বর্তমান গবেষণায়, গ্যালাকটান এক্সোপোলিস্যাকারাইড (ইপিএস) থেকেসিস্তানচেKR780676 এর সম্ভাব্যতার জন্য মূল্যায়ন করা হয়েছিলঅক্সিডেটিভ স্ট্রেস উপশম করুনইন ভিট্রো অ্যাসেস এবং ভিভো স্টাডিতে, স্যাকারোমাইসেস সেরেভিসিয়া (বন্য ধরনের) এবং এর ব্যবহারঅ্যান্টিঅক্সিডেন্ট(sod14, sod24, tsa14, cta2, এবং ctt12)অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক(pep4 এবং fs14) এবংবিরোধী পক্বতা(sod24, tsa1, এবং ctt12)) আইসোজেনিক জিন অপসারণ মিউট্যান্ট। গ্যালাকটান শক্তিশালী ডিপিপিএইচ প্রদর্শন করেছে এবংনাইট্রিক অক্সাইড স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপযথাক্রমে 450 এবং 138 ug/mL এর lCso মান সহ। ইস্ট মিউট্যান্ট মডেলে, H,0. দ্বারা উত্পন্ন অক্সিডেটিভ স্ট্রেস ব্যাপকভাবে গ্যালাকটান দ্বারা মাঝারিভাবে স্ক্যাভেঞ্জ করা হয়েছিল যেমন স্পট অ্যাসেস ব্যবহার করে নিশ্চিত করা হয়েছে এবং ফ্লুরোসেন্ট ডিসিএফ-ডিএ স্টেনিং এবং মাইক্রোস্কোপিক স্টাডি। গ্যালাকটান চিকিত্সার ফলে ইস্ট মিউট্যান্ট কোষে উৎপন্ন ROS হ্রাস পেয়েছে যেমনটি ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা হ্রাস দ্বারা প্রদর্শিত হয়েছে। তদ্ব্যতীত, গ্যালাকটান ইস্ট মিউট্যান্ট স্ট্রেনের (pep4 এবং fs1) ​​মধ্যে H,O, -প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিস প্রতিরোধের মাধ্যমে অক্সিডেটিভ ক্ষতির বিরুদ্ধে সুরক্ষা প্রদর্শন করে যা অক্সিডেটিভ স্ট্রেসকে নিরপেক্ষ করে বেঁচে থাকার হার বৃদ্ধি করে। কালানুক্রমিক লাইফ স্প্যান অ্যাসে, গ্যালাকট্যানইপিএস দিয়ে চিকিত্সা করা ডাব্লুটি কোষগুলি কার্যক্ষমতার 8 শতাংশ বৃদ্ধি দেখিয়েছে যেখানে sod2 মিউট্যান্ট 10-15 শতাংশ বৃদ্ধি দেখিয়েছে যা উচ্চারিত অ্যান্টি-এজিং প্রভাব নির্দেশ করে। ডাব্লু. কনফিউজ KR780676 থেকে Galactan-এর পুষ্টিকর, ফার্মাসিউটিক্যাল এবং খাদ্য প্রযুক্তিগত প্রয়োগের জন্য প্রাকৃতিক অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট হিসেবে ব্যবহার করার অপার সম্ভাবনা রয়েছে। আমাদের জ্ঞান অনুসারে, এটি একটি খামির মুছে ফেলা মডেল সিস্টেমে অ্যাকটেরিয়া ইপিএস-এর ভিভো অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্যগুলির গভীরভাবে মূল্যায়নের প্রথম প্রতিবেদন।

Cistanche সমৃদ্ধ EPS পেতে ক্লিক করুন

অক্সিডেশন জৈবিক প্রক্রিয়া বজায় রাখার জন্য এবং সমস্ত জীবন্ত প্রাণীর শক্তি উৎপাদনের জন্য একটি অপরিহার্য প্রক্রিয়া। প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) এবং প্রতিক্রিয়াশীল নাইট্রোজেন প্রজাতি (RNS) র্যাডিকালগুলি যথাক্রমে অক্সিজেন এবং নাইট্রোজেন অণুর স্বাভাবিক বিপাক থেকে উত্পাদিত হয়। গুরুতর অক্সিডেটিভ স্ট্রেস ডিএনএ ক্ষতি, সেলুলার অবক্ষয় এবং কার্সিনোজেনেসিসের মতো বিভিন্ন অবক্ষয়কারী অবস্থার দিকে পরিচালিত করে। এর ফলে অনেক স্বাস্থ্যের প্রতিবন্ধকতা দেখা দিতে পারে যেমনবার্ধক্য, কার্ডিওভাসকুলার রোগ, ক্যান্সার, সিরোসিস, এথেরোস্ক্লেরোসিস, ডায়াবেটিসএবং রিউম্যাটয়েড আর্থ্রাইটিস2-6, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট হল এমন অণু যা খাদ্য বা জীবন ব্যবস্থায় উত্পন্ন ফ্রি র্যাডিকেলগুলিকে অপসারণ করে এবং অক্সিডেটিভ ক্ষতি-সম্পর্কিত স্বাস্থ্য পরিস্থিতি প্রতিরোধ করে-9৷ যদিও অনেক সিন্থেটিক অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট শক্তিশালী র‌্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জার হিসাবে পাওয়া যায়, তাদের মধ্যে কিছু কিছু অবাঞ্ছিত পার্শ্বপ্রতিক্রিয়ার সাথে যুক্ত হয়েছে। এই পরিপ্রেক্ষিতে, খাদ্য এবং ওষুধ শিল্পে প্রাকৃতিক অ্যান্টিঅক্সিডেন্টগুলির জন্য আগ্রহ এবং চাহিদা বৃদ্ধি পেয়েছে। বেশিরভাগ উদ্ভিদ এবং মাশরুম-ভিত্তিক পলিস্যাকারাইডগুলি ROS11-21 এর বিরুদ্ধে উল্লেখযোগ্য প্রতিরক্ষামূলক এজেন্ট হিসাবে রিপোর্ট করা হয়েছে। ল্যাকটিক অ্যাসিড ব্যাকটেরিয়া (LAB) সহ বিভিন্ন মাইক্রোবিয়াল এক্সোপোলিস্যাকারাইড (ইপিএস) তাদের যথেষ্ট অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্যের জন্য রিপোর্ট করা হয়েছে। এগুলিকে সিন্থেটিকগুলির নিরাপদ বিকল্প হিসাবে বিবেচনা করা হয়। সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, LAB থেকে অনেক EPS তাদের অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সম্ভাবনা এবং অক্সিডেটিভ ক্ষতি প্রতিরোধের জন্য অধ্যয়ন করা হয়েছে 22,23। ওয়েইসেলা ইপিএস-এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সম্ভাবনা এবং প্রতিরক্ষামূলক ভূমিকাও রিপোর্ট করা হয়েছে ওয়েইসেল্লা থেকে বিচ্ছিন্ন বিভিন্ন ইপিএস থেকে সিস্তানচে ইপিএসডব্লিউসি, ডব্লিউ কনফুসা ওএফ126, ডব্লিউ সিবারিয়া GA44, ডব্লিউ সিবারিয়া ওয়াইবি-1, ডব্লিউ কনফুসা ডব্লিউ4 এবং ডব্লিউ সিবারিয়া এসজে১৪২৪–২৯। ভিভোতে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্যগুলি বিভিন্ন মডেল সিস্টেম ব্যবহার করে অধ্যয়ন করা যেতে পারে যেমন সেল লাইন 30, সি. এলিগ্যান্স31, ইস্ট32 এবং মাইস33। পূর্বে, Saccharomyces cerevisiae yeast gen deletion mutant model system32,34–37 ব্যবহার করে বিভিন্ন যৌগ তাদের সম্ভাব্য অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্যের জন্য স্ক্রীন করা হয়েছে।

এই গবেষণা উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করা হয়গ্যালাকটান ইপিএসের অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সম্ভাবনাপ্রোবায়োটিক স্ট্রেন Cistanche KR780676 দ্বারা উত্পাদিত একটি ভারতীয় ঐতিহ্যবাহী গাঁজনযুক্ত খাবার (ইডলি বাটা) 38,39 থেকে। এই কাগজে, DPPH, নাইট্রিক অক্সাইড, এবং হাইড্রোক্সিল র‌্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জিং অ্যাসেস ব্যবহার করে এবং ভিভো অ্যান্টিঅক্সিডেন্টে ভিট্রো অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সম্ভাবনার জন্য গ্যালাকটান ইপিএস পরীক্ষা করা হয়েছে,অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিকএবংবিরোধী বার্ধক্য বৈশিষ্ট্যখামির জিন অপসারণ মিউট্যান্ট মডেল সিস্টেম ব্যবহার করে।

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

মিডিয়া সম্পূরক সহ সমস্ত রাসায়নিক হাই-মিডিয়া ল্যাবরেটরিজ প্রাইভেট লিমিটেড থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল। Ltd., India, এবং DCF-DA (2,7 Dichlorodihydrofuorescein diacetate) সিগমা থেকে।

মাইক্রোবিয়াল সংস্কৃতি।সিস্তানচেKR780676 একটি ভারতীয় অম্লীয় গাঁজনযুক্ত খাবার (ইডলি বাটা) থেকে বিচ্ছিন্ন, গ্যালাকটান ইপিএস তৈরির জন্য রিপোর্ট করা এই বর্তমান গবেষণায় 38 ব্যবহার করা হয়েছিল।

ইপিএস উত্পাদন সনাক্তকরণ। উপনিবেশ স্তর থেকে ডব্লিউ কনফুসার Te EPS উৎপাদন পরিলক্ষিত হয়েছে। সংক্ষেপে, স্ট্রেনটি এমআরএস আগর (2 শতাংশ সুক্রোজের সাথে পরিপূরক) এর উপর সংস্কৃতি করা হয়েছিল। 30 ডিগ্রীতে 48 ঘন্টা পরে, চিকন/মিউকাস কলোনির উপস্থিতি পরিলক্ষিত হয়। স্ক্যানিং ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি (SEM) বিশ্লেষণের অধীনে গ্যালাকটান ইপিএসের উত্পাদন আরও যাচাই করা হয়েছিল।

ইপিএস নিষ্কাশন। কবিতাকে এট আল.৩৮-এ বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে ইপিএস নিষ্কাশন প্রক্রিয়া সম্পাদিত হয়েছিল। স্থির অবস্থার অধীনে 48 ঘন্টার জন্য 30 ডিগ্রিতে 2 শতাংশ সুক্রোজ-বর্ধিত এমআরএস মিডিয়ামে W. কনফুসার তাজা ইনোকুলাম (10 শতাংশ) যোগ করা হয়েছিল। সাসপেনশনটি এইভাবে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল (15 মিনিটের জন্য 12,000×g) জৈববস্তুকে বিচ্ছিন্ন করার জন্য এবং প্রোটিনের অংশগুলি দূর করার জন্য ট্রাইক্লোরো অ্যাসিডিক অ্যাসিড দিয়ে আরও চিকিত্সা করা হয়েছিল। গ্যালাকটান-ইপিএস বরফ-ঠান্ডা ইথানল (আয়তনের তিনগুণ), সেন্ট্রিফিউজড (15 মিনিটের জন্য 19,200×g) ব্যবহার করে প্ররোচিত হয়েছিল এবং ফলস্বরূপ EPS মিলি-কিউ জলে দ্রবীভূত হয়েছিল। অপরিশোধিত ইপিএস 12-14 kDa (48 h, 4 ডিগ্রি) এ ডায়ালাইজ করা হয়েছিল এবং 48 ঘন্টার জন্য লাইওফিলাইজেশনের মাধ্যমে ফ্রিজে শুকানো হয়েছিল।

গ্যালাকটান ইপিএস-এর ইন ভিট্রো অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্য। গ্যালাকট্যানের জন্য DPPH অ্যাস ইয়ে এট আল.9 এর পূর্ববর্তী প্রতিবেদন অনুসারে কার্যকর করা হয়েছিল এবং শতাংশ স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ ( শতাংশ) নিম্নলিখিত সমীকরণ দ্বারা গণনা করা হয়েছিল।

যেখানে Ao এবং As হল নিয়ন্ত্রণের শোষণ (খালি, EPS ছাড়া) এবং নমুনা যথাক্রমে। গ্যালাক্টানের জন্য নাইট্রিক অক্সাইড (NO) র্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জিং অ্যাস শ্রীজায়ান এট আল.৪০ অনুসারে সম্পাদিত হয়েছিল এবং নিম্নলিখিত সমীকরণ হিসাবে গণনা করা হয়েছিল,

যেখানে Ao হল কন্ট্রোলের শোষণ (খালি, ইপিএস ছাড়া) এবং ইপিএসের উপস্থিতিতে যেমন শোষণ হয়। ইয়ে এট আল। Te শোষণ 700 এনএম এ পড়া হয়েছিল এবং হ্রাসকারী সম্ভাব্য প্রতিক্রিয়া মিশ্রণের উচ্চ শোষণ ক্ষমতা দ্বারা নির্দেশিত হয়। অ্যাসকরবিক অ্যাসিড (ভিসি) একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। ইয়াং এট আল.৪১ দ্বারা বর্ণিত গ্যালাকটান ইপিএস-এর হাইড্রক্সিল র‌্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপকে মূল্যায়ন করা হয়েছে। Te শোষণ 536 এনএম এ পড়া হয়েছিল এবং স্ক্যাভেঞ্জিং শতাংশ হিসাবে গণনা করা হয়েছিল:

যেখানে একটি নমুনা হল নমুনার শোষণ, একটি ফাঁকা হল একটি নমুনা এবং H2O2 দ্রবণের অনুপস্থিতিতে একটি শোষণ, এবং একটি নিয়ন্ত্রণ হল নমুনার অনুপস্থিতিতে একটি শোষণ

খামির মিউট্যান্ট স্ট্রেনে গ্যালাকটান ইপিএস-এর ভিভো অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্য।

The Yeast, S. cerevisiae, BY4741 বন্য প্রকার (WT) (MATa his3∆:leu2∆:met15∆:ura3∆), এবং জিন অপসারণ মিউট্যান্ট স্ট্রেন থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল। মিউট্যান্ট নির্বাচনের জন্য 200 μg/mL জেনেটিসিন (G418 সালফেট) এর সাথে বা ছাড়া সম্পূরক ইস্ট পেপটোন ডেক্সট্রোজ (YPD) মাধ্যমে খামিরের স্ট্রেন জন্মানো হয়েছিল। YPD কঠিন মাধ্যমটি YPD লিকুইড মিডিয়ামে 2 শতাংশ ব্যাক্টো আগর যোগ করে প্রস্তুত করা হয়েছিল।

খামির বৃদ্ধির উপর EPS এর প্রভাব। দ্রুতগতিতে ক্রমবর্ধমান ইস্ট ওয়াইল্ড টাইপ (ডব্লিউটি) সংস্কৃতি (প্রায় 1×104 কোষ) একটি মাইক্রোওয়েল প্লেটে বিভিন্ন ঘনত্ব (0–400 ug/mL) EPS দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল এবং চূড়ান্ত আয়তন 200 পর্যন্ত করা হয়েছিল। YPD ঝোল সঙ্গে μL। টি কালচারটি 18 ঘন্টার জন্য 30 ডিগ্রিতে ইনকিউব করা হয়েছিল এবং তারপরে সিরিয়াল ডিলিউশন এবং ওয়াইপিডি আগর প্লেটে ছড়িয়ে দেওয়া হয়েছিল। Te প্লেটগুলি 2 দিনের জন্য 30 ডিগ্রীতে ইনকিউব করা হয়েছিল এবং কলোনি গঠনের ইউনিট (CFUs) গণনা করা হয়েছিল এবং কার্যকারিতা শতাংশ CFU43 হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল।

অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের বায়োমার্কারের পরিমাপ। দ্রুত ক্রমবর্ধমান ইস্ট ডাব্লুটি কোষগুলিকে 2 ঘন্টার জন্য 300 ug/ml EPS দিয়ে বা ছাড়াই পূর্ব-চিকিত্সা করা হয়েছিল। দশটি কোষ একটি শেকার ইনকিউবেটরে 30 ডিগ্রীতে 1 ঘন্টার জন্য 1 mM H2O2 এর সংস্পর্শে এসেছিল এবং পূর্ববর্তী প্রতিবেদনে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে SOD কার্যকলাপ এবং লিপিড পারঅক্সিডেশন মাত্রা পরিমাপের জন্য প্রক্রিয়া করা হয়েছিল 44-46

S. cerevisiae gene deletion mutants-এ EPS-এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সম্পত্তি।

ইস্ট ডব্লিউটি এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-ঘাটতি মিউট্যান্ট স্ট্রেনের দ্রুত ক্রমবর্ধমান সংস্কৃতি (sod1∆, sod2∆, tsa1∆, cta1∆, ctt1∆, glr1∆ , এবং yhb1∆) 300 ug/med থেকে Eposed অনুসরণ করার জন্য 300 ug/med দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। 1 ঘন্টার জন্য 1 মিমি H2O2। সিরিয়ালি মিশ্রিত কোষগুলি YPD আগর প্লেটে ছড়িয়ে দেওয়া হয়েছিল, 30 ডিগ্রিতে 2 দিনের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল এবং কার্যকারিতা গণনা করা হয়েছিল। স্পট অ্যাসের জন্য, কালচারগুলিকে ক্রমাগতভাবে 10- ভাঁজে পাতলা করা হয়েছিল, যার মধ্যে 4 μL YPD আগর প্লেটে দেখা গিয়েছিল এবং 2 দিনের জন্য 30 ডিগ্রিতে ইনকিউব করা হয়েছিল এবং 43,47 ছবি তোলা হয়েছিল৷ ROS সনাক্তকরণ এবং পরিমাপ। দ্রুত বর্ধনশীল WT এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-ঘাটতি মিউট্যান্ট স্ট্রেন (sod1∆, sod2∆, tsa1∆, cta1∆ , এবং ctt1∆) 2 ঘন্টার জন্য ইপিএস সহ বা ছাড়াই প্রিট্রিট করা হয়েছিল এবং 30 ডিগ্রিতে 1 ঘন্টার জন্য 1 মিমি H2O2 এর সংস্পর্শে এসেছিল। 5 মিনিটের জন্য 5000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউগেশনের জন্য সেল পেলেটগুলি পিবিএস বাফার দিয়ে দুবার ধোয়া হয়েছিল, পিবিএসের 200 μL এ পুনরায় স্থগিত করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় 15-20 মিনিটের জন্য অন্ধকারে 20 μM DCF-DA দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। ইনকিউবেশনের পরপরই, কোষগুলি পিবিএস দিয়ে দুবার ধোয়া হয়েছিল, স্লাইডে মাউন্ট করা হয়েছিল এবং একটি নীল ফিল্টার ব্যবহার করে 40 × উদ্দেশ্যের অধীনে একটি অলিম্পাস Ix71 ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের অধীনে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। ROS-এর পরিমাপের জন্য, DCF DA দাগযুক্ত কোষগুলি ধোয়ার পরে PBS-এর 200 μL-এ পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল এবং 495/529 এনএম-এর উত্তেজনা সর্বাধিক এবং নির্গমন তরঙ্গদৈর্ঘ্যে একটি স্পেকট্রোফ্লোরোমিটার ব্যবহার করে ডিসিএফ ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা পরিমাপ করা হয়েছিল। ফ্লুরোসেন্স ইউনিটগুলি প্রতিটি চিকিত্সা এবং চিকিত্সাবিহীন সংস্কৃতির বিরুদ্ধে প্লট করা হয়েছিল এবং 48,49 এর তুলনা করা হয়েছিল।

গ্যালাক্টানের অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক কার্যকলাপ।

স্পট এবং CFU assays. দ্রুত বেড়ে ওঠা ডব্লিউটি এবং অ্যান্টি-অপপ টটিক-ডেফিসিয়েন্ট মিউট্যান্ট (পেপ4∆ এবং এফএস1∆) কোষগুলিকে ইপিএস দিয়ে প্রাক-চিকিত্সা করা হয়েছিল এবং 2 ঘন্টার জন্য সংশ্লিষ্ট চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণের সাথে ইনকিউব করা হয়েছিল। CFU গণনার জন্য, সংস্কৃতিগুলিকে 2 ঘন্টার জন্য EPS দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল বা চিকিত্সা করা হয়নি এবং 1 ঘন্টার জন্য 0.5 মিমি H2O2 দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। প্রতিটি ধারাবাহিকভাবে মিশ্রিত সংস্কৃতি YPD আগর প্লেটে ছড়িয়ে দেওয়া হয়েছিল এবং 2 দিনের জন্য 30 ডিগ্রীতে ইনকিউব করা হয়েছিল এবং কোষের কার্যক্ষমতা শতাংশ CFU হিসাবে উপস্থাপিত হয়েছিল। স্পট অ্যাসের জন্য, 1 মিমি H2O2 সহ বা ছাড়া YPD আগর প্লেটগুলিতে দাগ দেওয়ার পরে সিরিয়াল পাতলা করার জন্য সংস্কৃতিগুলি অনুমোদিত হয়েছিল। প্লেটগুলি 2 দিনের জন্য 30 ডিগ্রীতে ইনকিউব করা হয়েছিল এবং 47 ছবি তোলা হয়েছিল।

ইপিএস-এর একটি অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক মার্কার সনাক্তকরণ

খামির মিউট্যান্ট স্ট্রেন ব্যবহার করে। খামিরে হাইড্রোজেন পারক্সাইড দ্বারা প্ররোচিত অ্যাপোপটোটিক কোষের মৃত্যু থেকে খামির কোষগুলিতে ইপিএসের উদ্ধার ক্রিয়া আরও নিশ্চিত করার জন্য, ডাব্লুটি এবং অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক ঘাটতি মিউট্যান্ট স্ট্রেন (পেপ4∆ এবং এফএস1∆) অ্যাপোপটোসিস মার্কারগুলির জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল। দ্রুত বর্ধনশীল WT, pep4∆ এবং fs1∆ কোষগুলিকে 2 ঘন্টার জন্য 300 μg/mL EPS দিয়ে চিকিত্সা বা চিকিত্সা করা হয়নি এবং তারপর 1 ঘন্টার জন্য 1 mM H2O2 এর সংস্পর্শে এসেছে। চিকিত্সা করা এবং চিকিত্সা না করা উভয় কোষই অ্যাক্রিডিন কমলা এবং ইথিডিয়াম ব্রোমাইড (AO/EB) দিয়ে দাগযুক্ত ছিল এবং ক্রোমাটিন ঘনীভবনের জন্য একটি ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোস্কোপের নীচে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল 50,51। DAPI স্টেনিংয়ের জন্য, চিকিত্সা করা এবং চিকিত্সা না করা কোষগুলিকে 4 শতাংশ প্যারাফর্মালডিহাইড দিয়ে স্থির করা হয়েছিল এবং 1 ug/mL DAPI দিয়ে ঘরের তাপমাত্রায় অন্ধকারে 5-10 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। সেলগুলি পিবিএস দিয়ে ধোয়ার পরে স্লাইডগুলিতে মাউন্ট করা হয়েছিল এবং পারমাণবিক বিভাজনের জন্য অলিম্পাস IX71 ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ (UV ফিল্টার, 40× উদ্দেশ্য) এর অধীনে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল 52,53৷

কালানুক্রমিক জীবনকাল অ্যাস দ্বারা ইপিএস-এর বিরোধী-বার্ধক্য প্রভাব।

ইস্ট ওয়াইল্ড টাইপ এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্টের ঘাটতি মিউট্যান্ট (sod2∆, tsa1∆ , এবং ctt1∆) সংস্কৃতিগুলি স্থির পর্যায়ে পৌঁছানোর জন্য জন্মানো হয়েছিল এবং কালানুক্রমিক জীবনকাল (CLS) পরীক্ষার জন্য EPS সহ বা ছাড়াই ইনকিউব করা হয়েছিল। 0 থেকে 30 দিন পর্যন্ত বিভিন্ন সময়ের ব্যবধানে প্রতিটি স্ট্রেইনের বেঁচে থাকার ক্ষমতা গণনা করা হয়েছিল। কোষের কার্যক্ষমতা 54,55 উভয় চিকিত্সা এবং চিকিত্সা না করা সংস্কৃতির জন্য শতাংশ CFU হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ. সমস্ত পরীক্ষা-নিরীক্ষা ট্রিপ্লিকেট (±SD)-এ করা হয়েছিল এবং একমুখী ANOVA মডেলে IBM SPSS 20 সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে পরিসংখ্যানগতভাবে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। Tukey এর HSD তুলনা পরীক্ষা (p<0.05) was used to measure the significance level. 

ফলাফল এবং আলোচনা ল্যাকটিক অ্যাসিড ব্যাকটেরিয়া (ল্যাকটিক অ্যাসিড ব্যাকটেরিয়া (ল্যাব) গাঁজনযুক্ত খাবার থেকে বিচ্ছিন্ন করা তাদের প্রমাণিত প্রোবায়োটিক বৈশিষ্ট্যের কারণে গত কয়েক বছরে খাদ্য প্রযুক্তিবিদদের প্রচুর মনোযোগ আকর্ষণ করেছে। ভারতীয় গাঁজনযুক্ত খাবার থেকে বিচ্ছিন্ন ব্যাকটেরিয়াগুলির মধ্যে রয়েছে ল্যাকটোব্যাসিলাস এসপিপি।, ল্যাকটোকোকাস এসপিপি।, লিউকোনোস্টক এসপিপি। এবং কম অন্বেষণ করা Weisella spp. অন্যান্য উপকারী LAB-এর মতো, Cistanche স্ট্রেন KR780676 যা আমাদের ল্যাবে ফার্মেন্টেড ইডলি ব্যাটার থেকে বিচ্ছিন্ন ছিল তা সম্ভাব্য প্রোবায়োটিক প্রার্থী হিসেবে কাজ করে বলে জানা গেছে। পূর্ববর্তী প্রতিবেদনে, এই গ্যালাকটানকে রৈখিক হোমোপোলিস্যাকারাইড হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে এবং এর ভৌত রাসায়নিক, কার্যকরী এবং ইমালসিফাইং বৈশিষ্ট্যগুলির জন্যও স্ক্রীন করা হয়েছে38,56-58। আমরা আরও রিপোর্ট করেছি যে W. confusa KR780676 এর কোষ এবং কোষের সুপারন্যাট্যান্টগুলি শক্তিশালী অ্যান্টি-অক্সিডেন্ট কার্যকলাপ দেখায়39। W. confusa KR780676 থেকে EPS উৎপাদন এমআরএস আগর প্লেটে 2 শতাংশ সুক্রোজ সমৃদ্ধ, 48 ঘন্টা (চিত্র 1A-i) জন্য ইনকিউবেট করা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল, যা ওয়েইসেলা স্লিমি কলোনিগুলি প্রকাশ করে এবং এটি SEM ছবিতে (ওয়েইসেলা কলোনির) আরও নিশ্চিত হয়েছিল। কোষের সাথে গ্যালাকটান ইপিএসের উপস্থিতি দেখায় (চিত্র 1A-ii)। ধাপে ধাপে ইপিএস উৎপাদন চিত্র 1বি-তে সচিত্র উপস্থাপনা সহ ওভারভিউ করা হয়েছে।

গ্যালাকটান ইপিএস-এর ইন ভিট্রো অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্য। চিত্র 2A-তে দেখানো হয়েছে, ডিপিপিএইচ স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপকে ঘনত্ব-নির্ভর হিসাবে পরিলক্ষিত হয়েছে, গ্যালাকটান ঘনত্বের সাথে স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ বৃদ্ধি পেয়েছে। অ্যাসকরবিক অ্যাসিডের অর্ধ-সর্বোচ্চ কার্যকর ঘনত্ব (IC50) ছিল 8.8 µg/mL, যেখানে গ্যালাকটান EPS ছিল 450 µg/mL। 1,1-ডিফেনাইল-2-পিক্রিলহাইড্রাজিল (ডিপিপিএইচ) একটি স্থিতিশীল মুক্ত র্যাডিকেল যা সামগ্রিকভাবে অণুর বিরুদ্ধে জোড়াবিহীন ইলেকট্রনগুলিকে ডিলোকালাইজ করে, এইভাবে অণুগুলিকে ডাইমারাইজেশন থেকে বাধা দেয় এবং এর ফলে গভীর বেগুনি রঙ 59 হয়। যখন DPPH দ্রবণটি গ্যালাকট্যানের বিভিন্ন ঘনত্বে (50 থেকে 500 μg/mL) যোগ করা হয়, তখন ঘনত্ব বৃদ্ধির সাথে সাথে এটি বেগুনি রঙের হ্রাসের জন্ম দেয়। অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট DPPH এর একটি ইলেক্ট্রনের সাথে বিক্রিয়া করলে, DPPH এর গভীর বেগুনি রঙ হালকা বেগুনি রঙে পরিণত হয়; এবং রঙের তীব্রতা সাবস্ট্রেট60 এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপের উপর নির্ভর করে। গ্যালাকটান 60 শতাংশ ডিপিপিএইচ স্ক্যাভেঞ্জিং সম্ভাব্যতা দেখিয়েছে যা এন্ডোফাইটিক ব্যাকটেরিয়াম পেনিব্যাসিলাস পলিমিক্সা ইজেএস থেকে ইপিএসের চেয়ে বেশি-3 (<45.40%)33.

নাইট্রিক অক্সাইড উৎপন্ন হয় যখন সোডিয়াম নাইট্রোপ্রসাইড 7.2 এর pH এ জলীয় দ্রবণে পচে যায়। নাইট্রেট এবং নাইট্রাইট বায়বীয় অবস্থার অধীনে উত্পাদিত হয় যখন নাইট্রিক অক্সাইড অক্সিজেন61 এর সাথে আবদ্ধ হয়। চিত্র 2B-তে দেখানো হয়েছে, গ্যালাকট্যানের সোডিয়াম নাইট্রোপ্রসাইড থেকে নাইট্রিক অক্সাইড উৎপাদন কমানোর সম্ভাবনা রয়েছে কারণ অর্ধ-সর্বোচ্চ কার্যকরী ঘনত্ব (IC50) হল 138 µg/mL, যখন স্ট্যান্ডার্ড অ্যাসকরবিক অ্যাসিড ছিল 11 µg/mL। চিত্র 2C-তে দেখানো হয়েছে, ইপিএস-এর হ্রাসকারী শক্তি কার্যকলাপ ক্রমবর্ধমান ক্রমে এর ঘনত্বের সাথে ইতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত। স্ট্যান্ডার্ড (অ্যাসকরবিক অ্যাসিড) গ্যালাকটান ইপিএসের তুলনায় উচ্চ হ্রাস ক্ষমতা দেখিয়েছে যা ইয়ে এট আল.৯ এর সাথে একমত ছিল। গ্যালাকটানের শক্তি কার্যকলাপ হ্রাস করা সম্ভাব্য অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ নির্দেশ করে। যখন গ্যালাকটান ইপিএস-এ পটাসিয়াম ফেরিসিয়ানাইড [K3Fe (CN)6] যোগ করা হয়, তখন এতে উপস্থিত অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট পটাসিয়াম ফেরিসিয়ানাইড [K4Fe(CN)6]-এ পরিণত হয়।

চিত্র 2. গ্যালাকটানের ইন ভিট্রো অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্য। (A) DPPH র‌্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ, (B) নাইট্রিক অক্সাইড অ্যাস, (C) শক্তি পরীক্ষা এবং (D) গ্যালাকটান ইপিএসের হাইড্রক্সিল র্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ।

গ্যালাকটানের হাইড্রক্সিল র্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ চিত্র 2D-এ দেখানো হয়েছে। Galactan সর্বোচ্চ কার্যকলাপ হিসাবে 41.93 শতাংশ দেখিয়েছে, যেখানে একই ঘনত্বে (1 mg/mL) মান অনুসারে 58.10 শতাংশ। ফলাফলের প্রবণতা Lactobacillus plantarum C88 (EPS-এর 4 mg/mL ঘনত্বের জন্য 85.21 শতাংশ) 62 এবং Paenibacillus polymyxa EJS-3 (1 mg/mL ঘনত্বের জন্য 68.55 শতাংশ EPS) 63-এর পূর্ববর্তী রিপোর্টগুলির সাথে একমত। মানগুলির সাথে তুলনা করে, গ্যালাকটান 72.16 শতাংশ দক্ষতা দেখিয়েছে যেখানে ল্যাকটোব্যাসিলাস প্লান্টারাম C8862 এবং পেনিব্যাসিলাস পলিমাইক্সা EJS-363 থেকে EPS যথাক্রমে 95.19 এবং 68.55 শতাংশ দক্ষতা দেখিয়েছে।

একটি খামির মডেলে গ্যালাকটান ইপিএসের ভিভো অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্যে। পূর্বের রিপোর্টগুলি LAB64 থেকে প্রাপ্ত EPS-এর বিভিন্ন স্বাস্থ্য-উন্নয়নকারী জৈবিক বৈশিষ্ট্য যেমন অ্যান্টি-প্রলিফারেটিভ, অ্যান্টি-আলসার, কোলেস্টেরল-হ্রাসকারী, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি এবং ইমিউনোমোডুলেটরি কার্যকলাপগুলি দেখিয়েছে। এই দৃষ্টিভঙ্গিতে, ইপিএস দ্বারা বিস্তারিত অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রভাবের মূল্যায়ন করা গুরুত্বপূর্ণ হয়ে ওঠে যা তাদের প্রিবায়োটিক এবং/অথবা প্রোবায়োটিক সম্ভাব্যতাকে সমর্থন করতে পারে, প্রধানত অক্সিডেটিভ স্ট্রেস কমিয়ে অন্ত্রের হোমিওস্ট্যাসিস বজায় রাখতে। সেলুলার অ্যান্টি-অক্সিডেন্ট যন্ত্রপাতি গুরুত্বপূর্ণ সেলুলার বিপাকীয় পথের মাধ্যমে উত্পন্ন অনিবার্য ROS উপশম করতে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। কোষের সহজাত অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিরক্ষা এবং উৎপন্ন ROS-এর মধ্যে ভারসাম্যহীনতা কোষের জন্য খুবই ক্ষতিকর হতে পারে। গুরুতর অক্সিডেটিভ স্ট্রেস সেলুলার গুরুত্বপূর্ণ উপাদান, প্রোটিন, নিউক্লিক অ্যাসিড এবং লিপিড অণুগুলির সম্ভাব্য ক্ষতির কারণ হয় যা ফলস্বরূপ অনেকগুলি প্রয়োজনীয় সংকেত পথকে প্রভাবিত করে এবং অ্যাপোপটোসিসকে প্ররোচিত করে। অ্যান্টিঅক্সিডেন্টের খাদ্যতালিকায় সেলুলার ড্যামেজ মার্কারের ফ্রিকোয়েন্সি কম দেখানো হয়েছে যেমন ROS লেভেল, ROS-মিডিয়াটেড ডিএনএ ড্যামেজ, অ্যাপোপটোসিস এবং সেলুলার ট্রান্সফরমেশন যার ফলে বয়স-সম্পর্কিত ব্যাধির ঘটনা কম হয়65 মাইক্রোবিয়াল ইপিএস যেমন জ্যান্থান এবং লেভান্স। ইন ভিট্রো অ্যাসেস (DPPH এবং হাইড্রক্সিল র্যাডিকাল অ্যাসেস) 5 এবং মানব গ্যাস্ট্রিক ক্যান্সার কোষ BGC-823 এর বিরুদ্ধে যথাক্রমে 66-এ অ্যান্টি-অক্সিডেন্ট কার্যকলাপ প্রদর্শন করেছে। পূর্বে, এই গবেষণায়, আমরা মডেল জীব হিসাবে ইস্ট Saccharomyces cerevisiae BY4741 ব্যবহার করে W. confusa KR780676 থেকে বিচ্ছিন্ন গ্যালাকটান ইপিএস দ্বারা প্রয়োগ করা অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, অ্যান্টিঅ্যাপোপ্টোটিক এবং অ্যান্টিএজিং প্রভাবের মূল্যায়ন করেছি।

খামির বৃদ্ধির উপর EPS এর প্রভাব। ইপিএসের বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে চিকিত্সা করা ওয়াইল্ড-টাইপ ইস্ট কোষগুলি কোনও বৃদ্ধির ত্রুটি দেখায়নি যা নিশ্চিত করে যে গ্যালাকট্যান 0 থেকে 400 ug/mL (চিত্র 3A) এর মধ্যে যে কোনও ঘনত্বে কোনও সাইটোটক্সিসিটি বা বৃদ্ধির ত্রুটি সৃষ্টি করেনি ) 300 ug/mL বা গ্যালাকট্যানের উচ্চতর ঘনত্বের সাথে চিকিত্সা করা কোষগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে উচ্চতর বৃদ্ধি দেখায় যা ইঙ্গিত করে যে গ্যালাকট্যানের খামির বৃদ্ধি উদ্দীপক কার্যকলাপ রয়েছে।

300 ug/mL এর একটি গ্যালাকটান ঘনত্ব খামির স্ট্রেনগুলির সাথে পরবর্তী পরীক্ষার জন্য ব্যবহৃত হয়। Galactan SOD এনজাইমের কার্যকলাপ হ্রাস করে। গ্যালাকটান ইপিএস দ্বারা প্রদর্শিত শক্তিশালী ইন ভিট্রো অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ অনুসরণ করে, খামির ডাব্লুটি কোষে এসওডি কার্যকলাপের উপর এর প্রভাব পরীক্ষা করে। আমাদের ফলাফল (চিত্র 3B) দেখায় যে H2O2 চিকিত্সার দ্বারা প্ররোচিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেস চিকিত্সা না করা কোষের তুলনায় H2O2-চিকিত্সা করা WT কোষগুলির SOD কার্যকলাপে তীব্র বৃদ্ধি ঘটায়। বিপরীতে, ডাব্লুটি কোষের গ্যালাকটান প্রাক-চিকিত্সা এবং H2O2-এর সংস্পর্শে আসার ফলে SOD কার্যকলাপে ~ দ্বিগুণ হ্রাস পাওয়া যায় যেগুলি শুধুমাত্র H2O2 দ্বারা চিকিত্সা করা কোষের তুলনায় গ্যালাকটান খামির কোষগুলিকে সুপারঅক্সাইড র্যাডিকেল-প্ররোচিত অক্সিডেটিভ পরিচালনা করতে সাহায্য করে। চাপ47,67।

অক্সিডেটিভ স্ট্রেসপারক্সাইড চিকিত্সা দ্বারা প্ররোচিত সুপারঅক্সাইড এনজাইম সক্রিয় করে এবং SOD কার্যকলাপের স্তরে পরিবর্তন হল সেলুলার অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের স্তরের একটি সরাসরি পরিমাপ। এই গবেষণায়, এনবিটি হ্রাস পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল, যেখানে, এনবিটি সুপার অক্সাইড র্যাডিকাল উত্পাদনের একটি সূচক। এনবিটি হ্রাসের নিষেধাজ্ঞা হল SOD-এর একটি প্রত্যক্ষ পরিমাপ। যেহেতু এসওডি অক্সিজেন এবং মেথিওনিনের উপস্থিতিতে রাইবোফ্লাভিনকে দৃশ্যমান আলোতে উন্মুক্ত করে উত্পন্ন সুপারঅক্সাইড র্যাডিকেলের জন্য NBT-এর সাথে প্রতিযোগিতা করে, যা একটি ইলেক্ট্রন দাতা। সুপারঅক্সাইড এনবিটি একটি নীল রঙের পণ্যে কমিয়ে দেয়, ফরমাজান যা বর্ণমিত্রিকভাবে 560 এনএম এ পরিমাপ করা যায়।

পূর্ববর্তী প্রতিবেদনগুলি ইঙ্গিত করে যে LAB EPS একটি ঘনত্ব-নির্ভর পদ্ধতিতে ইন ভিট্রো অ্যাসেস এবং কোলন ক্যান্সার সেল লাইন এবং ভিভো মডেলগুলিতে একটি অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রভাব প্রয়োগ করেছে। ইপিএস-এর ROS কে স্ক্যাভেঞ্জ করার ক্ষমতা তাদের বিভিন্ন রাসায়নিক গ্রুপের জন্য দায়ী করা যেতে পারে68। Bacillus amyl liquefacient থেকে অন্যান্য EPS (500 µg/ml) SOD কার্যকলাপকে ব্যাপকভাবে প্রভাবিত করে এবং H2O2 68 দ্বারা প্ররোচিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে HepG2 কোষকে রক্ষা করতে দেখা গেছে। একইভাবে, এল. প্লান্টারাম থেকে ইপিএস H2O2-জনিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেস69 এর বিরুদ্ধে Caco2 কোষে SOD কার্যকলাপের উপর একটি ঘনত্ব-নির্ভর প্রভাব দেখিয়েছে। আমাদের ফলাফল, এই রিপোর্টগুলির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ দেখায় যে গ্যালাকটান ইপিএস প্রাক-চিকিত্সা খামির ডাব্লুটি কোষগুলিতে H2O2 চিকিত্সার দ্বারা প্ররোচিত সুপারঅক্সাইড র্যাডিকেলগুলিকে মেরে ফেলে।

ইপিএস সেলুলার লিপিড পারক্সিডেশন হ্রাস করে। ম্যালোন্ডিয়ালডিহাইড (MDA) হল সর্বাধিক অধ্যয়ন করা সেলুলার লিপিড পারক্সিডেশন বায়োমার্কার যা অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের মাত্রা নির্দেশ করে। এমডিএ একটি রাসায়নিকভাবে স্থিতিশীল, অত্যন্ত প্রতিক্রিয়াশীল ডায়ালডিহাইড এবং সহজেই প্রোটিন, নিউক্লিক অ্যাসিড এবং লাইপোপ্রোটিনের সাথে আবদ্ধ হতে পারে। এটি অত্যন্ত মিউটেজেনিক এবং এই জৈব অণুগুলির জৈব রাসায়নিক বৈশিষ্ট্যগুলিকে ব্যাপকভাবে প্রভাবিত করতে পারে যা বিভিন্ন সংকেত পথের জন্য ক্ষতিকর। MDA মাত্রা বৃদ্ধি ROS-প্ররোচিত টিস্যু ক্ষতির একটি সূচক এবং এর বর্ধিত মাত্রা বিভিন্ন মানব প্যাথলজিতে সনাক্ত করা হয়। এই গবেষণায়, ইপিএস প্রাক-চিকিত্সা কীভাবে ইস্ট ডাব্লুটি কোষগুলিতে H2O2 দ্বারা প্ররোচিত লিপিড পারক্সিডেশনকে প্রভাবিত করে তা পরীক্ষা করার জন্য, MDA স্তরগুলি অনুমান করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি চিত্র 3C-তে দেখানো হিসাবে শুধুমাত্র H2O2-এর সংস্পর্শে আসা কোষগুলির তুলনায় EPS-এর পূর্ব-চিকিত্সা করা কোষগুলিতে MDA স্তরে প্রায় 1.{7}} গুণ কমেছে৷

পূর্বে, L. Plantarum C88 থেকে EPS কে Caco2 কোষে ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে (50-200 ug/ml) H2O2 চিকিত্সার দ্বারা প্ররোচিত MDA মাত্রা কমাতে দেখা গেছে, যা নির্দেশ করে যে অন্ত্রের কোষগুলির পারক্সাইড-প্ররোচিত ঝিল্লির আঘাত। EPS69 (zhang 2013) এর পরিপূরক দ্বারা উপশম করা যেতে পারে। আরও, B. amyloliquefaciens থেকে 500 ug/mL EPS HepG2 কোষ71-এ H2O2-প্রেরিত MDA উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে। ইস্ট কোষে H2O2-প্রেরিত MDA মাত্রা এবং গ্যালাকটান ইপিএস-এর সাহায্যে কোষের প্রাক-চিকিত্সা করার পরে এর উল্লেখযোগ্য হ্রাস সম্পর্কে আমাদের ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে গ্যালাকটান ইপিএস-এর সাথে চিকিত্সা সেলুলার ROS-প্ররোচিত লিপিড পারক্সিডেশন হ্রাস করে এবং ফলস্বরূপ, এটি রক্ষা করতে পারে পেরোক্সাইড র্যাডিকেল দ্বারা সৃষ্ট টিস্যুর ক্ষতি থেকে কোষ এবং সেলুলার অখণ্ডতা বজায় রাখতে সহায়তা করে

পরীক্ষা * পি প্রতিনিধিত্ব করে<0.0001 a signifcant increase/decrease in EPS+ H2O2 treated samples compared to those treated with H2O2 alone.

গ্যালাকটান অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের অধীনে খামির অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট জিন মিউট্যান্টদের রক্ষা করে। গ্যালাকট্যানের অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা মূল্যায়ন করার জন্য, বিভিন্ন অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট জিনের ঘাটতিযুক্ত ইস্ট মিউট্যান্ট (যাতে বিভিন্ন অক্সিডেটিভ স্ট্রেস প্রতিক্রিয়া জিনের অভাব রয়েছে) গ্যালাকট্যান দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল এবং তারপরে H2O2 42 এর একটি উপ-প্রাণঘাতী মাত্রার সংস্পর্শে আনা হয়েছিল। SOD (sod1∆ এবং sod2∆), catalase (cta1∆ এবং ctt1∆), থিওরেডক্সিন পারক্সিডেস (tsa1∆), গ্লুটাথিয়ন রিডাক্টেস (glr1∆), এবং নাইট্রিক অক্সাইড অক্সিডোরেডাক্টেস (yhb1∆) যখন H2O2 মিউট্যান্টের সাথে চিকিত্সা করা হয়। কম বেঁচে থাকা দেখানো হয়েছে (sod1∆ 10.8 শতাংশ, sod2∆ 13.17 শতাংশ, tsa1∆ 13.55 শতাংশ, cta1∆ 15.34 শতাংশ, ctt1∆ 17.06 শতাংশ, glr1∆ 27.37 শতাংশ এবং W3837 শতাংশ)। বিপরীতে, গ্যালাকটান প্রাক-চিকিৎসার সাথে, সমস্ত অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট জিনের ঘাটতি মিউট্যান্টের অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের বিরুদ্ধে সহনশীলতা বৃদ্ধি পেয়েছে এবং তাদের কার্যকারিতা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে (sod1∆ 78.43 শতাংশ, sod2∆ 59.96 শতাংশ, cta1∆ 87 শতাংশ, ctt17 শতাংশ, ctt17 শতাংশ ∆ 72.73 শতাংশ, glr1∆ 75.26 শতাংশ এবং yhb1∆ 82.41 শতাংশ) চিত্র 4A-তে দেখানো হয়েছে। টিস ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে গ্যালাকটান কার্যকরভাবে H2O2 দ্বারা প্ররোচিত ফ্রি র্যাডিকেলগুলিকে নির্মূল করতে পারে যার মধ্যে নির্দিষ্ট অক্সিডেটিভ স্ট্রেস প্রতিক্রিয়া জিনের অভাব রয়েছে এবং কোষগুলিকে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে রক্ষা করে। অনুরূপ সুরক্ষা স্পট অ্যাসে পরিলক্ষিত হয়েছিল, যেখানে গ্যালাকটান মিউট্যান্টদের অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে উদ্ধার করেছে এবং চিত্র 4বি-তে দেখানো হিসাবে কার্যকারিতা বৃদ্ধি করেছে।

কোষগুলি এনজাইমেটিক অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিরক্ষা ব্যবস্থার সাথে বিকশিত হয় বিভিন্ন শারীরবৃত্তীয় প্রতিক্রিয়ার মাধ্যমে ROS দ্বারা সৃষ্ট অন্তঃসত্ত্বা অক্সিডেটিভ স্ট্রেস প্রতিরোধ করার জন্য, যা অন্যথায় কোষের সুস্থতার উপর ক্ষতিকর প্রভাব ফেলবে। পূর্ববর্তী প্রতিবেদন এবং এই সমীক্ষায় আমাদের ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে ইপিএস আরওএসকে ধ্বংস করতে এবং কোষের কার্যকারিতা উন্নত করতে সক্ষম। ইস্ট অক্সিডেটিভ স্ট্রেস রেসপন্স মিউট্যান্ট স্ট্রেনের সাথে আমাদের ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে গ্যালাকটান ইপিএস চিকিত্সা H2O2 চিকিত্সা দ্বারা প্ররোচিত সাইটোসোলিক এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল সুপারঅক্সাইড র্যাডিকেল উভয়কেই স্ক্যাভেঞ্জ করে, যথাক্রমে খামির sod1∆ এবং sod2∆ মিউট্যান্ট স্ট্রেনের বর্ধিত কার্যকারিতা দ্বারা প্রমাণিত। এসওডি হল প্রাথমিক এনজাইমেটিক অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিরক্ষা কোষের অন্তঃসত্ত্বা এবং বহিরাগত অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের বিরুদ্ধে এবং এই জিনের মিউটেশনগুলি ক্যান্সার এবং অবক্ষয়জনিত ব্যাধিতে জড়িত। একইভাবে, ইপিএস চিকিত্সার দ্বারা cta1∆ এবং ctt1∆ (ক্যাটালেস মিউট্যান্ট) এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট উদ্ধার ইঙ্গিত করে যে গ্যালাকটান ইপিএসের সাথে চিকিত্সা H2O2 দ্বারা প্ররোচিত পেরোক্সিসোমাল এবং সাইটোসোলিক অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে সুরক্ষা প্রদান করে। ক্যাটালেস হাইড্রোজেন পারক্সাইডের সেলুলার ডিটক্সিফিকেশনের জন্য দায়ী এবং এর ঘাটতি বয়স-সম্পর্কিত ব্যাধিগুলির সূত্রপাতের সাথে যুক্ত। TSA1, থিওরেডক্সিন পারক্সিডেস উভয়ই রাইবোসোমাল সম্পর্কিত এবং বিনামূল্যে সাইটোপ্লাজমিক প্রোটিন যা কোষগুলিকে হাইড্রোজেন পারক্সাইড চাপ থেকে মুক্তি দেয়। রিপোর্টগুলি পরামর্শ দেয় যে TSA1 এর অক্সিডেটিভ ডিএনএ ক্ষতি মেরামতেও ভূমিকা রয়েছে। আমাদের ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে ইপিএস চিকিত্সা পেরক্সাইড-প্ররোচিত চাপ থেকে খামির tsa1∆ কোষগুলিকে উদ্ধার করে। স্তন্যপায়ী পেরোক্সিরেডক্সিন কোষের বৃদ্ধি, বিপাক এবং ইমিউন ফাংশনে ইতিবাচক প্রভাব ফেলে। তাদের ঘাটতির ফলে উচ্চতর সেলুলার অক্সিডেটিভ স্ট্রেস হয় যা গুরুত্বপূর্ণ সিগন্যালিং পথকে প্রভাবিত করে এবং নিউরোডিজেনারেটিভ ডিজঅর্ডার, ম্যালিগন্যান্সি এবং প্রদাহজনিত রোগের সাথে জড়িত 72. গ্লুটাথিয়ন অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট মেকানিজম হল অক্সিড স্ট্রেস কাটিয়ে উঠতে কোষে উপস্থিত আরেকটি প্রথম সারির এনজাইমেটিক অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিরক্ষা ব্যবস্থা। GLR1 হল স্তন্যপায়ী গ্লুটাথিয়ন রিডাক্টেসের ইস্ট হোমোলগ, সাইটোসল এবং মাইটোকন্ড্রিয়া 73 উভয় ক্ষেত্রেই স্থানীয়করণ করে। Glr অক্সিডাইজড গ্লুটাথিয়ন (GSSH) কমিয়ে গ্লুটাথিয়ন (GSH) থেকে কমিয়ে দেয় এবং কোষে GSH মাত্রা বজায় রাখতে ভূমিকা পালন করে যা ফলস্বরূপ সুপারঅক্সাইড এবং হাইড্রক্সাইড র্যাডিকেলগুলিকে ডিটক্সিফাই করে, এইভাবে কোষগুলিকে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে রক্ষা করে। আমাদের ফলাফলগুলি H2O2 থেকে খামির glr1∆ এর উচ্চ সংবেদনশীলতা দেখায় যা গ্যালাকটান ইপিএসের সাথে প্রাক-চিকিত্সা দ্বারা উপশম করা হয়েছিল যা পরামর্শ দেয় যে গ্যালাকটান ইপিএস অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে GLR1 এর ঘাটতি কোষগুলিকে রক্ষা করতে পারে। মজার বিষয় হল, গ্লুটাথিয়ন রিডাক্টেসের ঘাটতি বার্ধক্য এবং বয়স-সম্পর্কিত বিপাকীয়, অবক্ষয়জনিত এবং কার্ডিওভাসকুলার ডিসঅর্ডার75,76 এর সাথে জড়িত। চিত্র 4A তে দেখানো হয়েছে, yhb1∆ এছাড়াও H2O2 স্ট্রেসের বিরুদ্ধে গ্যালাকটান ইপিএস দ্বারা সুরক্ষিত ছিল যা পরামর্শ দেয় যে গ্যালাকটান ইপিএস অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে YHB1 এর ঘাটতি কোষগুলিকে রক্ষা করে। ইস্ট YHB1 হল একটি প্রিয় হিমোগ্লোবিন যা কোষকে নাইট্রিক অক্সাইড স্ট্রেস77 এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস78 থেকে রক্ষা করার জন্য রিপোর্ট করা হয়েছে। প্রমাণ থেকে জানা যায় যে YHB1-এর হিউম্যান হোমোলজ আলফা-সিনুকলিন বিষাক্ততা থেকে কোষকে উদ্ধার করতে দেখা যাচ্ছে যা পারকিনসন রোগের বায়োমার্কার79। এই পূর্ববর্তী তথ্যগুলি এবং আমাদের ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে ইপিএস অবক্ষয়জনিত ব্যাধিগুলির বিকাশের বিরুদ্ধে কোষের বেঁচে থাকার প্রচার করতে পারে।

H2O2 স্ট্রেসের অধীনে গ্যালাকটানের উপস্থিতি এবং অনুপস্থিতি সহ ইস্ট মিউট্যান্টগুলিতে ROS-এর স্তরের মূল্যায়ন করতে, খামির কোষগুলি একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের অধীনে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল এবং আন্তঃকোষীয় অক্সিডেশন স্তরটি একটি স্পেকট্রোফুওরোমিটার 47,48 দিয়ে গণনা করা হয়েছিল। শুধুমাত্র H2O2 দিয়ে চিকিত্‍সা করা ইস্ট মিউট্যান্টগুলি গ্যালাকট্যানের সাথে প্রাক-চিকিত্সা করা মানুষের তুলনায় বেশি সবুজ ফিউরোসেন্ট কোষ দেখায়। (চিত্র 4C)। DCF ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা আনুমানিক 60 শতাংশ বৃদ্ধি পেয়েছে, যেখানে গ্যালাকটান প্রাক-চিকিত্সা সহ, এটি WT এবং সংশ্লিষ্ট নিয়ন্ত্রণের তুলনায় H2O2-চিকিত্সা করা ইস্ট মিউট্যান্টগুলিতে প্রায় 30 শতাংশে হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 4D)৷ মাইক্রোস্কোপিক এবং স্পেকট্রোফোটোমেট্রিক ফলাফল উভয়ই কোষে ROS-এর একটি বর্ধিত স্তর নির্দেশ করে যেগুলিতে সংশ্লিষ্ট নিয়ন্ত্রণের তুলনায় নির্দিষ্ট অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট জিনের অভাব রয়েছে। গ্যালাকট্যানের সাথে প্রাক-চিকিত্সা করা এবং তারপরে H2O2 এর সংস্পর্শে আসা সংস্কৃতিগুলি গ্যালাকটান প্রাক-চিকিত্সাবিহীনদের তুলনায় একটি হ্রাস ফ্লুরোসেন্স দেখায় যা পরামর্শ দেয় যে গ্যালাকটান খামির মিউট্যান্ট কোষে ROS ইন্ডাকশন H2O2 এক্সপোজার হ্রাস করেছে এবং কোষের বেঁচে থাকার প্রচার করে। উপরের সমস্ত পরীক্ষায়, যখন H2O2 সংযোজনের আগে কোষগুলি ধুয়ে ফেলা হয়েছিল তখন কোনও উল্লেখযোগ্য উদ্ধার (পরিপূরক ডেটা) দেখায়নি যা নির্দেশ করে যে গ্যালাকটান দ্বারা ROS স্ক্যাভেঞ্জিং আন্তঃকোষীয় ক্রিয়াতে না হয়ে মাধ্যমে সরাসরি স্ক্যাভেঞ্জিং এর কারণে।