পার্ট 1 ইঁদুরের বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন-প্ররোচিত হেপাটিক ফাইব্রোসিসে সিস্টানচে টিউবুলোসা থেকে ফেনাইলেথানল গ্লাইকোসাইডের প্রতিরোধমূলক প্রভাব

যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com

বিমূর্ত

পটভূমি:Cistanche tubulosa একটি ঐতিহ্যবাহী চীনা ভেষজ ঔষধ যা ব্যাপকভাবে অনাক্রম্যতা নিয়ন্ত্রণের জন্য ব্যবহৃত হয়।সিস্টানচে থেকে ফিনাইল ইথানল গ্লাইকোসাইডএই উদ্ভিদ থেকে (CPhGs) প্রাথমিকভাবে কার্যকরী উপকরণ। এই অধ্যয়নের লক্ষ্য ছিল ইঁদুরের BSA-প্ররোচিত হেপাটিক ফাইব্রোসিস এবং হেপাটিক স্টেলেট কোষের সাথে জড়িত আণবিক প্রক্রিয়াগুলির উপর CPhG-এর প্রতিরোধমূলক এবং থেরাপিউটিক প্রভাবগুলি মূল্যায়ন করা। আরেকটি ঐতিহ্যবাহী চীনা ভেষজ ওষুধ Biejiarangan (BJRG), একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। পদ্ধতি: ভিভো পরীক্ষায়, 75 টি এসডি ইঁদুরকে এলোমেলোভাবে 6 টি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল: স্বাভাবিক (পাসিত জল-চিকিত্সা), মডেল (বিএসএ-চিকিত্সা), পজিটিভ ড্রাগ (বিএসএ-চিকিত্সা প্লাস বিজেআরজি 60{{29} } mg/kg/day), এবং BSA-চিকিত্সা প্লাস CPhGs (125, 250, এবং 500 mg/kg/day) গ্রুপ। লিভার এবং প্লীহা সূচক, অ্যাসপার্টেট অ্যামিনোট্রান্সফেরেজ (AST), অ্যালানাইন অ্যামিনোট্রান্সফেরেজ (ALT), হেক্সাডেসেনোয়িক অ্যাসিড (HA), ল্যামিনিন (LN), টাইপ III প্রোকোলাজেন (PCIII), টাইপ IV কোলাজেন (IV-C), হাইড্রক্সিপ্রোলিন (আইভি-সি) এর সিরাম স্তর। হাইপ), এবং ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর 1 (TGF- 1) ইঁদুরের লিভারে পরিমাপ করা হয়েছিল। লিভার ফাইব্রোসিসের জন্য হিস্টোপ্যাথোলজিকাল গ্রেডগুলি H&E এবং ম্যাসনের ট্রাইক্রোম স্টেনিং ব্যবহার করে প্রতিটি গ্রুপের জন্য মূল্যায়ন করা হয়েছিল। TGF- 1, কোলাজেন I (Col-I), এবং কোলাজেন III (Col-III) এর অভিব্যক্তি একটি ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেনিং পদ্ধতি দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। পরিমাণগত রিয়েল-টাইম পিসিআর বিশ্লেষণের মাধ্যমে NF-κB p65 এবং Col-I-এর এক্সপ্রেশন স্তরগুলি নির্ধারণ করে এই প্রভাবগুলি আরও ভিট্রোতে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। কোল-আই প্রোটিন এক্সপ্রেশনও পশ্চিমা ব্লটিং দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল। ফলাফল: CPhG-এর সমস্ত ডোজ গ্রুপ (125, 250, এবং 500 mg/kg/day) উল্লেখযোগ্যভাবে লিভার এবং প্লীহা সূচক হ্রাস করেছে, ALT, AST, HA, LN, PCIII, IV-C সিরামের মাত্রা হ্রাস করেছে, TGF- 1 সামগ্রী (P < 0.01,="" p="">< 0.01,="" এবং="" p="">< 0.01),="" এবং="" হাইপ="" সামগ্রী।="" এছাড়াও="" cphgs="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" লিভার="" কোষের="" ফোলাভাব="" কমিয়েছে="" এবং="" কার্যকরভাবে="" হেপাটোসাইট="" নেক্রোসিস="" এবং="" প্রদাহজনক="" কোষের="" অনুপ্রবেশ="" রোধ="" করেছে।="" ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল="" ফলাফলগুলি="" দেখায়="" যে="" cphgs="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" tgf-="" 1="" (p=""><0.01, p=""><0.01, এবং="" p=""><0.01), col-="" i,="" এবং="" col-iii-এর="" অভিব্যক্তিকে="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" হ্রাস="" করেছে।="" hsc-t6-তে="" cphgs-এর="" (100,="" 75,="" 50,="" এবং="" 25="" ug/ml)="" ইন="" ভিট্রো="" প্রভাবগুলি="" দেখিয়েছে="" যে="" cphgগুলি="" nf-κb="" p65="" এবং="" col-i-এর="" mrna="" অভিব্যক্তিকে="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" হ্রাস="" করেছে="" এবং="" cphgs="" col-i="" প্রোটিনের="" অভিব্যক্তিকেও="" কমিয়েছে।="" উপসংহার:="" cphg-এর="" একটি="" উল্লেখযোগ্য="" অ্যান্টি-হেপাটিক="" ফাইব্রোসিস="" প্রভাব="" রয়েছে="" এবং="" হেপাটিক="" ফাইব্রোসিসের="" চিকিত্সার="" জন্য="" হেপাটোপ্রোটেকটিভ="" এজেন্ট="" হিসাবে="" ব্যবহার="" করা="" যেতে="">

কীওয়ার্ড: হেপাটিক ফাইব্রোসিস, সিস্টানচে টিউবুলোসা, ফেনিলেথানল গ্লাইকোসাইড, কেমোকাইন বিএসএ, প্রতিরোধ এবং থেরাপি।

পটভূমি

হেপাটিক ফাইব্রোসিস হল গুরুতর লিভারের আঘাতের জন্য একটি ক্ষত নিরাময় প্রতিক্রিয়া যা বিভিন্ন কারণের দ্বারা প্ররোচিত দীর্ঘস্থায়ী হেপাটাইটিসের প্যাথোজেনেসিসে ঘটে। এই কারণগুলি হল ভাইরাল সংক্রমণ, অ্যালকোহল অপব্যবহার, কোলেস্টেসিস এবং বিপাকীয় এবং অটোইমিউন রোগ [1-3]। এক্সট্রা সেলুলার ম্যাট্রিক্স (ECM) এর প্রগতিশীল সঞ্চয় এবং হ্রাসকৃত পুনর্নির্মাণ লিভারের স্বাভাবিক স্থাপত্যকে ব্যাহত করে, যার ফলে হেপাটিক ফাইব্রোসিস হয় [৪]। হেপাটিক ফাইব্রোসিস দীর্ঘস্থায়ী লিভারের রোগে গুরুতর এবং প্রায়ই অপরিবর্তনীয় সিরোসিস এবং কার্সিনোজেনেসিসে বিকশিত হয়। বর্তমানে, হেপাটিক ফাইব্রোসিসের চিকিত্সার জন্য কোন পদ্ধতি বা কার্যকর ওষুধ নেই। অতএব, একটি অ্যান্টি-হেপাটিক ফাইব্রোসিস ড্রাগ খুঁজে বের করা জরুরী যা ফাইব্রোসিস এবং ক্যান্সারে লিভারের আঘাতের অগ্রগতি হ্রাস করবে।Cistanche tubulosaW (Orobanchaceae পরিবারের) একটি পরজীবী উদ্ভিদ যা চীনের জিনজিয়াংয়ের দক্ষিণাঞ্চলে ব্যাপকভাবে জন্মায় [৫]। লোকেরা সাধারণত কিডনিকে শক্তিশালী করতে, রক্তকে পুষ্ট করতে, অন্ত্রকে শিথিল করতে এবং বার্ধক্য বিলম্বিত করতে এটি ব্যবহার করে। এটি আনুষ্ঠানিকভাবে চীনা ফার্মাকোপিয়াতে তালিকাভুক্ত করা হয়েছে [6]। C. টিউবুলোসায় বিভিন্ন ধরনের সক্রিয় উপাদান রয়েছে। এই অন্তর্ভুক্তসিস্টানচে থেকে ফিনাইল ইথানল গ্লাইকোসাইড(CPhGs), iridoids, এবং polysaccharides. অনেক সক্রিয় উপাদানের মধ্যে একটি হিসাবেগ. টিউবুলোসা, CPhG গুলি ভিভো এবং ভিট্রো স্টাডিজ উভয় ক্ষেত্রেই বিশ্বাসযোগ্য অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, অ্যান্টি-ক্লান্তি, নিউরোপ্রোটেক্টিভ এবং অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি প্রভাব প্রদর্শন করেছে [7]। সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, এটি রিপোর্ট করা হয়েছে যে CPhGs(সিস্টানচে থেকে ফিনাইল ইথানল গ্লাইকোসাইড) হেপাটোপ্রোটেকটিভ প্রভাব আছে। এই প্রভাবগুলির অন্তর্নিহিত সম্ভাব্য প্রক্রিয়াগুলি হল ফ্রি র‌্যাডিকেলগুলির স্ক্যাভেঞ্জিং, হেপাটিক মেমব্রেনের সুরক্ষা, ইমিউনোরেগুলেশন, অ্যাপোপটোসিস প্রতিরোধ, HBsAg এবং HBeAg-এর প্রকাশের বাধা, এবং HBV DNA প্রতিলিপি এবং অন্যান্য [8-11]। যাইহোক, সাহিত্যের কিছু গবেষণা গ্রাফিক্সের অ্যান্টি-হেপাটিক ফাইব্রোসিস প্রভাবকে সম্বোধন করে। অতএব, এই অধ্যয়নের লক্ষ্য ইঁদুরে বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন (বিএসএ) প্ররোচিত হেপাটিক ফাইব্রোসিসের একটি মডেল ব্যবহার করে জিপিএইচসি-এর অ্যান্টি-হেপাটিক ফাইব্রোসিস প্রভাব তদন্ত করা। HSC-T6 কোষগুলিতে সম্পর্কিত আণবিক প্রক্রিয়াগুলি তদন্ত করা হয়েছিল।

পদ্ধতি

রাসায়নিক এবং বিকারক

একটি হাইড্রক্সিপ্রোলিন কিট (ক্ষারীয় হাইড্রোলাইসিস) (লট: 20140616) নানজিং জিয়ানচেং বায়োইঞ্জিনিয়ারিং ইনস্টিটিউট (চীন) থেকে কেনা হয়েছিল। Rat TGF- 1 স্যান্ডউইচ ELISA কিটস (লট: 238240615) Lianke Biotech Co., Ltd. (China) থেকে কেনা হয়েছে। খরগোশ অ্যান্টি-কোলাজেন I অ্যান্টিবডি (লট: 140619), খরগোশ অ্যান্টি-কোলাজেন III অ্যান্টিবডি (লট: 980788 ওয়াট), এবং খরগোশ অ্যান্টি-টিজিএফ- 1 অ্যান্টিবডি (লট: 140619) বেইজিং বায়োসিন্থেসিস বায়োটেকনোলজি কোম্পানি দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল। LTD (চীন)। সাধারণ ভেড়ার সিরাম (কাজ করার তরল) (লট: WP141214), PV-6000 (লট: WK141225), এবং DAB কিট (লট: K136621D) ঝংশান গোল্ডেন ব্রিজ বায়োটেক কোং লিমিটেড (চীন) থেকে কেনা হয়েছিল। . প্রাথমিক অ্যান্টিবডি সনাক্তকরণ 2. অ্যান্টিবডি সলিউশন (অ্যালক-ফস। কনজুগেটেড, অ্যান্টি-র্যাবিট) এবং 2. অ্যান্টিবডি সলিউশন (অ্যালক-ফস। কনজুগেটেড, অ্যান্টি-মাউস) (লট: 272387) ইনভিট্রোজেন কোম্পানি (ইউএসএ) থেকে কেনা ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়েছিল। ) বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন (বিএসএ) (লট: SLBG8239V) সিগমা (মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) থেকে কেনা হয়েছিল। ব্যবহারের আগে, সাধারণ স্যালাইনে BSA 18 g/L-এ প্রস্তুত করা হয়েছিল, ব্যাকটেরিয়াগুলি পরিস্রাবণ দ্বারা সরানো হয়েছিল, এবং BSA 4 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল। ভেড়ার চুল থেকে 1 গ্রাম লিপিডযুক্ত ফ্রুন্ডের অসম্পূর্ণ সহায়ক (লট: AF0220LA14, Shanghai yuan ye Bio-technology Co., Ltd. (China,)) 2 গ্রাম তরল প্যারাফিনের সাথে মেশানো হয়েছিল (লট: 20130815, Tianjin Fuyu, Tianjin Fuyu. লিমিটেড (চীন,), একটি স্টিম অটোক্লেভে জীবাণুমুক্ত করা হয় এবং 4 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়। ইনার মঙ্গোলিয়া ফুরুই মেডিকেল সায়েন্স কোং লিমিটেড (চীন) থেকে পজিটিভ ড্রাগ BJRG বিজিয়ারানগান ট্যাবলেট হিসাবে প্রাপ্ত হয়েছিল। বিজেআরজি ওষুধের স্টকগুলি দ্রবীভূত করে প্রস্তুত করা হয়েছিল। বিজেআরজি ট্যাবলেট পাতিত জলে 600 মিলিগ্রাম/কেজি ঘনত্বে।

উদ্ভিদ উপকরণ

গ. টিউবুলোসা(Orobanchaceae family) চীনের জিনজিয়াং এর মিনফেং অঞ্চল থেকে কেনা হয়েছিল। উপাদানটি গবেষক জুন ঝাও, উইঘুর মেডিসিনের কী ল্যাবরেটরি, জিনজিয়াংয়ের মেটেরিয়া মেডিকা ইনস্টিটিউট দ্বারা প্রমাণীকৃত হয়েছিল। ভাউচারের নমুনাগুলি জিনজিয়াংয়ের ইনস্টিটিউট অফ মেটেরিয়া মেডিকাতে জমা করা হয়েছিল।

CPhGs এর প্রস্তুতি(সিস্টানচে থেকে ফিনাইল ইথানল গ্লাইকোসাইড)

এর শুকনো এবং কাটা rhizomesগ. টিউবুলোসা(6.{1}} কেজি) 70 শতাংশ ইথানল সহ তিনবার রিফ্লাক্সের নীচে বের করা হয়েছিল, এবং ইথানল নির্যাস পাওয়ার জন্য দ্রাবকটি সরানো হয়েছিল। ফিনাইল ইথানল গ্লাইকোসাইডস (CPhGs) পেতে AB-8 রজন ব্যবহার করে ইথানলের নির্যাস শুদ্ধ করা হয়েছিল। প্রাণী গবেষণায় বিভিন্ন ডোজ গ্রুপের জন্য ব্যবহৃত CPhG-এর স্টক সলিউশন (যথাক্রমে 500 mg/kg, 250 mg/kg, এবং 125 mg/kg) 0.5 শতাংশ (5 g/L) কার্বোক্সিমিথাইল সেলুলোজ (সোডিয়াম লবণ) দ্রবীভূত করা হয়েছিল।

CPhG-এর পরিমাণ নির্ধারণ(সিস্টানচে থেকে ফিনাইল ইথানল গ্লাইকোসাইড)

CPhG-তে দুটি উপাদানের (ইচিনাকোসাইড এবং অ্যাক্টিওসাইড) বিষয়বস্তু HPLC দ্বারা পূর্বে রিপোর্ট করা পদ্ধতি ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল (ঝাং এট আল। 2004) [12]। HPLC একটি Shimadzu LC ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল-10একটি HPLC একটি UV ডিটেক্টর দিয়ে সজ্জিত৷ এইচপিএলসি কলামটি ছিল একটি ফেনোমেনেক্স জেমিনি ওডিএস কলাম (250 × 4.6 মিমি, 5 μm)। আইসোক্র্যাটিক মোবাইল ফেজ মিথানল-অ্যাসিটোনিট্রিল-1 শতাংশ অ্যাসিটিক অ্যাসিড (15:10:75, v/v/v) নিয়ে গঠিত। ইলুশন 40 মিনিটের জন্য ছিল এবং প্রবাহের হার 0.6 মিলি/মিনিট রাখা হয়েছিল। কলামের তাপমাত্রা 30 ডিগ্রিতে স্থির রাখা হয়েছিল। UV সনাক্তকরণ 334 এনএম এ ছিল।

প্রাণী এবং HSC-T6 সেল লাইন

[গ্রেড এসপিএফ] সুস্থ প্রাপ্তবয়স্ক পুরুষ স্প্রাগ-ডাউলি (এসডি) ইঁদুর (180-220 গ্রাম) জিনজিয়াং মেডিকেল ইউনিভার্সিটি অ্যানিমেল সেন্টার, লাইসেন্স নং: SCXK (নতুন) 2011-0004 থেকে কেনা হয়েছিল। ইঁদুরকে নির্দিষ্ট-প্যাথোজেন-মুক্ত (এসপিএফ) চা খাওয়ানো হয়েছিল। জিনজিয়াং মেডিকেল ইউনিভার্সিটির ফার্স্ট অ্যাফিলিয়েটেড হাসপাতালের অ্যানিমেল এথিক্স কমিটি দ্বারা প্রাণী পরীক্ষা সংক্রান্ত সমস্ত পদ্ধতি অনুমোদিত হয়েছিল। ইঁদুরগুলিকে নিয়ন্ত্রিত পরিবেশগত অবস্থার অধীনে খাঁচায় রাখা হয়েছিল (25 ডিগ্রী এবং একটি 12 ঘন্টা আলো/অন্ধকার চক্র) এবং স্ট্যান্ডার্ড ইঁদুরের পিলেট খাবার এবং কলের জলে বিনামূল্যে অ্যাক্সেস ছিল। ইঁদুরগুলি চিকিত্সার আগে অভ্যস্ত ছিল। একটি অমরকৃত ইঁদুর হেপাটিক স্টেলেট সেল লাইন, HSC-T6, উহান প্রোসেল জিন বায়োটেকনোলজি কোং, লিমিটেড থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। (উহান, চীন)। HSC-T6 কোষগুলি Dulbecco-এর পরিবর্তিত ঈগলের মাঝারি (উচ্চ গ্লুকোজ) (DMEM, বেইজিং, চীন) 10 শতাংশ ভ্রূণের বোভাইন সিরাম (Gibco, দক্ষিণ আমেরিকা), 100 IU/ml পেনিসিলিন এবং 100 ug/ml streptomycin (স্ট্রেপটোমিসিন) দিয়ে পরিপূরক করা হয়েছিল। , চীন) 5 শতাংশ CO2 সহ 37 ডিগ্রিতে আর্দ্রতাযুক্ত ইনকিউবেটরে।

বিএসএ-প্ররোচিত লিভারের আঘাত এবং চিকিত্সা

পঁচাত্তরটি এসডি ইঁদুরকে এলোমেলোভাবে ছয়টি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল: সাধারণ (পাসিত জল-চিকিত্সা), মডেল (বিএসএ-ট্রিটেড), পজিটিভ ড্রাগ (বিএসএ-ট্রিটেড প্লাস বিজেআরজি 600 মিলিগ্রাম/কেজি/দিন), এবং বিএসএ-চিকিত্সা করা প্লাস সিপিএইচজি(সিস্টানচে থেকে ফিনাইল ইথানল গ্লাইকোসাইড)(125, 250, 5{{20}0 মিলিগ্রাম/কেজি/দিন) গ্রুপ। BSA-চিকিত্সা করা প্লাস CPhGs (125, 250, 500 mg/kg/day) গ্রুপের প্রতিটি গ্রুপে 13টি ইঁদুর ছিল, এবং অন্য গ্রুপের প্রতিটি গ্রুপে 12টি ইঁদুর ছিল। বিএসএ-প্ররোচিত লিভারের আঘাতের মডেলটিকে প্রাথমিক সংবেদনশীলতায় ভাগ করা হয়েছে এবং তারপরে একটি ইমিউনোলজিকাল আক্রমণ) [13]। সাধারণ গোষ্ঠী ব্যতীত, অন্যান্য গোষ্ঠীগুলিকে প্রাথমিক সংবেদনশীলতার জন্য 1, দিন 15, দিন 22, দিন 29 এবং 36 দিনে 0.5 মিলি (9 মিলিগ্রাম/মিলি) বিএসএ ফ্রুন্ডের অসম্পূর্ণ সহায়ক সহ একাধিক সাবকুটেনিয়াস ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। পঞ্চম ইনজেকশনের সাত দিন পর, ইঁদুরের রেটিনাল ভেইন প্লেক্সাসের মাধ্যমে রক্ত ​​পাওয়া যায় এবং সিরাম অ্যালবুমিন অ্যান্টি-বডির জন্য পরীক্ষা করা হয়। ইঁদুরের সিরামে বিএসএ অ্যান্টিবডি একটি ডাবল আগর প্রসারণ পদ্ধতি দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। সপ্তাহে দুবার দশবার বিএসএ অ্যান্টিবডি-পজিটিভ ইঁদুরের কডাল ভেইন দিয়ে সাধারণ স্যালাইনে ০.৪ মিলি বিএসএ দিয়ে আক্রমণের ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। ইনজেকশনের ঘনত্ব এবং সময় ছিল 5৷{28}}, 5.50, 6৷{32}}, 6.50, 7৷{38}}, 7.50, 8.50, 9৷{42}}, 9.50 এবং 10.00 g/L দিন 46, দিন 50, দিন 53, দিন 57, দিন 60, দিন 64, দিন 67, দিন 71, দিন 74 এবং দিন 78, যথাক্রমে। সাধারণ গোষ্ঠীতে, সাধারণ স্যালাইন বিএসএর পরিবর্তে ইমিউনোলজিকাল প্রাথমিক (সংবেদনশীলতা) এবং মাধ্যমিক (আক্রমণ) ইনজেকশনগুলির জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল এবং অন্যান্য শর্তগুলি মডেল গ্রুপের মতোই ছিল। সাধারণ গোষ্ঠীকে 10 মিলি/কেজি/দিনের ডোজ সহ মৌখিকভাবে পাতিত জল দেওয়া হয়েছিল। মডেল গ্রুপকে মৌখিকভাবে 10 মিলি/কেজি/দিন 0.5 শতাংশ CMC-Na দ্রবণ দেওয়া হয়েছিল। ইতিবাচক ড্রাগ গ্রুপ মৌখিকভাবে 600 মিলিগ্রাম/কেজি/দিন BJRG পরিচালিত হয়েছিল। BSA-চিকিত্সা প্লাস CPhGs (125,

250, এবং 500 mg/kg/day) গ্রুপ মৌখিকভাবে 125, 250, এবং 500 mg/kg/day CPhGs পরিচালিত হয়েছিল(সিস্টানচে থেকে ফিনাইল ইথানল গ্লাইকোসাইড), যথাক্রমে। ইঁদুরের দৈনিক ডোজ শেষ ইনজেকশনের পর দুই সপ্তাহ ধরে চলতে থাকে। পরীক্ষামূলক সময়ের পরে, ইঁদুরগুলিকে 10 শতাংশ ক্লোরাল হাইড্রেটের আগে 12 ঘন্টা উপবাস করা হয়েছিল এবং তারপরে অবিলম্বে euthanized করা হয়েছিল। প্রতিটি ইঁদুর থেকে সিরাম নমুনা সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং অবিলম্বে ব্যবহার করা হয়েছিল। লিভার দুটি উদ্দেশ্যে সংগ্রহ করা হয়েছিল: (1) হাইপ কিটগুলির জন্য তরল নাইট্রোজেন সংরক্ষণ এবং (2) হিস্টোলজিক্যাল এবং ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল পরীক্ষার জন্য 10 শতাংশ ফর্মালডিহাইডে ফিক্সেশন। প্রাণী অধ্যয়নের পুরো সময়কাল ছিল 93 দিন।

লিভার এবং প্লীহা সূচক

লিভার এবং প্লীহা ল্যাপারোটমি দ্বারা বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং 4 ডিগ্রি সাধারণ স্যালাইন দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। ফিল্টার পেপার দিয়ে অতিরিক্ত জল শোষণ করার পর, সংশ্লিষ্ট সূচকগুলি গণনা করার জন্য লিভার এবং প্লীহাকে ওজন করা হয়েছিল: আপেক্ষিক অঙ্গের ওজন=অঙ্গ ভর (g)/ব্যক্তিগত শরীরের ভর (g) × 100 শতাংশ [14]।

কোষ পরীক্ষা

HSC-T6 কোষগুলি একটি 96- ভাল প্লেটে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল৷ প্রাথমিকভাবে, 48 ঘন্টার জন্য 10 শতাংশ FBS ধারণ করে DMEM দিয়ে কোষগুলিকে সংষ্কৃত করা হয়েছিল। 12 ঘন্টার জন্য কোষগুলিকে অনাহারে রাখার জন্য FBS ছাড়াই মাধ্যমটিকে ডিএমইএম দিয়ে প্রতিস্থাপিত করা হয়েছিল। কোষগুলিকে তখন DMEM দিয়ে সংষ্কৃত করা হয়েছিল যাতে 24 ঘন্টার জন্য 5.0 ng/mL TGF- 1 (FBS ছাড়া) থাকে। অবশেষে, CPhGs এর বিভিন্ন ঘনত্ব(সিস্টানচে থেকে ফিনাইল ইথানল গ্লাইকোসাইড)(100ug/ml, 50ug/ml, এবং 25ug/ml), অ্যাকটিওসাইড (6 ug/ml, 3 ug/ml, এবং 1.5 ug/ml), এবং echinacoside (500ug/ml, 250ug/ml, এবং 125ug/ml) চতুর্মুখী কূপে প্লেটে বাহিত হয় এবং 48 ঘন্টার জন্য incubated করা হয়।

রিয়েল-টাইম পিসিআর বিশ্লেষণ

NF-κB, p65, এবং কোলাজেন I-এর mRNA এক্সপ্রেশন লেভেল রিয়েল-টাইম পিসিআর দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। HSC-T6 কোষে mRNA অভিব্যক্তি নির্ধারণের জন্য, কোষগুলিকে (4 × 105 কোষ) 10 শতাংশ FBS সহ 3 mL DMEM সহ ছয়-কূপ প্লেটে বীজ দেওয়া হয়েছিল এবং 37 ডিগ্রি এবং 5 শতাংশ CO2 এ রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল, যার পরে কোষ সংস্কৃতি মিডিয়া সিরাম-মুক্ত DMEM-এ পরিবর্তিত হয়েছিল। পরবর্তী, CPhGs(সিস্টানচে থেকে ফিনাইল ইথানল গ্লাইকোসাইড)(100 ug/ml, 50 ug/ml, এবং 25 ug/ml), Acteoside (6 ug/ml, 3 ug/ml, এবং 1.5 ug/ml), এবং echinacoside (500 ug/ml , 250 ug/ml, এবং 125 ug/ml) কূপগুলিতে যোগ করা হয়েছিল। CPhGs বা মনোমেরিক কম্পোজিশনের সাথে 48 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে, TRIzol রিএজেন্ট (Invitrogen, USA) ব্যবহার করে মোট RNA বের করা হয়েছিল এবং 15 সেকেন্ডের জন্য ক্লোরোফর্ম দিয়ে জোরে জোরে আন্দোলিত হয়েছিল। 3 মিনিট ঘরের তাপমাত্রায় বসার পর, লাইসেটকে 12,000 × g 15 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রিতে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। জলীয় পর্যায়ের আরএনএ আইসোপ্রোপ্যানল দিয়ে প্ররোচিত হয়েছিল, এবং উপরের জলীয় পর্যায়টি একটি নতুন মাইক্রোসেন্ট্রিফিউজ টিউবে স্থানান্তরিত হয়েছিল। RNA 0.75 শতাংশ ইথানল যোগ করে প্ররোচিত হয়েছিল, তারপরে মাইক্রোসেন্ট্রিফিউজ টিউবটি 12,000 × g 4 ডিগ্রীতে 5 মিনিটের বেশি নয়। সুপারনাট্যান্ট সরানো হয়েছিল এবং আরএনএ 5-10 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় শুকানো হয়েছিল। প্রাইমারের নির্দিষ্ট সেট (সাংগন, সাংহাই, চীন) যেগুলি ইঁদুর-অ্যাক্টিন [জেনব্যাঙ্ক: এনএম_031144.3], কোলাজেন আই [জেনব্যাঙ্ক: এনএম_ 053304.1], এবং এনএফের পরিবর্ধনের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল -κB p65 [GenBank: NM_199267.2] জিনগুলি ব্যাচ প্রাইমার 3 ব্যবহার করে ডিজাইন করা হয়েছিল। ফরোয়ার্ড (fw) এবং বিপরীত (rv) প্রাইমারগুলি নিম্নরূপ ছিল: কোলাজেন I (fw: GGA GAG AGC ATG ACC GAT GG , rv: GGG ACT TCT TGA GGT TGC CA), NF-κB p65 (fw: CAT ACG CTG ACC CTA GCC TG, rv: TTT CTT CAA TCC GGT GGC GA), -actin (fw: TAA GGC CAA CCG TGA AAA GAT G, rv: AGA GGC ATA CAG GGA CAA CAC A)। ফলাফলগুলি হাউসকিপিং জিনের mRNA-তে স্বাভাবিক করা হয়েছিল - একটি অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ হিসাবে অ্যাক্টিন এবং আপেক্ষিক mRNA স্তর হিসাবে উপস্থাপিত হয়। 8 μL iQ SYBR গ্রিন সুপারমিক্স, 1 μL 10 pM প্রাইমার পেয়ার, 8.5 μL পাতিত জল, এবং 2.5 μL cDNA দিয়ে প্রতিক্রিয়া সম্পাদিত হয়েছিল। প্রতিটি পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া নিম্নলিখিত অবস্থার অধীনে সঞ্চালিত হয়েছিল: 3 মিনিটের জন্য 95 ডিগ্রি, তারপর 95 ডিগ্রিতে 10 সেকেন্ডের 40টি চক্র, 55 ডিগ্রিতে 30 সেকেন্ড এবং এক্সটেনশনের জন্য 55 ডিগ্রি - 95 ডিগ্রিতে 10 সেকেন্ড, তারপরে একক প্রতিপ্রভ পরিমাপ . চূড়ান্ত ফলাফল আপেক্ষিক মান (2-ΔΔCt) সহ বর্ণনা করা হয়েছিল। গণনা এবং বিশ্লেষণ iQ5 রিয়েল-টাইম পিসিআর সনাক্তকরণ সিস্টেম দ্বারা সঞ্চালিত হয়েছিল।

ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ

কোলাজেন I (Abcam, Cambridge, UK, Art No: ab34710) প্রোটিন এক্সপ্রেশন স্তরগুলি ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল [-অ্যাক্টিন (লট: 60008-1-lg; প্রোটিনটেক, চীন) একটি হাউসকিপিং নিয়ন্ত্রণ হিসাবে। সম্পূর্ণ কোষের নির্যাস রেডিওইমিউনোপ্রেসিপিটেশন অ্যাস (RIPA) (থার্মো সায়েন্টিফিক, ইউএসএ) বাফার ব্যবহার করে 1 শতাংশ হাল্ট প্রোটেজ ইনহিবিটর ককটেল (থার্মো সায়েন্টিফিক, ইউএসএ) এবং 1 শতাংশ হাল্ট ফসফেটেস ইনহিবিটর ককটেল (থার্মো সায়েন্টিফিক, ইউএসএ) ব্যবহার করে প্রস্তুত করা হয়েছিল। প্রোটিনের ঘনত্ব ব্র্যাডফোর্ড পদ্ধতি দ্বারা পরিমাপ এবং পরিমাপ করা হয়েছিল [18]। প্রোটিন (10-50 ug) 10 শতাংশ SDS-PAGE জেলে আলাদা করা হয়েছিল এবং PVDF মেমব্রেনে (মিলিপুর, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) স্থানান্তরিত হয়েছিল। 5 শতাংশ বিএসএ সহ কক্ষ তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য ঝিল্লি ব্লক করা হয়েছিল এবং প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলি (অ্যান্টি-কোলা জেন আই অ্যান্টিবডি, 1:200 ডিলিউশন বা -অ্যাক্টিনের মাউস এমএবি, 1:5000 ডাইলিউশন) রাতারাতি 4 ডিগ্রিতে ইনকিউব করা হয়েছিল। সংশ্লিষ্ট Alk-Phos. কনজুগেটেড সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলি ঘরের তাপমাত্রায় ইনকিউবেট করা হয়েছিল। অবশেষে, ঝিল্লিগুলি 0.1 শতাংশ টুইন 20 সহ 1 × ট্রিস-এইচসিএল স্যালাইন দিয়ে তিনবার ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল এবং GEL DOC XR ইমেজিং সিস্টেম (বায়ো-র্যাড) দ্বারা সিগন্যালগুলি স্ক্যান এবং ভিজ্যুয়ালাইজ করা হয়েছিল। ডেনসিটোমেট্রিক বিশ্লেষণ আগ্রহের প্রোটিনগুলিতে সম্পাদিত হয়েছিল এবং GEL DOC ইমেজ স্টুডিও সফ্টওয়্যার (বায়ো-র্যাড) দ্বারা অ্যাক্টিনে স্বাভাবিক করা হয়েছিল। -অ্যাক্টিন অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।

পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

শাপিরো-উইল্ক স্বাভাবিকতা পরীক্ষা এবং লেভেনের ভ্যারিয়েন্স সমজাতীয়তা পরীক্ষা স্বাভাবিকতা যাচাই করার জন্য প্রয়োগ করা হয়েছিল এবং আপনি এবং অন্যান্য। DARU জার্নাল অফ ফার্মাসিউটিক্যাল সায়েন্সেস (2015) 23:52 পৃষ্ঠা 4 এর 13 সমজাতীয়তার বৈচিত্র। তুকি-এর পোস্ট-হক টেস্টের পর প্রকরণের বিশ্লেষণ (ANOVA) একজাতীয়, সাধারণত বিতরণ করা ডেটার পরিসংখ্যানগত পার্থক্য সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। ক্রুসকাল-ওয়ালিস নন-প্যারামেট্রিক পরীক্ষাটি ডেটা বিশ্লেষণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল যা সাধারণত বিতরণ করা হয় না বা একজাতীয় নয়। ফলাফলগুলি গড় ± SD হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। তাত্পর্য P < 0.05="" এ="" সেট="" করা="" হয়েছিল।="" সমস্ত="" ডেটা="" spss="" 16.0="" সফ্টওয়্যার="" (জিনজিয়াং="" মেডিকেল="" বিশ্ববিদ্যালয়)="" দ্বারা="" বিশ্লেষণ="" করা="">

ফলাফল

CPhG-এর পরিমাণগত সংকল্প

সি. টিউবুলোসার CPhG-তে দুটি ফিনাইলথাইল অ্যালকোহল গ্লাইকোসাইড, ইচিনাকোসাইড এবং অ্যাক্টিওসাইড রয়েছে এবং CPhG-তে তাদের বিষয়বস্তু এইচপিএলসি বিশ্লেষণ (চিত্র 1) দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল 42.71 ± 0.42 শতাংশ এবং 14.27 ± {{7 }}.18 শতাংশ, যথাক্রমে।

লিভার এবং প্লীহা সূচক

সারণী 1 হিসাবে দেখানো হয়েছিল, মডেল গ্রুপের লিভার এবং প্লীহা সূচকগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত হয়েছিল [P < 0৷{3}}1,="" p="">< 0.05]।="" বিভিন্ন="" ডোজ="" গ্রুপে="" পজিটিভ="" ড্রাগ="" bjrg="" এবং="" cphg-এর="" লিভার="" এবং="" প্লীহা="" সূচকগুলি="" মডেল="" গ্রুপ="" [pliver="0.004," pliver="0.003," pliver="0" এর="" তুলনায়="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" হ্রাস="" পেয়েছে।="" 004,="" pliver="0.005;" pspleen="0.017," pspleen="0.027," pspleen="0.024," pspleen="0.070," যথাক্রমে]।="" লিভার="" এবং="" প্লীহা="" সূচকগুলি="" মডেল="" গ্রুপের="" তুলনায়="" কম="">

ALT, AST কার্যক্রম এবং লিভার ফাইব্রোসিস মার্কারগুলিতে CPhG-এর প্রভাব

বর্তমান গবেষণায়, মডেল গ্রুপে হেপাটিক এনজাইম AST এবং ALT-এর সিরামের মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে, যা BSA-প্ররোচিত লিভার ফাইব্রোসিস ইঁদুরের হেপাটোসেলুলার ক্ষতি প্রতিফলিত করে। তবে পরীক্ষা-নিরীক্ষা।

দেখিয়েছে যে BJRG (600 mg/kg) এবং CPhGs (125, 250, এবং 5{{10}}0 দিয়ে চিকিত্সা mg/kg) উল্লেখযোগ্যভাবে AST [PAST < 0="" হ্রাস="" করেছে।{57}}{{60}}1,="" অতীত="">< 0.001,="" অতীত="">< 0.001,="" অতীত="">< 0.001="" ,="" যথাক্রমে]="" এবং="" alt="" [palt="0.117," palt="0.139," palt="0.189," palt="0.255," যথাক্রমে]="" হেপাটিক="" ফাইব্রোসিস="" ইঁদুরের="" মাত্রা="" .="" (টেবিল="" ২).="" মডেল="" ইঁদুরে="" ha,="" ln,="" pc="" এবং="" iv-c-এর="" মাত্রা="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" বৃদ্ধি="" পেয়েছে="" [pha=""><0.001, pln=""><0.001, ppciii="0.002," piv-c=""><0.001, যথাক্রমে]।="" মডেল="" গ্রুপের="" সাথে="" তুলনা="" করে,="" ha="" [pha="0.009," pha="0.007," pha="0.009," pha="0.023," যথাক্রমে],="" ln="" [pln="0.011," p="" ln="0.004," p="" ln="0.026," p="" ln="0.069," যথাক্রমে],="" pc="" iii="" [p="" pciii="" {="" {47}}.006,="" p="" pciii="0.067," p="" pciii="0.136," p="" pciii="0.296," যথাক্রমে],="" এবং="" iv-c="" [p="" iv-c="">< 0.001,="" p="" iv-c=""><0.001, p="" iv-c=""><0.001, p="" iv-c=""><0.001, যথাক্রমে]="" বিভিন্ন="" ডোজ="" গ্রুপে="" bjrg="" (600="" mg/kg)="" এবং="" cphgs="" দ্বারা="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" হ্রাস="" পেয়েছে="" (125,="" 250,="" এবং="" 500="" মিলিগ্রাম/কেজি)="" (সারণী="" 3)।="" লিভারের="" টিস্যুতে="" হাইপের="" মাত্রা="" পরিমাপ="" করে="" হাইপ="" সামগ্রী="" এবং="" টিজিএফ-="" 1="" কোলাজেন="" সামগ্রীও="" সনাক্ত="" করা="" হয়েছিল।="" সারণি="" 4="" এ="" দেখানো="" হয়েছে,="" গড়="">মডেল গ্রুপে স্তরটি স্বাভাবিক গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল, তবে এটি বিজেআরজি গ্রুপ এবং বিভিন্ন সিপিএইচজি ডোজ গ্রুপে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। ইঁদুরের মডেল গ্রুপের TGF{{0}} এর হেপাটিক ঘনত্ব উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে [P < 0৷{8}}01]৷="" মডেল="" গ্রুপের="" সাথে="" তুলনা="" করে,="" ইতিবাচক="" ওষুধের="" tgf-="" 1="" মাত্রা="" এবং="" বিভিন্ন="" cphgs="" ডোজ="" গ্রুপগুলি="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" হ্রাস="" পেয়েছে="" [p="" tgf-="" 1="">< 0.001,="" p="" tgf-="" 1="">< 0.001,="" p="" tgf-="" 1="">< 0.001,="" ptgf-="" 1="">< 0.001,="" যথাক্রমে]।="" ফলাফলগুলি="" সারণী="" 4="" এ="" সংক্ষিপ্ত="" করা="">

হিস্টোপ্যাথলজিকাল পরীক্ষা

এইচএন্ডই এবং ম্যাসনের ট্রাইক্রোম দ্বারা দাগযুক্ত লিভারের টিস্যু বিভাগগুলির পর্যবেক্ষণগুলি স্বতন্ত্র হেপাটিক লোবিউল এবং হেপাটিক সাইনোসয়েডগুলি প্রদর্শন করে। মডেল ইঁদুরের লিভারের টিস্যুর গঠন বিকলাঙ্গ ছিল এবং যকৃতের টিস্যু এবং হেপাটিক সাইনোসয়েডগুলি প্রচুর পরিমাণে সংযোগকারী টিস্যু দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয়েছিল। যাইহোক, মডেল গ্রুপের তুলনায় চিকিত্সা গ্রুপে আরও সাধারণ সাইটোআর্কিটেকচার এবং কম সংযোগকারী টিস্যু সনাক্ত করা হয়েছিল।

H&E স্টেনিং

সাধারণ গ্রুপে, অস্বাভাবিক পোর্টাল এলাকা এবং হেপাটিক সাইনোসয়েড ছাড়া হেপাটিক লোবিউলের কাঠামোগত অখণ্ডতা পরিলক্ষিত হয়। হেপাটিক কর্ডগুলি একটি সুশৃঙ্খল ফ্যাশনে সাজানো হয়েছিল, মূল গোলাকার এবং পরিষ্কার। নিউক্লিয়াস কোষের কেন্দ্রে অবস্থিত, প্রচুর পরিমাণে সাইটোপ্লাজম রয়েছে। শুধুমাত্র পোর্টাল এলাকায় অল্প পরিমাণে আঁশযুক্ত টিস্যু থাকে (চিত্র 2a)। মডেল গ্রুপে, লোবুলার কাঠামো মারাত্মকভাবে ক্ষতিগ্রস্ত হয়েছিল। লিভারের কোষগুলি হালকা জলীয় অবক্ষয় দেখায়, বেশিরভাগ বেলুনিং অবক্ষয় এবং/অথবা ফ্যাটি অবক্ষয়। প্রদাহজনক কোষের অনুপ্রবেশের গঠন, ব্যাপক তন্তুযুক্ত টিস্যু হাইপারপ্লাসিয়া, প্রচুর সংখ্যক ফাইব্রাস সেপ্টামের গঠন, বিভক্ত লোবিউলস এবং উল্লেখযোগ্য লিভার কোষের বিস্তারও পরিলক্ষিত হয়েছে। এই পর্যবেক্ষণগুলি হেপাটিক ফাইব্রোসিস (চিত্র 2বি) এর ইঁদুর প্রতিরোধী আঘাতের পশু মডেল প্রতিষ্ঠার সাফল্য নিশ্চিত করেছে। মডেল গ্রুপের সাথে তুলনা করে, বিভিন্ন CPhG-তে প্রদাহজনক কোষের অনুপ্রবেশের হ্রাস ছিল। এছাড়াও কম নেক্রোসিস এবং লিভার কোষের ফ্যাটি অবক্ষয় এবং সেইসাথে ফাইব্রোসিস উপশম লক্ষ্য করা গেছে। CPhGs উল্লেখযোগ্যভাবে ইঁদুরের BSA-প্ররোচিত হেপাটিক ফাইব্রোসিসের প্যাথলজি প্রশমিত করেছে, যকৃতের কোষের ফোলাভাব কমিয়েছে, এবং কার্যকরভাবে হেপাটোসাইট নেক্রোসিস এবং প্রদাহজনক কোষের অনুপ্রবেশ রোধ করেছে, পরামর্শ দেয় যে CPhGs BSA-প্ররোচিত ফাইব্রোসিস হেপাপাসিসের উপর একটি প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব প্রয়োগ করে। (চিত্র 2c-f)। ম্যাসনের ট্রাইক্রোম স্টেনিং স্বাভাবিক গ্রুপে, লিভারের টিস্যু স্বাভাবিক ছিল। হেপাটিক পোর্টাল এলাকায় অল্প সংখ্যক নীল কোলাজেন ফাইবার দেখায় এবং লিভারের টিস্যু সাধারণত গঠন করা হয় (চিত্র 3a)। সাধারণ গোষ্ঠীর লিভার টিস্যুর সাথে তুলনা করে, তন্তুযুক্ত টিস্যু কেন্দ্রীয় লিফলেট দ্বারা প্রসারিত হয় এবং লিভার প্যারেনকাইমায় প্রসারিত হয়। কোলাজেন ফাইবার প্রসারিত এবং সংযুক্ত এবং

পুরো লোবিউলকে আবৃত করে এবং কেন্দ্রীয় শিরাকে ঘিরে রাখে। হেপাটোসাইট ফাইব্রোসিস, লোবুলার স্ট্রাকচারাল ড্যামেজ, পেরিপোর্টাল ফাইব্রোসিস এবং সিউডোলোবুল গঠন (চিত্র 3বি) সহ এই প্রভাবগুলি প্রমাণ দিয়েছে যে মডেলটি প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল। মডেল গ্রুপের সাথে তুলনা করে, পজিটিভ ড্রাগ কন্ট্রোল গ্রুপের কোলাজেন ফাইবারগুলি পেরিফেরাল পোর্টাল এলাকা (চিত্র 3c) থেকে হালকাভাবে বাইরের দিকে প্রসারিত হয়েছিল। মডেল গ্রুপের সাথে তুলনা করলে, বিভিন্ন CPhGs ডোজ গ্রুপে কোলাজেন ফাইবার উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, ফাইবারের বিস্তার বাধাপ্রাপ্ত হয়েছে এবং লিভার প্যারেনকাইমার মধ্যে ফাইবারস টিস্যুর বিস্তার উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে CPhGs ইঁদুরকে BSA-প্ররোচিত হেপাটিক ফাইব্রোসিস (চিত্র 3d–f) থেকে রক্ষা করেছে।

ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেনিং

গুরুত্বপূর্ণভাবে, কোলাজেন টাইপ I এবং কোলাজেন টাইপ III এর অভিব্যক্তি হেপাটিক ফাইব্রোসিসের বিকাশে অপরিহার্য ভূমিকা পালন করে এবং লিভারের টিস্যুতে তাদের উত্পাদন এবং জমা হওয়া অ্যান্টি-হেপাটিক ফাইব্রোসিস কার্যকারিতার একটি গুরুত্বপূর্ণ নির্ধারক হিসাবে কাজ করতে পারে। ফলাফলগুলি সারণী 5 এ সংক্ষিপ্ত করা হয়েছে

কোলাজেন টাইপ আই

সাধারণ গ্রুপ কোলাজেন টাইপ I প্রকাশ করে মূলত রক্তনালী এবং পোর্টাল এলাকায়। মডেল গ্রুপটি পোর্টাল এলাকায় কোলাজেন টাইপ I ভাস্কুলার ফাইব্রোসিসকে উচ্চভাবে প্রকাশ করেছে। ডিসের স্পেসে, কোলাজেন টাইপ I স্টেনিং স্ট্রিক বা প্যাচি ডিস্ট্রিবিউশন হিসাবে পরিলক্ষিত হয়েছিল। কোলাজেন ফাইব্রাস সেপ্টাকে আবদ্ধ করে সিউডোলোবুল গঠন করে। এই পরীক্ষাগুলিতে, BJRJ (600 mg/kg) এবং CPhGs (125, 250, এবং 500 mg/kg) [PCol I=0.002, PCol I {{ এর বিভিন্ন ডোজ গ্রুপের জন্য কম ফাইব্রাস সেপ্টা গঠিত হয়েছিল 6}}.001, PCol I=0.023, এবং P Col I=0.044, যথাক্রমে]। অর্ধ-পরিমাণগত ফলাফল প্রকাশ করেছে যে তাদের কোলাজেন টাইপ I-এর অভিব্যক্তি মডেল গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে কম ছিল (চিত্র 4)।

কোলাজেন প্রকার III

কোলাজেন টাইপ III স্বাভাবিক গোষ্ঠীতে দুর্বলভাবে প্রকাশ করা হয়েছিল এবং পোর্টাল এবং হেপাটিক শিরাগুলির আশেপাশের পেরিফেরাল অঞ্চলগুলি অবিচ্ছিন্ন তন্তুগুলির পরিবর্তে অল্প পরিমাণে সূক্ষ্ম হলুদ প্রদর্শন করেছিল (চিত্র 5a)। মডেল গ্রুপে, কোলাজেন ফাইবারগুলি প্রশস্ত এবং পুরু কর্ডগুলি প্রদর্শন করে, যা শক্তিশালী অভিব্যক্তি নির্দেশ করে, প্রধানত পোর্টাল এবং তন্তুযুক্ত টিস্যু এলাকায় অবস্থিত (চিত্র 5বি)। BJRJ (600 mg/kg) এর কোলাজেন ফাইবার এবং CPhGs এর বিভিন্ন ডোজ গ্রুপ (125, 250, এবং 500 mg/kg) ফিলামেন্টাস এবং কেন্দ্রীয় শিরা এবং পোর্টাল অঞ্চলের চারপাশে বিতরণ করা হয়েছিল। মডেল গ্রুপের সাথে তুলনা করে, কোলাজেন ফাইবার উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, দাগ ফ্যাকাশে এবং পাতলা ছিল এবং ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেনিং দুর্বলভাবে ইতিবাচক ছিল (চিত্র 5c–f)। এই আধা-পরিমাণগত ফলাফলগুলি দেখায় যে ধনাত্মক এবং বিভিন্ন ডোজ গ্রুপে ইতিবাচকভাবে প্রকাশিত কোষগুলি [PCol III=0.015, PCol III=0.001, PCol III=0.010, এবং P Col III=0.037, যথাক্রমে] মডেল গ্রুপের থেকে আলাদা ছিল।

TGF- 1

সাধারণ ইঁদুরের যকৃতের কোষে TGIF{{0}} এর সামান্য প্রকাশ ছিল। অভিব্যক্তি অল্প সংখ্যক ইন্টারস্টিশিয়াল কোষে সীমাবদ্ধ ছিল (চিত্র 6a)। মডেল গ্রুপে, TGF- 1 অভিব্যক্তিটি পোর্টাল এলাকা, তন্তুযুক্ত স্থান, হেপাটিক স্টেলেট কোষ, প্রদাহজনক কোষ, সাইনোসয়েডাল প্রাচীর এবং সাইটোপ্লাজমে ব্যাপকভাবে বিতরণ করা হয়েছিল। একটি নির্দিষ্ট পোর্টাল এলাকা বাদামী-হলুদ দাগ দিয়ে একটি দৃঢ়ভাবে ইতিবাচক অভিব্যক্তি প্রদর্শন করেছে (চিত্র 6বি)। বিজেআরজে (600 মিলিগ্রাম/কেজি) এবং সিপিএইচজি (125, 250, এবং 500 মিলিগ্রাম/কেজি) এর বিভিন্ন ডোজ গ্রুপের পোর্টাল এলাকায় এবং ফাইব্রাস সেপ্টাগুলিতে অল্প পরিমাণে অভিব্যক্তি ছিল। মডেল গ্রুপের তুলনায় এই গোষ্ঠীগুলিতে ইতিবাচক দাগের পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। ফাইব্রাস সেপ্টার অন্তর্বর্তী কোষে দাগ এবং প্রদাহজনক কোষের সাইটোপ্লাজম হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 6c–f)। আধা-পরিমাণগত ফলাফলগুলি প্রকাশ করেছে যে BJRJ এবং CPhGs এর বিভিন্ন ডোজ গ্রুপ [P TGF- 1=0.001, P TGF- 1 < 0.001,="" p="" tgf-="" 1="0.009," ptgf-="" 1="0" .004,="" যথাক্রমে]="" মডেল="" গ্রুপের="" তুলনায়="" উল্লেখযোগ্য="" ছিল।="" নিবন্ধে="" আগেই="" উল্লেখ="" করা="" হয়েছে,="" tgf-="" 1="" হল="" লিভারের="" প্যাথোফিজিওলজিতে="" একটি="" গুরুত্বপূর্ণ="">

ফাইব্রোসিস, এক্সট্রা সেলুলার ম্যাট্রিক্সের উত্পাদনকে উদ্দীপিত করে [19]। আমরা দেখিয়েছি যে লিভার ফাইব্রোসিসের তীব্রতার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণভাবে মডেল গ্রুপে TGF- 1 এর মাত্রা বৃদ্ধি পেয়েছে। লিভারে TGF- 1-এর এক্সপ্রেশন স্তরগুলি সিরাম TGF- 1 স্তরের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল। এটি ইঙ্গিত করে যে CPhGs উল্লেখযোগ্যভাবে TGF- 1 প্রকাশের কারণে যকৃতের ফাইব্রোসিস কমাতে পারে ECM এর সংশ্লেষণ এবং অবনতিতে অংশগ্রহণ করে। কোলাজেন টাইপ I, কোলাজেন টাইপ III এবং TGF- 1 এর অভিব্যক্তি হেপাটিক ফাইব্রোসিসের রোগগত প্রক্রিয়া সনাক্ত করতে পারে। চিকিত্সা গোষ্ঠীতে তাদের প্রকাশের মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে এবং চিত্রিত করা হয়েছে যে CPhGs কোলাজেনেস কার্যকলাপকে উন্নত করতে পারে, লিভার ECM সংশ্লেষণ এবং অবনতির গতিশীল ভারসাম্য বজায় রাখতে পারে, এইভাবে লিভার ফাইব্রোসিস গঠনে বিলম্ব এবং প্রতিরোধ করে।