বন্য মাছ ধরার বিড়ালদের মধ্যে পারভোভাইরাসের প্রাকৃতিক সংক্রমণ (প্রিওনাইলুরাস ভিভেরিনাস) কিডনিতে বিদ্যমান ভাইরাল স্থানীয়করণ প্রকাশ করে
Feb 25, 2022
বিমূর্ত
মাংসাশী প্রোটোপারভোভাইরাস-1 (CPPV-1), একটি ভাইরাল প্রজাতি যার মধ্যে ফেলাইন প্যানলিউকোপেনিয়া ভাইরাস (FPV) এবং ক্যানাইন পারভোভাইরাস (CPV) ভেরিয়েন্ট রয়েছে, যা গৃহপালিত এবং বন্য মাংসাশীদের মধ্যে ব্যাপকভাবে ছড়িয়ে পড়ে যা পদ্ধতিগত মারাত্মক রোগ সৃষ্টি করে। বন্য মাছ ধরার বিড়াল (Prionailurus viverrinus), একটি বিশ্বব্যাপী ঝুঁকিপূর্ণ প্রজাতি, মৃত পাওয়া গেছে। মৃতদেহের পোস্টমর্টেম পরীক্ষায় অন্ত্র, প্লীহা এবং ক্ষত প্রকাশ পেয়েছেরেনাল. এই টিস্যুতে CPPV-1 অ্যান্টিজেন সনাক্তকরণ, পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন (PCR) এবং ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি (IHC) ব্যবহার করে, ভাইরাস দ্বারা সংক্রমণকে সমর্থন করে। PCR- এবং IHC- পজিটিভিটি ইন কিডনি টিস্যুসিটু হাইব্রিডাইজেশন (আইএসএইচ) এবং পপ-অফ কৌশল সহ ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি (টিইএম) থাকাকালীন ভাইরাসের অ্যাটিপিকাল স্থানীয়করণ প্রকাশ করেছে ভাইরাস স্থানীয়করণের প্রথম বিবরণকিডনি. মাছ ধরার বিড়ালদের কাছ থেকে প্রাপ্ত CPPV-1-এর সম্পূর্ণ জিনোম বৈশিষ্ট্য এবং অনুমানকৃত অ্যামিনো অ্যাসিড বিশ্লেষণ FPV কে কার্যকারক এজেন্ট হিসাবে প্রকাশ করেছে। সনাক্ত করা FPV ক্রমগুলি ক্যাপসিড প্রোটিনে I566M এবং M569R এ অ্যামিনো অ্যাসিড মিউটেশন দেখায়। সম্পূর্ণ কোডিং জিনোম সিকোয়েন্সের ফাইলোজেনেটিক এবং বিবর্তনীয় বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে মাছ ধরার বিড়াল CPPV-1 জিনোমগুলি জেনেটিকভাবে থাইল্যান্ডের গৃহপালিত বিড়াল থেকে বিচ্ছিন্ন FPV জিনোমের সাথে ক্লাস্টার করা হয়েছে। 1970 এর দশক থেকে, এই জিনোমগুলিকে চীনা FPV স্ট্রেনের সাথে একটি জেনেটিক বিবর্তন ভাগ করে নেওয়ার জন্যও দেখানো হয়েছে। এই অধ্যয়নটি মাছ ধরার বিড়ালদের মধ্যে CPPV-1 সংক্রমণের প্রথম প্রমাণ এবং এটিই প্রথমকিডনি. এই ফলাফলগুলি এই পারভোভাইরাসের মাল্টি-হোস্ট রেঞ্জকে সমর্থন করে এবং মারাত্মক CPPV-1 সংক্রমণের ফলে অন্যান্য ঝুঁকিপূর্ণ বন্য মাংসাশী হতে পারে।
কীওয়ার্ড: কিডনি টিস্যু; কিডনি রোগ, কিডনি, রেনাল, রেনাল টিউবুলার
ভূমিকা
প্রিওনাইলুরাস, ফ্যালিডে পরিবার, দাগযুক্ত, ছোট আকারের, বন্য বিড়ালদের একটি গ্রুপ হিসাবে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছে যেগুলি এশিয়ার স্থানীয় [1]। Prionailurus গণে চিতাবাঘ বিড়াল (P. bengalensis), ফ্ল্যাট-হেড বিড়াল (P. planiceps), মরিচা-দাগযুক্ত বিড়াল (P. rubiginosus) এবং মাছ ধরার বিড়াল (P. viverrinus) সহ চারটি আনুষ্ঠানিকভাবে স্বীকৃত বন্য বিড়াল প্রজাতি রয়েছে। [২]। মাছ ধরার বিড়াল প্রধানত জলাভূমি এবং ম্যানগ্রোভের আশেপাশে বাস করে। এটি একচেটিয়াভাবে দক্ষিণ এবং দক্ষিণ-পূর্ব এশিয়ায় বাস করে এবং থাইল্যান্ডে বেশি প্রচলিত [3, 4]। বর্তমানে, মাছ ধরার বিড়ালের জনসংখ্যা হুমকির সম্মুখীন কারণ তারা যেখানে বাস করে সেই জলাভূমি গত দশকে ধ্বংস হয়ে গেছে। ফলস্বরূপ, এই প্রজাতিটি বর্তমানে অরক্ষিত বলে বিবেচিত এবং আন্তর্জাতিক প্রকৃতি সংরক্ষণের ইউনিয়ন (IUNC) এর লাল তালিকায় রয়েছে [৩]। তাদের আবাসস্থল হারানোর কারণে, মাছ ধরার বিড়াল উপনিবেশগুলি স্থানান্তরিত হচ্ছে এবং মাঝে মাঝে এমন এলাকায় বসবাস করছে যেখানে গৃহপালিত প্রাণী এবং মানুষ বাস করে [5]। ভাগ করা পরিবেশের এই ঘটনাটি সংবেদনশীল বন্য এবং গৃহপালিত প্রাণীদের মধ্যে প্যাথোজেন স্পিলওভার বাড়াতে পারে এবং এর বিপরীতে। বন্য বা গৃহপালিত প্রাণীদের মধ্যে মারাত্মক প্রাদুর্ভাবের রিপোর্ট যা প্যাথোজেন স্পিলওভারের ফলে হতে পারে গত কয়েক দশক ধরে নথিভুক্ত করা হয়েছে [6-9]। এইভাবে, সেই প্রাণীগুলি থেকে প্যাথোজেনগুলির সংক্রমণ গতিশীলতা পরীক্ষা করা উচিত এবং আরও তদন্তের প্রয়োজন।
CISTANCHE কিডনি/রেনাল ফাংশন উন্নত করবে
মাংসাশী প্রোটোপারভোভাইরাস-1 (CPPV-1), একটি ভাইরাল প্রজাতি যার মধ্যে রয়েছে মিঙ্ক এন্টারাইটিস ভাইরাস (MEV), র্যাকুন পারভোভাইরাস (RPV), ফেলাইন প্যানলিউকোপেনিয়া ভাইরাস (FPV) এবং ক্যানাইন পারভোভাইরাস (CPV) এর রূপগুলি বন্য এবং গার্হস্থ্য উভয় Canidae এবং Felidae পরিবারে মারাত্মক রোগের সাথে যুক্ত একটি গুরুত্বপূর্ণ প্যাথোজেন হিসাবে স্বীকৃত [10, 11]। FPV, Felidae প্রজাতির একটি সাধারণ প্যাথোজেন, CPV [12-14] এর একটি সাধারণ পূর্বপুরুষ বলে অনুমান করা হয়েছে। সিপিভি ঘন ঘন ক্যানিডে পরিবারে প্রাণীদের সংক্রামিত করে এবং ফেলিডি পরিবারের প্রতিরূপ [9, 15, 16]-এ সংক্রমণের ক্রমবর্ধমান প্রমাণ রয়েছে। পূর্বে, FPV এবং CPV একটি হোস্ট-সীমাবদ্ধ ভাইরাস হিসাবে অনুমান করা হয়েছে। যাইহোক, পরবর্তীকালে বেশ কয়েকটি অনুসন্ধানে ইঙ্গিত দেওয়া হয়েছে যে ক্যানিডে পরিবারের কিছু প্রাণী FPV এর জন্য একটি জলাধার হিসাবে ভূমিকা পালন করতে পারে বা এর বিপরীতে [11, 17, 18]। অধিকন্তু, বেশ কয়েকটি প্রতিবেদনে ইঙ্গিত করা হয়েছে যে FPV এবং CPV ভেরিয়েন্টগুলি (CPV-2a, -2b, এবং -2c) সংবেদনশীল হোস্টগুলি ভাগ করে৷ এই হোস্টগুলি শুধুমাত্র গৃহপালিত প্রাণীই নয় বরং বিভিন্ন ধরনের মাংসাশী প্রজাতি [15, 19, 20], যা সিপিপিভি-1 [১১] এর বহু-হোস্ট পরিসরের পরামর্শ দেয়।
1996 থেকে 1997 সাল পর্যন্ত, চিতা বিড়ালের মধ্যে CPV রূপগুলি প্রথম সনাক্ত করা হয়েছিল এবং প্রাথমিকভাবে চিতাবাঘ বিড়াল পারভোভাইরাস (LCPV) হিসাবে মনোনীত হয়েছিল, যা Prionailurus [21, 22] গণে CPPV-1 এর প্রথম বর্ণনার পরামর্শ দেয়। ক্যাপসিড (VP) প্রোটিনে G300A অ্যামিনো অ্যাসিডের একটি মিউটেশনের কারণে এই LCPV স্ট্রেনগুলির মধ্যে কিছু পূর্বে বর্ণিত CPV-2a এবং -2b থেকে জেনেটিক্যালি বিচ্ছিন্ন বলে প্রকাশ করা হয়েছিল। এর ফলে এর অ্যান্টিজেনিক বৈশিষ্ট্যের পরিবর্তন হয়েছে যা এখন CPV-2c কে অন্যান্য CPV রূপগুলি থেকে আলাদা করার জন্য একটি অনন্য মিউটেশন পয়েন্ট হিসাবে ব্যবহৃত হয় [22]। চিতা বিড়ালের মধ্যে নতুন CPV বৈকল্পিক (বর্তমানে CPV-2c নামে পরিচিত) আবিষ্কার প্রাণী প্রজাতির মধ্যে CPPV-1 এর সহ-বিবর্তনের ধারণাকে সমর্থন করে৷ পরে, চিতাবাঘের বিড়ালগুলিতে এফপিভি এবং সিপিভি রূপের সংক্রমণের খবর পাওয়া গেছে [৯]। এটি পরামর্শ দিয়েছে যে চিতা বিড়ালের মতো একই বংশের অন্যান্য প্রজাতি (প্রিয়নাইলুরাস) CPPV-1 সংক্রমণের জন্য সংবেদনশীল হতে পারে। এখন পর্যন্ত, Prionailurus গণের অন্যান্য প্রজাতিতে CPPV-1 সংক্রমণের সংবেদনশীলতা এখনও অনেকাংশে অজানা। CPPV-1 ভেরিয়েন্টগুলি কীভাবে বিকশিত হচ্ছে এবং নতুন উদীয়মান ভেরিয়েন্টগুলি কীভাবে আচরণ করে তা বোঝার মাধ্যমে কীভাবে নতুন বৈকল্পিকের সম্ভাব্য প্রাদুর্ভাব রোধ করা যায় তা ব্যাখ্যা করতে সাহায্য করতে পারে। এমনকি নতুন ভাইরাসটি হোস্টের বিস্তৃত পরিসর অর্জন করলেও, মারাত্মক প্রাদুর্ভাব বা সংক্রমণের সাথে সম্পর্কিত অ্যাটিপিকাল ক্ষতগুলি একটি নতুন, সংবেদনশীল হোস্টে পরিলক্ষিত হতে পারে। এই সমীক্ষাটি বন্য মাছ ধরার বিড়াল (প্রিওনাইলুরাস ভাইভেরিনাস) এর একটি মারাত্মক CPPV-1 সংক্রমণ বর্ণনা করে। প্রাপ্ত CPPV-1 এর জেনেটিক বৈশিষ্ট্য FPV কে একটি কার্যকারক এজেন্ট হিসাবে প্রকাশ করে। এই আবিষ্কারটি এই প্রজাতিতে FPV সংক্রমণের প্রথম প্রমাণ প্রদান করে এবং এটি এই ভাইরাসের অনন্য সেলুলার ট্রপিজম উন্মোচন করে। এই প্রজাতিতে FPV সংক্রমণ এবং এর রূপগুলির আরও ব্যাখ্যা করা অনেক দুর্বল প্রজাতির বিশ্বব্যাপী সংক্রমণের জন্য এর অ্যাকাউন্টের জন্য প্রয়োজনীয়।
উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ
প্রাণী এবং রুটিন পোস্টমর্টেম পরীক্ষাজুন 2019-এ, দুটি বন্য মাছ ধরার বিড়াল (P. viverrinus), মনোনীত কেস নং। থাইল্যান্ডের নাখোন রাতচাসিমা প্রদেশের শহরতলী এলাকায় ১ ও ২ জনকে মৃত অবস্থায় পাওয়া গেছে। পরবর্তীতে আগস্ট 2019 এ, আরেকটি মাছ ধরার বিড়াল, মনোনীত মামলা নং। 3, যে এলাকায় প্রথম দুটি মাছ ধরার বিড়াল পাওয়া গেছে সেখান থেকে উদ্ধার করা হচ্ছে। ডিহাইড্রেশনের তীব্রতার কারণে, মামলা নং। পশু হাসপাতালে রেফার করার সময় ৩ জনের মৃত্যু হয়। এই তিনটি মাছ ধরার বিড়াল একটি রুটিন প্রক্রিয়া হিসাবে পোস্টমর্টেম তদন্তের জন্য জমা দেওয়া হয়েছিল। দুর্ভাগ্যবশত, একই এলাকায় মুক্ত-বিচরণকারী গৃহপালিত প্রাণী বা বন্য প্রজাতির নমুনা পাওয়া যায় নি; এইভাবে, তারা এই গবেষণায় অন্তর্ভুক্ত করা হয়নি। সমস্ত মাছ ধরার বিড়ালের রুটিন পোস্টমর্টেম পরীক্ষা করা হয়েছিল। ফুসফুস, লিভার, হার্ট, প্লীহা এবং সহ নির্বাচনী গুরুত্বপূর্ণ অঙ্গকিডনিসমস্ত মাছ ধরার বিড়াল থেকে নমুনা নেওয়া হয়েছিল, যখন অন্ত্র এবং মেসেন্টেরিক লিম্ফ নোড অতিরিক্ত মাছ ধরার বিড়াল নং 3 থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল। সমস্ত নির্বাচিত টিস্যু হিস্টোলজিকাল পরীক্ষার জন্য জমা দেওয়া হয়েছিল এবং আরও আণবিক পরীক্ষার জন্য পৃথকভাবে নমুনা নেওয়া হয়েছিল। হিস্টোলজির জন্য, টিস্যুগুলিকে কমপক্ষে 24 ঘন্টা 10 শতাংশ (v/v) নিরপেক্ষ বাফারযুক্ত ফরমালিনের মধ্যে ডুবিয়ে রাখা হয়েছিল এবং নিয়মিত প্রক্রিয়া করা হয়েছিল। তারপরে তারা হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল
(H&E) একটি ACVP বোর্ড-প্রত্যয়িত ভেটেরিনারি প্যাথলজিস্ট (TK) দ্বারা তদন্তের আগে আদর্শ পদ্ধতি ব্যবহার করে। তিনটি মাছ ধরার বিড়াল থেকে প্রাপ্ত তাজা টিস্যু নমুনাগুলি আণবিক অধ্যয়নের জন্য -80˚C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়েছিল। চুলালংকর্ন ইউনিভার্সিটি অ্যানিমেল কেয়ার অ্যান্ড ইউজ কমিটির (নং 1931036) অনুমোদনের পরে সমস্ত পদ্ধতি নির্দেশিকা এবং প্রবিধান অনুসারে সঞ্চালিত হয়েছিল।
সাধারণ ভাইরোলজিক্যাল আণবিক পরীক্ষাহার্ট, ফুসফুস, লিভার, প্লীহা এবং সহ তাজা টিস্যুর নমুনাকিডনিসমস্ত মাছ ধরার বিড়াল প্লাস মাছ ধরার বিড়ালের অতিরিক্ত অন্ত্র এবং মেসেন্টেরিক লিম্ফ নোড টিস্যু। 3, 1 শতাংশ (v/v) ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইন (PBS) দিয়ে পৃথকভাবে একত্রিত করে ভাইরাল নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশনের শিকার হয়েছিল। পরবর্তীকালে, প্রস্তুতকারকের পরামর্শ অনুসারে একটি বাণিজ্যিক ভাইরাল নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন II কিট (জেনেইড, তাইপেই, তাইওয়ান) ব্যবহার করে মোট ভাইরাল নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন করা হয়েছিল। নিষ্কাশিত নিউক্লিক অ্যাসিডগুলি তখন স্পেকট্রোফটোমেট্রি পদ্ধতি ব্যবহার করে তাদের A260/A280 শোষণ অনুপাত দ্বারা যোগ্য এবং পরিমাপ করা হয়েছিল (NanoDrop, Thermo Scientific™, Waltham, MA, USA)। সমস্ত নিষ্কাশিত নিউক্লিক অ্যাসিডগুলি আরও কিছু প্যান-ভাইরোলজিক-ফ্যামিলি পিসিআর টেস্টিং প্যানেল সহ পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন (পিসিআর) বিশ্লেষণ ব্যবহার করে ভাইরাল আণবিক তদন্তের শিকার হয়েছিল যার মধ্যে হারপিসভাইরাস [২৩], প্যারামাইক্সোভাইরাস [২৪], নিউমোভাইরাস [২৫], ক্যালিসিভাইরাস সনাক্ত করা হয়েছে। [২৬], ইনফ্লুয়েঞ্জা ভাইরাস [২৭], বোকাভাইরাস [২৬, ২৮], পারভোভাইরাস [২৯] এবং করোনা ভাইরাস [৩০, ৩১]। PCR প্রোটোকল, রিএজেন্ট, সাইক্লিং অবস্থা এবং প্রতিক্রিয়াগুলিতে ব্যবহৃত ইতিবাচক/নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণগুলি S1 ফাইলে বর্ণিত হয়েছে। পিসিআর সনাক্তকরণ নির্দিষ্ট গ্লিসারালডিহাইড- 3-ফসফেট ডিহাইড্রোজেনেস (জিএপিডিএইচ) ফিলাইনের জিনের অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল যেমন পূর্বে বর্ণিত হয়েছে [৩২]। পরবর্তীকালে, পূর্বে বর্ণিত হিসাবে একটি QIAxcel কৈশিক ইলেক্ট্রোফোরসিস প্ল্যাটফর্ম (কিয়াজেন, হিলডেন, জার্মানি) ব্যবহার করে ইতিবাচক পিসিআর অ্যামপ্লিকনগুলি কল্পনা করা হয়েছিল [33]। প্রতিটি পিসিআর অ্যাসের ইতিবাচক অ্যামপ্লিকনগুলি শুদ্ধ করা হয়েছিল এবং দ্বিমুখী স্যাঞ্জার সিকোয়েন্সিং (ম্যাক্রোজেন ইনক, সিউল, দক্ষিণ কোরিয়া) এর শিকার হয়েছিল। টিস্যুগুলির মাঝারি অটোলাইসিসের কারণে, এই মাছ ধরার বিড়ালের ব্যাকটিরিওলজিকাল তদন্ত করা সম্ভব হয়নি।
ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি (IHC) ব্যবহার করে সিটু সিপিপিভি-1 সনাক্তকরণ, ইন সিটু হাইব্রিডাইজেশন (আইএসএইচ) এবং ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি (টিইএম)
প্রাথমিক ভাইরোলজিক আণবিক স্ক্রীনিং প্যান-পারভোভাইরাস পিসিআর-এর ইতিবাচক অ্যামপ্লিকন প্রকাশ করেছে এবং সিকোয়েন্সিং ফলাফলগুলি সিপিপিভি-1-এর সম্ভাব্য ডিএনএ সিকোয়েন্সগুলিও দেখিয়েছে। এই ফলাফলগুলি আমাদেরকে CPPV-1-এর উপস্থিতি আরও নিশ্চিত করতে এবং মাছ ধরার বিড়ালের টিস্যুতে CPPV-1-এর বিতরণকে স্থানীয়করণ করতে প্ররোচিত করেছিল। ফুসফুস, লিভার, হার্ট, প্লীহা সহ ফরমালিন-ফিক্সড প্যারাফিন-এমবেডেড (FFPE) টিস্যু,কিডনিএবং অন্ত্র একটি মাউস মনোক্লোনাল অ্যান্টি-ক্যানাইন পারভোভাইরাস অ্যান্টিবডি (ab59832, Abcam, Cambridge, UK) ব্যবহার করে হর্সরাডিশ পারক্সিডেস (HRP) সনাক্তকরণ সিস্টেম (এনভিশন পলিমার, ডাকো, গ্লোস্ট্রুপ, ডেনমার্ক) ব্যবহার করে CPPV-1 IHC সনাক্তকরণের শিকার হয়েছিল . সংক্ষেপে, FFPE বিভাগগুলি 4-μm পুরুত্বে কাটা হয়েছিল এবং আরও ডিপ্যারাফিনাইজড এবং রিহাইড্রেটেড হয়েছিল। স্লাইডগুলি তারপরে প্রিট্রিটেড করা হয়েছিল, অন্তঃসত্ত্বা পারক্সিডেস অবরুদ্ধ করা হয়েছিল এবং পূর্বে বর্ণিত হিসাবে প্রক্রিয়া করা হয়েছিল [11]। একটি FPVinfected বিড়াল এবং একটি CPV-সংক্রমিত কুকুরের অন্ত্রের টিস্যুর অংশগুলিকে ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল, যখন অভিন্ন অংশগুলি বিশুদ্ধ ছাগল-মাউস এবং খরগোশ IgGs (IHC সর্বজনীন নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ বিকারক, কোড ADI-950-231-0025, Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY, USA), নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। সংক্রান্তরেনালযেখানে সিপিপিভি-1 আইএইচসি ইতিবাচক সংকেত পরিলক্ষিত হয়েছে সেখানে টিউবুলার নেক্রোসিস উপস্থিত রয়েছে,কিডনিসেলুলার আর্কিটেকচার প্রদর্শনের জন্য সমস্ত মাছ ধরার বিড়ালের অংশগুলিকে পর্যায়ক্রমিক অ্যাসিডশিফ (PAS) বিশেষ দাগের শিকার করা হয়েছিলকিডনিটিস্যু
CISTANCHE কিডনি/রেনাল রোগের উন্নতি ঘটাবে
উপরন্তু, FFPEকিডনিমাছ ধরার বিড়াল সংখ্যা বিভাগ. ইতিবাচক CPPV-1 IHC দাগের ফলাফলকে সমর্থন করার জন্য এবং ভাইরাল কণাগুলিকে অতি কাঠামোগতভাবে প্রদর্শন করার জন্য 1 এবং 3 ISH এবং TEM বিশ্লেষণের শিকার হয়েছিলরেনাল টিস্যু, যথাক্রমে। ISH-এর জন্য, CPPV-1 DNA প্রোবটি CPPV-1-এর ক্যাপসিড জিনের 393 bp [34] কভার করে একটি PCR DIG প্রোব সিন্থেসিস কিট (Roche ডায়াগনস্টিকস, বাসেল, সুইজারল্যান্ড) ব্যবহার করে তৈরি করা হয়েছিল। প্রস্তুতকারকের পরামর্শ। ডিগক্সিজেনিন (ডিআইজি)- লেবেলযুক্ত অলিগোনিউক্লিওটাইড ব্যবহার করে ব্যতিক্রম সহ তাপ সাইক্লিং প্রতিক্রিয়া এবং অবস্থা পূর্বে বর্ণিত [৩৪] হিসাবে সঞ্চালিত হয়েছিল। নির্মিত হাইব্রিডাইজেশন প্রোবটি 1.5 শতাংশ (w/v) অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরসিসের আকারের রেজোলিউশন দ্বারা কল্পনা করা হয়েছিল এবং নিশ্চিত করা হয়েছিল। ক্রোমোজেনিক ডিএনএ সহ আইএসএইচ পূর্বে বর্ণিত [২৬] ছোটখাট পরিবর্তনের সাথে করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, পিবিএস-এ ডিপ্যারাফিনাইজেশন, রিহাইড্রেশন এবং পরবর্তীতে ধুয়ে ফেলার পরে, 4-μm-পুরু FFPE স্লাইডগুলি প্রোটিওলাইটিক হজম, পোস্ট-ফিক্সেশন এবং প্রাক-সংকরকরণের শিকার হয়েছিল। তারপরে স্লাইডগুলিকে রাতারাতি 42˚C তাপমাত্রায় 25 ng/μL ISH প্রোবের সাথে হাইব্রিডাইজ করা হয়েছিল। লিকুইড পারমানেন্ট রেড (এলপিআর) (ডাকো, গ্লোস্ট্রুপ, ডেনমার্ক) এর সংমিশ্রণে 100 μL অ্যান্টি-ডিআইজি-এপি ফ্যাব ফ্র্যাগমেন্ট (রোচে, বাসেল, সুইজারল্যান্ড) (1এক্স ব্লকিং সলিউশনে 1:200) দিয়ে হাইব্রিডাইজেশন সিগন্যালগুলিকে কল্পনা করা হয়েছিল। . তারপরে স্লাইডগুলিকে হেমাটোক্সিলিন দিয়ে পাল্টা করা হয়েছিল। সেলুলার মরফোলজির পারস্পরিক সম্পর্কের ক্ষেত্রে লাল অবক্ষেপগুলি আইএসএইচ-এর জন্য ইতিবাচক বলে মনে করা হয়েছিল। নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণের জন্য, CPPV-1 প্রোবের পরিবর্তে তেলাপিয়া লেক ভাইরাস (TiLV) প্রোব [35] নিযুক্ত করা হয়েছিল। TEM নমুনাগুলি পরিবর্তনের সাথে পপ-অফ কৌশল অনুসারে প্রস্তুত করা হয়েছিল [36-38] এবং পূর্বে বর্ণিত [39, 40] হিসাবে ভারী ধাতু দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল। 80 কেভিতে পরিচালিত TEM (HT7800; হিটাচি, টোকিও, জাপান) ব্যবহার করে আল্ট্রাস্ট্রাকচারটি তদন্ত করা হয়েছিল
মাছ ধরার বিড়াল সিপিপিভির সম্পূর্ণ দৈর্ঘ্যের জেনেটিক বৈশিষ্ট্য-1যেহেতু ভাইরোলজিক পিসিআর এবং আইএইচসি স্ক্রীনিংয়ের ফলাফলগুলি একমত ছিল এবং প্যান-পারভোভাইরাল পিসিআর থেকে প্রাপ্ত আংশিক ভিপি-2 জিনোম সিকোয়েন্সের ফলাফলগুলি কেস নম্বরগুলির মধ্যে জেনেটিক মিলের পরামর্শ দিয়েছে৷ 1 এবং 2, কিন্তু কেস নং 3 এর জন্য নয়, আমরা এই মাছ ধরার বিড়ালগুলি থেকে পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের CPPV-1 ক্রমকে আরও চিহ্নিত করেছি (কেস নং 1 এবং 3) এবং একটি ব্যবহার করে CPPV-1 উত্সকে শ্রেণীবদ্ধ করেছি FPV এবং CPV-এর জন্য নির্দিষ্ট degenerated প্রাইমার জোড়ার সেট পূর্ববর্তী প্রকাশনা থেকে পুনরুদ্ধার করা হয়েছে [26]। সংক্ষেপে, প্লীহা থেকে প্রাপ্ত নিউক্লিক অ্যাসিড এবংকিডনিদুটি মাছ ধরার বিড়ালের সাথে মাছ ধরার বিড়ালের অতিরিক্ত অন্ত্রের টিস্যু 3, একটি GoTaq1 হট স্টার্ট গ্রিন মাস্টার মিক্স (প্রোমেগা, ম্যাডিসন, WI, USA) এবং নির্দিষ্ট প্রাইমার (S1 ফাইল) ব্যবহার করে পৃথকভাবে প্রশস্ত করা হয়েছিল। পিসিআর শর্তগুলি পূর্বে বর্ণনা করা হয়েছে [26]। টার্গেট অ্যামপ্লিকনগুলিকে 2 শতাংশ (w/v) অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যবহার করে কল্পনা করা হয়েছিল এবং বাণিজ্যিক সেঙ্গার সিকোয়েন্সিংয়ের আগে একটি মোনার্ক ডিএনএ জেল নিষ্কাশন কিট (নিউ ইংল্যান্ড বায়োল্যাব, ফ্রাঙ্কফুর্ট, জার্মানি) ব্যবহার করে আরও বিশুদ্ধ করা হয়েছিল। দুটি মাছ ধরার বিড়াল থেকে প্রাপ্ত CPPV-1 বিচ্ছিন্নতার সম্পূর্ণ জিনোম ক্রমগুলি GenBank-এ জমা করা হয়েছিল (অ্যাক্সেশন নম্বর MW145540-MW145541)।
ফিশিং বিড়াল CPPV এর ফাইলোজেনেটিক, পুনঃসংযোগ এবং বিবর্তনীয় বিশ্লেষণ-1 মাছ ধরার বিড়াল CPPV-1 স্ট্রেনের পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের জিনোম ক্রমগুলি বিভিন্ন হোস্ট প্রজাতি থেকে প্রাপ্ত প্রকাশিত সম্পূর্ণ CPPV-1 ক্রমগুলির সাথে সারিবদ্ধ ছিল , MAFFT V. 7 (http://mafft.cbrc.jp/alignment/server/) এবং MEGA7 সফ্টওয়্যার (http://www.megasoftware.net) ব্যবহার করে GenBank-এ উপলব্ধ। ক্রম প্রান্তিককরণ তখন ফাইলোজেনেটিক ট্রি নির্মাণের অধীন ছিল। ফাইলোজেনেটিক ট্রি সর্বোচ্চ সম্ভাবনা (ML) পদ্ধতি ব্যবহার করে তৈরি করা হয়েছিল হাসগাওয়া-কিশিনো-ইয়ানো উইথ গামা ডিস্ট্রিবিউশন (HKY প্লাস জি) মডেল, যা বায়েসিয়ান তথ্যের মাপকাঠি অনুসারে MEGA7-এ ফাইন্ড-বেস্ট-ফিট মডেল অ্যালগরিদম ব্যবহার করে নির্বাচন করা হয়েছিল। . গাছটিকে 1টি দিয়ে বুটস্ট্র্যাপ করা হয়েছে,{10}} প্রতিলিপি করা হয়েছে৷ সর্বাধিক যৌগিক সম্ভাবনা মডেল ব্যবহার করে সিপিপিভি-1 জিনোমের মধ্যে ক্রম জোড়া সাদৃশ্য গণনা করা হয়েছিল এবং তাদের বিবর্তনীয় দূরত্ব MEGA7 এ বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। আউটপুট পেয়ারওয়াইজ নিউক্লিওটাইড আইডেন্টিটি মাইক্রোসফ্ট এক্সেল ফরম্যাটে (S2 ফাইল) তৈরি এবং ভিজ্যুয়ালাইজ করা হয়েছিল। CPPV-1-এর আউটপুট অ্যালাইনমেন্ট সিকোয়েন্স তারপরে দুটি পরিসংখ্যানগতভাবে স্বাধীন সফ্টওয়্যার প্যাকেজ ব্যবহার করে জেনেটিক পুনঃসংযোগ বিশ্লেষণের জন্য একটি টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, প্রান্তিককরণটি সমন্বিত পুনর্মিলন সনাক্তকরণ প্রোগ্রাম 4 (RDP4) প্যাকেজ V. বিটা 4.94 সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে সম্ভাব্য পুনঃসংযোজন স্ট্রেন চিহ্নিত করেছে এবং এটি সিমপ্লট সফ্টওয়্যার প্যাক বয়স V. 3.5.1-এ একটি মিল প্লট এবং বুটস্ক্যানিং বিশ্লেষণের সাথে ক্রসচেক করা হয়েছে। প্রোগ্রামগুলির সেটিংস এবং ফলাফলগুলির ব্যাখ্যা পূর্বে বর্ণিত হিসাবে পরিচালিত হয়েছিল [26, 41]।
মাছ ধরার বিড়াল CPPV{{0}}-এর বিবর্তনীয় বিশ্লেষণের জন্য, 26 FPV-, 6 MEV- এবং 192 CPV ক্রম সমন্বিত 224টি সম্পূর্ণ জিনোম সিকোয়েন্সের একটি ডেটাসেট, যা 1979 থেকে 2019 সালের মধ্যে 18টি দেশ থেকে উদ্ভূত হয়েছিল GenBank ডাটাবেস থেকে। BEAST V. 2.4.8 [42] এ বাস্তবায়িত বেয়েসিয়ান মার্কভ চেইন মন্টে কার্লো (BMCMC) মডেল ব্যবহার করে মাছ ধরার বিড়াল থেকে প্রাপ্ত 2টি সম্ভাব্য CPPV-1 অনুক্রমের সাথে বিবর্তনীয় বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। jModelTest [43] একাধিক অ্যালাইনমেন্ট সিকোয়েন্সের জন্য সেরা ফিটিং নিউক্লিওটাইড প্রতিস্থাপন মডেল সনাক্ত করতে সঞ্চালিত হয়েছিল। স্থির জনসংখ্যার আকারে সাধারণ শিথিল এবং কঠোর ঘড়ির মডেলের অধীনে সেরা-ফিট প্রতিস্থাপন মডেলগুলি পূর্বের হিসাবে প্রয়োগ করা হয়েছিল বংশের মধ্যে বিভিন্ন বিবর্তনীয় হারের জন্য। সমন্বিত বেয়েসিয়ান স্কাইলাইন ট্রি পূর্বের এবং অভিজ্ঞতামূলক বেস ফ্রিকোয়েন্সিগুলি সেরা-ফিট ক্লক মডেলের অধীনে প্রাপ্ত হয়েছিল এবং 100 মিলিয়ন চেইনের জন্য চালিত হয়েছিল, প্রতি 10,{21}}ম প্রজন্মের নমুনা, প্রথম 10 শতাংশ বার্ন-ইন হিসাবে বাতিল করা হয়েছিল৷ TRACER প্রোগ্রাম V. 1.7.0 [44] ব্যবহার করে কার্যকরী নমুনা আকার গণনা করে পরামিতিগুলির একত্রীকরণ নিশ্চিত করা হয়েছিল। TreeAnnotator V. 1.8.3 [42] ব্যবহার করে সর্বাধিক ক্লেড বিশ্বাসযোগ্যতা ট্রিগুলি টীকা করা হয়েছে। আনুমানিক বিচ্যুতি, পরিবর্তনশীল টাইমলাইন, পোস্টেরিয়র সম্ভাব্যতা এবং 95 শতাংশ সর্বোচ্চ পোস্টেরিয়র ডেনসিটি (HPD) সহ ফাইলোজেনেটিক ট্রি ফিগট্রি V. 1.4.3 [45] ব্যবহার করে তৈরি এবং প্রদর্শিত হয়েছিল।
বন্যপ্রাণী মাংসাশীতে CPPV-1 অ্যান্টিজেনের পূর্ববর্তী অধ্যয়নদূরবর্তী এবং সাম্প্রতিক অতীতে বন্য মাংসাশী প্রাণীদের অজানা কারণ সহ অসুস্থতা এবং মৃত্যুর সাথে সম্পর্কিত CPPV-1 এর ভূমিকা অন্বেষণ করার জন্য, সিপিপিভির জিনোমিক নিষ্কাশন এবং সনাক্তকরণ লক্ষ্যমাত্রার জন্য 305টি নির্বাচিত তাজা নমুনা অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল{{2} উপরে বর্ণিত ক্যাপসিড জিন। এই নমুনাগুলি 2013 সাল থেকে মল সোয়াব বা অন্ত্রের বিষয়বস্তু হিসাবে প্রাপ্ত হয়েছে। তারা 27টি বিভিন্ন মাংসাশী প্রজাতির (S1 টেবিল) থেকে 136টি চিড়িয়াখানার প্রাণী থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। ফলাফল পোস্টমর্টেম ফলাফল এবং মাছ ধরার বিড়ালের টিস্যু স্থানীয়করণ CPPV-1 সমস্ত নেক্রোপসিড মাছ ধরার বিড়াল বিভিন্ন ডিহাইড্রেশনের সাথে মাঝারিভাবে দুর্বল ছিল যখন 3টি মাছ ধরার বিড়ালের মধ্যে 2টি (কেস নং 1 এবং 2) মাঝারি অটোলাইসিস দেখিয়েছিল। উল্লেখযোগ্যভাবে, প্লীহা এবংকিডনিসব মাছ ধরার বিড়াল ভিড় ছিল. মাছ ধরার বিড়ালের নং 3 ক্যাটারহ্যাল এন্টারাইটিসের ম্যাক্রোস্কোপিক ক্ষত ছিল যা তাদের লুমেন এবং মেসেন্টেরিক লিম্ফ নোডের ভিড়ের মধ্যে একটি জলযুক্ত বাদামী-হলুদ উপাদান রয়েছে। হিস্টোলজিক্যালি, মাছ ধরার বিড়ালের ফুসফুস নং। 3 অ্যালভিওলিতে মনোনিউক্লিয়ার কোষের অনুপ্রবেশের সাথে গুরুতর ভিড় প্রকাশ করেছে। লিভারে হালকা পেরিপোর্টাল হেপাটাইটিস দেখা গেছে, যা লিভার পোর্টাল ট্রায়াডে মনোনিউক্লিয়ার কোষের অনুপ্রবেশ দ্বারা চিহ্নিত। সমস্ত মাছ ধরার বিড়ালের মধ্যে কয়েক সংখ্যক স্প্লেনিক লিম্ফয়েড ফলিকলের সাথে অনুরূপ ডিগ্রী স্প্লেনিক কনজেশন লক্ষ্য করা গেছে। লিম্ফয়েড ফলিকলগুলি ক্ষয়প্রাপ্ত হয়েছিল এবং অবশিষ্ট লিম্ফয়েড ফলিকলগুলি বিশিষ্ট স্প্লেনিক ট্র্যাবেকুলে (চিত্র 1A) এর সংখ্যা বৃদ্ধি সহ ধসে পড়া স্প্লেনিক আর্কিটেকচারের মধ্যে। সঙ্গে লিম্ফোসাইট বিক্ষিপ্ত karyorrhectic ধ্বংসাবশেষ ছিল
চিত্র 1. মাছ ধরার বিড়ালের মধ্যে CPPV-1 সংক্রমণ। মাছ ধরার বিড়াল থেকে প্রদর্শনমূলক H&E (A, C) এবং CPPV-1 IHC (B, D) ছবি। (ক) মাছ ধরার বিড়াল নং. 1. লিম্ফয়েড follicles এর বিরল সংখ্যা সহ প্রসারিত ঘনীভূত প্লীহা। অবশিষ্ট লিম্ফয়েড ফলিকলগুলির একটির কেন্দ্রে ইওসিনোফিলিক ফাইব্রিলার উপাদান (ফাইব্রিন) লিম্ফোসাইটের বিক্ষিপ্ত ক্যারিওরহেকটিক ধ্বংসাবশেষের সাথে মিশ্রিত (লিম্ফোসাইটোলাইসিস) (ইনসেট) রয়েছে। এই লিম্ফোসাইটগুলির অল্প সংখ্যক 5-7 μm বেসোফিলিক ইন্ট্রানিউক্লিয়ার ইনক্লুশন বডি রয়েছে যা পারমাণবিক ক্রোমাটিনকে (তীর) প্রান্তিক করে দেয়। (খ) মাছ ধরার বিড়াল নং. 3. মাঝে মাঝে প্রসারিত ক্রিপ্টগুলির সাথে ভিলির সংক্ষিপ্তকরণ যাতে ইওসিনোফিলিক প্রোটিনেসিয়াস পদার্থ থাকে এবং স্পষ্টভাবে ক্ষয়প্রাপ্ত বা নেক্রোটিক ক্রিপ্ট এপিথেলিয়াল কোষ (ইনসেট) দ্বারা রেখাযুক্ত। অনেক ক্রিপ্ট এপিথেলিয়াল কোষ ছিল পাইকনোটিক এবং ক্যারিওরহেক্টিক এবং বিরল কোষে অনুরূপ বেসোফিলিক ইন্ট্রানিউক্লিয়ার ইনক্লুশন বডি (তীর) থাকে। (গ) মাছ ধরার বিড়াল নং. 1. স্প্লেনিক লিম্ফয়েড ফলিকলের এলাকায় মনোনিউক্লিয়ার কোষের সাইটোপ্লাজমে সিপিপিভি-1 ইমিউনোর অ্যাক্টিভিটি প্রায়শই পরিলক্ষিত হয়। (D) মাছ ধরার বিড়াল নং. 3. CPPV-1 IHC সংকেতগুলি বিস্তৃতভাবে সনাক্ত করা হয়েছিল এবং ক্রিপ্টাল এপিথেলিয়াল কোষের সাইটোপ্লাজমে (ইনসেট) ইমিউনোরঅ্যাক্টিভিটি সিগন্যালগুলি চিহ্নিতভাবে স্থানীয়করণ করা হয়েছিল৷ বারগুলি (A) এর জন্য 25 μm এবং (B–D) এর জন্য 120 μm নির্দেশ করে।
এই জাতীয় ফলিকলের কেন্দ্রে ইওসিনোফিলিক ফাইব্রিলার পদার্থের সঞ্চয়। এই লিম্ফোসাইটগুলির কয়েকটি সংখ্যায় 5-7 μm বেসোফিলিক ইন্ট্রানিউক্লিয়ার ইনক্লুশন বডি থাকে যা পারমাণবিক ক্রোমাটিনকে প্রান্তিক করে। মিউকোসাল আর্কিটেকচারের পতনের সাথে অন্ত্রের ভিলির সংক্ষিপ্তকরণ মাছ ধরার বিড়ালের নং অন্ত্রের বিভাগে উপস্থিত ছিল। 3 (চিত্র 1B)। কিছু ক্রিপ্ট প্রসারিত ছিল, এবং সেগুলিতে ইওসিনোফিলিক প্রোটিনেসিয়াস উপাদান ছিল এবং স্পষ্টভাবে ক্ষয়প্রাপ্ত বা নেক্রোটিক ক্রিপ্ট এপিথেলিয়াল কোষ দ্বারা রেখাযুক্ত ছিল। অনেক ক্রিপ্টাল এপিথেলিয়াল কোষ ছিল পাইকনোটিক এবং ক্যারিওরহেকটিক এবং বিরল কোষে অনুরূপ বেসোফিলিক ইন্ট্রানিউক্লিয়ার ইনক্লুশন বডি থাকে। CPPV-1 IHC টিস্যুতে ভাইরাসের উপস্থিতি প্রদর্শন করতে এবং রুটিন পোস্টমর্টেম পরীক্ষায় দেখা ক্ষতগুলিতে CPPV-1 এর রোগগত ভূমিকা বর্ণনা করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। প্লীহাতে থাকা মনোনিউক্লিয়ার কোষগুলি সমস্ত মাছ ধরার বিড়ালের (চিত্র 1C) মধ্যে CPPV-1-এর ইতিবাচক তীব্র ইমিউনোর অ্যাক্টিভিটি প্রকাশ করে। ক্রিপ্টাল এপিথেলিয়াল কোষের বেশিরভাগ সাইটোপ্লাজমেও ইমিউনোরঅ্যাক্টিভিটি পরিলক্ষিত হয়েছিল এবং মাছ ধরার বিড়ালের নং অন্ত্রের ক্ষতের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল। 3 (চিত্র 1D)। উল্লেখযোগ্যভাবে, বিভিন্ন ডিগ্রীরেনাল টিউবুলারভ্যাকুয়ালেশন এবং মাল্টিফোকালরেনালসমস্ত মাছ ধরার বিড়ালের মধ্যে রক্তক্ষরণ স্পষ্ট ছিল (চিত্র 2A)। কিছুরেনালটিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষগুলি পারমাণবিক পাইকনোসিসের সাথে হাইপারিওসিনোফিলিক ছিল, যখন বিরল ভ্যাকুয়ালেটেড টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষগুলি প্রান্তিক নিউক্লিয়ার ক্রোমাটিন (চিত্র 2B) সহ ভেসিকুলেটেড নিউক্লিয়াস প্রকাশ করে। সংক্রান্তকিডনিক্ষত, আমরা এর সেলুলার আর্কিটেকচার প্রদর্শনের জন্য আরও PAS স্টেনিং করেছিকিডনি টিস্যুএবং এই ক্ষতের সম্ভাব্য কারণ হিসাবে সিস্টেমিক হাইপোক্সিয়া বাদ দেওয়া। PAS staining প্রদর্শিতরেনাল টিউবুলারবেসমেন্ট ঝিল্লি অক্ষত ছিল (চিত্র 2B, ইনসেট)। মধ্যেকিডনিবিভাগে, CPPV-1 ইমিউনোলাবেলিং শক্তিশালী ছিল এবং প্রায়শই সাইটোপ্লাজমে দেখা যায়রেনাল টিউবুলারএপিথেলিয়াল কোষ (চিত্র 2C) এবং ইউরোথেলিয়াল কোষরেনাল শ্রোণীচক্রসব ক্ষেত্রে. নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণে (S1 Fig) ইমিউনোজেনিক প্রতিক্রিয়ার কোন প্রমাণ পরিলক্ষিত হয়নি। এর মধ্যে অস্বাভাবিক CPPV-1 স্থানীয়করণরেনাল টিস্যুIHC দ্বারা প্রকাশিত প্রস্তাবিত যে আমাদের CPPV-1 এর উপস্থিতি এবং স্থানীয়করণ নিশ্চিত করার জন্য অতিরিক্ত তদন্ত পরিচালনা করা উচিতকিডনিপপ-অফ কৌশল সহ ISH এবং TEM ব্যবহার করে৷ সিপিপিভি-1 আইএসএইচ-ইমিউনোর অ্যাক্টিভিটি সমস্ত মাছ ধরার বিড়ালের মধ্যে ইতিবাচক ছিল এবং এর নিউক্লিয়াসে ছড়িয়ে পড়েছিলরেনালটিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষ, যেখানে টিউবুলার ক্ষত পরিলক্ষিত হয়েছিল (চিত্র 2D)। নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণে কোন প্রতিক্রিয়া পরিলক্ষিত হয়নি (S1 Fig.) ISH-এর ইতিবাচক ইমিউনোলজিক্যাল সিগন্যালের ফলাফল অনুসারে যা নিউক্লিয়াসে স্থানীয়করণ করেছে।রেনালএপিথেলিয়াল কোষ, অসংখ্য ছোট ছোট ইলেক্ট্রন-ঘন ভাইরাল কণা, প্রায় 19-22 এনএম ব্যাস অনুমান করা হয়েছে। এগুলোর নিউক্লিয়াসে গুচ্ছবদ্ধ ছিলরেনাল টিউবুলারএবং ইউরোথেলিয়াল কোষ (চিত্র 3)।
মাছ ধরার বিড়ালের সনাক্তকরণ CPPV-1 এবং জিনোমিক বিশ্লেষণপ্রাথমিকভাবে, হার্পিসভাইরাস, প্যারামিক্সোভাইরাস, নিউমোভাইরাস, ক্যালিসিভাইরাস, ইনফ্লুয়েঞ্জা ভাইরাস, বোকাভাইরাস, করোনভাইরাস এবং পারভোভাইরাস সহ বিভিন্ন ভাইরাসের জন্য নির্দিষ্ট প্যান-ফ্যামিলি পিসিআর প্যানেলগুলি নিষ্কাশিত ভাইরাল নিউক্লিক অ্যাসিড নমুনাগুলিতে পরীক্ষা করা হয়েছিল। এটি শুধুমাত্র অন্ত্র, লিম্ফ নোড এবং প্যান-পারভোভাইরাস পিসিআরের সাথে ইতিবাচক ফলাফল প্রকাশ করেছেকিডনিতিনটি মাছ ধরার বিড়ালের নমুনা। বিপরীতভাবে, অন্যান্য ভাইরাস সনাক্তকরণের জন্য অন্যান্য প্যান-পিসিআর সমস্ত পরীক্ষিত টিস্যু নমুনায় নেতিবাচক ছিল অন্ত্র থেকে প্রাপ্ত নিউক্লিক অ্যাসিডের নমুনা (কেস নং 1) এবংকিডনি(মামলা নং 3)। দুটি মাছ ধরার বিড়াল CPPV-1 স্ট্রেনের সম্পূর্ণ কোডিং জিনোমের 4,462 এবং 4,430 বেস জোড়া শনাক্ত করা হয়েছে এবং স্ট্রেন 19ZP004-TH/2019 (কেস নং 1, অ্যাসেশন নং MW145540) এবং 19ZP{ {12}TH/2019 (কেস নং 3, অ্যাকসেশান নং MW145541), যথাক্রমে। জেনেটিক বিশ্লেষণের পর, সম্পূর্ণ কোডিং জিনোমগুলি মাছ ধরার বিড়াল থেকে প্রাপ্ত CPPV-1 স্ট্রেনের মধ্যে জেনেটিক্যালি একই রকম ফলাফল প্রকাশ করে যে এই মাছ ধরার বিড়াল CPPV-1 FPV ছিল। সিপিপিভি-1 ভেরিয়েন্ট এবং ফিশিং ক্যাটস এফপিভি-এর মধ্যে ডিডিউডেড অ্যামিনো অ্যাসিডের তুলনা সারণি 1-এ বর্ণনা করা হয়েছে। উল্লেখ্য, ফিশিং বিড়াল এফপিভি কাঠামোগত (VP1 এবং 2) প্রোটিনে I566M এবং M569R-এর অনন্য অ্যামিনো অ্যাসিড মিউটেশন প্রকাশ করেছে। , যা পূর্ববর্তী CPPV-1 ভেরিয়েন্টে সনাক্ত করা হয়নি।
চিত্র 2. মাছ ধরার বিড়ালের মধ্যে CPPV-1 সংক্রমণ। ডেমোনস্ট্রেটিভ H&E (A), PAS স্টেনিং (B), CPPV-1 IHC (C) এবং ইন সিটু হাইব্রিডাইজেশন (ISH) (D) ফটোমাইক্রোগ্রাফকিডনিমাছ ধরার বিড়াল থেকে। (A, B) মাছ ধরার বিড়াল নং 3. (ক) মাল্টিফোকালরেনালসঙ্গে রক্তক্ষরণরেনাল টিউবুলারশূন্যতা কিছু টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষগুলি পাইকনোটিক নিউক্লিয়াস (ইনসেট, তীর) সহ হাইপারিওসিনোফিলিক ছিল। (খ)রেনাল টিউবুলারএপিথেলিয়াল কোষে সাইটোপ্লাজমিক ভ্যাকুওল প্রদর্শিত হয় এবং বিরল এপিথেলিয়াল কোষের নিউক্লিয়াস প্রান্তিক পারমাণবিক ক্রোমাটিনের সাথে ভেসিকুলেটযুক্ত। PAS স্টেনিং অক্ষত বেসমেন্ট মেমব্রেন (ইনসেট) হাইলাইট করেছে। (গ) মাছ ধরার বিড়াল নং. 2. CPPV-1 IHC-ইমিউনোরঅ্যাকটিভিটি (গাঢ়-বাদামী রঙ) বিস্তৃতভাবে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিলরেনাল টিউবুলসএবং প্রায়শই এর সাইটোপ্লাজমে সনাক্ত করা হয়রেনাল টিউবুলারএপিথেলিয়াম (ইনসেট)। (D) মাছ ধরার বিড়াল নং 1। সিপিপিভি-1 আইএসএইচ-ইমিউনোর অ্যাক্টিভিটি (লাল গোলাপী রঙ) প্রচুর পরিমাণে পরিলক্ষিত হয়েছিলরেনাল টিউবুলস(তারকা), এবং এটি এর নিউক্লিয়াসে স্থানীয়করণ করেরেনাল টিউবুলারepitheliums (ইনসেট, তীর)। বারগুলি (A, C) এর জন্য 50 μm এবং (B, D) এর জন্য 120 μm নির্দেশ করে।
ফাইলোজেনেটিক এবং বিবর্তনীয় বিশ্লেষণশনাক্ত করা মাছ ধরার বিড়াল CPPV-1 এবং অন্যান্য পূর্বে প্রকাশিত CPPV-1 জিনোমের মধ্যে জেনেটিক সম্পর্কের তুলনা করার জন্য, সম্পূর্ণ কোডিং জিনোম সিকোয়েন্সের উপর ভিত্তি করে ফাইলোজেনেটিক বিশ্লেষণ পরিচালিত হয়েছিল। এমএল ফাইলোজেনেটিক ট্রি দেখায় যে বেশিরভাগ FPV, MEV এবং CPV গ্রুপগুলির মধ্যে একটি খুব স্বতন্ত্র ক্লেড গঠন করে (চিত্র 4)। অধ্যয়ন করা মাছ ধরার বিড়াল থেকে দুটি CPPV-1 জিনোম (লাল ত্রিভুজ দ্বারা নির্দেশিত) বিভিন্ন হোস্ট থেকে প্রাপ্ত পূর্বে প্রকাশিত FPV ক্রমগুলির একই বংশের সাথে একত্রে ক্লাস্টার করা হয়েছিল, যা নিশ্চিত করে যে প্রাপ্ত
চিত্র 3. এর নিউক্লিয়াসে CPPV-1 ভাইরাল কণারেনাল টিউবুলারএপিথেলিয়াল কোষের. ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি (TEM) পপ-অফ কৌশল ব্যবহার করে। ইলেক্ট্রন-ঘন কণার (তীর) ক্লাস্টারিংয়ের আল্ট্রাস্ট্রাকচারাল প্রদর্শন। আইকোসাহেড্রাল কণার আকার ছিল 19-22 nm ব্যাস এর নিউক্লিয়াসে অবস্থিতরেনাল টিউবুলারএপিথেলিয়াল কোষ (ইনসেট)। চিত্রে দেখানো হিসাবে স্কেল বার.
মাছ ধরার বিড়াল CPPV-1গুলি ছিল FPV৷ শনাক্ত করা জিনোমগুলিকে একত্রে গুচ্ছবদ্ধ করা হয়েছিল এবং থাইল্যান্ডের গৃহপালিত বিড়ালগুলির মধ্যে সনাক্ত করা FPV জিনোমের সাথে সবচেয়ে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত ছিল (অ্যাক্সিশন নং MN127780)। শনাক্ত করা মাছ ধরার বিড়াল CPPV-1-এর বিবর্তন প্রক্রিয়াকে আরও ব্যাখ্যা করার জন্য, 224 CPPV-1 সম্পূর্ণ জিনোম সিকোয়েন্সের একটি ডেটাসেটে বিভিন্ন পুনঃসংযোগ সনাক্তকরণ এবং বিবর্তনীয় বিশ্লেষণ পরিচালিত হয়েছিল। পুনর্মিলন বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে মাছ ধরার বিড়াল CPPV-1 ক্রমগুলিতে কোনো পুনর্মিলন ঘটনা পাওয়া যায়নি। এই তথ্যের বিবর্তনীয় গাছ দুটি প্রধান স্বতন্ত্র পৃথক ক্লেড (চিত্র 5) দেখিয়েছে। একটি ক্লেডে FPV এবং MEV এবং অন্য ক্লেডে সমস্ত CPV সিকোয়েন্স অন্তর্ভুক্ত ছিল। সামগ্রিক বিবর্তনের হার অনুমান করা হয়েছিল 1.08 × 10−4 প্রতিস্থাপন/সাইট/বছর (95 শতাংশ HPD: 1.95– 2.87 × 10−4)। বিবর্তনীয় গাছটি দেখিয়েছে যে মাছ ধরার বিড়াল এফপিভি ক্রমগুলি থাইল্যান্ড থেকে বিচ্ছিন্ন এফপিভি-র একই বংশের মধ্যে ক্লাস্টার করা হয়েছিল। তারা চীনে গৃহপালিত বিড়ালদের মধ্যে সনাক্ত করা FPV জিনোমের সাথে জেনেটিক বিবর্তন ভাগ করেছে এবং 1970 সালের দিকে একই উত্স হতে পারে।
আলোচনা
CPV এবং FPV অন্তর্ভুক্ত সিপিপিভি-1 রূপের প্রচলন গৃহপালিত এবং বন্য মাংসাশী উভয়ের মধ্যে সনাক্ত করা হয়েছে। যদিও গৃহপালিত কুকুর এবং বিড়ালের মধ্যে CPPV-1 এর মারাত্মক সংক্রমণ সাধারণ, এই সংক্রমণটি বিক্ষিপ্তভাবে বন্য মাংসাশী প্রাণীদের মধ্যে দেখা যায় [46]। বেশ কিছু গবেষণায় দেখা গেছে যে অনেক বন্য মাংসাশী সিপিপিভি-1 সংক্রমণের জন্য সংবেদনশীল যার মধ্যে রয়েছে বন্য ফেলিড, মিঙ্কস, ওটার, স্কাঙ্কস, র্যাকুন, শিয়াল, নেকড়ে, কোয়োটস, সিভেট এবং মার্টেন [১১, ১৯]। বিশেষ করে প্রিওনাইলুরাস গোত্রের জন্য, শুধুমাত্র চিতা বিড়ালই সিপিপিভি-1 ভ্যারিয়েন্ট [৯] দ্বারা সংক্রমিত হয়েছে বলে জানা গেছে। এই সমীক্ষায়, আমরা বন্য মাছ ধরার বিড়ালগুলিতে (প্রিওনাইলুরাস ভাইভেরিনাস) CPPV-1-এর সদস্য FPV-এর প্রাকৃতিক সংক্রমণ বর্ণনা করি। স্বতন্ত্র ভাইরাল বিতরণ এবং ট্রপিজমের বর্ণনা সহ এটি প্রথম প্রতিবেদনকিডনি টিস্যুআল্ট্রা-স্ট্রাকচারের PCR, IHC, ISH এবং TEM বিশ্লেষণ ব্যবহার করে অ্যান্টিজেনিক সনাক্তকরণের মাধ্যমে নিশ্চিত করা হয়েছে।
গার্হস্থ্য এবং বন্য মাংসাশী প্রাণীর মধ্যে CPPV-1 বৈচিত্রের ক্রস-প্রজাতির সংক্রমণ লক্ষ্য করা গেছে, এবং কিছু মারাত্মক CPPV-1 প্রাদুর্ভাব আবাসস্থলগুলির মধ্যে প্যাথোজেন স্পিলওভারের সাথে সম্পর্কিত বলে অনুমান করা হয়েছে [9, 11]। বন্যপ্রাণীর আবাসস্থলের বর্তমান ক্ষতির কারণে, বন্য উপনিবেশগুলি স্থানান্তরিত হচ্ছে এবং গৃহপালিত প্রাণীদের সাথে আবাসস্থল ভাগ করছে, যার ফলে সংবেদনশীল প্রাণীদের মধ্যে প্যাথোজেন স্পিলওভার বেড়েছে। এই গবেষণায়, আমরা দেখতে পেয়েছি যে মাছ ধরার বিড়াল CPPV-1 জিনোমগুলি সনাক্ত করা FPV স্ট্রেনের সাথে একটি বিবর্তনীয় প্যাটার্ন ভাগ করেছে
চিত্র 4. ফাইলোজেনেটিক টপোলজি মাছ ধরার বিড়াল CPPV-1 এবং অন্যান্য CPPV-1 ভেরিয়েন্টগুলির মধ্যে পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের কোডিং ক্রমগুলির জেনেটিক সম্পর্ক প্রকাশ করে৷ ফাইলোজেনেটিক গাছটি দেখিয়েছে যে মাছ ধরার বিড়াল CPPV-1 ক্রমগুলি (লাল ত্রিভুজ দ্বারা নির্দেশিত) FPV জিনোমের সাথে থাই বিড়াল (MN127780) সনাক্ত করা FPV জিনোমের সাথে সবচেয়ে বেশি সম্পর্কিত জিনোমের সাথে একত্রে ক্লাস্টার করা হয়েছিল। এই বিশ্লেষণে ব্যবহৃত পূর্বে বর্ণিত CPPV-1 ক্রমগুলির GenBank অ্যাক্সেস নম্বরগুলি নির্দেশিত হয়েছিল৷
থাইল্যান্ডে গৃহপালিত বিড়াল। এই ফলাফলগুলি 1970 এর দশক থেকে চীনে গৃহপালিত বিড়ালদের থেকে বিচ্ছিন্ন সাধারণ পূর্বপুরুষদের এফপিভি স্ট্রেনের অনুরূপ বিবর্তনীয় প্যাটার্ন দেখায়। এই ফলাফল হতে পারে গৃহপালিত বিড়াল এবং মাছ ধরার বিড়ালের মধ্যে ক্রস-প্রজাতি সংক্রমণের সম্ভাব্য প্রমাণ বা CPPV-1 ভেরিয়েন্টের সহ-বিবর্তন। যাইহোক, একই আবাসস্থলে মুক্ত-বিচরণকারী প্রাণীদের থেকে প্রাপ্ত নমুনার সীমাবদ্ধতার কারণে এবং তদন্ত করা মাছ ধরার বিড়ালের অল্প সংখ্যক, এই গবেষণায় CPPV-1-এর প্রাথমিক জলাধার চিহ্নিত করা যায়নি এবং আরও তদন্তের প্রয়োজন। . যদিও বেশ কিছু গবেষণায় ইঙ্গিত দেওয়া হয়েছে যে ক্যাপসিড জিনের বিভিন্ন অ্যামিনো অ্যাসিড অবশিষ্টাংশ নতুন হোস্টকে সংক্রামিত করার ক্ষমতা এবং CPPV-1 [১৮, 47] এর অ্যান্টিজেনিসিটি উভয়ের সাথেই যুক্ত, তবে 300 অবস্থানে একক অ্যামিনো অ্যাসিড মিউটেশন ক্যাপসিড প্রোটিন (VP2) একাধিক হোস্ট রেঞ্জের জন্য একটি মূল নির্ধারক হিসাবে রিপোর্ট করা হয়েছে [48]। এই সমীক্ষায়, মাছ ধরার বিড়াল থেকে প্রাপ্ত CPPV-1 রূপটি FPV সিকোয়েন্সের মতো একই অ্যামিনো অ্যাসিড প্যাটার্ন প্রকাশ করেছে, যেখানে ক্যাপসিড অবস্থান 300-এ একটি মূল অ্যামিনো অ্যাসিড নির্ধারক হিসাবে অ্যালানাইন (A) এর উপস্থিতি রয়েছে। CPPV-1 এর ফিশিং ক্যাট ক্যাপসিড প্রোটিন যথাক্রমে 564 এবং 568 অবস্থানে অবস্থিত অ্যাসপারাজিন (N) এবং অ্যালানাইন (A) অ্যামিনো অ্যাসিড প্রকাশ করেছে (যা বিড়াল হোস্টে FPV প্রতিলিপির জন্য গুরুত্বপূর্ণ বলে মনে করা হয়), তাদের ছিল I566M এবং M569R অবস্থানে 2টি অনন্য অ্যামিনো অ্যাসিড মিউটেশন। এই মিউটেশনগুলি এই ভাইরাসটিকে পূর্বে বর্ণিত CPPV-1 রূপগুলি থেকে আলাদা করতে পারে। পূর্বপুরুষের পুনর্গঠনের পূর্ববর্তী বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে FPV VP2 জিনের কিছু পরিবর্তনের সাথে স্বতন্ত্র মাংসাশীকে সংক্রামিত করতে পারে [49]। এইভাবে, FPV-এর মতো পারভোভাইরাসকে অস্থায়ীভাবে মাছ ধরার বিড়ালের মধ্যে সনাক্ত করা একটি সম্ভাব্য অভিনব ভাইরাস হিসাবে নামকরণ করা হয়েছিল এবং এটি এই প্রজাতিতে এই ভাইরাসের প্রথম সনাক্তকরণকে সমর্থন করতে পারে। যাইহোক, অল্প সংখ্যক অন্যান্য সিকোয়েন্সের তুলনায় তদন্ত করা মাছ ধরার বিড়ালগুলির একটি নির্দিষ্ট সংখ্যক একটি নির্দিষ্ট ব্যাখ্যা নাও দিতে পারে। আরও সুনির্দিষ্ট সিদ্ধান্তে উপনীত হওয়ার জন্য এটির আরও অধ্যয়ন প্রয়োজন।
মাছ ধরার বিড়ালের CPPV-1 স্থানীয়করণগুলি অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষ এবং লিম্ফয়েড কোষ সহ বিভিন্ন টিস্যুতে পরিলক্ষিত হয়েছিল, যেখানে CPPV-1 সংক্রমণের সবচেয়ে সাধারণ টিস্যু স্থানীয়করণ অন্যান্য প্রজাতির মধ্যে পাওয়া যায় [20, 26, 50, 51 ]। মজার বিষয় হল, যেহেতু পিসিআর ব্যবহার করে ভাইরাল জিনোমিক সনাক্তকরণের প্রাথমিক তদন্ত এবং আইএইচসি ব্যবহার করে ভাইরাল স্থানীয়করণের মধ্যে স্বতন্ত্র ভাইরাল স্থানীয়করণ প্রকাশ পেয়েছেকিডনি টিস্যু, আমরা এর সেলুলার আর্কিটেকচার প্রদর্শন করার জন্য PAS স্টেনিং করেছিরেনাল টিস্যুএবং টিউবুলার নেক্রোসিসের সম্ভাব্য কারণ হিসাবে সিস্টেমিক হাইপোক্সিয়া বাদ দেওয়া। PAS স্টেনিং প্রকাশ করেছে যে সবচেয়ে নলাকার বেসমেন্ট ঝিল্লিগুলি অক্ষত ছিল, পরামর্শ দেয় যে এই ক্ষতটি সিস্টেমিক হাইপোক্সিয়া [52] এর ফলে হতে পারে না। যাইহোক, অন্যান্য কারণ যেমন টক্সিন-প্ররোচিত টিউবুলার নেক্রোসিস এই ক্ষত সৃষ্টি করতে পারে। এইভাবে, এফপিভি-এর মতো পারভোভাইরাস সংক্রমণের সাথে যুক্ত ভূমিকাকিডনিক্ষত এখনও আরও তদন্ত প্রয়োজন. তদুপরি, আমরা ভাইরাসটির বিদ্যমান স্থানীয়করণকে আরও ব্যাখ্যা করার চেষ্টা করেছিকিডনি টিস্যুআইএসএইচ এবং টিইএম ব্যবহার করে পপ-অফ কৌশল [৩৭] যেখানে সিপিপিভি-1 আইএইচসি-ইমিউনোরেঅ্যাকটিভিটি সনাক্ত করা হয়েছিল। এর নিউক্লিয়াসে ইলেকট্রন-ঘন কণা পরিলক্ষিত হয়রেনাল টিউবুলারএপিথেলিয়াল কোষ এবং ইউরোথেলিয়াল কোষ, সিপিপিভি-1 এর সিটু ইমিউনোরঅ্যাক্টিভিটি ইতিবাচক সমর্থন করেকিডনি টিস্যু. এফপিভি-সংক্রমিত বিড়ালরা ভাইরাসটি প্রধানত মলের মধ্যে ফেলে, তবে প্রস্রাবে সক্রিয় ভাইরাসের উপস্থিতি বর্ণনা করা হয়েছে [53, 54]। সাম্প্রতিক গবেষণায় দেখা গেছে যে পারভোভাইরাস সংক্রমণের ভূমিকা রয়েছেরেচনজনিত ব্যর্থতা[৫৫]। যাইহোক, FPV এর স্থানীয়করণ এবং CPV এর প্রতিরূপকিডনি টিস্যুআগে তদন্ত করা হয়নি। উপরন্তু, একটি মাউসকিডনিপারভোভাইরাস (MKPV) একটি নেফ্রোট্রপিক ভাইরাস বলে প্রমাণিত হয়েছে যাতে এটি সংক্রামিত এবং স্থানীয়করণের জন্য একটি সখ্যতা দেখিয়েরেনাল টিউবুলারএপিথেলিয়াল কোষ, যার ফলেকিডনি রোগ [56, 57].
আমাদের জ্ঞানের উপর ভিত্তি করে, CPPV-1 স্থানীয়করণকিডনিপূর্বে বর্ণনা করা হয়নি। এটি এই প্রজাতির একটি অনন্য ভাইরাল স্থানীয়করণের অভিনব বর্ণনার পরামর্শ দেয় বা এটি FPV- আক্রান্ত বিড়ালদের মধ্যেও পাওয়া যায়। এই অনুসন্ধানটি পূর্ববর্তী গবেষণাকে সমর্থন করতে পারে যা প্রস্রাবে FPV পাওয়া গেছে। অনন্য প্যাথলজিকাল ফলাফলগুলি বিষয়গত হতে পারে এবং ব্যক্তিদের মধ্যে সংক্রমণ হিসাবে পরিলক্ষিত হতে পারে। এইভাবে, মাছ ধরার বিড়াল CPPV-1 এর একটি বড় মাপের তদন্ত একটি সুনির্দিষ্ট ব্যাখ্যার সুবিধা দেবে৷ উপরন্তু, যে নমুনাগুলি বেশিরভাগ মৃত প্রাণী থেকে জমা দেওয়া হয়েছিল এবং ইতিমধ্যেই পোস্টমর্টেম অটোলাইসিস করা হয়েছিল এই প্রাণীগুলি থেকে আরও অঙ্গ সংগ্রহের জন্য উপযুক্ত নয়। এইভাবে আমরা অন্যান্য অঙ্গে ভাইরাল স্থানীয়করণ নির্ধারণ করতে সক্ষম হইনি। মাছ ধরার বিড়াল CPPV-1-এর অ্যাটিপিকাল ভাইরাল স্থানীয়করণের ব্যাখ্যা একটি দরকারী তদন্ত হবে।
CISTANCHE কিডনি/রেনাল রোগের উন্নতি ঘটাবে
CPPV-1 বিভিন্ন বন্য মাংসাশী প্রাণীর মধ্যে সনাক্ত করা হয়েছে এবং এটি মারাত্মক প্রাদুর্ভাবের সাথে যুক্ত। এই গবেষণায় চিড়িয়াখানা-বন্য নমুনাগুলিতে পূর্ববর্তী সিপিপিভি-1 সনাক্তকরণের নেতিবাচক প্রমাণগুলি হয় সংবেদনশীল প্রাণীদের মধ্যে কোনও ঘনিষ্ঠ-সংযোগ না থাকার ফলে বা, অন্যদিকে, দীর্ঘায়িত নমুনা স্টোরেজ যা জিনোমিক পদার্থের স্থায়িত্বকে প্রভাবিত করে। এই গবেষণায় মাছ ধরার বিড়ালদের প্রাণঘাতী সংক্রমণের সাথে যুক্ত CPPV-1 এর অভিনব সনাক্তকরণ এই দুর্বল প্রাণীর একটি অভিনব, সম্ভাব্য ভাইরাসজনিত রোগ সম্পর্কে উদ্বেগ বাড়ায়। তাই, অন্যান্য সংবেদনশীল প্রাণী প্রজাতির ক্ষতি রোধ করার জন্য মাছ ধরার বিড়ালের মধ্যে CPPV-1 সংক্রমণের আরও অধ্যয়ন অপরিহার্য। সেই অনুযায়ী, CPPV-1 সংক্রমণ পরিচালনা করার জন্য প্রতিরোধ কৌশলগুলির উপর জোর দেওয়া উচিত, শুধুমাত্র এই প্রজাতিতেই নয়, মুক্ত-বিচরণকারী গৃহপালিত প্রাণীদের মধ্যেও যেগুলি এই ভাইরাসের সম্ভাব্য হোস্ট হিসাবে কাজ করতে পারে।
