সিস্তানচে টিউবুলোসায় সেনেসেন্সের একটি ননইনভেসিভ বায়োমার্কার এবং অ্যাডভান্সড গ্লাইকেশন এন্ড প্রোডাক্ট হিসেবে অটোফ্লুরেসেন্স

আলোচনা

পূর্বে, অটোফ্লোরোসেন্স লিপোফুসিন, বয়সের রঙ্গক, বায়োমার্কার বা বায়োমার্কার হিসাবে নিরীক্ষণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল4,13. যদিও আমরা লাল পর্যবেক্ষণ করেছিflপূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে লিপোফুসিনের ইউরোসেন্স নির্দেশক9, নীলflএকটি M165 FC ব্যবহার করে কৃমি পরীক্ষা করার সময় জীবনের প্রথম পর্যায়ে ইউরোসেন্স সনাক্ত করা হয়েছিলfluorescence stereomicroscope (Leica Microsystems, Tokyo, Japan) (ডেটা দেখানো হয়নি)। বর্তমান অধ্যয়নের উদ্দেশ্য ছিল স্বতন্ত্র কৃমির সেন্সেন্স ট্রেসিংয়ের জন্য নীল অটোফ্লোরোসেন্স আরও সংবেদনশীল মার্কার হিসাবে কাজ করতে পারে কিনা তা পরীক্ষা করা।

anti- senescence cistanche function

জন্য Cistancheবার্ধক্য বিরোধী

অ্যান্টি-এজিং সিস্টানচে পণ্য পাঠানোর জন্য প্রস্তুত

দ্যflপৃথক কৃমিতে পরিমাপ করা ইউরোসেন্স বয়সের সাথে বৃদ্ধি পায়; কম কৃমিfluoresced, দীর্ঘ তাদের আয়ু. এইভাবে, নীলflইউরোসেন্স সেন্সেসেন্স ট্রেস করার জন্য একটি বিকল্প বায়োমার্কার প্রদান করতে পারে। যাইহোক, পিঙ্কাস এট আল। রিপোর্ট করেছে যে কীটগুলি পরবর্তীতে মারা যায় (24 ঘন্টার মধ্যে)flkynurenine এর জৈব সংশ্লেষণের কারণে uoresced; গবেষকরা এই নীল আলোর নাম দিয়েছেন"মৃত্যুfluorescence". জানা গেছে, মৃত্যুfluorescence reflকাইনুরেনাইন পাথওয়ে দ্বারা উত্পাদিত অ্যান্থ্রানিলিক অ্যাসিডের গ্লাইকোসিলেটেড ফর্ম দ্বারা ects নির্গমন; স্বয়ংক্রিয়flলাইসোসোম-সদৃশ অন্ত্রের দানাগুলিতে ইউরেসিং উপাদান সনাক্ত করা হয়31. এই নীল আলো একই মৃত্যু চিহ্নিতকারী হতে পারে যে Coburn et al. মধ্যে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছেগ. এলিগানসমৃত্যুর আগে এবং পরে কয়েক ঘন্টা ধরে, এবং এটি মারাত্মক আঘাতের শিকার এবং বার্ধক্যে স্বাভাবিকভাবে মারা যাওয়া কৃমি উভয়েই দেখা গেছে। প্রকৃতপক্ষে, আমরা লক্ষ্য করেছি যেসদয়-1মিউট্যান্ট, যার মধ্যে কাইনুরেনিনেস কার্যকলাপের অভাব রয়েছে, তা বন্য-প্রকারের চেয়ে কম অটোফ্লোরসেন্ট ছিল। যাইহোক, আমাদের ফলাফল ইঙ্গিত যে নীল কিছু অংশflউওরেসেন্স মৃত্যুর সাথে নয় বরং বার্ধক্যের সাথে জড়িত। উল্লেখযোগ্যভাবে, চিত্রে দেখানো হয়েছে।3খ, বার্ধক্যের কৃমি বর্ধিত নীল দেখায়flমৃত্যুর আগের 2 দিনের মধ্যে প্রাপ্ত ডেটা বাদ দিলেও ইউরোসেন্স। উপরন্তু, কৃমি এখনওflবার্ধক্যের সাথে আরও বেশি উওরেসড, নির্বিশেষে রাষ্ট্রের অবস্থাকিনু-1জিন হ্রাস করা হয়েছেflমধ্যে uorescenceকিনু-1মিউট্যান্ট এইভাবে ক্ষতির কারণে হওয়া উচিতমৃত্যুর অভাবের পরিবর্তে kynurenines দ্বারা AGE সংশ্লেষণের ত্বরণfluorescence32.

নির্দিষ্ট AGE যৌগ হলflইউরোসেন্ট27. আমরা অনুমান করেছি যে নীলfluorescence সেই AGE থেকে নির্গমনকে অন্তর্ভুক্ত করতে পারে, যা মৃত্যুর জন্য দায়ী থেকে আলাদাfluorescence যখন নিষ্কাশিত কৃমি প্রোটিনগুলি ভিট্রোতে শর্করার সাথে ইনকিউবেট করা হয়, তখনflইউরোসেন্সের তীব্রতা এবং AGE-এর মাত্রা সময়ের সাথে বেড়েছে। রাইবোজ ধারণকারী একটি মাধ্যমে চাষ করা কৃমিflপরিপূরক রাইবোজের অনুপস্থিতিতে নিয়ন্ত্রিত প্রাণীর চেয়ে বেশি uoresced হয়, এমনকি যখনকিনু-1পরিবর্তিত ছিল। বিপরীতে, রিফাম্পিসিনের উপস্থিতিতে সংষ্কৃত কৃমি, AGEs উৎপাদনের একটি পরিচিত প্রতিরোধক, নীল রঙের মাত্রা হ্রাস পেয়েছে।fluorescence প্রকৃতপক্ষে, ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি নির্দেশ করে যে 13-দিন-বয়সী কৃমিগুলি 3-দিন বয়সী তরুণ প্রাপ্তবয়স্কদের চেয়ে বেশি নীল আলো নির্গত করে৷ অ্যান্টি-সিএমএল বা অ্যান্টি-পেন্টোসিডিন অ্যান্টিবডিগুলির সাথে ইমিউনোস্টেইনিং নীল রঙের অনুরূপ বিতরণ প্যাটার্নে ছড়িয়ে পড়া AGE-এর উপস্থিতি দেখাতে ব্যর্থ হয়েছে।fluorescence দ্যfluorescence অন্যান্য প্রচুর থেকে উদ্ভূত হতে পারেflইউরোসেন্ট AGE যেমন ভেসপারটাইন A, LM-1, এবং argpyrimidine33,34.

oocysts জন্য কুসুম প্রদান করতে,গ. এলিগানসহার্মাফ্রোডাইটরা তাদের নিজস্ব অন্ত্রের বায়োমাস গ্রাস করে, যার ফলে পরবর্তী জীবনে অন্ত্রের অ্যাট্রোফি এবং একটোপিক কুসুম জমা হয়। ভিটেলোজেনিন (কুসুম প্রোটিন) পুরানো কৃমিতে (অল্পবয়সী প্রাণীদের তুলনায়) দ্বিগুণ উচ্চ স্তরে উপস্থিত ছিল, যেমনটি আগে রিপোর্ট করা হয়েছিল35, এবং ছয় গুণ বেশি প্রদর্শিতflভিট্রোতে গ্লাইকেশনের পরে ইউরোসেন্স। এই তথ্যগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে ভিটেলোজেনিনগুলি নিজেরাই 12-গুণ বৃদ্ধি পাবে৷flতাত্ত্বিকভাবে তরুণ প্রাপ্তবয়স্কদের তুলনায় বয়স্ক কৃমিতে ইউরোসেন্স। ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দেখায় যে প্রধান ব্যান্ডগুলি অ্যান্টি-সিএমএল অ্যান্টিবডির সাথে প্রতিক্রিয়া করে কুসুম প্রোটিন। এই অনুসন্ধানটি নাকামুরা এট আল. এর পূর্ববর্তী প্রতিবেদনের সাথে মেলে, যিনি ভিটেলোজেনিনের ভারী গ্লাইকেশন সনাক্ত করেছিলেন36, এবং গোলেগাঁওকর এট আল., যিনি রিফাম্পিসিন-চিকিত্সা করা নেমাটোডে ভিটেলোজেনিন-2, ভিটেলোজেনিন-6 এবং প্রসারণ ফ্যাক্টর 1 আলফাতে গ্লাইকেশন হ্রাস সনাক্ত করেছেন30. রিপোর্ট অনুযায়ী, ভিটেলোজেনিন অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট হিসেবে কাজ করে এবং মধু মৌমাছির রাণীদের দীর্ঘায়ুতে অবদান রাখে37. ভিতরেগ. এলিগানস, ভিটেলোজেনিনগুলি স্ট্রেস প্রতিরোধে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে 38. যেহেতু অ্যান্টিঅক্সিডেন্টগুলি সহজেই নিজেরাই অক্সিডাইজ করা যায়, তাই গ্লাইকেটেড ভিটেলোজেনিন জমা হওয়া অক্সিডেটিভ ক্ষতি থেকে সুরক্ষা নষ্ট করতে পারে, যার ফলে আয়ু এবং নীলের তীব্রতার মধ্যে বিপরীত সম্পর্ক তৈরি হয়।flবর্তমান গবেষণায় দেখা গেছে ইউরোসেন্স। যাইহোক, Sornda et al. সম্প্রতি রিপোর্ট করা হয়েছে যে আয়ুষ্কাল YP115/YP88 (ভিটেলোজেনিন-6) দ্বারা মধ্যস্থতা করা অক্সিডেটিভ স্ট্রেস প্রতিরোধের সাথে সম্পর্কিত নয়39. সেই গবেষকরা প্রস্তাব করেছিলেন যে ভিটেলোজেনিন YP170 এর সঞ্চয়, ভিটেলোজেনিন 1 থেকে উদ্ভূত–5, অন্ত্রের অ্যাট্রোফির কারণ হয় এবং আয়ুষ্কাল হ্রাস পায়, যখন YP115/YP88 জমা হওয়ার ফলে অন্ত্রের অ্যাট্রোফি বন্ধ হয়ে যেতে পারে এবং আয়ু বাড়াতে পারে। ভিটেলোজেনিনের গ্লাইকেশন-6 এবং ফলস্বরূপ কর্মহীনতা সেন্সেন্সে অবদান রাখতে পারে। যদিও প্রসারণ কারণflইন ভিট্রো গ্লাইকেশনের পরে তিনগুণ বেশি তীব্রভাবে উওরেসেস করা হয়, এই প্রোটিনের পরিমাণ তরুণ এবং বৃদ্ধ কৃমির মধ্যে একই রকম ছিল। অতএব, বর্ধিত অটোফ্লোরোসেন্সে এই ফ্যাক্টরের অবদান ভিটেলোজেনিনগুলির জন্য দায়ী এর চেয়ে ছোট হতে পারে।

anti- senescence cistanche function

সিস্তানচেএকটি মডেল হিসাবে সাধারণত ব্যবহার করা হয়েছেঅধ্যয়নসেন্সেন্স এবং অ্যান্টি-সেনেসেন্স হস্তক্ষেপ. আমরা দীর্ঘায়ুত্বের প্রভাবগুলি তদন্ত করতে মডেল হিসাবে কীটটির ব্যবহারের প্রস্তাব করেছিল্যাকটিক অ্যাসিড ব্যাকটেরিয়া8. প্রদত্ত (বর্তমান গবেষণায়) যে নীলflনেমাটোডের ইউরোসেন্স হল AGEs সঞ্চয়ের সম্ভাব্য সূচক, আমরা প্রস্তাব করি যেসিস্তানচে হার্মাফ্রোডাইটরা অ্যান্টি-সেনেসেন্স হস্তক্ষেপের ইউটিলিটি তদন্তের জন্য একটি মডেল হিসাবে কাজ করতে পারে যা AGEs উত্পাদন দমনের মাধ্যমে কাজ করে। বিপরীতে, অটোফ্লোরোসেন্স পুরুষ কৃমির জন্য বায়োমার্কার হওয়ার সম্ভাবনা কম কারণ ভিটেলোজেনিন অবশ্যই দুষ্প্রাপ্য।

anti- senescence cistanche function

চিত্র 5 কাইনু-1 মিউট্যান্ট থেকে নীল ফ্লুরোসেন্স, যা ডেথ ফ্লুরোসেন্স নির্গত করা উচিত নয়। কফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা (যেমন 340/em 430) 7-দিন-পুরোনো এবং 13-দিন-পুরোনোকিনু-1মিউট্যান্টস (n = 37 প্রতিটি); পুরানো কৃমি এখনও বেশি নির্গত হয়flকনিষ্ঠ কৃমি তুলনায় uorescence, সত্ত্বেওকিনু-1মিউটেশন যাইহোক, কোন লক্ষণ নেইfifiমান দ্বারা অটোফ্লুরোসেন্স মানগুলিতে ক্যান্ট পার্থক্য সনাক্ত করা হয়েছিল–হুইটনিU পরীক্ষাb রাইবোজ দিয়ে রক্ষণাবেক্ষণ করা একটি 7-দিনের কীট বেশি নীল নির্গত করেflসত্বেও uorescenceসদয়-1মিউটেশন নীলflএর uorescenceগ. এলিগানসরাইবোজ দিয়ে জন্মানো (n = 24) বা সরবিটল (n = 18) শর্করা ছাড়া নিয়ন্ত্রণ কৃমির সাথে তুলনা করা হয়েছিল (n = 20)। অটোফ্লোরোসেন্স মানগুলি ননপ্যারামেট্রিক স্টিল ব্যবহার করে তুলনা করা হয়েছিল–ডোয়াস পদ্ধতি (**p < 0.01). c এর সারভাইভাল কার্ভগ. এলিগানসরাইবোজ দিয়ে জন্মানো (n = 62) বা সরবিটল (n = 84) শর্করা ছাড়া নিয়ন্ত্রণ কৃমির সাথে তুলনা করা হয়েছিল (n = 64)। 0 দিনে কৃমির বয়স ছিল ৩ দিন। নেমাটোডের বেঁচে থাকা ক্যাপলান দ্বারা গণনা করা হয়েছিল–লগ-র্যাঙ্ক পরীক্ষা (**p < 0.01).

পদ্ধতি

নেমাটোডসিস্তানচে ব্রিস্টল স্ট্রেন N2 এবং এর ডেরিভেটিভ মিউট্যান্ট স্ট্রেন দয়া করে মিনেসোটা বিশ্ববিদ্যালয়ের ক্যানোরহাবডিটিস জেনেটিক্স সেন্টার দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল। এই গবেষণায় ব্যবহৃত মিউটেশনগুলি ছিল CB1370daf-2 (e1370)এবং CB1003kynu-1 (e1003). এনজিএম-এ নেমাটোডগুলি রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল এবং স্ট্যান্ডার্ড কৌশল 40 অনুসারে প্রচার করা হয়েছিল। পূর্বে বর্ণিত সোডিয়াম হাইপোক্লোরাইট/সোডিয়াম হাইড্রোক্সাইড দ্রবণের সংস্পর্শে আসার পরে প্রাপ্তবয়স্ক কৃমি থেকে কৃমির ডিম উদ্ধার করা হয়েছিল 41. ডিমের সাসপেনশনগুলি 25 ডিগ্রীতে রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল যাতে হ্যাচিং এবং সাসপেনশন হয়। L1- পর্যায়ের কৃমিগুলিকে 156 × সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিলg 1 মিনিটের জন্য সুপারনাট্যান্ট অপসারণ করা হয়েছিল, এবং অবশিষ্ট লার্ভাগুলিকে আচ্ছাদিত তাজা পেপটোন-মুক্ত পরিবর্তিত NGM (mNGM) প্লেটে স্থানান্তরিত করা হয়েছিল।ই কোলাইস্ট্রেন OP50 (OP50)। এমএনজিএম আগর প্লেটে 25 ডিগ্রীতে স্ট্রেন বাদেড্যাফ-2স্ট্রেন, যা L4 পর্যায় পর্যন্ত 20 ডিগ্রীতে উত্থিত হয়েছিল। সমস্ত অ্যাসগুলি অল্প বয়স্ক কৃমি দিয়ে শুরু হয়েছিল যা 25 ডিগ্রিতে ডিম দিতে শুরু করেছিল। নেমাটোডগুলির জন্য কোনও নৈতিক অনুমোদনের প্রয়োজন ছিল না।ব্যাকটেরিয়া স্ট্রেনOP50 আন্তর্জাতিকভাবে প্রতিষ্ঠিত নেমাটোডের খাদ্য হিসেবে ব্যবহৃত হত। ট্রাইপটোন সয়া আগর (নিসুই ফার্মাসিউটিক্যাল, টোকিও, জাপান) OP50 সংস্কৃতিতে ব্যবহৃত হয়েছিল। ব্যাকটেরিয়া (100 মিলিগ্রাম ভেজা ওজন) M9 বাফারের 0.5 মিলিতে স্থগিত করা হয়েছিল; ব্যাকটেরিয়া সাসপেনশনের একটি 50-µL অ্যালিকোট তখন mNGM-এ 5-এ ছড়িয়ে দেওয়া হয়েছিল৷{8}}সেমি-ব্যাস প্লেট যদি না অন্যথায় বলা হয়৷

anti- senescence cistanche function

অটোফ্লোরেসেন্সের মাল্টিভেরিয়েট বিশ্লেষণ

100 জন প্রাপ্তবয়স্কের জনসংখ্যা 3 এবং 17 দিন বয়সে পুনরুদ্ধার করা হয়েছিল,তিনবার ধুয়ে, M9 বাফারের 3 µL মধ্যে ঘনীভূত, এবং হিমায়িত সংরক্ষণ করা হয়এ–ব্যবহার না হওয়া পর্যন্ত 80 ডিগ্রি। নিষ্কাশনের আগে, 3 μL লাইসিস বাফার (এর মধ্যে রয়েছে50 mM Tris-HCl বাফার (pH 7.5), 150 mM NaCl, 0.1 শতাংশ সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট(SDS), 1 শতাংশ ট্রাইটন X-100, 1 মিমি ফিনাইলমেথাইলসালফোনাইলfluoride (PMSF), এবং

2 শতাংশ 2-mercaptoethanol) এবং 4 µL 15 শতাংশ SDS প্রতিটি টিউবে বিতরণ করা হয়েছিল। এরপর নমুনা নেওয়া হয়fiপ্রোটিন নিঃসরণ করতে হিমায়িত-গলে যাওয়া চক্র। ফটোলুমিনেসেন্ট স্পেকট্রা একটি দিয়ে সংগ্রহ করা হয়েছিলfluorescenceস্পেকট্রোফটোমিটার (হিটাচি FL{{0}}) ডেটা ইন্টারপ্রেটিং সফ্টওয়্যার সহ (FL সলিউশন সংস্করণ 2.0)। নিমাটোড সাসপেনশনের ফ্লুরোসেন্স বৈশিষ্ট্য ছিল

একটি উত্তেজনা-নির্গমন ম্যাট্রিক্স (EEM) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছেflইউরোসেন্স স্পেকট্রোস্কোপি. মাল্টিভারিয়েট বিশ্লেষণ (একাধিক সহ একক-তরঙ্গদৈর্ঘ্য উত্তেজনাতরঙ্গদৈর্ঘ্য নির্গমন, এবং সিঙ্ক্রোনাস-স্ক্যানিংflইউরোমেট্রি) একক-স্ক্যান উত্তেজনা সমন্বিত EEM প্লট, এবং সিঙ্ক্রোনাসফ্লুরোসেন্সপ্রতিটি সিরিজের বর্ণালী আঁকা হয়েছে।

বার্ধক্যজনিত কৃমির ফ্লুরোসেন্স স্পেকট্রা

কৃমি (3–13 দিন বয়সী) 2 সমন্বিত একটি বৃদ্ধির মাধ্যম থেকে উদ্ধার করা হয়েছিল'-ডিঅক্সি-5-fluorouridine (টোকিও কেমিক্যাল ইন্ডাস্ট্রি, টোকিও, জাপান)। এইযৌগ সন্তানের ভ্রূণ বিকাশকে বাধা দেয়, যার ফলে বংশের দ্বারা দূষিত হওয়া রোধ করে। ব্যক্তিগত বার্ধক্য কৃমি সংগ্রহ করা হয়েছিলটিউব, ধুয়েপাঁচবার, M9 বাফারের 3 µL মধ্যে ঘনীভূত, এবং হিমায়িত এ সংরক্ষিত–ব্যবহার না হওয়া পর্যন্ত 80 ডিগ্রি। নিষ্কাশনের আগে, 100 μL লিসিস বাফার(50 mM Tris-HCl বাফার (pH 7.5), 150 mM NaCl, 10 mM dithiothreitol (DTT), 1 mM PMSF, এবং 1 μL প্রোটিজ ইনহিবিটর ককটেল (সিগমা, সেন্ট লুইস, MO, USA) যুক্ত করা হয়েছে) প্রতিটি টিউব। তারপরে একটি মিনি কর্ডলেস গ্রাইন্ডার (ফুনাকোশি, টোকিও, জাপান) ব্যবহার করে নমুনাগুলি ছেড়ে দেওয়া হয়েছিল।

প্রোটিন পিয়ার্স ব্যবহার করে প্রোটিনের সামগ্রী পরিমাণগতভাবে পরিমাপ করা হয়েছিল™ 660 এনএম প্রোটিন অ্যাস রিএজেন্ট (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক মেরিডিয়ান,Waltham, MA, USA) এবং একটি NanoDrop OneC যন্ত্র (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) দ্যফ্লুরোসেন্সপ্রতিটি 30-µL নমুনার জন্য বর্ণালী নির্ধারণ করা হয়েছিল (১.৫ রয়েছেμমোট প্রোটিনের g) একটি মাল্টিমোড গ্রেটিং ব্যবহার করে

মাইক্রোপ্লেট রিডার মডেল SH-9000SF6 ডেটা ট্রিটমেন্ট সফ্টওয়্যার সহ ল্যাব৷(করোনা ইলেকট্রিক, ইবারাকি, জাপান)। প্রতিটি পরিমাপ তিনবার করা হয়েছিল।

পৃথক জীবন্ত কৃমির অটোফ্লোরোসেন্স পরিমাপ (র্যাপ-ড্রপ পদ্ধতি)

এলোমেলোভাবে নির্বাচিত কীটগুলি M9 বাফার দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং তারপরেপৃথক কৃমি 1টিতে স্থাপন করা হয়েছিল।film (আসাহি কাসেই, টোকিও, জাপান) একটি 384-কূপ কালো প্লেটের উপর প্রসারিত(STEM, টোকিও, জাপান)। ক ব্যবহার করে প্রতিটি কূপের উপর ছোট ছোট ফাঁপা তৈরি করা হয়েছিলপ্রতিলিপিকারী (ওয়াটসন, কোবে, জাপান)। এই পরিবর্তনটি ছিল পরিমাপের পরে নিরাপদে কৃমি পুনরুদ্ধার করা যাতে প্রতিটি কৃমির অটোফ্লোরোসেন্সের বয়স-নির্ভর পরিবর্তন সনাক্ত করা যায়। আঁকড়ে থাকাfilm বেছে নেওয়া হয়েছিল কারণ এটি বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ অন্যান্য তুলনায় স্বয়ংক্রিয়ভাবে ফ্লুরোসেস করা হয়েছেfilms

যাইহোক, ফাঁকা (শুধুমাত্র M9 বাফার) ডেটা তিনবার পরীক্ষা করা হয়েছিলপ্রতিটি ভাল, বিবেচনাওঠানামাভাল থেকে ভাল ন্যূনতম সনাক্তকরণ সীমা এবং পরিমাপযোগ্য সীমা প্রতিটি দিনে ফাঁকা ডেটার ভিত্তিতে নির্ধারিত হয়েছিলμ (খালির অর্থ)প্লাস3.29σ (মানক বিচ্যুতি) এবংμপ্লাস√2 × 10σ, যথাক্রমে। প্রতিটি কৃমির শরীরে অটোফ্লুরেসেন্স

একটি মাল্টিমোড গ্রেটিং মাইক্রোপ্লেট রিডার দিয়ে বন্দী করা হয়েছিল। পরেপরিমাপ, প্রতিটি কীট পৃথকভাবে একটি 4৷{1}}সেমিOP50 দিয়ে আচ্ছাদিত ব্যাস প্লেট (2 mg/10μL M9 বাফার) 25 ডিগ্রীতে। প্রতিটিপরীক্ষাটি ন্যূনতম 20টি কৃমির উপর করা হয়েছিল এবং দুবার পুনরাবৃত্তি হয়েছিল।

আয়ুষ্কাল পরিমাপ

13 দিন বয়স পর্যন্ত 25 ডিগ্রিতে OP50 দিয়ে আচ্ছাদিত mNGM প্লেটে কৃমি বজায় রাখা হয়েছিল। দ্বারা মূল্যায়ন পরেফ্লুরোসেন্সপরীক্ষা, 30 কৃমি প্রতিটি ছিলOP50 দিয়ে আচ্ছাদিত পৃথক নতুন mNGM প্লেটের দিকে সরানো হয়েছে। প্লেটগুলি 25 ডিগ্রিতে ইনকিউবেট করা হয়েছিল এবং প্রতি 24 ঘন্টায় জীবিত এবং মৃত কীটগুলি স্কোর করা হয়েছিল। একটি কৃমি যখন একটি কৃমি বাছাইকারীর সাথে মৃদু স্পর্শে সাড়া দিতে ব্যর্থ হয় তখন তাকে মৃত বলে মনে করা হত।

anti- senescence cistanche function

ইন ভিট্রো গ্লাইকেশনের পরে AGE

প্রোটিন নিষ্কাশন পূর্বে বর্ণিত হিসাবে সঞ্চালিত হয়েছিল। কৃত্রিম গ্লাইকেশনের জন্য তিন দিন বয়সী কৃমি ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রোটিনের নমুনা (2 মিলিগ্রাম/মিলি)500 মিমি গ্লুকোজ, 100 মিমি রাইবোজ, বা 500 মিমি ফ্রুক্টোজ দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল(final ঘনত্ব)। সমস্ত নমুনা 0 এর জন্য 37 ডিগ্রীতে ইনকিউব করা হয়েছিল–4 সপ্তাহ. Aliquots (50μL) একটি পলিস্টাইরিন প্লেটের কূপে বিতরণ করা হয়েছিল

(সুমিতোমো বেকেলাইট, টোকিও, জাপান) এবং 37 ডিগ্রীতে 2 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়। পরেনমুনা সমাধান অপসারণ, প্লেট PBS-T দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল(ফসফেট-বাফার স্যালাইন (PBS), 0.05 শতাংশ টুইন 20); 250μ3 শতাংশ স্কিম দুধের এলপ্রতিটি কূপে যোগ করা হয়েছিল, এবং প্লেটটি 37 ডিগ্রিতে 2 ঘন্টার জন্য incubated ছিল। প্রতিটিভাল তারপর পিবিএস-টি, এবং 100 দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিলμএকটি অ্যান্টি-AGE (এন্টি-সিএমএল) এর L

মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি (ক্লোন নং 6D12, ট্রান্স জেনিক, ফুকুওকা, জাপান; 75 এনজি/mL) প্রতিটি কূপে বিতরণ করা হয়েছিল; প্লেট তারপর রুমে incubated ছিল1 ঘন্টার জন্য তাপমাত্রা। PBS-T, 100 দিয়ে ধোয়ার পরμএকটি peroxidase-সংযুক্ত Lছাগল এন্টি-মাউস আইজিজি অ্যান্টিবডি (রকল্যান্ড ইমিউনোকেমিক্যালস, ইনক।, লিমেরিক, পিএ, ইউএসএ; 1:150,000) প্রতিটি কূপে বিতরণ করা হয়েছিল, এবং

প্লেটটি ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য incubated ছিল। PBS-T, 100 দিয়ে ধোয়ার পরμএকটি কার্যকরী দ্রবণের এল (টেট্রামেথাইলবেনজিডাইন (টিএমবি) স্টেনিং দ্রবণ: পারক্সাইড দ্রবণ= 1:1; এলিসা পড সাবস্ট্রেট টিএমবি কিট, জনপ্রিয়,নাকালাই টেস্ক, কিয়োটো, জাপান) প্রতিটি কূপে বিতরণ করা হয়েছিল এবং প্লেটটি অন্ধকারে ঘরের তাপমাত্রায় রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল

100 এর সংযোজনμকূপ প্রতি 1 mol/L সালফিউরিক অ্যাসিডের L. প্রতিটি শোষণভালভাবে 450 nm (সাব: 650 nm) তারপর একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার দিয়ে অবিলম্বে পরিমাপ করা হয়েছিল। ELISA পরীক্ষার প্রতিটি শর্তের জন্য তিনবার সঞ্চালিত হয়েছিল।

বার্ধক্য কৃমি জন্য পশ্চিমী blotting

নমুনাগুলি 4× বোল্ট দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল™ এলডিএস নমুনা বাফার (থার্মো ফিশার সায়েন্টিfifiগ) এবং 10× বোল্ট™ নমুনা হ্রাসকারী এজেন্ট (থার্মো ফিশার সায়েন্টিfifiগ), এবং প্রতিটি নমুনায় 1.5μমোট প্রোটিনের গ্রাম একটি বোল্টে চালানো হয়েছিল™ 4–12 শতাংশ বিস-ট্রিস প্লাস জেল (থার্মো ফিশার সায়েন্টিfifiগ)। তারপরে প্রোটিনগুলি জেল থেকে একটি পলিভিনিলাইডেনে স্থানান্তরিত হয়েছিলflইউওরাইড মেমব্রেন (ATTO, টোকিও, জাপান) এবং পিবিএসে 5 শতাংশ স্কিম মিল্ক দিয়ে ব্লক করা হয়েছে- 0.1 শতাংশ টুইন 20 1 ঘন্টার জন্য। ঝিল্লিটি রাতারাতি অ্যান্টি-AGE (অ্যান্টি-সিএমএল) মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি (ক্লোন নং 6D12 at 1:1000) দিয়ে 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল, PBS-T দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল, এবং তারপর 1-এর জন্য ঘরের তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল h একটি পারক্সিডেস-কনজুগেটেড গোট অ্যান্টি-মাউস আইজিজি অ্যান্টিবডি সহ (1:25,000)। পিবিএস-টি দিয়ে ধোয়ার পর, ঝিল্লিটি ইসিএল প্রাইম ওয়েস্টার্ন ব্লটিং ডিটেকশন রিএজেন্ট (জিই হেলথকেয়ার ইউকে, লিটল চ্যালফন্ট, ইংল্যান্ড) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল এবং কেমিডক টাচ ইমেজিং সিস্টেম (বায়ো-র্যাড, হারকিউলিস, সিএ, ইউএসএ) বা ইমেজ কোয়ান্ট ব্যবহার করে স্ক্যান করা হয়েছিল। LAS 500 (GE Healthcare UK)। তারপরে ঝিল্লিগুলিকে পিবিএস-টি দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়, ওয়েস্টার্ন বিএলওটি স্ট্রিপিং বাফার (টাকারা, শিগা, জাপান) দিয়ে ঘরের তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয় এবং পিবিএস-টি দিয়ে আবার ধুয়ে ফেলা হয়। ঝিল্লিটি অ্যান্টি-ভিটেলোজেনিন অ্যান্টিবডি YP115 এবং YP170 (প্রতিটি 1:10,000) দ্বারা রাতে 4 ডিগ্রিতে পুনরায় পরীক্ষা করা হয়েছিল42, PBS-T দিয়ে ধুয়ে, এবং 2 ঘন্টার জন্য ঘরের তাপমাত্রায় পেরক্সিডেস (1:2000) (প্রোটিনটেক, রোজমন্ট, IL, USA) দিয়ে সংযোজিত ছাগল-বিরোধী ইঁদুর-বিরোধী IgG অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউব করা হয়। লোডিং নিয়ন্ত্রণের জন্য, অ্যান্টি-অ্যাক্টিন অ্যান্টিবডি (ক্লোন নং C4; Merck KGaA, Darmstadt, Germany) এবং peroxidase-conjugated অ্যান্টি-মাউস অ্যান্টিবডি (GE Healthcare UK) ব্যবহার করে ঝিল্লিগুলিকে পুনরায় পরীক্ষা করা হয়েছিল। প্রতিটি লেনের ভিটেলোজেনিন (YP170 এবং YP115) এবং CML ব্যান্ডের ঘনত্বগুলি সংশ্লিষ্ট লেনের অ্যাক্টিন ব্যান্ডগুলির বিপরীতে স্বাভাবিক করা হয়েছিল। ইমেজকোয়ান্ট টিএল সফ্টওয়্যার (জিই হেলথকেয়ার) ব্যবহার করে ব্যান্ড ঘনত্ব বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। প্রতিটি পরীক্ষা দুবার করা হয়েছিল।

ভিভোতে AGE-তে রাইবোজ এবং রিফাম্পিসিনের প্রভাব

400 মিমি রাইবোজ ধারণকারী এমএনজিএম-এ তিন দিন বয়সী কৃমি চাষ করা হয়েছিলবা উচ্চ রাইবোজের অসমোলারিটির সাথে মেলে 400 মিমি সরবিটল; কৃমি খাদ্য তাপ হিসাবে প্রদান করা হয় (100 ডিগ্রী, 10 মিনিট)-নিহত OP50 ব্যাকটেরিয়া যাতে চিনির গাঁজন থেকে বিরত থাকে। বংশধরদের দ্বারা দূষণ প্রতিরোধ করার জন্য, কৃমিগুলি সম্পূর্ণরূপে না হওয়া পর্যন্ত প্রতিদিন 4 দিনের জন্য তাজা প্লেটে স্থানান্তর করা হয়েছিল

সমাপ্তডিম পাড়া (7 দিন বয়সে)। রাইবোসের প্রভাব মূল্যায়ন করতে, আমরা বেঁচে থাকার অ্যাসেস করেছি এবং অটোফ্লোরেসেন্স পরিমাপ করেছি। একটা কীট ছিলএকটি কৃমি বাছাইকারীর সাথে মৃদু স্পর্শে সাড়া দিতে ব্যর্থ হলে মৃত বলে বিবেচিত হয়। প্লেটের দেয়ালে লেগে থাকার ফলে মারা যাওয়া কীটগুলি বিশ্লেষণে অন্তর্ভুক্ত করা হয়নি এবং সেন্সর করা হয়েছিল। একটি পৃথক পরীক্ষায়,50 µM ধারণকারী MGM (চূড়ান্তঘনত্ব) rifampicin (দ্রবীভূতDMSO) ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রতিটি পরীক্ষা দুবার পুনরাবৃত্তি হয়েছিল।

anti- senescence cistanche function

চিত্র 6 ভিটেলোজেনিন (ভিট) এবং প্রসারণ ফ্যাক্টর (ইএফ) এর অটো-ফ্লুরোসেন্স। কস্পেকট্রোফটোমেট্রি (যেমন 325/em 350–600) ভিটেলোজেনিন এবং14 দিনের জন্য রাইবোজ দ্বারা ভিট্রোতে গ্লাইকেশনের আগে এবং পরে প্রসারণ ফ্যাক্টর: গ্লাই-ভিট এবং গ্লাই-ইএফ হল গ্লাইকেটেড ভিটেলোজেনিন এবং গ্লাইকেট প্রসারণফ্যাক্টর, যথাক্রমে। রিবোflflavin (Rib) একটি প্রতিনিধি হিসাবে দেখানো হয়েছেlflইউরোসেন্ট যৌগ। তুলনা করার জন্য 17-দিন-পুরনো কীট (বন্য-প্রকার N2) থেকে নির্যাস দেখানো হয়েছে (গ. এলিগানস). b রাইবোজ দ্বারা ভিট্রোজেনিনের গ্লাইকেশন এবং প্রসারণ ফ্যাক্টর অটোফ্লোরেসেন্সে বৃদ্ধি পায়

সময়ের সাথে সাথেc বিভিন্ন বয়সের কৃমি (ওয়াইল্ড-টাইপ N2) জনসংখ্যা থেকে প্রাপ্ত নমুনায় AGE এবং vitellogenins-এর ওয়েস্টার্ন ব্লটিং বিশ্লেষণ। ব্লটগুলি একই জেল থেকে উদ্ভূত হয়েছিল এবং প্রতিটি অ্যান্টিবডি দিয়ে ক্রমানুসারে প্রক্রিয়া করা হয়েছিল।d পরিমাণ নির্ধারণপশ্চিম থেকে vitellogenins এবং AGEsডেনসিটোমেট্রি ব্যবহার করে ব্লটিং। পরীক্ষাগুলি দুবার পুনরাবৃত্তি হয়েছিল এবং একটি প্রতিনিধি পরীক্ষার ডেটা দেখানো হয়েছে। লাল রঙের লাইন এবং ডটেড লাইন উভয়ই AGE-এর ভাঁজ পরিবর্তন দেখায়, যখন কালো রঙেরগুলি ভিটেলোজেনিনের পরিমাণ নির্দেশ করে। বন্ধ চেনাশোনা এবং ক্রসগুলি যথাক্রমে YP170 এবং YP115 এর সাথে মিলে যাওয়া ব্যান্ডগুলির ডেটার জন্য

পুরানো কৃমি-নির্দিষ্ট প্রোটিন সনাক্তকরণ

3- এবং 17- দিন-পুরানো নেমাটোড থেকে নির্যাসের ভর স্পেকট্রোমেট্রি বিশ্লেষণপ্রোটিন পাইলট সংস্করণ 4.0 সহ একটি AB SCIEX 5800 LC-MALDI-TOF ভর স্পেকট্রোমিটারে (নেওয়ার্ক, NJ, USA) সম্পাদিত হয়েছিল৷ দুটোই ম্যাট্রিক ছিলট্রিপসিন দ্বারা পরিপাক হয় এবং একটি ম্যাট্রিক্স দ্রবণের সাথে মিশ্রিত হয় (7 মিলিগ্রাম/লি - সায়ানো-4-হাইড্রোক্সিসিনামিক অ্যাসিড 0.1 শতাংশ (v/v) ট্রাইফ্লুরোসেটিক অ্যাসিড (TFA), 70 শতাংশ

(v/v) acetonitrile (ACN))। দ্যসহকর্মীবিচ্ছেদের জন্য ব্যবহৃত হার ছিল 300ML/মিনিট,এবং দুটি মোবাইল ফেজ ({{0}}.1 শতাংশ (v/v) 2 শতাংশ ACN (দ্রাবক A) তে TFA এবং 80 সালে 0.1 শতাংশ (v/v)) TFA) এর একটি রৈখিক গ্রেডিয়েন্ট ব্যবহার করে বিচ্ছেদ অর্জন করা হয়েছিল শতাংশ ACN(দ্রাবক B)) নিম্নলিখিত অনুপাতে: A/B= 100/0–50/50 (60 মিনিট), A/B= 50/50–0/100 (20 মিনিট), A/B= 0/100 (10 মিনিট)। একটি পেপটাইড-ভর পেতে একটি MALDI-TOF ভর সিস্টেম ব্যবহার করা হয়েছিলআঙুলের ছাপ. পেপটাইড ম্যাচিং এবংপ্রোটিন অনুসন্ধানগুলি সুইস-প্রোট সংস্করণ 57{2}} ডাটাবেসের বিরুদ্ধে সম্পাদিত হয়েছিল।

নিষ্কাশিত প্রোটিনগুলি 50 মিমি অ্যামোনিয়াম বাইকার্বোনেটে দ্রবীভূত হয়েছিল(AmBic) প্রোটিনের ঘনত্ব 0.1 এবং 1 µg/µL এর মধ্যে দিতে। প্রোটিনের দ্রবণীয়তা সর্বাধিক করার জন্য, জলের একটি গণনাকৃত আয়তনRapigest (Waters Corporation, Milford, MA, USA) ফলন যোগ করা হয়েছেfiনাল ঘনত্ব 0.1–0. প্রাক-পাচন নমুনায় 2 শতাংশ রেপিজেস্ট। নমুনাগুলি

10 মিনিটের জন্য ঝাঁকুনি দিয়ে 40 ডিগ্রিতে উত্তপ্ত করা হয়েছিল; বিষয়বস্তু তারপর ছিলসেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল, এবং ফলস্বরূপ পেলেটটি 10 মিমি ডিটিটি ধারণকারী অ্যাম্বিকে সাসপেন্ড করা হয়েছিল। নমুনাগুলি 15 মিনিটের জন্য 80 ডিগ্রিতে উত্তপ্ত করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় ছুরি দেওয়া হয়েছিল। 50 মিলিমিটারে 200 মিমি আয়োডোসেটামাইড (IAM) এর একটি অ্যালিকোটA দিতে প্রতিটি নমুনায় AmBic যোগ করা হয়েছিলচূড়ান্তএর IAM ঘনত্ব

20 মিমি (2× মোলার অতিরিক্ত DTT উপস্থিতিতে); তখন মিশ্রণটি ছিল30 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় অন্ধকারে ধূসরিত করা হয় যাতে অ্যালকিলেশন বিক্রিয়া চলতে পারে। 50 মিমি অ্যাম্বিকে ট্রিপসিন প্রতিটি দ্রবণে 1:50 এ মিশ্রিত করা হয়েছিল (ট্রিপসিন: প্রোটিন ঘনত্ব)। নমুনাগুলি কমপক্ষে 4 ঘন্টা বা রাতারাতি 37 ডিগ্রি ঝাঁকুনি সহ হজম করা হয়েছিল। অনুসরণ করছেসেন্ট্রিফিউগেশন, TFA এবং ACN ফলন যোগ করা হয়েছেচূড়ান্তঘনত্ব 0.5–ভলিউম অনুসারে 1।{1}} শতাংশ TFA এবং 2 শতাংশ ACN। নমুনাগুলি 2 ঘন্টার জন্য 60 ডিগ্রিতে নাড়াচাড়া করা হয়েছিল। 22,200 × সেন্ট্রিফিউগেশনের পরg 5 মিনিটের জন্য, supernatant ছিলএকটি autosampler শিশি মধ্যে pipetted. প্রোটিন আগে ট্রিপসিনের সাথে হজম হয়েছিলএকটি ESI-Q-TOF সিস্টেমের সাথে মিলিত একটি Ultimate3000RSnanoLC সিস্টেম (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) ব্যবহার করে বিপরীত-ফেজ তরল ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা বিশ্লেষণের জন্য (ইমপ্যাক্ট II ব্রুকার ডাল্টনিক্স)। খামির অ্যালকোহল ডিহাইড্রোজেনেস(ADH1_YEAST) প্রোটিন একটি অভ্যন্তরীণ মান হিসাবে নমুনাগুলিতে স্পাইক করা হয়েছিল;প্রায় 50 fmol এর পরিমাণ প্রদানের জন্য স্পাইকিং করা হয়েছিলকলামে স্ট্যান্ডার্ড।

ইন ভিট্রো গ্লাইকেশনের পরে অটোফ্লুরোসেন্স

পিবিএস দ্রবণে ভিটেলোজেনিন ({{0}}.053 µM) বায়োসেন্স ল্যাবরেটরিজ এএস (বার্গেন, নরওয়ে) থেকে কেনা হয়েছিল। প্রসারণ ফ্যাক্টর সমাধান (1.17 µM) আবনোভা কর্পোরেশন (তাইপেই সিটি, তাইওয়ান) থেকে কেনা হয়েছিল। এই দ্রবণগুলিকে 0.1 মিমি রাইবোজ দিয়ে 23 দিনের জন্য 37 ডিগ্রিতে গ্লাইকেট করা হয়েছিল। রিবোflflavin সিগমা (টোকিও, জাপান) থেকে কেনা হয়েছিল এবং 0.1 মিমি এ পিবিএস-এ দ্রবীভূত হয়েছিল। প্রতিটি সমাধান একই অবস্থার অধীনে ফ্লুরোসেন্স স্পেকট্রোফোটোমেট্রি দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল।

ইমিউনোফ্লোরেসেন্সতরুণ এবং পুরানো কৃমি দ্বারাবয়স-সিঙ্ক্রোনাইজড CB1003 ফেড OP50 25 ডিগ্রীতে incubated ছিল। তিন দিন বয়সী এবং 13-দিন বয়সী প্রাপ্তবয়স্কদের বউইন ব্যবহার করে ব্যাপ্ত করা হয়েছিল's টিউব ফিক্সেশন প্রোটোকল43.

anti- senescence cistanche function

চিত্র. 7 3-দিন-পুরোনো এবং 13-দিন-পুরোনো কিনু-1 মিউট্যান্টের ফ্লুরোসেন্স চিত্র। a–cতিন দিন বয়সী কৃমি এবংd–f 13-দিন-পুরনো কৃমি, কলাম 1-এ কাঁচা চিত্র সহ। মৃত্যুর সম্ভাব্য প্রভাবগুলি বাদ দিতেflকৃমি হওয়ার 2 দিন আগে থেকে শুরু হওয়া uorescence' মৃত্যু, মিউট্যান্টকিনু-1আমরা ব্যবহার করেছি. কলাম 2 এবং 3 এর চিত্রগুলিতে অটোফ্লুরোসেন্স দেখা যায়। কলাম 3-এর ফটোগুলি 2 কলামের চিত্রগুলির নির্দেশিত (আয়তক্ষেত্র দ্বারা) অঞ্চলগুলি থেকে বড় করা হয়েছিল। বয়স্ক কৃমি (13-দিন-পুরানো) স্বয়ংক্রিয়ভাবেফ্লোরেসডচিহ্নfifiঅল্প বয়স্ক কৃমির (3-দিন-বয়সী) চেয়ে উচ্চতর। প্রতিটি স্কেল বার 50 নির্দেশ করেμm. g পরিমাপনীল এরফ্লুরোসেন্সImageJ এবং ImageQuant TL সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে। প্রতিটি বার এর গড় মান উপস্থাপন করেflপ্রতি 1 মিমি ইউরোসেন্স তীব্রতা2 নয়টি কৃমির। ** একটি পরিসংখ্যানগত চিহ্ন নির্দেশ করেfifiএকটিতে 3-দিন-পুরানো এবং 13-দিনের কৃমির মধ্যে পার্থক্য করা যায় নাp মান < 0.01। ত্রুটি বার SE প্রতিনিধিত্ব করে।

নমুনা ছিলস্থিরBouin মধ্যে's স্থিরকারীমিথানল দিয়ে/ - mercaptoethanol30 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায়। কিউটিকল ফাটানোর জন্য, কৃমি স্থাপন করা হয়েছিলআইসোপ্রোপ্যানল এবং সংরক্ষিত–10 মিনিটের জন্য 80 ডিগ্রি, তারপর আরও 30 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়। দ্যস্থিরকারীসমাধান সরানো হয়েছে এবংBTB সমাধান দিয়ে প্রতিস্থাপিত হয়েছে (25 মিমি বোরেট বাফার, 0.5 শতাংশ ট্রাইটন এক্স-100, 2 শতাংশ

-mercaptoethanol) ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টা; বিটিবিতে ইনকিউবেশন ছিলমোট তিনবার পুনরাবৃত্তি। কৃমিগুলি তখন BTB থেকে BT (25 mM বোরেট বাফার, 0.5 শতাংশ ট্রাইটন এক্স-100), অ্যান্টিবডি বাফার দ্রবণে (1× PBS, 0.5 শতাংশ) স্থানান্তরিত হয় ট্রাইটন এক্স-100, 0.1 মিমি ইডিটিএ, {{10}}.1 শতাংশ বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন (বিএসএ), 0.05 শতাংশ সোডিয়াম অ্যাজাইড, পিএইচ 7.2) ঘরের তাপমাত্রায়

1 ঘন্টা, এবং 10 শতাংশ ছাগলের সিরাম ধারণকারী একটি অ্যান্টিবডি বাফার দ্রবণ দিয়ে অবরুদ্ধ(কসমো বায়ো, টোকিও, জাপান) রাতারাতি 4 ডিগ্রিতে। প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলির মধ্যে একটি মাউস মনোক্লোনাল অ্যান্টি-এজি (এন্টি-সিএমএল) অ্যান্টিবডি (ক্লোন নং 6D12; 1:125) এবং একটি অ্যান্টি-পেন্টোসিডিন অ্যান্টিবডি (ক্লোন নম্বর PEN-12, ট্রান্স জেনিক; 1:5) ছিল 0)। সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি আলেক্সা ফ্লুর 555- কনজুগেটেড গোট অ্যান্টি-মাউস অ্যান্টিবডি (Abcam, Cambridge, England; 1:100) নিয়ে গঠিত। সমস্ত অ্যান্টিবডি ডিলিউশন 0.5 শতাংশ বিএসএ ধারণকারী অ্যান্টিবডি বাফার ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়েছিল। VECTASHIELD অ্যান্টিফেড মাউন্টিং মাধ্যম (ভেক্টর ল্যাবরেটরিজ, বার্লিংগেম, CA, USA) ব্যবহার করে নমুনাগুলি কাচের স্লাইডে মাউন্ট করা হয়েছিল।

ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি

উপরে বর্ণিত কাচের স্লাইডে মাউন্ট করা 3- বা 13- দিন বয়সী প্রাপ্তবয়স্ক কৃমির ফ্লুরোসেন্স চিত্রগুলি একটি উল্টানো ব্যবহার করে রেকর্ড করা হয়েছিলfluorescenceমাইক্রোস্কোপ (BZ-X700; Keyence) একটি 10× অবজেক্টিভ লেন্স সহ (CFI প্ল্যান ফ্লুর ডিএল10×/0.30)। অটোflflকৃমির uorescence একটি লালফ্লুরোসেন্সআলেক্সা থেকেFluor 555 BZ-X DAPI (উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য (প্রাক্তন), 360 ±20 nm; নির্গমন তরঙ্গদৈর্ঘ্য (Em), 460 ± 25 nm) এবং TRITC (প্রাক্তন, 545 ±) দিয়ে দেখা হয়েছে12.5 এনএম; এম, 605 ± 35 এনএম)ফিল্টার, যথাক্রমে। সেকশন ইমেজ ছিলএকটি সহ এক-মাত্রিক স্লিট টাইপ সহ বিভাগকরণ মোড দ্বারা বন্দীপ্রস্থ 32, এবং Z-স্ট্যাক পিচ 0.7μ40- এর জন্য মিμমি পুরু নমুনা। নীল পরিমাপ করতেফ্লুরোসেন্স, দ্যফ্লুরোসেন্সচিত্র দ্বারা পরিমাপ তীব্রতা

কোয়ান্ট টিএল সফ্টওয়্যার (জিই হেলথকেয়ার) প্রতি 1 মিমি ঘনত্বের মানগুলিতে স্বাভাবিক করা হয়েছিল2 একটি কৃমির's অভিক্ষেপ এলাকা। ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট অফ হেলথ দ্বারা তৈরি অ্যাডোব ফটোশপ এলিমেন্টস এবং ইমেজজে সফ্টওয়্যার দিয়ে শরীরের আকার নির্ধারণ করা হয়েছিল। এই পদ্ধতিতে একটি কৃমির এলাকা's অভিক্ষেপস্বয়ংক্রিয়ভাবে অনুমান করা হয়েছিল এবং শরীরের আকারের সূচক হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।

পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

স্পিয়ারম্যান ব্যবহার করে আয়ুর পারস্পরিক সম্পর্ক গণনা করা হয়েছিল's র্যাঙ্ক পারস্পরিক সম্পর্ক সহগ। ইন ভিট্রো গ্লাইকেশনের পরে অটোফ্লুরোসেন্সের মাত্রা দ্বি-ফ্যাক্টরিয়াল আনোভা এবং শেফে ব্যবহার করে তুলনা করা হয়েছিল's F পরীক্ষা দ্যইন ভিট্রো গ্লাইকেশনের পরে ELISA মানগুলি একক-ফ্যাক্টর ANOVA এবং একাধিক তুলনার জন্য Dunnett পরীক্ষা ব্যবহার করে তুলনা করা হয়েছিল। নিমাটোড বেঁচে থাকাকাপলান দ্বারা গণনা করা হয়েছিল–লগ-র‍্যাঙ্ক পরীক্ষা ব্যবহার করে মায়ার পদ্ধতি এবং বেঁচে থাকার পার্থক্যগুলি তাত্পর্যের জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল। রিফাম্পিসিন চিকিত্সা এবং বার্ধক্যের পরে অটোফ্লুরোসেন্স মানড্যাফ-2এবংকিনু-1মিউট্যান্টদের প্রতিটি ব্যবহার করে ছাত্রদের সাথে তুলনা করা হয়েছিল's t পরীক্ষা, পুনরাবৃত্ত পরিমাপ দ্বি-ফ্যাক্টর আনোভা, এবং মান–হুইটনিU পরীক্ষা N2 বা এর জন্য রাইবোজ চিকিত্সা অনুসরণ করে অটোফ্লুরোসেন্স মানকিনু-1মিউট্যান্টকে ননপ্যারামেট্রিক স্টিল ব্যবহার করে তুলনা করা হয়েছিল–ডোয়াস পদ্ধতি। অটোফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি থেকে ঘনত্ব ছাত্র ব্যবহার করে তুলনা করা হয়েছিল's টি-পরীক্ষা. যেখানে তাত্পর্য পরিলক্ষিত হয়েছিল, ডেটা ক্লাসি ছিলfified হিসাবে *p < 0.05 and **p < 0.01. All পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণগুলি মাইক্রোসফ্ট এক্সেলের সাথে সম্পূরক করা হয়েছিলঅ্যাড-ইন সফ্টওয়্যারপ্লাসStatcel 3 (OMS, Tokyo, Japan) এবং Windows এর জন্য JSTAT(নানকোডো, টোকিও, জাপান)।

রিপোর্টিং সারাংশ

গবেষণা নকশা উপর আরও তথ্য প্রকৃতি গবেষণা পাওয়া যায়রিপোর্টিং সারাংশ এই নিবন্ধে লিঙ্ক.

ডেটা উপলব্ধতা

বর্তমান অধ্যয়নের সময় উত্পন্ন ডেটাসেটগুলি সংশ্লিষ্ট থেকে পাওয়া যায়যুক্তিসঙ্গত অনুরোধে লেখক.

তথ্যসূত্র

1. ব্রেনার, এস. এর জেনেটিক্সকেনোরহাবডাইটিস এলিগানস. জেনেটিক্স 77, 71–94 (1974).

2. Riddle, DL, Blumenthal, T., Meyer, BJ, Priess, JR (eds.)C. এলিগানস II. (ঠান্ডাস্প্রিং হারবার ল্যাবরেটরি প্রেস, কোল্ড স্প্রিং হারবার, 1997)।

3. হারন্ডন, এলএ এট আল। স্টোকাস্টিক এবং জেনেটিক কারণগুলি বার্ধক্যের টিস্যু-নির্দিষ্ট পতনকে প্রভাবিত করেগ. এলিগানস. প্রকৃতি 419, 808–814 (2002).

4. ক্লাস, নিমাটোডে এমআর এজিংকেনোরহাবডাইটিস এলিগানস: প্রধান জৈবিক এবং পরিবেশগত কারণ যা জীবনকালকে প্রভাবিত করে।মেক. বার্ধক্য দেব। 6, 413–429 (1977).

5. Son, HG, Altintas, O., Kim, EJE, Kwon, S. & Lee, SV বয়স-নির্ভর পরিবর্তন এবং বয়সের বায়োমার্কারকেনোরহাবডাইটিস এলিগানস. বার্ধক্য কোষ 18, e12853 (2019).

6. ইয়োশিনো, জে., মিলস, কেএফ, ইউন, এমজে এবং ইমাই, এস. নিকোটিনামাইড মনোনিউক্লিওটাইড, একটি মূল এনএডি(প্লাস) মধ্যবর্তী, খাদ্যের প্যাথোফিজিওলজি- এবং ইঁদুরের বয়স-প্ররোচিত ডায়াবেটিসের চিকিত্সা করে।সেল মেটাব। 14, 528–536 (2011).

7. Denzel, MS, Lapierre, LR & Mack, HID উদীয়মান বিষয়গ. এলিগানসবার্ধক্য গবেষণা: ট্রান্সক্রিপশনাল রেগুলেশন, স্ট্রেস রেসপন্স এবং এপিজেনেটিক্স।মেক. দেবের বয়স। 177, 4–21 (2019).

8. Ikeda, T., Yasui, C., Hoshino, K., Arikawa, K. & Nishikawa, Y. Inflflদীর্ঘায়ু উপর ল্যাকটিক অ্যাসিড ব্যাকটেরিয়া uenceCaenorhabditis elegansএবং সালমোনেলার বিরুদ্ধে হোস্ট ডিফেন্সআন্ত্রিকserovar Enteritidis.আবেদন পরিবেশ। মাইক্রোবায়োল। 73, 6404–6409 (2007).

9. Komura, T., Ikeda, T., Yasui, C., Saeki, S. & Nishikawa, Y. বাইফিডোব্যাকটেরিয়া দ্বারা প্ররোচিত প্রো-দীর্ঘায়ুর অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াকেনোরহাবডাইটিস এলিগানস. বায়োজেরোন্টোলজি 14, 73–87 (2013).

10. ক্লার্ক, এলসি এবং হজকিন, জে. কমেন্সাল, প্রোবায়োটিকস এবং প্যাথোজেনCae Caenorhabditis elegansমডেল.কোষ মাইক্রোবায়োল। 16, 27–38 (2013).

11. Cabreiro, F. & Gems, D. কৃমিরও জীবাণু প্রয়োজন: মাইক্রোবায়োটা, স্বাস্থ্য এবং বার্ধক্যকেনোরহাবডাইটিস এলিগানস. EMBO Mol. মেড. 5, 1300–1310 (2013).

12. কিম, ওয়াই এবং মাইলোনাকিস, ই।Caenorhabditis elegansপ্রোবায়োটিক ব্যাকটেরিয়া দিয়ে ইমিউন কন্ডিশনিংল্যাকটোব্যাসিলাস অ্যাসিডোফিলাসস্ট্রেন NCFM গ্রাম-পজিটিভ ইমিউন প্রতিক্রিয়া বাড়ায়।সংক্রমিত। ইমিউন। 80, 2500–2508 (2012).

13. Gerstbrein, B., Stamatas, G., Kollias, N. & Driscoll, M. in vivo spectrofluorimetryঅন্তঃসত্ত্বা বায়োমার্কারগুলি প্রকাশ করে যা স্বাস্থ্যকাল এবং খাদ্যতালিকায় সীমাবদ্ধতার রিপোর্ট করেকেনোরহাবডাইটিস এলিগানস. বার্ধক্য কোষ 4, 127–137 (2005).

14. Coburn, C. et al. অ্যানথ্রানিলেটফ্লুরোসেন্সএকটি ক্যালসিয়াম-প্রচারিত নেক্রোটিক তরঙ্গ চিহ্নিত করে যা জীবের মৃত্যুকে উৎসাহিত করেগ. এলিগানস. পিএলওএস বায়োল। 11, e1001613 (2013).

15. Pincus, Z., Mazer, TC & Slack, FJ Autoflflমধ্যে বার্ধক্য একটি পরিমাপ হিসাবে uorescenceগ. এলিগানস: লাল দেখান, নীল বা সবুজ নয়।বার্ধক্য (আলবানি এনওয়াই) 8, 889–898 (2016).

16. সেবেকোভা, কে এবং সেবেকোভা, কেবি গ্লাইকেটেড প্রোটিন পুষ্টিতে: বন্ধু না শত্রু?মেয়াদ। গেরোন্টল। 117, 76–90 (2019).

17. Giacco, F. & Brownlee, M. অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং ডায়াবেটিক জটিলতা।সার্কুলেশন রেস. 107, 1058–1070 (2010).

18. শ্রীকান্ত, ভি. এবং অন্যান্য। আল্জ্হেইমারে উন্নত গ্লাইকেশন শেষ পণ্য এবং তাদের রিসেপ্টর RAGE's রোগ।নিউরোবায়োল। বয়স 32, 763–777 (2011).

19. Zhuo, Q., Yang, W., Chen, JY & Wang, Y. মেটাবলিক সিনড্রোম অস্টিওয়ার থ্রাইটিস পূরণ করে।নাট। রেভ. রিউমাটল। 8, 729–737 (2012).

20. Gkogkolou, P. & Bohm, M. Advanced glycation end products: ত্বক বার্ধক্যের মূল খেলোয়াড়?ডার্মাটোএন্ডোক্রিনোল 4, 259–270 (2012).

21. লিউ, জে. এট আল। উন্নত গ্লাইকেশন শেষ-পণ্যের জন্য রিসেপ্টর অকালকে উন্নীত করেএন্ডোপ্লাজমিক সক্রিয়করণের মাধ্যমে প্রক্সিমাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষের সেন্সেন্সরেটিকুলাম স্ট্রেস-নির্ভর p21 সিগন্যালিং।সেল সংকেত 26, 110–121 (2014).

22. Mendler, M., Schlotterer, A., Morcos, M. & Nawroth, PP আন্ডারস্ট্যান্ডিং ডায়াবেটিক পলিনিউরোপ্যাথি এবং দীর্ঘায়ু: আমরা নেমাটোড থেকে কী শিখতে পারিCae norhabditis elegans? মেয়াদ। ক্লিন। এন্ডোক্রিনোল। ডায়াবেটিস 120, 182–183 (2012).

আরো জন্য অনুরোধ:

ইমেল:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp প্লাস 86 15292862950