অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এবং অ্যান্টি-এজিং সম্ভাবনা একটি পেপটাইড ফর্মুলেশন (Gal2-Pep) গ্যালিক অ্যাসিডের সাথে সংযুক্ত

ত্বক অকাল বার্ধক্যের জন্য অত্যন্ত ঝুঁকিপূর্ণবাহ্যিক চাপের কারণে, তাই, এই গবেষণায়, একটি পেপটাইড গঠন, (গ্যালয়েল)2–KTPPTTP (গাল2–পেপ) টিপিপিটিপি পেপটাইড এবং গ্যালিক একত্রিত করে সংশ্লেষিত হয়েছিলঅ্যাসিড (GA)। সমস্ত পেপটাইড সলিড-ফেজ পেপটাইড ব্যবহার করে 2-ক্লোরোট্রিটাইল ক্লোরাইড রেজিনে সংশ্লেষিত হয়েছিলসংশ্লেষণ (এসপিপিএস), এবং একটি ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন (ইএসআই)/কোয়াড্রপোল-টাইম-অফ-তে বিশ্লেষণ করা হয়েছেflflight (Q-TOF) ট্যান্ডেম ভর স্পেকট্রোস্কোপি (MS) সিস্টেম। প্রাথমিকভাবে, Gal2–পেপ ঘনত্ব 100 এর নিচে কোন বিষাক্ততা দেখায়নিmকেরাটিনোসাইটের জন্য 88 শতাংশের কোষ বেঁচে থাকার হার সহ M এবংফাইব্রোব্লাস্ট. দ্যপ্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি(ROS) গালের স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ2–পেপ একা GA এর তুলনায় আরো স্থিতিশীল ছিল; এবং চার সপ্তাহ পর রুমেতাপমাত্রা, তারROS স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ৫০ শতাংশের বেশি রয়ে গেছে। অধিকন্তু, পেপটাইড গঠন,গাল2–পেপ সিসিডি-1064স্কেতে একটি ইলাস্টেস ইনহিবিটরি প্রভাবও প্রদর্শন করেছেফাইব্রোব্লাস্টকোষ RT-qPCR এর ফলাফলের উপর ভিত্তি করে, এই গবেষণায় এটি প্রমাণিত হয়েছিল যে গাল2–পেপ PGC এর অভিব্যক্তি বাড়িয়েছে-1a প্রতিপ্রতিরোধঅক্সিডেটিভ স্ট্রেস, এবং একটি হিসাবে এর সম্ভাব্যতা যাচাই করেছেবিরোধী বার্ধক্য এজেন্টদ্বারাএর অভিব্যক্তি বৃদ্ধিটাইপ I কোলাজেনএবং দ্বারাম্যাট্রিক্স মেটালোপ্রোটিনেসের অভিব্যক্তি হ্রাস করা-1 (MMP1). দ্যফলাফল প্রাপ্ত পরামর্শকে শক্তিশালী করে যে এই গবেষণায় সংশ্লেষিত পেপটাইড ফর্মুলেশন একটি হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারেপ্রাকৃতিক অ্যান্টিঅক্সিডেন্টএবংবিরোধী বার্ধক্য এজেন্টএর প্রসাধনী অ্যাপ্লিকেশনের জন্য।

Cistanche অ্যান্টি-এজিং পণ্য সম্পর্কে আরও তথ্য পেতে এখানে ক্লিক করুন

1। পরিচিতি

চামড়া পক্বতাকেরাটিনোসাইট এবং ব্রোর কোষ বিভাজন ধীরে ধীরে হ্রাস এবং শেষ পর্যন্ত বন্ধ হওয়ার ফলে ঘটেত্বকের মধ্যে বিস্ফোরণ। কোষের সংখ্যা হ্রাসের সাথে সাথে ত্বকে বলিরেখা তৈরি হয়, যার ফলে বহির্কোষী ম্যাট্রিক্সের বিকৃতকরণের ফলে শুষ্কতা এবং ইলাসের ক্ষতি হয়ত্বকে তিক্ততা।1 ইন্ট্রাসেলুলার মাইটোকন্ড্রিয়াল ডিএনএর ক্ষতিএবং প্রোটিন সংশ্লেষণের হারও হ্রাস পায়ত্বকের বার্ধক্য প্রক্রিয়ার সময়।2 ত্বকের বার্ধক্যের দুটি প্রধান পথ রয়েছেউপায়, অভ্যন্তরীণ এবং বহির্মুখী, অতিবেগুনী (UV) এক্সপোজার সহ

একটি প্রধান ড্রাইভারবহির্মুখী বার্ধক্য. UV আলো ত্বকের প্রধান উপাদানগুলির সাথে প্রতিক্রিয়া করেলিপিড, প্রোটিন এবং নিউক্লিক অ্যাসিড সহ, প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) তৈরি করতে যা কোষের দিকে নিয়ে যায়মৃত্যু3–5 অত্যধিক ROS মাত্রা এছাড়াও ক্লিভেজ বাড়ে এবংকোলাজেন বা ইলাস্টিন চেইনের অস্বাভাবিক আবদ্ধতা এবং ম্যাট্রিক্স মেটালোপ্রোটিনেসেস (MMPs), যেমন MMP-1-এর অভিব্যক্তি প্রচার করে, যা কোলাজেনকে ভেঙে দেয়, যা ত্বকের কুঁচকে যায় এবংত্বকের বার্ধক্য ত্বরান্বিত করে।6,7 অতএব, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট থেরাপি অপসারণROS এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল সম্ভাব্য সক্রিয় করার জন্য ত্বককে বার্ধক্য থেকে রক্ষা করার যোগ্যতা রয়েছে।

ROS ছাড়াও, ইলাস্টেসের ক্ষতির একটি উল্লেখযোগ্য ভূমিকা রয়েছেত্বকের স্থিতিস্থাপকতা, যা ইলাস্টিনকে ভেঙ্গে দেয়, একটি গুরুত্বপূর্ণ প্রোটিনকোষীয় ম্যাট্রিক্স.8 ইলাস্টিন, এর উল্লেখযোগ্য ইলাস্টিক রিকোয়েলের কারণেবৈশিষ্ট্য, ত্বকে স্থিতিস্থাপকতা প্রদান করে, যেখানে ইলাস্টেস রয়েছেইলাস্টিন এবং অন্যান্য প্রোটিন বিচ্ছিন্ন করার ক্ষমতা।8 অতএব, বাধাইলাস্টেস এনজাইম এর মাধ্যমে ত্বক ঝুলে যাওয়ার জন্য একটি মূল কৌশল হতে পারে ত্বকের স্থিতিস্থাপকতা হ্রাস রোধ করা।

এই গবেষণায়, আমরা একটি নতুন উপাদান ডিজাইন করেছি যা একত্রিত করেপারক্সিসোম প্রলিফেরেটর-সক্রিয় রিসেপ্টর গামা কোঅ্যাক্টিভেটর1-আলফা (PGC-1a-প্রাপ্ত পেপটাইড TPPTTP এবং গ্যালিক অ্যাসিড (GA)অ্যান্টি-এজিং প্রসাধনী ব্যবহারের জন্য। GA হল একটি ফাইটোকেমিক্যাল যা আঙ্গুর, টমেটো এবং সবুজ চা সহ বিভিন্ন ফল ও সবজিতে পাওয়া যায়, যা উচ্চ অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এবং অ্যান্টিব্যাকটেরিয়াল বলে পরিচিত। effects9 যদিও GA প্রসাধনী এবং খাদ্য শিল্পে ব্যবহৃত হয় কারণ এই উপকারী ইffects, এর গঠন অস্থির হতে থাকে।10 আমরা এইভাবে বিকাশ করেছি (গ্যালোয়েল)2–KTPPTTP (গাল2–পেপ) GA এর স্থায়িত্ব বাড়ানোর জন্য এটিকে PGC এর সাথে আবদ্ধ করে-1aপ্রাপ্ত পেপটাইড TTPTTP।

এই গবেষণায়, আমরা একটি (গ্যালয়েল) সংশ্লেষিত করেছি2–KTPPTTP (গাল2– পেপ) গ্যালিক অ্যাসিডের সাথে সংমিশ্রণে পেপটাইড গঠন এবং নিশ্চিত করা হয়েছেএকটি অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এবং অ্যান্টিজিং এজেন্ট হিসাবে এর সম্ভাবনা।

2। সামগ্রী ও পদ্ধতি

2.1। উপকরণ

Dulbecco এর পরিবর্তিতঈগলস মিডিয়াম (DMEM), পেনিসিলিন/স্ট্রেপ্টোমাইসিন, ফেটাল বোভাইন সিরাম (FBS), ফসফেট-বুfferedস্যালাইন (পিবিএস), এবং ট্রিপসিন গিবকো (কার্লস) থেকে কেনা হয়েছিল

খারাপ, CA)। Hydroxybenzotriazole (HOBt), diisopropyl carbodiimide (DIC), 1,8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en (DBU),N, N-ডাইসোপ্রোপিলেথাইলামাইন (DIEA), গ্যালিক অ্যাসিড এবংN-সুসিনাইল-ট্রাই-অ্যালানাইল-pনাইট্রোঅ্যানিলাইড সিগমা-অলড্রিচ (সেন্ট লুইস, এমও) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল।L- ফর্ম অ্যামিনো অ্যাসিড (Fmoc-Lys (Boc)–ওহ, Fmoc-Thr (tবু)–ওহ, এবং Fmoc-Pro–ওএইচ) বিড-টেক (সিউল,) থেকে কেনা হয়েছিলকোরিয়া)।

2.2। পেপটাইড এবং গ্যালিক অ্যাসিড-কাপলড পেপটাইডের সংশ্লেষণ

সমস্ত পেপটাইড 2- ক্লোরোট্রিটাইল ক্লোরাইড রেজিনে সংশ্লেষিত হয়েছিল (200mmol স্কেল, প্রতিস্থাপন মান¼ 1.46 mmol গ্রাম 1) HOBt ব্যবহার করে–DIC মধ্যস্থতা সলিড-ফেজ পেপটাইড সংশ্লেষণ (SPPS)।

SPPS পদ্ধতি ব্যবহার করে পেপটাইড সংশ্লেষণ সামান্য মোডি দিয়ে করা হয়েছিলcations পূর্ববর্তী গবেষণার উল্লেখ করে।11–13 2-ক্লোরোট্রিটাইল ক্লোরাইড (CTC) রজন ডাইক্লোরোতে ফুলে গিয়েছিল

মিথেন (ডিসিএম, 8 মিলি) 30 মিনিটের জন্য। রজন দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিলডাইমেথাইলফর্মাইড (ডিএমএফ)। সমস্ত প্রতিক্রিয়া ঘরের তাপমাত্রায় সঞ্চালিত হয়েছিল। Fmoc সুরক্ষিত অ্যামিনো অ্যাসিড ডেরিভেটিভস (2 সমতুল্য(সমমান), জন্যfiপ্রথম সংযুক্ত অ্যামিনো অ্যাসিড বা 5 ইকুইভ।, অন্যান্য অ্যামিনো অ্যাসিডের জন্য) DMF a-তে DIEA (5 ইকুইভ, একটি অ্যাটাচড অ্যামিনো অ্যাসিডের জন্য) অথবা HOBt/DIC (6 equiv./5 equiv.) এর সাথে মিলিত হয়েছিল।ফুটerDMF-এ 2 শতাংশ (v/v) DBU ব্যবহার করে Fmoc-এর ডিপ্রোটেকশন করা হচ্ছে (2 বার, 2 মিনিটে, 8 mL)। এবং সমস্ত ধাপ 5 বার DMF দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। চূড়ান্ত গ্যালিক অ্যাসিড লাইসিন-সংযুক্ত পেপটাইডের সাথে মিলিত হয়েছিল।গ্যালিক অ্যাসিডের সংযোগের পরে, রজন ছিলaপরিস্কার করা, ধুয়ে ফেলা,এবং একটি উচ্চ ভ্যাকুয়াম অধীনে শুকিয়ে. ক্লিভেজ সমাধান (TFA:ডিওনাইজড [ডিআই] জল: টিআইএস¼ 95 : 2.5 : 2.5, v/v/v শতাংশ) 2 ঘন্টার জন্য চিকিত্সা করা হয়েছিলঅপরিশোধিত পেপটাইড প্রাপ্ত করার জন্য। অপরিশোধিত পেপটাইডগুলি প্রস্রাব করা হয়েছিল এবং ঠান্ডা ডাইথাইল ইথার দিয়ে তিনবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল।

বিশ্লেষণাত্মক বিপরীত-ফেজ উচ্চ-কর্মক্ষমতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি(RP-HPLC) একটি ওয়াটারস 2695 বিচ্ছেদের উপর পরিচালিত হয়েছিলএকটি Capcell Pak C18 কলাম সহ মডিউল (4.6 মিমি 250 মিমি, 5mমি, শিসিডো)। H-এ মোবাইল ফেজটি 0.05 শতাংশ TFA নিয়ে গঠিত2O (মোবাইল ফেজ A) এবং 0. 05 শতাংশ টিএফএ অ্যাসিটোনিট্রিলে (মোবাইল ফেজ বি)।

মোবাইলের জন্য একটি রৈখিক গ্রেডিয়েন্ট নিয়োগ করে ইলুশন অর্জন করা হয়েছিলবি ফেজ 5 শতাংশ থেকে 65 শতাংশের বেশি 30 মিনিটে aow রেট 1।{1}} mL মিনিট 1. পেপটাইড শিখরগুলি 230 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে সনাক্ত করা হয়েছিল। আধা-প্রস্তুতিমূলক RP-HPLC একটি জেমিনি RP-C18 সহ একটি ওয়াটার এইচপিএলসি সিস্টেমে (পাম্প 600E, ডিটেক্টর UV-484) পরিচালিত হয়েছিলকলাম (21.2 মিমি 250 মিমি, 5mমি, ফেনোমেনেক্স)। H-এ মোবাইল ফেজটি 0.05 শতাংশ TFA নিয়ে গঠিত2O (মোবাইল ফেজ A)এবং 0. 05 শতাংশ টিএফএ অ্যাসিটোনিট্রিলে (মোবাইল ফেজ বি)। মোবাইল ফেজ B এর জন্য একটি রৈখিক গ্রেডিয়েন্ট নিয়োগ করে ইলুশন অর্জন করা হয়েছিল7 শতাংশ থেকে 22 শতাংশ 15 মিনিটের বেশি a এlow হার 10 mL মিনিট 1. দ্যপেপটাইড শিখরগুলি 230 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে স্পেকট্রোফটোমেট্রিকভাবে সনাক্ত করা হয়েছিল।

সংশ্লেষিত পেপটাইডগুলি পানিতে 5 শতাংশ ফরমিক অ্যাসিডে দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং একটি ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন (ESI) এর উপর বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।চতুষ্পদ-সময়-এর-light (Q-TOF) ট্যান্ডেম ভর স্পেকট্রোস্কোপি(MS) সিস্টেম (TripleTOF6600, ABSciex, Foster City, CA)। নমুনাগুলি সজ্জিত Q-TOF সিস্টেমে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিলএকটি ন্যানো-স্প্রে উত্স একটিlow হার 1mL মিন 1. ইএসআই আয়নউত্স পরামিতিগুলি নিম্নরূপ ছিল: একটি আয়ন স্প্রে ভোল্টেজ 1.5 কেভি, 10 পিএসআই-এ কার্টেন গ্যাস এবং 5 পিএসআই-এ শিথ গ্যাস। মধ্যে বর্ণালীফুল-স্ক্যান মোড এবং MS/MS এর পরিসরে সংগ্রহ করা হয়েছিলm/z

100–1200 Daসংঘর্ষের শক্তি 10 থেকে 80 পর্যন্ত র‌্যাম্প করা হয়েছিল। ফলস্বরূপবিশ্লেষক টিএফ ব্যবহার করে ডেটা অর্জিত হয়েছিল তাইগুদাম এবং স্বয়ংক্রিয়ভাবেন্যূনতম শিখর সহ সেন্ট্রোয়েড 80 শতাংশ দ্বারা নির্ধারিত, 10 শতাংশের শব্দ হ্রাস, 3 শতাংশ থ্রেশহোল্ড সহ মাঝারি ডিসোটোপিং, কোন শব্দ হ্রাস এবং মসৃণতা নেই। সংশ্লেষিত পেপটাইড সনাক্ত করা হয়েছিলএকটি ভর সহনশীলতা সঙ্গে 0.05 Da এবং একটি MS/MS সহনশীলতা ব্যবহার করে ম্যানুয়ালি সিকোয়েন্স করা হয়েছে 0.01 দা.

2.3। কোষ সংস্কৃতি এবং কার্যকারিতা পরীক্ষা

মানব, প্রাপ্তবয়স্ক, কম ক্যালসিয়াম, উচ্চ তাপমাত্রা (HaCaT) কোষএবং CCD-1064Sk (সাধারণ মানুষের ত্বকফাইব্রোব্লাস্ট) কোষ ছিলDMEM-তে 10 শতাংশ FBS এবং 1 শতাংশ পেনিসিলিন/ সহ সংস্কৃতিস্ট্রেপ্টোমাইসিন। কোষগুলি 37 এ ইনকিউবেট করা হয়েছিল 5 শতাংশ CO সহ একটি আর্দ্র বায়ু চেম্বারে সি2.কার্যকারিতা পরীক্ষার জন্য, সেল কাউন্টিং কিট-8 (CCK-8, Dojindo Co. Ltd. Beijing, China) ব্যবহার করা হয়েছিল৷ HaCaT এবং CCD-1064Sk কোষ96-কূপ মাইক্রোপ্লেটে বীজ করা হয়েছিল (5 103 ভাল প্রতি কোষ) এবং 37 এ incubated 5 শতাংশ CO মধ্যে C2 24 ঘন্টার জন্য সংস্কৃতিগুলি তখন সংশ্লেষিত পেপটাইড বা GA-এর বিভিন্ন ঘনত্বের সংস্পর্শে আসে এবং 37 এ ইনকিউব করা হয়। 5 শতাংশ CO মধ্যে C2 24 ঘন্টার জন্য সেল কার্যকরতাপরবর্তীতে নির্মাতার নির্দেশিকা অনুসরণ করে একটি CCK-8 ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল।

2.4। অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ নির্ধারণ

2.4.1। DPPH পরীক্ষা।সংশ্লেষিত এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপপেপটাইড এবং জিএ ডিপিপিএইচ অ্যাস ব্যবহার করে পৃথকভাবে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। পূর্বে রিপোর্ট করা অনুসরণ করে DPPH অ্যাসেস করা হয়েছিল

নাবালক মোদির সাথে পদ্ধতিcation12,14–16 প্রথমে, একটি 0.12 মিলিগ্রাম এমএল 1 ডিপিপিএইচ দ্রবণটি মিথানলে প্রস্তুত করা হয়েছিল, তখন 100mDPPH দ্রবণের L এবং 100mসংশ্লেষিত পেপটাইডগুলির L বা GA বিভিন্ন ঘনত্বে মিশ্রিত হয়েছিল ({{0}}.1 মিমি, 0.05 মিমি, 0.01 মিমি, এবং 1mM) ভাল মাইক্রোপ্লেটে 96- একটি অরবিটাল কাঁপানো ইনকিউবেটরে,মিশ্রণগুলি 37 এ 30 মিনিটের জন্য প্রতিক্রিয়া জানানো হয়েছিল সি এবং 100 আরপিএম ছাড়াআলো. শোষণটি তখন 517 এনএম পরিমাপ করা হয়েছিল এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা গণনা করা হয়েছিল।

2.4.2। ROS স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ।

অন্তঃকোষীয় ROS স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ একটি 20,70-ডিক্লোরোফ্লুরেসসিন ডায়াসেটেট কিট ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল(DCF-DA, Abcam, USA)। HaCaT কোষগুলিকে 96-কূপ মাইক্রোপ্লেটে (5 103 ভাল প্রতি কোষ) এবং 37 এ incubated 24 ঘন্টার জন্য গ.Aফুটইনকিউবেশনের সময়, সংস্কৃতিগুলি সংশ্লেষিত পেপটাইড বা GA (100) এর সংস্পর্শে এসেছিলmM) এবং 37 এ incubated 24 ঘন্টার জন্য গ. কোষগুলি তখন 10-এর সংস্পর্শে আসেmএম DCF-DA দ্রবণ এবং 30 মিনিটের জন্য incubated. কফুটএর ইনকিউবেশন, সমাধানটি পিবিএস দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। দ্যকোষগুলি উত্তেজনায় মাইক্রোপ্লেট রিডার ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং

নির্গমন তরঙ্গদৈর্ঘ্য যথাক্রমে 485 nm এবং 530 nm।

আকার 1কোয়াড্রপোল-টাইম অফ ব্যবহার করে পেপটাইডের সিন্থেটিক ধাপ এবং ক্রম নিশ্চিতকরণফ্লাইট(Q-TOF) ভর স্পেকট্রোমেট্রি: (a) বিস্তারিত সিন্থেটিক পদ্ধতি (b) TPPTTP, (c) গ্যালয়েল–TPPTTP, এবং (d) (গ্যালয়েল)2–কেটিপিটিটিপিটিপি।

2.5। মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন সম্ভাব্য পরীক্ষা

JC-1 ডাই (থার্মো ফিশার, ইউএসএ) মাইটোকন্ড্রিয়ালের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিলমেমব্রেন পটেনশিয়াল (MmP) অ্যাস। CCD-1064Sk এবং HaCaT কোষগুলিকে 96-ওয়েল মাইক্রোপ্লেটে বীজ করা হয়েছিল (5 10 3কূপ প্রতি কোষ)

এবং 37 এ incubated সি এবং 5 শতাংশ CO2 24 ঘন্টার জন্য আফ্টএর ইনকিউবেশন,সংস্কৃতিগুলি সংশ্লেষিত পেপটাইডের বিভিন্ন ঘনত্বের সংস্পর্শে এসেছিল এবং 37-এ ইনকিউব করা হয়েছিল 5 শতাংশ CO মধ্যে C2 24 ঘন্টার জন্যJC-1 ডাই CCD-1064Sk এবং HaCaT কোষে যোগ করা হয়েছিলউত্পাদন একটি 10 এর চূড়ান্ত ঘনত্বmM. Aফুটইনকিউবেশনের 10 মিনিটের মধ্যে, কোষগুলি 37 দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল সি পিবিএস। সবুজ এবং লালফ্লুরোসেন্সএকটি Varioskan LUX ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিলমাল্টিমোড মাইক্রোপ্লেট রিডার (ThermoFisher, USA) একটি exci এটেনশন (lযেমন)/নিঃসরণ (lএম) এর 475/530 nm এবং কlযেমন/lএম475/ এরযথাক্রমে 590 এনএম।

2.6। ইলাস্টেস ইনহিবিটরি অ্যাকটিভিটি অ্যাস

সিসিডি-1064এসকে কোষগুলিকে 6-কূপ প্লেটে বীজ করা হয়েছিল এবং 37 এ ইনকিউব করা হয়েছিল 5 শতাংশ CO মধ্যে C2 24 ঘন্টার জন্য সংস্কৃতিগুলি তখন 100 এর ঘনত্বে উন্মুক্ত হয়েছিলmসংশ্লেষিত পেপটাইড বা GA এর M এবং 37 এ incubated 5 শতাংশ CO মধ্যে C2 24 ঘন্টার জন্য কোষগুলি দুবার ডিপিবিএস দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং আমরা সেল স্ক্র্যাপার ব্যবহার করে প্রতিটি কোষ সংগ্রহ করেছি। কer যোগ করা হচ্ছে 0.2 M Tris–HCl (pH 8.0) সংগৃহীত 0.1 শতাংশ Triton-X সহকোষ, কোষ ultrasonicator দ্বারা সমজাতীয় করা হয়েছে. সমজাতীয় দ্রবণটি 3000 rpm এ 20 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিলএবং 4 গ. তারপর, কফুটer supernatant গ্রহণ, প্রোটিন পরিমাণ-Cation বিসিএ প্রোটিন অ্যাস ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়েছিল। প্রতিটি জন্য প্রোটিননমুনা এ বিতরণ করা হয়fi100 এর nal ঘনত্বmজিএমএল 1, এবংN-সুসিনাইল-ট্রাই-অ্যালানাইল-p-এ নাইট্রোঅ্যানিলাইড যোগ করা হয়েছিলচূড়ান্ত ঘনত্ব 1.6 মিমি এবং প্রতিক্রিয়া 36 এ 1 ঘন্টার জন্য গ.তারপরে, একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার ব্যবহার করে শোষণটি 405 এনএম পরিমাপ করা হয়েছিল।

2.7। RT-qPCR

CCK-1064Sk কোষে অ্যান্টি-এজিং মার্কারগুলির mRNA স্তরRT-qPCR ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। মোট আরএনএ TRIzol রিএজেন্ট (লাইফ টেকনোলজিস, কার্লসবাদ, CA) এবং বিপরীত ব্যবহার করে সংগ্রহ করা হয়েছিল

প্রাইমস্ক্রিপ্ট আরটি রিএজেন্ট কিট ব্যবহার করে প্রতিলিপি করা হয়েছে (টাকারা বায়োInc., Kusatsu, জাপান)। একটি CFX96 সিস্টেম (বায়ো-রাড ল্যাবরেটরিজ, হারকিউলিস, CA) এবং iQ SYBR গ্রীন সুপারমিক্স (বায়ো-র্যাড ল্যাবোরা)

tories) RT-qPCR এর জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল।b-অ্যাক্টিন টাইপ I কোলাজেন, MMP-1, এবং PGC-1 এর mRNA স্তরগুলিকে স্বাভাবিক করতে ব্যবহৃত হয়েছিলa. 

2.8। পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

 তথ্য গড় হিসাবে উপস্থাপন করা হয় থেকে আদর্শ বিচ্যুতিছাত্রদের ব্যবহার করে তিনটি স্বাধীন পরিমাপ এবং বিশ্লেষণ করা হয়েছেt-পরীক্ষা, একটি সহp < 0.05 considered to be a signiপার্থক্য করতে পারে না।

আরো জন্য অনুরোধ:

ইমেল:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: প্লাস 86 15292862950