অ্যামাইলয়েড বিটা একত্রিতকরণ এবং সিস্টানচে টিউবুলোসা জলীয় নির্যাস জমার বাধা

1। পরিচিতি

ডিমেনশিয়া হল সবচেয়ে সাধারণ দীর্ঘস্থায়ী বার্ধক্যজনিত রোগগুলির মধ্যে একটি। 2015 সালে বিশ্ব আলঝেইমার রিপোর্ট অনুমান করেছে যে প্রায় 46.8 মিলিয়ন মানুষ ডিমেনশিয়ায় ভুগছে এবং 2030 সালে এই সংখ্যা 74.7 মিলিয়ন এবং 2050 সালে 131.5 মিলিয়ন হবে বলে আশা করা হচ্ছে। বিশ্বব্যাপী ডিমেনশিয়া জনসংখ্যা প্রতি বছর বৃদ্ধি পাবে এবং ভবিষ্যতে নিয়ন্ত্রণের বাইরে চলে যাবে। . ডিমেনশিয়া চিকিৎসার জন্য বিশ্বব্যাপী স্বাস্থ্যসেবা ব্যয় 2010 সালে প্রায় 604 বিলিয়ন মার্কিন ডলার ছিল এবং 2030 সালে এই পরিমাণ 1000 বিলিয়ন হবে বলে আশা করা হচ্ছে। ডিমেনশিয়া রোগীদের দুর্ঘটনাজনিত মৃত্যুর ঝুঁকি বেশি থাকে এবং তাই তাদের আরও চিকিৎসা যত্নের প্রয়োজন হয়। ডিমেনশিয়া রোগীর পারিবারিক পরিচর্যাকারীদের জন্য এটি একটি ভারী বোঝা। তত্ত্বাবধায়ক, পরিবার এবং সমাজের উপর ডিমেনশিয়ার প্রভাব দুর্দান্ত শারীরিক, মানসিক, জীবন এবং অর্থনৈতিক চাপ তৈরি করতে পারে। ডিমেনশিয়ার দুটি প্রধান রূপ রয়েছে, আলঝেইমার ডিজিজ (AD) এবং ভাস্কুলার ডিমেনশিয়া। AD হল সবচেয়ে সাধারণ ডিমেনশিয়া এবং এটি একটি অপরিবর্তনীয় এবং প্রগতিশীল নিউরোডিজেনারেটিভ ডিসঅর্ডার। 2015 সালে মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রে AD মৃত্যুর ষষ্ঠ প্রধান কারণ ছিল।

PHGS75% ECH 30% ACT 12%

সাম্প্রতিক গবেষণাগুলি সমর্থন করে যে অ্যামাইলয়েড পেপটাইড (A ) (ফলক) এবং প্রোটিন টাউ (ট্যাঙ্গেল) একত্রিতকরণ দ্বারা প্ররোচিত নিউরন বিষাক্ততা AD প্যাথোজেনেসিসের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত। মস্তিষ্কে A এবং প্রোটিন টাউ জমা হওয়ার ফলে নিউরনের ক্ষতি এবং স্মৃতিশক্তি হ্রাস হতে পারে। অদ্রবণীয় A অলিগোমারগুলি বহির্কোষীয় ফলকে একত্রিত হয় এবং এটি সিন্যাপটিক কর্মহীনতা, নিউরন বিষাক্ততা এবং কোষের মৃত্যুর দিকে পরিচালিত করে বলে জানা গেছে। দুর্ভাগ্যবশত, A এবং প্রোটিন টাউ পরিষ্কার করতে, A-এর গঠন বা অলিগোমারাইজেশনকে বাধা দিতে এবং অপরিবর্তনীয় নিউরন ক্ষতি স্থগিত বা নিরাময় করার জন্য এখনও পর্যন্ত কোন কার্যকরী চিকিত্সা উপলব্ধ নেই। বর্তমান থেরাপিউটিক এজেন্ট, যেমন গ্যালান্টামাইন এবং ডনপেজিল, যা অ্যাসিটাইলকোলিনস্টেরেজ ইনহিবিটর, শুধুমাত্র নিউরোট্রান্সমিটারের মাত্রা বাড়িয়ে সাময়িকভাবে স্মৃতিশক্তি হ্রাস করতে পারে। 2012 সালে, কোনো প্রার্থীর ওষুধই বড় AD রোগীর ক্লিনিকাল স্টাডিতে A প্রভাব কমাতে সক্ষম হয়নি। তাই, আল্জ্হেইমার রোগের প্রকোপ দমন করার জন্য একটি অভিনব চিকিৎসার জন্য গবেষণা জরুরীভাবে প্রয়োজন। ধাতব আয়নগুলি সম্প্রতি A সমষ্টির সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত একটি মূল ফ্যাক্টর হিসাবে বিবেচিত হয়েছিল। সম্ভাব্য সীসা যৌগ হিসাবে বিবেচিত মেটাল চেলেটরগুলি AD-বিরোধী পদ্ধতির জন্য সম্পূর্ণ নতুন কৌশল প্রদান করে।

Cistanche tubulosa এর শুকনো কান্ড(শ্রেঙ্ক) R. Wight, Rou Cong Rong, চীনের মরুভূমির জিনজাং-এ ব্যাপকভাবে ফসল কাটা হয়। এটি একটি গুরুত্বপূর্ণ ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধ যা চায়না ফার্মাকোপিয়াতে সূচিত করা টনিক চীনা ওষুধের অন্তর্গত এবং শারীরিক দুর্বলতা, কিডনির ঘাটতি, বন্ধ্যাত্ব, ভুলে যাওয়া, পুরুষত্বহীনতা এবং বার্ধক্যজনিত কোষ্ঠকাঠিন্যের চিকিৎসার জন্য হাজার হাজার বছর ধরে ব্যবহৃত হয়।C. টিউবুলোসা জলীয় নির্যাস (CTE)ক্যাপসুলগুলি চীনে ভাস্কুলার ডিমেনশিয়ার জন্য একটি বোটানিকাল ড্রাগ হিসাবে অনুমোদিত হয়েছে। 18 জন রোগীর ক্লিনিকাল ট্রায়াল অনুসারে হালকা থেকে মাঝারি এডি নির্ণয় করা হয়েছে, CTE ক্যাপসুল রোগীদের অ্যাসিটাইলকোলিনস্টেরেজ ইনহিবিটরসের তুলনায় আরও স্থিতিশীল স্মৃতিশক্তি দিয়েছে। আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায়, CTE অ্যামাইলয়েড পেপটাইড (A) জমা হ্রাস করেছে এবং আলঝেইমার রোগের মতো ইঁদুরের স্মৃতিশক্তি হ্রাস করেছে। ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড, ইচিনাকোসাইড (1), অ্যাক্টিওসাইড (2), এবং আইসোঅ্যাকটিওসাইড (3) কে CTE-এর প্রধান উপাদান হিসেবে বিবেচনা করা হয়। যৌগ 1-এর 1-মিথাইল-4-ফিনাইল-1,2,3,6-টেট্রাহাইড্রোপাইরিডিন (MPTP), 1-মিথাইল{{13} এর বিষাক্ততার বিরুদ্ধে নিউরোপ্রোটেক্টিভ কার্যকলাপ রয়েছে }}ফেনাইলপাইরিডিনিয়াম আয়ন (MPP+), এবং 6-হাইড্রক্সিডোপামিন (6-OHDA)। আমাদের পূর্ববর্তী প্রতিবেদনে দেখা গেছে যে 1টি একটি ইন ভিট্রো গবেষণায় A অলিগোমারাইজেশন এবং বিষাক্ততাকে দমন করেছে এবং A-প্ররোচিত ইঁদুরগুলিতে A জমা, উন্নত প্রতিবন্ধী স্মৃতিশক্তি এবং জ্ঞানীয় কর্মহীনতাকে বাধা দিয়েছে। যৌগ 2 এবং 3 A অবনতি বৃদ্ধি করেছে এবং ভিট্রোতে A অলিগোমারাইজেশন হ্রাস করেছে। যৌগ 3 A-প্ররোচিত ইঁদুরে A জমা কমিয়েছে। এই অধ্যয়নের উপর ভিত্তি করে, সি. টিউবুলোসা ইতিমধ্যেই প্রমাণ করেছে যে এটি AD-এর চিকিৎসা করার ক্ষমতা রাখে। CTE অ্যান্টি-এ অ্যাগ্রিগেশন এবং ডিপোজিশনের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত। CTE প্রক্রিয়াটি আরও ভালভাবে বোঝার জন্য, আমাদের সক্রিয় উপাদান এবং সেইসাথে মস্তিষ্কের টিস্যু নমুনার বিষয়বস্তু সনাক্ত করার জন্য একটি সুবিধাজনক এবং দক্ষ পদ্ধতি থাকা দরকার। বেশিরভাগ গবেষণার পরিমাণগত নির্ধারণের জন্য ডিজাইন করা হয়েছিলভেষজে ইচিনাকোসাইড, অ্যাক্টিওসাইড এবং আইসোঅ্যাকটিওসাইডবা উচ্চ-কর্মক্ষমতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (HPLC) দ্বারা খাদ্য, কিন্তু শুধুমাত্র দুটি গবেষণা সিরাম বা টিস্যু নির্ধারণের জন্য ছিল। যাইহোক, CTE মৌখিক প্রশাসনের পরে মস্তিষ্কের টিস্যুতে 1-3 এর যুগপত বিশ্লেষণের কোনও রিপোর্ট নেই। উপরন্তু, CTE সক্রিয় উপাদান বা তাদের বিপাক সফলভাবে রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা অতিক্রম করেছে এবং মস্তিষ্কের নিউরনে কাজ করেছে কিনা তা সাম্প্রতিক গবেষণা থেকে এখনও স্পষ্ট নয়। অতএব, এই গবেষণাটি দৃঢ়প্রত্যয়ী প্রমাণ সহ একটি উন্নত এবং সংবেদনশীল পদ্ধতি প্রদান করে যা A সমষ্টি এবং জমার বিরুদ্ধে CTE-এর অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াটিকে স্পষ্টভাবে ব্যাখ্যা করে।

2. ফলাফল

2.1। তিনটি প্রধান যৌগের বিচ্ছিন্নতা এবং সনাক্তকরণ (1-3)

সি. টিউবুলোসার শুকনো ডালপালা ঘরের তাপমাত্রায় 75% EtOH দিয়ে বের করা হয়। ঘনীভূত 75% EtOH নির্যাস তিনটি প্রধান যৌগ, echinacoside (1), সজ্জিত করার জন্য রজন এবং C18 কলাম ক্রোমাটোগ্রাফির অধীন ছিল।অ্যাক্টিওসাইড (2), এবং আইসোঅ্যাকটিওসাইড(3)। এনএমআর (নিউক্লিয়ার ম্যাগনেটিক রেজোন্যান্স) স্পেকট্রোস্কোপি এবং ইএসআই-এমএস (ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন ভর) বিশ্লেষণ করে এবং সাহিত্যের ডেটার সাথে তুলনা করে তাদের গঠনগুলি ব্যাখ্যা করা হয়েছিল (চিত্র 1, পরিপূরক উপাদানের চিত্র S3-S11)।

2.2। CTE থেকে Phenylethanoid Glycosides (1-3) বিষয়বস্তু পরীক্ষা

ফিনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড বিশ্লেষণের জন্য পরীক্ষা পদ্ধতিটি বৈধ করা হয়েছিল। যৌগ 1–3 (5.0 মিলিগ্রাম) সঠিকভাবে ওজন করা হয়েছিল এবং 50% মিথানল (40 মিলি) এর সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল। মিশ্রণ 5 মিনিট জন্য sonicated ছিল. তিনটি ফিনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড (1-3) স্ট্যান্ডার্ড স্টক দ্রবণ (100 ug/mL) হিসাবে মিশ্রিত করা হয়েছিল। 50% মিথানলের সিরিয়াল ভলিউম দিয়ে পাতলা করে যথাক্রমে নির্দেশিত সমাধানগুলির পাঁচটি ভিন্ন ঘনত্ব (5, 10, 25, 50 এবং 100 ug/mL) প্রস্তুত করতে স্ট্যান্ডার্ড স্টক সলিউশন ব্যবহার করা হয়েছিল। ফিনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডস (1-3) বক্ররেখাগুলি 5-100 ug/mL থেকে আল্ট্রা-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (UPLC) ব্যবহার করে প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল এবং যথাক্রমে রৈখিক ছিল (1, r2= 0.9999; 2, r{{25} }.9999; 3, r2= 0.9998)। ইন্ট্রা-ডে এবং ইন্টার-ডে নির্ভুলতা [% RSD (আপেক্ষিক মান বিচ্যুতি) ছিল 0.1 থেকে 1.8%] এবং নির্ভুলতা (95.6–104.2%) 1-3-এর জন্য UPLC দ্বারা গ্রহণযোগ্য ছিল। UPLC CTE বিষয়বস্তুর 1, 2, এবং 3 যথাক্রমে 254, 38, এবং 41 mg/g হিসাবে পরিমাপ করেছে (চিত্র S2)।

ন্যাচারাল সিস্টানচে টিউবুলোসা AD রোগীদের চিকিত্সার জন্য PHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.3। UPLC/MS/MS যাচাইকরণ

ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডগুলি (1-3) ইঁদুরের মস্তিষ্কের টিস্যু হোমোজেনেটের সাথে মিশ্রিত এবং স্পাইক করা হয়েছিল এবং আল্ট্রা পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি-ট্যান্ডেম ভর স্পেকট্রোমিটার (UPLC/MS/MS) ব্যবহার করে কঠিন ফেজ নিষ্কাশনের সাথে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। সনাক্তকরণের নিম্ন সীমা (LLOQ) 1–3 ছিল 0.2 ng/mL৷ ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের পুনরুদ্ধার মস্তিস্কের টিস্যু হোমোজেনেট (10 ng/mL) এর সাথে যথাক্রমে 1 এর জন্য 91.39%, 2 এর জন্য 89.54% এবং 3 এর জন্য 96.81% বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র 2)।

2.4। AD-এর মতো ইঁদুরের মস্তিষ্কের টিস্যুগুলির বিশ্লেষণ

CTE মৌখিক প্রশাসনের 14 দিনের পর (200 mg/kg/day), AD-এর মতো ইঁদুরের মস্তিষ্কের টিস্যুগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং হিপ্পোক্যাম্পাস এবং স্ট্রিয়াটাম দুটি অংশে বিভক্ত করা হয়েছিল এবং উভয়ই সমজাতীয় করা হয়েছিল। যেহেতু প্রতিটি ইঁদুরের হিপ্পোক্যাম্পাস এবং স্ট্রিয়াটাম হোমোজেনেটগুলি কঠিন ফেজ নিষ্কাশনে লোড করার জন্য খুব কম ছিল এবং অতিরিক্ত পরীক্ষামূলক ত্রুটি এড়াতে, চারটি পৃথক ইঁদুরের হিপ্পোক্যাম্পাস এবং স্ট্রিয়াটাম হোমোজেনেটগুলিকে UPLC/MS/MS এর জন্য একটি বিশ্লেষণকৃত নমুনায় মিশ্রিত করা হয়েছিল। ফেজ নিষ্কাশন পদ্ধতি (চিত্র 3A, B)। হিপ্পোক্যাম্পাস (চিত্র 3A) এবং স্ট্রিয়াটামে (চিত্র 3B) ফিনিলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড (1-3) পরিলক্ষিত হয়েছিল। ফাঁকা মস্তিষ্কের টিস্যুতে কোন উল্লেখযোগ্য শিখর ছিল না (চিত্র 3C)। হিপ্পোক্যাম্পাসে ইচিনাকোসাইড সামগ্রী ছিল 11.97 ± 0.34 এনজি/এমএল, অ্যাক্টিওসাইড সামগ্রী ছিল 1.25 ± 0.16 এনজি/এমএল, এবং আইসোঅ্যাকটিওসাইড সামগ্রী ছিল 1.38 ± 0.08 এনজি /mL স্ট্রাইটামে ইচিনাকোসাইড সামগ্রী ছিল 22.60 ± 1.69 ng/mL, অ্যাক্টিওসাইড সামগ্রী ছিল 2.03 ± 0.61 ng/mL, এবং আইসোঅ্যাকটিওসাইড সামগ্রী ছিল 4.90 ± 0.64 ng/mL। চিত্র 4 এ দেখানো হয়েছে, হিপ্পোক্যাম্পাস এবং স্ট্রিয়াটামে 1-3 এর উল্লেখযোগ্য সনাক্তকরণযোগ্য পরিমাণ অনুযায়ী CTE রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা অতিক্রম করবে। UPLC বিশ্লেষণ (চিত্র S2) দ্বারা CTE-তে 1-এর বিষয়বস্তু 2 এবং 3-এর থেকে অনেক বেশি। অতএব, এটি পর্যবেক্ষণ করা যুক্তিসঙ্গত যে মৌখিক CTE প্রশাসনের পরে 1 মস্তিষ্কের টিস্যুতে সর্বোচ্চ।

2.5। ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডস (1-3) মেটাল চেলেটিং অ্যাক্টিভিটি

সাহিত্যে, HPLC ব্যবহার করে মুক্ত যৌগ এবং তাদের ধাতব কমপ্লেক্সের নির্ধারণ করা হয়েছিল। এই গবেষণায় UPLC দ্বারা চিলেশন কার্যকলাপের পরিমাপ বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। প্রতিটি ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের (1-3) 50 µg/mL দ্রবণগুলিকে তামা (Cu), ক্যালসিয়াম (Ca), ম্যাগনেসিয়াম (Mg), দস্তা (Zn), আয়রন (Fe) এর 10 µg/mL দ্রবণে যোগ করা হয়েছিল। ) বা যথাক্রমে ইঁদুরের সিরাম। প্রতিটি ধাতব দ্রবণ বা সিরাম সহ প্রতিটি যৌগ ইউপিএলসি দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডস (1-3) লোহা এবং সিরামের সাথে ধাতব চেলেটিং কার্যকলাপ প্রদর্শন করেছে (চিত্র 5, পরিপূরক উপাদান চিত্র S1)।

2.6। ভিভোতে ইঁদুরের সিরামে ইচিনাকোসাইড (1) এর বিশ্লেষণ

ইঁদুরের সিরামে ইচিনাকোসাইডের বন্টন বোঝার জন্য, ইচিনাকোসাইড (1) মৌখিক প্রশাসনের (100 মিলিগ্রাম/কেজি) পরে প্রাথমিক সময় থেকে 720 মিনিট পর্যন্ত সিরাম সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং UPLC দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। চিত্র 6 ইঁদুরের সিরামে ইচিনাকোসাইডের ঘনত্ব বনাম সময় প্রোফাইল দেখায়।

3. আলোচনা

ডিমেনশিয়া, বিশেষ করে AD, একটি অপরিবর্তনীয় বার্ধক্য এবং দীর্ঘস্থায়ী রোগ যা একটি গর্ডিয়ান গিঁটের দিকে নিয়ে যায়। এই অপ্রতিরোধ্য রোগটি একটি বিশাল এবং ক্রমবর্ধমান আর্থিক বোঝা সহ গুরুতর অর্থনৈতিক সমস্যার দিকে পরিচালিত করে। বিশ্বব্যাপী, AD গবেষকরা তদন্ত করার জন্য অনেক প্রচেষ্টা করেছেননতুন এন্টি-এডি ওষুধকিন্তু 2012 সালে A কে লক্ষ্য করে বেশ কয়েকটি বড় ক্লিনিকাল ট্রায়ালে ব্যর্থ হয়েছিল। A কে লক্ষ্য করে সরাসরি ব্যতীত, মস্তিষ্কে ধাতব আয়ন হোমিওস্ট্যাসিস A এগ্রিগেশন এবং ডিপোজিশন সম্পর্কিত মূল কারণ হিসাবে বিবেচিত হয় যা AD গঠনের দিকে পরিচালিত করে। অতএব, ধাতব আয়নগুলি AD এর প্যাথোজেনেসিসে একটি অপরিহার্য ভূমিকা পালন করে এবং ধাতব চিলেশন হাইপোথিসিস একটি গুরুত্বপূর্ণ গবেষণা দিক হয়ে উঠেছে।

আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণা অনুযায়ী,CTE সম্ভাব্য ডিমেনশিয়া বিরোধী কার্যকলাপ প্রদর্শন করেছে. এমনকি মানুষের ক্লিনিকাল স্টাডিতেও, মাঝারি AD রোগীদের জন্য CTE ক্যাপসুল দিয়ে চিকিত্সার 1 বছর পরে, আলঝেইমার ডিজিজ অ্যাসেসমেন্ট স্কেল-কগনিটিভ সাবস্কেল (ADAS-cog) স্কোর চিকিত্সার আগের তুলনায় উল্লেখযোগ্য অবনতি দেখাবে না। CTE AD রোগীদের ADAS-cog স্কোর স্থিতিশীল রাখে, কিন্তু অন্যান্য প্রেসক্রিপশন ওষুধ তা করেনি। লাইসেন্সকৃত প্রেসক্রিপশন ওষুধের একমাত্র পছন্দAD চিকিত্সাঅ্যাসিটাইলকোলিনস্টেরেজ ইনহিবিটরস (AChEIs) যেমন ডনপেজিল এবং গ্যালানথামিন যা স্বল্পমেয়াদে AD লক্ষণগুলিকে উন্নত করে, কিন্তু চিকিত্সার 1 বছর পরে অবনতি ঘটে। ক্লিনিকাল স্টাডিজের উপর ভিত্তি করে, CTE-এর কাছে অ্যান্টি-এডি এজেন্ট বিকাশের সম্ভাব্য চিকিত্সা হওয়ার সুযোগ রয়েছে। আমাদের পূর্ববর্তী প্রতিবেদনের উপর ভিত্তি করে, ইচিনাকোসাইড (1), অ্যাকটিওসাইড (2), এবং আইসোঅ্যাকটিওসাইড (3) নিউরনগুলিকে A দ্বারা ক্ষতি থেকে রক্ষা করবে, ভিট্রোতে A অলিগোমারাইজেশন হ্রাস করবে এবং ভিভোতে A দ্বারা প্ররোচিত জ্ঞানীয় কর্মহীনতাকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রশমিত করবে। ইন ভিট্রো স্টাডি নির্দেশ করে যে 1-3 এর সক্রিয় ডোজ 5{{10}} µg/mL পর্যন্ত ছিল। যদিও পূর্ববর্তী গবেষণায় বিবেচনা করা হয়েছে যে 1 এবং 2 এর মৌখিক জৈব উপলভ্যতা খুব কম ছিল (1 এর জন্য 0.83% এবং 2 এর জন্য 0.12%)। মৌখিক ইচিনেসিয়া ট্যাবলেট গ্রহণের পরেও মানুষের সিরামে যৌগ 1 সনাক্ত করা যায়নি। বর্তমান গবেষণায় দেখা যায় যে 1-3টির অন্ত্রের কোষে ঝিল্লির ব্যাপ্তিযোগ্যতা এবং শোষণ দুর্বল ছিল এবং 1টির বেশিরভাগ গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল নালীতে বিপাকিত হবে। 10 মিলিগ্রাম/কেজি অ্যাকটিওসাইডের ডোজ সহ 15 মিনিটের ইন্ট্রাভেনাস ইনজেকশনের পরে ইঁদুরের সিরামে যৌগ 2 উপাদান ছিল প্রায় 4.5 µg/mL। যাইহোক, এই গবেষণাটি দেখায় যে CTE মৌখিক প্রশাসনের (চিত্র 3 এবং 4) পরে ইঁদুরের মস্তিষ্কের টিস্যুগুলির হিপ্পোক্যাম্পাস এবং স্ট্রিয়াটামে 1-3 সনাক্ত করা হবে। উপরন্তু, চিত্র 6 দেখায় যে ইঁদুরের সিরামে যৌগ 1 উপাদান যৌগ 1 মৌখিক প্রশাসনের (100 মিলিগ্রাম/কেজি) পরে 15 মিনিট থেকে 720 মিনিটে প্রায় 5 গুণ বৃদ্ধি পেয়েছে। আমরা বিবেচনা করেছি CTE-এর phenylethanoid glycosides রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা অতিক্রম করবে এবং CTE এবং ধাতুর মধ্যে চিলেশন অ্যাকশন হবে। চেলেশন একটি বিপরীত রাসায়নিক বিক্রিয়া। আয়রন সিরাম এবং মস্তিষ্কের একটি অপরিহার্য উপাদান [10,40]। চিত্র 5 দেখায় যে তিনটি ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের আয়রন এবং সিরামের সাথে ধাতব-চেলেটিং কার্যকলাপ থাকবে। আয়রন এবং সিরাম তিনটি ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের সর্বোচ্চ ধরে রাখার সময় এলাকা পরিবর্তন করে। ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের খুব কম জৈব উপলভ্যতার ভুল শনাক্তকরণের প্রধান কারণ হতে পারে আয়রন চিলেশন। অতএব, প্রকৃত জৈব উপলভ্যতা এবং ফার্মাকোকিনেটিক্স পুনরুদ্ধার করতে রক্তের সিরাম এবং তিনটি CTE ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের মস্তিষ্ক বিশ্লেষণে ধাতব চেলেটিং কার্যকলাপ বিবেচনা করা উচিত। উপরন্তু, ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে তিনটি ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড (1-3) রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা অতিক্রম করবে এবং শরীরের সঞ্চালনের মাধ্যমে মস্তিষ্কের টিস্যুতে পৌঁছাবে। এই অধ্যয়নটি UPLC/MS/MS ব্যবহার করে 1-3 বিশ্লেষণের জন্য সবচেয়ে দ্রুত এবং সংবেদনশীল পদ্ধতি তৈরি করেছে এবং প্রমাণ করার শক্তিশালী প্রমাণ দিয়েছে যে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড (1-3) হল CTE-এর প্রধান জৈব সক্রিয় উপাদান।

অ্যালঝাইমার রোগ প্রতিরোধের জন্য ন্যাচারাল সিস্টানচে টিউবুলোসা PHGS75% ECH 30% অ্যাক্ট 12%

4. উপকরণ এবং পদ্ধতি

4.1। উদ্ভিদ উপাদান

C. tubulosa এর ডালপালা মে 2016 সালে চীনের হ্যাংজু থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল। ডাঃ লিন এইচসি ভাউচার নমুনা (নং 20016CT) দ্বারা উদ্ভিদটিকে চিহ্নিত করা হয়েছে যেগুলি সিনফার তিয়ান-লি ফার্মাসিউটিক্যাল কোং, লিমিটেড, হ্যাংঝো, চীনে জমা করা হয়েছে।

4.2। বিচ্ছিন্নতা এবং পরিশোধন

শুকনো C. টিউবুলোসা স্টেমকে গুঁড়ো করে তারপর 75% EtOH দিয়ে পাঁচবার বের করা হয়। কম চাপে দ্রাবক বাষ্পীভবনের পরে, অপরিশোধিত নির্যাসটি 20% EtOH থেকে 100% EtOH পর্যন্ত H2O/EtOH গ্রেডিয়েন্ট দ্রাবক সিস্টেমের সাথে ম্যাক্রোপোরাস রজন AB-8 কলাম ক্রোমাটোগ্রাফির শিকার হয়েছিল। পাতলা স্তরের ক্রোমাটোগ্রাফি অনুসারে, আরও আলাদা করার জন্য চারটি ভগ্নাংশ (Fr.1~Fr.4) সংগ্রহ করা হয়েছিল। Fr. 2 একটি COSMOSIL® 5C18-AR-II কলামে (250 mm × 20 mm id, 5 µm) মোবাইল ফেজ সিস্টেম হিসাবে 18% অ্যাসিটোনিট্রিল ব্যবহার করে প্রস্তুতিমূলক উচ্চ-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (HPLC) এর শিকার হয়েছিল৷ প্রবাহের হার ছিল 15 মিলি/মিনিট। আগ্রহের তিনটি প্রধান শিখর বেছে বেছে সংগ্রহ করা হয়েছিল। লক্ষ্যযুক্ত যৌগগুলি ধারণকারী ভগ্নাংশগুলিকে আরও শুষ্কতায় ঘনীভূত করা হয়েছিল এবং যথাক্রমে 1, 2 এবং 3 উত্পাদিত হয়েছিল।

4.3। পরীক্ষামূলক বিশ্লেষণ

1H এবং 13C NMR স্পেকট্রা অভ্যন্তরীণ মান হিসাবে টেট্রামেথিসিলেন (TMS) সহ Bruker Avance DRX 500 MHz স্পেকট্রোমিটার (Billerica, MA, USA) ব্যবহার করে প্রাপ্ত হয়েছিল। প্রস্তুতিমূলক এইচপিএলসি একটি শিমাদজু এলসি-6এডি সিরিজে বিপরীত ফেজ কলাম (কসমোসিল C18-AR-II কলাম, 250 mm × 20 mm id; Nacalai Tesque, Inc., Kyoto, Japan) ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল বিশিষ্ট এইচপিএলসি ইউভি-ভিস ডিটেক্টর সহ যন্ত্রপাতি (কিয়োটো, জাপান)।

ইচিনাকোসাইড (1): সাদা পাউডার; ESI−MS m/z: 785 [M − H]−; 1H NMR (CD3OD, 500 MHz): δ 1.07 (1H, d, J=6.2 Hz, Rha-H-6), 2.79 ( 2H, t, J=5.2 Hz, H-7), 3.56 (1H, m, Ha-8), 3.79 (1H, m, H-30 ), 3.91 (1H, m, Hb-8), 4.29 (1H, d, J=7.7, Glc-H-1), 4.38 (1H, d, J {{4{ {80}}}.9 Hz, H-10 ), 5৷{100}}0 (1H, t, J=9.6 Hz, H-40 ), 5.17(1H, d, J=1.5 Hz, Rha-H-1), 6.27 (1H, d, J=15.9 Hz, H-800 ), 6.58 (1H, dd, J=8.1,2.0 Hz, H-6), 6.67 (1H, d, J=8.1 Hz, H-5), 6.70 (1H, d, J=2.0 Hz, H-2), 6.77 (1H, d, J=8.2 Hz, H-500 ), 6.94 (1H, dd, J=8.3, 2.0 Hz, H-600 ), 7.05 (1H, d, J=2.0 Hz, H-200 ), δ 7.59 (1H, d, J=15.9 Hz, H-700 ); 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz): δ 18.5 (Rha-C-6), 36.6 (C-7), 62.6 (Glc-C-6), 69.4 (C{{ 125}} ), 70.5 (C-40), 70.6 (Rha-C-5), 71.5 (Glc-C-4), 72.0 (Rha-C-3) , 72.3 (C-8), 72.4 (Rha-C-2), 73.8 (Rha-C-4), 74.7 (C-50), 75.1 (Glc-C -2), 76.1 (C-20), 77.8 (Glc-C-5), 77.9 (Glc-C-3), 81.7 (C-30) , 103.1 (Rha-C-1), 104.2 (C-10), 104.7 (Glc-C-1), 114.7 (C-200), 115.3 (C{{ 189}} ), 116.3 (C-500), 116.5 (C-2), 117.1 (C-5), 121.3 (C-6), 123.3 (C{{ 204}} ), 127.6 (C-100), 131.5 (C-1), 144.7 (C-3), 146.1 (C-4), 146.9 (C{{) 219}} ), 148.2 (C-700), 149.8 (C-300), 168.5 (C-900 ) (চিত্র S3–S5)।

অ্যাকটিওসাইড (2): সাদা পাউডার; ESI−MS m/z: 623 [M − H]−; 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz): δ 0.94 (3H, d, J =5.9 Hz, H-6000 ), 2.68 (2H, m, H-7), 4.33 (1H, d, J=7.8 Hz, H-100 ), 4.70 (1H, t , জে=9৷{160}} Hz, H-400 ), 5৷{209}}1 (1H, s, H{{ 31}} ), 6.18 (1H, d, J=15.9 Hz, H-80 ), 6.48 (1H, dd, J=7.9, 1.4 Hz, H{{ 45}}), 6.62 (1H, d, J=7.1 Hz, H-5), 6.73 (1H, d, J=2.0 Hz, H{{57} }), 6.75 (1H, d, J=7.9 Hz, H-50 ), 6.97 (1H, d, J=8.1 Hz, H-60 ) , 7.01 (1H, s, H-20 ), 7.44 (1H, d, J=15.8 Hz, H-70); 13C NMR: (DMSO-d6, 125 MHz): δ 18.2 (C-6000 ), 35.1 (C-7), 60.8 (C-600 ), 68.8 (C{{95} } ), 69.2 (C-400), 70.3 (C-3000), 70.3 (C-8), 70.4 (C-2000), 70.6 (C{{110} } , 71.7 (C-500 ), 74.5 (C-200 ), 79.2 (C-300 ), 101.3 (C-1000 ), 102.3 (C{{125} } , 113.6 (C-80), 114.7 (C-20), 115.5 (C-5), 115.8 (C-50), 116.3 (C{{140} }), 119.6 (C-6), 121.5 (C-60), 125.6 (C-10), 129.2 (C-1), 143.6 (C{{155} }), 145.0 (C-3), 145.0 (C-30), 145.6 (C-70 ), 148.5 (C-40 ), 165.7 (C{{170} } ) (চিত্র S6–S8)। Isoacteoside (3): সাদা পাউডার; ESI−MS m/z: 623 [M − H]−; 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz): δ 1.07 (3H, d, J=6.1 Hz, H-6000 ), 2.65 (2H, m, H-7), 4.35 (1H, d, J=10.0 Hz, H-100 ), 5.10 (1H, s, H-1000 ), 6.27 (1H, d, J=15 .9 Hz, H-80 ), 6.45 (1H, dd, J=8.0, 1.8 Hz, H-6), 6.58 (1H, d, J=8 .8 Hz, H-5), 6.73 (1H, d, J=1.6 Hz, H-2), 6.74 (1H, d, J=8.1 Hz, H-50 ), 6.94 (1H, d, J=8.2 Hz, H-60 ), 7.04 (1H, s, H-20 ), 7.46 ( 1H, d, J=15.8 Hz, H-70 ); 13C NMR (DMSO-d6, 125 MHz): δ 17.9 (C-6000 ), 35.2 (C-7), 63.5 (C-600 ), 68.2 (C-5000 , 70.4 (C-400), 70.6 (C-3000), 71.7 (C-8), 72.1 (C-2000), 73.7 (C-4000 ), 74.1 (C-500 ), 74.5 (C-200 ), 80.9 (C-300 ), 100.7 (C-1000 ), 102.7 (C-100 ), 113.9 (C-20), 114.9 (C-80), 115.5 (C-5), 115.8 (C-50 ), 116.3 (C-2 ), 119.6 (C-6), 121.5 (C-60), 125.5 (C-10), 129.2 (C-1), 143.5 (C-4 ), 145.0 (C-3), 145.3 (C-30 ), 145.6 (C-70 ), 148.5 (C-40 ), 165.6 (C-90 ) (চিত্র S9–S11)।

4.4। C. Tubulosa Aqueous Extract (CTE) এর প্রস্তুতি

সি. টিউবুলোসা পাউডারের স্টেমটি 1.5 ঘন্টার জন্য জল দিয়ে রিফ্লাক্স করে দুবার বের করা হয়েছিল এবং নির্যাস দ্রবণটি ফিল্টার করা হয়েছিল। ফিল্টার করা জলীয় নির্যাস (CTE) ব্যবহারের আগে 4 ◦C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়েছিল।

4.5। পশু মডেল এবং পরীক্ষামূলক সময়সূচী

এই গবেষণায় ব্যবহৃত AD-এর মতো ইঁদুরের মডেল এবং পরীক্ষামূলক সময়সূচী আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায় নির্ধারিত ছিল [19]। সেরিব্রাল ভেন্ট্রিকেলে কমপক্ষে দুই সপ্তাহ বা তার বেশি সময় ধরে A 1-42 (300 pmol/day) ঢোকানোর পর, AD-এর মতো ইঁদুরগুলিকে পরের দিন মৌখিক প্রশাসন দ্বারা CTE (200 mg/mL) দেওয়া হয়েছিল। প্রশাসনের 14 দিন পর, মস্তিষ্কের টিস্যু সংগ্রহের জন্য ইঁদুর বলি দেওয়া হয়েছিল। অত্যধিক পরীক্ষামূলক ত্রুটি এড়াতে, চারটি পৃথক ইঁদুরের নমুনা একটি নমুনায় একত্রিত করা হয়েছিল। প্রতিটি গ্রুপের জন্য তিনটি নমুনা ছিল।

4.6। রাসায়নিক এবং বিকারক

Methanol (HPLC গ্রেড) Merck (Darmstadt, Germany) থেকে কেনা হয়েছিল। ফরমিক অ্যাসিড (বিশ্লেষণের জন্য 98%, ACS) প্যানরিয়াক (বার্সেলোনা, স্পেন) থেকে কেনা হয়েছিল। অ্যাসিটোনিট্রিল (এইচপিএলসি গ্রেড) জেটি বেকার (ফিলিপসবার্গ, এনজে, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) থেকে কেনা হয়েছিল। বিশুদ্ধ জল ELGA সিস্টেম ব্যবহার করে প্রস্তুত করা হয়েছিল (Woodridge, UK)। হেস্পেরিডিন ক্রোমাডেক্স থেকে কেনা হয়েছিল এবং ইউপিএলসি বিশ্লেষণের জন্য অভ্যন্তরীণ মান (আইএস) হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।

4.7। UPLC/MS/MS যন্ত্রপাতি

ওয়াটার অ্যাক্যুইটি TQD আল্ট্রা-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (UPLC)/MS/MS সিস্টেম (Milford, MA, USA) UPLC/MS/MS বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। ক্রোমাটোগ্রাফিক পরীক্ষাগুলি একটি অ্যাকুইটি UPLC BEH C18 কলামে (2.1 × 100 মিমি, 1.7 µm, জল) 0.4 মিলি/মিনিট প্রবাহ হারে গ্রেডিয়েন্ট ইলুশনের অধীনে পরিচালিত হয়েছিল৷ মোবাইল ফেজটি ফর্মিক অ্যাসিড-জল (1: 1000, v/v) (A) এবং ফর্মিক অ্যাসিড-অ্যাসিটোনিট্রিল (1: 1000, v/v) (B) দিয়ে গঠিত। সময় প্রোগ্রামটি নিম্নরূপ ছিল: 0-5 মিনিট, A–B (92:8, v/v) A–B (62:38, v/v) এ পরিবর্তিত হয়েছে; 5–7 মিনিট, AB (62:38, v/v); 7-7.1 মিনিট, AB (62:38, v/v) A–B (92:8, v/v) এ পরিবর্তিত হয়েছে; 7.1–9 মিনিট, (92: 8, v/v)। নেতিবাচক ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন (ESI) আয়ন উত্স সহ UPLC/MS/MS সিস্টেমে ইনজেকশনের পরিমাণ ছিল 5 μL। 1-3-এর জন্য মোট আয়ন ক্রোমাটোগ্রাম (TIC) একাধিক-প্রতিক্রিয়া পর্যবেক্ষণ (MRM) মোড ব্যবহার করে করা হয়েছিল। ভর পরামিতিগুলি পরিষ্কার, উচ্চ-তীব্রতার সংকেত পেতে অপ্টিমাইজ করা হয়েছিল। পরামিতিগুলির সর্বোত্তম পছন্দ 3000 V কৈশিক ভোল্টেজ, 20 V শঙ্কু ভোল্টেজ, 125 ◦C উত্স তাপমাত্রা, 400 ◦C দ্রবীভূতকরণ তাপমাত্রা, 50 L/h শঙ্কু গ্যাস প্রবাহ, 900 L/h দ্রবীভূতকরণ গ্যাস প্রবাহ, এবং 38 সায়ন ইভিকোল শক্তি. MassLynx 4.1 (Milford, MA, USA) সফ্টওয়্যার দ্বারা ডেটা প্রক্রিয়া করা হয়েছিল৷

4.8। নমুনা প্রস্তুতি

ইঁদুরের মস্তিষ্কের টিস্যু একজাতকরণের জন্য 50% মিথানল ব্যবহার করেছে (5 মিলি মিথানলের জন্য 1 গ্রাম টিস্যু)। হোমোজেনেটকে 10 মিনিটের জন্য 4 ◦C তে 10,000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। 10 µL IS (100 µg/mL) সহ সুপারনাট্যান্ট (50 µL) 1 mL এ বিশুদ্ধ পানি যোগ করেছে। মিশ্রণটি সাবধানে ওয়েসিস এইচএলবি (হাইড্রোফিলিক-লিপোফিলিক ব্যালেন্সড) কার্টিজ (ওয়াটারস, মিলফোর্ড, এমএ, ইউএসএ) এর উপর লোড করা হয়েছিল, যা ইতিমধ্যে 1 মিলি মিথানল দিয়ে নির্গত করা হয়েছিল এবং তারপর ভ্যাকুয়াম অবস্থায় 1 মিলি জল দিয়ে ভারসাম্য করা হয়েছিল। কার্টিজ ধোয়ার জন্য 1 mL 10% মিথানল ব্যবহার করার পরে, বিশ্লেষণকৃত নমুনা পাওয়ার জন্য 1 mL মিথানল ব্যবহার করা হয়েছিল যা 1% অ্যাসকরবিক অ্যাসিড দ্রবণের 10 μL সহ অন্য 1.5 mL Eppendorf টিউবে স্থানান্তরিত হয়েছিল এবং বাষ্পীভবনের মাধ্যমে শুকানো হয়েছিল। অবশেষে, বিশ্লেষণ করা নমুনা থেকে অবশিষ্টাংশ বিশ্লেষণের জন্য 50% মিথানলের 200 μL এ দ্রবীভূত করা হয়েছিল।

4.9। ক্রমাঙ্কন স্ট্যান্ডার্ড কার্ভের প্রস্তুতি

1-3 যৌগগুলি ক্রমাঙ্কন মান প্রস্তুত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল যথাক্রমে মস্তিষ্কের টিস্যু হোমোজেনেট এবং হেস্পেরিডিনে অভ্যন্তরীণ মান হিসাবে যুক্ত করা হয়েছিল চূড়ান্ত ক্রমাঙ্কন মান ঘনত্ব প্রাপ্ত করার জন্য যা ছিল 10, 5.0, 1{{7 }}৷{9}}, 50.0, এবং 100.0 ng/mL৷

4.10। বৈধতা

ক্যালিব্রেশন স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা 1{3}}, 50, 10 রেঞ্জে 1-3 এর পাঁচটি ভিন্ন ঘনত্ব ব্যবহার করে রৈখিকতা পরীক্ষা ব্যবহার করে প্রাপ্ত করা হয়েছিল৷{9}} , 50। সনাক্তকরণের নিম্ন সীমা (LLOQ), একটি পরীক্ষার নমুনার ঘনত্বের ± 20% হিসাবে সংজ্ঞায়িত, গোলমালের পরিবর্তে একটি সংকেত শিখর তৈরি করে। বিশ্লেষণ পদ্ধতির বিশ্বাসযোগ্যতা এবং নির্ভুলতা 1-3 এর 10 ng/mL এ পুনরুদ্ধার পরীক্ষা ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল।

4.11। মেটাল চেলেটিং অ্যাকটিভিটি অ্যাস

UPLC তামা, ক্যালসিয়াম, ম্যাগনেসিয়াম, দস্তা, আয়রন, বা ইঁদুরের সিরামের একটি ধাতব দ্রবণের 10 μg/mL ধারণকারী CTE ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডস 1-3 এর 50 µg/mL দ্রবণ ব্যবহার করে ধাতব চেলেটিং প্রভাব বিশ্লেষণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। প্রতিটি ধাতব দ্রবণ বা সিরাম সহ প্রতিটি যৌগ ইউপিএলসি দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ধাতব চেলেটিং প্রভাব তরল ক্রোমাটোগ্রাফিতে 1-3 ধরে ধরে রাখার সময় পরিবর্তন করবে। ধাতু চেলেটিং প্রভাবের শতাংশ নীচের হিসাবে গণনা করা হয়েছিল এবং ডেটার গড় ± SD (n=3) উপস্থাপন করা হয়েছিল।

5। উপসংহার

এই সমীক্ষায় প্রমাণিত হয়েছে যে 1-3 হল AD-বিরোধী কার্যকলাপের জন্য CTE-এর সক্রিয় উপাদান। AD এর চিকিত্সার জন্য একটি নতুন প্রজন্মের ওষুধ ডিজাইন করার জন্য আয়রন চিলেশন নতুন ধারণা হয়ে উঠেছে।CTE হল একটি সম্ভাব্য বোটানিক্যাল এন্টি-এডি চাইনিজ ওষুধআয়রন চিলেশন-প্ররোচিত একটি সমষ্টি এবং জমাকে লক্ষ্য করে। উপরন্তু, আমরা আরও প্রমাণ করেছি যে 1-3 রক্তের মাধ্যমে মস্তিষ্কে পৌঁছাবে - রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা (BBB)। সক্রিয় উপাদান এবং CTE এর অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়া নিশ্চিতকরণ ভবিষ্যতে মান নিয়ন্ত্রণ এবং পণ্য অধ্যয়নের জৈব উপলভ্যতাকে ব্যাপকভাবে সাহায্য করবে। একই সময়ে, উপস্থাপিত উন্নত এবং দক্ষ বিশ্লেষণ পদ্ধতি রাসায়নিক আঙ্গুলের ছাপ এবং ফার্মাকোকিনেটিক গবেষণার জন্য উদ্ভিদ, খাদ্য, রক্ত ​​এবং মস্তিষ্কের টিস্যুতে 1-3 নির্ধারণ করতে কার্যকর হবে।

অ্যালজাইমার রোগের চিকিৎসার জন্য ন্যাচারাল সিস্টানচে টিউবুলোসা PHGS75% ECH 30% ACT 12%