TUNEL Assay: কিডনি ইনজুরি মূল্যায়নের জন্য একটি শক্তিশালী টুল

যোগাযোগ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

বিমূর্ত:টার্মিনাল ডিঅক্সিনিউক্লিওটিডিল ট্রান্সফারেজ ডিইউটিপি নিক-এন্ড লেবেলিং (টিউনেল) অ্যাস হল একটি দীর্ঘ-স্থাপিত অ্যাস যা এন্ডোনিউক্লিস দ্বারা কোষের মৃত্যু-সম্পর্কিত ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশন (3'-ওএইচ ডিএনএ টার্মিনি) সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়। যেহেতু এই এনজাইমগুলি কিডনিতে বিশেষভাবে সক্রিয়, TUNEL ব্যাপকভাবে ডিএনএ বিভক্তকরণ এবং কোষের মৃত্যু সনাক্ত করতে এবং পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়।কিডনি কোষ এবং প্রাণী এবং মানুষের কিডনি থেকে ফলেবিষাক্ত বা হাইপোক্সিক আঘাত. একটি অ্যাপোপটোটিক অ্যাস হিসাবে TUNEL-এর প্রাথমিক বৈশিষ্ট্যগুলি এর প্রক্রিয়াগুলির অসংখ্য ভুল ব্যাখ্যার দিকে পরিচালিত করেছেকিডনি কোষ আঘাততবুও, TUNEL এর জন্য ক্রমশ জনপ্রিয় হয়ে উঠছেকিডনি আঘাতমূল্যায়ন কারণ এটি সর্বজনীনভাবে সংস্কৃতি এবং টিস্যু কোষে এবং কোষের মৃত্যুর সমস্ত প্রক্রিয়ার জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। অধিকন্তু, এটি সংবেদনশীল, নির্ভুল, পরিমাণগত, বিশেষ কোষ বা টিস্যু পার্টমেন্টের সাথে সহজেই সংযুক্ত এবং কোষের প্রকার বা কোষের মৃত্যুর সম্ভাব্য প্রক্রিয়াগুলির নির্ভরযোগ্য সনাক্তকরণের জন্য ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রির সাথে মিলিত হতে পারে। ঐতিহ্যগতভাবে, TUNEL বিশ্লেষণ একটি TUNEL সংকেতের উপস্থিতি বা অনুপস্থিতিতে সীমাবদ্ধ। যাইহোক, কোষের মৃত্যুর প্রক্রিয়া সম্পর্কে অতিরিক্ত তথ্য TUNEL প্যাটার্নগুলির বিশ্লেষণ থেকে পাওয়া যেতে পারে।

যৌন উত্তেজনা কিডনি ব্যাধি চিকিত্সা cistanche সম্পূরক পাউডার সঙ্গে

ভূমিকা ডিএনএ হল কোষের একমাত্র অণু যা মেরামত করা যায়, তবে ক্ষতির পরে এটি সম্পূর্ণরূপে পুনরায় সংশ্লেষিত হতে পারে না। ডিএনএ ধ্বংস একটি বহু-পদক্ষেপ কোষের মৃত্যু প্রক্রিয়ার চূড়ান্ত পর্যায়ের একটি, যা টার্মিনাল ডিএনএ বিভক্তকরণের বিন্দু পর্যন্ত সম্ভাব্যভাবে বিপরীতমুখী। অতএব, পরেরটি অপরিবর্তনীয় কোষ মৃত্যুর একটি সাধারণ বৈশিষ্ট্য এবং যান্ত্রিক চিহ্নিতকারী [1,2]। সেল ডেথ-সম্পর্কিত ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশন সাধারণত টার্মিনাল ডিঅক্সিনিউক্লিওটিডিল ট্রান্সফারেজ ডিইউটিপি নিক-এন্ড লেবেলিং (টিউনেল) অ্যাস, ডিএনএ ল্যাডারিং, বা ধূমকেতু অ্যাস [3] দ্বারা "ভিজ্যুয়ালাইজ" করা হয়। পালস-ফিল্ড ইলেক্ট্রোফোরেসিস [৪] এবং র্যান্ডম অলিগোনিউক্লিওটাইড-প্রাইমড সিন্থেসিস (ROPS) অ্যাস [৫] দুটি অন্য দুটি খুব কমই ব্যবহৃত সেকেন্ডারি অ্যাস। ধূমকেতু অ্যাসে ব্যবহার শুধুমাত্র ইন ভিট্রো (সংস্কৃতি কোষ) মধ্যে সীমাবদ্ধ, এবং এর পরিমাণ নির্ধারণ শ্রম-নিবিড় [6]। বিচ্ছিন্ন কোষের নিউক্লিয়াসে ধূমকেতুর পরীক্ষা করা সম্ভব, তবে এটি নিউক্লিয়াসের বিচ্ছিন্নতার সময় অতিরিক্ত বিভ্রান্তিকর কারণগুলির সাথে যুক্ত। দ্বিতীয়, ডিএনএ ল্যাডারিং অ্যাস, একটি পরিমাণগত পদ্ধতি নয়, এবং প্রাথমিক আশা যে মই প্যাটার্ন বনাম স্মিয়ার যথাক্রমে অ্যাপোপটোসিস এবং নেক্রোসিসের মধ্যে পার্থক্য করবে, এই পদ্ধতিটি অবিশ্বস্ত বলে প্রমাণিত হওয়ায় তা বাতিল হয়ে গেছে [7]। তিনটি প্রধান পদ্ধতির মধ্যে, TUNEL হল সবচেয়ে সংবেদনশীল, সর্বনিম্ন সময় সাপেক্ষ এবং সর্বজনীনভাবে প্রযোজ্য। এটি সভ্য কোষ এবং টিস্যুতে এবং সমস্ত কোষের মৃত্যুর প্রক্রিয়ার জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। এটি সঠিক, পরিমাণগত, বিশেষ কোষ বা টিস্যু অংশগুলির সাথে সহজে সংযুক্ত, এবং TUNEL-পজিটিভ সংকেত [2] এর সাথে সম্পর্কিত কোষের প্রকার বা কোষের আঘাতের প্রক্রিয়াগুলির নির্ভরযোগ্য সনাক্তকরণের জন্য ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রির সাথে একত্রিত করা যেতে পারে।

TUNEL দ্বারা পরিমাপযোগ্য ডিএনএ ব্রেকগুলি মূলত অ্যাপোপটোটিক এন্ডোনিউক্লিস দ্বারা উত্পাদিত হয়। কিডনির সবচেয়ে সক্রিয় এন্ডোনিউক্লিজ হল ডিঅক্সিরাইবোনুক্লিজ 1 (DNase I) এবং এন্ডোনিউক্লিজ G (EndoG) [8-10]। DNase আমি স্তন্যপায়ী প্রাণীদের মধ্যে সবচেয়ে সক্রিয় এবং প্রচুর পরিমাণে অ্যাপোপটোটিক এন্ডোনিউক্লিজ [১১]। কিডনি, লালা গ্রন্থি, অগ্ন্যাশয় এবং অন্ত্র হল এমন অঙ্গ যা উচ্চ পরিমাণে DNase I উত্পাদন করতে পরিচিত। লালা গ্রন্থি, অগ্ন্যাশয় এবং অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষগুলি খাদ্যনালীতে একটি পাচক এনজাইম হিসাবে DNase I নিঃসরণ করে। কিছু সেলুলার DNase I "বিদেশী" DNA আক্রমণকারী হোস্ট কোষের বিরুদ্ধে লড়াই করে [12]। নন-সিক্রেটেড DNase I হোস্ট-সেল ডিএনএ-র জন্য একটি লুকানো বিপদ উপস্থাপন করে, কিন্তু সাধারণত DNases আঘাত বা কোষের মৃত্যু না হওয়া পর্যন্ত হোস্ট-সেল ডিএনএ-তে কাজ করে না। কিডনিতে, DNase I টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষ দ্বারা নিঃসৃত হয়, সম্ভবত প্রস্রাবে ভাইরাস এবং ব্যাকটেরিয়া ধ্বংস করার জন্য। এই ফাংশনটি সম্ভবত প্রোটিনেসের সাথে একত্রিত হয়, বিশেষত, মেপ্রিন, যা প্রস্রাবের প্রধান প্রোটিনেস [13]। যদিও এটি সংক্রমণের বিরুদ্ধে প্রতিরক্ষামূলক, কিডনিতে অত্যন্ত সক্রিয় DNase-এর উপস্থিতি এই অঙ্গটিকে আঘাতের জন্য ঝুঁকিপূর্ণ করে তোলে, যেখানে DNase-এর কার্যকলাপ হোস্ট কোষের জন্য সাইটোটক্সিক বলে পরিচিত। DNases বিষাক্ত বা হাইপোক্সিক উদ্দীপনা দ্বারা প্ররোচিত কোষের মৃত্যুর প্রচার করে এবং কোষের মৃত্যুর ফলে নির্গত সমস্ত হোস্ট কিডনি ডিএনএ কোষকে ধ্বংস করে।

কিডনিফিল্টারিং অঙ্গ যা শরীর থেকে বিষাক্ত যৌগ অপসারণ করে। কিডনিতে উচ্চ DNase I কার্যকলাপ কিডনি কোষকে বিষাক্ত যৌগ এবং তাদের বিপাকীয় পণ্য থেকে আঘাতের প্রতি খুব সংবেদনশীল করে তোলে। এটি কিডনির আঘাত পরিমাপ করার জন্য TUNEL কে সবচেয়ে উপযুক্ত এবং প্রযোজ্য পদ্ধতি করে তোলে। এই পর্যালোচনাতে, আমরা কিডনিতে কোষের মৃত্যু এবং টিস্যুর আঘাতের পরিমাপের জন্য একটি বহুল ব্যবহৃত, তথ্যপূর্ণ, এবং সুনির্দিষ্ট পরীক্ষা হিসাবে TUNEL-এর উপর ফোকাস করব। আমরা TUNEL এর দিকগুলি নিয়ে আলোচনা করব কারণ এটি কিডনি রোগ এবং আঘাতের ক্ষেত্রে প্রযোজ্য এবং কিডনি রোগের গবেষণা, ডায়াগনস্টিকস এবং থেরাপিতে এই শক্তিশালী অ্যাসটির উত্পাদনশীল এবং উপযুক্ত ব্যবহারকে উন্নীত করার জন্য TUNEL-এর গুণাবলী, কৌশল এবং অব্যবহৃত বৈশিষ্ট্যগুলি সনাক্ত করব। আমরা বিভিন্ন TUNEL চিত্রের নিদর্শন নিয়েও আলোচনা করব যা কোষের মৃত্যুর প্রক্রিয়ার সাথে যুক্ত হতে পারে। এই পর্যালোচনায় উত্থাপিত পয়েন্টগুলি কিডনি ছাড়া অন্য অঙ্গগুলিতে TUNEL ব্যবহারের জন্য ব্যাপকভাবে প্রযোজ্য।

কীওয়ার্ড:TUNEL; কোষের মৃত্যু; কিডনি; DNases; endonucleases; টিস্যু আঘাত

TUNEL নীতিTUNEL অ্যাস 1992 সালে Gorczyca et al দ্বারা বিকশিত হয়েছিল। [১৪] এবং গ্যাভরিলি এট আল। [১৫], যথাক্রমে ফ্লুরোক্রোম এবং এভিডিন-পেরক্সিডেস লেবেলিং ব্যবহার করে। সেই সময়ে, অ্যাপোপটোসিস মূল্যায়নের জন্য নতুন পদ্ধতির একটি মরিয়া প্রয়োজন ছিল এবং TUNEL সফলভাবে এই ফাঁকটি পূরণ করেছে। প্রাথমিকভাবে অ্যাপোপটোসিস [14,16] এর সাথে বা এর সাথে সম্পর্কিত ডিএনএ স্ট্র্যান্ড ব্রেকগুলির জন্য একটি অ্যাস হিসাবে বিপণন করা হয়েছিল, আরও ভাল অ্যাসের অনুপস্থিতিতে, TUNEL দ্রুত অ্যাপোপটোসিস [17,18] এর জন্য স্ট্যান্ডার্ড অ্যাস হয়ে ওঠে। যাইহোক, এটি গবেষকদের দ্বারা প্রায় অবিলম্বে স্বীকৃত হয়েছিল যে TUNEL নির্বিচারে যে কোনও ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশন পরিমাপ করেছে, শুধুমাত্র অ্যাপোপটোসিসের সাথে সম্পর্কিত নয় [19-21]। তবুও, অ্যাপোপটোটিক অ্যাসের প্রয়োজনীয়তা এতটাই দুর্দান্ত ছিল যে টিউনেল অ্যাপোপটোসিসের জন্য অ-নির্দিষ্ট হওয়ার বিরল প্রতিবেদনগুলিকে সাধারণত উপেক্ষা করা হয়েছিল। এটি কিডনি এবং অন্যান্য অঙ্গগুলিতে অ্যাপোপটোসিসের প্রচুর পরিমাণে মিথ্যা-ইতিবাচক রিপোর্টের দিকে পরিচালিত করে, যেখানে মোট কোষের 20 শতাংশ পর্যন্ত অ্যাপোপ্টোটিক রিপোর্ট করা হয়েছিল এমনকি আঘাত ছাড়াই [22-25] যখন পরিবর্তন হয় 0.01 শতাংশের মতো ছোট টিস্যু আঘাতের পরিসংখ্যানগতভাবে উল্লেখযোগ্য প্রমাণ হতে পারে।

কয়েক বছর আগে অ্যাপোপটোসিস স্টাডিতে বুম শেষ হওয়ার পর থেকে সাম্প্রতিক বছরগুলিতে TUNEL অ্যাস একটি নবজাগরণ অনুভব করেছে। "কিডনি" এবং "TUNEL" শব্দের সাথে জড়িত জার্নাল নিবন্ধগুলির আমাদের PubMed অনুসন্ধান 1992 থেকে 2020 পর্যন্ত 1500 টিরও বেশি ফলাফল তৈরি করেছে৷ 2019 সালে, 170টি নিবন্ধ প্রকাশিত হয়েছিল, যা গত 28 বছরে এক বছরে সর্বোচ্চ সংখ্যা (চিত্র S1) এবং যা এই পর্যালোচনার জন্য জরিপ করা নিবন্ধের সংখ্যাগরিষ্ঠ গঠন. অসংখ্য গবেষণায় অ্যাপোপটোসিস ছাড়াও অন্যান্য ধরনের কোষের মৃত্যুতে ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশন-সম্পর্কিত কোষের মৃত্যুর সার্বজনীন পরিমাপ হিসাবে TUNEL-পজিটিভিটি ব্যবহার করা হয়েছে। উদাহরণস্বরূপ, ফেরোপটোসিস, ইঁদুরের রেনাল ইস্কেমিয়া-রিপারফিউশন (আইআর) এর সময় ঘটে যাওয়া অক্সিডেটিভ ক্ষতির দ্বারা সৃষ্ট প্রোগ্রামড, নন-অ্যাপোপ্টোটিক কোষের মৃত্যুর একটি নতুন আবিষ্কৃত রূপ, TUNEL [26] দ্বারা সনাক্ত করা যেতে পারে। পাইরোপটোসিস, যা প্রোগ্রামড কোষের মৃত্যুর একটি প্রদাহজনক রূপ যা অ্যাপোপটোসিস এবং নেক্রোসিস থেকে পৃথক, এটি টিউনেল-পজিটিভ সংকেতের সাথে যুক্ত দেখানো হয়েছে [২৭,২৮]। টিউনেল-পজিটিভিটি নেক্রোপ্টোসিসের সময় পরিলক্ষিত হয়েছিল যা সাবটোটাল নেফ্রেক্টমি [২৯] ইঁদুরের রেনাল টিউবুল কোষের প্রগতিশীল হ্রাসে অবদান রাখে। কিডনি এবং অন্যান্য টিস্যুতে, নেক্রোসিস [30,31], অনিয়ন্ত্রিত অটোফাজি [32-35], অ্যানোকিস [36,37], মাইটোটিক বিপর্যয় [35,38], অটোলাইসিস [39], পাউটোলাইসিসে ইতিবাচক TUNEL সংকেত পাওয়া গেছে। [৩৯], প্রোপ্টোসিস [৪০], এবং এপোনিউরোসিস [৩০], TUNEL কে অপরিবর্তনীয় কোষের মৃত্যুর জন্য সত্যিকারের সার্বজনীন পরীক্ষা হিসাবে প্রদর্শন করে।

TUNEL অ্যাস একটি 3'OH-এন্ড-নির্দিষ্ট ডিএনএ এনজাইম, টার্মিনাল ডিঅক্সিনিউক্লিওটিডিল ট্রান্সফারেজ (TdT) (চিত্র) দ্বারা 3'OH শেষের লেবেলিংয়ের উপর ভিত্তি করে। TdT এর জায়গায় DNA পলিমারেজ বা Klenow ফ্র্যাগমেন্ট DNA পলিমারেজের ব্যবহার 3'OH প্রান্তের ধরন (নিক, ফাঁক, বা ওভারহ্যাংগিং অলিগোস) নির্ধারণ করতে সাহায্য করতে পারে কারণ DNA পলিমারেজগুলির একটি টেমপ্লেট (বিপরীত DNA স্ট্র্যান্ড) প্রয়োজন এবং এইভাবে লেবেল হবে না। ঝুলন্ত বা প্রসারিত ডিএনএ শেষ। এটা মনে রাখা গুরুত্বপূর্ণ যে 3ZOH ডিএনএ শেষের উত্পাদন অ্যাপোপটোটিক (ডিএনএ-ডিগ্রেডিং) এন্ডোনিউক্লিসের জন্য অনন্য নয়। 3'OH ডিএনএ প্রান্তগুলি একটি প্রধান "যোগাযোগকারী" সংকেত, বেশিরভাগ ডিএনএ এনজাইমের একটি সাধারণ হর। এগুলি ইউক্যারিওটে প্রায় সমস্ত ডিএনএ এনজাইম দ্বারা উত্পাদিত এবং ব্যবহার করা হয়, যার মধ্যে রয়েছে ডিএনএ মেরামত (অপুরিনিক/অ্যাপিরিমিডিনিক, এপি) এন্ডোনিউক্লিস, এক্সোনিউক্লিস, ডিএনএ পলিমারেজ, ডিএনএ লিগাসেস, ডিএনএ ট্রান্সফারেজ এবং টপোইসোমেরাসেস। উপরন্তু, 3'Id 3z-সুগার, বা 3z-প্রোটিন কনজুগেটগুলিকে যথাক্রমে ফসফেটেস, গ্লাইকোসিলেসেস এবং প্রোটিনেস দ্বারা 3'OH টার্মিনিতে রূপান্তর করা যেতে পারে। এই কারণেই TUNEL এর সফল প্রয়োগ এবং এর ফলাফলের ব্যাখ্যার জন্য কী পরিমাপ করা হচ্ছে তার একটি সুনির্দিষ্ট বোঝার প্রয়োজন।

ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশন পরিমাপের অন্যান্য দুটি প্রাথমিক পদ্ধতির সাথে তুলনা করে, ডিএনএ মই এবং ধূমকেতু অ্যাস, টুনেলের সুবিধা রয়েছে খণ্ডের পরিবর্তে ডিএনএ টার্মিনি সনাক্তকরণের উপর ভিত্তি করে (চিত্র 2)। তাত্ত্বিকভাবে, ডিএনএ মই বা ধূমকেতুর তুলনায় প্রাথমিক (নিম্ন) ডিএনএ বিভক্তকরণ সনাক্তকরণের জন্য TUNEL শোক্লড বেশি সংবেদনশীল এবং রৈখিক হতে পারে, উভয়েরই ছোট উচ্চ-গতিশীলতার টুকরো জমা হওয়ার একটি ল্যাগ-পিরিয়ড রয়েছে। যাই হোক না কেন, ধূমকেতু 41,42] বা ডিএনএ মই [43,44] এর সাথে TUNEL-এর সংমিশ্রণ করা গবেষণায় সর্বাধিক সংবেদনশীলতার সাথে প্রাথমিক ডিএনএ বিভক্তকরণ ধরার কিছু সুবিধা রয়েছে।

TUNEL অ্যাপ্লিকেশনTUNEL চিকিত্সা চিকিত্সা [45], পরিবেশগত [46], কৃষি [41] এবং শিল্প [47] এক্সপোজার, এবং প্রাণী [48] সহ বিভিন্ন ধরণের অ্যাপ্লিকেশনগুলিতে ক্লিনিকাল এবং মৌলিক টক্সি কোলজিক্যাল স্টাডিতে কিডনির আঘাত সনাক্ত করতে এবং পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়। ] এবং খাদ্য বিজ্ঞান [৪৯]। TUNEL সমস্ত কোষের ধরন, অঙ্গ এবং প্রজাতির জন্য প্রযোজ্য যেগুলির DNA এবং DNase আছে, যার মধ্যে প্রায় সমস্ত প্রজাতি রয়েছে৷ জেব্রাফিশ [৫০], জাপানি ভাতের মাছ [৫১], মুরগি [৪৮], জারবিলস [৫২], ইঁদুর [৪১], ইঁদুর [৪৫], সহ বিস্তৃত প্রাণীর কিডনিতে আঘাত শনাক্ত করতে এবং পরিমাপ করতে TUNEL ব্যবহার করা হয়েছে। রাব এর [53], মিনি-পিগ [54], এবং মানুষ [55]। TUNEL এর একটি গুরুত্বপূর্ণ সুবিধা হল এটি স্থির কালচারড কোষের পাশাপাশি স্থির টিস্যুতে ব্যবহার করা যেতে পারে। এটি ইন ভিট্রো এবং ইন ভিভোর ফলাফলের মধ্যে তুলনা করার জন্য পদ্ধতিগত সামঞ্জস্য প্রদান করে যা অধ্যয়নগুলির মধ্যে যা পদ্ধতিগুলি সংস্কৃতিযুক্ত কিডনি কোষগুলিতে তদন্ত করা যেতে পারে, যখন ভিভোর প্রভাবগুলি প্রাণীর কিডনিতে মূল্যায়ন করা হয়। সম্পূর্ণ কোষ এবং টিস্যুগুলির মধ্যে যেকোন কিছুও ব্যবহার করা যেতে পারে, যার মধ্যে রয়েছে কালচারড সেল স্পেরয়েড [৫৬] এবং প্রাক্তন ভিভো কিডনি স্লাইস [৫৭,৫৮]।

সংকেত শক্তির পরিপ্রেক্ষিতে TUNEL-এর তীব্রতা বা TUNEL- পজিটিভ কোষের সংখ্যা DNase-এর কার্যকলাপের উপর নির্ভর করে প্রজাতির মধ্যে পরিবর্তিত হতে পারে। আমাদের অভিজ্ঞতায়, ইঁদুরের কিডনিতে ইঁদুরের কিডনির চেয়ে বেশি সক্রিয় DNase I রয়েছে এবং TUNEL- পজিটিভ সিগন্যাল শক্তি এর সাথে সম্পর্কযুক্ত। যখন কিডনিকে অন্যান্য অঙ্গের সাথে তুলনা করা হয়, তখন এর TUNEL-পজিটিভ সংকেত অত্যন্ত তীব্র এবং উচ্চ DNase I কার্যকলাপ সহ অন্যান্য অঙ্গের অনুরূপ, যেমন অন্ত্র এবং লালা গ্রন্থি। স্পেকট্রামের অন্য প্রান্তে, সর্বনিম্ন TUNEL-পজিটিভ সংকেত শক্তি মস্তিষ্ক এবং টিউমার/ক্যান্সার কোষে পরিলক্ষিত হয়, যেখানে DNase I অভিব্যক্তি সম্ভবত কোডিং অঞ্চলে বিকল্প স্প্লিসিং দ্বারা নিষ্ক্রিয় হয় [59]। কিডনির সমস্ত ধরণের কোষে TUNEL-পজিটিভ সংকেত পরিলক্ষিত হয়। গড় হিসাবে, টিউবুলার এপিথেলিয়াম গ্লোমেরুলির চেয়ে বেশি ক্ষতিগ্রস্থ হয়, বিশেষ করে তীব্র আঘাতে (চিত্র 3A)। এটি এই ধরণের কোষগুলিতে বিদ্যমান DNase I কার্যকলাপের সাথে ভাল সম্পর্কযুক্ত। আমাদের পরীক্ষায় দেখা লিঙ্গ এবং বয়সের পার্থক্য থেকে বিচার করে, DNase I বৃদ্ধ বা নবজাতক বয়সের প্রাণীদের তুলনায় মহিলাদের এবং মধ্যবয়সী প্রাণীদের তুলনায় পুরুষদের মধ্যে বেশি প্রচুর এবং সক্রিয়। যাইহোক, লিঙ্গ বা বয়সের ক্ষেত্রে TUNEL-ইতিবাচকতার কোন স্পষ্ট পার্থক্য স্পষ্ট নয়, সম্ভবত বিশিষ্ট বা অন্যান্য কারণ দ্বারা প্রভাবিত হওয়ার কারণে। কিছু কিডনি মডেলে (যেমন ইস্কেমিয়া-রিপারফিউশন), DNase I প্ররোচিত হয় [9]; অন্যদের মধ্যে, এটি নয় এবং এমনকি দমন করা যেতে পারে (উদাহরণস্বরূপ, সিসপ্ল্যাটিন বিষাক্ততায়) [10]। এন্ডোনিউক্লিসের সক্রিয়করণ, যদি উপস্থিত থাকে, কিডনি আঘাতের [9,60,61] পরে প্রথম 24 ঘন্টার মধ্যে ঘটতে দেখা গেছে। অতএব, এটা আশ্চর্যজনক ছিল না যে এই পর্যালোচনায় কিডনি গবেষণায় অন্তত অর্ধেক TUNEL অ্যাপ্লিকেশনগুলি তীব্র কিডনি আঘাতের (AKI) জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল যেহেতু AKI-এর মূল্যায়ন প্রায়শই আঘাতের 24 থেকে 72 ঘন্টার মধ্যে করা হয় যখন এন্ডোনিউক্লিসগুলি সবচেয়ে সক্রিয় থাকে। . AKI গবেষণার তালিকা দীর্ঘ এবং এতে বিষাক্ত, সেপটিক, প্রতিস্থাপন এবং হাইপোক্সিক আঘাত অন্তর্ভুক্ত রয়েছে। এই কাজে, আমরা এই গবেষণায় প্রভাবিত মডেল, এক্সপোজারের ধরন, চিকিত্সা, মূল্যায়নের সময়রেখা এবং কোষের প্রকারগুলি জরিপ করেছি। যে সমীক্ষাগুলি জরিপ করা হয়েছিল সেগুলি কিডনির আঘাত এবং দীর্ঘস্থায়ী কিডনি রোগের তীব্র এবং মিশ্র তীব্র-দীর্ঘস্থায়ী মোডগুলিকে কভার করেছে।

টিউনেল-পজিটিভ সংকেত সহ কিডনির আঘাত টিউবুলে বা গ্লোমেরুলাসে পরিলক্ষিত হয় কিনা তা ক্ষতিকারক এজেন্ট বা রোগের ধরণের উপর নির্ভর করে। উদাহরণস্বরূপ, মানুষের মধ্যে লুপাস নেফ্রাইটিস এবং নিকেল ন্যানো পার্টিকেলের ক্ষতিকে কঠোরভাবে গ্লোমেরুলার TUNEL-পজিটিভ সংকেত [62,63] হিসাবে বর্ণনা করা হয়েছিল। অন্যদিকে, ইঁদুরের ইসকেমিয়া-রিপারফিউশন এবং স্ট্রেপ্টোজোটোসিন-প্ররোচিত ডায়াবেটিক নেফ্রোপ্যাথি শুধুমাত্র টিউবুলে TUNEL-পজিটিভ কোষ তৈরি করে [64,65]। প্রক্সিমাল টিউবুলস, হেনলের লুপ, ডিস্টাল টিউবুলস এবং যৌথ নালীগুলি প্রায়শই ইস্কেমিয়া-রিপারফিউশন মডেলগুলিতে টিউনেল-পজিটিভ হয়। সাইক্লোস্পোরিন A [66] এবং ডক্সোরুবিসিন [67] বা জিঙ্ক অক্সাইড ন্যানো পার্টিকেলস [68] এবং ডায়াবেটিস মেলিটাসের একটি ইঁদুর মডেলের মতো ভোক্তা পণ্য সামগ্রীর মতো ওষুধের সংস্পর্শে আসা ইঁদুরগুলিতে গ্লোমেরুলি এবং টিউবুল উভয়েরই TUNEL-পজিটিভ কোষগুলি বর্ণনা করা হয়েছিল। 69]। মানুষের মধ্যে সেপটিক শক-প্ররোচিত AKI এছাড়াও উভয় গ্লোমেরুলার এবং টিউবুলার TUNEL-পজিটিভ কোষের সাথে যুক্ত ছিল [70]। শ্বাসরোধ করা বন্ধ লুপ ছোট অন্ত্রের বাধা 3h [87] কিডনিতে TUNEL-পজিটিভিটি সৃষ্টি করে।

AKI প্রতিস্থাপন এবং হাইপোক্সিক আঘাতের পরে ঘটতে পারে। মানুষের মধ্যে অ্যালোগ্রাফ্ট প্রত্যাখ্যান সাধারণত TUNEL- পজিটিভ কোষের উচ্চতার সাথে যুক্ত হয় [88,89]। ঠান্ডা ইস্কিমিয়ার পরে, টিউনেল-পজিটিভ কোষগুলি সাধারণত রিপারফিউশনের সময় 2-24 ঘন্টার মধ্যে পরিলক্ষিত হয় [90], বা আরও সংকীর্ণভাবে, ইসকেমিয়া [91] এর পরে 14 থেকে 17 ঘন্টার মধ্যে, এবং কখনও কখনও আমরা এখনও 7 দিন দেরিতে পর্যবেক্ষণ করি। প্রতিস্থাপন প্রত্যাখ্যান [92]. একইভাবে, ইসকেমিয়া-রিপারফিউশন মডেলগুলিতে, TUNEL-পজিটিভ কোষগুলি প্রায়শই রিপারফিউশন [44,93,94] এর 24 ঘন্টা পরে বা 4 [95,96] এবং 72 ঘন্টা [97] এর মধ্যে পরিলক্ষিত হয়। ট্রান্সপ্ল্যান্টেশন এবং ইস্কেমিক AKI উভয় গবেষণায়, TUNEL-পজিটিভ কোষগুলি দূরবর্তী এবং প্রক্সিমাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষগুলিতে স্থানীয়করণ করা হয়েছিল [44,93]। মাউসেকিডনিইস্কেমিয়া-রিপারফিউশন আঘাতের পরে, টিউনেল-পজিটিভ কোষগুলিকে কর্টিকোমেডুলারি জংশনে ঘনীভূত হিসাবে বর্ণনা করা হয়েছিল, ইস্কেমিক আঘাতের স্বাভাবিক লক্ষ্য [98]।

মিশ্র তীব্র এবং দীর্ঘস্থায়ী আঘাত, যেখানে বিষাক্ত এক্সপোজার, রোগের অবস্থা এবং/অথবা মূল্যায়ন একই গবেষণায় তীব্র (অর্থাৎ, ঘন্টা, দিন) এবং দীর্ঘস্থায়ী (অর্থাৎ, সপ্তাহ, মাস, বছর) উভয়ই ছিল, মানব প্রতিস্থাপনে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল প্রত্যাখ্যান (বায়োপসি 1 সপ্তাহ থেকে 3 বছর পর ট্রান্সপ্লান্ট) [88], সোয়াইন হেপাটাইটিস ই ভাইরাস সংক্রমণ (7 এবং 14 দিন পোস্ট-ইনোকুলেশন) [52], হাইড্রোনফ্রোটিকগুলিতে CO2 নিউমোপেরিটোনিয়াম-প্ররোচিত চাপকিডনি(2 সপ্তাহ হাইড্রোনফ্রোসিস, 2 দিন পোস্ট-নিউমোপেরিটোনিয়াম) [53], সাপের বিষ দ্বারা প্ররোচিত মেসেঞ্জিয়াল প্রলিফারেটিভ গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস (1 থেকে 14 দিন পোস্ট-ইনজেকশন) [99], একতরফা মূত্রনালীর প্রতিবন্ধকতা (1 থেকে 14 দিনের বাধা) [10] ইউরানাইল অ্যাসিটেট এক্সপোজার (এক্সপোজারের 1 থেকে 28 দিন) [101], অ্যারিস্টোকলিক অ্যাসিড নেফ্রোপ্যাথি (5 এবং 30-দিনের দৈনিক এক্সপোজার) [102], এবং নবজাতক হাইপারক্সিয়া (1 থেকে 60 প্রসবোত্তর দিন পরীক্ষিত, হাইপারক্সিয়ার প্রথম 14-এর সংস্পর্শে এসেছে) দিন) [১০৩]। প্রভাব পরে চৌদ্দ দিন এই ধরনের জন্য একটি খুব সাধারণ মূল্যায়ন সময় পয়েন্টকিডনি আঘাত[52,53,99,101,103]। বেশিরভাগ ক্ষেত্রে, টিউনেল-পজিটিভ কোষগুলি টিউবুল এবং যৌথ নালীতে স্থানীয়করণ করা হয়েছিল। একমাত্র ব্যতিক্রম ছিল সাপের বিষের বিষ, যা প্রাথমিকভাবে গ্লোমেরুলিকে ক্ষতিগ্রস্থ করেছিল [৯৯]।

ক্রনিককিডনিরোগ (CKD), এর উপস্থিতি হিসাবে সংজ্ঞায়িতকিডনি3 মাসের বেশি সময় ধরে মানুষের মধ্যে গ্লোমেরুলার পরিস্রাবণ হার (GFR) ক্ষতি বা হ্রাস, এটিও TUNEL মূল্যায়নের একটি সাধারণ বিষয়, যা নির্ধারণ করতে পারে যে CKD প্রগতিশীলতার সাথে যুক্ত কিনা।কিডনি ক্ষতি।সবচেয়ে বেশি অধ্যয়ন করা CKD যেটিতে TUNEL প্রয়োগ করা হয় তা হল ডায়াবেটিক নেফ্রোপ্যাথি। TUNEL-পজিটিভিটি দ্বারা চিহ্নিত আঘাতটি 7 থেকে 30 বছর [104,105] এবং ইঁদুরগুলিতে স্ট্রেপ্টোজোটোসিন চিকিত্সার 2 থেকে 16 সপ্তাহের মধ্যে ডায়াবেটিস শুরু হওয়ার আগে ডায়াবেটিস রোগীদের মধ্যে টিউবুলস এবং পডোসাইট [69] এ ঘটেছিল [106.10] ইমিউনোগ্লোবুলিন এ নেফ্রোপ্যাথিতে অনুরূপ TUNEL-পজিটিভ হিস্টোপ্যাথলজি রিপোর্ট করা হয়েছিল [22]। লুপাস নেফ্রাইটিস এবং মেমব্রানোপ্রোলাইফেরেটিভ গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিসে, টিউনেল-পজিটিভিটি প্রাথমিকভাবে গ্লোমেরুলিতে দেখা গেছে [62,108,109]। অন্যদিকে, সিসপ্ল্যাটিন [110], ক্লোরোকুইন [45], ডক্সোরুবিসিন [67], ফিনাস্টেরাইড [23], ট্যাক্রোলিমাস [111] এবং লেভেটিরাসিটাম [24] এর ওষুধ নিরাপত্তা গবেষণায় বেশিরভাগ নলাকার ক্ষতি লক্ষ্য করা গেছে। একইভাবে, টিউবুলার টিউনেল-পজিটিভ কোষ দ্বারা চিহ্নিত ক্রমাগত তীব্র আঘাত ইউরিক অ্যাসিড নেফ্রোপ্যাথি [112], মেথিওনিনের ঘাটতি [48], পরিবেশগত টক্সিন মাইক্রোসিস্টিন-এলআর [50], এবং ক্যাডমিয়াম [113] এর সংস্পর্শের গবেষণায় বর্ণনা করা হয়েছিল। ক্যালসিয়াম-অক্সালেট প্ররোচিত সঙ্গে সংযোগকিডনিপাথর [114] এবং ক্যালসিফাইং ন্যানো পার্টিকেল [115]। যদিও TUNEL অ্যাস ব্যবহার করে CKD এর সময় প্রগতিশীল কিডনি ক্ষতি সনাক্তকরণ একটি দরকারী ডায়গনিস্টিক টুল, TUNEL অ্যাসকে ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি (IHC) এর সাথে একত্রিত করা সম্ভবত আঘাতের প্রক্রিয়া নির্ধারণে আরও বেশি তথ্যপূর্ণ হবে।

TUNEL পরিমাণ নির্ধারণ এবং সমষ্টিকরণ কৌশল

TUNEL পরিমাপ করার পদ্ধতি পরিবর্তিত হয়। বেশিরভাগ রিপোর্টে, TUNEL-পজিটিভ কোষ/নিউক্লিয়াসকে মোট কোষ/নিউক্লিয়াসের শতাংশ হিসাবে পরিমাপ করা হয় [83,116,117]। এটি করা সঠিক জিনিস বলে মনে হচ্ছে, যদিও TUNEL-পজিটিভ কোষের সংখ্যা সম্ভবত মৃত কোষের সংখ্যার সাথে মিল নেই। কিছু কোষ ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশনের শনাক্তযোগ্য স্তরে পৌঁছাতে পারেনি, অন্যগুলি ইতিমধ্যে ম্যাক্রোফেজ দ্বারা নির্মূল করা যেতে পারে। প্রতি বর্গ ইউনিট (mm2) TUNEL-ধনাত্মক কোষের সংখ্যার পরিমাণও ব্যবহার করা হয় [118], তবে এই পদ্ধতিটি কম সুনির্দিষ্ট বলে মনে হয় কারণ এটি এলাকার অবস্থান এবং কোষের ধরণের বিষয়বস্তুর উপর নির্ভর করে। কর্টিকাল বিভাগে বেশিরভাগ গ্লোমেরুলি, টিউবুলস, রক্তনালী এবং মেডুলারি রশ্মি থাকে, যখন মেডুলারি বিভাগে প্রাথমিকভাবে হেনলের লুপ, সংগ্রহ নালী এবং রক্তনালী থাকে। পরিমাপ "প্রতি ফিফিল্ড" অবশ্যই ক্ষেত্রটি কিসের উপর নির্ভর করে [72,119], এবং পরিমাপ "প্রতি বিভাগে", এমনকি আরও বেশি, অনির্ধারিত [61,120]। খারাপভাবে চিহ্নিত পরিমাপ, যেমন "হিস্টোলজিক্যাল স্কোর" [121], "অ্যাপোপ্টোটিক ইনডেক্স" [113], "অ্যাপোপ্টোসিস রেট" [92], "অ্যাপোপ্টোসিসের শতাংশ" [122], বা অপরিশোধিত নিয়ন্ত্রণের শতাংশ [123,124], মনে হয় এমনকি কম উপযুক্ত হবে, এবং ব্যাখ্যাকে কঠিন করে তুলবে এবং বেশিরভাগ অধ্যয়নের সাথে তুলনীয় নয়।

প্রতিবেশী কোষে কোষের মৃত্যু অসমভাবে শুরু হয় কারণ এটি ভাস্কুলারাইজেশন, কোষ চক্র এবং অন্যান্য ভেরিয়েবলের উপর নির্ভর করে। এটি প্রায়শই টিস্যু [45,96,125] এর কোষগুলির অসম TUNEL দাগের ফলে হয়। আশ্চর্যজনকভাবে, TUNEL-পজিটিভ সিগন্যালের সাধারণ তীব্রতা TUNEL পরিমাপের জন্য ব্যবহার করা হয় না, যদিও এটি সরাসরি ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশনের ডিগ্রির উপর নির্ভর করে। এটি সম্ভবত কারণ কোষগুলিকে TUNEL সংকেতের তীব্রতার থেকে স্বাধীনভাবে মৃত বলে মনে করা হয়, কারণ TUNEL স্টেনিং আরও তীব্র হলে একটি কোষ "আরও মৃত" হতে পারে না। যদিও TUNEL ফলাফলের পরিমাণ নির্ধারণের জন্য বিভিন্ন ধরণের পদ্ধতি ব্যবহার করে এমন অধ্যয়নের তুলনা করা কঠিন, তবে নিয়ন্ত্রণ প্রাণীদের মধ্যে TUNEL-পজিটিভ কোষের পরিমাণ সাধারণত 2 শতাংশের নিচে থাকে [75,99,100,116,126]। একটি তীব্র আঘাত TUNEL- পজিটিভিটি [79,126,127] ~5–40× বৃদ্ধির সাথে যুক্ত। দীর্ঘস্থায়ী আঘাতের সময়, TUNEL-পজিটিভ কোষের বৃদ্ধি সামান্য কম, ~2–20-গুণ, [২৯,৪৩,৬৫] অপরিশোধিত নিয়ন্ত্রণের তুলনায়।

ডায়ামিনোবেনজিডাইন (ডিএবি) স্টেনিংয়ের উপর ভিত্তি করে প্রাথমিক টিউনেল অ্যাস হালকা মাইক্রোস্কোপির জন্য ডিজাইন করা হয়েছিল [14,15]। এই প্রথাগত পদ্ধতিটি এখনও এই পর্যালোচনাতে জরিপ করা গবেষণার দুই-তৃতীয়াংশ এবং মানুষের বায়োপসি গবেষণার সিংহভাগে ব্যবহৃত হয়েছিল। পরিমাপটি ম্যানুয়াল সেল গণনা দ্বারা সম্পন্ন করা হয় এবং সুনির্দিষ্টভাবে, এটি সময়সাপেক্ষ। প্রায়শই, পরিমাপ ব্যবহার করা হয় না, এবং ফলাফলগুলি চিকিত্সা করা এবং দাগযুক্ত নমুনার চিত্রগুলি ব্যবহার করে উপস্থাপন করা হয় সাধারণ প্রমাণ হিসাবে যে কোষের মৃত্যু ঘটেছিল। স্বয়ংক্রিয়তা পরিমাণ নির্ধারণের প্রক্রিয়াকে দ্রুততর করতে পারে [128,129]। যাইহোক, DAB একই নমুনায় অন্য কোন দাগের সাথে মিলিত হতে পারে না, এবং এইভাবে DAB-ভিত্তিক TUNEL কোষের ধরন (ভিজ্যুয়াল রিকগনিশন ব্যতীত) বা সেল ডেথ মেকানিজমের কোনো সনাক্তকরণ ছাড়াই শুধুমাত্র মৃত কোষের সংখ্যা প্রদান করতে পারে।

যদিও মানুষের অধ্যয়নগুলি হালকা মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করে DAB-ভিত্তিক TUNEL-এর উপর নির্ভর করে, প্রায় অর্ধেক প্রাণী অধ্যয়ন FL ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করে (চিত্র 3)। ফ্লুরোসেন্ট টুনেল দৃশ্যত আকর্ষণীয়, সহজে ব্যাখ্যাযোগ্য এবং এর বেশ কিছু বড় সুবিধা রয়েছে। TUNEL-পজিটিভ নিউক্লিয়াস বা রঙের গড় তীব্রতা সনাক্তকরণের মাধ্যমে সুনির্দিষ্ট পরিমাপ ছাড়াও, FL ফ্লুরোসেন্ট TUNEL সংকেত হিস্টোকেমিস্ট্রির জন্য অন্যান্য রঙের সাথে একত্রিত করা যেতে পারে (যেমন, DAPI) (চিত্র 3A) বা IHC (চিত্র 3B)। পরবর্তীতে, প্রোটিন মার্কার ব্যবহার বিভিন্ন সাথে যুক্ত TUNEL-পজিটিভ সংকেত সনাক্ত করতে সাহায্য করতে পারেকিডনিকম্পার্টমেন্ট বা কোষ মৃত্যুর ধরনের তথ্য দিতে. আমরা ডাবল আইএইচসি অ্যান্টিবডি স্টেনিংয়ের সাথে মিলিত TUNEL-এর কোনো উদাহরণ খুঁজে পাইনি। যদিও এই জাতীয় সংমিশ্রণটি খুব তথ্যপূর্ণ হবে, উদাহরণস্বরূপ, নির্দিষ্ট কোষের ধরণের কোষের মৃত্যুর প্রক্রিয়া সনাক্তকরণের জন্য, এই জাতীয় দাগের সাথে সম্পর্কিত প্রযুক্তিগত অসুবিধাগুলি সুবিধার চেয়ে বেশি হতে পারে।

সনাক্তকরণকিডনিকোষের ধরন অবশ্যই অভিজ্ঞদের জন্য একটি সমস্যা নয়কিডনিরোগ বিশেষজ্ঞ [104]। এই কারণে, সেল-টাইপ সনাক্তকরণের জন্য অতিরিক্ত মার্কার ব্যবহার, উদাহরণস্বরূপ, এন্ডোথেলিয়াল কোষ সনাক্তকরণের জন্য CD31 ব্যবহার করা [130], বিরল। যাইহোক, টিস্যু আঘাতের বৈশিষ্ট্যের জন্য IHC প্রোটিন মার্কার ব্যবহার প্রায়ই ব্যবহৃত হয়। বেশিরভাগ গবেষণায় অ্যাপোপটোসিসের একমাত্র প্রমাণ হিসাবে TUNEL- পজিটিভিটি ব্যবহার করে। অন্যান্য গবেষণায়, টিউনেল-পজিটিভিটি অ্যাপোপটোসিসের জন্য সুনির্দিষ্ট নয় এমন স্বীকৃতির ফলে অনেক রূপগত (যেমন, হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন বা পর্যায়ক্রমিক অ্যাসিড-শিফ স্টেনিং), জৈব রাসায়নিক, এবং আইএইচসি মার্কারগুলিকে অ্যাপোপটোসিস নিশ্চিত করতে TUNEL স্টেনিংয়ের সাথে একত্রিত করা হয়েছে। ক্যাসপেস-নির্ভর অ্যাপোপটোসিসের জন্য সর্বাধিক ব্যবহৃত মার্কার হল ক্লিভড (সক্রিয়) ক্যাসপেস-3 একটি অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে যা পূর্ণ আকারের ক্যাসপেস চিনতে পারে না-3 [131,132]। TUNEL এবং ক্লিভড ক্যাসপেস-3 উভয় পরীক্ষাই ইঁদুরের ইসকেমিয়া-রিপারফিউশনে একচেটিয়াভাবে টিউবুলার, গ্লোমেরুলার নয়, দাগ দেখায় [64]। অন্যান্য ক্যাসপেস গবেষণায় ক্যাসপেস ব্যবহার করা হয়েছে-1 [27], -9 [53], -11 [28], এবং -12 [75]। অন্যান্য অ্যাপোপটোটিক মার্কারগুলির মধ্যে রয়েছে বি-সেল লিম্ফোমা 2 (Bcl2) প্রোটিনের পরিবার Bcl-2 [27], Bcl2L1 [43], Bcl-xl [71], Bax [99], Bak [49], এবং Bad [৪৩]; apoptotic রিসেপ্টর Fas [52] এবং apoptotic রিসেপ্টর-ligand FasL [66]; ফর্কহেড বক্স (ফক্স) প্রোটিন ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর Fox01 [133] এবং Fox03 [27]; এবং সাইটোক্রোম গ [53]। টিউমার নেক্রোসিস ফ্যাক্টর-আলফা (TNF) [134] এর IHC দ্বারা প্রদাহ চিহ্নিত করা হয়েছিল; টিউমার বৃদ্ধির কারণ TGF [66] এবং TGF- 1 [135]; serine/threonine kinase 1 (SGK1) [135]; ইলেক্ট্রন-ট্রান্সফার ফ্ল্যাভোপ্রোটিন, বিটা-সাবুনিট (ইটিএফ) [১৩৬]; জানুস কিনেস-2 (JAK2) [137]; ট্রান্সক্রিপশন 3 (STAT3) এর সংকেত ট্রান্সডুসার এবং অ্যাক্টিভেটর [137]; নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টর কাপ্পা-লাইট-চেইন অ্যাক্টিভেটেড বি কোষের বৃদ্ধিকারী (NF-κB) [১৩৭] এবং এর ইনহিবিটর প্রোটিন IκB [১৩৭]। জন্যকিডনিআঘাতের মূল্যায়ন, কিডনির আঘাতের অণু-1 (KIM-1) [24], অ্যাকোয়াপোরিন-1 চ্যানেল (AQP-1) [45], হাইপোক্সিয়া-ইনডিউসিবল ফ্যাক্টর {{7} }আলফা ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর (HIF-1 ) [103], Asc-টাইপ অ্যামিনো অ্যাসিড ট্রান্সপোর্টার-1 (Asc-1) [121], রেপামাইসিনের স্তন্যপায়ী লক্ষ্য (mTOR) [131] কাইনেস , এবং ট্রান্সগ্লুটামিনেজ II [৮৯] ব্যবহার করা হয়েছিল। অক্সিডেটিভ কিডনির আঘাত অধ্যয়ন করা হয়েছিল যেমন {{16}হাইড্রোক্সিগুয়ানোসিন (8OHdG) [102], নিউট্রোফিল জেলটিনেস-সম্পর্কিত লাইপোক্যালিন (এনজিএএল) [102], এনএডি-নির্ভর ডেসিটাইলেস সিরটুইন-1 [38}] , এবং হিম অক্সিজেনেস 1 (HO-1) [90]। সি-জুন এন-টার্মিনাল কিনেস (জেএনকে) পাথওয়ে [১০১], ফসফোইনোসাইটাইড 3-কাইনেস/প্রোটিন কিনেস বি/নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টর এরিথ্রয়েড 2-সম্পর্কিত ফ্যাক্টর 2 ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর (PI3K/ Akt/Nrf2) পাথওয়ে [46], প্যানেক্সিন-1 (PANX1) প্লাজমা মেমব্রেন গ্যাপ জংশন প্রোটিন [26], এবং মাইটোজেন-অ্যাক্টিভেটেড প্রোটিন কিনেস/এক্সট্রাসেলুলার সিগন্যাল-নিয়ন্ত্রিত কিনেস (MAPK/ERK) [26]। অ্যাপোপটোটিক এন্ডোনিউক্লিসের গবেষণায় ক্যাসপেস-অ্যাক্টিভেটেড DNase (CAD) [139], DNase I [108], এবং EndoG [139], এবং DNA ক্ষতির চিহ্নিতকারীগুলির মধ্যে রয়েছে টিউমার প্রোটিন p53 (p53) [99] এবং ডায়নামিন-সম্পর্কিত প্রোটিন 1 (PARP1) ) [66]। কিছু গবেষণায় এন্ডোপ্লাজমিক রেটিকুলাম স্ট্রেস-মধ্যস্থিত অ্যাপোপটোসিস এবং টিস্যু আঘাতের মূল্যায়নও দরকারী [75]।

প্রচুর পরিমাণে যান্ত্রিক গবেষণা জরিপ করা হয়েছে এবং কোষের মৃত্যুর প্রক্রিয়া সনাক্তকরণের জন্য TUNEL-কে IHC মার্কারগুলির সাথে একত্রিত করার সুবিধার কারণে, উভয়ের মধ্যে সমষ্টিকরণ ব্যবহার করে অনেক গবেষণা আশা করা যায়। বিশ্লেষণটি TUNEL-পজিটিভ কোষ এবং IHC মার্কারগুলির মধ্যে একটি পিক্সেল-বাই-পিক্সেল কোলোকালাইজেশন দ্বারা সঞ্চালিত হতে পারে, IHC মার্কার মানে TUNEL-পজিটিভ এলাকায় তীব্রতা, বা TUNEL-পজিটিভ সংকেত মানে IHC মার্কার-পজিটিভ এলাকায় তীব্রতা। দুর্ভাগ্যবশত, TUNEL-এর এই সুবিধাটি শুধুমাত্র কয়েকটি গবেষণায় ব্যবহার করা হয়েছে। TUNEL-পজিটিভ কোষগুলিকে ক্লিভড ক্যাসপেস-3 ইঞ্চি দিয়ে একত্রিত করা হয়েছিলকিডনিইঁদুরে অ্যাসিটামিনোফেন বিষাক্ততার সময় টিউবুলস [74]। TUNEL- পজিটিভ সংকেতের সাথে IHC সমষ্টিকরণ হাবু নেফ্রাইটিসের সময় মেসাঞ্জিয়াল কোষগুলির কোষের মৃত্যু সনাক্তকরণের অনুমতি দেয় [99]। হালকা মাইক্রোস্কোপিতে, বিষাক্ততার যান্ত্রিক মার্কারগুলির সাথে সমষ্টিকরণ সিরিয়াল বিভাগে করা হয়েছিল, যেমনটি ওট এট আল দ্বারা রিপোর্ট করা হয়েছে। [৮৯]।

TUNEL সমস্যা এবং সীমাবদ্ধতা

TUNEL এর সাথে কাজ করার সময় বেশ কয়েকটি সম্ভাব্য সমস্যা হতে পারে এবং আশা করা উচিত। একটি হল যে 30OH ডিএনএ টার্মিনি কেবলমাত্র এন্ডোনিউক্লিজ অ্যাকশনের ফলে কোষের মৃত্যুর সময় নয়, ডিএনএর সাথে প্রায় সমস্ত এনজাইমেটিক বিক্রিয়ায় একটি সাধারণ মধ্যবর্তী বিপাক হিসাবেও ঘটে। একটি প্রাথমিক কোষ ফাংশন যা 30OH টার্মিনি তৈরি করে তা হল ডিএনএ সংশ্লেষণ, যেখানে অসংখ্য ওকাজাকি টুকরা তাত্ত্বিকভাবে একটি মিথ্যা-ইতিবাচক TUNEL সংকেত তৈরি করতে পারে, বিশেষ করে অ্যাসের অত্যন্ত সংবেদনশীল পরিবর্তনগুলিতে। সময়কিডনি আঘাত,ডিএনএ মেরামত একটি এপি এন্ডোনিউক্লিজ অ্যাকশনের ফলে মিথ্যা TUNEL-পজিটিভ সংকেতগুলিতেও অবদান রাখতে পারে। রাসায়নিক (হাইড্রোজেন পারক্সাইড, ব্লোমাইসিন) বা শারীরিক (গামা বিকিরণ) আঘাত দ্বারা প্ররোচিত ব্যাপক অক্সিডেটিভ কিডনি আঘাত 30OH প্রান্তের সংখ্যা বাড়াতে পারে, এন্ডোনিউক্লিজ মধ্যস্থতাকারী ডিএনএ ফ্র্যাগমেন্টেশন ছাড়াও মিথ্যা-পজিটিভ TUNEL রিডিং বাড়াতে পারে।

আরো প্রায়ই এবং আরো সম্ভবত, TdT প্রতিক্রিয়া (সময়, তাপমাত্রা, এনজাইমেটিক কার্যকলাপ, বা কোফ্যাক্টর) এর পরীক্ষামূলক অবস্থার ভুলভাবে সেট করার ফলে একটি কৃত্রিমভাবে উন্নত TUNEL-পজিটিভ সংকেত পটভূমি হতে পারে। যদিও এটি অসংজ্ঞায়িত রয়ে গেছে যে কিডনি টিস্যুর নমুনাগুলির জন্য স্বাভাবিক বেসলাইন হিসাবে বিবেচিত হয়, এটি মোট কোষের প্রায় 1 শতাংশ একটি যুক্তিসঙ্গত সংখ্যা হবে বলে মনে হয়। অবশ্যই, একটি 10 ​​শতাংশ বা উচ্চতর ব্যাকগ্রাউন্ড অচ্যুত এবং অপরিশোধিত পরীক্ষা শর্ত বা উপযুক্ত নমুনা স্টোরেজ অবস্থা থেকে বিচ্যুতির স্পষ্ট প্রমাণ।

আশা করা আরেকটি সমস্যা হল কিছু কোষের প্রকারে কম DNase I কার্যকলাপ (যেমন, এন্ডোথেলিয়াম),কিডনিকম্পার্টমেন্ট (যেমন, গ্লোমেরুলি), বা প্যাথলজিক্যাল টিস্যু (যেমন, টিউমার)। এই কোষগুলি কম TUNEL ইতিবাচকতা দেখাবে বলে আশা করা উচিত, কারণ তারা আঘাত প্রতিরোধী নয়, কিন্তু TUNEL-এ একটি পরিমাপযোগ্য সংকেত তৈরি করার জন্য পর্যাপ্ত এন্ডোনিউক্লিজ কার্যকলাপ নেই। আমাদের অভিজ্ঞতায়, এমনকি TUNEL পজিটিভ কোষের {{0}}.01 শতাংশ এবং 0.1 শতাংশের মধ্যে পরিবর্তনগুলি পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ এবং কিডনি (অন্য টিস্যুর) আঘাতের শক্ত প্রমাণ হিসাবে ব্যবহৃত হতে পারে।

অবশেষে, TUNEL দাগের পরিমাণ নির্ধারণে একটি সমস্যা দেখা দেয় যখন DNA খণ্ডিতকরণের পরিমাণ খুব বেশি হয়, উদাহরণস্বরূপ, কোষের মৃত্যুর শেষ পর্যায়ে বা উচ্চ-তীব্রতার আঘাতে, যেখানে অবশিষ্ট DNA বিচ্ছিন্ন করার কারণে DAPI এর সাথে সঠিকভাবে প্রতিরোধ করা যায় না। ডবল হেলিক্স (চিত্র 3D)। এই ক্ষেত্রে, TUNEL-পজিটিভ সংকেত "বাতাসে ঝুলন্ত" এবং আপাতদৃষ্টিতে নিউক্লিয়াসের সাথে যুক্ত নয়। এটি একটি প্যাথলজিস্টের দায়িত্ব হয়ে যায় যে এগুলোকে একটি আর্টিফ্যাক্টের পরিবর্তে TUNEL-পজিটিভ কোষ হিসাবে ব্যাখ্যা করা। ফ্লুরোসেসিন-লেবেলযুক্ত TUNEL-এর সাথে, টিস্যুতে ব্যাকগ্রাউন্ড অটোফ্লোরোসেন্সকে TUNEL- পজিটিভিটি [140] হিসাবে চিহ্নিত করার একটি বিপদ রয়েছে। এই ক্ষেত্রে, লাল বর্ণালী TUNEL [51,54] এ একটি স্যুইচ করার পরামর্শ দেওয়া হয়।

অতিরিক্ত তথ্যের উৎস হিসেবে TUNEL প্যাটার্নস

বেশ কয়েকটি TUNEL প্যাটার্ন স্পষ্টভাবে আলাদা করা যেতে পারে এবং একটি সম্ভাব্য প্রক্রিয়া এবং আঘাতের মাত্রা নির্ধারণ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে (সারণী 1, চিত্র 3)। সাধারণত, একটি নিউক্লিয়াস-শুধুমাত্র TUNEL প্যাটার্ন হালকা আঘাত দ্বারা উত্পাদিত হয়, যখন শক্তিশালী আঘাত (অর্থাৎ, উচ্চতর এক্সপোজার) এর ফলে নিউক্লিয়াস বা কোষগুলির আরও শক্তিশালী দাগ এবং বিচ্ছিন্নতা ঘটে। একটি কঠোরভাবে apoptotic TUNEL প্যাটার্ন হল apoptotic দেহ গঠনের ফলে পারমাণবিক বিভাজন (চিত্র 3E)। টুনেল-পজিটিভ নিউক্লিয়াসের ছোট টুকরো, যা সম্ভবত অ্যাপোপটোটিক দেহ, ইঁদুরের ইস্কেমিয়া-রিপারফিউশনে 24-72 ঘন্টা [97] এ দেখা গেছে। ইঁদুরের ইসকেমিয়া-রিপারফিউশন আঘাতের 14 দিন পরে রেনাল টিউবুলার এপিথেলিয়াম এবং ইন্টারস্টিটিয়ামে নিউক্লিয়াসের TUNEL লেবেলিংয়ের সাথে অ্যাপোপটোটিক দেহগুলিও দেখা গেছে [141]। ল্যাভেন্ডার তেলের ক্রমবর্ধমান ডোজ নিউক্লিয়াস-শুধু TUNEL প্যাটার্ন হ্রাস করে এবং সাইটোপ্লাজমিক ফুটো [94] সহ নেক্রোসিস-এর মতো TUNEL-এ রূপান্তরিত করে। পরেরটি নেক্রোসিসে প্রোটিনেস এবং লাইপেসের ক্রিয়াকলাপের কারণে পারমাণবিক খাম ধ্বংসের ফলস্বরূপ। সাইটোপ্লাজমিক TUNEL (চিত্র 3F) টিউনেল-পজিটিভ সাইটোপ্লাজম হিসাবে দেখা গেছে, ইঁদুরের টিউবুলে র্যাবডোমায়োলাইসিস মডেলের হালকা মাইক্রোস্কোপিতে [142] এবং উচ্চ গ্লুকোজের উপস্থিতিতে এবং ইঁদুরের ডায়াবেটিক নেফ্রোপ্যাথিতে সংষ্কৃত পডোসাইটগুলিতে [135]। সাইটোপ্লাজমিক TUNEL এছাড়াও FL ফ্লুরোসেন্ট TUNEL [98] এবং হালকা মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করে ইঁদুরের ইসকেমিয়া-রিপারফিউশন ব্যবহার করে ইঁদুরের রেনাল ইস্কেমিয়া-রিপারফিউশনে বর্ণনা করা হয়েছিল [143]। পারমাণবিক ঝিল্লি ক্ষতির নির্দেশক শক্তিশালী সাইটোপ্লাজমিক TUNEL স্টেনিং সহ মার্কিউরিক ক্লোরাইড-প্ররোচিত গভীর এবং একচেটিয়াভাবে টিউবুলার ক্ষতি [60]। যদি আঘাত অব্যাহত থাকে বা ক্ষতিকারক এজেন্টের মাত্রা বৃদ্ধি পায়, সাইটোপ্লাজমিক TUNEL কে বিচ্ছুরিত TUNEL (চিত্র 3G) এর একটি "অগোছালো" ছবিতে রূপান্তরিত করা যেতে পারে যা কোষ ধ্বংসের শেষ পর্যায়ে এবং কোষের সাইটোপ্লাজম এবং ধ্বংসাবশেষের ছিদ্রের কারণে কোষ ধ্বংসের জন্য দায়ী। উদাহরণস্বরূপ, সাইটোপ্লাজমিক এবং বিচ্ছুরিত TUNEL উভয়ই সিসপ্ল্যাটিন-চিকিত্সা করা ইঁদুর [71,72] এবং ইঁদুর [144] এবং স্ট্রেপ্টোজোটোসিন-প্ররোচিত ডায়াবেটিক ইঁদুর [145]-এ পডোসাইটের আঘাতে পরিলক্ষিত হয়েছিল। বিচ্ছুরিত নেক্রোটিক TUNEL এছাড়াও ইঁদুর [101] এর মধ্যে ইউরানাইল অ্যাসিটেট-প্ররোচিত নেফ্রোটক্সিসিটির সময় পরিলক্ষিত হয়েছিল। সবশেষে, আরেকটি TUNEL সংকেত পরিবর্তনশীল যা মনোযোগ দিতে হবে তা হল TUNEL-পজিটিভ সিগন্যালের তীব্রতা, যা প্রতিটি কোষের অভিজ্ঞতার বিরতির (আঘাতের মাত্রা) সংখ্যার উপর নির্ভর করে কোষ থেকে কোষে বিচ্যুত হতে পারে, যেমন কিছু গবেষণা দ্বারা নথিভুক্ত করা হয়েছে [45,96,125 ]। মডেলের জন্য যেখানে TUNEL সংকেতের তীব্রতা পরিলক্ষিত হয়, TUNEL-পজিটিভ বস্তুর সংখ্যা এবং স্টেনিংয়ের গড় তীব্রতা উভয় দ্বারা পরিমাপ করার পরামর্শ দেওয়া হয়।

উপসংহার

কিডনিতে অ্যাপোপটোটিক এন্ডোনিউক্লিজের উচ্চ ক্রিয়াকলাপের কারণে, বিশেষ করে DNase I এবং EndoG, TUNEL এর ব্যবহারকিডনি গবেষণা এবং রোগ নির্ণয়খুব তথ্যপূর্ণ। এটি আরও বেশি কার্যকর হতে পারে যদি TUNEL এর প্রাথমিক ব্যবহারের বাইরে অ্যাপোপটোসিস সনাক্ত করার পদ্ধতি হিসাবে প্রয়োগ করা হয়। অ্যাপোপটোসিস অধ্যয়নের জন্য একচেটিয়াভাবে TUNEL প্রয়োগ করা একটি অনুপযুক্তভাবে ব্যবহৃত পদ্ধতি দ্বারা বিজ্ঞান কীভাবে অসাবধানতাবশত ভুল নির্দেশিত হতে পারে তার একটি ভাল উদাহরণ। বেশিরভাগ তীব্র আঘাতের পরীক্ষা হিসাবে এর ব্যবহার সত্ত্বেও, AKI এবং CKD উভয় মূল্যায়নের জন্য TUNEL সফলভাবে প্রয়োগ করা যেতে পারে। যাইহোক, CKD-এ, TUNEL-পজিটিভিটির মাত্রা তীব্র আঘাতের তুলনায় কম বলে আশা করা উচিত। যেহেতু এন্ডোনিউক্লিজের (প্রধানত, DNase I) ক্রিয়াকলাপ টিউবুলার এপিথেলিয়ামে অন্যান্য কিডনির অংশগুলির তুলনায় অনেক বেশি, কিডনি টিউবুলে আঘাত সাধারণত আরও বিশিষ্ট হিসাবে দেখা যায়। যাইহোক, গ্লোমেরুলার বা ভাস্কুলার ইনজুরিগুলিও TUNEL ব্যবহার করে অধ্যয়ন করা যেতে পারে যদি আঘাত আসলে এই অংশগুলিতে ঘটে থাকে। IHC মার্কারগুলির সাথে FL ফ্লুরোসেন্ট TUNEL-এর একত্রীকরণ TUNEL সংকেতের সাথে কোষের ধরন এবং কোষের মৃত্যুর প্রক্রিয়া সনাক্তকরণ এবং সংযোগের অনুমতি দেয়। TUNEL quantification কোষের মৃত্যুর ডিগ্রী সম্পর্কে মূল্যবান তথ্য অবদান রাখতে পারে, এবং চিত্র বিশ্লেষণ সফ্টওয়্যার প্রয়োগ করা এই বিষয়ে খুব দরকারী হতে পারে। TUNEL প্যাটার্নের বিভিন্নতা বিবেচনা করে, প্রতিনিধি চিত্রগুলিকে দৃঢ়ভাবে প্রতিষ্ঠিত এবং প্রদর্শন করার পরামর্শ দেওয়া হয়

TUNEL সংকেত যা ইতিবাচক বলে মনে করা হয়। অবশেষে, TUNEL প্যাটার্নগুলি অতিরিক্ত তথ্যের উত্স হিসাবে ব্যবহার করা উচিত, যেমন কোষের মৃত্যুর প্রক্রিয়া এবং বিষাক্ততার মাত্রা। উদাহরণস্বরূপ, TUNEL-পজিটিভ অ্যাপোপটোটিক দেহের মধ্যে পার্থক্য, সাইটোপ্লাজমিক TUNEL সংকেতের উপস্থিতি, বা বিচ্ছুরিত TUNEL প্যাটার্নগুলি গবেষণা এবং ডায়াগনস্টিক ফলাফলের আরও সুনির্দিষ্ট ব্যাখ্যার জন্য অ্যাপোপটোটিক বনাম নেক্রোটিক TUNEL-পজিটিভ কোষ সনাক্ত করতে সাহায্য করতে পারে।

যৌন উত্তেজনা কিডনি ব্যাধি চিকিত্সা