বিমূর্ত

Cistanche deserticolaমা, সাধারণত "মরুভূমি জিনসেং" নামে পরিচিত, একটি মূল্যবান পরজীবী ঔষধি উদ্ভিদ যা উত্তর-পশ্চিম চীনে ব্যাপকভাবে বিতরণ করা হয়। এর পলিস্যাকারাইড উপাদানগুলি অ্যান্টি-এজিং, ইমিউনোমোডুলেটরি এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ফাংশন সহ সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ বায়োঅ্যাকটিভ পদার্থগুলির একটি প্রতিনিধিত্ব করে। এই সমীক্ষায়, গরম-জল নিষ্কাশন, এনজাইমেটিক নিষ্কাশন এবং অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশন সহ তিনটি নিষ্কাশন পদ্ধতির পলিস্যাকারাইড ফলনের জন্য তুলনা করা হয়েছিলCistanche deserticola. বক্স-বেহেনকেন প্রতিক্রিয়া-সারফেস পদ্ধতির সাথে একক-ফ্যাক্টর পরীক্ষাগুলি কঠিন-তরল অনুপাত, অতিস্বনক নিষ্কাশন সময় এবং স্বতন্ত্র ভেরিয়েবল হিসাবে অতিস্বনক তাপমাত্রা সহ অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশন পরামিতিগুলিকে অপ্টিমাইজ করার জন্য প্রয়োগ করা হয়েছিল। প্রাপ্ত পলিস্যাকারাইডের ইন-ভিট্রো অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা DPPH এবং ABTS র্যাডিকাল-স্ক্যাভেঞ্জিং অ্যাসেস দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল, ভিটামিন সি (ভিসি) ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহার করে। ফলাফলগুলি দেখায় যে অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশন তিনটি পরীক্ষিত কৌশলগুলির মধ্যে সর্বোচ্চ পলিস্যাকারাইড ফলন প্রদান করে। সর্বোত্তম অবস্থা ছিল কঠিন-তরল অনুপাত 1:100 (500 মিলি পাতিত জলে 5.0 গ্রাম কাঁচা পাউডার), অতিস্বনক নিষ্কাশন সময় 40 মিনিট এবং নিষ্কাশন তাপমাত্রা 48 ডিগ্রি, 7.49% এর পলিস্যাকারাইড নিষ্কাশন হারের ফলন। এই অপ্টিমাইজ করা অবস্থার অধীনে, DPPH এর র্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপCistanche deserticolaপলিস্যাকারাইড Vc কার্যকলাপের 84.27% এ পৌঁছেছে, এবং ABTS র্যাডিকাল-স্ক্যাভেঞ্জিং ক্ষমতা Vc-এর তুলনায় 73.95% হয়েছে। এই গবেষণাটি বড় আকারের উৎপাদন এবং প্রয়োগের জন্য পরীক্ষামূলক রেফারেন্স প্রদান করেCistanche deserticolaকার্যকরী খাদ্য, নিউট্রাসিউটিক্যাল এবং স্বাস্থ্য-যত্ন শিল্পে পলিস্যাকারাইড।

কীওয়ার্ড: Cistanche deserticola; মরুভূমি জিনসেং; উদ্ভিদ পলিস্যাকারাইড; অতিস্বনক-সহায়তা নিষ্কাশন; প্রতিক্রিয়া-সারফেস পদ্ধতি; DPPH; ABTS; অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ; প্রাকৃতিক কার্যকরী উপাদান

1. ভূমিকা

Cistanche deserticolaমা একটি বহুবর্ষজীবী হলোপ্যারাসাইট ভেষজ যা জিনজিয়াং, অভ্যন্তরীণ মঙ্গোলিয়া এবং চীনের গানসু প্রদেশের মরু অঞ্চলে সমৃদ্ধ। ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধে হাজার হাজার বছর ধরে, এটি কিডনির সারাংশ টোনিফাই করার জন্য, অন্ত্রের কার্যকারিতা শিথিল করার জন্য এবং সেন্সেন্স উইলিকে বিলম্বিত করার জন্য "মরুভূমির জিনসেং" হিসাবে খ্যাতি পেয়েছে। আধুনিক পুষ্টি এবং ফার্মাকোলজিক্যাল গবেষণায়, থেকে জৈব সক্রিয় উপাদানCistanche deserticola, বিশেষ করে পলিস্যাকারাইড, ফেনোলিক যৌগ, ফ্ল্যাভোনয়েড এবং অ্যালকালয়েডগুলি কার্যকরী-খাদ্য বিকাশের জন্য প্রাকৃতিক অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কাঁচামালের প্রতি বিশ্বব্যাপী গবেষণার আগ্রহ বাড়িয়েছে।

পলিস্যাকারাইড হল উচ্চ-আণবিক-ওজন ম্যাক্রোমোলিকুলস যা গ্লাইকোসিডিক বন্ডের মাধ্যমে সংযুক্ত মনোস্যাকারাইড ইউনিট থেকে পলিমারাইজড।Cistanche deserticolaপলিস্যাকারাইডগুলি হাজার হাজার থেকে মিলিয়ন ডাল্টন পর্যন্ত বিস্তৃত আণবিক-ওজন বন্টন ধারণ করে এবং এতে গ্লুকোজ, গ্যালাকটোজ, ম্যানোজ এবং অন্যান্য মনোস্যাকারাইডের অবশিষ্টাংশ থাকে। জটিল শাখা কাঠামোগুলি তাদের অনন্য ভৌত রাসায়নিক বৈশিষ্ট্য এবং জৈবিক কর্মক্ষমতাতে অবদান রাখে। পলিস্যাকারাইড ছাড়াও, কাঁচা ভেষজটিতে প্রচুর পরিমাণে প্রয়োজনীয় অ্যামিনো অ্যাসিড, অসম্পৃক্ত ফ্যাটি অ্যাসিড এবং জিঙ্ক, সেলেনিয়াম এবং তামার মতো ট্রেস উপাদান রয়েছে, যা মানুষের শারীরবৃত্তীয় বিপাক এবং ইমিউন হোমিওস্টেসিসকে সমর্থন করে। এন্ডোজেনাস অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট যৌগগুলিCistanche deserticolaক্যাটেচিন, গ্যালিক অ্যাসিড, কোয়ার্সেটিন, কেম্পফেরল, বেটেইন এবং সিস্টানচে অ্যালকালয়েড অন্তর্ভুক্ত। এই পদার্থগুলি প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতিকে নির্মূল করে এবং অক্সিডেটিভ ক্ষতি কমাতে লিপিড পারক্সিডেশনকে বাধা দেয়। এটি লক্ষণীয় যে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকারিতা নিষ্কাশন কর্মপ্রবাহ, জৈব-অণুর বিদ্যমান ফর্ম এবং বিভিন্ন ফাইটোকেমিক্যালের মধ্যে যৌগিক মিথস্ক্রিয়া প্রভাব দ্বারা ব্যাপকভাবে প্রভাবিত হয়।

নিষ্কাশন প্রযুক্তি উদ্ভিদ থেকে প্রাপ্ত সক্রিয় যৌগগুলি পুনরুদ্ধার করার জন্য একটি সিদ্ধান্তমূলক পদক্ষেপ। বোটানিক্যাল পলিস্যাকারাইডের জন্য সাধারণ শিল্প-ল্যাব স্কেল নিষ্কাশন কৌশলগুলিতে গরম জল নিষ্কাশন, অ্যালকোহল নিষ্কাশন, অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশন, মাইক্রোওয়েভ-সহায়ক নিষ্কাশন এবং সুপারক্রিটিক্যাল-তরল নিষ্কাশন রয়েছে। প্রতিটি পদ্ধতির স্বতন্ত্র শক্তি এবং ত্রুটি রয়েছে। গরম-পানি নিষ্কাশন কম খরচে এবং ব্যাপক উত্পাদনের জন্য অপারেশন-বান্ধব, তবুও সাধারণত মাঝারি ফলন দেয় এবং যথেষ্ট অমেধ্য সহ-নিষ্কাশন করে। অ্যালকোহল-ভিত্তিক প্রোটোকলগুলি লিপোফিলিক বিপাকের পক্ষে কিন্তু জলে দ্রবণীয় পলিস্যাকারাইডের জন্য অনুপযুক্ত এবং জৈব-দ্রাবক ঝুঁকি বহন করে। অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশন যান্ত্রিক cavitation প্রভাব উদ্ভিদ কোষ প্রাচীর ব্যাহত ব্যবহার করে, জলীয় দ্রাবক মধ্যে অন্তঃকোষীয় পদার্থ ভর স্থানান্তর ত্বরান্বিত. এটি সংক্ষিপ্ত প্রক্রিয়াকরণের সময়কাল এবং উন্নত নিষ্কাশন ফলন বৈশিষ্ট্যযুক্ত; তবুও, উচ্চ অতিস্বনক তীব্রতা বা অত্যধিক তাপমাত্রা তাপ-সংবেদনশীল জৈব উপাদানগুলিকে হ্রাস করতে পারে এবং সরঞ্জামগুলির জন্য উচ্চ মূলধন বিনিয়োগের প্রয়োজন। সুপারক্রিটিক্যাল-তরল নিষ্কাশন উচ্চ বিশুদ্ধতার সাথে দ্রাবক-মুক্ত নির্যাস অর্জন করে, কিন্তু জটিল অপারেশন থ্রেশহোল্ড এবং ব্যয়বহুল উপকরণ বিনিয়োগের সম্মুখীন হয়।

যদিও একাধিক তদন্তে সুরাহা হয়েছেCistanche deserticolaপলিস্যাকারাইড নিষ্কাশন এবং বায়োঅ্যাকটিভিটি, গরম জলের মধ্যে পদ্ধতিগত তুলনামূলক মূল্যায়ন, এনজাইমেটিক এবং অতিস্বনক-সহায়ক কর্মপ্রবাহ সীমিত থাকে। এই কাজটি তিনটি প্রতিনিধি নিষ্কাশন প্রোটোকল থেকে পলিস্যাকারাইডের ফলন তুলনা করার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে, একক-ফ্যাক্টর স্ক্রীনিং এবং প্রতিক্রিয়া-সারফেস মডেলিং দ্বারা অতিস্বনক-সহায়ক অবস্থার অপ্টিমাইজ করা এবং বিশুদ্ধ পলিস্যাকারাইড পণ্যগুলির ইন-ভিট্রো অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রোফাইলের পরিমাণ নির্ধারণ করা হয়েছে। উদ্দেশ্য ছিল অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা বজায় রেখে পলিস্যাকারাইড পুনরুদ্ধার সর্বাধিক করার জন্য ব্যবহারিক প্রক্রিয়াকরণের পরামিতি স্থাপন করা। অনুসন্ধান আরও শোষণ সমর্থন করতে পারেCistanche deserticolaবিশ্বব্যাপী কার্যকরী-খাদ্য বাজারের জন্য ভোজ্য-ওষুধ সম্পদ হিসাবে এবং প্রাকৃতিক-পণ্য প্রক্রিয়া অপ্টিমাইজেশনের জন্য পদ্ধতিগত রেফারেন্স অফার করে।

2. উপকরণ এবং পদ্ধতি

2.1 কাঁচামাল এবং রাসায়নিক বিকারক

এর শুকনো কন্দ ব্লকCistanche deserticolaBaise শহরের স্থানীয় চীনা-ভেষজ সরবরাহকারীর কাছ থেকে কেনা হয়েছিল। যৌগিক সেলুলেজ-পেকটিনেজ প্রস্তুতি এবং ফসফেট বাফার দ্রবণ গুয়াংঝো কাংঝংইয়াং বায়োটেকনোলজি কোং, লিমিটেড বিশ্লেষণাত্মক গ্রেড 1,1-ডিফেনাইল-2-পিক্রিলহাইড্রাজিল (DPPH), থেকে প্রাপ্ত করা হয়েছিল। 2,2′‑Azino‑bis‑(3‑ethylbenzothiazoline‑6‑sulfonic অ্যাসিড) ডায়ামোনিয়াম লবণ (ABTS) সাংহাই ডংফুলং বায়ো-রিএজেন্ট কোং লিমিটেড দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল। ফেনল সহ অন্যান্য রাসায়নিক, ঘনীভূত সালফিউরিক অ্যাসিড ছিল 9% গ্রিরোলিটি অ্যাসিড।

2.2 যন্ত্র এবং যন্ত্রপাতি

CG-01 বিশ্লেষণাত্মক ভারসাম্য, 6800 হাই-স্পিড পালভারাইজার, RQ-100 স্লাইসিং মেশিন, TWS-1000 থার্মোস্ট্যাটিক ওয়াটার-বাথ; WH50 রোটারি ইভাপোরেটর, SG30‑01A অতিস্বনক এক্সট্র্যাক্টর (350 W, 40 kHz); UAR-2000 UV-Vis স্পেকট্রোফটোমিটার, THQ-03 সেন্ট্রিফিউজ, BTS-31E ফ্রিজ-ড্রায়ার।

2.3 নমুনা প্রস্তুতি

শুকিয়ে গেছেCistanche deserticolaকন্দগুলি অতি বিশুদ্ধ জল দিয়ে ধুয়ে 40 ডিগ্রিতে চুলায় শুকানো হয় যতক্ষণ না পৃষ্ঠের আর্দ্রতা অপসারণ করা হয়। উপাদানটি 0.3 মিমি পুরুতে কাটা হয়েছিল, 100-জাল চালনি দিয়ে ছেঁকে নেওয়া হয়েছিল যাতে পরবর্তী নিষ্কাশন পরীক্ষার জন্য একজাতীয় পাউডার পাওয়া যায়।

2.4 তিনটি পলিস্যাকারাইড এক্সট্রাকশন প্রোটোকল

2.4.1 গরম-জল নিষ্কাশন

5.0 g Cistanche deserticolaপাউডার 500 মিলি পাতিত জলের সাথে মিশ্রিত 1000 মিলি বিকারে স্থানান্তরিত হয়েছিল। জল-স্নান নিষ্কাশন 100 ডিগ্রির নিচে 2 ঘন্টা ধরে রাখা হয়েছিল। প্রতি 100 মিনিটে ম্যানুয়াল নাড়াচাড়া করা হয়েছিল প্রিপিটিট স্থগিত করতে এবং পলিস্যাকারাইড দ্রবীভূত করার সুবিধার্থে। মিশ্রণটিকে পরিবেষ্টিত তাপমাত্রায় ঠাণ্ডা করা হয়েছিল, সুপারনাট্যান্ট তরল সংগ্রহের জন্য 10 মিনিটের জন্য 4000 r/min এ সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। সুপারনাট্যান্টকে ঘূর্ণমান বাষ্পীভবন দ্বারা 40 ডিগ্রীতে কম চাপে ঘনীভূত করা হয়েছিল. 60 এমএল 95% ইথানল অ্যালকোহল বৃষ্টিপাতের জন্য 20 মিলি ভলিউম পর্যন্ত এবং রাতারাতি দাঁড়িয়েছিল। অশোধিত পলিস্যাকারাইড পাউডার অর্জনের জন্য ফ্রিজ-ড্রায়ারের মাধ্যমে লাইওফিলাইজড সেন্ট্রিফিউগেশন (3000 r/মিনিট, 10 মিনিট) পরে বর্ষণ সংগ্রহ করা হয়েছিল।

2.4.2 এনজাইমেটিক নিষ্কাশন

5.0 গ্রাম নমুনা পাউডার 500 মিলি যৌগ সেলুলেজ-পেকটিনেজ বাফার দ্রবণে (পিএইচ 5.0) ছড়িয়ে দেওয়া হয়েছিল। এনজাইমেটিক হাইড্রোলাইসিস 5 ঘন্টার জন্য 45 ডিগ্রী জলের স্নানে এগিয়ে যায়। এনজাইম প্রোটিন নিষ্ক্রিয় করার জন্য 10 মিনিটের জন্য 100 ডিগ্রী পর্যন্ত দ্রবণ গরম করার মাধ্যমে প্রতিক্রিয়া সমাপ্তি উপলব্ধি করা হয়েছিল। ঠান্ডা হওয়ার পরে, তরল সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল (4000 r/min, 10 মিনিট)। সুপারন্যাট্যান্ট ভ্যাকুয়াম-ঘনিষ্ঠ ছিল 20 মিলি, রাতারাতি বৃষ্টিপাতের জন্য 95% ইথানলের সাথে মিশ্রিত। সেন্ট্রিফিউগেশন এবং হিমায়িত-শুকানোর পদক্ষেপগুলি অপরিশোধিত পলিস্যাকারাইড সংগ্রহের জন্য গরম জলের পদ্ধতির অনুরূপ।

2.4.3 অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশন

5.0 g Cistanche deserticolaপাউডার 500 মিলি পাতিত জলের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল। সমজাতীয় সাসপেনশনটি অতিস্বনক এক্সট্র্যাক্টরের ভিতরে স্থাপন করা হয়েছিল যেমন শক্তি 350 W এবং ফ্রিকোয়েন্সি 40 kHz। নির্ধারিত অতিস্বনক চিকিত্সার পরে, নমুনা তরল প্রাকৃতিকভাবে ঠান্ডা হয়। সেন্ট্রিফিউগেশন, ঘূর্ণমান বাষ্পীভবন, ইথানল বৃষ্টিপাত এবং লাইওফিলাইজেশন পদক্ষেপগুলি অপরিশোধিত পলিস্যাকারাইড নির্যাস পেতে উপরে উল্লিখিত সামঞ্জস্যপূর্ণ কর্মপ্রবাহ অনুসরণ করে।
 

2.5 পলিস্যাকারাইড নিষ্কাশন ফলন নির্ধারণ

প্রকাশিত সাহিত্যে বর্ণিত পরিবর্তিত পদ্ধতির উল্লেখ করে ফেনল-সালফিউরিক-অ্যাসিড অ্যাস দ্বারা মোট কার্বোহাইড্রেট সামগ্রীর পরিমাণ নির্ধারণ করা হয়েছিল। গ্লুকোজ স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণগুলি সিরিয়াল ঘনত্ব গ্রেডিয়েন্টে কনফিগার করা হয়েছিল. 1 mL 10 % ফেনল বিকারক প্লাস 3 mL ঘনীভূত সালফিউরিক অ্যাসিড স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল। বিক্রিয়াটি 15 মিনিটের জন্য 85 ডিগ্রির নিচে ইনকিউবেট করা হয়েছিল, প্লট ক্রমাঙ্কন বক্ররেখার জন্য শোষণের মান 540 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে পড়া হয়েছিল। রিগ্রেশন সমীকরণ: \\(y=9.6959x+0.0077\\), নির্ণয়ের সহগ \\(R^2=0.999\\)।

অশোধিত পলিস্যাকারাইড নমুনা (0.1 গ্রাম) 100 মিলি পাতিত জলে দ্রবীভূত করা হয়েছিল। অভিন্ন ফেনল-সালফিউরিক-অ্যাসিড প্রতিক্রিয়ার অধীনে অ্যালিকোট বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। পলিস্যাকারাইডের ফলন (%) সূত্র (1) দ্বারা গণনা করা হয়েছিল:

\\(ফলন(\\%)=\\frac{C\\times V\\times n}{M}\\times100\\% \\tag{1}\\)

কোথায়: সি=পলিস্যাকারাইড ঘনত্ব (g/mL); V=নমুনা সমাধানের পরিমাণ; n= বহুবিধ পাতলা; M=কাঁচা ওজনCistanche deserticolaপাউডার (ছ)।

2.6 অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশনের জন্য একক-ফ্যাক্টর পরীক্ষামূলক নকশা

তিনটি প্রধান প্রভাবশালী ভেরিয়েবল তদন্ত করা হয়েছিল: কঠিন-তরল অনুপাত, অতিস্বনক নিষ্কাশন সময়কাল এবং অতিস্বনক তাপমাত্রা। পলিস্যাকারাইড ফলন মূল্যায়ন সূচক হিসাবে কাজ করে। কঠিন-তরল অনুপাত গ্রেডিয়েন্ট: 1:400, 1:200, 1:100, 1:50; অতিস্বনক-সময় গ্রেডিয়েন্ট: 10 মিনিট, 20 মিনিট, 30 মিনিট, 40 মিনিট, 50 মিনিট; তাপমাত্রা গ্রেডিয়েন্ট: 37 ডিগ্রী, 43 ডিগ্রী, 48 ডিগ্রী, 53 ডিগ্রী। প্রতিটি গ্রুপ তিন প্রতিলিপিতে সঞ্চালিত হয়েছিল।

2.7 প্রতিক্রিয়া-সারফেস পদ্ধতি (বক্স-বেহেনকেন ডিজাইন)

একক-ফ্যাক্টর পরীক্ষার ফলাফলের উপর ভিত্তি করে, থ্রি-ফ্যাক্টর-থ্রি-লেভেল বক্স-বেহেনকেন রেসপন্স-সারফেস স্কিম তৈরি করা হয়েছিল। ফ্যাক্টর A প্রতিনিধিত্ব করে কঠিন-তরল অনুপাত; ফ্যাক্টর বি অতিস্বনক নিষ্কাশন সময় জন্য দাঁড়িয়েছে; ফ্যাক্টর সি অতিস্বনক তাপমাত্রা প্রতিনিধিত্ব করে। পলিস্যাকারাইড নিষ্কাশন ফলন প্রতিক্রিয়া মান Y হিসাবে সেট করা হয়েছিল। সর্বোত্তম নিষ্কাশন পরামিতিগুলি স্ক্রীন করার জন্য রিগ্রেশন-মডেল ফিটিং এবং প্রকরণ বিশ্লেষণ সম্পন্ন করা হয়েছিল।

2.8 অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-ক্রিয়াকলাপ মূল্যায়ন ইন-ভিট্রো

অশোধিত পলিস্যাকারাইড নমুনা সমাধানগুলি ঘনত্বের সীমার মধ্যে প্রস্তুত করা হয়েছিল: 0.1 মিগ্রা/মিলি‑0.7 মিলিগ্রাম/মিলি। ভিটামিন সি (ভিসি) সলিউশন ইতিবাচক অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বেঞ্চমার্ক কন্ট্রোল গ্রুপ হিসাবে কাজ করে।

2.8.1 DPPH র‌্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং অ্যাক্টিভিটি মেজারমেন্ট

2 মিলি পলিস্যাকারাইড নমুনা দ্রবণ 1.5 মিলি ডিপিপিএইচ অ্যানহাইড্রাস-ইথানল কার্যকরী দ্রবণের সাথে প্রতিক্রিয়া জানায়। মিশ্র তরলটি 40 মিনিটের জন্য অন্ধকার পরিবেশের অধীনে ইনকিউবেট করা হয়েছিল। শোষণ \\(A_i\\) 517 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে সনাক্ত করা হয়েছিল। \\(A_j\\) Vc এর সাথে কন্ট্রোল গ্রুপের শোষণকে নির্দেশ করে; \\(A_0\\) পাতিত জলের প্রতিস্থাপিত নমুনা তরল হলে ফাঁকা-গ্রুপ শোষণের প্রতিনিধিত্ব করে। DPPH র‌্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং রেট (%) সূত্রের মাধ্যমে গণনা করা হয়েছিল (2):

\\(DPPH\\ radical\\ scavenging\\ rate(\\%)=\\frac{A_0-(A_i-A_j)}{A_0}\\times100\\% \\tag{2}\\)

2.8.2 ABTS র‌্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং অ্যাক্টিভিটি অ্যাসে

ABTS কার্যকারী তরলটি সদ্য প্রস্তুত করা হয়েছিল. 2 mL পলিস্যাকারাইডের নমুনা দ্রবণে 4 mL ABTS বিকারক মিশ্রিত করে, 15 মিনিটের জন্য অন্ধকারে রাখা হয়েছিল। শোষণ রিডিং 752 এনএম এ রেকর্ড করা হয়েছিল। \\(A_i\\), \\(A_j\\), \\(A_0\\) যথাক্রমে নমুনা গ্রুপ, পজিটিভ-কন্ট্রোল গ্রুপ এবং ব্ল্যাঙ্ক-কন্ট্রোল গ্রুপের সাথে মিলে যায়। ABTS র্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং রেট (%) সূত্র (3) দ্বারা গণনা করা হয়েছিল:

\\(ABTS\\ radical\\ scavenging\\ rate(\\%)=\\frac{A_0-(A_i-A_j)}{A_0}\\times100\\% \\tag{3}\\)

2.9 পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ

সমস্ত পরীক্ষামূলক ট্রায়াল তিনবার পুনরাবৃত্তি হয়েছিল। ডেটা প্রসেসিং, রিগ্রেশন বিশ্লেষণ এবং প্রকরণ বিশ্লেষণ পরিসংখ্যানগত সফ্টওয়্যার দ্বারা পরিচালিত হয়েছিল। পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীগুলির ভিজ্যুয়াল তুলনার জন্য গ্রাফ প্লটিং করা হয়েছিল।

3. ফলাফল এবং আলোচনা

3.1 তিনটি নিষ্কাশন প্রযুক্তির জন্য পলিস্যাকারাইড নিষ্কাশন ফলনের তুলনা

গরম-জল নিষ্কাশন, এনজাইমেটিক নিষ্কাশন এবং অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশন সংশ্লিষ্ট স্ট্যান্ডার্ড ওয়ার্কফ্লোগুলির অধীনে প্রয়োগ করা হয়েছিল। চূড়ান্ত পলিস্যাকারাইড ফলনে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য বিদ্যমান। গরম-পানি নিষ্কাশন সর্বনিম্ন ফলন মূল্য প্রদান করে; এনজাইমেটিক নিষ্কাশন মাঝারি পুনরুদ্ধার উত্পাদিত; অতিস্বনক-সহায়তা নিষ্কাশন (7.27±0.04) % এর সর্বোচ্চ ফলন অর্জন করেছে। যেহেতু নিষ্কাশন-পরবর্তী ঘনত্ব, বৃষ্টিপাত এবং লাইওফিলাইজেশন ধাপ তিনটি ব্যাচের জন্য অভিন্ন ছিল, তাই ফলন ভিন্নতা সরাসরি নিষ্কাশন প্রক্রিয়ার পার্থক্য থেকে উদ্ভূত হয়েছিল।

গরম-জল নিষ্কাশন শুধুমাত্র তাপীয় জলীয় দ্রবীভূতকরণের উপর নির্ভর করে। কিছু উচ্চ-আণবিক-ওজন পলিস্যাকারাইড ভগ্নাংশ বায়ুমণ্ডলীয়-চাপ গরম করার অবস্থার অধীনে সীমিত জল দ্রবণীয়তা প্রদর্শন করে, যা উদ্ভিদের টিস্যু থেকে অসম্পূর্ণ মুক্তির দিকে পরিচালিত করে। এনজাইমেটিক নিষ্কাশন সক্রিয় পদার্থের মুক্তির সুবিধার্থে যৌগিক হাইড্রোলেজ সহ কোষের দেয়ালে সেলুলোজ এবং পেকটিন উপাদানগুলিকে হ্রাস করে। যাইহোক, জটিল এনজাইম সিস্টেম অন্যান্য কোষ-প্রাচীর ম্যাট্রিক্স উপাদানগুলির জন্য সীমিত হাইড্রোলাইসিস দক্ষতা প্রদর্শন করে, মোট পলিস্যাকারাইড আউটপুটকে সীমাবদ্ধ করে। অতিস্বনক cavitation বল ক্রমাগত শক এবং ফ্র্যাকচারCistanche deserticolaকোষ প্রাচীরের গঠন, দ্রাবক-কঠিন যোগাযোগের ক্ষেত্রকে বর্ধিত করে এবং আন্তঃকোষীয় পলিস্যাকারাইড অণুর জলীয় পর্যায়ে ভর স্থানান্তর দক্ষতাকে ত্বরান্বিত করে। ফলস্বরূপ, অতিস্বনক-সহায়তা নিষ্কাশন উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত পলিস্যাকারাইড পুনরুদ্ধার দক্ষতা. এই তুলনামূলক ফলাফল অনুযায়ী, অতিস্বনক-সহায়তা নিষ্কাশন পরবর্তী প্রক্রিয়া-অপ্টিমাইজেশন তদন্তের জন্য নির্বাচিত হয়েছিল।

3.2 অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশনের জন্য একক-ফ্যাক্টর পরীক্ষার ফলাফল

3.2.1 পলিস্যাকারাইড ফলনের উপর কঠিন-তরল অনুপাতের প্রভাব

সলিড-তরল অনুপাত উদ্ভিদ-কোষের অভ্যন্তর এবং বহিরাগত জলীয় দ্রাবকের মধ্যে ঘনত্ব গ্রেডিয়েন্ট চালিকা শক্তি নির্ধারণ করে। তরল অনুপাত বৃদ্ধির সাথে, পলিস্যাকারাইড নিষ্কাশনের ফলন প্রথমে বেড়ে যায় এবং তারপরে হ্রাস পায়। কঠিন-তরল অনুপাত 1:100 (500 মিলি পাতিত জলে 5 গ্রাম পাউডার যোগ করা হয়েছে), ফলন 7.46%-এ শীর্ষে পৌঁছেছে। যখন দ্রাবকের পরিমাণ অপর্যাপ্ত ছিল (কঠিন-তরল অনুপাত 1:50), দ্রাবক ক্ষমতা পরিপূর্ণ হয়ে ওঠে, পলিস্যাকারাইড দ্রবীভূত করা সীমিত করে। অত্যধিক উচ্চ দ্রাবক অনুপাত (1:200,1:400) দ্রাবক ঘনত্বকে পাতলা করবে এবং পরবর্তী ভ্যাকুয়াম-ঘনত্বের জন্য কাজের চাপ বাড়াবে আর ফলনের উন্নতি ছাড়াই। এইভাবে, কঠিন-তরল অনুপাত 1:100 প্রতিক্রিয়া-পৃষ্ঠের নকশার জন্য কেন্দ্রীয় স্তর হিসাবে বেছে নেওয়া হয়েছিল।

3.2.2 নিষ্কাশন কর্মক্ষমতা উপর অতিস্বনক নিষ্কাশন সময় প্রভাব

30 মিনিটের মধ্যে অতিস্বনক চিকিত্সার সময় বাড়ানোর সাথে পলিস্যাকারাইডের ফলন ক্রমাগত বেড়েছে। 30 মিনিট অতিক্রম করার পরে, ফলন-বৃদ্ধির প্রবণতা সমতল হয়। সংক্ষিপ্ত অতিস্বনক সময়কাল কোষ-প্রাচীর বাধা সম্পূর্ণরূপে ভাঙ্গার জন্য পর্যাপ্ত যান্ত্রিক গহ্বর শক্তি সরবরাহ করতে পারে না। একবার কোষ-প্রাচীরের ব্যাঘাত সম্পৃক্ততা অর্জন করে, অতিস্বনক প্রক্রিয়াকরণের সময়কে দীর্ঘায়িত করা খুব কমই পলিস্যাকারাইড মুক্তিকে উন্নীত করতে পারে। অত্যধিক দীর্ঘ অতিস্বনক এক্সপোজার সম্ভাব্য পলিস্যাকারাইড ম্যাক্রোমোলিকুলার চেইনের আংশিক অবক্ষয় ঘটাতে পারে। তাই, রেসপন্স-সারফেস ডিজাইনের জন্য রেফারেন্স কেন্দ্রীয় স্তর হিসাবে 30 মিনিট নির্বাচন করা হয়েছিল।

3.2.3 অতিস্বনক নিষ্কাশন তাপমাত্রার প্রভাব

তাপমাত্রা 53 ডিগ্রি পর্যন্ত বৃদ্ধি পাওয়ায় পলিস্যাকারাইড নিষ্কাশনের ফলন বেড়েছে। একবার তাপমাত্রা 55 ডিগ্রি ছাড়িয়ে গেলে ফলন দ্রুত কমে যায়। মাঝারি উত্তাপ পলিস্যাকারাইডের আণবিক প্রসারণ হার এবং জল দ্রবণীয়তা বাড়ায়। তা সত্ত্বেও, উচ্চ তাপীয় অবস্থা পলিস্যাকারাইড ম্যাক্রোমোলিকুলসের তাপীয় অবক্ষয় ঘটাবে, গ্লাইকোসিডিক বন্ধন ভেঙে দেবে এবং লক্ষ্য উপাদানগুলিকে ধ্বংস করবে, যার ফলে পরিমাপযোগ্য ফলন হ্রাস পাবে। একক-ফ্যাক্টর প্রতিক্রিয়া প্রবণতার উপর ভিত্তি করে, আরও মাল্টি-ফ্যাক্টর অপ্টিমাইজেশনের জন্য 48-53 ডিগ্রি তাপমাত্রা ব্যবধান গ্রহণ করা হয়েছিল।

3.3 প্রতিক্রিয়া-সারফেস অপ্টিমাইজেশান বিশ্লেষণ

Box-Behnken প্রতিক্রিয়া-সারফেস পরীক্ষামূলক নকশা কঠিন-তরল অনুপাত (A), অতিস্বনক সময় (B), অতিস্বনক তাপমাত্রা (C) স্বাধীন ভেরিয়েবল হিসাবে এবং পলিস্যাকারাইড ফলন Y হিসাবে গ্রহণ করে কার্যকর করা হয়েছিল। একাধিক দ্বিঘাত রিগ্রেশন সমীকরণ এইভাবে লাগানো হয়েছিল:

\\(Y=7.120-0.065A+0.280B-0.210C+0.390AB+0.04AC+0.072BC-0.190A^2-0.860B^2-0.075C^2\\)

Variance‑analysis outcomes illustrated that overall regression model reached extremely significant level (\(P=0.0003\)). The lack‑of‑fit term showed non‑significant difference (\(P=0.0592>0.05\\)), রিগ্রেশন সমীকরণ এবং প্রকৃত পরীক্ষামূলক ডেটার মধ্যে ভাল ফিটিং ডিগ্রী প্রদর্শন করে। সামঞ্জস্যপূর্ণ সংকল্প সহগ \\(R^2_{Adj}=0.9232\\), পলিস্যাকারাইড ফলনের 92% এর বেশি বৈচিত্র প্রমাণ করে এই গাণিতিক মডেল দ্বারা ব্যাখ্যা করা যেতে পারে।

ফ্যাক্টর তাত্পর্য তুলনা: অতিস্বনক নিষ্কাশন সময় (B) ফলনের উপর অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ প্রভাব ফেলে (\\(P=0.0035\\)); অতিস্বনক তাপমাত্রা (C) উল্লেখযোগ্য প্রভাব তৈরি করেছে (\\(P=0.0256\\)); কঠিন-তরল অনুপাত (A) অ-উল্লেখযোগ্য প্রভাব দেখিয়েছে (\\(P=0.3938\\))। ফ্যাক্টর-প্রভাব অগ্রাধিকার অর্ডার: অতিস্বনক নিষ্কাশন সময় > অতিস্বনক নিষ্কাশন তাপমাত্রা > কঠিন-তরল অনুপাত। মিথস্ক্রিয়া শব্দ AB (কঠিন-তরল অনুপাত × অতিস্বনক সময়) অত্যন্ত উল্লেখযোগ্য মিথস্ক্রিয়া প্রভাব অর্জন করেছে।

রেসপন্স-সারফেস ম্যাট্রিক্সের পরীক্ষামূলক রান থেকে, সর্বাধিক পরিমাপ করা পলিস্যাকারাইড ফলন 7.49% শর্তে উপস্থিত হয়েছে: কঠিন-তরল অনুপাত 1:100, অতিস্বনক নিষ্কাশন সময় 40 মিনিট, অতিস্বনক নিষ্কাশন তাপমাত্রা 48 ডিগ্রি। পরামিতিগুলির এই সেটটি সর্বোত্তম অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশন শর্ত হিসাবে নিশ্চিত করা হয়েছিলCistanche deserticolaপলিস্যাকারাইড

3.4 সর্বোত্তমভাবে নিষ্কাশিত পলিস্যাকারাইডের অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-ক্রিয়াকলাপ মূল্যায়ন

সর্বোত্তম অতিস্বনক-সহায়তা নিষ্কাশন পরামিতিগুলির অধীনে, ইন-ভিট্রো র্যাডিকাল-স্ক্যাভেঞ্জিং ক্ষমতাCistanche deserticolaপলিস্যাকারাইডগুলি ইতিবাচক বেঞ্চমার্ক রেফারেন্স হিসাবে ভিসি দিয়ে পরিমাপ করা হয়েছিল। পলিস্যাকারাইড নমুনার DPPH র্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং ক্ষমতা Vc স্ক্যাভেঞ্জিং কর্মক্ষমতার তুলনায় 84.27% এ পৌঁছেছে; ভিসি স্ট্যান্ডার্ডের তুলনায় এর ABTS র‌্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ 73.95%। DPPH এবং ABTS হল দুটি ক্লাসিক পরিপূরক ইন-ভিট্রো অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট মূল্যায়ন সিস্টেম, যা বিভিন্ন র্যাডিকাল প্রজাতির প্রতি মুক্ত-মৌল নির্মূল ক্ষমতা প্রতিফলিত করে। পরীক্ষার তথ্য তা নিশ্চিত করেছেCistanche deserticolaপলিস্যাকারাইড বিশিষ্ট অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সম্ভাবনার অধিকারী।

উদ্ভিদ পলিস্যাকারাইডের অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রক্রিয়া সাধারণত চিনি-চেইন শাখায় বিতরণ করা হাইড্রক্সিল গ্রুপের সাথে যুক্ত। হাইড্রক্সিল ময়েটিগুলি মুক্ত র্যাডিকেলগুলিকে নিরপেক্ষ করতে এবং র্যাডিক্যাল-চেইন প্রতিক্রিয়া বন্ধ করতে হাইড্রোজেন প্রোটন দান করে। অতিরিক্তভাবে, অপরিশোধিত পলিস্যাকারাইড পাউডারে অবশিষ্ট সহ-নিষ্কাশিত পলিফেনলিক এবং ফ্ল্যাভোনয়েড অমেধ্য সিনারজিস্টিক অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রভাব তৈরি করতে পারে। এটি উল্লেখ করা উচিত যে নিষ্কাশন প্রযুক্তিগত পরামিতিগুলি পলিস্যাকারাইডের আণবিক-ওজন বন্টন এবং সহ-বিদ্যমান ক্ষুদ্র-উপাদান বিষয়বস্তুকে পরিবর্তন করতে পারে, চূড়ান্ত অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট শক্তিকে আরও সংশোধন করে। অপ্টিমাইজ করা অতিস্বনক-সহায়ক কর্মপ্রবাহ শুধুমাত্র পলিস্যাকারাইডের ফলনকে সর্বোচ্চ করে না বরং নির্যাসের জন্য তুলনামূলকভাবে উচ্চ অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপও সংরক্ষিত করে।

3.5 ব্যাপক আলোচনা

প্রচলিত গরম-জল এবং এনজাইমেটিক নিষ্কাশনের সাথে তুলনা করে, অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশন জলীয় দ্রাবক দ্রবীভূতকরণের সাথে যান্ত্রিক গহ্বরের শারীরিক ব্যাঘাতকে একত্রিত করে। এটি এনজাইম প্রস্তুতির বড় খরচ ছাড়াই উচ্চ পলিস্যাকারাইড ফলন উপলব্ধি করে। বৈচিত্র-বিশ্লেষণের ফলাফল অনুসারে, অতিস্বনক প্রক্রিয়াকরণের সময় সবচেয়ে প্রভাবশালী পরিবর্তনশীল ছিল। অপর্যাপ্ত অতিস্বনক সময়কাল কোষ-প্রাচীর বিভক্তকরণকে বাধা দেয়; অত্যধিক সময় জৈব-অণু ক্ষয় ঝুঁকি হতে পারে. পলিস্যাকারাইড পদার্থের তাপ-অবক্ষয় থ্রেশহোল্ডের নীচে তাপমাত্রা কঠোরভাবে নিয়ন্ত্রণ করতে হবে। সলিড-তরল অনুপাত প্রধানত দ্রবীভূত ভারসাম্য এবং প্রক্রিয়াকরণ পরবর্তী শক্তি খরচকে প্রভাবিত করে; যুক্তিসঙ্গত ব্যবধানে এর প্রভাব সময় এবং তাপমাত্রার তুলনায় অপেক্ষাকৃত দুর্বল।

প্রাপ্ত অপরিশোধিত পলিস্যাকারাইড শক্তিশালী ইন-ভিট্রো ফ্রি-র্যাডিক্যাল-অপসারণ ক্ষমতা প্রদর্শন করে, যা কার্যকরী-খাদ্য সূত্রে আংশিক সিন্থেটিক অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিস্থাপন করে প্রাকৃতিক অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কাঁচামাল হিসাবে এর বিকাশের সম্ভাবনাকে সমর্থন করে। এই গবেষণায় শুধুমাত্র অশোধিত পলিস্যাকারাইডের মূল্যায়ন করা হয়েছে। ভবিষ্যত তদন্ত পলিস্যাকারাইড পরিশোধন, মনোস্যাকারাইড-কম্পোজিশন বিশ্লেষণ, আণবিক-ওজন বৈশিষ্ট্য, এবং কোষ-স্তর বা পশু-মডেল অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈধতার উপর ফোকাস করতে পারে। এছাড়াও, আরও গবেষণা নিষ্কাশন ফলন এবং জৈবিক কার্যকলাপের মধ্যে বাণিজ্য বন্ধ সম্পর্ক অন্বেষণ করতে পারে; কিছু কঠোর উচ্চ-ফলন নিষ্কাশন পরামিতিগুলি জৈব-ক্রিয়াকলাপকে ক্ষতিগ্রস্ত করতে পারে যদিও অপরিশোধিত ভরের আউটপুট বাড়তে পারে।

4. উপসংহার

এই গবেষণায়, জন্য তিনটি নিষ্কাশন কর্মপ্রবাহCistanche deserticolaপলিস্যাকারাইডগুলি পদ্ধতিগতভাবে তুলনা করা হয়েছিল। অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশন পলিস্যাকারাইড পুনরুদ্ধারের হার সম্পর্কিত গরম-জল নিষ্কাশন এবং এনজাইমেটিক নিষ্কাশনকে ছাড়িয়ে গেছে। বক্স-বেহেনকেন প্রতিক্রিয়া-সারফেস পদ্ধতির সাথে মিলিত একক-ফ্যাক্টর স্ক্রীনিং সর্বোত্তম অতিস্বনক-সহায়ক নিষ্কাশন পরামিতি নির্ধারণ করে: কঠিন-তরল অনুপাত 1:100 (5.0 গ্রামCistanche deserticola500 মিলি পাতিত জলের সাথে মিশ্রিত পাউডার), অতিস্বনক নিষ্কাশন সময় 40 মিনিট, নিষ্কাশন তাপমাত্রা 48 ডিগ্রি। এই অপ্টিমাইজ করা সেটিংসের অধীনে, পলিস্যাকারাইড নিষ্কাশন ফলন 7.49% অর্জন করেছে। অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-অ্যাক্টিভিটি সনাক্তকরণ ইঙ্গিত দেয় যে পলিস্যাকারাইড নির্যাসের DPPH র্যাডিকাল-স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ ভিটামিন-সি কর্মক্ষমতার 84.27% এ পৌঁছেছে; ABTS র‌্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং ক্ষমতা Vc এর 73.95% এর সমতুল্য।

বর্তমান গবেষণা অতিস্বনক-সহায়ক উত্পাদনের জন্য ব্যবহারিক প্রক্রিয়াকরণ পরামিতি সরবরাহ করেCistanche deserticolaপলিস্যাকারাইড পরীক্ষামূলক ফলাফলগুলি বৈধ করে যে পলিস্যাকারাইডগুলি থেকেCistanche deserticolaযথেষ্ট অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বায়োঅ্যাকটিভিটি আছে। ফলাফলগুলি আরও ব্যবহারের জন্য পরীক্ষামূলক ভিত্তি স্থাপন করেCistanche deserticolaগ্লোবাল নিউট্রাসিউটিক্যাল, খাদ্যতালিকা-সম্পূরক এবং কার্যকরী-খাদ্য খাতে প্রাকৃতিক কার্যকরী কাঁচামাল হিসাবে।

তথ্যসূত্র

[১] লিউ জেডএক্স, লি বিবি, ঝাও ওয়াই, এট আল। আখরোট প্রোটিন দ্বারা স্থিতিশীল রেসভেরাট্রল পিকারিং ইমালশনের প্রস্তুতি এবং স্থায়িত্বCistanche deserticolaপলিস্যাকারাইড [জে]। খাদ্য বিজ্ঞান, 2024, 45(23): 2328-2334। [২] Ma JC, Li XP, Gong Y F. গোলাপ জ্যাম সহ যৌগিক পানীয় প্রক্রিয়াকরণের অপ্টিমাইজেশন এবংCistanche deserticolaপ্রতিক্রিয়া-সারফেস পদ্ধতি দ্বারা [জে]। চায়না কন্ডিমেন্ট, 2024, 49(11):102-109। [৩] শু ডব্লিউএল, ইয়ে ওয়াই, মেং ডব্লিউ ডি. প্রস্তুতি অপ্টিমাইজেশান এবং মূল উপাদান বিশ্লেষণCistanche deserticolaমৌখিক তরল [জে]। খাদ্য গবেষণা ও উন্নয়ন, 2024,45(19):132-139। [৪] লিউ ডব্লিউ এইচ. থেকে উদ্বায়ী তেল নিষ্কাশন এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ উপর অধ্যয়নCistanche deserticolaঅতিস্বনক-সহায়তা সল্টিং-আউট বাষ্প-পাতন [জে] দ্বারা। গুয়াংজু রাসায়নিক শিল্প, 2024,52(15):46‑50,58। [৫] জিয়াং এস কিউ. পুষ্টি-উপাদান বিশ্লেষণ এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-অ্যাক্টিভিটি গবেষণাCistanche deserticola[জে]। জার্নাল অফ ফুড সেফটি রিভিউ, 2024(12): 96-98। [৬] চেন ওয়াই, সং জেডপি, উ এইচ. এক্সট্রাকশন-প্রক্রিয়া অপ্টিমাইজেশান এবং পলিস্যাকারাইডের অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-অ্যাক্টিভিটি বিশ্লেষণপেরিস্ট্রোফ বিভালভিস[জে]। খাদ্য শিল্পের বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি, 2023,44(5):166-173।