সেনেসেন্ট হিউম্যান ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টের উপর ওনোথেরা বিয়েনিসের প্রোমিটোটিক অ্যাকশন পার্ট 1

বিমূর্ত: সেনসেন্ট ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্ট জমে ত্বকের বার্ধক্য বাড়ায়। প্রসারণের পুনঃসক্রিয়তা হল কোষের সেন্সেন্স মডিউল করার এক কৌশল। সম্প্রতি, আমরা Oenothera biennis cell cultures (ObHEx) এর হাইড্রোফিলিক নির্যাসের সঠিক রাসায়নিক গঠনের কথা জানিয়েছি এবং আমরা এর ত্বকের বার্ধক্য বিরোধী বৈশিষ্ট্য দেখিয়েছি। এই কাজটি বিশেষভাবে কোষের সেন্সেন্সের উপর এর জৈবিক প্রভাব মূল্যায়ন করার লক্ষ্য রাখে। ObHEx অ্যাকশন একটি অতি-গভীর প্রোটিওমিক বিশ্লেষণের মাধ্যমে স্ট্রেস-ইনডিউসড প্রিম্যাচিউর সেন্সেন্স (SIPS) এর শিকার সাধারণ মানুষের ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টের উপর মূল্যায়ন করা হয়েছে, যা এখন পর্যন্ত সবচেয়ে বিশ্বব্যাপী সেন্সেন্স-সম্পর্কিত প্রোটিওমের দিকে পরিচালিত করেছে। ভর স্পেকট্রোমেট্রি ডেটা দেখায় যে ObHEx-এর সাথে চিকিত্সা গুরুত্বপূর্ণ মাইটোটিক প্রোটিনের মাত্রা পুনঃপ্রতিষ্ঠিত করে, সেন্সেন্ট কোষগুলিতে দৃঢ়ভাবে নিয়ন্ত্রিত হয়। আমাদের প্রোটিওমিক্সের ফলাফলগুলিকে যাচাই করার জন্য, আমরা প্রমাণ করেছি যে ObHEx আংশিকভাবে 'সেনসেসেন্স-সম্পর্কিত-ß-গ্যালাকটোসিডেস'-এর কার্যকলাপকে পুনরুদ্ধার করতে পারে, যা সেনসেন্ট কোষের সবচেয়ে সাধারণ বৈশিষ্ট্য। তদ্ব্যতীত, মাইটোটিক প্রোটিন স্তরের আপগ্র্যুলেশন কোষ চক্রের পুনঃপ্রবেশে অনুবাদ করে কিনা তা মূল্যায়ন করার জন্য, FACS পরীক্ষাগুলি চালানো হয়েছে, ObHEx দ্বারা সেন্সেন্ট কোষের বিস্তারের একটি ছোট কিন্তু উল্লেখযোগ্য পুনঃসক্রিয়তা প্রদর্শন করে। উপসংহারে, এখানে প্রকাশিত গভীর সেন্সেসেন্স-সম্পর্কিত গ্লোবাল প্রোটিওম প্রোফাইলিং SIPS দ্বারা নিয়ন্ত্রিত শত শত প্রোটিনের একটি প্যানেল সরবরাহ করে যা সম্প্রদায়ের দ্বারা বার্ধক্য এবং নতুন সম্ভাব্য মডুলেটরগুলির প্রভাব আরও বোঝার জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। অধিকন্তু, প্রোটিওমিক্স বিশ্লেষণ সেনসেন্ট কোষগুলিতে ObHEx-এর একটি নির্দিষ্ট প্রো-মিটোটিক প্রভাবের দিকে নির্দেশ করে। সুতরাং, আমরা ত্বকের বার্ধক্যের সাথে যুক্ত বার্ধক্যের বিরুদ্ধে একটি শক্তিশালী সহায়ক হিসাবে ObHEx-এর পরামর্শ দিই।

সিস্টানচে গ্লাইকোসাইড হৃৎপিণ্ড ও যকৃতের টিস্যুতে SOD-এর কার্যকলাপকেও বাড়িয়ে তুলতে পারে এবং প্রতিটি টিস্যুতে lipofuscin এবং MDA-এর উপাদানকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করতে পারে, কার্যকরভাবে বিভিন্ন প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন র‌্যাডিকেল (OH-, H₂O₂, ইত্যাদি) এবং ডিএনএ-এর ক্ষতি থেকে রক্ষা করে। OH-র্যাডিক্যাল দ্বারা। Cistanche phenylethanoid glycosides মুক্ত র্যাডিকেলগুলির একটি শক্তিশালী স্ক্যাভেঞ্জিং ক্ষমতা, ভিটামিন C-এর তুলনায় উচ্চ হ্রাস করার ক্ষমতা, শুক্রাণু সাসপেনশনে SOD-এর কার্যকলাপকে উন্নত করে, MDA-এর বিষয়বস্তু হ্রাস করে এবং শুক্রাণুর ঝিল্লির কার্যকারিতার উপর একটি নির্দিষ্ট প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব ফেলে। সিস্টানচে পলিস্যাকারাইডগুলি ডি-গ্যালাকটোজ দ্বারা সৃষ্ট পরীক্ষামূলকভাবে সেনসেন্ট ইঁদুরের এরিথ্রোসাইট এবং ফুসফুসের টিস্যুতে এসওডি এবং জিএসএইচ-পিএক্সের কার্যকলাপকে বাড়িয়ে তুলতে পারে, সেইসাথে ফুসফুস এবং প্লাজমাতে এমডিএ এবং কোলাজেনের উপাদান হ্রাস করতে পারে এবং ইলাস্টিনের উপাদান বাড়াতে পারে। ডিপিপিএইচের উপর একটি ভাল স্ক্যাভেঞ্জিং প্রভাব, সেন্সেন্ট ইঁদুরের হাইপোক্সিয়ার সময়কে দীর্ঘায়িত করে, সিরামে এসওডির কার্যকলাপকে উন্নত করে এবং পরীক্ষামূলকভাবে সেন্সেন্ট ইঁদুরের ফুসফুসের শারীরবৃত্তীয় অবক্ষয়কে বিলম্বিত করে সেলুলার মরফোলজিক্যাল অবক্ষয়ের সাথে, পরীক্ষাগুলি দেখিয়েছে যে সিস্টানচে ভাল অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা রয়েছে। এবং ত্বকের বার্ধক্যজনিত রোগ প্রতিরোধ ও চিকিত্সার জন্য একটি ওষুধ হওয়ার সম্ভাবনা রয়েছে। একই সময়ে, সিস্তানচে ইচিনাকোসাইডের DPPH ফ্রি র‌্যাডিকেলগুলিকে স্ক্যাভেঞ্জ করার একটি উল্লেখযোগ্য ক্ষমতা রয়েছে এবং এটি প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতিকে স্ক্যাভেঞ্জ করতে পারে, মুক্ত র‌্যাডিক্যাল-প্ররোচিত কোলাজেনের অবক্ষয় রোধ করতে পারে এবং থাইমিন মুক্ত র‌্যাডিক্যাল অ্যানিয়নের ক্ষতির উপর একটি ভাল মেরামত প্রভাব ফেলে।

Cistanche Tubulosa Supplement এ ক্লিক করুন

【আরো তথ্যের জন্য:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

কীওয়ার্ড: Oenothera biennis hydrophilic নির্যাস; বার্ধক্য; fibroblasts; প্রোটিওমিক্স; ভর বর্ণালিবীক্ষণ; diaPASEF; মাইটোসিস; চামড়া পক্বতা

1। পরিচিতি

বার্ধক্য এবং বয়সজনিত রোগের প্রধান কারণ হল সেন্সেন্স। সংবেদনশীল কোষগুলি শারীরবৃত্তীয় টেলোমের ক্ষয় (প্রতিলিপিমূলক সেন্সেন্স) বা ডিএনএ ক্ষতি, অক্সিডেটিভ স্ট্রেস, অর্গানেল স্ট্রেন এবং অনকোজিন অ্যাক্টিভেশন (স্ট্রেস-প্ররোচিত অকাল সেন্সেসেন্স, এসআইপিএস) সহ স্ট্রেস ট্রিগারগুলির প্রতিক্রিয়া হিসাবে প্রসারণ গ্রেপ্তারের মধ্য দিয়ে যায়। ডিএনএ ড্যামেজ রেসপন্স (ডিডিআর) প্ররোচিত বৃদ্ধি গ্রেপ্তার হওয়া সত্ত্বেও, সেনসেন্ট কোষগুলি একটি উচ্চ বিপাকীয় অবস্থা এবং লাইসোসোমাল কার্যকলাপ প্রদর্শন করে, যা তাদের বর্ধিত সিক্রেটরি কার্যকলাপের জন্য গুরুত্বপূর্ণ, যা সেন্সেন্স-সম্পর্কিত সিক্রেটরি ফেনোটাইপ (SASP) [2,3] নামে পরিচিত। SASP ফ্যাক্টরগুলির মধ্যে দ্রবণীয় (ইন্টারলিউকিনস, কেমোকাইনস, গ্রোথ ফ্যাক্টর, সিক্রেটেড প্রোটিজ) এবং অদ্রবণীয় (ক্ষরিত অদ্রবণীয় প্রোটিন এবং এক্সট্রা সেলুলার ম্যাট্রিক্স উপাদান) প্রোটিনের বেশ কয়েকটি পরিবার অন্তর্ভুক্ত যা পার্শ্ববর্তী টিস্যুকে নেতিবাচকভাবে প্রভাবিত করে, একটি দীর্ঘস্থায়ী নিম্ন-গ্রেডের প্রদাহজনক অবস্থা তৈরি করে।

ডার্মাতে সেনসেন্ট ফাইব্রোব্লাস্ট জমে ত্বকের বয়স বাড়ায়, এক্সট্রা সেলুলার ম্যাট্রিক্স (ECM) এর অখণ্ডতা এবং প্রতিবেশী মাইক্রোভাসকুলার এন্ডোথেলিয়াল কোষ, এপিডার্মাল মেলানোসাইট এবং কেরাটিনোসাইট [4-6] এর কার্যকারিতা নষ্ট করে। বার্ধক্য প্রতিরোধের তিনটি প্রধান কৌশলের মধ্যে রয়েছে (i) অ্যাপোপটোসিস বা ইমিউন অ্যাক্টিভেশনের মাধ্যমে সেনসেন্ট কোষের ক্লিয়ারেন্স; (ii) SASP এর মড্যুলেশন এবং (iii) কোষের বিস্তারের পুনরায় সক্রিয়করণ। প্রকৃতপক্ষে, যদিও বার্ধক্যকে মূলত একটি অপরিবর্তনীয় কোষ চক্র গ্রেপ্তার হিসাবে বর্ণনা করা হয়েছে, বর্তমান প্রমাণগুলি পরামর্শ দেয় যে বিস্তার পুনরুদ্ধার করা যেতে পারে [7-9]।

এই পরিস্থিতিতে, কোষের বার্ধক্য প্রতিরোধ করতে এবং/অথবা পরিবর্তন করতে সক্ষম উপাদানগুলি ত্বকের বার্ধক্য প্রতিরোধের জন্য মূল্যবান অস্ত্র হিসাবে প্রসাধনী ক্ষেত্রের ক্ষেত্রে অত্যন্ত আগ্রহের বিষয়। বিশেষ করে, Oenothera biennis (O. biennis, Evening Primrose) প্রজাতি থেকে প্রাপ্ত নির্যাসগুলি Onagraceae পরিবারের অন্তর্গত, প্রথাগতভাবে তাদের প্রদাহ বিরোধী এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপের কারণে প্রসাধনী প্রয়োগের জন্য ব্যবহৃত হয় [10]। বায়বীয় অংশ এবং জলীয় পাতার নির্যাস থেকে তৈরি মেথানোলিক নির্যাস প্রধানত ফেনোলিক অ্যাসিড এবং ফ্ল্যাভোনয়েড ধারণ করে, যেখানে শিকড় থেকে প্রাপ্ত মেথানোলিক নির্যাসে বেশিরভাগ স্টেরল এবং ট্রাইটারপেন থাকে [১১]। যদিও অ্যালকোহলযুক্ত এবং হাইড্রোঅ্যালকোহলিক বায়বীয় অংশের নির্যাসগুলির জৈবিক কার্যকলাপ প্রদর্শন করা হয়েছে [12-14], O. biennis-এর সর্বাধিক ব্যবহৃত নির্যাস হল বীজ থেকে প্রাপ্ত তেল, যা অত্যন্ত ফ্যাটি অ্যাসিড সমৃদ্ধ। প্রকৃতপক্ষে, যেহেতু তাদের লিনোলিক অ্যাসিড (এলএ) এবং -লিনোলেনিক অ্যাসিড (জিএলএ) এর উচ্চ উপাদান রয়েছে, তাই ও. বিয়েনিস বীজ তেল ত্বকের সঠিক কার্যকারিতা উন্নত করে এবং বিশেষ করে, তারা দীর্ঘস্থায়ী ডার্মাটাইটিস রোগীদের ক্ষেত্রে উপকারী প্রভাব দেখিয়েছে [১১, 15]।

অতি সম্প্রতি, O. biennis কোষ সংস্কৃতি থেকে প্রাপ্ত নির্যাসগুলিকে স্বতঃস্ফূর্ত উদ্ভিদের নির্যাস সম্পূর্ণরূপে প্রতিস্থাপন করার প্রস্তাব করা হয়েছে কারণ সেগুলি জৈব-টেকসই, দূষিত-মুক্ত, এবং প্রমিত সেকেন্ডারি মেটাবোলাইট মিশ্রণ [16]। এটি সুনির্দিষ্টভাবে যৌগগুলির সংমিশ্রণ এবং তাদের সিনারজিস্টিক প্রভাব যা বোটানিকাল নির্যাসগুলির সামগ্রিক কার্যকলাপের জন্য দায়ী [17]।

এখানে, আমরা লিগনানস এবং ট্রাইটারপেনে সমৃদ্ধ O. biennis cell cultures (ObHEx) এর হাইড্রোফিলিক নির্যাসের উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করেছি, কারণ এটি ভিট্রো এবং প্রাক্তন ভিভো মডেলগুলিতে পরীক্ষা করার সময় ত্বকের বার্ধক্য বিরোধী বৈশিষ্ট্যগুলি দেখায় [18]। এই নির্যাসটির ভর স্পেকট্রোমেট্রি-ভিত্তিক রাসায়নিক বৈশিষ্ট্য প্রকাশ করেছে যে এতে আকর্ষণীয় সেকেন্ডারি মেটাবোলাইটের বেশ কয়েকটি শ্রেণি রয়েছে। এগুলি লিগনানস (সালভাডোরাসাইড এবং লিরিওডেনড্রন) এবং ট্রাইটারপেনস (মুরিয়াটিক অ্যাসিড, আর্জুনোলিক অ্যাসিড, অ্যাসপার্টিক অ্যাসিড, এবং হেডেরজেনিন) এর অন্তর্গত, যার মধ্যে কিছু আগে মানব ফাইব্রোব্লাস্টগুলিতে প্রো-কোলাজেন I উত্পাদনের সাথে যুক্ত ছিল [19,20]। বিশেষ করে, আমরা আগে প্রমাণ করেছি যে ObHEx ম্যাট্রিক্স কোলাজেন সংকোচন, অ্যাক্টিন পলিমারাইজেশন, এবং ECM প্রোটিন উৎপাদনকে উৎসাহিত করে, এইভাবে মায়োসিন লাইট চেইন কিনেস (MYLK) জিনের অভিব্যক্তি বৃদ্ধির মাধ্যমে ত্বকের দৃঢ়তা এবং স্থিতিস্থাপকতা উন্নত করে।

আজ অবধি, ত্বকের বার্ধক্য এবং সেলুলার সেন্সেন্সের উপর ObHEx প্রভাবের আণবিক প্রক্রিয়া, বিশেষত, তদন্ত করা হয়নি। এই কাজের লক্ষ্য হল সেন্সেন্ট হিউম্যান ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টের উপর ObHEx কার্যকলাপ অন্বেষণ করা। আমরা একটি ডেটা-স্বাধীন ভর স্পেকট্রোমেট্রি অতি-গভীর প্রোটিওমিক পদ্ধতির ইঙ্গিত প্রাপ্ত করার জন্য ক্রিয়াকলাপের প্রক্রিয়া এবং জৈব-অর্থোগোনাল পদ্ধতিগুলিকে যাচাই এবং তদন্ত করার জন্য ব্যবহার করেছি (চিত্র 1)।

2. ফলাফল

হাইড্রোজেন পারক্সাইড (H2O2) দিয়ে চিকিত্সার মাধ্যমে স্বাভাবিক মানব ডার্মাল ফাইব্রোব্লাস্টে (NHDF) স্ট্রেস-প্ররোচিত অকাল সেন্সেন্স (SIPS) সঞ্চালিত হয়েছিল। অক্সিডেটিভ স্ট্রেস-প্ররোচিত সেনসেন্ট কোষগুলি বার্ধক্য গবেষণার জন্য একটি দুর্দান্ত ইন ভিট্রো মডেল এবং H2O2 এটি অর্জনের জন্য ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয় [21,22]।

সেনসেন্ট NHDF কোষগুলিতে ObHEx দ্বারা পরিবর্তিত জৈবিক পথগুলি বোঝার জন্য, আমরা একটি অতি-গভীর প্রোটোমিক পদ্ধতি ব্যবহার করেছি। SIPS এবং কন্ট্রোল সেলগুলিকে 48 ঘন্টার জন্য 0.01 শতাংশ (p/v) নির্যাস দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল বা না করা হয়েছিল, যেহেতু MTT অ্যাস থেকে [18] রিপোর্ট করা হয়েছে, এর ফলে সর্বোচ্চ ঘনত্ব ঘটে যা কারণ হয় না 48 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে যেকোন কোষের বিষাক্ততা।

সেল লাইসেটগুলি তখন ট্রিপটিক হজম এবং ন্যানো-ইউপিএলসি এমএস/এমএস বিশ্লেষণের শিকার হয়েছিল। প্রোটিওমের সর্বোত্তম গভীরতা অর্জনের জন্য, ভর স্পেকট্রোমেট্রি ডেটা ডেটা স্বাধীন অধিগ্রহণ (DIA) মোডে অর্জিত হয়েছিল, যা 98 শতাংশ ডেটা সম্পূর্ণতা সহ 9650 প্রোটিনের (টেবিল S1) শক্তিশালী পরিমাণ নির্ধারণের অনুমতি দেয়। আমাদের অধ্যয়নটি আজ অবধি সেনসেন্ট কোষগুলির সর্বাধিক সম্পূর্ণ প্রোটিওম বিশ্লেষণের প্রতিবেদন করে।

2.1। স্ট্রেস-ইনডিউসড প্রিম্যাচিউর সেনেসেন্স (SIPS) মূল্যায়ন

সর্বপ্রথম, আমরা যাচাই করেছি যে NHDF-এ সেন্সেন্স ইনডাকশন সফল হয়েছে কিনা, H2O2-এর গ্লোবাল প্রোটিওম বিশ্লেষণ করে ভর স্পেকট্রোমেট্রি (MS) দ্বারা NHDF-এর চিকিৎসা করা হয়েছে এবং ফ্লো সাইটোমেট্রির মাধ্যমে তাদের রূপবিদ্যা পরীক্ষা করে।

2.1.1। ভর স্পেকট্রোমেট্রি (MS) দ্বারা SIPS মূল্যায়ন

SIPS ইনডাকশন মূল্যায়ন করার জন্য, আমরা H2O2-চিকিত্সা করা NHDF কোষ বনাম চিকিত্সা না করা কোষগুলির মোট প্রোটিওমের তুলনা করেছি৷ 3256 টি প্রোটিনের মধ্যে যেগুলি নিয়ন্ত্রণমুক্ত করা হয়েছিল, সেন্সেসেন্সের বেশ কয়েকটি বায়োমার্কার উল্লেখযোগ্যভাবে পরিবর্তিত হয়েছে (চিত্র 2A, B)। প্রথমত, আমরা সেনসেন্ট কোষের বহুল ব্যবহৃত বায়োমার্কার, 'senescence-associated-ß-galactosidase' (SA- -gal, GLB1) এর আপগ্র্যুলেশন পর্যবেক্ষণ করেছি। লাইসোসোমাল এনজাইম GLB1 এবং টিস্যু আলফা-এল-ফুকোসিডেস (FUCA1) এর বর্ধিত মাত্রা, যা MS দ্বারা আপগ্রিগুলেটেড পাওয়া গেছে, সেনসেন্ট কোষের লাইসোসোমাল বিষয়বস্তুর বৈশিষ্ট্যগত বৃদ্ধিকে প্রতিফলিত করে [23,24]। প্রকৃতপক্ষে, লাইসোসোমগুলি ক্যাটাবলিক প্রক্রিয়াগুলিকে সমর্থন করে, যা সেন্সেসেন্স-সম্পর্কিত ক্ষরণের জন্য প্রয়োজনীয় শক্তি এবং কাঁচামাল সরবরাহ করে [25]।

দ্বিতীয়ত, ডিডিআর সিগন্যালিংয়ে জড়িত সেরিন/থ্রোনাইন-প্রোটিন কিনেস এটিআর এবং সেরিন-প্রোটিন কিনেস এটিএম-এর প্রোটিন স্তরও বৃদ্ধি পাওয়া গেছে [২৬]। ডিডিআর পারমাণবিক ডিএনএ ক্ষতি দ্বারা সক্রিয় হয়, সাধারণত সেলুলার সেন্সেসেন্স প্রতিষ্ঠার সাথে যুক্ত থাকে এবং এটি টিউমার দমনকারী p53 সক্রিয়করণে রূপান্তরিত হয়। এটি ছাড়াও, হিস্টোন 2A রূপগুলি MACROH2A1 এবং MACRO2A2-এর আপগ্র্যুলেশনও পরিলক্ষিত হয়েছে। এই প্রোটিনগুলি সেনেসেন্স অ্যাসোসিয়েটেড হেটেরোক্রোমাটিন ফোসি (SAHFs) এর ATR-নির্ভর গঠনে অংশগ্রহণ করে, ঘন এবং দমনমূলক ক্রোমাটিন কাঠামো সেনসেন্ট কোষের বৈশিষ্ট্য [1,2,27]।

অবশেষে, সাইক্লিন-নির্ভর কেনাজ ইনহিবিটর 1A বা p21 (CDK1NA) এবং প্রসারণ চিহ্নিতকারী প্রোটিন কি-67 (MKI67) এর নিয়ন্ত্রণহীন স্তরগুলি G2 ফেজে [২৮,২৯] সেনসেন্ট কোষ চক্র গ্রেপ্তারকে প্রতিফলিত করে। প্রকৃতপক্ষে, p21 মাত্রা বৃদ্ধি করে, একটি DNA ক্ষতি-প্ররোচিত p53 পথ দ্বারা প্রচারিত হয় এবং CDK2-সাইক্লিন ই কমপ্লেক্সকে বাধা দেয়। এটি রেটিনোব্লাস্টোমা প্রোটিন (RB) এর ডিফোসফোরিলেশন ঘটায়, যা এর হাইপো-ফসফরিলেটেড অবস্থায় E2F কে আলাদা করে, একটি ট্রান্সক্রিপশনাল ফ্যাক্টর যা কোষ চক্রের অগ্রগতির পক্ষে থাকে [2]।

বার্ধক্যের এই ইতিমধ্যে পরিচিত মার্কারগুলির বাইরে, H2O2 চিকিত্সা করা বনাম কন্ট্রোল কোষগুলির মধ্যে সর্বাধিক আপগ্রেগুলেটেড প্রোটিনের একটি বিস্তৃত পাথওয়ে সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণ ডিএনএ ক্ষতি দ্বারা প্ররোচিত p53/p21 পাথওয়ে অ্যাক্টিভেশনের দিকে নির্দেশ করে (চিত্র 2C, টেবিল S2)। পরিবর্তে, প্রসারণ এবং মাইটোসিসের সাথে যুক্ত প্রোটিনগুলিকে নিয়ন্ত্রিত করা হয়, ফলস্বরূপ বিস্তারের গ্রেপ্তারের দিকে নির্দেশ করে (চিত্র 2D, টেবিল S3)।

2.1.2। ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা SIPS মূল্যায়ন

SIPS এছাড়াও প্রবাহ সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণ দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছে. সেনসেন্ট কোষে লাইসোসোমের সংখ্যা এবং আকার বৃদ্ধির কারণে আমরা H2O2-চিকিত্সা করা কোষের (চিত্র S1A, B) সাইটোপ্লাজমিক গ্রানুলারিটির বৃদ্ধি লক্ষ্য করেছি। এটি অকার্যকর লাইসোসোমগুলির ক্রমান্বয়ে জমা হওয়া এবং নতুনগুলির উত্পাদনের মধ্যে ভারসাম্যের ফলাফল [25]। তদুপরি, আমরা লিপোফুসিন অ্যাগ্রোসোমের একটি ইন্ট্রা-লাইসোসোমাল জমেও সনাক্ত করেছি: ফ্লো সাইটোমিটারের 525/50 এনএম ব্যান্ডপাস চ্যানেলে অটোফ্লুরোসেন্সের বৃদ্ধির সাথে যুক্ত এই বৃদ্ধিটি লাইসোসোমাল ত্রুটির সাথে সম্পর্কিত সেন্সেন্সের আরেকটি চিহ্নিতকারী (চিত্র S1, চিত্র ঘ) [30]।

2.2। ObHEx আংশিকভাবে পুনরুদ্ধার করা মাইটোটিক প্রোটিনগুলি সেনেসেন্ট এনএইচডিএফ কোষগুলিতে নিয়ন্ত্রণ করা হয়েছে

ObHEx চিকিত্সা আংশিকভাবে 71 টি প্রোটিনের মাত্রা পুনরুদ্ধার করতে সক্ষম হয়েছিল যা সেনসেন্ট অবস্থায় নিয়ন্ত্রণহীন ছিল (টু-ওয়ে আনোভা টেস্ট কিউ-মান < 0.05)। আরও স্পষ্টভাবে, 46 টি প্রোটিন নির্যাস দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল এবং 25টি আপ-নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল (চিত্র 3A, টেবিল S4 এবং S5)।

46 টি প্রোটিনের রিঅ্যাক্টোম সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণে পরামর্শ দেওয়া হয়েছে যে নির্যাসটি p53 পাথওয়ে অ্যাক্টিভেশন কমাতে পারে এবং ফসফ্যাটিডাইলিনোসিটল বিপাক এবং হেজহগ সিগন্যালিংকে প্রভাবিত করতে পারে, যার পরিবর্তনগুলি বার্ধক্য [31,32] (চিত্র 3B, টেবিল S6) এ পাওয়া গেছে।

25টি আপ-রেগুলেটেড প্রোটিন সম্পর্কে, সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণ মাইটোটিক কোষ চক্র পাথওয়ে পুনরায় সক্রিয়করণের দিকে নির্দেশ করে এবং বিশেষ করে, ডিএনএ আনওয়াইন্ডিং এবং প্রতিলিপি, ক্রোমোজোম ঘনীভবন এবং বোন ক্রোমাটিডের রেজোলিউশনের দিকে নির্দেশ করে (চিত্র 3C, টেবিল S7)।

একটি গভীর বিশ্লেষণ দেখায় যে 25টি পুনরুদ্ধার করা প্রোটিনগুলির মধ্যে 18টি দৃঢ়ভাবে একত্রিত হয় (চিত্র 4A)। এই ক্লাস্টারে, CDK1, কনডেনসিন I কমপ্লেক্সের সমস্ত সাবইউনিট (SMC2, SMC4, NCAPD2, NCAPH, এবং NCAPG), তিনটি কাইনেটোকোর-সম্পর্কিত প্রোটিন (KNTC1, NUF2, এবং TRIP13), সমস্ত ছয়টি সাবইউনিট সনাক্ত করা সম্ভব। IQGAP3, PBK, এবং DHFR এর সাথে একত্রে প্রতিলিপিমূলক মিনিক্রোমোসোম রক্ষণাবেক্ষণ (MCM) কমপ্লেক্স (MCM2-7)।

ObHEx-এর এই প্রোটিনের স্তরগুলিকে আংশিকভাবে পুনরুদ্ধার করার ক্ষমতা চিত্র 4B-এর প্রোফাইল প্লটে ভালভাবে দেখানো হয়েছে: প্রোটিন এক্সপ্রেশনের মাত্রা বেশিরভাগই অপরিবর্তিত ছিল প্রসারিত কোষগুলিতে যা নির্যাস দিয়ে চিকিত্সা করা হয় বা না করা হয়, সেন্সেন্ট কোষে নেমে যায় এবং আংশিকভাবে বৃদ্ধি পায়। ObHEx চিকিত্সা।

2.3। বায়োলজিক্যাল অ্যাসেস ওএইচএক্স প্রোমিটোটিক মেকানিজম অফ অ্যাকশনকে নিশ্চিত করেছে

সেনসেন্ট কোষের সবচেয়ে সাধারণ বৈশিষ্ট্য হল SA{{0}}গালের কার্যকলাপের বৃদ্ধি যা একটি স্টেনিং অ্যাস দ্বারা মূল্যায়ন করা যেতে পারে। আমাদের ফলাফলগুলি দেখায় যে H2O2 চিকিত্সা SA- -গাল পজিটিভ কোষের সংখ্যা (নীল), 4.7 শতাংশ থেকে 22.9 শতাংশে (চিত্র 5A, B) উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি ঘটায়। ObHEx ইনকিউবেশন উল্লেখযোগ্যভাবে SA- -গালের কার্যকলাপকে 38.4 শতাংশ হ্রাস করে (p <0.01)।

অধিকন্তু, ObHEx দ্বারা মাইটোটিক প্রোটিন এক্সপ্রেশনের পুনরুদ্ধার কোষ চক্রের পুনরায় সক্রিয়করণে অনুবাদ করে কিনা তা মূল্যায়ন করার জন্য, নিয়ন্ত্রণ এবং সেনসেন্ট কোষগুলিকে 72 ঘন্টার জন্য নির্যাস দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল বা না এবং ফ্লুরোসেন্স অ্যাক্টিভেটেড সেল সর্টিং (FACS) পরীক্ষা করা হয়েছিল। সেনসেন্ট সেলের ফলাফলগুলি কোষ চক্রের G2/M পর্যায়গুলিতে একটি ব্লক দেখায় (36.8 শতাংশ), যখন নিয়ন্ত্রণ কোষগুলির শুধুমাত্র একটি খুব কম ভগ্নাংশ (7.2 শতাংশ) এই পর্যায়ে ছিল যেহেতু তারা সঙ্গমে পৌঁছেছে, সাহিত্য অনুসারে [ 33] (চিত্র 5C, D)। ObHEx দিয়ে সেন্সেন্ট কোষের চিকিৎসা G2/M জনসংখ্যাকে 4.3 শতাংশ কমাতে সক্ষম হয়েছিল (p < 0.05)। লক্ষণীয়, যখন SIPS (22.9 শতাংশ) এর পরে সেন্সেসেন্স সেল অংশের সাথে সম্পর্কিত, G2/M এস্কেপ 18.9 শতাংশ অনুমান করা যেতে পারে। 48 ঘন্টার জন্য একই ObHEx চিকিত্সা করা হয়েছে, তবে ফলাফলগুলি পরিসংখ্যানগতভাবে উল্লেখযোগ্য ছিল না।

【আরো তথ্যের জন্য:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】