পার্ট 2: ইচিনাকোসাইড হাইপোথ্যালামিক অ্যান্ড্রোজেন রিসেপ্টরকে লক্ষ্য করে ইঁদুরের মধ্যে শুক্রাণুর পরিমাণ বাড়ায়
Mar 05, 2022
যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com
Zhihui Jiang1,2, Bo Zhou2, Xinping Li2, Gordon M. Kirby3 এবং Xiaoying Zhang1,2
অনুগ্রহ করে পার্ট 1 এ ক্লিক করুন
পরীক্ষা চিকিত্সা
পরীক্ষা 1. ইঁদুরকে এলোমেলোভাবে ছয়টি গ্রুপে ভাগ করা হয়েছিল, প্রতিটি গ্রুপে সাতটি ইঁদুর (n=7)।ECH(cistanche থেকে Echinacoside)(CAS: 82854-37-3; Chengdu Preferred Biotechnology Co., Ltd, Sichuan, China) একটি ইন্ট্রাগাস্ট্রিক টিউব ব্যবহার করে পরিচালিত হয়েছিল এবং টেস্টোস্টেরন প্রোপিওনেট (TP, CAS: 57-85-2; KingYork, Tianjin, China) দেওয়া হয়েছিল। নিম্নলিখিত পরীক্ষামূলক নকশা অনুসারে প্রতিদিন একবার ইন্ট্রামাসকুলার ইনজেকশন দ্বারা 14 দিনের জন্য: নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ: সাধারণ স্যালাইন (10 মিলি/কেজি), ECH(L)গ্রুপ (5 mg/kg), ECH(M)গ্রুপ (20 mg/kg), ECH(H)গ্রুপ (80 মিলিগ্রাম/কেজি), টিপি (15 মিলিগ্রাম/কেজি) এবং এনজালুটামাইড (এআর ইনহিবিটর, প্রতিদিন 14 দিনের জন্য প্রতিদিন একবার; 20 মিগ্রা/কেজি; সিএএস: 915087- 33-1; আলাদিন, সাংহাই, চীন)।
2 সপ্তাহের চিকিত্সার পরে, হরমোনের মাত্রা বিশ্লেষণের জন্য রক্তের নমুনা সংগ্রহের জন্য ইঁদুরগুলিকে ডাইথাইল ইথার দিয়ে চেতনানাশক করা হয়েছিল। হাইপোথ্যালামাস, এনসেফালন প্লাস পিটুইটারি, টেস্টিস এবং কউডা এপিডিডাইমিস আলাদা করার জন্য ইঁদুরগুলিকে ছিন্ন করা হয়েছিল। কউডা এপিডিডাইমিসের নমুনাগুলি শুক্রাণুর গুণমান মূল্যায়নের জন্য 5 শতাংশ বিএসএ সহ সাধারণ স্যালাইনে রাখা হয়েছিল এবং হাইপোথ্যালামাস, এনসেফালন প্লাস পিটুইটারি এবং টেস্টিস তরল নাইট্রোজেনে হিমায়িত করা হয়েছিল এবং আরও তদন্তের জন্য −80 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল।
পরীক্ষা 2. ইঁদুরগুলি এলোমেলোভাবে 10টি দলে বিভক্ত ছিল, প্রতি দলে পাঁচটি প্রাণী। ECH (20 mg/kg) মৌখিকভাবে পরিচালিত হয়েছিল এবং প্রতিটি গ্রুপের ইঁদুরকে 0.5 h, 1 h, 1.5 h, 2 h, 2.5 h, 3 h, 4 h, 6 h, 9 পয়েন্টে ডাইথাইল ইথার দিয়ে অ্যানেস্থেটাইজ করা হয়েছিল। নমুনা সংগ্রহের জন্য প্রশাসনের পর ঘন্টা এবং 12 ঘন্টা।
প্লাজমা সংগ্রহ করা হয় এবং হৃদয় উন্মুক্ত করা হয়। লিভার এবং ফুসফুস ব্লাঞ্চ না হওয়া পর্যন্ত বাম ভেন্ট্রিকেলে স্বাভাবিক স্যালাইনের পারফিউশন একটি ইনফিউশন যন্ত্রপাতি দ্বারা পরিচালিত হয়েছিল। তারপর হাইপোথ্যালামাস এবং টেস্টিস ECH এর টিস্যু ঘনত্ব নির্ধারণের জন্য সংগ্রহ করা হয়েছিল(cistanche থেকে Echinacoside).
পরীক্ষা 3. ইঁদুরগুলি এলোমেলোভাবে 4 টি গ্রুপে বিভক্ত ছিল, প্রতিটি গ্রুপে সাতটি। ECH(cistanche থেকে Echinacoside)এবং BPA (CAS: 80-05-7; আলাদিন, সাংহাই, চীন) নিম্নলিখিত পরীক্ষামূলক নকশা অনুসারে 6 সপ্তাহের জন্য প্রতিদিন একবার একটি ইন্ট্রাগ্যাস্ট্রিক টিউব ব্যবহার করে পরিচালিত হয়েছিল: সাধারণ গ্রুপ (ভুট্টার তেল, 10 মিলি/কেজি, bw/ d), মডেল গ্রুপ: BPA গ্রুপ (BPA 200 mg/kg, bw/d, ভুট্টার তেল), এবং পরীক্ষামূলক গ্রুপ: BPA প্লাস ECH গ্রুপ (BPA 200 mg/kg; ECH 20 mg/kg)।
42 দিনের চিকিত্সার পরে, ইঁদুরগুলিকে ডাইথাইল ইথার দিয়ে অ্যানেস্থেটাইজ করা হয়েছিল এবং হরমোন স্তর বিশ্লেষণের জন্য রক্তের নমুনা সংগ্রহ করা হয়েছিল। টেস্টিস এবং কউডা এপিডিডাইমিস আলাদা করে সংগ্রহ করা হয়েছিল। কউডা এপিডিডাইমিস শুক্রাণুর গুণমান মূল্যায়নের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল এবং টেস্টিসটিকে তরল নাইট্রোজেনে হিমায়িত করা হয়েছিল এবং আরও তদন্তের জন্য −80 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল।
চিত্র 7. পুরুষ প্রজননে নির্বাচিত HPG অক্ষ-সম্পর্কিত হরমোন এবং প্রোটিন দ্বারা নিয়ন্ত্রিত পথগুলি যেমন Pathway Ontology ডেটাবেস এবং KEGG পাথওয়ে ডেটাবেস দ্বারা পূর্বাভাস দেওয়া হয়েছে৷
দ্রষ্টব্য: নিয়ন্ত্রিত প্রক্রিয়াগুলি বিভিন্ন রঙ এবং আকারের পটভূমি দ্বারা প্রতিনিধিত্ব করা হয় এবং নিয়ন্ত্রক ইভেন্টগুলি তীর এবং লাইন ব্যবহার করে প্রদর্শিত হয়।
প্রতিটি প্রোটিনের সাথে সংযুক্ত রেফারেন্সগুলি পাথওয়ে অন্টোলজি ডেটাবেস এবং কেইজিজি পাথওয়ে ডেটাবেসের উপর ভিত্তি করে ছিল এবং তালিকাভুক্ত নয়।
শুক্রাণুর গুণমান নির্ধারণ। শুক্রাণু সাসপেনশন প্রস্তুতি। কাউডা এপিডিডাইমাইডগুলি 5 শতাংশ বিএসএ সহ 5 মিলি সাধারণ স্যালাইনে কিমা করা হয়েছিল এবং তাদের বিষয়বস্তুগুলিকে মাঝারিতে ছড়িয়ে দেওয়ার জন্য 37 ডিগ্রিতে 5 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল।
শুক্রাণুর সংখ্যা: ইয়োকোই (2003) দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে, পাতলা শুক্রাণু সাসপেনশন (1:10; v/v; শুক্রাণু সাসপেনশন/10 শতাংশ মিথানল) একটি হিমোসাইটোমিটারের প্রতিটি গণনা চেম্বারে স্থানান্তরিত হয়েছিল এবং 5 এর জন্য দাঁড়ানোর অনুমতি দেওয়া হয়েছিল। মিনিট এবং তারপর X200 ম্যাগনিফিকেশনে হালকা মাইক্রোস্কোপের (নিকন, ইন্সট্রুমেন্টস ইনক., জাপান) অধীনে গণনা করা হয়।
শুক্রাণুর কার্যকারিতা: মোট 20 μL শুক্রাণু সাসপেনশন 2 মিনিটের জন্য সমান আয়তনের ইওসিন-নিগ্রোসিন দাগের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল; দাগহীন শুক্রাণুগুলিকে 200x বিবর্ধনে হালকা মাইক্রোস্কোপের নীচে গণনা করা হয়েছিল।
শুক্রাণুর গতিশীলতা: মোট 10 μL শুক্রাণু সাসপেনশন একটি গ্লাস স্লাইডে রাখা হয়েছিল এবং 200x ম্যাগনিফিকেশনে হালকা মাইক্রোস্কোপের নীচে মোবাইল বা অচল হিসাবে রেকর্ড করা হয়েছিল।
হরমোনের মাত্রা নির্ধারণ। রেডিওইমিউনোসে (আরআইএ) কিট (বেইজিং চীন-ইউকে ইনস্টিটিউট অফ বায়োলজিক্যাল টেকনোলজি, বেইজিং, চীন) ব্যবহার করে সিরাম, এনসেফালন প্লাস পিটুইটারি এবং টেস্টিস হোমোজেনেটে টেস্টোস্টেরন (টি) এবং এলএইচের মাত্রা পরিমাপ করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, অ্যান্টি-টেসটোস্টেরন বা অ্যান্টি-এলএইচ আইজিজি অ্যান্টিবডি (100 μL) এবং 125-আই-সংযোজিত অ্যান্টি-মাউস অ্যান্টিবডিগুলি নমুনাগুলিতে বা স্ট্যান্ডার্ডে (100 μL) যোগ করা হয়েছিল এবং 4 ডিগ্রিতে রাকারে মিশ্রিত করা হয়েছিল। পিবিএস-টুইন 20 (500 μL) দিয়ে তিনবার ধোয়ার পরে, মিশ্রণগুলিকে 15 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রিতে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল (3500 rpm/মিনিট)। রেডিওইমিউনোসাই যন্ত্র (Beijing Sino-western Technology Co. Ltd, CN202M/KZ4GC-1200, বেইজিং, চায়না) দ্বারা প্রসিপিটেটগুলির CPM মানগুলি মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং T এবং LH এর ঘনত্ব একটি স্ট্যান্ডার্ডের সূত্র অনুসারে গণনা করা হয়েছিল বক্ররেখা প্রকরণের T এবং LH সহগ নমুনা গ্রুপে যথাক্রমে 2.8 শতাংশ এবং 3.2 শতাংশ এবং স্ট্যান্ডার্ড গ্রুপে 2.1 শতাংশ এবং 2.8 শতাংশ।
রিয়েল-টাইম পরিমাণগত পিসিআর দ্বারা জিনের অভিব্যক্তি নির্ধারণ। মোট আরএনএ হিমায়িত টেস্টিকুলার এবং এনসেফালন প্লাস পিটুইটারি টিস্যু থেকে একটি আরএনএ সিম্পল টোটাল আরএনএ কিট (তিয়ানজেন, বেইজিং, চীন) ব্যবহার করে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। পরিমাণগত রিয়েল-টাইম পিসিআর (q RT-PCR) 2 × SYBR গ্রিন আই পিসিআর মাস্টার মিক্স (ভ্যাজাইম, নানজিং, চীন) ব্যবহার করে সিডিএনএ পরিবর্ধনের জন্য পরিচালিত হয়েছিল। পিসিআর পদ্ধতিতে 30 সেকেন্ডের জন্য 95 ডিগ্রি, তারপর 15 সেকেন্ডের জন্য 95 ডিগ্রির 35টি চক্র, 30 সেকেন্ডের জন্য 58 ডিগ্রি এবং 30 সেকেন্ডের জন্য 72 ডিগ্রি। প্রাইমারের সুনির্দিষ্টতা এবং পণ্যের বিশুদ্ধতা যাচাই করতে পিসিআর পণ্যগুলিতে গলানো বক্ররেখা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। একটি একক পণ্যের উত্পাদন নিশ্চিত করতে প্রতিটি প্লেটের জন্য একটি বিচ্ছিন্নকরণ বক্ররেখা সঞ্চালিত হয়েছিল। প্রতিটি এমআরএনএর আপেক্ষিক প্রাচুর্য গণনা করা হয়েছিল। অধ্যয়নের জন্য ব্যবহৃত পিসিআর প্রাইমারগুলি সারণি 2 এ দেখানো হয়েছে।
পশ্চিম ফোঁটার. এআর এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণের জন্য, সাইটোপ্লাজমিক এবং পারমাণবিক প্রোটিনের নিষ্কাশন এবং বিচ্ছিন্নতা একটি সাইটোপ্লাজমিক এবং নিউক্লিয়ার প্রোটিন এক্সট্রাকশন কিট (বিয়োটাইম, নানজিং, চীন) ব্যবহার করে প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে সঞ্চালিত হয়েছিল। সাইটোপ্লাজমিক এবং পারমাণবিক প্রোটিনের ঘনত্ব একটি ব্র্যাডফোর্ড প্রোটিন অ্যাসে কিট (বিয়োটাইম, জিয়াংসু, চীন) ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। প্রোটিন নমুনা (80 ug) একটি 12 শতাংশ এবং 5 শতাংশ SDS-PAGE জেলে চালানো হয়েছিল এবং PVDF ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত হয়েছিল। ব্লক করার পরে, ঝিল্লিগুলি অ্যান্টি-এআর আইজিজি অ্যান্টিবডি (1:1,000; বায়োস; বেইজিং চায়না), এবং মাউস পলিক্লোনাল অ্যান্টি-জিএপিডিএইচ অ্যান্টিবডি (1:1,000; উহান বোস্টার) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল জৈবিকপ্রযুক্তি, উহান, চীন) বা মাউস পলিক্লোনাল অ্যান্টি-লামিন বি1 অ্যান্টিবডি 2 ঘন্টার জন্য। ঝিল্লিটি টিবিএসটি দিয়ে তিনবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং একটি এইচআরপি-সংযোজিত খরগোশ অ্যান্টি-মাউস আইজিজি অ্যান্টিবডি (1:5,000; বায়োস; বেইজিং চীন) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। ChemiDoc ইমেজিং সিস্টেম (Tanon-3,500, Shanghai, China) ব্যবহার করে সংকেতটি কল্পনা করা হয়েছিল।
উচ্চ-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (HPLC) অ্যাস। হেপারিনাইজড গ্লাস টিউবে রক্ত সংগ্রহ করা হয়েছিল। রক্তরসকে তাৎক্ষণিক সেন্ট্রিফিউগেশনের মাধ্যমে 6,000 rpm-এ 10 মিনিটের জন্য আলাদা করা হয়েছিল এবং আরও পরীক্ষার জন্য −20 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল। প্রতিটি টাইম পয়েন্ট থেকে হাইপোথ্যালামাস এবং টেস্টিসের নমুনাগুলিকে পুল করা হয়েছিল এবং মিথানল দিয়ে একজাত করা হয়েছিল। 10,000 rpm-এ 10 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রীতে কেন্দ্রীভূত করার পরে, সুপারনাট্যান্ট N2 দ্বারা ঘনীভূত হয়েছিল এবং অবশিষ্টাংশ 50 μL মিথানলে দ্রবীভূত হয়েছিল এবং একটি 0.45 μm ফ্লটারের মাধ্যমে ফিল্টার করা হয়েছিল। নমুনা ফিল্টার করা তরলটির দশ μL বিশ্লেষণের জন্য এইচপিএলসি সিস্টেমে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল।
স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখায় ECH এর 50, 100, 250, 500 এবং 750 ng/mL সমন্বিত নমুনা থাকে(cistanche থেকে Echinacoside)(Chengdu Pufei De Biotech Co., Ltd, Sichuan, China)। 75ng/mL (নিম্ন), 150 ng/mL (মাঝারি) এবং 300 ng/mL (উচ্চ) ECH এর সাথে স্পাইক করা প্লাজমা মান নিয়ন্ত্রণের নমুনাগুলি তদনুসারে পদ্ধতির নির্ভুলতা এবং নির্ভুলতা পরিমাপের জন্য প্রস্তুত করা হয়েছিল।
ক্রোমাটোগ্রাফি একটি HPLC সিস্টেম (D2{{1{12}}}}00 এলিট সিরিজ, হিটাচি, জাপান) এবং একটি UV ডিটেক্টর (L-2400, Hitachi, জাপান) এর সাথে সঞ্চালিত হয়েছিল। 25 ডিগ্রিতে রাখা একটি থার্মো-সি 18 (250 মিমি × 4.6 মিমি আইডি, 4.6 μm কণা) কলামে বিচ্ছেদ করা হয়েছিল। মোবাইল ফেজটি 0.1 শতাংশ ফসফরিক অ্যাসিড থেকে তৈরি একটি গ্রেডিয়েন্ট ছিল যার মধ্যে 0.04 শতাংশ ট্রাইমেথাইলামাইন (কম্পোনেন্ট A) এবং মিথানল (কম্পোনেন্ট বি) রয়েছে। রৈখিক গ্রেডিয়েন্টটি নিম্নরূপ ছিল: 70-90 শতাংশ A 0-2 মিনিটের বেশি, 60–70 শতাংশ A 2-6 মিনিটের বেশি, 55–60 শতাংশ B 6-8 মিনিটে এবং তারপর 8 এ 90 শতাংশ A-তে ফিরে আসে মিনিট অবিলম্বে প্রবাহের হার ছিল 0.8 মিলি/মিনিট। ইউভি ডিটেক্টর 332 এনএম এ পরিচালিত হয়েছিল। পিক এলাকা বিশ্লেষণাত্মক পরিমাপ হিসাবে মূল্যায়ন করা হয়েছিল।
ইঁদুরের ফার্মাকোকিনেটিক গবেষণা। ECH এর অনুপ্রবেশ(cistanche থেকে Echinacoside)হাইপোথ্যালামাস এবং টেস্টিসের ওষুধ এবং পরিসংখ্যান সফ্টওয়্যার (ড্রাগ অ্যান্ড স্ট্যাটিস্টিকস, চীনের গাণিতিক ফার্মাকোলজি প্রফেশনাল কমিটি) এর সাথে ফার্মাকোকিনেটিক বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ফার্মাকোকিনেটিক প্যারামিটারগুলি পরিসংখ্যানগত মুহূর্ত তত্ত্বের উপর ভিত্তি করে অ-কম্পার্টমেন্টাল পদ্ধতি ব্যবহার করে নির্ধারিত হয়েছিল। প্রাথমিক ফার্মাকোকিনেটিক পরামিতি যার মধ্যে রয়েছে পিক কনস্ট্যান্টের সময় (Tmax), সর্বোচ্চ ঘনত্ব (Cmax), নির্মূল হার ধ্রুবক (Ke), নির্মূল অর্ধ-জীবন (T0.5), বক্ররেখার অধীনে এলাকা (AUC{) {4}}–12), আপাত বন্টন ভলিউম (Vc), এবং ক্লিয়ারেন্স (CL) আরও বিশ্লেষণের জন্য প্রাপ্ত হয়েছিল৷ মস্তিষ্ক/প্লাজমা অনুপাত প্লাজমা এবং মস্তিষ্কের জন্য AUC0-টি মানের উপর ভিত্তি করে গণনা করা হয়েছিল।
ECH-Ovalbumin (ECH-OVA) সংশ্লেষণ এবং সনাক্তকরণ। ECH এর মোট 9.8 মিলিগ্রাম(cistanche থেকে Echinacoside)এবং 1.{1}} মিলিগ্রাম বুটেনেডিওল অ্যানহাইড্রাইড 2 মিলি পাইরিডিনে দ্রবীভূত করা হয়েছিল, ঘরের তাপমাত্রায় নাড়ার সাথে 12 ঘন্টার জন্য মিশ্রিত করা হয়েছিল। মিশ্রণটি N2 দ্বারা ঘনীভূত হয়েছিল এবং অবশিষ্টাংশটি 10.8 মিলিগ্রাম এন-হাইড্রোক্সিসুসিনিমাইড (এনএইচএস) এবং 19.3 মিলিগ্রাম ডাইসাইক্লোহেক্সিলকারবোডিইমাইড (ডিসিসি) এর সাথে মিলিত হয়েছিল এবং 12 ঘন্টা তাপমাত্রায় 4 মিলি এন, এন-ডাইমিথাইলফর্মাইড (ডিএমএফ) এ দ্রবীভূত হয়েছিল। . 4 ডিগ্রীতে 5 মিনিটের জন্য 2,{14}} g সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে, সুপারনাট্যান্ট 5 মিলি পিবিএস-এ যোগ করা হয়েছিল যাতে 14.4 মিলিগ্রাম ওভালবুমিন (ওভিএ) দ্রবীভূত হয়েছিল। নতুন মিশ্রণটি 24 ঘন্টার জন্য 4 ডিগ্রিতে নাড়াচাড়া করা হয়েছিল। প্রতিক্রিয়া সমাধানটি তখন তিন দিনের জন্য পিবিএসের বিরুদ্ধে ডায়ালাইজ করা হয়েছিল। ECH-OVA-এর উপস্থিতি UV স্পেকট্রা (Shimadzu Scientifc Instruments, Inc. Columbia, MD USA) দ্বারা 190 থেকে 400 nm পর্যন্ত তরঙ্গদৈর্ঘ্যের পাশাপাশি PAGE-কে বিকৃত করার মাধ্যমে নিশ্চিত করা হয়েছিল।
পরোক্ষ ELISA (iELISA)। একটি মাইক্রোটাইটার প্লেট ECH-OVA (2 ug/100 μL) দিয়ে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল এবং 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল। প্লেটটি পিবিএসটি দিয়ে তিনবার এবং পিবিএস দিয়ে দুইবার ধোয়া হয়েছিল; এবং 5 শতাংশ পিবিএসএম (5 শতাংশ স্কিমড মিল্কযুক্ত পিবিএস) যোগ করা হয়েছিল 2 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রীতে আনবাউন্ড সাইটগুলি ব্লক করতে। প্লেটগুলি পিবিএসটি এবং পিবিএস দিয়ে ধোয়ার পরে, কূপগুলিকে 4 টি দলে বিভক্ত করা হয়েছিল; পরীক্ষামূলক গ্রুপ, 1 ug AR মোট প্রোটিন/100 μL; পজিটিভ গ্রুপ, খরগোশের অ্যান্টি-ওভিএ অ্যান্টিবডি (1:1,000); নেতিবাচক গ্রুপ, বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিনের 1 ইউজি; এবং পিবিএস ধারণকারী একটি ফাঁকা গ্রুপ। 1.5 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেশনের পরে, প্লেটগুলি ধুয়ে ফেলা হয়েছিল, এবং খরগোশের 100 μL/ওয়েল HRP-কনজুগেটেড IgG (1:1,000) পজিটিভ গ্রুপে যোগ করা হয়েছিল, 100 μL/ওয়েল অ্যান্টি-AR যোগ করা হয়েছিল (1:1,000) অন্যান্য গোষ্ঠীতে। 1.5 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেশনের পরে, খরগোশের HRP-সংযোজিত IgG (1:5,000) পাতলা প্লেটগুলিতে যোগ করা হয়েছিল। 1 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রীতে ইনকিউবেশনের পরে, প্লেটগুলি পিবিএসটি দিয়ে তিনবার এবং পিবিএস দিয়ে দুইবার ধোয়া হয়েছিল। তারপরে টিএমবি যোগ করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় অন্ধকারে 10 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল এবং প্রতিক্রিয়া বন্ধ করতে 2 M H2SO4 যুক্ত করা হয়েছিল। শোষণটি 450 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে পড়া হয়েছিল।
আণবিক ডকিং। যৌগ ECH এর বাঁধাই মোড তদন্ত করতে একটি আণবিক ডকিং অধ্যয়ন করা হয়েছিল(cistanche থেকে Echinacoside)অটোডক ভিনা 1.1.2 (http://vina.scripps.edu) ব্যবহার করে মানব এন্ড্রোজেন রিসেপ্টর (AR) এর কাছে। AR (PDB ID: 2YHD) এর ত্রিমাত্রিক (3D) কাঠামো প্রোটিন ডেটা ব্যাংক (http://www. rcsb.org/pdb/home/hone.do) থেকে ডাউনলোড করা হয়েছে। ECH এর 3D কাঠামো ChemBioDraw Ultra 14৷{8}} এবং ChemBio 3D Ultra 14৷{11}} সফ্টওয়্যার দ্বারা প্রাপ্ত হয়েছে৷ AutoDockTools 1.5.6 প্যাকেজ (http://mgltools.scripps.edu) ডকিং ইনপুট ফাইল তৈরি করতে নিযুক্ত করা হয়েছিল। AR এর অনুসন্ধান গ্রিড কেন্দ্র x: 36.141, কেন্দ্র y: 8.513, এবং কেন্দ্র z হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল:
সাইজ x: 15, সাইজ y: 15, এবং সাইজ z: 15 সহ 21.304। পরিপূর্ণতার মান 20 এ সেট করা হয়েছিল। ভিনা ডকিংয়ের জন্য, ডিফল্ট প্যারামিটার ব্যবহার করা হয়েছিল যদি এটি উল্লেখ না করা হয়। ভিনা ডকিং স্কোর দ্বারা বিচার করা সেরা-স্কোরিং ভঙ্গিটি PyMOL 1.7.6 সফ্টওয়্যার (http://www.pymol.org) ব্যবহার করে বাছাই করা হয়েছিল এবং দৃশ্যত বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।
ডেটা বিশ্লেষণ এবং পরিসংখ্যান পদ্ধতি। পরিসংখ্যানগত সফ্টওয়্যার SPSS 19 ব্যবহার করে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল৷{1}} (SPSS Inc., Chicago, IL, USA)৷ গ্রুপগুলির মধ্যে তুলনা করার জন্য একটি একমুখী আনোভা নিযুক্ত করা হয়েছিল। গ্রুপের মধ্যে উল্লেখযোগ্য পার্থক্যের Tukey এর তুলনা পরীক্ষা নির্ধারণ করা হয়েছিল। গ্রাফ প্যাড প্রিজম সফ্টওয়্যার v.7 (গ্রাফপ্যাড সফ্টওয়্যার, ইনক, ক্যালিফোর্নিয়া, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) ব্যবহার করে ফলাফলগুলিকে গড় ± স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি (SD) হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল।
নৈতিকতার অনুমোদন এবং অংশগ্রহণের সম্মতি। এই অধ্যয়নের জন্য নৈতিক অনুমোদন আনাং ইনস্টিটিউট অফ টেকনোলজির নীতিশাস্ত্র কমিটি থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল।
তথ্যসূত্র
1. Cano, SN, Misra, M. & Ackerman, KE ব্যায়াম, প্রশিক্ষণ, এবং পুরুষ ও মহিলাদের হাইপোথ্যালামিক-পিটুইটারি-গোনাডাল অক্ষ। সামনে। হরম। Res. 47, 27–43 (2016)।
2. Papadopoulos, V. & Miller, WL স্টেরয়েডোজেনেসিসে মাইটোকন্ড্রিয়ার ভূমিকা। সর্বোত্তম অনুশীলন। Res. ক্ল. এন. 26, 771–790 (2012)।
3. রন, এমবি এবং অন্যান্য। একটি গতিশীল মাইটোকন্ড্রিয়াল প্রোটিন কমপ্লেক্সের সনাক্তকরণ যা একটি স্টেরয়েড হরমোনে কোলেস্টেরল আমদানি, পাচার এবং বিপাককে চালিত করে। মোল। এন্ডোক্রিনোল। 26, 1868-1882 (2012)।
4. শিবারি, এস., ইলোনেন, এইচ. অ্যান্ড পালমে, আর. ব্যাঙ্ক ভোলে কর্টিকোস্টেরন এবং টেস্টোস্টেরন মেটাবোলাইটের নির্গমন এবং পরিমাপ (মায়োডস গ্ল্যারিওলাস)। জেনারেল কমপ. এন্ডোক্রিনোল। 243, 39–50 (2017)।
5. ও'হারা, এল. এট আল। পিটুইটারি অ্যান্ড্রোজেন রিসেপ্টর সিগন্যালিং প্রোল্যাক্টিন নিয়ন্ত্রণ করে কিন্তু পুরুষ মাউসের গোনাডোট্রফিন নয়। PloS এক. 10, e0121657 (2015)।
6. Amador, AG, Parkening, TA, Beamer, WG, Bartke, A. & Collins, TJ Testicular LH রিসেপ্টর এবং বংশগত রোগের জন্য তিনটি মাউস মডেলে সঞ্চালনকারী হরমোনের মাত্রা (Tfm/y, lit/lit এবং hyt/hyt)। এন্ডোক্রিনোল। মেয়াদ। 20, 349-58 (1986)।
7. Bulldan, A., Dietze, R., Shihan, M. & Scheiner-Bobis, G. ZIP9 এর মাধ্যমে মধ্যস্থতা করা নন-ক্লাসিক্যাল টেস্টোস্টেরন সিগন্যালিং ক্লাউডিন এক্সপ্রেশন এবং সার্টোলি কোষে টাইট সংযোগ গঠনকে উদ্দীপিত করে। সেল। সংকেত. 28, 1075–85 (2016)।
8. ওয়াকার, ডাব্লুএইচ টেস্টোস্টেরন সিগন্যালিং এবং স্পার্মাটোজেনেসিসের নিয়ন্ত্রণ। স্পার্মাটোজেনেসিস। 1, 116-20 (2011)।
9. Cao, C. & Kindscher, K. দ্য মেডিসিনাল কেমিস্ট্রি অফ ইচিনেসিয়া স্পিসিস (ed. Kindscher, K.) 127–145 (Springer, 2016)।
10. জিয়াং, জেডএইচ, জিয়ান, ডব্লিউ, লি, এক্সপি এবং ঝাং, এক্সওয়াইইচিনাকোসাইডএবংCistanche tubulosa (Schenk) R. গোনাড অক্ষ নিয়ন্ত্রিত স্টেরয়েডোজেনিক এনজাইমের মাধ্যমে ইঁদুরের বিসফেনল এ-প্ররোচিত টেস্টিকুলার এবং শুক্রাণুর ক্ষতি কমিয়ে দেয়। J. Ethnopharmacol। 193, 321–328 (2016)।
