বিমূর্ত

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight, Orobanchaceae পরিবারের একটি মূল্যবান খাদ্য-ঔষধ সমজাতীয় ভেষজ, চীনের দক্ষিণ জিনজিয়াংয়ে ব্যাপকভাবে চাষ করা হয়। এর প্রধান বায়োঅ্যাকটিভ ফিনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড উপাদান,echinacosideএবংঅ্যাক্টিওসাইড (ভারবাস্কোসাইড), অ্যান্টি-অক্সিডেশন, অ্যান্টি-ইনফ্লেমেশন এবং ইমিউন রেগুলেশন সহ একাধিক ফার্মাকোলজিক্যাল ক্রিয়াকলাপ সরবরাহ করে। অপ্রমাণিত ঐতিহ্যগত প্রক্রিয়াকরণ পদ্ধতি প্রায়ই এই মূল সক্রিয় যৌগগুলির যথেষ্ট ক্ষতির কারণ হয়, যার ফলে ওষুধ এবং কার্যকরী-খাদ্য প্রয়োগ সীমিত হয়।Cistanche tubulosaক্বাথ টুকরা। এই গবেষণার লক্ষ্য তাজা জন্য আধুনিক প্রক্রিয়াকরণ পরামিতি অপ্টিমাইজ করাCistanche tubulosaঅ্যাক্টিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইডের পুনরুদ্ধার সর্বাধিক করার জন্য স্লাইস, এবং আরও স্পষ্ট করে অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি বায়োঅ্যাকটিভিটি সেইসাথে সেলুলার স্তরে সর্বোত্তমভাবে প্রক্রিয়াকৃত ক্বাথ টুকরাগুলির অন্তর্নিহিত আণবিক প্রক্রিয়া।

স্লাইস বেধ, বাষ্পের সময়কাল এবং ওভেন-শুকানোর তাপমাত্রার জন্য উপযুক্ত পরিসর স্ক্রীন করার জন্য একক-ফ্যাক্টর পরীক্ষা করা হয়েছিল। দ্বৈত মূল্যায়ন সূচক হিসাবে অ্যাক্টিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইড সামগ্রী ব্যবহার করে বহু-ফ্যাক্টর ইন্টারঅ্যাকশন মডেল স্থাপনের জন্য একটি তিন-ফ্যাক্টর থ্রি-লেভেল বক্স-বেহেনকেন রেসপন্স-সারফেস পদ্ধতি গ্রহণ করা হয়েছিল। পরবর্তীকালে, লিপোপলিস্যাকারাইড (এলপিএস)-উদ্দীপিত RAW264.7 মাউস ম্যাক্রোফেজ সেল মডেলটি লিপিড পারক্সিডেশন এবং তীব্র প্রদাহজনক ক্ষতি অনুকরণ করার জন্য তৈরি করা হয়েছিল। এমটিটি, আরওএস ফ্লুরোসেন্ট সনাক্তকরণ, এলিসা এবং ওয়েস্টার্ন ব্লট সহ জৈব রাসায়নিক পরীক্ষাগুলির একটি সিরিজ অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস শক্তি মূল্যায়ন করতে এবং সংকেত-ট্রান্সডাকশন পথগুলি অন্বেষণ করতে প্রয়োগ করা হয়েছিল।

পরীক্ষামূলক ফলাফল অনুসারে, সর্বোত্তম প্রক্রিয়াকরণের পরামিতিগুলি 0.6 সেন্টিমিটারের স্লাইস পুরুত্ব, 6 মিনিটের জন্য স্টিমিং ট্রিটমেন্ট এবং শুকানোর তাপমাত্রা 57 ডিগ্রি নির্ধারণ করা হয়েছিল। এই ব্যবহারিক প্রক্রিয়াকরণ অবস্থার অধীনে, অ্যাক্টিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইডের পরিমাপকৃত বিষয়বস্তু যথাক্রমে 7.25% এবং 31.62%-এ পৌঁছেছে, যা তাত্ত্বিক ভবিষ্যদ্বাণী মানগুলির সাথে ভাল সামঞ্জস্য দেখাচ্ছে। সেল-ভিত্তিক অ্যাসেস প্রকাশ করেছে যে সর্বোত্তমভাবে প্রক্রিয়া করা হয়েছেCistanche tubulosaএলপিএস-চ্যালেঞ্জড RAW264.7 ম্যাক্রোফেজগুলিতে ডিকোকশন-পিস নির্যাস উল্লেখযোগ্যভাবে নাইট্রিক অক্সাইড (NO) এবং ম্যালন্ডিয়ালডিহাইড (MDA) ঘনত্বকে হ্রাস করে। ইতিমধ্যে, এটি গ্লুটাথিয়ন (GSH) সামগ্রীর সাথে বর্ধিত সুপারঅক্সাইড ডিসমুটেজ (SOD), ক্যাটালেস (CAT), ল্যাকটেট ডিহাইড্রোজেনেস (LDH) এর অন্তঃকোষীয় অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইম কার্যকলাপকে উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত করেছে। TNF-, IL-1 এবং IL-6 সহ প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি মধ্যস্থতাকারীদের ক্ষরণের মাত্রাও ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে দমন করা হয়েছিল। ওয়েস্টার্ন-ব্লট সনাক্তকরণ এটিকে বৈধ করেছেCistanche tubulosap38/AKT/JNK/NF‑κB সিগন্যালিং ক্যাসকেডের মধ্যে মূল প্রোটিনের অত্যধিক ফসফোরিলেশন নিয়ন্ত্রণ করে।

সংক্ষেপে, এই অপ্টিমাইজ করা আধুনিক প্রক্রিয়াকরণ প্রোটোকলটি কার্যকরভাবে বৈশিষ্ট্যযুক্ত ফিনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের (অ্যাকটিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইড) ফলন উন্নত করে।Cistanche tubulosaক্বাথ টুকরা। প্রক্রিয়াকৃত ভেষজ উপাদান এলপিএস-প্ররোচিত ম্যাক্রোফেজ ইনজুরি মডেলে বিশিষ্ট অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস এবং প্রদাহ-বিরোধী প্রভাব প্রয়োগ করে, যার ফার্মাকোলজিক্যাল মেকানিজম আংশিকভাবে p38/AKT/JNK/NF-অক্সিডেন্ট সিগন্যাল-এর ওভার-অ্যাক্টিভেশন বাধার মাধ্যমে উপলব্ধি করা হয়। এই কাজটি প্রমিত শিল্প উত্পাদনের জন্য নির্ভরযোগ্য প্রযুক্তিগত পরামিতি প্রদান করে এবং থেকে প্রাপ্ত অ্যান্টি-অক্সিডেন্ট কার্যকরী খাদ্য বিকাশের জন্য পরীক্ষামূলক সহায়তা সরবরাহ করেCistanche tubulosa.

কীওয়ার্ড: Cistanche tubulosa; ক্বাথ-পিস প্রক্রিয়াকরণ প্রযুক্তি; অ্যাক্টিওসাইড; echinacoside; অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ স্ট্রেস; RAW264.7 ম্যাক্রোফেজ; p38/AKT/JNK/NF‑κB সিগন্যালিং পাথওয়ে

1. ভূমিকা

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight Orobanchaceae পরিবারের অন্তর্গত, এবং এর মাংসল আঁশযুক্ত কান্ড সরকারী ঔষধি অংশ। এই মরুভূমির ঔষধি গাছটি মূলত চীনের শুষ্ক দক্ষিণ জিনজিয়াংয়ে রোপণ করা হয়। ঐতিহ্যগত চীনা ভেষজ অনুশীলনে,Cistanche tubulosaকিডনি-ইয়াংকে টোনিফাই করা, সার-রক্ত পূরণ করা এবং অন্ত্রের আন্দোলনকে শিথিল করার নথিভুক্ত থেরাপিউটিক ফাংশন সহ একটি ক্লাসিক টনিক ভেষজ হিসাবে কাজ করে। ক্লিনিকালভাবে এটি ব্যথা উপশমের জন্য প্রয়োগ করা হয় ‑লোম্বাস এবং হাঁটুর দুর্বলতা, কিডনির ঘাটতির কারণে বন্ধ্যাত্ব, এবং অন্ত্রের শুষ্কতা-জনিত কোষ্ঠকাঠিন্য 维普期刊।

ফেনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডগুলি সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ বায়োঅ্যাকটিভ মার্কারগুলির জন্য দাঁড়ায়Cistanche tubulosa. চাইনিজ ফার্মাকোপিয়া শর্ত দেয় যে ইচিনাকোসাইড প্লাস অ্যাক্টিওসাইডের মোট উপাদান যোগ্য ওষুধের জন্য 1.50% এর কম হওয়া উচিত নয়। তা সত্ত্বেও, বর্তমান মূলধারার উত্পাদনCistanche tubulosaক্বাথের টুকরা এখনও বেশিরভাগই প্রাচীন ম্যানুয়াল ওয়ার্কফ্লো অনুসরণ করে: তাজা কাঁচা ভেষজ ভেজানো, পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে আর্দ্র করা, টুকরো টুকরো করা এবং প্রাকৃতিক শুকানো বা ওয়াইন-স্টিমিং প্রক্রিয়াকরণ। এই প্রচলিত পদ্ধতির সুনির্দিষ্ট পরিমাণগত প্রযুক্তিগত বৈশিষ্ট্যের অভাব রয়েছে। ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের তাপীয় অস্থিরতা প্রায়শই প্রক্রিয়াকরণের সময় গুরুতর সক্রিয়-উপাদানের অবনতির দিকে নিয়ে যায়, যা চূড়ান্ত পণ্যের গুণমানকে হ্রাস করে এবং বড় আকারের উচ্চ-মানের উত্পাদনকে সীমাবদ্ধ করে। বর্তমানে, শুধুমাত্র সীমিত গবেষণা জৈবিক-ক্রিয়াকলাপ বৈধতার সাথে প্রক্রিয়াকরণ-প্রযুক্তি অপ্টিমাইজেশানকে একত্রিত করে; বেশিরভাগ গবেষণা সেলুলার কার্যকরী যাচাইকরণ ছাড়াই কেবল রাসায়নিক উপাদানের বিষয়বস্তু সনাক্ত করে, শিল্প রূপান্তরের জন্য Google এর জন্য ফাঁক তৈরি করে।

অক্সিডেটিভ স্ট্রেস একাধিক দীর্ঘস্থায়ী বিপাকীয় এবং প্রদাহজনিত রোগের জন্য মূল প্যাথলজিকাল ট্রিগার হিসাবে কাজ করে। অত্যধিক প্রতিক্রিয়াশীল-অক্সিজেন-প্রজাতি (ROS) জমে রেডক্স হোমিওস্ট্যাসিস ব্যাহত করে, ম্যাক্রোফেজ ওভার-অ্যাক্টিভেশন এবং ব্যাপক প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি-সাইটোকাইন নিঃসরণকে আরও উস্কে দেয়, যা অক্সিডেশন এবং প্রদাহের মধ্যে একটি দুষ্ট চক্র তৈরি করে। বিদ্যমান ফার্মাকোলজিকাল তদন্ত এটি প্রমাণ করেছেসিস্তানচে- অরিজিন ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি বৈশিষ্ট্য রয়েছে। পূর্ববর্তী প্রাণী পরীক্ষাগুলি তা প্রমাণ করেছেCistanche tubulosaমোট গ্লাইকোসাইডগুলি Nrf2/HO-1 অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সিগন্যালিং সক্রিয় করে সেপসিস ইঁদুরের মডেলগুলিতে হেপাটিক আঘাতের উন্নতি ঘটায়। লিগনান-গ্লাইকোসাইড উপাদানগুলি থেকে বিচ্ছিন্নCistanche tubulosaRAW264.7 ম্যাক্রোফেজে PI3K/AKT পাথওয়ে মড্যুলেট করার মাধ্যমে LPS-প্ররোচিত প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া প্রশমিত করতে পারে। যাইহোক, নতুন-অপ্টিমাইজ করা প্রক্রিয়াকরণ অবস্থার অধীনে উত্পাদিত ক্বাথ-টুকরা শক্তিশালী অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস জৈব সক্রিয়তা বজায় রাখে কিনা তা পদ্ধতিগতভাবে মূল্যায়ন করা হয়নি। কংক্রিট আণবিক নিয়ন্ত্রক প্রক্রিয়া এখনও গভীর অন্বেষণ প্রয়োজন.

এলপিএস-উদ্দীপিত RAW264.7 ম্যাক্রোফেজ হল একটি সু-স্বীকৃত ইন-ভিট্রো প্রদাহ-অক্সিডেটিভ-ড্যামেজ মডেল, যা প্রাকৃতিক-প্রোডাক্ট অ্যান্টি-অক্সিডেন্ট এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি প্রভাবের মূল্যায়নের জন্য ব্যাপকভাবে গৃহীত। এই সমীক্ষায়, আমরা প্রথমে একক-ফ্যাক্টর স্ক্রীনিং করি যার পরে বক্স-বেহেনকেন প্রতিক্রিয়া-সারফেস অপ্টিমাইজেশান উচ্চ অ্যাকটিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইড ফলন লক্ষ্য করে মানসম্মত স্লাইসিং-স্টিমিং-ড্রাইং প্রযুক্তিগত পরামিতিগুলি পেতে। অপ্টিমাইজড ডিকোশন-পিস পণ্য পাওয়ার পর, আমরা ভেষজ নির্যাস প্রস্তুত করি এবং LPS-প্ররোচিত RAW264.7 সেলুলার ইনজুরি মডেল গ্রহণ করি। অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস-বায়োকেমিক্যাল-মার্কার পরিমাপ, সাইটোকাইন ELISA পরিমাণ নির্ধারণ এবং ওয়েস্টার্ন-ব্লট পাথওয়ে বিশ্লেষণ সহ একাধিক পরীক্ষামূলক প্ল্যাটফর্মগুলি অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস কার্যকারিতা এবং সংকেত-ট্রান্সডাকশন প্রক্রিয়া স্পষ্ট করতে ব্যবহার করা হয়। এই গবেষণা উচ্চ মানের পাইলট-স্কেল উত্পাদনের জন্য ব্যবহারিক প্রক্রিয়া পরামিতি প্রদান করেCistanche tubulosaস্থিতিশীল অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস কার্যকলাপ সহ ক্বাথ টুকরা, এবং জিনজিয়াং থেকে প্রাপ্ত কার্যকরী খাদ্য এবং খাদ্যতালিকা-সম্পূরক পণ্যগুলির পরবর্তী বিকাশের জন্য পরীক্ষামূলক ভিত্তি স্থাপন করেCistanche tubulosaসম্পদ

2. উপকরণ এবং পদ্ধতি

2.1 কাঁচামাল, বিকারক এবং যন্ত্র

তাজাCistanche tubulosaচীনের জিনজিয়াং উইঘুর স্বায়ত্তশাসিত অঞ্চল হোতান থেকে শরৎকালে মাংসল ডালপালা সংগ্রহ করা হয়েছিল। RAW264.7 মাউস মনোসাইট-ম্যাক্রোফেজ লিউকেমিয়া সেল লাইন প্রোসেল লাইফ সায়েন্স অ্যান্ড টেকনোলজি কোং, লিমিটেড (উহান, চীন) থেকে কেনা হয়েছিল। ক্রোমাটোগ্রাফিক-গ্রেড অ্যাসিটোনিট্রিল এবং মিথানল মার্ক (জার্মানি) দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল। রেফারেন্স-স্ট্যান্ডার্ড পদার্থ ইচিনাকোসাইড এবং অ্যাক্টিওসাইড (বিশুদ্ধতা 98% এর চেয়ে বেশি বা সমান) বেইজিং উত্তর ওয়েই মেট্রোলজি টেকনোলজি রিসার্চ ইনস্টিটিউট থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। ডাইমিথাইল সালফক্সাইড (DMSO) সিগমা-VETEC (USA) থেকে কেনা হয়েছিল। ডিএমইএম উচ্চ-গ্লুকোজ মাধ্যম, বিসিএ মোট-প্রোটিন অ্যাস কিট ছিল থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক (ইউএসএ) এর পণ্য। ফেটাল বোভাইন সিরাম (এফবিএস) বিআই (ইসরায়েল) থেকে কেনা হয়েছিল। পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিন ডাবল-অ্যান্টিবডি সলিউশন হাইক্লোন (ইউএসএ) থেকে এসেছে। NO, MDA, SOD, CAT, GSH এর জন্য বাণিজ্যিক অ্যাস কিটগুলি Beyotime বায়োটেকনোলজি (সাংহাই, চীন) থেকে অর্জিত হয়েছিল। এলডিএইচ সনাক্তকরণ কিট এবং লিপোপলিস্যাকারাইড (এলপিএস,ই. কোলি055:B5) সোলারবিও (বেইজিং, চীন) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল।

মূল পরীক্ষাগার যন্ত্রের মধ্যে রয়েছে শিমাদজু হাই-পারফরম্যান্স লিকুইড-ক্রোমাটোগ্রাফি (এইচপিএলসি) সিস্টেম, ল্যাবটেক রোটারি ইভাপোরেটর, সুইং-টাইপ হাই-স্পিড চাইনিজ-হার্ব পাল্ভারাইজার, থার্মোস্ট্যাটিক ব্লাস্ট-ড্রাইং ওভেন, স্টিম-ইকপট-এস-ওয়াই ইকুইপমেন্ট। মাল্টি-মোড মাইক্রোপ্লেট রিডার, FA1204N ইলেকট্রনিক অ্যানালিটিক্যাল ব্যালেন্স, CF1524R রেফ্রিজারেটেড সেন্ট্রিফিউজ, BSC-1300IIA2 বায়োসেফটি ক্যাবিনেট এবং BDS200-PH ইনভার্টেড অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ।

2.2 একক-ফ্যাক্টর প্রক্রিয়াকরণ পরীক্ষা

তাজাCistanche tubulosaমাংসল ডালপালা বিভিন্ন পুরুত্বের (0.2 সেমি, 0.4 সেমি, 0.6 সেমি, 0.8 সেমি, 1.0 সেমি, 1.2 সেমি) টুকরো টুকরো করে কাটা হয়েছিল। স্লাইসগুলি বিভিন্ন সময়কালের জন্য স্টিম করা হয়েছিল (3 মিনিট, 6 মিনিট, 9 মিনিট, 12 মিনিট, 15 মিনিট, 18 মিনিট, 21 মিনিট)। পরে উপকরণগুলি বিভিন্ন তাপমাত্রার গ্রেডিয়েন্টের অধীনে শুকানো হয়েছিল (পরিবেষ্টিত 25 ডিগ্রি, 40 ডিগ্রি, 50 ডিগ্রি, 60 ডিগ্রি, 70 ডিগ্রি, 80 ডিগ্রি)। সম্পূর্ণ শুকনো ক্বাথ-পিস নমুনাগুলি পরবর্তী HPLC উপাদানের পরিমাণ নির্ধারণের জন্য 40-জাল চালনির মাধ্যমে পাল্ভারাইজ করা হয়েছিল এবং চালিত করা হয়েছিল।

2.3 অ্যাকটিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইড সামগ্রী নির্ধারণ

নমুনা-সমাধান প্রস্তুতি: সঠিকভাবে 1.0 গ্রাম পাল্ভারাইজড ডিকোশন-পিস পাউডারের ওজন স্টপারড শঙ্কু ফ্লাস্কে করুন। সুনির্দিষ্টভাবে 100 mL 50% মিথানল দ্রবণ যোগ করুন। 30-মিনিট ভিজিয়ে তারপর 40-মিনিট অতিস্বনক নিষ্কাশন করুন। ঠান্ডা হওয়ার পরে, 50% মিথানল দিয়ে দ্রাবক ওজন হ্রাস পুনরায় পূরণ করুন, সমানভাবে মিশ্রিত করুন এবং স্থির নিষ্পত্তির অনুমতি দিন। এইচপিএলসি ইনজেকশনের জন্য 0.22 μm মাইক্রোপোরাস ঝিল্লির মাধ্যমে সুপারনাট্যান্ট ফিল্টার করা হয়েছিল।

রেফারেন্স-স্ট্যান্ডার্ড-সলিউশন প্রস্তুতি: সঠিকভাবে অ্যাক্টিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইড রেফারেন্স পদার্থের যথাযথ ওজন করুন, ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কের ভিতরে 50% মিথানল দিয়ে দ্রবীভূত করুন, সিরিয়াল-গ্রেডিয়েন্ট স্ট্যান্ডার্ড সমাধান প্রস্তুত করুন, 0.22 μm ফিল্টার মেমব্রেন দিয়ে ফিল্টার করুন।

ক্রোমাটোগ্রাফিক সেটআপ: COSMOSIL C₁₈ বিশ্লেষণাত্মক কলাম; মোবাইল-ফেজ সিস্টেম: মোবাইল-ফেজ A: 0.1% ফসফরিক অ্যাসিড জলীয় দ্রবণ; মোবাইল-ফেজ বি: অ্যাসিটোনিট্রাইল। সনাক্তকরণ তরঙ্গদৈর্ঘ্য 330 এনএম হিসাবে সেট করা হয়েছিল; কলাম তাপমাত্রা 35 ডিগ্রী; প্রবাহ হার 1 মিলি/মিনিট। অ্যাকটিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইড সামগ্রীর পরিমাণগত গণনার জন্য বাহ্যিক-মান পদ্ধতি প্রয়োগ করা হয়েছিল। ব্যাপক মূল্যায়ন স্কোর=(ইচিনাকোসাইড সামগ্রী × 50 %) + (অ্যাকটিওসাইড সামগ্রী × 50 %)। বিস্তৃত স্কোর প্রক্রিয়াকরণ-শর্ত কর্মক্ষমতা জন্য যৌগিক মূল্যায়ন সূচক হিসাবে পরিবেশিত.

2.4 বক্স-বেহেনকেন রেসপন্স-সারফেস এক্সপেরিমেন্টাল ডিজাইন

একক-ফ্যাক্টর পরীক্ষামূলক ফলাফলের উপর ভিত্তি করে, ডিজাইন-বিশেষজ্ঞ 13.0 সফ্টওয়্যারটি বক্স-বেহেনকেন থ্রি-ফ্যাক্টর থ্রি-লেভেল পরীক্ষামূলক ব্যবস্থা বাস্তবায়নের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। স্লাইস বেধ (X₁, সেমি), ভাপ-চিকিত্সা সময় (X₂, মিনিট), শুকানোর তাপমাত্রা (X₃, ডিগ্রি ) স্বাধীন পরিবর্তনশীল হিসাবে নির্বাচিত হয়েছিল। অ্যাকটিওসাইড সামগ্রী (Y₁, %) এবং ইচিনাকোসাইড সামগ্রী (Y₂, %) ছিল প্রতিক্রিয়া মান। পরীক্ষা-নিরীক্ষার সতেরোটি গ্রুপ পরিচালিত হয়েছিল। একক-ফ্যাক্টর পরীক্ষায় অর্জিত সর্বোত্তম পরামিতি অনুসারে প্রতিটি ফ্যাক্টরের জন্য শূন্য স্তর নির্বাচন করা হয়েছিল। রেসপন্স-সারফেস ট্রায়াল শেষ করার পর, মডেল ভ্যারিয়েন্স-বিশ্লেষণ, 3D-প্রতিক্রিয়া-সারফেস প্লটিং এবং শর্ত-পূর্বাভাস সম্পন্ন হয়েছে। তাত্ত্বিক ভবিষ্যদ্বাণীকৃত পরামিতিগুলিকে কার্যকর প্রকৃত উত্পাদন মানগুলির সাথে সামঞ্জস্য করার পরে ব্যবহারিক যাচাই পরীক্ষাগুলি করা হয়েছিল।

2.5 কোষ সংস্কৃতি এবং নমুনা প্রস্তুতি

অপ্টিমাইজড প্রসেসিং অবস্থার অধীনে ডিকোকশন-পিস কাঁচামাল তৈরি করা হয়েছিল। উপরে উল্লিখিত নমুনা-প্রস্তুতি প্রোটোকল অনুসরণ করে ভেষজ পাউডার নিষ্কাশন করা হয়েছিল, ঘূর্ণমান বাষ্পীভবন দ্বারা ঘনীভূত এবং কঠিন নির্যাস পাউডার পাওয়ার জন্য ভ্যাকুয়াম-শুকনো। DMSO-তে নির্যাস পাউডার দ্রবীভূত করে স্টক সলিউশন প্রস্তুত করা হয়েছিল, সেলুলার পরীক্ষা-নিরীক্ষার জন্য সম্পূর্ণ DMEM মাধ্যম (10% FBS এবং 1% পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিন ধারণকারী) দিয়ে আরও মিশ্রিত করা হয়েছিল; চূড়ান্ত DMSO কাজের ঘনত্ব 0.1% (v/v) এর নিচে নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল। RAW264.7 ম্যাক্রোফেজগুলি 37 ডিগ্রির নিচে DMEM সম্পূর্ণ মাঝারি, 5% CO₂ আর্দ্র ইনকিউবেটর পরিবেশে সংষ্কৃত হয়েছিল।

2.6 MTT সাইটোটক্সিসিটি অ্যাস

RAW264.7 কোষগুলি 8 × 10⁴ কোষ/mL এর কোষ ঘনত্বে 96‑ভাল মাইক্রোপ্লেটগুলিতে বীজ করা হয়েছিল। পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীগুলির মধ্যে রয়েছে দ্রাবক-নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ (0.1% DMSO মাধ্যম), LPS-মডেল গ্রুপ (চূড়ান্ত এলপিএস ঘনত্ব 1 ug/mL), এবং একাধিকCistanche tubulosaনির্যাস ঘনত্ব গ্রুপ (3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100, 200, 400 ug/mL)। ভেষজ নমুনা সহ 2‑ঘন্টা প্রাক-ইনকিউবেশনের পরে, দ্রাবক-নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ ব্যতীত প্রতিটি গ্রুপে এলপিএস (1 ug/mL চূড়ান্ত ঘনত্ব) পরিপূরক করা হয়েছিল। ইনকিউবেশন 24 ঘন্টা অব্যাহত ছিল। তারপরে এমটিটি বিকারক (5 মিলিগ্রাম / এমএল) যুক্ত করা হয়েছিল এবং 4 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। সুপারন্যাট্যান্ট বাদ দিন, ভাল প্রতি 150 μL DMSO যোগ করুন, 15 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রিতে ঝাঁকান। 490 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যের শোষণের মান মাইক্রোপ্লেট রিডারে পড়া হয়েছিল এবং কোষ-বেঁচে থাকার হার গণনা করা হয়েছিল। ফলো-আপ কার্যকরী পরীক্ষার জন্য নিরাপদ কাজ-ঘনত্ব পরিসীমা নির্ধারণ করা হয়েছিল।

2.7 অন্তঃকোষীয় ROS পরিমাপ

RAW264.7 ম্যাক্রোফেজগুলি প্রতি কূপের 4 × 10⁵ কোষের ঘনত্বে ছয়টি কূপ প্লেটে ইনোকুলেশন করা হয়েছিল। কোষ আনুগত্যের পরে, গ্রুপিং চিকিত্সা সঞ্চালিত হয়েছিল: দ্রাবক-নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ, এলপিএস-মডেল গ্রুপ এবং সিটি এক্সট্র্যাক্ট ট্রিটমেন্ট গ্রুপ (12.5, 25, 50, 100 ug/mL)। নমুনা সহ 2‑ঘন্টা প্রাক-চিকিত্সা করার পরে, দ্রাবক-নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ ব্যতীত LPS 1 ug/mL যোগ করা হয়েছিল, 24 ঘন্টা ইনকিউবেট। কিট নির্দেশাবলী অনুসারে ফ্লুরোসেন্ট-প্রোব লোডিং পদ্ধতি ব্যবহার করে অন্তঃকোষীয় ROS স্তর সনাক্ত করা হয়েছিল। ফ্লুরোসেন্ট তীব্রতা ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোপ্লেট রিডার (উত্তেজনা 488 এনএম, নির্গমন 525 এনএম) দিয়ে পরিমাপ করা হয়েছিল।

2.8 NO, MDA, SOD, CAT, LDH এবং GSH সনাক্তকরণ

সংশ্লিষ্ট কোষের চিকিত্সার পরে, গ্রিস প্রতিক্রিয়া গ্রহণ করে কোনো পরিমাপের জন্য কোষ-সংস্কৃতির সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল। সংযুক্ত কোষগুলিকে প্রি-কুলড পিবিএস দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল, বরফের উপর লাইস করা হয়েছিল, সেল লাইসেট সুপারনাট্যান্ট সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে সংগ্রহ করা হয়েছিল (10 000 r/min, 4 ডিগ্রি , 5 মিনিট)৷ বিসিএ কিট প্রতিটি নমুনার মোট-প্রোটিনের ঘনত্ব নির্ধারণ করে। এমডিএ, জিএসএইচ এবং এনজাইমেটিক-অ্যাক্টিভিটি সূচক SOD, CAT, LDH-এর বিষয়বস্তুগুলি কিট অপারেশনাল ম্যানুয়ালগুলি অনুসরণ করে কঠোরভাবে পরীক্ষা করা হয়েছিল।

2.9 প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনের এলিসা নির্ধারণ

RAW264.7 কোষগুলি মোট 16 ঘন্টার জন্য নমুনা প্রাক-চিকিত্সা এবং এলপিএস উদ্দীপনা পেয়েছে। সেল-কালচার সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। সুপারনাট্যান্টে TNF-, IL-1, IL-6-এর ঘনত্ব বাণিজ্যিক ELISA কিট দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল।

2.10 ওয়েস্টার্ন-ব্লট বিশ্লেষণ

LPS এবং নমুনা সহ-ইনকিউবেশনের 45 মিনিটের পরে, RAW264.7 কোষগুলি প্রোটিজ-ফসফেটেস ইনহিবিটর ককটেলের সাথে সম্পূরক RIPA লাইসিস বাফার ব্যবহার করে লাইজ করা হয়েছিল। সেল লাইসেটকে 5 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রির নিচে 10 000 r/min এ সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। বিসিএ কিট মোট-প্রোটিন ঘনত্বের পরিমাণ নির্ধারণ করেছে। নমুনা প্রোটিন (প্রতি লেনে 50 ug) 5 মিনিটের জন্য 100 ডিগ্রি ধাতব স্নানে বিকৃত করা হয়েছিল। SDS-PAGE জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস টার্গেট প্রোটিনগুলিকে আলাদা করে, যা পরে PVDF ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত হয়েছিল। 5% স্কিম-মিল্ক টিবিএসটি দ্রবণ সহ ঝিল্লিগুলি 1 ঘন্টার জন্য অবরুদ্ধ করা হয়েছিল। p38, p‑p38, AKT, p‑AKT, JNK, p‑JNK, NF‑κB p65, p‑NF‑κB p65 এবং GAPDH লক্ষ্য করে প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলি 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল। টিবিএসটি ধোয়ার পরে, অনুরূপ সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলি ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেট করা হয়েছিল। বারবার ধোয়ার পর, ইসিএল অতি-সংবেদনশীল কেমিলুমিনেসেন্ট বিকারক প্রোটিন-ব্যান্ড ইমেজিংয়ের জন্য প্রয়োগ করা হয়েছিল। আপেক্ষিক ফসফোরিলেশন-প্রোটিন এক্সপ্রেশন স্তরের মূল্যায়নের জন্য ব্যান্ড ধূসর-স্কেল পরিমাণগত বিশ্লেষণ প্রয়োগ করা হয়েছিল।

2.11 পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ

গ্রাফপ্যাড প্রিজম 8.0.2 সফ্টওয়্যারটি পরিসংখ্যানগত গণনা এবং গ্রাফ প্লটিংয়ের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। পরীক্ষামূলক পরিমাণগত-ডেটা ফলাফলগুলিকে গড় ± স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি (\\(\\bar{x} \\pm s\\)) হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। একমুখী ANOVA পরে পোস্ট-হক মাল্টিপল-তুলনা পরীক্ষা আন্তঃগ্রুপ তুলনার জন্য প্রয়োগ করা হয়েছিল। \\(পি<0.05\) represented statistically significant difference; \(P<0.01\) highly significant difference; \(P<0.001\) extremely significant difference.

3. পরীক্ষামূলক ফলাফল

3.1 একক-ফ্যাক্টর পরীক্ষার ফলাফল

Slice thickness exerted obvious influence over the contents of acteoside and echinacoside. Slices at 0.2 cm thickness were easily over‑steamed, leading to thermal degradation of phenylethanoid‑glycoside active components. Excessively thick slices (>0.4 সেমি) অভ্যন্তরীণ-পদার্থ প্রকাশে বাধা দেয়, চূড়ান্ত সনাক্তযোগ্য উপাদান সামগ্রী কমিয়ে দেয়। স্থির স্টিমিং-টাইম (10 মিনিট) এবং শুকানোর-তাপমাত্রার (60 ডিগ্রি) অধীনে, 0.4 সেমি স্লাইস পুরুত্ব সর্বোচ্চ ব্যাপক মূল্যায়ন স্কোর অর্জন করেছে।

স্টিমিং-ট্রিটমেন্টের সময়কালের ফলাফল: যখন স্লাইসের বেধ 0.4 সেন্টিমিটারে স্থির করা হয় এবং শুকানোর তাপমাত্রা 60 ডিগ্রিতে রাখা হয়, তখন অপর্যাপ্ত স্টিমিং সময় উদ্ভিদ-কোষের গঠনকে পর্যাপ্তভাবে ধ্বংস করতে পারে না যাতে সক্রিয় যৌগগুলি দ্রবীভূত করা কঠিন ছিল। একবার স্টিমিং টাইম 6 মিনিটের বেশি হয়ে গেলে, অতিরিক্ত স্টিমিং ক্ষতিগ্রস্থ ভেষজ টিস্যু এবং ইচিনাকোসাইড এবং অ্যাক্টিওসাইডের অবক্ষয় ঘটায়। তাই 6 মিনিট প্রাথমিকভাবে বাষ্পীয়-প্রসেসিং সময়কাল হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল।

ওভেন-শুকানোর-তাপমাত্রার গ্রেডিয়েন্ট পরীক্ষাগুলির জন্য: স্লাইস পুরুত্ব 0.4 সেমি এবং স্টিমিং সময় 6 মিনিট স্থির করা হয়েছিল। নির্দিষ্ট সীমার মধ্যে ক্রমবর্ধমান শুকানোর-তাপমাত্রার সাথে উপাদানের বিষয়বস্তু বেড়েছে। একবার শুকানোর তাপমাত্রা 60 ডিগ্রি ছাড়িয়ে গেলে, উচ্চ-তাপমাত্রার তাপ পচন লক্ষ্য-পদার্থের বিষয়বস্তুর উল্লেখযোগ্য পতন ঘটায়। তাই পরবর্তী প্রতিক্রিয়া-সারফেস অপ্টিমাইজেশানের জন্য প্রাথমিক সর্বোত্তম শুকানোর-তাপমাত্রার অবস্থা হিসাবে 60 ডিগ্রি বেছে নেওয়া হয়েছিল।

3.2 বক্স-বেহেনকেন রেসপন্স-সারফেস অপ্টিমাইজেশান এবং যাচাইকরণ

ডিজাইন ম্যাট্রিক্স অনুসারে বক্স-বেহেনকেনের পরীক্ষামূলক রানের সতেরোটি গ্রুপ শেষ হয়েছিল। প্রকরণ-বিশ্লেষণের ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে অ্যাক্টিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইড উভয় সামগ্রীর জন্য রিগ্রেশন মডেল পরিসংখ্যানগত তাত্পর্য অর্জন করেছে (\\(P<0.05\)). The lack‑of‑fit terms were non‑significant (\(P>0.05\)), demonstrating satisfactory model‑fitting quality. Coefficient of determination \(R^2\) values were close to 1, illustrating high consistency between predicted values and practical measured experimental data. Factor‑influence rank for acteoside yield: slice thickness > drying temperature > steaming time. Factor‑influence rank for echinacoside yield: steaming time > drying temperature >টুকরা বেধ।

মডেল গাণিতিক গণনার মাধ্যমে, তাত্ত্বিক সর্বোত্তম প্রক্রিয়াকরণ পরামিতিগুলি ছিল: স্লাইস পুরুত্ব 0.600 সেমি, স্টিমিং-ট্রিটমেন্ট সময় 5.685 মিনিট, শুকানোর তাপমাত্রা 57.009 ডিগ্রি। প্রকৃত শিল্প-অপারেশনের সম্ভাব্যতা বিবেচনা করে, প্যারামিটারগুলি স্লাইস পুরুত্ব 0.6 সেমি, স্টিমিং টাইম 6 মিনিট, শুকানোর তাপমাত্রা 57 ডিগ্রিতে সামঞ্জস্য করা হয়েছিল। তিনটি সমান্তরাল বৈধতা পরীক্ষা করা হয়েছিল। এই বাস্তব অবস্থার অধীনে, পরিমাপকৃত অ্যাক্টিওসাইড সামগ্রী ছিল 7.25%, ইচিনাকোসাইড সামগ্রী 31.62% এ পৌঁছেছে। পরিমাপ করা মান এবং তাত্ত্বিক ভবিষ্যদ্বাণীর মধ্যে বিচ্যুতি 5%-এর নিচে ছিল, প্রমাণ করে যে এই প্রতিক্রিয়া-সারফেস মডেলটি নির্ভরযোগ্য এবং বাস্তব-বিশ্বের ক্বাথ-পিস উত্পাদনের জন্য প্রযোজ্য।

3.3 অপ্টিমাইজড-প্রসেসডের সাইটোটক্সিসিটি স্ক্রীনিংCistanche tubulosaRAW264.7 কোষে নির্যাস

MTT সাইটোটক্সিসিটি ফলাফলগুলি প্রকাশ করেছে যে 0-100 ug/mL সীমার নির্যাস ঘনত্ব RAW264.7 ম্যাক্রোফেজগুলিতে কোনও সুস্পষ্ট বিষাক্ত প্রভাব ফেলেনি, এবং এমনকি হালকা কোষ-প্রসারণ-প্রচারের প্রবণতাও দেখায়। যখন চিকিত্সার ঘনত্ব 200 ug/mL এবং 400 ug/mL-এ উঠে যায়, তখন কোষ-বেঁচে থাকার হার দ্রাবক-নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পায়, যা ঘনত্ব-নির্ভর সাইটোটক্সিসিটি দেখায়। অতএব, 12.5 ug/mL, 25 ug/mL, 50 ug/mL, 100 ug/mL এর ঘনত্বের গ্রেডিয়েন্টগুলি পরবর্তী অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস এবং প্রদাহ-সম্পর্কিত সেলুলার অ্যাসেসের জন্য নিরাপদ কাজের ঘনত্ব হিসাবে নির্বাচিত হয়েছিল।

3.4 Cistanche tubulosaLPS-উদ্দীপিত ম্যাক্রোফেজগুলিতে হ্রাসকৃত অন্তঃকোষীয় ROS স্তর নিষ্কাশন করুন

দ্রাবক-নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর সাথে তুলনা করে, LPS-মডেল গ্রুপের অন্তঃকোষীয় ROS ফ্লুরোসেন্ট তীব্রতা অত্যন্ত উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে (\\(P<0.001\)), confirming successful construction of cellular oxidative‑damage model. After intervention with gradient‑concentration Cistanche tubulosaনির্যাস, অন্তঃকোষীয় ROS সঞ্চয় ডোজ-নির্ভর ফ্যাশনে হ্রাস পেয়েছে। প্রতিটি ওষুধ-চিকিত্সা গ্রুপ ROS বনাম LPS-মডেল গ্রুপের পরিসংখ্যানগতভাবে-উল্লেখযোগ্য হ্রাস দেখিয়েছে (\\(P<0.001\)). This finding demonstrated that processed‑herb extract could effectively restrain excess ROS generation under inflammatory stimulation.

3.5 NO এবং MDA বিষয়বস্তুর উপর প্রভাব

NO সক্রিয় ম্যাক্রোফেজ দ্বারা নির্গত ক্লাসিক প্রদাহজনক মধ্যস্থতাকারী হিসাবে কাজ করে। MDA হল স্বর্ণ-মান বায়োমার্কার যা লিপিড-পেরক্সিডেশন অক্সিডেটিভ আঘাত প্রতিফলিত করে। দ্রাবক-নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর সাথে তুলনা করে, LPS উদ্দীপনা RAW264.7 কোষে NO এবং MDA বিষয়বস্তুকে উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত করেছে (\\(P<0.001\)). Different dosages of Cistanche tubulosaনির্যাস চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে কোন ঘনত্ব কমাতে পারে. MDA সূচকের জন্য: 12.5 ug/mL গ্রুপ পরিসংখ্যানগতভাবে উল্লেখযোগ্য উন্নতি করেনি; 25-100 ug/mL ঘনত্বের গোষ্ঠীগুলি MDA স্তরের লক্ষণীয়ভাবে হ্রাস পেয়েছে (\\(P<0.001\)). The results illustrated that extracts alleviated LPS‑triggered lipid‑peroxidation injury and inflammatory‑mediator over‑production.

3.6 অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-সম্পর্কিত জৈব রাসায়নিক সূচক SOD, CAT, LDH, GSH এর উপর প্রভাব

এলপিএস চ্যালেঞ্জের পরে, অন্তঃকোষীয় এসওডি, ক্যাট, এলডিএইচ এনজাইমেটিক-অ্যাক্টিভিটি এবং সেইসাথে জিএসএইচ সামগ্রী দ্রাবক-নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় তীব্রভাবে হ্রাস পেয়েছে (\\(পি<0.001\)). Low‑dose (12.5 μg/mL) extract treatment could significantly raise SOD activity, but failed to generate prominent changes for CAT and LDH activity. Medium‑and‑high concentration groups (25 μg/mL, 50 μg/mL, 100 μg/mL) concentration‑dependently enhanced SOD, CAT, LDH enzyme activities and intracellular GSH content (\(P<0.001\)). It indicated that optimally‑processed Cistanche tubulosaডিকোকশন-পিস নির্যাস এলপিএস দ্বারা প্ররোচিত অক্সিডেটিভ অপমানের বিরুদ্ধে সেলুলার অন্তঃসত্ত্বা অ্যান্টি-অক্সিডেন্ট প্রতিরক্ষা ক্ষমতা পুনরুদ্ধার করতে পারে।

3.7 প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন TNF- , IL-1 , IL-6 রিলিজের উপর ইনহিবিটরি প্রভাব

ELISA সনাক্তকরণের ফলাফলে দেখা গেছে যে LPS উদ্দীপনা RAW264.7 ম্যাক্রোফেজ (\\(P<0.001\)). With the increase of Cistanche tubulosaনির্যাস চিকিত্সা ঘনত্ব, এই তিনটি মূল প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনের মুক্তির পরিমাণ ক্রমান্বয়ে দমন করা হয়েছিল, স্পষ্ট ডোজ-প্রতিক্রিয়া সম্পর্ক উপস্থাপন করে। এটি নিশ্চিত করেছে যে ভেষজ নির্যাস সক্রিয় ম্যাক্রোফেজ থেকে প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি-সাইটোকাইন নিঃসরণ রোধ করে শক্তিশালী প্রদাহ-বিরোধী ফাংশন প্রয়োগ করে।

3.8 p38/AKT/JNK/NF‑κB সিগন্যালিং-পাথওয়ে ফসফোরিলেশনের উপর নিয়ন্ত্রণ

ওয়েস্টার্ন-ব্লট পরীক্ষামূলক ডেটা দেখিয়েছে যে p‑p38/p38, p‑AKT/AKT, p‑JNK/JNK এবং p‑NF‑κB/NF‑κB এর অনুপাত LPS-মডেল গ্রুপ বনাম দ্রাবক-পি (\\P কন্ট্রোল গ্রুপে) উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত ছিল<0.001\)). Medium‑and‑high‑dosage Cistanche tubulosaনিষ্কাশন হস্তক্ষেপ উল্লেখযোগ্যভাবে p‑p38/p38 এবং p‑JNK/JNK অনুপাত (\\(P) হ্রাস পেয়েছে<0.001\)). All concentration‑treatment groups obviously down‑regulated p‑AKT/AKT and p‑NF‑κB/NF‑κB phosphorylation level (\(P<0.05\) or \(P<0.001\)). These observations proved that Cistanche tubulosaডিকোশন-পিস নির্যাস p38/AKT/JNK/NF-κB সিগন্যালিং নেটওয়ার্কের হাইপার-ফসফোরিলেশন অ্যাক্টিভেশন দমনের মাধ্যমে অক্সিডেটিভ-প্রদাহজনিত আঘাত থেকে মুক্তি দেয়।

4. আলোচনা

জন্য চীনা ফার্মাকোপিয়া মধ্যে নথিভুক্ত ঐতিহ্যগত প্রক্রিয়াকরণ প্রয়োজনীয়তাCistanche tubulosaস্লাইস বেধ, স্টিমিং সময়কাল এবং শুকানোর তাপমাত্রার জন্য সুনির্দিষ্ট সংখ্যাসূচক পরামিতি নির্দিষ্ট না করেই প্রধানত অশুদ্ধতা অপসারণ, ধোয়া, আর্দ্রতা, টুকরো করা এবং শুকানো অন্তর্ভুক্ত। অ-মানক ম্যানুয়াল প্রক্রিয়াকরণ বাণিজ্যিক ডিকোকশন-পিস পণ্যগুলির বড় মানের ওঠানামা নিয়ে আসে। ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডস (ইচিনাকোসাইড এবং অ্যাক্টিওসাইড) হল তাপগতভাবে-যোগ্য বায়োঅ্যাকটিভ যৌগ। অনুপযুক্ত গরম করার সময় বা তাপমাত্রা রাসায়নিক পচনকে ট্রিগার করবে এবং ঔষধি মান হ্রাস করবে। আমাদের একক-ফ্যাক্টর পরীক্ষাগুলি প্রকাশ করেছে যে অপর্যাপ্ত এবং অত্যধিক স্টিমিং এবং সেইসাথে অতিরিক্ত শুকানোর তাপমাত্রা উভয়ই লক্ষ্য গ্লাইকোসাইড উপাদানগুলির ক্ষতির কারণ হবে৷ আরও বক্স-বেহেনকেন মাল্টি-ফ্যাক্টর অপ্টিমাইজেশান ব্যবহারিক উত্পাদন পরামিতিগুলি পেয়েছে: স্লাইস বেধ 0.6 সেমি, স্টিমিং 6 মিনিট, শুকানো 57 ডিগ্রি। এই অবস্থার অধীনে, অ্যাক্টিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইড সামগ্রী 7.25% এবং 31.62%-এ পৌঁছেছে, যা ফার্মাকোপিয়া ন্যূনতম-মানের থ্রেশহোল্ডকে ছাড়িয়ে গেছে। এই অপ্টিমাইজড প্রোটোকল জিনজিয়াং-উৎপত্তির প্রমিত শিল্প প্রক্রিয়াকরণের জন্য সম্ভাব্য পরিমাণগত প্রযুক্তিগত রেফারেন্স প্রদান করেCistanche tubulosa.

অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং প্রদাহ দৃঢ়ভাবে আন্তঃসংযুক্ত প্যাথলজিকাল প্রক্রিয়া। অতিরিক্ত ROS লিপিড পারক্সিডেশন প্ররোচিত করে এবং MDA তৈরি করে, যা আরও সহজাত-ইমিউন ম্যাক্রোফেজগুলিকে সক্রিয় করে। সক্রিয় ম্যাক্রোফেজগুলি প্রচুর পরিমাণে NO এবং একাধিক প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন নিঃসরণ করে, যা বিপরীতভাবে অন্তঃকোষীয় ROS উত্পাদনকে প্রসারিত করে, স্ব-পরিবর্ধক অক্সিডেটিভ-প্রদাহজনক দুষ্ট চক্র গঠন করে। প্রাকৃতিক উদ্ভিদ থেকে প্রাপ্ত অ্যান্টি-অক্সিডেন্ট পদার্থগুলি অন্তঃসত্ত্বা অ্যান্টি-অক্সিডেন্ট এনজাইম সিস্টেমকে উন্নত করে এবং প্রদাহজনক-সংকেত ট্রান্সডাকশনকে নিয়ন্ত্রণ করে এই প্যাথলজিকাল লুপটি ভেঙে দিতে পারে। এই ইন-ভিট্রো স্টাডিতে, সর্বোত্তমভাবে প্রক্রিয়া করা হয়েছেCistanche tubulosaডিকোকশন-পিস নির্যাস ROS, NO এবং MDA মাত্রা কমিয়ে দেয়, যখন LPS-উত্তেজক RAW264.7 ম্যাক্রোফেজে SOD, CAT, LDH কার্যকলাপ এবং GSH সামগ্রী বৃদ্ধি করে। একই সাথে, এটি TNF-, IL-1, IL-6 প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি-সাইটোকাইন নিঃসরণকে বাধা দেয়, সমন্বিত অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি ক্ষমতা প্রদর্শন করে।

মাইটোজেন-অ্যাক্টিভেটেড-প্রোটিন-কিনেস ফ্যামিলি অণু p38, JNK একসাথে AKT এবং NF-κB রচনা করে কেন্দ্রীয় সংকেত-ট্রান্সডাকশন হাব মধ্যস্থতাকারী ম্যাক্রোফেজ প্রদাহজনক-অক্সিডেটিভ প্রতিক্রিয়া। এলপিএস উদ্দীপনার উপর, আপস্ট্রিম সংকেত p38, JNK এবং AKT-এর ফসফোরিলেশন অ্যাক্টিভেশনকে ট্রিগার করে, যা ক্রমানুসারে NF-κB p65 সাবইউনিট ফসফোরিলেশন এবং পারমাণবিক ট্রান্সলোকেশন প্রচার করে। সক্রিয় NF‑κB ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর হিসাবে কাজ করে এবং প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি-সাইটোকাইন এবং অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস-সম্পর্কিত জিনের বৃহৎ ব্যাচের ট্রান্সক্রিপশন শুরু করে। আমাদের ওয়েস্টার্ন-ব্লট ফলাফল তা প্রমাণ করেছেCistanche tubulosaনির্যাস p38, JNK, AKT এবং NF‑κB p65 এর ফসফোরিলেশন দমন করতে পারে। অতএব, আমরা অনুমান করি যে এর অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি জৈব-ক্রিয়াকলাপ অর্জিত হয়েছে, অন্তত আংশিকভাবে, p38/AKT/JNK/NF-κB সিগন্যালিং অক্ষের অতিরিক্ত-অ্যাক্টিভেশন ব্লক করার মাধ্যমে।

বর্তমান গবেষণার মধ্যে বেশ কিছু সীমাবদ্ধতা রয়েছে। সমস্ত কার্যকরী যাচাইকরণ ইন-ভিট্রো সেল-কালচার স্তরে সীমাবদ্ধ। অপ্টিমাইজড ডিকোশন টুকরোগুলির ইন-ভিভো ফার্মাকোডাইনামিক কার্যকারিতা যাচাই করার জন্য আরও পশু-মডেল ইন-ভিভো পরীক্ষা-নিরীক্ষার প্রয়োজন। উপরন্তু, এই গবেষণায় ক্বাথ টুকরা থেকে মোট মিশ্র নির্যাস গ্রহণ করা হয়েছে, তাই আমরা ইচিনাকোসাইড, অ্যাক্টিওসাইড এবং অন্যান্য গৌণ গৌণ বিপাকগুলির পৃথক অবদানকে আলাদা করতে পারি না। ফলো-আপ গবেষণা সংশ্লিষ্ট অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস শক্তির তুলনা করতে মনোমার যৌগগুলিকে আলাদা করতে পারে এবং সামঞ্জস্য-প্রভাব তদন্ত চালাতে পারে। তা সত্ত্বেও, আমাদের বর্তমান কাজ এখনও ব্যবহারিক প্রক্রিয়াকরণ-প্রযুক্তি পরামিতি এবং বিকাশের জন্য প্রাথমিক যান্ত্রিক প্রমাণ সরবরাহ করেCistanche tubulosa- সম্পর্কিত স্বাস্থ্য-যত্ন পণ্য।

5. উপসংহার

উপসংহারে, বক্স-বেহেনকেন প্রতিক্রিয়া-সারফেস পদ্ধতি দ্বারা অপ্টিমাইজ করা আধুনিক প্রক্রিয়াকরণ কর্মপ্রবাহ (স্লাইস বেধ 0.6 সেমি, স্টিমিং 6 মিনিট, শুকানোর তাপমাত্রা 57 ডিগ্রী) উল্লেখযোগ্যভাবে অ্যাক্টিওসাইড এবং ইচিনাকোসাইড সামগ্রী বৃদ্ধি করতে পারে।Cistanche tubulosaক্বাথ টুকরা। এই সর্বোত্তম-প্রক্রিয়াজাত ভেষজ স্লাইসগুলি থেকে প্রস্তুত করা নির্যাসগুলি এলপিএস-প্ররোচিত RAW264.7 ম্যাক্রোফেজ ক্ষতির বিরুদ্ধে বিশিষ্ট অ্যান্টি-অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস এবং প্রদাহ-বিরোধী প্রভাব প্রয়োগ করে। অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াটি অন্তঃকোষীয় অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-প্রতিরক্ষা ব্যবস্থার পুনরুদ্ধার এবং p38/AKT/JNK/NF‑κB প্রদাহজনক সংকেত-পথের অত্যধিক সক্রিয়করণের বাধার সাথে সম্পর্কযুক্ত। এই গবেষণাটি প্রমিত শিল্প উত্পাদন এবং কার্যকরী-খাদ্য শোষণের জন্য কঠিন পরীক্ষামূলক ভিত্তি প্রদান করেCistanche tubulosaসম্পদ

তথ্যসূত্র

লিন জে, ইউ এইচ, ঝাও ওয়াই, এট আল। থেকে echinacoside নিষ্কাশনCistanche tubulosa(শেঙ্ক) আর. উইট এবং সেপসিস ইঁদুরের লিভারের আঘাতের উপর এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবের তদন্ত। ফুড সাই টেকনোল, 2023, 43:e010523।

গুও জে, ট্যাং এস, মিয়াও ওয়াই, এবং অন্যান্য। থেকে লিগনান গ্লাইকোসাইডের প্রদাহবিরোধী প্রভাবCistanche tubulosaPI3K/AKT পাথওয়ের মাধ্যমে LPS/IFN-প্ররোচিত RAW264.7 ম্যাক্রোফেজ কোষগুলিতে কান্ড। বর্তমান ফার্মাসিউটিক্যাল বায়োটেকনোলজি, 2021, 22(10):1380-1391।

রানি ভি, দীপ জি, সিং আরকে, এবং অন্যান্য। অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং বিপাকীয় ব্যাধি: প্যাথোজেনেসিস এবং থেরাপিউটিক কৌশল। জীবন বিজ্ঞান, 2016,148:183-193।

পার্ক জেএইচ, কিম জেএইচ, জ্যাং এস আই। এলপিএস-উদ্দীপিত RAW264.7 কোষে ডিজ-নেসিওনিল সিস-খেলাকটোনের প্রদাহরোধী এবং দ্রবণীয় ইপোক্সাইড হাইড্রোলেসে এর প্রতিরোধমূলক কার্যকলাপ। হেলিয়ন, 2023,9(10):e21032।

চুং ওয়াইসি, সং এস জে. আইসোবাভাচিন MAPK এবং NF‑κB সংকেত পথকে দমন করে ম্যাক্রোফেজে লিপোপলিস্যাকারাইড-প্ররোচিত প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া হ্রাস করে। জার্নাল অফ এথনোফার্মাকোলজি, 2024,321:117501।

He X, Li Y, Deng B. আঘাতজনিত মেরুদণ্ডের আঘাতের পরে প্রদাহ, কোষের মৃত্যু এবং গ্লিয়াল দাগ গঠনে PI3K/AKT সংকেত পথ। কোষ বিস্তার, 2022,55(9):e13275।