yuaভাষা
বাড়ি / জ্ঞান / সন্তুষ্ট

জ্ঞান

H2O2/UVB-প্ররোচিত ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট কোলাজেন ডিগ্রেডেশনের বিরুদ্ধে Hsa-microRNA-4535-মধ্যস্থিত TGF/Smad সিগন্যালিং এর বিরুদ্ধে সুরক্ষামূলক প্রভাব

May 06, 2023

বিমূর্ত

এই অধ্যয়নের লক্ষ্য ছিল অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াটি তদন্ত করাcistanche এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবH2O2/UVB-প্ররোচিত ক্ষতির বিরুদ্ধে ইন ভিট্রো এবং ফটোড্যামেজের ভিভো মডেল ব্যবহার করে। তদুপরি, আমরা এই প্রক্রিয়াতে miRNA নিয়ন্ত্রণের জড়িততা চিহ্নিত করেছি। H2O2/UVB-চিকিত্সা করা HS68 হিউম্যান ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট এবং UVB-প্ররোচিত C57BL/6J নগ্ন ইঁদুরগুলি ভিট্রো এবং ফটোডামেজের ভিভো মডেলগুলিতে ব্যবহৃত হয়েছিল। ফলাফলে তা দেখা গেছেcistanche চিকিত্সাপ্রশমিত H2O2/UVB-প্রেরিত কোষের কার্যক্ষমতা হ্রাস, TGF/Smad সিগন্যালিং দুর্বলতা, এবং ত্বকের বার্ধক্য। মাইক্রোআরএনএ অ্যারে বিশ্লেষণ এবং ডাটাবেস অনুসন্ধানের ফলাফলের উপর ভিত্তি করে, has-miR-4535 হিসেবে চিহ্নিত করা হয়েছিলসম্ভাব্য প্রার্থী miRNA যা লক্ষ্য Smad4. ইন ভিট্রো, cistanche চিকিত্সা Smad2/3/4 কমপ্লেক্স সক্রিয় করে এবং H2O2/UVB-প্রকাশিত কোষগুলিতে hsa-miR-4535 প্রকাশকে বাধা দেয়। ভিভোতে, C57BL/6J নগ্ন ইঁদুরের পৃষ্ঠীয় ত্বকে কম (12 mg/kg) এবং উচ্চ মাত্রায় (24 mg/kg) cistanche এর সাময়িক প্রয়োগ TGF/Smad কোলাজেন সংশ্লেষণ সংকেত প্রচার করে UVB-প্ররোচিত ত্বকের ফটোড্যামেজকে উল্লেখযোগ্যভাবে উপশম করেছে, এপিডার্মাল হাইপারপ্লাসিয়া, বলি গঠন, এবং ত্বকের সেন্সেন্স কমায়, সেইসাথে hsa-miR-4535 প্রকাশকে বাধা দেয়। একসাথে নেওয়া, আমাদের ফলাফলগুলি hsa-miR-4535 এবং TGF /Smad কোলাজেন সংশ্লেষণ সংকেতের মধ্যে একটি লিঙ্ক নির্দেশ করে এবং এই কারণগুলিকে H2O2/UVB-প্ররোচিত বার্ধক্যের বিরুদ্ধে ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টগুলিতে সিস্টানচে ফটো-প্রতিরক্ষামূলক প্রক্রিয়াতে জড়িত থাকার পরামর্শ দেয়। সাক্ষ্য-প্রমাণ সেই ইঙ্গিত দিয়েছেবিরোধী-বার্ধক্য বৈশিষ্ট্য সঙ্গে cistancheহতে পারেএকটি সম্পূরক হিসাবে বিবেচনা করা হয়ত্বকের যত্ন পণ্য.

Protective effects of cistanche

Cistanche স্কিন-কেয়ার পণ্য বিক্রয়ের জন্য

ভূমিকা

মানুষের ত্বকের বার্ধক্যের ক্লিনিকাল লক্ষণগুলির মধ্যে রয়েছে কুঁচকে যাওয়া, শিথিলতা এবং অনিয়মিত পিগমেন্টেশন [১]। ত্বকের বার্ধক্যের প্রক্রিয়াটি জটিল এবং দুটি প্রকারে বিভক্ত করা যেতে পারে: অন্তর্নিহিত বার্ধক্য এবং বহির্মুখী বার্ধক্য। অভ্যন্তরীণ বার্ধক্য সময় এবং জেনেটিক কারণের কারণে হয়, যখন বহির্মুখী বার্ধক্য, যাকে ফটোজিংও বলা হয়, প্রধানত অতিবেগুনী বিকিরণের সংস্পর্শে আসার ফলে [2, 3]। পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে প্রচুর প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) অভ্যন্তরীণ এবং বহির্মুখী উভয় বয়সের সময় উত্পন্ন হয়। ROS এর জমে থাকা মাইটোজেন-অ্যাক্টিভেটেড প্রোটিন কিনেস (MAPK) সিগন্যালিং প্ররোচিত করতে পারে এবং এর ডাউনস্ট্রিম ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর, অ্যাক্টিভেটর প্রোটিন-1 (AP-1) সক্রিয় করতে পারে। সক্রিয় AP-1 নিউক্লিয়াসে স্থানান্তর করতে পারে এবং ম্যাট্রিক্স মেটালোপ্রোটিনেসেস (MMPs) [4] এর প্রবর্তক অঞ্চলে আবদ্ধ হতে পারে। এমএমপিগুলি হল একটি বড় দস্তা-নির্ভর এন্ডোপেপ্টিডেস গ্রুপ, যা ত্বকের ডার্মিস এক্সট্রা সেলুলার ম্যাট্রিক্স (ECM) এর অবনতিতে অবদান রাখে। বিশেষ করে, এমএমপি-1, একটি কোলাজেনেস, কোলাজেন প্রকার I এবং III [5] এর বিভাজনের সাথে জড়িত। কোলাজেন প্রকার I এবং III, ECM এর প্রধান উপাদান, ত্বকের ডার্মিসকে সমর্থন এবং শক্তি প্রদান করতে সক্ষম এবং তাদের অব্যবস্থাপনা বয়স্ক ত্বকের বৈশিষ্ট্যগত কুঁচকে যাওয়া এবং শিথিলতার দিকে পরিচালিত করে [6]। ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর-বিটা (TGF) হল তিনটি ভিন্ন আইসোফর্ম, TGF 1, TGF 2 এবং TGF 3 সহ একটি সর্বব্যাপী এবং শক্তিশালী সাইটোকাইন, যা মানুষের ত্বকের ডার্মিসে কোলাজেন সংশ্লেষণকে ইতিবাচকভাবে নিয়ন্ত্রণ করতে পারে [2]। TGF গুলি TGF রিসেপ্টর প্রকার I (T RI) এবং II (T RII) সহ নির্দিষ্ট কোষের পৃষ্ঠের সেরিন/থ্রোনাইন কাইনেজ রিসেপ্টর কমপ্লেক্সগুলির সাথে মিথস্ক্রিয়া করে তাদের সংকেত শুরু করে। T RI ফসফোরিলেশন R-Smads (Smad2 এবং Smad3) এর ফসফোরিলেশনকে ট্রিগার করে। সক্রিয় R-Smads এর নিউক্লিয়াস ট্রান্সলোকেশন নিয়ন্ত্রণ করতে Smad4 এর সাথে ইন্টারঅ্যাক্ট করে এবং Smad-বাইন্ডিং এলিমেন্ট (SBE) [7, 8] এর প্রবর্তকদের সাথে আবদ্ধ হওয়ার মাধ্যমে ট্রান্সক্রিপশনলি কোলাজেন প্রকার I এবং III সক্রিয় করে। মাউন্টিং প্রমাণ ইঙ্গিত করে যে উন্নত ROS প্রজন্ম, অভ্যন্তরীণ বা ফটোজিং দ্বারা প্ররোচিত, TGF/Smad সিগন্যালিং পথের দুর্বলতায় অবদান রাখে, যার ফলস্বরূপ মানুষের ত্বকের ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টগুলিতে কোলাজেন সংশ্লেষণ হ্রাস পায় [9, 10]। সিস্টানচে (3,5,7-ট্রাইহাইড্রক্সি ফ্ল্যাভোন), ফ্ল্যাভোনয়েড পরিবারের একটি প্রাকৃতিক সদস্য, আলপিনিয়া অফিসিনারাম এবং প্রোপোলিসে প্রচুর পরিমাণে পাওয়া যায়। সিস্টানচে ইস্কেমিক স্ট্রোক, ডায়াবেটিস এবং বিভিন্ন ধরণের ক্যান্সারের চিকিত্সার জন্য একটি সম্ভাব্য প্রার্থী [11-13]। উপরন্তু, cistanche র‌্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জিং এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি কার্যকলাপের অধিকারী [14, 15]। আমরা পূর্বে দেখিয়েছি যে সিস্টানচে H2O2-প্রদাহ কমিয়েছে এবং HS68 কোষে ইনসুলিন-সদৃশ গ্রোথ ফ্যাক্টর 1 রিসেপ্টর (IGFI-R)/ERK1/2 সিগন্যালিং পাথওয়ের মাধ্যমে কোলাজেন গঠনের প্রচার করেছে [16, 17]। তদ্ব্যতীত, একটি গবেষণায় ইঙ্গিত দেওয়া হয়েছে যে সিস্টানচেকে আলপিনিয়া অফিসিনারামের একটি যৌগ হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল এবং ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট কোষগুলিতে কোলাজেনেস প্রতিরোধক প্রভাব রয়েছে [18]। যাইহোক, সিস্টানচ কীভাবে ত্বকের ত্বকের বার্ধক্য নিয়ন্ত্রণ করে তার সাথে সম্পর্কিত আরও বিস্তারিত আণবিক প্রক্রিয়া অজানা। MicroRNAs (miRNAs) হল ছোট, একক-স্ট্রেন্ডেড, নন-কোডিং RNA অণুর একটি গ্রুপ যার গড় দৈর্ঘ্য 22 নিউক্লিওটাইড। পরিপক্ক miRNA গুলি DNA ক্রম থেকে প্রতিলিপি করা হয়। বেশিরভাগ ক্ষেত্রে, পরিপক্ক miRNAs mRNA অনুবাদকে নীরব করার জন্য লক্ষ্য mRNA-এর 3′-অঅনুবাদিত অঞ্চল (UTRs) এর সাথে আবদ্ধ হয় [19]। মানুষের ত্বকে, miRNAs কোষ বিপাক, ক্যান্সার, সেন্সেন্স এবং কোলাজেন গঠনের নিয়ন্ত্রণে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে [20-23]। উদাহরণ স্বরূপ, miR-377 ডিএনএ মিথাইলট্রান্সফেরেজ 1 (DNMT1) এক্সপ্রেশনকে বাধা দিয়ে ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট সেন্সেন্সকে প্ররোচিত করতে পারে, যা পরবর্তীতে p53 প্রোমোটার এবং ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট সেন্সেন্স [22]-এ কম মেথিলেশনের দিকে পরিচালিত করে। মানব ডার্মাল প্যাপিলা কোষে (এনএইচডিপি) UVB-প্ররোচিত ক্ষতির miRNA প্রোফাইলটি আগে তদন্ত করা হয়েছিল [24]। যাইহোক, এমআইআরএনএ রেগুলেশনের মাধ্যমে ইউভিবি-প্ররোচিত ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট সেন্সেন্স, বিশেষ করে প্রাকৃতিক যৌগ জড়িত হওয়ার ক্ষেত্রে অনেকাংশে অজানা। এই গবেষণার লক্ষ্য ছিল H2O2/UVB-প্ররোচিত ত্বকের ক্ষতির বিরুদ্ধে cistanche-এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবের পাশাপাশি এই প্রক্রিয়ায় microRNA- মধ্যস্থতাকারী কোলাজেন অবক্ষয়ের ভূমিকা তদন্ত করা। আমরা আরও লক্ষ্য করেছি কোলাজেন সংশ্লেষণ নিয়ন্ত্রণে জড়িত মাইক্রোআরএনএগুলি সনাক্ত করা।

Protective effects of cistanche

ফলাফল

cistanche HS68 হিউম্যান ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টে UVB/H2O2-প্ররোচিত সাইটোটক্সিসিটি বাধা দেয়

ভিট্রোতে সিস্টানচে (চিত্র 1A) এর সাইটোটক্সিসিটি তদন্ত করার জন্য, HS68 কোষগুলিকে সিস্টাঞ্চের বিভিন্ন ডোজ দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল (0, 10, 20, 30, 40, 50 μM) 24 ঘন্টার জন্য এমটিটি পরীক্ষার ফলাফল দেখিয়েছে যে সিস্টানচে এইচএস 68 কোষে সাইটোটক্সিক ছিল না (চিত্র 1 বি)। এর পরে, আমরা 24 ঘন্টার জন্য H2O2 (0, 100, 150, 200, 250, 300 μM) এবং UVB (0, 25, 30, 40, 50, 60 mJ/cm²) এর বিভিন্ন ডোজে HS68 কোষগুলিকে প্রকাশ করেছি। H2O2 এবং UVB চিকিত্সা ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে কোষের কার্যক্ষমতা হ্রাস করেছে (চিত্র 1C, 1D)। নিম্নলিখিত cistanche এর cytoprotective বৈশিষ্ট্য মূল্যায়ন করতেH2O2 এবং UVB এক্সপোজার, আমরা HS68 কোষের সাথে চিকিত্সা করেছিসিস্টাঞ্চের বিভিন্ন ঘনত্ব (10, 20, 30 μM)অনুসরণ করে H2O2- (200 μM) এবং UVB-প্ররোচিত (40mJ/cm²) ক্ষতি। এইচ2O2 বা একা UVB চিকিত্সাউল্লেখযোগ্যভাবে কমেছে (40 শতাংশ) HS68 এর কার্যক্ষমতাকোষ যাইহোক, cistanche চিকিত্সা কোষের মৃত্যু প্রতিরোধ করেঘনত্ব-নির্ভর পদ্ধতিতে (চিত্র 1E, 1F)।উচ্চতর ঘনত্ব cistanche (30 μM) বিশিষ্টভাবেalleviated H2O2- এবং UVB-প্ররোচিত সাইটোটক্সিসিটি।অতএব, 30 μM cistanche এর ডোজ ব্যবহার করা হয়েছিলপরবর্তীভিট্রোতেঅধ্যয়ন এর প্রতিরক্ষামূলক মূল্যায়নHS68 কোষে প্রভাব।

Protective effects of cistanche

চিত্র 1. cistanche HS68 হিউম্যান ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টে UVB/H2O2-প্ররোচিত সাইটোটক্সিসিটি বাধা দেয়। (A) cistanche এর রাসায়নিক গঠন। (B) HS68 কোষের কোষের কার্যক্ষমতা বিভিন্ন ঘনত্বের (10, 20, 30, 40, 50 µM সহ চিকিত্সা করা হয় ) 24 ঘন্টার জন্য। (C এবং D) H2O2 (100, 150, 200, 250, 300 µM) এর বিভিন্ন ডোজ বা UVB (25, 30, 40, 50, 60 J/cm2 ) দ্বারা বিকিরণিত 24 ঘন্টার জন্য উন্মুক্ত HS68 কোষের কোষের কার্যক্ষমতা। (E এবং F) H2O2 (200 µM) এর সংস্পর্শে আসা HS68 কোষের কোষের কার্যকারিতা বা UVB (40 J/cm2 ) দিয়ে 1 ঘন্টার জন্য বিকিরণ করা হয় এবং তারপর 23 ঘন্টার জন্য cistanche (10, 20, 30 µM) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়। সিস্টাঞ্চের সাইটোপ্রোটেকটিভ প্রভাবগুলি এমটিটি অ্যাস দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। কন্ট্রোল সেলগুলিকে 100 শতাংশ কার্যকরতা বরাদ্দ করা হয়েছিল। মানগুলি গড় ± SE হিসাবে দেখানো হয়৷ ফলাফলের পরিমাণ দেখানো হয়েছে (n=3) *P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001 বনাম চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণ কোষ; ##P <0.01, ###P <0.001 বনাম H2O2 বা UVB-চিকিত্সা করা কোষ।



Cistanche H2O2-প্ররোচিত HS68 কোষকে কমিয়ে দেয়অ্যাপোপটোসিসের পরিবর্তে বার্ধক্য

কোষের কার্যক্ষমতা হ্রাস কোষের মৃত্যু বা বৃদ্ধি বাধার কারণে হয়েছে কিনা তা নির্ধারণ করতে, আমরা H2O2 (50, 100, 200, 300, 400 μM) এর বিভিন্ন মাত্রার সংস্পর্শে আসা HS68 কোষগুলিতে পশ্চিমা ব্লটিং দ্বারা বেশ কয়েকটি অ্যাপোপটোসিস এবং বেঁচে থাকার মার্কারগুলির অভিব্যক্তি পরীক্ষা করেছি। ) 24 ঘন্টার জন্য। আমরা p-Akt-এর মতো বেঁচে থাকা মার্কারগুলির উল্লেখযোগ্যভাবে কমে যাওয়া অভিব্যক্তি এবং বর্ধিত অভিব্যক্তি খুঁজে পেয়েছিapoptosis-related markers, such as cleaved-caspase 3 and cytochrome c, at concentrations >200 μM H2O2 (চিত্র 2A)। তদ্ব্যতীত, আমরা অ্যানেক্সিন ভি এবং পিআই স্টেনিং ব্যবহার করে অ্যাপোপটোটিক কোষগুলি মূল্যায়ন করতে ফ্লো সাইটো মেট্রি সম্পাদন করেছি এবং অনুরূপ ফলাফলগুলি পর্যবেক্ষণ করেছি। একসাথে নেওয়া, 200 μM H2O2 HS68 সেল অ্যাপোপটোসিস সৃষ্টি করেনি (চিত্র 2B)। এর পরে, আমরা সেনসেন্ট কোষগুলি নির্ধারণ করতে p16, p21 এবং SA{11}}গালের মতো বেশ কয়েকটি সেন্সেন্স মার্কারের এক্সপ্রেশন শনাক্ত করেছি। আমাদের ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে সিস্টানচে চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে H2O2-প্ররোচিত p16 এবং p21 প্রোটিন স্তরের পাশাপাশি SA- -গাল-পজিটিভ কোষের সংখ্যা (চিত্র 2C, 2D) হ্রাস করেছে।


Cistanche HS68 কোষে UVB/H2O2-প্ররোচিত অন্তঃকোষীয়/মাইটোকন্ড্রিয়াল ROS উৎপাদন এবং MMP ভারসাম্যহীনতা হ্রাস করে

অক্সিডেটিভ স্ট্রেস বিভিন্ন রোগে মূল ভূমিকা পালন করে এবং অন্তঃসত্ত্বা বা বহিরাগত কারণ দ্বারা প্ররোচিত হতে পারে। এখানে, আমরা অক্সিডেটিভ ক্ষতি প্ররোচিত করার জন্য একটি বহিরাগত ফ্যাক্টর হিসাবে H2O2 এবং UVB ব্যবহার করেছি এবং তারপরে cistanche এর ROS নির্মূল কার্যক্রম তদন্ত করেছি। ROS এর উত্সগুলি সনাক্ত করতে, MitoSOX এবং DCFH-DA অন্তঃকোষীয় এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল ROS নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। স্টেনিং ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে H2O2 এবং UVB চিকিত্সা ROS সঞ্চয়কে প্ররোচিত করেছে যখন cistanche চিকিত্সা ROS প্রজন্মকে হ্রাস করেছে (চিত্র 3A, 3B)। ভিতরেউপরন্তু, যেহেতু ভারসাম্যহীন MMP কোষের মৃত্যু শুরু করতে পারে, আমরা MMP-তে পরিবর্তনগুলি নির্ধারণ করতে JC-1 ব্যবহার করেছি। সাধারণ মাইটোকন্ড্রিয়া ফ্লুরোসেসড লাল (JC-1 ডাইমার) যখন প্রতিবন্ধী মাইটোকন্ড্রিয়া ফ্লুরোসেসড সবুজ (JC-1 মনোমার)। UVB এবং H2O2 এক্সপোজার সবুজ ফ্লুরোসেন্সের উচ্চ মাত্রায় প্ররোচিত করে। উল্লেখযোগ্যভাবে, cistanche চিকিত্সা সবুজ প্রতিপ্রভকে লালে স্থানান্তরিত করেছে, যা মাইটোকন্ড্রিয়াল ফাংশনগুলির পুনরুজ্জীবন নির্দেশ করে (চিত্র 3C)।

Protective effects of cistanche


cistanche কমায় H2O2-প্রেরিত TGF/SmadHS68 কোষে কোলাজেন সংশ্লেষণ পথের দুর্বলতা

TGF/Smad সিগন্যালিং মানুষের ত্বকের ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টে কোলাজেন গঠনের জন্য সহায়ক [25-27]। অতএব, আমরা H2O2 এর সংস্পর্শে থাকা HS68 কোষে TGF/Smad পাথওয়ের মাধ্যমে cistanche incollagen সংশ্লেষণের ভূমিকা তদন্ত করেছি। ওয়েস্টার্ন ব্লট ফলাফল ইঙ্গিত করে যে সিস্টানচে উল্লেখযোগ্যভাবে TGF/Smad সিগন্যালিং এবং সেইসাথে H2O2-উন্মোচিত HS68 কোষে কোলাজেন সংশ্লেষণকে উন্নত করেছে (চিত্র 4A)। অধিকন্তু, কোলাজেন টাইপ I এবং III এর অব্যবস্থাপনা বয়স্ক ত্বকের ফাইব্রোব্লাস্টগুলির একটি সাধারণ বৈশিষ্ট্য [২৮]। যেহেতু এমএমপি পরিবার কোলাজেন ক্যাটাবোলিজমের সাথে জড়িত [২৯], আমরা পরবর্তীতে এমএমপি-1 অ্যাক্টিভেশনে সিস্টাঞ্চের প্রভাব নিশ্চিত করেছি। আমরা দেখতে পেয়েছি যে সিস্টানচে H2O2-বর্ধিত MMP-1 স্তর (চিত্র 4A) দমন করে HS68 কোষে কোলাজেন ক্ষয় রোধ করে।
তদ্ব্যতীত, আমরা একাকী H2O2 এর সাথে চিকিত্সা করা বা ইমিউনোব্লটিং এবং ইমিউনোফ্লোরোসেন্স স্টেনিং ব্যবহার করে সিস্টানচে সহ-চিকিত্সা করা HS68 কোষগুলির তুলনা করে এই প্রতিরক্ষামূলক ক্রিয়াটির অন্তর্নিহিত সাবসেলুলার আণবিক প্রক্রিয়া সনাক্ত করেছি। cistanche চিকিত্সা p-smad2/3 এবং Smad4 এর পারমাণবিক সঞ্চয়কে উন্নত করেছে যা HS68 কোষে H2O2 এর সংস্পর্শে ব্যাহত হয়েছিল(চিত্র 4B, 4C)। এই ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে সিস্টাঞ্চ HS68 কোষে TGF/Smad পাথওয়ে সক্রিয় করার মাধ্যমে H2O2-প্রেরিত কোলাজেন ফ্র্যাগমেন্টেশনকে উন্নত করতে পারে।


Cistanche চিকিত্সা H2O2-Hsa-miR-এর প্ররোচিত আপ-নিয়ন্ত্রিত অভিব্যক্তি হ্রাস করে-4535, Smad4 লক্ষ্য করার পূর্বাভাস দেওয়া হয়েছে

এর miRNA অ্যারে বিশ্লেষণcistanche-চিকিত্সাHS68 কোষগুলি প্রকাশ করেছে যে নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় cistanche-চিকিত্সা করা গ্রুপে hsa-miR-4535 এক্সপ্রেশন হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 5A)। আরও, miRNA ডাটাবেস ব্যবহার করে, যেমন miRDB এবং TargetScanHuman, আমরা Smad4-3′-UTR (চিত্র 5B)-এ hsa-miR-4535-এর জন্য একটি সংরক্ষিত লক্ষ্য সাইটের পূর্বাভাস দিয়েছি। টার্গেট সাইট নিশ্চিত করার পর, Smad4-3′-UTR-WT এবং Smad4-3′-UTR MT রিপোর্টার কনস্ট্রাক্টগুলিকে HS68 কোষে স্থানান্তরিত করা হয়েছিল যাতে hsa-miR-4535 এর সরাসরি আবদ্ধতা যাচাই করা যায় স্ম্যাড4-3′-UTR আমরা বন্য প্রকার এবং মিউট্যান্ট স্ম্যাড4-3′-UTR গ্রুপগুলির মধ্যে 50 শতাংশ হ্রাস লক্ষ্য করেছি hsa-miR-4535 মিমিক ট্রান্সফেকশন (চিত্র 5C) এর মধ্যে। তারপরে আমরা HS68 কোষে hsa-miR-4535 এবং Smad 4-এর নিয়ন্ত্রণের উপর H2O2 (100,200 μM) এর প্রভাবগুলি মূল্যায়ন করেছি এবং দেখতে পেয়েছি যে H2O2 ডোজ-নির্ভরশীলভাবে উন্নত hsa-miR-4535 এবং Smad4 RNA দমন করেছে অভিব্যক্তি (চিত্র 6A, 6B)। এছাড়াও, hsa-miR-4535 এবং Smad4 এক্সপ্রেশনের এই প্রবণতাটি সিস্টানচে চিকিত্সার পরে বিপরীত হয়েছিল, যা ইঙ্গিত করে যে Smad সংকেত নিয়ন্ত্রণ H2O2-প্ররোচিত HS68 কোষের ক্ষতির cistanche মধ্যস্থতা হ্রাসের সাথে জড়িত হতে পারে (চিত্র 6C, 6D)। একত্রে নেওয়া, এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে মানুষের ত্বকের ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টগুলিতে hsa-miR-4535 এক্সপ্রেশনকে কমিয়ে দিয়ে cistanche H2O2-প্ররোচিত TGF/Smad পথের দুর্বলতাকে হ্রাস করে৷


Protective effects of cistanche

চিত্র 4. cistanche HS68 কোষে H2O2-প্ররোচিত TGF/Smad কোলাজেন সংশ্লেষণ পথের দুর্বলতাকে কমিয়ে দেয়। (A) HS68 কোষগুলি 1 ঘন্টার জন্য H2O2 (200 µM) এর সংস্পর্শে আসে এবং তারপর 23 ঘন্টার জন্য সিস্টানচে (30 µM) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়। কোলাজেন সংশ্লেষণ-সম্পর্কিত পাথওয়ে উপাদানগুলির প্রোটিন অভিব্যক্তি (TGF , p-smad2/3, Smad4, COL1A1, COL3A1) এবং কোলাজেন অবক্ষয়-সম্পর্কিত প্রোটিন (MMP-1) ওয়েস্টার্ন ব্লট দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল৷ (বি) পারমাণবিক এবং সাইটোসোলিক ভগ্নাংশে p-smad2/3, এবং Smad4 এর প্রোটিন অভিব্যক্তি পশ্চিমা ব্লটিং দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। GAPDH একটি লোডিং নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। মানগুলি গড় ± SE হিসাবে দেখানো হয়৷ ফলাফলের পরিমাণ দেখানো হয়েছে (n=3) *P < 0।{35}}5, **P < 0.01, ***P < 0.001 বনাম। চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণ কোষ; #P <0.05, ##P <0.01, ###P <0.001 বনাম H2O2-চিকিত্সা করা কোষ। (C) অ্যান্টি-p-Smad2/3, Smad4 অ্যান্টিবডি এবং FITC/PE-কঞ্জুগেটেড সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি p-Smad2/3 (সবুজ), এবং Smad4 (লাল) অভিব্যক্তি সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। DAPI নিউক্লিয়াস অবস্থান (নীল) নির্দেশ করে। চিত্রগুলি একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ (200×) ব্যবহার করে ক্যাপচার করা হয়েছিল।


has-miR-4535 দ্বারা Smad4 এর মডুলেশন H2O2-উন্মুক্ত মানব ত্বকের ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টে কোলাজেন সংশ্লেষণের সাথে জড়িত

যে প্রক্রিয়াগুলি দ্বারা has-miR-4535 Smad4 এর অভিব্যক্তি এবং HS68 কোষে এর নিম্নধারার সংকেতকে প্রভাবিত করে তা আরও নির্ধারণ করতে, আমরা HS68 কোষগুলিকে hsa-miR-4535 অনুকরণ বা ইনহিবিটর দিয়ে স্থানান্তরিত করেছি এবং Smad4 পরিমাপ করেছি। এবং এর ডাউনস্ট্রিম কোলাজেন এক্সপ্রেশন। ফলাফলগুলি প্রমাণ করেছে যে hsa-miR-4535 দ্বারা hsa-miR-4535 ইনহিবিটর দ্বারা নিষেধাজ্ঞা উল্লেখযোগ্যভাবে Smad4 mRNA এবং H2O2-চিকিত্সা করা HS68 কোষে প্রোটিন এক্সপ্রেশনের নিম্ননিয়ন্ত্রণকে বিপরীত করেছে (চিত্র 7A–7C) . অধিকন্তু, hsa-miR-4535 দমন করা H2O2-প্রেরিত COL1A1 এবং COL3A1 প্রতিবন্ধকতা H2O2-চিকিত্সা করা HS68 কোষে আংশিকভাবে পুনরুদ্ধার করেছে (চিত্র 7C)। বিপরীতভাবে, hsa-miR-4535 মিমিক ট্রান্সফেকশনের ফলে বর্ধিত hsa-miR-4535 এক্সপ্রেশন H2O2 (চিত্র 7D–7F) এর সংস্পর্শে থাকা HS68 কোষে Smad4-এর সিস্টানচে-মধ্যস্থতাকে অবরুদ্ধ করে। hsa-miR-4535-এর অত্যধিক এক্সপ্রেশন আংশিকভাবে কমেছে cistanche-প্ররোচিত COL1A1

এবং COL3A1 স্তর (চিত্র 7F)। hsa-miR-4535 (চিত্র 8A–8C) এর অত্যধিক এক্সপ্রেশন বা siRNA (চিত্র 8D, 8E) দ্বারা Smad4-এর নিষেধাজ্ঞার ফলে H2O2 এক্সপোজারের পরে সিস্টানচে চিকিত্সার অধীনে কোলাজেন সংশ্লেষণ হ্রাস পেয়েছে। আশ্চর্যজনকভাবে, আমরা দেখতে পেয়েছি যে সরাসরি Smad4 সাইলেন্সিং এবং hsa-miR-4535 এর সাথে চিকিত্সা উভয়ই H2O2- চিকিত্সা করা HS68 কোষে বিপরীত সিস্টানচে-ইনডিউসড কোলাজেন সংশ্লেষণের অনুকরণ করে। একসাথে নেওয়া, আমরা উপসংহারে পৌঁছেছি যে cistanche কোলাজেন সংশ্লেষণকে নিয়ন্ত্রিত করে, সম্ভাব্যভাবে H2O2-এর সংস্পর্শে থাকা HS68 কোষে Smad4 সংকেত বাড়াতে hsa-miR-4535 স্তর হ্রাস করার মাধ্যমে।

KSL30


cistanche TGF/Smad কোলাজেন সংশ্লেষণ পথকে উন্নত করে এবং UVB-উন্মুক্ত HS68 কোষে has-miR-4535 এক্সপ্রেশনকে বাধা দেওয়ার পাশাপাশি ডার্মাল সেন্সেসেন্সকে কমিয়ে দেয়

যেহেতু প্রদাহ, ইমিউনোসপ্রেশন, ক্যান্সার এবং অকাল বার্ধক্য [30-32] সহ বিভিন্ন ত্বকের ডার্মিস ডিজঅর্ডারে UV-আলো একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে, আমরা UVB বিকিরণের সংস্পর্শে আসা HS68 কোষগুলিতে কোলাজেন সংশ্লেষণ-সম্পর্কিত সংকেতগুলিতে সিস্টাঞ্চের প্রভাব পরীক্ষা করেছি। UVB-চিকিত্সা করা HS68 কোষগুলিতে TGF/Smad পাথওয়ে উপাদানগুলির প্রোটিনের মাত্রা এবং ডাউনস্ট্রিম COL1A1 এবং COL3A1 হ্রাস পেয়েছিল কিন্তু cistanche চিকিত্সার পরে কার্যকরভাবে আপ-নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল (চিত্র 9A)। ওয়েস্টার্ন ব্লটিং ফলাফল নিশ্চিত করেছে যে সিস্টানচেHS68 কোষে চাপা UVB-বর্ধিত MMP-1 এক্সপ্রেশন (চিত্র 9A)। তদুপরি, আমরা ইউভিবি এক্সপোজারের শিকার এইচএস 68 কোষগুলিতে সিস্টাঞ্চের অ্যান্টি-বার্ধক্য প্রভাবকে স্পষ্ট করে দিয়েছি যে সিস্টানচে p16 এবং পি21 স্তরের UVB-প্ররোচিত উচ্চতা হ্রাস করেছে (চিত্র 9A)। Smad4 কে লক্ষ্য করে hsa-miR- 4535 বাধার মাধ্যমে cistanche UVB-প্ররোচিত কোলাজেন ভাঙ্গন কমিয়ে দিতে পারে কিনা তা মূল্যায়ন করতে, আমরা qPCR ব্যবহার করে UVB এবং cistanche সহ-চিকিত্সা করা কোষগুলিতে has-miR-4535 এবং Smad4 স্তরগুলি তদন্ত করেছি৷ আমরা খুঁজে পেয়েছি যে আছে-miR-4535 অভিব্যক্তিUVB-উন্মুক্ত কোষগুলিতে উল্লেখযোগ্যভাবে আপ-নিয়ন্ত্রিত করা হয়েছিল কিন্তু cistanche চিকিত্সার পরে হ্রাস পেয়েছে। বিপরীতভাবে, Smad4 এক্সপ্রেশনটি UVB এক্সপোজার দ্বারা দমন করা হয়েছিল এবং এই দমনটি সিস্টানচে চিকিত্সা (চিত্র 9B, 9C) দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে বিপরীত হয়েছিল। সম্মিলিতভাবে, আমাদের অনুসন্ধানগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে এইচএস68 কোষে Smad4 সংকেত প্রচার করার জন্য hsa-miR-4535 স্তরগুলিকে দমন করে কোলাজেন গঠনে UVB-প্ররোচিত হ্রাস পুনরুদ্ধার করতে cistanche H2O2 এর মতো একই প্রভাব ফেলে।

Protective effects of cistanche


সিস্টাঞ্চের সাময়িক প্রয়োগ UVB-প্ররোচিত ত্বকের হাইপারপ্লাসিয়া এবং কোলাজেনের অবক্ষয়কে হ্রাস করে এবং সেই সাথে C57BL6/J নগ্ন ইঁদুরের পৃষ্ঠীয় ত্বকে TGF/Smad সংকেত বাড়ায়

ভিভোতে UVB-প্ররোচিত ত্বকের আঘাতের উপর cistanche-এর ফটো-প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব ব্যাখ্যা করার জন্য, আমরা microRNA-4535, Smad4, এবং ত্বকের টিস্যু পরিবর্তনের মাত্রা মূল্যায়ন করেছি। চিত্র 10A C57BL6/J নগ্ন ইঁদুরের পৃষ্ঠীয় ত্বকে UVB বিকিরণ অনুসরণ করে সিস্টাঞ্চের সাময়িক প্রয়োগের জন্য পরীক্ষামূলক নকশা এবং সময়-রেখার পরিকল্পনা দেখায়। ইউভিবি-উন্মুক্ত গোষ্ঠীতে C57BL/6J ইঁদুরের পৃষ্ঠীয় ত্বকের অংশে বলির গঠন লক্ষ্য করা গেছে। সিস্টাঞ্চের সাময়িক প্রয়োগ উল্লেখযোগ্যভাবে বলিরেখার গঠন হ্রাস করে, যা ত্বকের অখণ্ডতা বজায় রাখার জন্য কোলাজেন সামগ্রীতে সিস্টানচে-মধ্যস্থতা বৃদ্ধির ইঙ্গিত দেয় (চিত্র 10বি)। তদুপরি, ডার্মাল স্তরের হিস্টোলজিকাল বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে ত্বকে কোলাজেনের পরিমাণ এবং ঘনত্ব
যানবাহন নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় UVB-বিকিরণিত গ্রুপে উল্লেখযোগ্যভাবে কম ছিল। যাইহোক, cistanche এর সাময়িক প্রয়োগ (12 mg/kg এবং 24 mg/kg)


Protective effects of cistanche


চিত্র 6. cistanche hsa-miR-4535 স্তর হ্রাস করে Smad4 অভিব্যক্তিকে আপ-নিয়ন্ত্রিত করে। (A, B) HS68 কোষগুলিকে H2O2 (0, 100, 20{{30}} µM এর বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে চিকিত্সা করা হয়েছিল ) 24 ঘন্টার জন্য। (C, D) HS68 কোষগুলি 1 ঘন্টার জন্য H2O2 (200 µM) এর সংস্পর্শে এসেছিল এবং তারপর 23 ঘন্টার জন্য সিস্টানচে (30 µM) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। qRT-PCR দ্বারা hsa-miR-4535 এবং Smad4 এর অভিব্যক্তি সনাক্ত করা হয়েছিল। মানগুলি গড় ± SE হিসাবে দেখানো হয়৷ ফলাফলের পরিমাপ দেখানো হয়েছে (n=3) *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001 বনাম চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণ কোষ; ##P <0.01, ###P <0.001 বনাম H2O2-চিকিত্সা করা কোষ।


ইউভিবি-বিকিরণ (চিত্র 11) এর শিকার ইঁদুরের তুলনায় ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে কোলাজেনের সামগ্রী এবং ঘনত্বকে উন্নীত করা হয়েছে। ত্বকের রূপবিদ্যা H&E স্টেনিং দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। যান নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় UVB এক্সপোজার এপিডার্মাল বেধ বৃদ্ধি করেছে। যাইহোক, cistanche এর সাময়িক প্রয়োগ উল্লেখযোগ্যভাবে UVB-প্রেরিত হ্রাস করেছেএপিডার্মাল হাইপারপ্লাসিয়া (চিত্র 11)। উপরন্তু, -গালের ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেনিং নির্দেশিত সিস্টানচে প্রয়োগ UVB-বিকিরণযুক্ত ত্বকে উচ্চ -গালের অভিব্যক্তি হ্রাস করেছে (চিত্র 11)। cistanche UVB-প্ররোচিত কোলাজেনকে উন্নত করতে পারে কিনা তা নির্ধারণ করতে

Protective effects of cistanche

চিত্র 7. hsa-miR-4535 এর অত্যধিক এক্সপ্রেশন বা বাধা HS68 কোষে কোলাজেন সংশ্লেষণ নিয়ন্ত্রণ করে। (A-C) HS68 কোষগুলি hsa-miR-4535 ইনহিবিটর (40 nM) বা ইনহিবিটর NC (40 nM) দিয়ে 1 ঘন্টার জন্য স্থানান্তরিত হয়েছিল এবং তারপরে H2O2 (2) দিয়ে প্রশ্রয় দেওয়া হয়েছিল 23 ঘন্টার জন্য 00 μM)। (D–F) HS68 কোষগুলি hsa-miR-4535 মিমিক (10 nM) বা মিমিক NC (10 nM) দিয়ে 1 ঘন্টার জন্য স্থানান্তরিত হয়েছিল এবং তারপরে সিস্টানচে সহ-চিকিত্সা করা হয়েছিল (30 μM) 23 ঘন্টার জন্য। সফল স্থানান্তর নিশ্চিত করতে qPCR দ্বারা hsa-miR-4535 স্তর সনাক্ত করা হয়েছে। Smad4, COL1A1, এবং COL3A1 এর প্রোটিনের মাত্রা পশ্চিমা ব্লটিং দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। GAPDH একটি লোডিং নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। মানগুলি গড় ± SE হিসাবে দেখানো হয়৷ ফলাফলের পরিমাণ দেখানো হয়েছে (n=3) *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001 বনাম চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণ কোষ; #P <0.05, ##P <0.01, ###P <0.001 বনাম H2O2 বা সিস্টানচে-ট্রিটেড কোষ।


ভিভোতে Smad4 উন্নত করার জন্য hsa-miR-4535 ডাউনরেগুলেশনের মাধ্যমে ফাইবার ক্ষয়, এর RNA এক্সপ্রেশনটি qRT-PCR দ্বারা এক্সাইজড ডোরসাল ত্বকের নমুনায় মূল্যায়ন করা হয়েছিল। Hsa-miR-4535 এক্সপ্রেশন UVB-বিকিরণযুক্ত ত্বকে উন্নত ছিল কিন্তু উল্লেখযোগ্যভাবে দমন করা হয়েছিলcistanche-চিকিত্সা ত্বকউভয় কম এবং উচ্চ ডোজ এ. তদ্ব্যতীত, UVB-বিকিরণযুক্ত ত্বকে Smad4 RNA এক্সপ্রেশনের নিম্ন স্তরগুলি সিস্টাঞ্চ চিকিত্সা দ্বারা পুনরুদ্ধার করা হয়েছিল (চিত্র 12A, 12B)


Protective effects of cistanche

চিত্র 8. siRNA বা hsa-miR-4535 দ্বারা Smad4-এর প্রতিবন্ধকতা ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টে কোলাজেন সংশ্লেষণের সিস্টানচে-মধ্যস্থ বর্ধনকে বিপরীত করে। (A-C) HS68 কোষগুলি hsa-miR-4535 মিমিক (10 nM) বা মিমিক NC (10 nM) দিয়ে 1 ঘন্টার জন্য স্থানান্তরিত হয়েছিল এবং তারপরে সিস্টানচে (3) সহ চিকিত্সা করা হয়েছিল {{40} μM) এবং H2O2 (200 μM) 23 ঘণ্টার জন্য। সফল স্থানান্তর নিশ্চিত করতে qPCR দ্বারা Hsa-miR-4535 (A) এবং Smad4 (B) স্তরগুলি সনাক্ত করা হয়েছিল৷ (D–E) HS68 কোষগুলি siRNA Smad4 (20 nM) বা siRNA NC (20 nM) দিয়ে 1 ঘন্টার জন্য স্থানান্তরিত হয়েছিল এবং তারপরে 23 ঘন্টার জন্য cistanche (30 μM) এবং H2O2 (200 μM) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল৷ সফল স্থানান্তর (ডি) নিশ্চিত করতে কিউপিসিআর দ্বারা Smad4 স্তর সনাক্ত করা হয়েছিল। Smad4, COL1A1 এবং COL3A1 এর প্রোটিন স্তরগুলি ওয়েস্টার্ন ব্লটিং (সি, ই) দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। GAPDH একটি লোডিং নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। দেখানো মান মানে ± SE. ফলাফলের পরিমাণ দেখানো হয়েছে (n=3) *P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001 বনাম চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণ কোষ; #P <0.05, ##P <0.01, বনাম H2O2-চিকিত্সা করা কোষ; $$P <0.01, $$$P <0.001 বনাম H2O2 প্লাস সিস্টানচে-ট্রিটেড সেল

উপরন্তু, cistanche অ্যাপ্লিকেশন টিজিএফ, p smad2/3, এবং Smad4 প্রোটিন অভিব্যক্তি UVB- প্রতিবন্ধী ত্বকের টিস্যুতে (চিত্র 12C) উদ্ধার করেছে। আমাদের অনুসন্ধানে ইঙ্গিত দেওয়া হয়েছে যে সিস্টানচে সম্ভবত কোলাজেন সংশ্লেষণকে উন্নীত করার জন্য P-smad2/3 সক্রিয় করার জন্য Smad4 এক্সপ্রেশন বাড়ানোর জন্য hsa miR-4535কে বাধা দিয়ে UVB-প্ররোচিত ক্ষতি থেকে ত্বককে রক্ষা করতে পারে (চিত্র 13)


image

চিত্র 9. cistanche TGF/Smad কোলাজেন সংশ্লেষণের পথকে উন্নত করে এবং UVB-উন্মুক্ত HS68 কোষে hsa-miR-4535 অভিব্যক্তিকে বাধা দেওয়ার পাশাপাশি ডার্মাল সেন্সেন্সকে হ্রাস করে। HS68 কোষগুলি UVB (40 mJ/cm2 ) এর সংস্পর্শে এসেছিল এবং তারপর 23 ঘন্টার জন্য cistanche (30 µM) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। (A) কোলাজেন সংশ্লেষণ-সম্পর্কিত পাথওয়ে উপাদানগুলির প্রোটিন অভিব্যক্তি (TGF, p-smad2/3, Smad4, COL1A1, COL3A1), কোলাজেন অবক্ষয়-সম্পর্কিত প্রোটিন (MMP{{20}}), এবং সেন্সেন্স- সম্পর্কিত চিহ্নিতকারী (p16 এবং p21) পশ্চিমী দাগ দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। GAPDH একটি লোডিং নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। (B এবং C) hsa-miR-4535 এবং Smad4 এর RNA এক্সপ্রেশন qRT-PCR দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। মানগুলি গড় ± SE হিসাবে দেখানো হয়৷ ফলাফলের পরিমাণ দেখানো হয়েছে (n=3) *P < 0.05, **P < 0.01, বনাম চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণ কোষ; #P <0.05, ##P <0.01 বনাম UVB- উন্মুক্ত কোষ।

আরো জন্য অনুরোধ:

ইমেল:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: প্লাস 86 15292862950


তুমি এটাও পছন্দ করতে পারো