পার্ট 1: অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট স্থিতি, প্রদাহ, এবং অ্যাপোপটোসিস পরিবর্তনের মাধ্যমে ডক্সোরুবিসিন-মধ্যস্থ কিডনির আঘাতকে অ্যামিলিওরেট করে: NF-kB এবং Nrf2/Ho-এর সম্ভাব্য ভূমিকা-1

আরও তথ্যের জন্য. যোগাযোগtina.xiang@wecistanche.com

বিমূর্ত: ডক্সোরুবিসিন-মধ্যস্থকিডনি বৈকল্যক্যান্সার চিকিৎসায় একটি গুরুতর সমস্যা। তদনুসারে, এই কাজটি ডক্সোরুবিসিন-প্ররোচিত করার জন্য জেরানিয়লের ক্ষমতার তদন্ত করেছেকিডনি ক্ষতিএকটি ইঁদুর মডেল ব্যবহার করে। ইঁদুরগুলিকে এলোমেলোভাবে চারটি গ্রুপে বরাদ্দ করা হয়েছিল: নিয়ন্ত্রণ, ডক্সোরুবিসিন (20 মিলিগ্রাম/কেজি, ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল, আইপি), ডক্সোরুবিসিন প্লাস 100 মিলিগ্রাম/কেজি জেরানিওল এবং ডক্সোরুবিসিন প্লাস 200 মিলিগ্রাম/কেজি জেরানিওল। একটি একক ডক্সোরুবিসিন ইনজেকশন কিডনির বিকলাঙ্গতা সৃষ্টি করে, যা পরিবর্তিত সিরাম ক্রিয়েটিনিন, রক্তের ইউরিয়া নাইট্রোজেন এবং অ্যালবুমিন মান দ্বারা প্রমাণিত হয়; এটি কিডনির আর্কিটেকচারে হিস্টোলজিক্যাল পরিবর্তনও ঘটায়। অতিরিক্তভাবে, ডক্সোরুবিসিন বর্ধিত লিপিড পারক্সিডেশন কমিয়ে গ্লুটাথিয়ন, ক্যাটালেস কার্যকলাপ এবং গ্লুটাথিয়ন পারক্সিডেস এবং সুপারঅক্সাইড ডিসমিউটেজের প্রকাশ কমিয়ে দেয়। মজার বিষয় হল, জেরানিওলের সাথে প্রাক-চিকিৎসা কিডনির অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট পরামিতি, এনজাইমেটিক কার্যকলাপ এবং প্রদাহজনক এবং অ্যাপোপটোসিস-মধ্যস্থতাকারী জিন এবং প্রোটিনের অভিব্যক্তিতে ডক্সোরুবিসিন-প্ররোচিত পরিবর্তনগুলি উদ্ধার করে। অধিকন্তু, জেরানিয়লের সাথে প্রফিল্যাকটিক চিকিত্সা ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে বেশিরভাগ কিডনির হিস্টোলজিকাল বৈশিষ্ট্য সংরক্ষণ করে। এই ফলাফলগুলি সমর্থন করে যে জেরানিওল ডক্সোরুবিসিন-মধ্যস্থতা থেকে রক্ষা করতে পারেকিডনি কর্মহীনতা. যাইহোক, ডক্সোরুবিসিন-মধ্যস্থ কিডনি কর্মহীনতার বিরুদ্ধে জেরানিওলের প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবের প্রক্রিয়াগুলি স্পষ্ট করার জন্য আরও গবেষণা প্রয়োজন।

কীওয়ার্ড: ডক্সোরুবিসিন; প্রদাহ; অক্সিডেটিভ স্ট্রেস; apoptosis; কিডনি আঘাত; geraniol

1। পরিচিতি

আবিষ্কারের পর থেকে, অ্যানথ্রাসাইক্লিন অ্যান্টি-ক্যান্সার ওষুধ ডক্সোরুবিসিন (ডক্স) কঠিন টিউমার এবং হেমাটোলজিকাল ম্যালিগন্যান্সির বিরুদ্ধে ব্যাপকভাবে ব্যবহার করা হয়েছে। এর সবচেয়ে সাধারণ পার্শ্বপ্রতিক্রিয়াগুলির মধ্যে রয়েছে নেফ্রোটক্সিসিটি, যাকে পরিস্রাবণ, পুনর্শোষণ এবং মলত্যাগের সাথে রেনাল ডিসফাংশন হিসাবে বর্ণনা করা হয়েছে, যা অসুস্থতা এবং মৃত্যুর একটি উল্লেখযোগ্য ঝুঁকির সাথে যুক্ত। কেমোথেরাপি গ্রহণকারী ক্যান্সার রোগীদের প্রায় 60 শতাংশ নেফ্রোটক্সিসিটি বিকাশ করে, যা ডক্সের থেরাপিউটিক কার্যকারিতা সীমাবদ্ধ করে[5,6]। যদিও ডক্স-মধ্যস্থ নেফ্রোটক্সিসিটি সৃষ্টিকারী মৌলিক প্রক্রিয়াগুলি অজানা থেকে যায়, সাহিত্যে পরামর্শ দেওয়া হয় যে সম্ভাব্য অবদানকারীদের অন্তর্ভুক্তঅক্সিডেটিভ স্ট্রেস, প্রদাহ, এবংapoptosis. বিশেষ করে, প্রমাণ ইঙ্গিত করে যে ডক্স-সম্পর্কিত হ্রাসঅক্সিডেটিভ স্ট্রেস, প্রদাহ, এবং অ্যাপোপটোটিক ঘটনাগুলি ওষুধের রেনাল বিষাক্ততা কমাতে সাহায্য করতে পারে।

নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টর(erythroid-derived 2)-like 2 (Nrf2) হল একটি রেডক্স-সংবেদনশীল ট্রান্সক্রিপশনাল ফ্যাক্টর যার অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি এবং সাইটোপ্রোটেক্টিভ ক্ষমতা রয়েছে যা সেলুলার প্রতিরক্ষা ব্যবস্থাকে টিকিয়ে রাখে। অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের উপর, Nrf2 তার সাইটোপ্লাজমিক ইনহিবিটর প্রোটিন প্রকাশ করে, যা নিউক্লিয়াসে প্রবেশ করে এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিরক্ষায় জড়িত বেশ কয়েকটি জিনকে সক্রিয় করে, যেমন হেম অক্সিজেনেস-1(হো-1), গ্লুটাথিয়ন পারক্সিডেস (GPx), ক্যাটালেস( CAT), এবং সুপারঅক্সাইড ডিসম্যুটেজ (SOD) [14-19]। ডক্সের সাথে চিকিত্সা Nrf2 এর mRNA এবং প্রোটিন অভিব্যক্তি উভয়ই কমাতে দেখা গেছে এবং তাই, ডাউনস্ট্রিম অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট জিন এবং প্রোটিন, যা কিডনির বিষাক্ততার দিকে পরিচালিত করে।

নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টর-কেবি (এনএফ-কেবি) একটি ট্রান্সক্রিপশনাল ফ্যাক্টর যা অনেক প্রদাহজনক জিনের প্রকাশকে নিয়ন্ত্রণ করে; NF-kB পাথওয়ের কেন্দ্রীয় চিত্র হিসাবে, যা প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) দ্বারা সক্রিয় হয়, এটি একটি প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া এবং ফলস্বরূপ টিস্যু আঘাত [8,22,23] ট্রিগার করতে পারে। অসংখ্য গবেষণায় ডক্স প্রদাহ সৃষ্টি করে এবং ইন্টারলিউকিন-6(IL-6), ইন্টারলিউকিন-1 বিটা (L-1) এর মতো প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনের উৎপাদন বাড়াতে রিপোর্ট করেছে। এবং টিউমার নেক্রোসিস ফ্যাক্টর-আলফা(TNF-)[11,13]। উপরন্তু, ডক্স-মধ্যস্থ কিডনি ক্ষতির পরে ROS উত্পাদন বৃদ্ধি মাইটোকন্ড্রিয়াল অস্থিরতার মাধ্যমে অভ্যন্তরীণ অ্যাপোপটোটিক পাথওয়েকে সক্রিয় করতে মূল ভূমিকা পালন করতে দেখা গেছে। এই পথের মূল নির্ধারক হল মাইটোকন্ড্রিয়াল-সম্পর্কিত প্রোটিন Bax এবং Bcl-2; ব্যাক্সের সাথে Bcl-2 এর একটি সুষম অনুপাত অ্যাপোপটোসিস প্রতিরোধ করে, যখন ভারসাম্যহীনতার ফলে ঝিল্লির ব্যাপ্তিযোগ্যতা বৃদ্ধি পায় এবং সাইটোসলের মধ্যে সাইটোক্রোম সি ফুটো হয়ে যায়, যা ক্যাসপেস-9(ক্যাস্প-9) এবং ক্যাসপেসকে সক্রিয় করে {21}} (ক্যাস্প-3)। এই ধরনের অ্যাক্টিভেশন সাধারণত ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশন এবং কোষের মৃত্যুর দিকে নিয়ে যায়।

কেমোথেরাপিউটিক ওষুধের ক্লিনিকাল ব্যবহার সর্বাধিক করা এবং তাদের নেতিবাচক প্রভাবগুলি হ্রাস করা অত্যন্ত আগ্রহের বিষয়। তদনুসারে, এর বিরূপ প্রভাবগুলি [13,30,31] কমানোর জন্য ডক্সের সাথে একযোগে বিভিন্ন এজেন্টের ব্যবহার তদন্ত করার জন্য গবেষণা প্রচেষ্টা নেওয়া হয়েছে। ভেষজ নির্যাস এবং তাদের বায়োঅ্যাকটিভ উপাদানগুলি দীর্ঘদিন ধরে ওষুধের মধ্যস্থতাকারী বিষাক্ততা কমানোর ক্ষমতার জন্য স্বীকৃত। Geraniol হল অ্যাসাইক্লিক মনোটারপিন অ্যালকোহল যা প্রায় সমস্ত প্রয়োজনীয় তেলে পাওয়া যায়, যেমন আদা, গোলাপ, কমলা, ল্যাভেন্ডার এবং লেবু [32,33]। অসংখ্য গবেষণায় জেরানিয়েলের বিভিন্ন উপকারী বৈশিষ্ট্য রয়েছে, যেমন অ্যান্টি-আলসার, অ্যান্টি-ক্যান্সার [৩৫], অ্যান্টি-ডিপ্রেসেন্ট [৩৬], অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি [৩৩], এবং উপরন্তু, এটি ডায়াবেটিক নেফ্রোপ্যাথি [৩৭] কমাতে পারে। .

আমাদের সর্বোত্তম জ্ঞান অনুসারে, ডক্স-মধ্যস্থ নেফ্রোটক্সিসিটির বিরুদ্ধে জেরানিওলের প্রতিরোধমূলক প্রভাব সম্পর্কে বর্তমানে কোনও নির্দিষ্ট তথ্য নেই। তাই, আমরা Wistar ইঁদুরের কিডনিতে NF-kB এবং Nrf2/Ho-1 সংকেত পথের মাধ্যমে ডক্স দ্বারা সৃষ্ট আঘাতের উপর জেরানিওলের ক্রিয়াকলাপের প্রভাব এবং সম্ভাব্য প্রক্রিয়াগুলি অধ্যয়ন করেছি।

2. উপাদান এবং পদ্ধতি

2.1.প্রাণী

সৌদি আরবের রিয়াদের কিং সৌদ ইউনিভার্সিটি (কেএসইউ) পশু যত্ন কেন্দ্র থেকে পুরুষ উইস্টার ইঁদুর সংগ্রহ করা হয়েছিল। প্রাণীগুলিকে নিয়ন্ত্রিত অবস্থায় রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল, যেমন তাদের ঘরের তাপমাত্রায় (25 ± 1 ডিগ্রী) 12 ঘন্টা আলো/অন্ধকার চক্রের সাথে রাখা হয়েছিল এবং কেএসইউ স্থানীয় ইনস্টিটিউশনাল স্টাডি এথিক্স কমিটি দ্বারা অনুমোদিত জলে সীমাহীন প্রবেশাধিকার এবং একটি আদর্শ খাদ্য ছিল। (REC) অনুমোদন নম্বর KSU-SE-19-122 এর অধীনে।

2.2। পরীক্ষামূলক অলঙ্করণ

এই তদন্তে মোট 32টি পুরুষ উইস্টার ইঁদুর পরীক্ষা করা হয়েছে যার ওজন 190-210 গ্রাম, চারটি গ্রুপে বরাদ্দ করা হয়েছে। গবেষণার আগে ইঁদুরগুলোকে পরিবেশের সঙ্গে খাপ খাইয়ে নিতে এক সপ্তাহ সময় দেওয়া হয়েছিল। যানবাহন গ্রুপ, নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ নামেও পরিচিত, ইঁদুরের সমন্বয়ে গঠিত ছিল যাদেরকে সাধারণ স্যালাইনের মৌখিক ফর্মুলেশন দেওয়া হয়েছিল। গ্রুপ II তে 17 তম দিনে ডক্স (20 মিলিগ্রাম/কেজি আইপি একক ডোজ) দেওয়া ইঁদুর নিয়ে গঠিত [১১]। গ্রুপ ⅢI এবং IV ইঁদুরগুলিকে 18 দিনের জন্য যথাক্রমে 100 এবং 200 মিলিগ্রাম/কেজি হারে জেরানিওলের (মৌখিকভাবে) প্রফিল্যাকটিক ডোজ দেওয়া হয়েছিল এবং 17 দিনে একইভাবে ডক্স (20 মিলিগ্রাম/কেজি, আইপি) সাপেক্ষে ছিল। 18 তম দিনে, একটি নিয়ন্ত্রিত পরিবেশে কেটামাইন/জাইলাজিন সংমিশ্রণ ব্যবহার করে ইঁদুরগুলিকে euthanized করা হয়েছিল। রক্ত সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং সিরাম আলাদা করা হয়েছিল, এবং উভয় কিডনি অপসারণ করা হয়েছিল এবং অবিলম্বে তরল নাইট্রোজেনে ফ্ল্যাশ-হিমায়িত করা হয়েছিল। জৈব রাসায়নিক, জিন এবং প্রোটিন এক্সপ্রেশন অ্যাস হিমায়িত টিস্যুতে পরিচালিত হয়েছিল। হিস্টোলজিকাল পরীক্ষার জন্য, কিডনি টিস্যুর নমুনাগুলি পিবিএস-এ ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং তারপরে 4 শতাংশ ফর্মালডিহাইড দ্রবণে সংরক্ষণ করা হয়েছিল। তদন্তের সময়, একটি পরীক্ষামূলক প্রাণীর মধ্যে কষ্ট বা মৃত্যুর কোনও ইঙ্গিত পাওয়া যায়নি।

2.3। কিডনি ফাংশন মার্কার নির্ধারণ

কোরবানির সময় সংগৃহীত রক্ত ​​থেকে সিরাম বিচ্ছিন্ন করার জন্য, রক্তের নমুনাগুলিকে একটি প্রি-কুলড সেন্ট্রিফিউজে 2000×g এ 10 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। প্রাপ্ত সিরাম তারপর অ্যালবামিন, রক্তের ইউরিয়া নাইট্রোজেন (BUN) এবং ক্রিয়েটিনিনের পরিমাণ নির্ধারণের জন্য বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। এর মানকিডনি ফাংশনসিমেন্স অটোঅ্যানালাইজার ডাইমেনশন RXL MAXTM, Siemens, Washington, DC, USA ব্যবহার করে মার্কারগুলি গণনা করা হয়েছিল।

2.4.লিপিড পারক্সিডেশনের মূল্যায়ন

লিপিড পারক্সিডেশন কিডনি টিস্যুতে মূল্যায়ন করা হয়েছিল যেমনটি পূর্বে ওহকাওয়া এট আল দ্বারা বর্ণিত হয়েছে, সামান্য পরিবর্তন সহ।

2.5। হ্রাসকৃত গ্লুটাথিয়নের পরিমাণ নির্ধারণ

রেনাল পোস্ট-মাইটোকন্ড্রিয়াল সুপারনাট্যান্ট (পিএমএস) এ হ্রাসকৃত গ্লুটাথিয়ন (জিএসএইচ) এর মাত্রা ছোটখাটো পরিবর্তন সহ সেডলাক এবং লিন্ডসে দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে পরিমাপ করা হয়েছিল।

2.6। ক্যাটালেসের কার্যকলাপের পরিমাণ

রেনাল পিএমএস-এ CAT-এর কার্যকলাপ ক্লেইবোর্ন দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে নির্ধারিত হয়েছিল, সামান্য পরিবর্তনের সাথে।

2.7। জিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ (RT-qPCR)

TRIzolTMreagent (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) প্রস্তুতকারকের নির্দেশিকা অনুযায়ী কিডনি টিস্যু থেকে মোট RNA বের করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। নিষ্কাশিত আরএনএ নমুনার বিশুদ্ধতা এবং পরিমাণ একটি NanoDropTM 8000 Spectrophotometer (Thermo Scientific, USA) ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল। বিচ্ছিন্ন RNA তারপর cDNA সংশ্লেষণ সুপারমিক্স (Bimake, Houston, TX, USA) ব্যবহার করে cDNA-তে বিপরীতভাবে প্রতিলিপি করা হয়েছিল এবং ফলিত বায়োসিস্টেম 7500 ফাস্ট রিয়েল-এ এসওয়াইবিআর গ্রীন মাস্টার মিক্স (বিমাকে, হিউস্টন, টিএক্স, ইউএসএ) দিয়ে জিনের এক্সপ্রেশন পরিমাপ করা হয়েছিল। টাইম পিসিআর সিস্টেম। AACt পদ্ধতিটি তখন গ্রুপগুলির মধ্যে বিভিন্ন জিনের আপেক্ষিক অভিব্যক্তি নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল, GAPDH গৃহস্থালি জিন হিসাবে নিযুক্ত ছিল। সারণী 1 এই গবেষণায় ব্যবহৃত প্রাইমার সিকোয়েন্সগুলি তালিকাভুক্ত করে (IDT, লিউভেন, বেলজিয়াম)।

2.8। ইমিউনোব্লট বিশ্লেষণ

আলাসমারি এট আল দ্বারা বর্ণিত হিসাবে ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। [৪১]। সংক্ষেপে, বিচ্ছিন্ন প্রোটিনগুলি (30-50 ug) SDS-PAGE জেলগুলিতে ইলেক্ট্রোফোরস করা হয়েছিল এবং তারপর PVDF ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত হয়েছিল। 60 মিনিটের জন্য 5 শতাংশ ননফ্যাট শুষ্ক দুধ দিয়ে ব্লক করার পরে, নির্বাচনী প্রাথমিক অ্যান্টিবডি (Ho-1, Nrf2, TNF- , I6, NF-kB-p65, ক্লিভড-ক্যাস্পেস{{ এর বিরুদ্ধে) 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি ব্লটগুলি পরীক্ষা করা হয়েছিল 14}}, Bcl-2, Bax, এবং GAPDH, dilution 1:1000)। ঝিল্লিগুলি পরবর্তীকালে ধুয়ে ফেলা হয়, তারপর উপযুক্ত এইচআরপি-সংযোজিত সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (ডিলিউশন: 1:5000) সহ ঘরের তাপমাত্রায় 60 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়। ইসিএল রিএজেন্ট কিট এবং জেল ইমেজিং সরঞ্জাম (বায়ো-রাড, হারকিউলিস, সিএ, ইউএসএ) ঝিল্লিতে প্রোটিনের উপস্থিতি সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল।

2.9.হিস্টোপ্যাথলজি স্টাডিজ

কিডনির টিস্যুগুলি 4 শতাংশ ফর্মালডিহাইডে ফিক্সড করা হয়েছিল, তারপর প্যারাফিন বিভাগ এবং দাগ দেওয়ার জন্য প্রক্রিয়া করা হয়েছিল। 3 μm বেধে প্যারাফিন বিভাগগুলি কাটাতে একটি মাইক্রোটোম ব্যবহার করা হয়েছিল। তারপরে কাটা অংশগুলিকে মোম অপসারণের জন্য চিকিত্সা করা হয়েছিল এবং হিস্টোপ্যাথোলজিকাল পরীক্ষার জন্য হেমাটোক্সিলিন প্লাস ইওসিন (H&E) ডাই ব্যবহার করে দাগ দেওয়া হয়েছিল। অলিম্পাস বিএক্স মাইক্রোস্কোপের সাথে মিলিত একটি DP72 ক্যামেরা ব্যবহার করে কিডনি হিস্টোলজি চিত্রগুলি অর্জিত হয়েছিল।

2.10.ডেটা বিশ্লেষণ

ডেটা কম্পিউটার-ভিত্তিক প্রোগ্রাম গ্রাফ প্যাড প্রিজম 5 (সান দিয়েগো, CA, USA) দিয়ে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং ফলাফলগুলি উপায় এবং মানক বিচ্যুতি (মান ± SD) হিসাবে উপস্থাপন করা হয়েছে। গোষ্ঠীগত পার্থক্যগুলিকে একমুখী ANOVA ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল তারপরে Tukey-এর তুলনা পরীক্ষা করা হয়েছিল, যার p-মান 0.05 এর চেয়ে কম পরিসংখ্যানগত তাত্পর্য নির্দেশ করে (p<>