ইমিউন-স্টিমুলেটিং অ্যান্টিবডি কনজুগেটস এলিসিট রোবাস্ট মাইলয়েড অ্যাক্টিভেশন এবং টেকসই অ্যান্টি-টিউমার ইমিউনিটি (পর্ব 2)

আরও তথ্য জানতে plz যোগাযোগ করুনdavid.wan@wecistanche.com

আলোচনা:

এখানে উপস্থাপিত ফলাফলগুলি টিউমার ইমিউনোথেরাপির জন্য একটি অভিনব প্রযুক্তি হিসাবে ISAC-কে সমর্থন করে এমন বাধ্যতামূলক প্রমাণ সরবরাহ করে। আইএসএসি-এর ইন ভিট্রো মডেলিং এফসি আর এবং টিএলআর-নির্ভর পদ্ধতিতে প্রাথমিক মানব মাইলয়েড এপিসি সক্রিয় করার এবং মুরিন ওভিএ মডেল সিস্টেম ব্যবহার করে অ্যান্টিজেন ক্রস-প্রেজেন্টেশন উন্নত করার ক্ষমতা প্রদর্শন করেছে। কস্টিমুলেটরি অণু CD40-এর আপ-রেগুলেশনের মাধ্যমে সক্রিয়করণ শুধুমাত্র ভিট্রোতেই পরিলক্ষিত হয়নি বরং জেনোগ্রাফ্ট এবং সিনজেনিক টিউমার উভয় মডেলেই টিউমার-রেসিডিং মাইলয়েড এপিসি-তেও দেখা গেছে। একটি ISAC আকারে টিউমার-লক্ষ্যযুক্ত মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি ইমিউনোস্টিমুলেটরি ফলাফল এবং সামগ্রিক কার্যকারিতা পরিবর্তন করে যা সাধারণত TLR অ্যাগোনিস্টদের সাথে প্রত্যাশিত হয়। T785 এর সাথে T785-ISAC-এর সিস্টেমিক ডেলিভারির সাথে ট্রাস্টুজুমাবের স্থানীয় ডেলিভারির তুলনা দেখায় যে শুধুমাত্র ISAC টিউমারের বোঝা কমাতে সফল হয়েছে। মিশ্রণের স্থানীয় ডেলিভারি HCC1954 টিউমার জেনোগ্রাফ্ট মডেলে কোনও সুবিধা দেয়নি, একা ট্রাস্টুজুমাবের সাথে তুলনীয় প্রভাব। এই অনুসন্ধানটি সমর্থন করে যে শুধুমাত্র স্থানীয় প্রসব নয়, একই সাথে অ্যান্টিবডি এবং টিএলআর অ্যাগোনিস্টের ডেলিভারিও ISAC-এর সাথে পর্যবেক্ষণ করা থেরাপিউটিক কার্যকারিতার জন্য অপরিহার্য। HCC1954 টিউমার জেনোগ্রাফ্ট মডেলে উত্পন্ন মেকানিস্টিক ডেটা Fc R এনগেজমেন্ট এবং TLR এনগেজমেন্টের জন্য ভিভোর প্রয়োজনীয়তা প্রদর্শন করেছে, কারণ TLRnull-ISAC এবং Fc- নিষ্ক্রিয় ISAC উভয়ই টিউমার বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রণ করতে ব্যর্থ হয়েছে। তদ্ব্যতীত, ISAC-এর পদ্ধতিগত প্রশাসনের ফলে ইঁদুরের HER2 প্লাস সিনজেনিক টিউমার মডেল এবং মানব HER2 প্লাস স্তন ক্যান্সার জেনোগ্রাফ্টে টেকসই অ্যান্টি-টিউমার কার্যকারিতা পাওয়া যায় যেগুলি অসংলগ্ন অ্যান্টিবডির সাথে চিকিত্সার জন্য প্রতিরোধী ছিল। ভিভো স্টাডিতে প্রিক্লিনিকালের জন্য HER2 কে টার্গেট অ্যান্টিজেন হিসাবে নির্বাচিত করা হয়েছিল কারণ স্থানীয়ভাবে উন্নত বা মেটাস্ট্যাটিক স্তন ক্যান্সারে আক্রান্ত রোগীদের জন্য নিওঅ্যাডজুভেন্ট, অ্যাডজুভেন্ট এবং প্রথম-লাইন থেরাপিতে HER2-লক্ষ্যযুক্ত অ্যান্টিবডিগুলির প্রাধান্য রয়েছে যা প্রতিরোধ ক্ষমতাকে উদ্দীপিত করার জন্য ডিজাইন করা হয়নি সিস্টেম এবং অনুমোদিত টি সেল চেকপয়েন্ট ইনহিবিটর ব্লকিং অ্যান্টিবডি এই রোগীদের মধ্যে ন্যূনতম কার্যকর হয়েছে। এই রোগীরা আইএসএসিগুলি থেকে উপকৃত হতে পারে যা পিতামাতার অ্যান্টিবডিগুলির কার্যকারিতা বজায় রাখে এবং উল্লেখযোগ্য ইমিউনোস্টিমুলেটরি সম্ভাবনা যুক্ত করে। যেকোন ইমিউনোথেরাপিউটিকের মতো, ড্রাগ-বিরোধী অ্যান্টিবডি তৈরি বা বাড়িয়ে দেওয়ার সম্ভাবনা বিদ্যমান এবং ISAC-এর ক্ষেত্রে, শেষ পর্যন্ত পিতামাতার অ্যান্টিবডির ইমিউনোজেনিসিটির উপর নির্ভর করতে পারে। এই মূল্যায়নগুলি সর্বোত্তমভাবে চিকিত্সাগতভাবে করা হয় এবং ট্রাস্টুজুমাব আদর্শভাবে তদন্তের জন্য উপযুক্ত হতে পারে কারণ রোগীদের মধ্যে Herceptin™-এর রিপোর্ট করা ইমিউনোজেনিসিটির হার 1 শতাংশের কম। ভিভো ডেটাতে অ্যান্টিবডি এবং সহায়কের একযোগে ডেলিভারির প্রয়োজনীয়তা প্রদর্শন করে একই সাথে Fc R এবং TLR সিগন্যালিংয়ের মাধ্যমে ISAC ক্রিয়াকলাপ পরিচালনাকারী অন্তঃকোষীয় সংকেতগুলির বিশদ বিবরণ দিয়ে আরও সমর্থিত হয়। যদিও অতিরিক্ত অধ্যয়নগুলি অন্তঃকোষীয় ISAC সিগন্যালিং গতিবিদ্যাকে আরও ব্যাখ্যা করতে পারে, এখানে বর্ণিত অধ্যয়নগুলি একটি টিএলআর অ্যাগোনিস্টকে একটি অ্যান্টিবডিতে সংযুক্ত করার সম্ভাব্য সংকেত সুবিধাগুলিকে হাইলাইট করে, যেমনটি সাধারণত দেখা যায় যখন অ্যান্টিবডিগুলি প্রতিরক্ষামূলক অনাক্রম্যতার সময় প্যাথোজেনের সাথে জড়িত। মানব PBMCs আরো নিযুক্ত করা হয়েছিলমিশ্রণ এবং ISAC এর কার্যকলাপ বুঝতে এবং পার্থক্য. ফলাফলগুলি পৃথক উপাদানগুলির মিশ্রণের দ্বারা প্রকাশিত ISAC উদ্দীপনার পরে একটি পরিবর্ধিত স্বাক্ষর প্রকাশ করে, যা অ্যান্টিবডি এবং TLR অ্যাগোনিস্টের রাসায়নিক সংমিশ্রণের মাধ্যমে কার্যকলাপের বৃদ্ধির সম্ভাবনাকে আরও সমর্থন করে। যদিও TLR7 এবং TLR8- ISAC-এর নির্দিষ্ট ক্ষমতা HEK293 রিপোর্টার সেল ব্যবহার করে পরিমাপ করা যায় না, প্রদর্শনIRF-7-এর ISAC-প্ররোচিত ফসফোরিলেশন সক্রিয় TLR7/8 অ্যাগোনিজমের পরামর্শ দেয়, কারণ IRF-7 TLR7 এবং TLR8 MyD88-চালিত সিগন্যালিং 30 এর নিচের দিকে বলে পরিচিত৷ ডেটা নির্দেশ করে যে ISAC শুধুমাত্র TLR এবং Fc R পাথওয়ের সাথে যুক্ত ক্যানোনিকাল পাথওয়ের বর্ধিত সংকেত প্রকাশ করে না বরং কোষে প্রোটিন অনুবাদের একটি মূল নিয়ন্ত্রক রাইবোসোমাল প্রোটিন S6-এর মতো ডাউনস্ট্রিম সিগন্যালিং প্রোটিনের ফসফোরিলেশন ট্রিগার করার জন্য প্রয়োজনীয় পেয়ারওয়াইজ অ্যাক্টিভেশন থ্রেশহোল্ডকেও হ্রাস করে। উচ্চ DREMI স্কোর, বিশেষ করে পরিমাপমনোসাইটের পাশাপাশি ডিসি-তে, আইএসএসি-এর সাথে উদ্দীপনা দ্বারা প্ররোচিত শক্তিশালী শর্তাধীন নির্ভরতাকে সমর্থন করে যা মিশ্রণের সাথে দেখা যায় না। এই ঘটনা হতে পারেপ্রাচুর্য, স্থানীয়করণ, এবং/অথবা এন্ডোসোমের মধ্যে রিসেপ্টর নিয়োগের অন্তঃকোষীয় পরিবর্তনের দ্বারা সুবিধাজনক, তবে একটি সঠিক প্রক্রিয়া নিশ্চিত করার জন্য আরও তদন্তের প্রয়োজন। গুরুত্বপূর্ণভাবে, DREMI বিশ্লেষণ ISAC উদ্দীপনার ফলে পরিচিত সিগন্যালিং অংশীদারদের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ সম্পর্ক চিহ্নিত করেছে। তার পরিচিত বাধা দ্বারাক্যানোনিকাল NF-κB সিগন্যালিং 49-এ ভূমিকা, আমরা কম নির্ভরতা লক্ষ্য করেছি (যেমন DREMI স্কোর)পিআইআরএফ7 এবং কাপ্পা বি (আইκবি) এর ইনহিবিটর এর মধ্যে যখন মাইলয়েড কোষগুলি আইএসএসি দিয়ে উদ্দীপিত হয়েছিল। সমষ্টিগতভাবে, এই ফলাফলগুলি টিএলআর এবং এফসি আর-সম্পর্কিত সিগন্যালিং পাথওয়ের মধ্যে সমন্বয় ছাড়াও আইএসএসি উদ্দীপনার নিচের দিকে প্রাসঙ্গিক সিগন্যাল ট্রান্সডাকশন পাথওয়ে অণুর মাধ্যমে একটি পরিবর্ধিত এবং টেকসই অন্তঃকোষীয় প্রতিক্রিয়া সমর্থন করে।

Cistanche সম্পর্কে আরও জানতে এখানে ক্লিক করুন

আমাদের ফলাফলগুলি প্রকাশ করেছে যে কার্যকরী এফসি-এফসি আর মিথস্ক্রিয়াগুলি মাইলয়েড এপিসিগুলির আইএসএসি-মধ্যস্থতা সক্রিয়করণের জন্য অপরিহার্য। নেটিভ IgG1 Fc, যা স্বাভাবিকভাবে বিদ্যমান IgG আইসোটাইপগুলির সক্রিয় Fc Rs-এর জন্য সর্বোচ্চ সখ্যতা রয়েছে, সক্রিয় Fc Rs-এর জন্য নিম্ন সখ্যতা সহ অন্যান্য IgG আইসোটাইপগুলির থেকে উচ্চতর ছিল৷ ফুকোসিলেশন বর্ধিত শক্তির মাধ্যমে Fc-Fc R মিথস্ক্রিয়াকে আরও বর্ধিত করা যখন গ্লাইকোসিলেশনের মাধ্যমে Fc-Fc R মিথস্ক্রিয়া হ্রাস পাওয়ার ক্ষমতা হ্রাস করে। প্রত্যাশিত হিসাবে, ISAC-এর জন্য সর্বাধিক উদ্দীপনা প্রকাশের জন্য পরবর্তী TLR অ্যাগোনিজম ছাড়াও Fc R ব্যস্ততার নিচের দিকে Syk সংকেত দেওয়া প্রয়োজন ছিল। এই ফলাফলগুলি প্লেট-বাউন্ড IgG এবং TLR অ্যাগোনিস্ট PAM3CSK 50-এর সাথে সহ-উদ্দীপনার পরে মাইলয়েড উদ্দীপনার একটি নাটকীয় বর্ধিতকরণ প্রদর্শনের দ্বারা সমর্থিত। তারা আরও বিস্তৃত Fc ক্রসলিংকিং, লক্ষ্য কোষের পৃষ্ঠে বা ইন ভিট্রো প্লেট সেটিং এর মধ্যে পরামর্শ দেয়। , ঘটতে পারে, অথবা উপাদানের মিশ্রণের বিপরীতে ISAC উদ্দীপনা অনুসরণ করে ডিফারেনশিয়াল সিগন্যালিং নেটওয়ার্ক নিযুক্ত থাকে। ভিভোতে আইএসএসি প্ল্যাটফর্মের অনুবাদটি প্রথমে ইঁদুরের মানব HER2 প্লাস টিউমার সেল লাইনগুলির সাথে মূল্যায়ন করা হয়েছিল যেগুলি সম্পূর্ণরূপে কার্যকরী B, T, এবং NK কোষগুলির অভাব রয়েছে৷ লক্ষণীয়ভাবে, HER2 এক্সপ্রেশনের বিভিন্ন মাত্রা সহ একাধিক টিউমার জুড়ে ট্রাস্টুজুমাব আইএসএসি উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি কার্যকর ছিল। তদ্ব্যতীত, ডেটা আইএসএসি-এর অ্যান্টি-টিউমার প্রভাবগুলির জন্য টিউমার-টার্গেটিং-এর উপর নির্ভরতা প্রদর্শন করেছে, কারণ আইসোটাইপ-আইএসএসি টিউমার রিগ্রেশন এবং ক্লিয়ারেন্স প্ররোচিত করতে অক্ষম ছিল। যদিও ইন ভিট্রো মডেলিং ISAC ক্ষমতা সক্ষম করার জন্য TLR এবং Fc R কার্যকলাপের প্রয়োজনীয়তা প্রদর্শন করেছে, এই ধরনের মডেলগুলি ISAC অ্যান্টিজেন-টার্গেটিং এর উপর নির্ভরতা পরিমাপ করতে সফল হয়নি। টার্গেটেড এবং আইসোটাইপ টি785-আইএসএসি-এর মধ্যে কোনো পার্থক্য পরিমাপ করা হয়নি প্লেট-ভিত্তিক অ্যাসেসে সুস্থ মানব মেলয়েড এপিসি সহ-সংস্কৃতিটিউমার কোষ সহ (ডেটা দেখানো হয়নি)।ভিট্রোতে পরিমাপ করা লক্ষ্য-নির্ভরতার অভাব একাধিক কারণের জন্য দায়ী করা যেতে পারে: মাইলয়েড এপিসিগুলি ভিট্রো সংস্কৃতিতে অনুসরণ করে কোষের পৃষ্ঠে Fc Rs কে আপগ্রেগুলেট করতে দেখা যায়, যা দ্রবণীয় IgG-এর Fc R-এর সাথে আবদ্ধ হওয়ার ক্ষমতা বাড়াতে পারে, যার ফলে আইসোটাইপ ISAC থেকে পরিবর্ধিত সংকেত।উপরন্তু, সংস্কৃতিবানসিস্টেমে ভিভোতে উপস্থিত অন্তঃসত্ত্বা IgG এবং অতিরিক্ত সিরাম ফ্যাক্টর নেই যা ভিভোতে Fc R-এর জন্য প্রতিদ্বন্দ্বিতা করতে পারে এবং একটি আইসোটাইপ ISAC এর সাথে দেখা প্রভাবগুলিকে স্যাঁতসেঁতে করতে পারে।তা সত্ত্বেও, ইন ভিভো মডেলগুলি টিউমার-বিরোধী কার্যকারিতার জন্য টিউমার-টার্গেটিং এর উপর ISAC-এর নির্ভরতা প্রদর্শন করেছে।আইসোটাইপ আইএসএসিগুলি কার্যকারিতা অধ্যয়নে টিউমার বৃদ্ধিতে সামান্য প্রভাব দেখায়নি, তবে তারা টিউমারের জেনেটিক স্তরের উপর কোনও প্রভাব ফেলতে পারে না, যেমন জেনোগ্রাফ্ট এবং সিঞ্জেনিক টিউমার মডেলগুলিতে দেখানো হয়েছে।ভিভোতে লক্ষ্য-নির্ভর কার্যকারিতা প্রদর্শনের পাশাপাশি, টি785-আইএসএসি প্রাণীদের দ্বারা সহ্য করা হয়েছিল এবং ন্যূনতম ওজন হ্রাসকে প্ররোচিত করেছিল, যা লক্ষ্যবহির্ভূত প্রভাব এবং মাউসে প্রতিকূল ঘটনাগুলির সামান্য চিহ্ন প্রদর্শন করে।এই তথ্যগুলি টিউমারে ভ্রমণ করার এবং একটি স্থানীয় প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি অ্যান্টি-টিউমার প্রতিক্রিয়া প্ররোচিত করার জন্য পদ্ধতিগতভাবে বিতরণ করা টিউমার-টার্গেটিং ISAC-এর ক্ষমতাকে আরও সমর্থন করে।

মাইলয়েড কোষ-মধ্যস্থ প্রভাবক ফাংশনগুলির গুরুত্ব কোষ-ক্ষয়কারী গবেষণায় প্রদর্শিত হয়েছিল, যেখানে ফ্যাগোসাইটের ক্লোড্রোনেট হ্রাস টিউমার ক্লিয়ারেন্স প্ররোচিত করার জন্য ISAC-এর ক্ষমতাকে হ্রাস করে।মজার বিষয় হল, যদিও টিউমারগুলি প্রাথমিকভাবে Gr1 পজিটিভ কোষগুলির হ্রাসের পরে ফিরে যায়, টিউমারগুলি পরবর্তীকালে বৃদ্ধি পায়।এই ঘটনাটি মোনোসাইটের মতো ফ্যাগোসাইট পূর্বসূরগুলির হ্রাসের ফলে ঘটতে পারে, যা পরবর্তীতে কার্যকরী এবং পরিপক্ক ফ্যাগোসাইটিক কোষ 51-এ আলাদা হতে পারে।আরও আণবিক এবং সেলুলার অন্তর্দৃষ্টি এমআরএনএ স্তরের পরিমাণ নির্ধারণ এবং আইএসএসি চিকিত্সার পরে পরিবর্তনগুলি প্রাপ্ত হয়েছিল।এই তথ্যগুলি ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি এবং সেইসাথে প্রোটিন পরিমাপ দ্বারা আরও নিশ্চিত করা হয়েছিল, যা টিউমারে মাইলয়েড কোষগুলির অনুপ্রবেশ নির্দেশ করে।একটি প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন TNF এবং myeloid chemoattractants CCL2 (MCP-1) এবং CCL4 (Mip1b) উৎপাদনের সাথে।

চিত্র 2: আইএসএসিএস মাইলয়েড এপিসি-তে স্বতন্ত্র সিগন্যালিং প্যাটার্ন বের করে। (বিজ্ঞাপন) নতুনভাবে বিচ্ছিন্ন মানব পিবিএমসিকে 1 μM রিটুক্সিমাব-আইএসএসি বা মিশ্রণের সমতুল্য সমতুল্য CD20 প্লাস টলেডো টিউমার কোষের উপস্থিতিতে উদ্দীপিত করা হয়েছিল: 15 মিনিটের জন্য অনুপাত। (a) সিগন্যালিং ওভার আইএসএসি-এর মাঝারি আর্কসিন অনুপাত বিভিন্ন ফসফোপ্রোটিনের জন্য মিশ্রণ উদ্দীপনা অনুসরণ করে পরিমাপ করা হয়েছিল যেমন একটি তাপ মানচিত্র দ্বারা চিত্রিত হয়েছে, হলুদ সংকেত বৃদ্ধির সূচক এবং হ্রাস সংকেতের নীল নির্দেশক। (খ) মনোসাইট এবং সিডিসিতে pIRF7 এবং pRPS6 এর জন্য প্রতিনিধি প্রবাহ সাইটোমেট্রি প্লট। (c) উদ্দীপিত নিয়ন্ত্রণের উপর আর্কসিন অনুপাত হিসাবে প্ররোচিত সিগন্যালিং এর ভাঁজ পরিবর্তন গণনা করা হয়েছিল। IRF7 এবং ERK1/2 ফসফোরিলেশন ISAC বা মিশ্রণ উদ্দীপনা অনুসরণ করে মনোসাইট এবং সিডিসিতে পরিমাপ করা হয়েছিল। ডেটা ছয় দাতাদের (গড় এবং SEM) সাথে একটি পরীক্ষা থেকে নেওয়া; *পি<0.05,><0.01,><0.001,><0.0001. (d)="" representative="" drevi="" plots="" following="" dremi="" analysis="" with="" the="" area="" under="" the="" curve="" (auc)="" and="" inflection="" point="" (ip)="" denoted.="" drevi="" plots="" were="" visually="" inspected="" for="" curve="" fit="" and="" signal-to-noise,="" and="" inflection="" points="" were="" calculated="" for="" those="" with="" proper="" sigmoidal="" curve="" fits="" (n/a="" indicates="" no="" curve="">

CCL2 এবং CCL4, CCR2 এবং CCR5 এর রিসেপ্টরগুলি যথাক্রমে মনোসাইট এবং ম্যাক্রোফেজে প্রকাশ করা হয়, পরামর্শ দেয় যে এই কোষের ধরনগুলি ISAC-চিকিত্সা করা টিউমারগুলিতে নিয়োগ করা যেতে পারে।তদ্ব্যতীত, Cxcl9 এবং Cxcl11 mRNA, যা T কোষ-নির্দিষ্ট কেমোকাইনগুলিকে এনকোড করে এবং TME-তে DC দ্বারা প্রকাশ করা হয়, এছাড়াও ট্রাস্টুজুমাব আইএসএসি চিকিত্সা (পরিপূরক চিত্র 23) 52,53 দ্বারা উন্নীত করা হয়েছিল।অ্যাগোনিস্ট CL264 ব্যবহার করে বর্ধিত শক্তি সহ একটি ট্রাস্টুজুমাব ISAC, কম HER2 প্রকাশ করে টিউমার মডেলগুলিতে বর্ধিত কার্যকারিতা প্রদর্শন করেছে।এটি গুরুত্বপূর্ণ যে রোগীদের টিউমার কম HER2 প্রকাশ করে তাদের সীমিত চিকিত্সার বিকল্প রয়েছে এবং তারা ট্রাস্টুজুমাব বা অন্যান্য ট্রাস্টুজুমাব-যুক্ত থেরাপির জন্য যোগ্য নয়।প্রায় 5-10 শতাংশের ক্ষণস্থায়ী ওজন হ্রাস এবং TNF এর সিস্টেমিক নিঃসরণ বৃদ্ধি লক্ষ্য করা এবং আইসোটাইপ CL264-ISACs উভয়ের সাথে চিকিত্সা করা প্রাণীদের মধ্যে পরিলক্ষিত হয়েছে, যা শক্তিশালী অ্যান্টি-এর পাশাপাশি সম্ভাব্য অফ-টার্গেট প্রভাবের ইঙ্গিত দেয়। টিউমার কার্যকলাপ পরিলক্ষিত.জেনোগ্রাফ্ট মডেলগুলিতে উপস্থাপিত সমষ্টিগত তথ্যগুলি পরামর্শ দেয় যে ISAC-মধ্যস্থ ফাগোসাইটোসিস টিউমারগুলি নির্মূল করার একটি কার্যকর প্রক্রিয়া, তবে ইমিউনোকম্পিটেন্ট হোস্টগুলিতে টি কোষে টিউমার নিওঅ্যান্টিজেনের অ্যান্টিজেন উপস্থাপনের পরে এই প্রক্রিয়াটি উন্নত করা যেতে পারে।এই লক্ষ্যে, বন্য-প্রকার ইঁদুরে টিউমার-বিরোধী অনাক্রম্যতা উন্নীত করার জন্য ISAC-এর ক্ষমতা দুটি ভিন্নভাবে অ্যান্টি-rHER2 ISAC-এর সাথে তদন্ত করা হয়েছিল।rHER2-এক্সপ্রেসিং সিনজেনিক মডেল (MMC এবং CT26-rHER2)। T785 এবং CL264 উভয়ই ISAC সমন্বিত Syngeneic MMC মডেলে rHER2-এর উচ্চ অ্যান্টিজেন অভিব্যক্তিতে মূল্যায়ন করা হয়েছিল, কারণ নিম্ন এবং উচ্চ ক্ষমতা উভয় ISAC-কে টিউমার কোষে উচ্চ অ্যান্টিজেন ঘনত্বের সাথে কার্যকরী বলে ধারণা করা হয়েছিল। উভয় rHER2 ISACs MMC মডেলে বড় টিউমার (350-950 mm3) বহনকারী প্রাণীদের সম্পূর্ণ টিউমার ক্লিয়ারেন্সের দিকে পরিচালিত করে যেখানে unconjugated অ্যান্টিবডি টিউমার বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রণ করতে ব্যর্থ হয়। এমএমসি মডেলে এমআরএনএ ট্রান্সক্রিপ্ট স্তরের বিশ্লেষণে এর নিয়ন্ত্রণে একটি নাটকীয় পরিবর্তন প্রকাশিত হয়েছেrHER2 অ্যান্টিবডি বা আইসোটাইপ ISAC-এর সাপেক্ষে লক্ষ্যযুক্ত rHER2 T785-আইএসএসি-এর সাথে চিকিত্সার পরে 24 ঘন্টার মধ্যে অনেক জিন, মায়েলয়েড কোষ জীববিজ্ঞান, TLR জীববিজ্ঞান এবং অভিযোজিত প্রতিরোধমূলক প্রতিক্রিয়াগুলির সাথে জড়িত জিনের মধ্যে অন্তর্ভুক্ত। CD11c- এবং F4/80- প্রকাশকারী কোষের বর্ধিত অনুপ্রবেশ ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি দ্বারা দেখা গেছে, HCC1954 জেনোগ্রাফ্ট টিউমার মডেলে দেখা প্রবণতার অনুরূপ। উপরন্তু, CD8 T কোষ অনুপ্রবেশ দ্বারা পরিলক্ষিত হয়ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি, আইএসএসি চিকিত্সার পরে অভিযোজিত ইমিউন প্রতিক্রিয়া তৈরি করতে সহায়তা করে।

জেনোগ্রাফ্ট মডেলে ফ্যাগোসাইটের প্রদর্শিত গুরুত্ব ছাড়াও, এমএমসি সিঞ্জেনিক টিউমার মডেলের অবক্ষয় অধ্যয়ন ফাগোসাইটের উপর একটি শক্তিশালী নির্ভরতা প্রকাশ করেছে, কারণ ক্লোড্রোনেট-লোডেড লাইপোসোম ব্যবহার করে হ্রাস ISAC- মধ্যস্থতাবিরোধী টিউমার প্রভাবগুলিকে থামিয়ে দেয়। তদুপরি, সিনজেনিক অধ্যয়নগুলি ISAC কার্যকারিতায় টি কোষগুলির জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা প্রদর্শন করেছে। ISAC-চালিত টিউমার ক্লিয়ারেন্স CD8 T কোষের কার্যকলাপের উপর ব্যাপকভাবে নির্ভরশীল ছিল, কারণ CD8 T কোষের অবক্ষয় অ্যান্টি-টিউমার কার্যকারিতাকে বাধা দেয়। তথ্যটি পরামর্শ দেয় যে টি কোষের কার্যকলাপটি ISAC- উদ্দীপিত মাইলয়েড কোষগুলির TLR-মধ্যস্থতা সক্রিয়করণের মাধ্যমে চালিত হয়। টি কোষের জন্য এই ধরনের প্রয়োজনীয়তা, সম্ভবত ISAC-উদ্দীপিত মাইলয়েড কোষ দ্বারা টিউমার-সম্পর্কিত অ্যান্টিজেনগুলির উপস্থাপনার সাথে সম্পর্কিত, এটি সমর্থন করে যে ISACs সম্ভবত কমপক্ষে দুটি প্রক্রিয়ার মাধ্যমে তাদের টিউমার-বিরোধী কার্যকলাপের মধ্যস্থতা করতে পারে: ফ্যাগোসাইটোসিস এবং অ্যান্টিজেন উপস্থাপনা। যদিও ফাগোসাইটগুলি ISAC চিকিত্সার পরে একটি প্রাথমিক অ্যান্টি-টিউমার প্রতিক্রিয়া প্রদান করে, টি কোষের অ্যান্টিজেন প্রাইমিং শেষ পর্যন্ত টিউমার ক্লিয়ারেন্স এবং টেকসই প্রভাব প্রদান করে যা সম্পূর্ণরূপে ইমিউনোকম্পিটেন্ট মডেলগুলিতে পরিমাপ করা হয়। এই সংমিশ্রণটি ক্যান্সারের রোগীদের জন্য অত্যন্ত আকাঙ্খিত হবে কারণ ISAC চিকিত্সা শক্তিশালী এবং টেকসই অ্যান্টি-টিউমার প্রতিরোধ ক্ষমতার দিকে নিয়ে যেতে পারে৷ ISAC-মধ্যস্থিত T কোষ সক্রিয়করণের গুরুত্ব আরও অন্বেষণ করতে, rHER2 CL অনুসরণ করে CT26- rHER2 টিউমার নিরাময় করা হয়েছে৷ 264-টিউমার-মুক্ত থাকার 30 দিন পরে, CT26 প্যারেন্টাল সেল লাইন প্রকাশ করে নন-rHER2 সহ ISAC চিকিত্সা পুনরায় চ্যালেঞ্জ করা হয়েছিল। rHER2-CT26 নিরাময় করা প্রাণীরা CT26 দিয়ে চ্যালেঞ্জ থেকে সুরক্ষিত ছিল যেখানে টিউমার ন্যাভ প্রাণীরা টিউমার বৃদ্ধি প্রত্যাখ্যান করতে পারেনি। অতিরিক্তভাবে, এটি দেখানোর জন্য যে সুরক্ষাটি CT26 টিউমার সেল লাইনের জন্য নির্দিষ্ট ছিল, 4T1 একই সাথে প্যারেন্টাল CT26 চ্যালেঞ্জ করা ইঁদুরের কনট্রাল্যাটারাল ফ্ল্যাঙ্কে রোপণ করা হয়েছিল। যদিও CT26 টিউমারগুলি তার-CT26 নিরাময় করা ইঁদুরগুলিতে বৃদ্ধি পেতে ব্যর্থ হয়েছিল, 4T1 টিউমারের বৃদ্ধি ভারমুক্ত ছিল এবং এইভাবে প্রমাণ দেয় যে অনাক্রম্যতা অ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট এবং অভিযোজিত প্রতিরোধী প্রতিক্রিয়ার উপর নির্ভরশীল। তদ্ব্যতীত, এই গবেষণাগুলি টিউমার-লক্ষ্যযুক্ত আইএসএসিগুলি কেবল প্রাথমিকভাবে লক্ষ্যযুক্ত টিউমার অ্যান্টিজেন নয় বরং লক্ষ্যহীন অ্যান্টিজেনগুলিতেও ইমিউনোলজিক্যাল মেমরির মধ্যস্থতার পরামর্শ দেয়। এই তথ্যগুলি আরও পরামর্শ দেয় যে মাইলয়েড কোষগুলি টিউমার-সম্পর্কিত অ্যান্টিজেনগুলি উপস্থাপন করতে পারে যা অতিরিক্ত CTL প্রতিক্রিয়া চালায়। এই ফলাফলগুলির প্রভাবগুলি দেখায় যে, লক্ষ্যযুক্ত টিউমার অ্যান্টিজেন পরবর্তীকালে নিয়ন্ত্রিত বা ISAC এর সাথে আবদ্ধ হতে না পারলেও, ইমিউনোলজিক্যাল মেমরি ইতিমধ্যেই আহ্বান করা হয়েছে এবং একটি টেকসই প্রতিক্রিয়া বজায় রাখতে সক্ষম। এই প্রতিক্রিয়া নাISAC দ্বারা টার্গেট করা অ্যান্টিজেনের মধ্যে সীমাবদ্ধ কিন্তু অতিরিক্ত, অজ্ঞাত, টিউমার-প্রকাশিত অ্যান্টিজেনের জন্যও।একত্রে নেওয়া, এই তথ্যগুলি নির্দেশ করে যে ISACs গুণগত এবং পরিমাণগতভাবে সেলুলার অ্যাক্টিভেশন এবং অ্যান্টিজেন উপস্থাপনা, টি কোষের বিস্তার, এবং টেকসই অ্যান্টি-টিউমার অনাক্রম্যতা সম্পর্কিত জীববিজ্ঞানের গুণগত এবং পরিমাণগতভাবে স্বতন্ত্র জীববিজ্ঞান প্রকাশ করে।

Methods and Materials: Antibody Conjugation & Characterization For conjugation of adjuvants to the antibody, adjuvants were first synthesized to include a linker flanked by a reactive group. Conjugates produced using two-step methods were first synthesized through the modification of mAb lysine residues with a heterobifunctional crosslinker SATA. Deprotection of the acetylated thiol exposed a reactive thiol which was then reacted at room temperature for 2-4 hours with an adjuvant-linker flanked by a thio-reactive maleimide. For constructs produced using a single-step conjugation method, TFP esters were then conjugated to an IgG1 antibody. The TFP esters were dissolved in anhydrous DMSO to make a 20 mM stock solution and 5-10 molar equivalents (relative to the antibody) were added to the IgG antibody at 10 mg/mL in PBS. The conjugation reaction was performed at 4-40°C for 2-12 hours. The resulting immunoconjugates were buffer exchanged into PBS (pH 7.4) through desalting (Zeba Columns, Thermo Fisher Scientific) or dialysis to remove excess small molecular weight impurities. The final protein concentration was determined by measuring the absorbance at 280 nm on a Nanodrop 1000 spectrophotometer (Thermo Fisher Scientific). The yields were >75 শতাংশ পুনরুদ্ধার করা প্রোটিনের উপর ভিত্তি করে। SEC বিশ্লেষণ ন্যূনতম সামগ্রিক উপস্থিতি সনাক্ত করেছে এবং DAR LC/MS বিশ্লেষণ দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। বিশুদ্ধ আইএসএসিগুলিকে একটি 0.2 μm জীবাণুমুক্ত ফিল্টারের মাধ্যমে ফিল্টার করা হয়েছিল এবং ব্যবহার না করা পর্যন্ত −20 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল৷ HEK রিপোর্টার AssayHEK293 রিপোর্টার কোষগুলি মানব TLR7 বা মানব TLR8 প্রকাশ করে Invivogen (hub-htlr7 বা hub-htlr8) থেকে কেনা হয়েছিল৷ এবং সেলুলার প্রচার এবং পরীক্ষার জন্য বিক্রেতা প্রোটোকল অনুসরণ করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, 10 শতাংশ FBS, জিওসিন এবং ব্লাস্টিসিডিনের সাথে সম্পূরক ডিএমইএম-এ 5 শতাংশ CO2-তে কোষগুলিকে 80-85 শতাংশ সঙ্গম করা হয়েছিল৷ তারপরে কোষগুলিকে 4x104 কোষে 96-কূপ সমতল প্লেটে/কূপে HEK সনাক্তকরণ মাধ্যম এবং ইমিউনোস্টিমুলেটরি অণু সমন্বিত সাবস্ট্রেটের সাথে বীজ করা হয়েছিল। ক্রিয়াকলাপটি 620-655 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে একটি প্লেট রিডার ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল৷ বায়াকোর বিশ্লেষণহিস-ট্যাগযুক্ত Fc গামা রিসেপ্টর (FCGR) প্রোটিনগুলি R&D সিস্টেম (FCGR1 (CD64, cat# 1257-FC{{23}) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল }), FCGR2A (CD32a, cat# 1257-FC-050), FCGR2B (CD32b, cat# 1875-FC-050), FCGR3A (CD16a, cat# {{34) }}এফসি-050)। HBS-EP প্লাস বাফারে (GE BR100669) একটি Biacore T200 ইন্সট্রুমেন্টে বাইন্ডিং বিশ্লেষণ করা হয়েছিল একটি CM5 চিপ (GE BR100530) ব্যবহার করে অচল অ্যান্টি-HIS অ্যান্টিবডি (HIS ক্যাপচার কিট, GE05698) ) Rituximab বা Rituximab-ISAC ক্যাপচার করা FCGR বা রেফারেন্স সারফেস অ্যান্টি-হিজ অ্যান্টিবডি ধারণকারী প্রবাহ কোষের উপর ইনজেকশন দিয়েছে। ডেটার সাথে ডাবল রেফারেন্স করা হয়েছে।বিরোধী তার পৃষ্ঠ এবং একটি বাফার শুধুমাত্র ইনজেকশন. একটি কাইনেটিক টাইট্রেশন পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল এবং 10 মিমি গ্লাইসিন, পিএইচ 1.5 ইনজেকশনের মাধ্যমে চক্রের মধ্যে পৃষ্ঠগুলি পুনরুত্পাদন করা হয়েছিল। Biacore T200 মূল্যায়ন সফ্টওয়্যার (V3.1) FCGR1 এবং FCGR3A (গড় 6 রান) এর জন্য গতিশীল ফিট (1:1) ব্যবহার করে এবং FCGR2A এবং FCGR2B (3 রানের গড়) জন্য স্টেডি-স্টেট অ্যাফিনিটি (1:1) ব্যবহার করে ডেটা উপযুক্ত ছিল )

Human Myeloid APC Isolation Myeloid APCs, which predominantly consisted of monocytes (>95%), were isolated from the whole blood of healthy donors (Stanford Blood Center) by density gradient centrifugation using a RosetteSep Human Monocyte Enrichment Cocktail (Stem Cell Technologies). Myeloid APCs were further isolated using a negative selection Human Monocyte Enrichment Kit without CD16 depletion (Stem Cell Technologies) to a final purity of >CD14, CD16, CD11c, এবং HLA-DR এক্সপ্রেশনের উপর ভিত্তি করে ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা নির্ধারিত 90 শতাংশ৷ টলেডো টিউমার সেল প্রস্তুতি টলেডো কোষগুলি (এটিসিসি) বিক্রেতা-প্রস্তাবিত মিডিয়াতে সংস্কৃত করা হয়েছিল এবং বিক্রেতা-প্রস্তাবিত সেল ঘনত্বে (ATCC) বজায় রাখা হয়েছিল৷ PBS-এ 2 শতাংশ FBS এবং 2 mM EDTA সহ 1-10x106 কোষ/mL-এ কোষগুলিকে সংস্কৃতি থেকে সরানো হয়েছে, ধুয়ে ফেলা হয়েছে এবং পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছে৷ কিছু ক্ষেত্রে, কোষগুলিকে পরবর্তীতে 2 মিনিটের জন্য 2 μM CFSE দিয়ে লেবেল করা হয়েছিল এবং তারপর RPMI-1640 (Lonza) দিয়ে 10 শতাংশ FBS (আটলান্টা বায়োলজিক্যালস) এবং 100 U/mL পেন/স্ট্রেপ (লোনজা) দিয়ে পরিপূরক দিয়ে একবার ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল। তারপরে কোষগুলিকে 2 শতাংশ প্যারাফর্মালডিহাইডে স্থির করা হয়েছিল এবং আরও ব্যবহারের আগে পিবিএস দিয়ে তিনবার ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল৷ সেলুলার অ্যাক্টিভেশন অ্যাসেসপিবিএমসি বা বিচ্ছিন্ন মনোসাইটগুলি যথাক্রমে 3x105 বা 2x105 কোষে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল, যথাক্রমে, ফ্ল্যাট-বটমে, 96-ওয়েল প্লেট IM DM-এ 10 শতাংশ FBS (আটলান্টা বায়োলজিক্যালস), 1 মিমি সোডিয়াম পাইরুভেট (লোনজা), 100 μM অ-প্রয়োজনীয় অ্যামিনো অ্যাসিড (লোনজা), এবং 100 U/mL পেন/স্ট্রেপ (লোনজা) দিয়ে পরিপূরক। মনোসাইট এবং টিউমার সহ-সংস্কৃতি পরীক্ষার জন্য, মনোসাইটগুলিকে 3 থেকে 1 অনুপাতে স্থির অ্যালোজেনিক টিউমার কোষ দিয়ে সংষ্কৃত করা হয়েছিল। কোষগুলি পরবর্তীতে 10 শতাংশ CO2 সহ 37 ডিগ্রীতে 18-36 ঘন্টা ইমিউনোস্টিমুলেটরি এজেন্ট বা নিয়ন্ত্রণের সাথে ইনকিউব করা হয়েছিল। সেলুলার অ্যাক্টিভেশন অ্যাক্টিভেশন মার্কার এবং সাইটোকাইন উত্পাদনের সেল পৃষ্ঠের অভিব্যক্তির মাধ্যমে পরিমাপ করা হয়েছিল। সারফেস মার্কার এক্সপ্রেশন স্তরগুলি CD40 (5C3, BD), CD86 (IT2.2, BD), HLA-DR (L243, BD), এবং CD16 (3G8, BD) এর বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডি সহ ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল। CD14 (MΦP9, BD), এবং CD123 (7G3, BD)। পিবিএমসিগুলি পূর্বোক্ত অ্যাক্টিভেশন মার্কারগুলির পাশাপাশি বংশ চিহ্নিতকারী CD19 (HIB19, BD), CD56 (B159, BD), CD3 (SK7, BD), CD4 (OKT4, BioLegend), CD8 (SK1) এর বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডি সহ ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। BD) এবং CD69 (FN50, BD)। সমস্ত ক্ষেত্রে, 18 বা 36-ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে সেল কালচার সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল, এবং সাইটোকাইন বিড অ্যারে কিট (হিউম্যান ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন কিট, বিডি বায়োসায়েন্সেস) এবং এলিসা (টিএনএফ হিউম্যান ইলিসা কিট, ইবিওস) ব্যবহার করে সাইটোকাইন উৎপাদন পরিমাপ করা হয়েছিল। ভর সাইটোমেট্রিপিবিএমসিগুলিকে সুস্থ দাতার রক্ত ​​থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং ISAC দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল, অ্যান্টিবডি এবং সহায়কের মিশ্রণ, বা 37 ডিগ্রিতে 5-15 মিনিটের জন্য কোনও উদ্দীপনা ছিল না। উদ্দীপনা অনুসরণ, কোষ1.6 শতাংশের চূড়ান্ত ঘনত্বে 16 শতাংশ PFA (ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি বিজ্ঞান) যোগ করে স্থির করা হয়েছিল এবং কক্ষ তাপমাত্রায় (RT) 10 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। স্থির কোষগুলি সেল স্টেনিং মাধ্যম (CSM; 0.5 শতাংশ BSA সহ PBS এবং 0.02 শতাংশ সোডিয়াম অ্যাজাইড (সমস্ত সিগমা)) দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং পূর্বে বর্ণিত হিসাবে প্যালাডিয়াম-ভিত্তিক পদ্ধতি ব্যবহার করে বারকোড করা হয়েছিল 54. বারকোডেড নমুনাগুলিকে একত্রিত করা হয়েছিল পৃষ্ঠ স্টেনিংয়ের জন্য যৌগিক নমুনা।

CSM-এ অ্যান্টিবডি (পরিপূরক সারণী 2) যোগ করে এবং RT-এ 3{{10}} মিনিটের জন্য ইনকিউবেশন করে সারফেস স্টেনিং করা হয়েছিল। ম্যাক্সপার এক্স8 অ্যান্টিবডি-লেবেলিং কিট (ফ্লুইডিগম) ব্যবহার করে প্রস্তুতকারকের সুপারিশ অনুসারে মানব-বিরোধী অ্যান্টিবডিগুলি হয় কনজুগেটেড (ফ্লুইডিগম) কেনা হয়েছিল বা ভারী ধাতুর আইসোটোপে সংযোজিত হয়েছিল। সারফেস-দাগযুক্ত কোষগুলি সিএসএম-এ একবার ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল এবং বরফে 10 মিনিটের জন্য MeOH দিয়ে প্রবেশ করা হয়েছিল। পারমিবিলাইজড কোষগুলি সিএসএম দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং আরটি-তে 30 মিনিটের জন্য আন্তঃকোষীয় অ্যান্টিজেনের বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডি যুক্ত করা হয়েছিল। কোষগুলি সিএসএম দিয়ে ধুয়ে শেষ পর্যন্ত ইন্টারক্যালেশন দ্রবণে (পিবিএস-এ 1.6 শতাংশ পিএফএ, 0.02 শতাংশ স্যাপোনিন (সিগমা), এবং 0.5 μM ইরিডিয়াম-ইন্টারকেলেটর (ফ্লুইডিগম)) রাতারাতি 4 ডিগ্রিতে পুনরুদ্ধার করা হয়েছিল। ডেটা অধিগ্রহণের আগে, নমুনাগুলি একবার সিএসএমে এবং দুবার ডিডিএইচ 2ওতে ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল। সমস্ত নমুনা একটি সেল স্ট্রেনার (ফ্যালকন) এর মাধ্যমে ফিল্টার করা হয়েছিল এবং 1x EQ ফোর-এলিমেন্ট ক্রমাঙ্কন জপমালা (Fluidigm) এবং CyTOF2 ভর সাইটোমিটার (ফ্লুইডিগম) এ অর্জিত ডেটা সহ ddH2O তে 1x106 কোষ/mL এ পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল। Citibank 29-এর মধ্যে SPADE বাস্তবায়ন ব্যবহার করে সিগন্যালিং প্রতিক্রিয়াগুলি মূল্যায়ন করা হয়েছিল। বিশ্লেষণগুলি সমস্ত কক্ষে চালানো হয়েছিল (কোনও ডাউন-স্যাম্পলিং নেই), উল্লিখিত সংখ্যক ক্লাস্টার বেছে নিয়ে এবং সমস্ত প্রাসঙ্গিক পৃষ্ঠ চিহ্নিতকারী ব্যবহার করে কিন্তু ক্লাস্টারিংয়ের জন্য কোনও অন্তঃকোষীয় মার্কার ছিল না। ইমিউন কোষের বংশগুলি তাদের উচ্চ-মাত্রিক পৃষ্ঠ প্রোটিন অভিব্যক্তির ধরণগুলির উপর ভিত্তি করে টীকা করা হয়েছিল৷ পরিসংখ্যান বিশ্লেষণগুলি R, একটি ওপেন-সোর্স পরিসংখ্যানগত সফ্টওয়্যার পরিবেশে পরিচালিত হয়েছিল৷ প্রতিটি কোষের উপসেট, চিকিত্সা গোষ্ঠী এবং দাতার মধ্যে, নিম্নলিখিত বিশটি ফসফো-প্রোটিন মার্কারগুলির জন্য গড় ভাঁজ পরিবর্তন গণনা করা হয়েছিল: p-Src, p-STAT5, p-cMET, p-AKT, p-MAPKAPK2, p-SHP2, p -SLP76, p-IRF-7, p-ZAP70/SYK, p-CREB, p-NFKB, p-PI3K, IKB (মোট), p-PLCG1, p-ERK1/2, p-p38, p -BTK/ITK, p-S6, p-STAT3, এবং p-JNK/SAPK। গড় ভাঁজ পরিবর্তন প্রতিটি ক্লাস্টারে কোষের মোট সংখ্যা দ্বারা ওজন করা হয়েছিল, যেমন SPADE ক্লাস্টারিং অনুসরণ করে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছে। জোড়যুক্ত টি-পরীক্ষাগুলি গড় ভাঁজ পরিবর্তনের পার্থক্য অনুমান করার জন্য এবং নাল অনুমান পরীক্ষা করার জন্য পরিচালিত হয়েছিল যে চিকিত্সা এবং নিয়ন্ত্রণ শর্ত জুড়ে প্রতিটি মার্কারের গড় ভাঁজ পরিবর্তনের মধ্যে কোনও পার্থক্য ছিল না।

জেনোগ্রাফ্ট টিউমার মডেল পরীক্ষামূলক পদ্ধতি টিউমার সেল লাইনগুলি ATCC (NCI-N87, HCC1954, এবং COLO205) বা AddexBio (JIMT-1) থেকে কেনা হয়েছিল এবং প্রস্তুতকারকের নির্দেশিকা অনুসারে বেড়েছে৷ অ্যাকুটেজ (স্টেমসেল) এর সাথে বিচ্ছিন্ন করে, পিবিএস দিয়ে ধুয়ে, পিবিএস-এ 40 x 106 কোষ/মিলি-তে পুনরায় সাসপেন্ড করে এবং দুই ঘণ্টার বেশি বরফের উপর রাখা হলে কোষগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল। ইমপ্লান্টেশনের ঠিক আগে, সাসপেন্ড করা কোষগুলিকে সমান পরিমাণ Cultrex PathClear BME, টাইপ 3 (R&D সিস্টেম) এর সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং মিশ্রণের 100 μL (2 x 106 কোষ) 6-8-সপ্তাহের ডান ফ্ল্যাঙ্কে সাবকিউটনিভাবে রোপণ করা হয়েছিল। -পুরানো মহিলা ইঁদুরগুলি নিম্নরূপ: NCI-N87 এবং COLO205 কোষগুলি এনএসজি ইঁদুরে (জ্যাকসন ল্যাবরেটরি), HCC1954 এবং JIMT-1 কোষগুলিকে Rag2/IL2rg ডাবল নকআউট (ট্যাকোনিক) এবং HCC1954 (মূল্যায়নের জন্য) এ রোপণ করা হয়েছিল T785-ISAC) এনএসজিতে বসানো হয়েছিল বাSCID/বেইজ ইঁদুর (জ্যাকসন ল্যাবরেটরি বা ট্যাকোনিক এবং এনভিগো)। টিউমারের আকার সপ্তাহে দুবার রেকর্ড করা হয়েছিল এবং নিম্নলিখিত সূত্র ব্যবহার করে অনুমান করা হয়েছিল: (দৈর্ঘ্য x প্রস্থ 2)/2। টিউমারগুলি একবার 50-100 mm3 এ পৌঁছালে, সাধারণত টিউমার ইমপ্লান্টেশনের এক সপ্তাহের মধ্যে, চিকিত্সা শুরু করা হয়। প্রাথমিক চিকিত্সার আগে টিউমারের আকার দ্বারা ইঁদুরগুলিকে চিকিত্সার গ্রুপগুলিতে এলোমেলো করা হয়েছিল। Trastuzumab (EirGenix; EG12014), Trastuzumab ISAC, বা Isotype ISAC PBS-এ 1 mg/mL-এ প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং মোট ছয়টি ডোজের জন্য প্রতি পাঁচ দিনে (Q5D) 5 mg/kg intraperitoneally দেওয়া হয়েছিল। যেসব ইঁদুরের টিউমার 2000 mm3 ছাড়িয়ে গেছে তাদের euthanized করা হয়েছিল।

HCC1954 এবং MMC সেলুলার হ্রাস পরীক্ষামূলক পদ্ধতি ম্যাক্রোফেজ এবং অন্যান্য ফ্যাগোসাইটিক কোষগুলিকে ক্ষয় করার জন্য, ইঁদুর বহনকারী HCC1954 বা MMC টিউমারগুলিকে ক্লোড্রোনেট লাইপোসোমগুলির সাথে প্রাথমিক ISAC চিকিত্সার দুই দিন আগে ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশনের মাধ্যমে চিকিত্সা করা হয়েছিল বা ক্লোড্রোনেট লাইপোসোমগুলি নিয়ন্ত্রণ করে না (Cacrophages নিয়ন্ত্রণ করে) CLD-8901) এবং তারপরে সপ্তাহে দুবার মোট তিন সপ্তাহের জন্য চিকিত্সা করা হয়। নিউট্রোফিলস ক্ষয় করার জন্য, ইঁদুরকে শুধুমাত্র Ly6G প্লাস নিউট্রোফিল ক্ষয় করার জন্য ক্ষয়কারী অ্যান্টিবডি 1A8 দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল (BioXCell ক্যাটালগ # BE0075-1) অথবা RB6-8C5 দিয়ে Gr1 প্লাস কোষগুলিকে শূন্য করার জন্য, যার মধ্যে Ly6G প্লাস নিউট্রোফিল এবং Ly6Cplus অন্তর্ভুক্ত রয়েছে। কোষ (BioXCell ক্যাটালগ # BE0075) বা আইসোটাইপ নিয়ন্ত্রণ 2A3 এবং LTF-2 (যথাক্রমে বায়োএক্সসেল ক্যাটালগ # BE0089 এবং BE0090) প্রাথমিক ISAC চিকিত্সার দুই দিন আগে, তারপর তিন সপ্তাহের জন্য সপ্তাহে দুবার চিকিত্সা করা হয়। রক্তে কোষের হ্রাস প্রবাহ সাইটোমেট্রি (পরিপূরক চিত্র 24) দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল। টিউমার সাইটোকাইন এবং এমআরএনএ বিশ্লেষণ পদ্ধতি টিউমারগুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে রোপন করা হয়েছিল এবং চিকিত্সার পরে নির্দেশিত সময়ে বিশ্লেষণের জন্য সংগ্রহ করা হয়েছিল। ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি এবং এমআরএনএ বিশ্লেষণের জন্য, টিউমারগুলিকে বিভক্ত করা হয়েছিল এবং এমআরএনএ ন্যানোস্ট্রিং মাউস প্যান-ক্যান্সার ইমিউন প্রোফাইলিং প্যানেলের সাথে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। প্রস্তুতকারকের সুপারিশ অনুসারে nSolver অ্যাডভান্সড অ্যানালাইসিস সফ্টওয়্যার দিয়ে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। R-এ ggplot2 প্যাকেজ দিয়ে আগ্নেয়গিরির প্লট আঁকা হয়েছিল। সাইটোকাইন বিশ্লেষণের জন্য টিউমার লাইসেট পাওয়ার জন্য, টিউমারের টুকরোগুলিকে একটি পূর্ব-তৈরি বাফারে রাখা হয়েছিল (1 পিয়ার্স প্রোটিজ ইনহিবিটর ট্যাবলেট (থার্মো ফিশার, ক্যাটালগ #A32965) 20 মিলিমিটারে দ্রবীভূত করা হয়েছিল। PER টিস্যু প্রোটিন এক্সট্রাকশন রিএজেন্ট, থার্মো ফিশার, ক্যাটালগ #78510) জেন্টলম্যাসিএস এম টিউবগুলিতে (মিল্টেনি, ক্যাটালগ #130-093-236) নেক্রোপসির পরপরই। টিউমারের নমুনাগুলি তখন একটি জেন্টলম্যাকস অক্টো ডিসোসিয়েটর ব্যবহার করে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। সমস্ত নমুনা পরে 300g এ 5 মিনিটের জন্য কাটা হয়েছিল। সুপারন্যাট্যান্টগুলিকে তখন মাইক্রোফিউজ টিউবগুলিতে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং একটি মাইক্রোসেন্ট্রিফিউজ দিয়ে আবার কাটা হয়েছিল। সাইটোকাইন বিশ্লেষণ এমএসডি দ্বারা সুপারনাট্যান্টদের উপর সম্পাদিত হয়েছিল। টিস্যু আর্কিটেকচার সনাক্ত করতে হিমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন ব্যবহার করে ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি সঞ্চালিত হয়েছিল, সেইসাথে নিম্নলিখিত মার্কারের জন্য যেখানে গবেষণায় নির্দেশিত হয়েছে: CD11c (CST ক্যাটালগ #87585) এবং CD8 (CST ক্যাটালগ #98941)।

চিত্র 4: টি785-আইএসএসিগুলি ট্রাস্টুজুমাব-প্রতিরোধী টিউমার জেনোগ্রাফ্ট মডেলগুলিতে শক্তিশালী অ্যান্টি-টিউমার প্রতিরোধ ক্ষমতা তৈরি করে। - 75 মিমি 3। (a) একবার ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল (আইপি) দ্বারা 5 মিলিগ্রাম/কেজি ট্রাস্টুজুমাব টি785-আইএসএসি বা ট্রাস্টুজুমাব দিয়ে, অথবা ইন্ট্রাটুমোরাল (আইটি) ইনজেকশনের মাধ্যমে আইএসএসি-তে ট্রাস্টুজুমাব এবং T785 এর মিশ্রণের সাথে মোলার সমতুল্য ডোজ দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। প্রতি গ্রুপে n=3-5টি ইঁদুরের সাথে একটি পরীক্ষা থেকে ডেটা পাওয়া যায়। (খ) ইঁদুরকে 5 মিলিগ্রাম/কেজি ট্রাস্টুজুমাব, ট্রাস্টুজুমাব-আইএসএসি দিয়ে ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশনের মাধ্যমে চিকিত্সা করা হয়েছিল,rituximab, বা rituximab-ISAC Q5DX6 (প্রতি গ্রুপে n= 5 ইঁদুর)। (c) ট্রাস্টুজুমাব, ট্রাস্টুজুমাব T785-ISAC, trastuzumab N297A-ISAC, বা trastuzumab TLRnull-ISAC (n=5 ইঁদুর প্রতি গ্রুপ) দিয়ে ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশনের মাধ্যমে ইঁদুরের চিকিৎসা করা হয়েছিল। (d) HCC1954 টিউমার কোষগুলিকে SCID/বেইজ ইঁদুরের মধ্যে রোপণ করা হয়েছিল, এবং ট্রাস্টুজুমাব T785-আইএসএসি চিকিত্সার আগে এবং চলাকালীন আগ্রহের কোষগুলি ক্ষয় হয়ে গিয়েছিল (5 mg/kg, Q5DX3) অ্যান্টি-Ly6G অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে (ইদুর IgG2a নিয়ন্ত্রণ) , ক্লোড্রোনেট liposomes (নিয়ন্ত্রণ হিসাবে liposomes নিয়ন্ত্রণ) বা anti-Gr1 অ্যান্টিবডি (ইদুর IgG2b নিয়ন্ত্রণ)। প্রতি গ্রুপে n{21}}টি ইঁদুরের সাথে একটি পরীক্ষা থেকে ডেটা পাওয়া যায়। (e, f) NSG বা Rag2/IL2rg ডাবল নকআউট ইঁদুরগুলিকে JIMT-1 টিউমার সেল লাইনের সাথে ইমপ্লান্ট করা হয়েছিল এবং টিউমারের পরিমাণ 50 – 75 mm3 এ পৌঁছলে এলোমেলো করা হয়েছিল৷ ইঁদুরগুলিকে পরবর্তীতে (ই) Q5DX6 ফ্রিকোয়েন্সি সহ 5 মিলিগ্রাম/কেজি ইন্ট্রাপেরিটোনলি নির্দেশিত চিকিত্সার মাধ্যমে চিকিত্সা করা হয়েছিলঅথবা (f) Q5DX5 (n=3-6টি গ্রুপ প্রতি ইঁদুর)। (bf) দেখানো ডেটা কমপক্ষে দুটি পরীক্ষার প্রতিনিধি। (gj) HCC-1954 টিউমারগুলি 5 মিলিগ্রাম/কেজি আইএসএসি বা নিয়ন্ত্রণ অ্যান্টিবডিগুলির একক ডোজ দিয়ে চিকিত্সার পরে নির্দেশিত সময়ে ইঁদুরের দল থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল। টিউমারগুলি ফ্লো সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণ, ন্যানোস্ট্রিং এমআরএনএ কোয়ান্টিফিকেশন বা ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রির জন্য ফরমালিন-স্থির এবং প্যারাফিন-এমবেডেডের জন্য প্রক্রিয়া করা হয়েছিল। (ছ) আগ্নেয়গিরির প্লটগুলি 24 ঘন্টায় ন্যানোস্ট্রিং দ্বারা পরিমাপ করা চিকিত্সা বনাম আইসোটাইপ কন্ট্রোল টিউমারগুলিতে জিনের অভিব্যক্তির log2 ভাঁজ পরিবর্তন চিত্রিত করে (প্রতি গ্রুপে n=5 ইঁদুর)। < 0.05="" এর="" একটি="" সামঞ্জস্য="" করা="" p-মানের="" সাথে="" পরিবর্তনগুলি="" লাল="" রঙে="" দেখানো="" হয়েছে৷="" (h)="" জিন="" স্বাক্ষর="" স্কোর="" nsolver="" advanced="" analysis="" pathway="" score="" দ্বারা="" পরিমাপ="" করা="" হয়েছে="" চিকিৎসার="" 24="" ঘন্টা="" পর="" বিশ্লেষণ="" করা="" হয়েছে="" (n="5টি" গ্রুপ="" প্রতি="" ইঁদুর)।="" (i)="" চিকিত্সার="" 24="" ঘন্টা="" এবং="" 7="" দিন="" পর="" টিউমারাল="" সেলুলার="" রচনার="" ফ্লো="" সাইটোমেট্রি="" বিশ্লেষণ="" (ন="2-4" গ্রুপ="" প্রতি="" ইঁদুর)।="" ডেটা="" কমপক্ষে="" 2টি="" পরীক্ষার="" প্রতিনিধি।="" (j)="" প্রতিনিধি="" চিত্রের="" পাশাপাশি="" f4/80="" এবং="" cd11c="" ihc="" টিউমারের="" পরিমাণ="" নির্ধারণ="" প্রতিটি="" নির্দেশিত="" চিকিত্সার="" 9="" দিন="" পরে="" সংগ্রহ="" করা="" হয়েছে।="" স্কেল="" বার="" 50="" μm="" হয়।="" (aj)="" ডেটা="" sem="" এর="" সাথে="" গড়="" হিসাবে="" দেখানো="" হয়="" এবং="" পরিসংখ্যান="" *p="" দিয়ে="" দেখানো=""><0.05,><0.01,><0.001,><>

সিঞ্জেনিক টিউমার মডেল পরীক্ষামূলক পদ্ধতি এমএমসি কোষগুলি ডাঃ ডিসিস (ওয়াশিংটন বিশ্ববিদ্যালয়) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল এবং RPMI 1640-তে 20 শতাংশ FBS, 1 শতাংশ পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিন এবং L-গ্লুটামিন 37 ডিগ্রি এবং 5 শতাংশ পর্যন্ত {8 শতাংশ CO-এর সাথে পরিপূরক ছিল। }} শতাংশ সঙ্গম। CT26 কোষ (ATCC) স্থিরভাবে প্রকাশ করা ইঁদুর HER2 প্রোটিনকে RPMI 1640 তে 10 শতাংশ FBS এবং 600 ug/mL G418 সিলেক্টিভ অ্যান্টিবায়োটিক (থার্মো) 37 ডিগ্রীতে এবং 5 শতাংশ CO2 এর সাথে 80-90 শতাংশ সঙ্গম না হওয়া পর্যন্ত জন্মানো হয়েছিল। একবার পর্যাপ্ত সঙ্গম হয়ে গেলে, অ্যাকুটেস (স্টেমসেল) দিয়ে আলাদা করে এবং পিবিএস দিয়ে ধুয়ে কোষগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল। সংগ্রহ করা কোষ 20 x 106 কোষ/mL (MMC) এ পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিলঅথবা PBS-এ 5 x 106 কোষ/mL (CT26-rHER2) এবং ব্যবহার না করা পর্যন্ত 4 ডিগ্রি /বরফে রাখা হয়। 100 μLসাসপেন্ড করা কোষগুলির মধ্যে সাবকুটনিলি রোপণ করা হয়েছিল 6-8-সপ্তাহ-পুরোনো FVB/N-TgN(MMTV- Erbb2)NK1Mul/Jmice (MMC মডেল, দ্য জ্যাকসন ল্যাবরেটরি) অথবা মহিলা BALB/c ইঁদুর (CT26 মডেল, দ্য জ্যাকসন ল্যাবরেটরি) . টিউমারের আকার পরিমাপ করা হয়েছিল এবং দুবার রেকর্ড করা হয়েছিলঅধ্যয়নের সময়কালের জন্য এক সপ্তাহ। নিম্নলিখিত সূত্র ব্যবহার করে টিউমারের পরিমাণ অনুমান করা হয়েছিল: (দৈর্ঘ্য x প্রস্থ 2)/2। টিউমারগুলি একবার 200-500 mm3 (MMC) বা 50-100 mm3 (CT26-rHER2) এ পৌঁছলে, সাধারণত টিউমার ইমপ্লান্টেশনের এক সপ্তাহের মধ্যে, চিকিত্সা শুরু করা হয়। প্রাথমিকের আগে টিউমারের আকার দ্বারা ইঁদুরগুলিকে চিকিত্সা গ্রুপে এলোমেলো করা হয়েছিলচিকিত্সা অ্যান্টি-rHER2 mAb (BioXCell; 7.16.4) বা অ্যান্টি-rHER2-ISAC অধ্যয়নের সময়কালের জন্য ইন্ট্রাপেরিটোনলি (চিত্র কিংবদন্তিতে নির্দেশিত ফ্রিকোয়েন্সি) পরিচালিত হয়েছিল।যেসব ইঁদুরের টিউমার 2000 mm3 ছাড়িয়ে গেছে তাদের euthanized করা হয়েছিল। টি কোষের হ্রাস মূল্যায়ন করা হয়েছিলCD4 (BioXCell; GK1.5) বা CD8 (BioXCell; YTS 169.4) কোষ-ক্ষয়কারী অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে প্রাণীদের মধ্যে। টিউমার ইমপ্লান্টেশনের আগে অবক্ষয় শুরু করা হয়েছিল এবং প্রতি অ্যান্টিবডি 200 ug এর দুবার-সাপ্তাহিক প্রশাসনের সাথে অব্যাহত ছিল। টিউমার রিচ্যালেঞ্জের জন্য, CT26 এবং 4T1 সেল লাইনগুলি প্রতি টিউমার লাইনে 5 x 106 কোষে রোপণ করা হয়েছিল এবং টিউমার ন্যাভ ইঁদুরকে নিয়ন্ত্রণ হিসাবে উভয় সেল লাইনের সাথে চ্যালেঞ্জ করা হয়েছিল।

পরিপূরক উপাদান সম্পূরক উপাদানের জন্য পাবমেড সেন্ট্রাল-এর ওয়েব সংস্করণটি দেখুন। স্বীকৃতি: লেখকরা তাদের সহায়ক আলোচনার জন্য P. Basto, NE Reticker-Flynn, T. Prestwood, এবং B. Mallet কে ধন্যবাদ জানাতে চান। আমরা স্ট্যানফোর্ড ব্লাড সেন্টার ফ্লো সাইটোমেট্রি কোরকেও ধন্যবাদ জানাই, বিশেষ করে এল. টলেন্টিনো, ও. চোই এবং এন.উউ। আমরা ওয়াশিংটন বিশ্ববিদ্যালয়ের ডাঃ মেরি এল. (নোরা) ডিসিস এবং ডেনিস সেসিলের প্রতিও আমাদের কৃতজ্ঞতা জানাই যারা MMC টিউমার সেল লাইন প্রদান করেছেন।

অর্থায়ন: এসই অ্যাকারম্যান স্ট্যানফোর্ড বায়োএক্স বোয়েস ফেলোশিপ দ্বারা সমর্থিত ছিল।

তথ্যসূত্র: 1. ডেভিস টিএ এট আল। রিটুক্সিমাব অ্যান্টি-সিডি 20 মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি থেরাপি নন-হজকিনের লিম্ফোমা: সুরক্ষা এবং পুনরায় চিকিত্সার কার্যকারিতা। J Clin Oncol 18, 3135–3143, doi:10.1200/JCO.2000.18.17.3135 (2000)। [পাবমেড: 10963642]2. গ্রিলো-লোপেজ এজে এট আল। রিটুক্সিমাব: লিম্ফোমার চিকিত্সার জন্য অনুমোদিত প্রথম মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি। কার ফার্ম বায়োটেকনোল 1, 1-9 (2000)। [পাবমেড: 11467356]3. লিজোট পিএইচ এট আল। অ-ক্ষুদ্র-কোষ ফুসফুসের ক্যান্সারের মাল্টিপ্যারামেট্রিক প্রোফাইলিং স্বতন্ত্র ইমিউনোফেনোটাইপগুলি প্রকাশ করে। JCI ইনসাইট 1, e89014, doi:10.1172/jci.insight.89014 (2016)। [পাবমেড: 27699239]4. স্প্রেঞ্জার এস এট আল। ইমিউনোজেনিক অ্যান্টিজেনের ঘনত্ব মেলানোমাতে টি-সেল-প্রদাহযুক্ত টিউমার মাইক্রোএনভায়রনমেন্টের উপস্থিতি বা অনুপস্থিতি ব্যাখ্যা করে না। Proc Natl Acad Sci USA 113, E7759– E7768, doi:10.1073/pnas.1609376113 (2016)। [পাবমেড: 27837020]5. ক্যানসার ইমিউনোথেরাপির গাইড হিসেবে বিটি জিএল এবং গ্ল্যাডনি ডব্লিউএল ইমিউন এস্কেপ মেকানিজম। Clin Cancer Res 21, 687–692, doi:10.1158/1078-0432.CCR-14-1860 (2015)। [পাবমেড: 25501578]6. ফ্রিডম্যান ডব্লিউএইচ, পেজ এফ, স্যালুটস-ফ্রিডম্যান সি এবং গ্যালন জে মানব টিউমারে ইমিউন প্রেক্ষাপট: ক্লিনিকাল ফলাফলের উপর প্রভাব। Nat Rev Cancer 12, 298–306, doi:10.1038/nrc3245 (2012)। [পাবমেড: 22419253]

7. গ্যালন জে অ্যান্ড ব্রুনি ডি সংমিশ্রণ ইমিউনোথেরাপির সাহায্যে অনাক্রম্য গরম, পরিবর্তিত এবং ঠান্ডা টিউমারের চিকিত্সার পদ্ধতি। Nat Rev Drug Discov 18, 197–218, doi:10.1038/s41573-018-0007-y (2019)। [পাবমেড: 30610226]8. গ্যাব্রিলোভিচ ডিআই, অস্ট্র্যান্ড-রোজেনবার্গ এস এবং ব্রোন্ট ভি টিউমার দ্বারা মাইলয়েড কোষের সমন্বিত নিয়ন্ত্রণ। Nat Rev Immunol 12, 253–268, doi:10.1038/nri3175 (2012)। [পাবমেড: 22437938]9. জয়েস জেএ এবং ফেয়ারন ডিটি টি কোষ বর্জন, প্রতিরোধ ক্ষমতা এবং টিউমার মাইক্রোএনভায়রনমেন্ট। বিজ্ঞান 348, 74–80, doi:10.1126/science.aaa6204 (2015)। [PubMed: 25838376]10.Carmi Y et al. Akt এবং SHP-1 হল টিউমার অনাক্রম্যতার জন্য DC-অভ্যন্তরীণ চেকপয়েন্ট। JCI ইনসাইট 1, e89020, doi:10.1172/jci.insight.89020 (2016)। [PubMed: 27812544]11. কারমি ওয়াই এট আল। অ্যালোজেনিক আইজিজি ডেনড্রাইটিক কোষের উদ্দীপনার সাথে মিলিত হয় অ্যান্টিটিউমার টি-সেল অনাক্রম্যতা প্ররোচিত করে। প্রকৃতি 521, 99–104, doi:10.1038/Nature14424 (2015)। [পাবমেড: 25924063]12. অ্যালেন বিএম এট আল। ক্যান্সার মডেলগুলিতে ইমিউন মাইক্রোএনভায়রনমেন্টের সিস্টেমিক কর্মহীনতা এবং প্লাস্টিকতা। Nat Med 26, 1125–1134, doi:10.1038/s41591-020-0892-6 (2020)। [পাবমেড: 32451499]13. সগিভ-বরফি আই এট আল। স্থানীয় ইমিউনোথেরাপি দ্বারা স্বতঃস্ফূর্ত ম্যালিগন্যান্সি নির্মূল। Sci Transl Med 10, doi:10.1126/scitranslmed.aan4488 (2018).14. Spitzer MH et al. কার্যকরী ক্যান্সার ইমিউনোথেরাপির জন্য সিস্টেমিক ইমিউনিটি প্রয়োজন। সেল 168, 487–502 e415, doi:10.1016/j.cell.2016.12.022 (2017)। [পাবমেড: 28111070]15. মিলহেম মোহাম্মদ এম., থেরেসা মেডিনা আরজি, কার্কউড জন এম., বুচবিন্ডার এলিজাবেথ, মেহমি ইন্দরজিৎ, নিউ জিয়াক্সিন, শাহীন মন্টাসার, ওয়েট রায়ান, মার্গোলিন কিম, লুক জেসন, মরিস অ্যারন, মাউরো ডেভিড, ক্রিগ আর্থার এম., রিবাস আন্তোনি সিটি{ {77}}ইন্ট্রাটুমোরাল টোল-লাইক রিসেপ্টর (TLR9) অ্যাগোনিস্ট, সিএমপি-001, পেমব্রোলিজুমাবের সংমিশ্রণে উন্নত মেলানোমা (এএসিআর বার্ষিক সভা) সহ একটি ফেজ 1 বি ট্রায়ালে পিডি-1 প্রতিরোধের প্রতিরোধকে বিপরীত করতে পারে 2018, 2018)।16। Rook AH সিটিসিএল-এর জন্য TLR অ্যাগোনিস্টদের সৌন্দর্য। রক্ত 119, 321–322, doi:10.1182/ রক্ত-2011-11-391243 (2012)। [পাবমেড: 22247516]17. সিং এম এট আল। স্থানীয়কৃত TLR7/8 সক্রিয়করণের মাধ্যমে কার্যকর সহজাত এবং অভিযোজিত অ্যান্টি-মেলানোমা প্রতিরোধ ক্ষমতা। J Immunol 193, 4722–4731, doi:10.4049/J Immunol.1401160 (2014)। [পাবমেড:25252955]18. Zhao BG, Vasilakos JP, Tross D, Smirnov D & Klinman DM কম্বিনেশন থেরাপি টার্গেট করে টোল-এর মতো রিসেপ্টর 7, 8, এবং 9 বড় প্রতিষ্ঠিত টিউমারগুলিকে নির্মূল করে। J Immunother Cancer 2, 12, doi:10.1186/2051-1426-2-12 (2014)। [পাবমেড: 24982761]19. জার্ক এম এট আল। মানব TLR7 বা TLR8 স্বাধীনভাবে অ্যান্টিভাইরাল যৌগ R-848-এর প্রতিক্রিয়া প্রদান করে। Nat Immunol 3, 499, doi:10.1038/ni0602-499 (2002)। [পাবমেড: 12032557]20. চ্যাটারগুন এমএ এট আল। এইচআইভি এবং এইচসিভি টাইপ 1 ইন্টারফেরনের আনয়ন ছাড়াই এন্ডোসোমাল টোল-জাতীয় রিসেপ্টরগুলির মাধ্যমে মনোসাইট এবং ম্যাক্রোফেজে প্রদাহকে সক্রিয় করে। PLOS Pathog 10, e1004082, doi:10.1371/journal.bat.1004082 (2014)। [পাবমেড: 24788318]21. Eigenbrod T, Pelka K, Latz E, Kreikemeyer B এবং Dalpke AH TLR8 মানব মনোসাইটগুলিতে ব্যাকটেরিয়া RNA সংবেদন করে এবং স্ট্রেপ্টোকক্কাস পাইোজেনের স্বীকৃতির জন্য একটি অপ্রয়োজনীয় ভূমিকা পালন করে। J Immunol 195, 1092–1099, doi:10.4049/J Immunol.1403173 (2015)। [পাবমেড: 26101323]22. ম্যাটসন জি এট আল। ক্রসলিংকিংয়ের জন্য একটি ব্যবহারিক পদ্ধতি। Mol Biol Rep 17, 167–183 (1993)। [পাবমেড: 8326953]23. Gabay C, Ben-Bassat H, Schlesinger M & Laskov R সোম্যাটিক মিউটেশন এবং বি-নন-হজকিনের লিম্ফোমা কোষের লাইনের পুনর্বিন্যস্ত Vkappa জিনে ইন্ট্রাক্লোনাল বৈচিত্র। Eur J Haematol 63, 180–191, doi:10.1111/j৷{164}}.1999.tb01766.x (1999)৷ [পাবমেড: 10485273]24. আলোনসো এমএন এট আল। T(H)1, T(H)2, এবং T(H)17 কোষ মনোসাইটকে বিশেষ ডেনড্রাইটিক কোষের উপসেটে পার্থক্য করার নির্দেশ দেয়। রক্ত 118, 3311–3320, doi:10.1182/ব্লাড-2011-03-341065 (2011)। [পাবমেড: 21813450]25. ক্লার্ক এসআর এট আল। ওভালবুমিন-নির্দিষ্ট TCR ট্রান্সজেনিক লাইন OT-I এর বৈশিষ্ট্য: ইতিবাচক এবং নেতিবাচক নির্বাচনের জন্য MHC উপাদান। ইমিউনল সেল বায়োল 78, 110–117, doi:10.1046/ j৷{189}}.2000.00889.x (2000)৷ [পাবমেড: 10762410]26. জেহন ডি, লি এসওয়াই এবং বেভান এমজে সম্পূর্ণ কিন্তু খুব কম অ্যাফিনিটি অ্যান্টিজেনের প্রতি টি-কোষের প্রতিক্রিয়া হ্রাস পেয়েছে। প্রকৃতি 458, 211–214, doi:10.1038/Nature07657 (2009)। [পাবমেড: 19182777]27. কন্ড্রাটোভা এম এট আল। ক্যান্সারে সহজাত ইমিউন রেসপন্সের একটি মাল্টিস্কেল সিগন্যালিং নেটওয়ার্ক ম্যাপ সেল বৈচিত্র্যের স্বাক্ষর প্রকাশ করে। Nat Commun 10, 4808, doi:10.1038/s41467-019-12270-x (2019)। [পাবমেড: 31641119]

28. Bendall SC et al. মানব হেমাটোপয়েটিক ধারাবাহিকতা জুড়ে ডিফারেনশিয়াল ইমিউন এবং ড্রাগ প্রতিক্রিয়াগুলির একক-কোষ ভর সাইটোমেট্রি। বিজ্ঞান 332, 687–696, doi:10.1126/science.1198704 (2011)।[PubMed: 21551058]29. কিউ পি এট আল। SPADE-এর সাহায্যে উচ্চ-মাত্রিক সাইটোমেট্রি ডেটা থেকে একটি সেলুলার শ্রেণিবিন্যাস বের করা। Nat Biotechnol 29, 886–891, doi:10.1038/nbt.1991 (2011)। [পাবমেড: 21964415]30. কাওয়াই টি অ্যান্ড আকিরা এস টিএলআর সিগন্যালিং। সেল ডেথ ডিফারেন্স 13, 816–825, doi:10.1038/sj.cdd.4401850 (2006)। [পাবমেড: 16410796]31. সানচেজ-মেজোরাডা জি এবং রোজালেস সি ইমিউনোগ্লোবুলিন এফসি রিসেপ্টর দ্বারা সংকেত ট্রান্সডাকশন। J Leukoc Biol 63, 521–533 (1998)। [পাবমেড: 9581795]32. কৃষ্ণস্বামী এস এট আল। সিস্টেম বায়োলজি। একক-কোষ ডেটাতে টি সেল সিগন্যালিং এর শর্তাধীন ঘনত্ব-ভিত্তিক বিশ্লেষণ। বিজ্ঞান 346, 1250689, doi:10.1126/science.1250689 (2014)। [পাবমেড: 25342659]33. কিফার এফ এট আল। ম্যাক্রোফেজ এবং নিউট্রোফিলে এফসিগামা রিসেপ্টর সিগন্যালিংয়ের জন্য সাইক প্রোটিন টাইরোসিন কিনেস অপরিহার্য। Mol Cell Biol 18, 4209–4220 (1998)। [পাবমেড: 9632805]34. Braselmann S et al. R406, একটি মৌখিকভাবে উপলব্ধ প্লীহা টাইরোসিন কিনেস ইনহিবিটর এফসি রিসেপ্টর সিগন্যালিং ব্লক করে এবং ইমিউন জটিল-মধ্যস্থ প্রদাহ হ্রাস করে। J Pharmacol Exp Ther 319, 998– 1008, doi:10.1124/jpet.106.109058 (2006)। [পাবমেড: 16946104]35. Bruhns P et al. মানব Fcgamma রিসেপ্টর এবং মানুষের IgG সাবক্লাসের জন্য তাদের পলিমরফিক ভেরিয়েন্টের নির্দিষ্টতা এবং সখ্যতা। রক্ত 113, 3716–3725, doi:10.1182/ব্লাড-2008-09-179754 (2009)। [পাবমেড: 19018092]36. নিমারজাহান এফ অ্যান্ড রেভেচ জেভি ডাইভারজেন্ট ইমিউনোগ্লোবুলিন জি সাবক্লাস অ্যাক্টিভিটি নির্বাচনী এফসি রিসেপ্টর বাইন্ডিংয়ের মাধ্যমে। বিজ্ঞান 310, 1510-1512, doi:10.1126/science.1118948 (2005)। [পাবমেড: 16322460]37. জেফারিস আর রিকম্বিন্যান্ট অ্যান্টিবডি থেরাপিউটিকস: কর্মের প্রক্রিয়াগুলিতে গ্লাইকোসিলেশনের প্রভাব। Trends Pharmacol Sci 30, 356–362, doi:10.1016/j.tips.2009.04.007 (2009)। [পাবমেড: 19552968]38. তানজি এইচ, ওহিও ইউ, শিবাটা টি, মিয়াকে কে এবং শিমিজু টি অ্যাগোনিস্টিক লিগান্ড দ্বারা প্ররোচিত টোল-সদৃশ রিসেপ্টর 8 ডাইমারের কাঠামোগত পুনর্গঠন। বিজ্ঞান 339, 1426–1429, doi:10.1126/ science.1229159 (2013)। [পাবমেড: 23520111]39. Shultz LD et al. NOD/LtSz-এ হিউম্যান লিম্ফয়েড এবং মাইলয়েড সেল ডেভেলপমেন্ট-এ বলা হয়েছে IL2R গামা নাল ইঁদুরকে সংকলিত মানব হিমোপয়েটিক স্টেম সেল দিয়ে খোদাই করা হয়েছে। J Immunol 174, 6477–6489, doi:10.4049/J Immunol.174.10.6477 (2005)। [পাবমেড: 15879151]40. জিয়া জেড এট আল। CB17 SCID/বেইজ ইঁদুরে মানব অস্থি মজ্জা ফাইব্রোব্লাস্টিক সেল ইমপ্লান্টেশনের জন্য সহজাত ইমিউন প্রতিক্রিয়া। জে সেল বায়োকেম 98, 966–980, doi:10.1002/jcb.20730 (2006)। [পাবমেড: 16795075]41. ট্যানার এম এট আল। হারসেপটিন-প্রতিরোধী স্তন ক্যান্সারে আক্রান্ত রোগীর কাছ থেকে প্রতিষ্ঠিত একটি অভিনব কোষ লাইনের বৈশিষ্ট্য। মোল ক্যান্সার থার 3, 1585-1592 (2004)। [PubMed: 15634652]42.Luque-Cabal M, Garcia-Teijido P, Fernandez-Perez Y, Sanchez-Lorenzo L & Palacio-Vazquez I Mechanisms Behind the Resistance to Trastuzumab in HER2-প্রশস্ত স্তন এবং স্তন প্রসারিত করতে এটা. Clin Med Insights Oncol 10, 21–30, doi:10.4137/CMO.S34537 (2016)। [পাবমেড: 27042153]43. লি জেওয়াই এট আল। একটি বিপ্যারাটোপিক HER2-লক্ষ্যযুক্ত অ্যান্টিবডি-ড্রাগ কনজুগেট প্রাথমিক মডেলগুলিতে টিউমার রিগ্রেশনকে প্ররোচিত করে বা তার জন্য অযোগ্য হয়2-লক্ষ্যযুক্ত থেরাপি৷ ক্যান্সার সেল 29, 117–129, doi:10.1016/j.ccell.2015.12.008 (2016)। [পাবমেড: 26766593]44. Ning S, Pagano JS & Barber GN IRF7: সক্রিয়করণ, নিয়ন্ত্রণ, পরিবর্তন এবং কার্যকারিতা। জিন ইমিউন 12, 399–414, doi:10.1038/gene.2011.21 (2011)। [পাবমেড: 21490621]45. কাও কিউ এট আল। রেনাল F4/80 প্লাস CD11c প্লাস মনোনিউক্লিয়ার ফ্যাগোসাইট স্বাস্থ্য এবং অ্যাড্রিয়ামাইসিন নেফ্রোপ্যাথিতে ম্যাক্রোফেজের ফেনোটাইপিক এবং কার্যকরী বৈশিষ্ট্য প্রদর্শন করে। J Am Soc Nephrol 26, 349–363, doi:10.1681/ASN.2013121336 (2015)। [PubMed: 25012165]46. শেং জে এট আল। সাধারণ প্রচলিত টাইপ 2 ডেনড্রাইটিক কোষগুলির মধ্যে মনোসাইট-উত্পন্ন কোষগুলির একটি পৃথক উপসেট দক্ষতার সাথে ক্রস-প্রেজেন্ট করতে পারে। সেলের প্রতিনিধি 21, 1203–1214, doi:10.1016/ j.celrep.2017.10.024 (2017)। [পাবমেড: 29091760]

47. Knutson KL, Almand B, Dang Y & Disis ML Neu অ্যান্টিজেন-নেতিবাচক রূপগুলি নিউ ট্রান্সজেনিক ইঁদুরে নিউ-নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডি থেরাপির পরে তৈরি করা যেতে পারে। ক্যান্সার রেস 64, 1146-1151 (2004)। [পাবমেড: 14871850]48. ময়নিহান কেডি এট আল। সংমিশ্রণ ইমিউনোথেরাপির মাধ্যমে ইঁদুরের মধ্যে বৃহৎ প্রতিষ্ঠিত টিউমার নির্মূল করা যা সহজাত এবং অভিযোজিত ইমিউন প্রতিক্রিয়া নিযুক্ত করে। Nat Med 22, 1402–1410, doi:10.1038/nm.4200 (2016)। [PubMed: 27775706]49.Siebenlist U, Franzoso G & Brown K NF-Kappa B. Annu Rev Cell Biol 10, 405–455, doi:10.1146/annurev.cb.10.1041020 (10.10419) এর কাঠামো, নিয়ন্ত্রণ এবং কার্যকারিতা . [পাবমেড: 7888182]

চিত্র 6: CL264- ISACs ধারণ করে HER2 মাধ্যমে টিউমার ক্লিয়ারেন্স প্রকাশ করে জেনোগ্রাফ্ট এবং টি সেল-মিডিয়াটেড টিউমার ক্লিয়ারেন্স, ইমিউনোলজিক মেমরি, এবং একটি সিনজেনিক টিউমার মডেলে ছড়িয়ে পড়া এপিটোপ। (a) ISAC প্রজন্মের জন্য ব্যবহৃত T785 এবং CL264 সহায়কের রাসায়নিক কাঠামো। (b) HCC1954 টিউমার সেল লাইনের সাথে ইমপ্লান্ট করা NSG ইঁদুরগুলিকে এলোমেলো করা হয়েছিল যখন টিউমারের পরিমাণ 50 - 75 mm3 এ পৌঁছেছিল। 5 মিলিগ্রাম/কেজি ট্রাস্টুজুমাব, ট্রাস্টুজুমাব টি{{11}আইএসএসি বা ট্রাস্টুজুমাব সিএল264-আইএসএসি-এর ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশনের মাধ্যমে একবার ইঁদুরের চিকিৎসা করা হয়েছিল। টিউমারগুলি প্রশাসনের 20 ঘন্টা পরে সংগ্রহ করা হয়েছিল, একটি একক কোষ সাসপেনশনে প্রক্রিয়া করা হয়েছিল এবং টিউমার-অনুপ্রবেশকারী মাইলয়েড এপিসিগুলির সক্রিয়করণের মূল্যায়ন করতে ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। (cd) NSG বা Rag2/IL2rg ডাবল নকআউট ইঁদুরগুলিকে নির্দেশিত মানব টিউমার সেল লাইনের সাথে রোপণ করা হয়েছিল এবং টিউমারের পরিমাণ 50 – 75 mm3 (HCC1954) বা 75 – 150 mm3 (JIMT-1) এ পৌঁছলে এলোমেলো করা হয়েছিল। 5 মিগ্রা/কেজি রিটুক্সিমাব, ট্রাস্টুজুমাব, ট্রাস্টুজুমাব টি785-আইএসএসি, ট্রাস্টুজুমাব সিএল264-আইএসএসি বা সংশ্লিষ্ট আইসোটাইপ- দিয়ে ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশনের মাধ্যমে ইঁদুরের চিকিত্সা করা হয়েছিল-ISACs, প্রতি 5 দিনে মোট 6টি চিকিত্সার জন্য। (ঙ) rHER2 এক্সপ্রেশনটি CT26-rHER2 টিউমার কোষে ইমপ্লান্টেশনের আগে (বাম প্রবাহ প্লট) এবং টিউমারে নয় দিন-পরবর্তী ইমপ্লান্টেশন (ডান প্রবাহ প্লট) ফ্লোরোসেন্টলি-কঞ্জুগেটেড অ্যান্টি-আরএইচইআর2 অ্যান্টিবডি সহ ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল। (লাল) বা আইসোটাইপ নিয়ন্ত্রণ (নীল)। (f) Balb/c ইঁদুরগুলিকে CT26-rHER2 টিউমার সেল লাইনের সাথে রোপণ করা হয়েছিল এবং টিউমারের পরিমাণ 50 এ পৌঁছলে এলোমেলো করা হয়েছিলmm3 তারপরে ইঁদুরকে 10 মিলিগ্রাম/কেজি মাউস অ্যান্টি-ইঁদুর দিয়ে ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশনের মাধ্যমে চিকিত্সা করা হয়েছিলHER2 বা মাউস অ্যান্টি-র‍্যাট HER2 CL264-আইএসএসি প্রতি 5 দিনে মোট 6টি চিকিত্সার জন্য। দেখানো ডেটা প্রতি বাহুতে 8টি ইঁদুর সহ 1টি পরীক্ষা থেকে এবং 3টি পরীক্ষার প্রতিনিধি।

(g) Anti-rat HER2 CL264-ISAC treated mice that experienced complete tumor regression for >তাদের শেষ চিকিৎসার 21 দিন পর প্যারেন্টাল CT26 (বাম ফ্ল্যাঙ্ক) এবং 4T1 সেল লাইন (ডান ফ্ল্যাঙ্ক), CD4 এবং CD8 T কোষ হ্রাস (n =3 প্রতিটি) সহ বা ছাড়াই চ্যালেঞ্জ করা হয়েছিল। প্যারেন্টাল CT26 এবং 4T1 সেল লাইনের সাথে চ্যালেঞ্জ করা টিউমার নেভ মাইস (n=6) নিয়ন্ত্রণ হিসাবে অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল। (ai) প্রতিটি বাহুতে 3-6টি ইঁদুরের সাথে পৃথক পরীক্ষা থেকে ডেটা দেখানো হয় এবং প্রতিটি পরীক্ষায় প্রতি বাহুতে ন্যূনতম 3টি ইঁদুরের সাথে 1-4টি পরীক্ষার প্রতিনিধিত্ব করে৷ ডেটা SEM এর সাথে গড় হিসাবে দেখানো হয় এবং পরিসংখ্যান *P দিয়ে দেখানো হয়<><0.01,><0.001, and=""><>

50. Vogelpoel LT et al. TLRs, IL-1R, এবং IFNgammaR-এর সাথে FcgammaRIIa ক্রস-টক বেছে বেছে মানুষের মাইলয়েড কোষে সাইটোকাইন উৎপাদন মডিউল করে। ইমিউনোবায়োলজি 220, 193–199, doi:10.1016/j.imbio.2014.07.016 (2015)। [পাবমেড: 25108563]51. Daley JM, Thomas AA, Connolly MD, Reichner JS এবং Albina JE Ly6G-নির্দিষ্ট মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে ইঁদুরের নিউট্রোফিলগুলিকে হ্রাস করতে। J Leukoc Biol 83, 64–70, doi:10.1189/ jlb.0407247 (2008)। [পাবমেড: 17884993]52. ব্রোজ এমএল এট আল। টিউমার মাইলয়েড কম্পার্টমেন্ট বিচ্ছিন্ন করা বিরল সক্রিয় অ্যান্টিজেন-উপস্থাপক কোষগুলিকে প্রকাশ করে যা টি কোষের অনাক্রম্যতার জন্য গুরুত্বপূর্ণ। ক্যান্সার সেল 26, 938, doi:10.1016/ j.ccell.2014.11.010 (2014).53. Spranger S, Dai D, Horton B & Gajewski TF টিউমার-রেসিডিং Batf3 ডেনড্রাইটিক কোষ ইফেক্টর টি সেল ট্রাফিকিং এবং অ্যাডপ্টিভ টি সেল থেরাপির জন্য প্রয়োজন। ক্যান্সার সেল 31, 711–723 e714, doi:10.1016/j.ccell.2017.04.003 (2017)। [পাবমেড: 28486109]54. Zunder ER et al. ডাবল-ফিল্টারিং স্কিম এবং একক-কোষ ডিকনভোলিউশন অ্যালগরিদম সহ প্যালাডিয়াম-ভিত্তিক ভর ট্যাগ সেল বারকোডিং। Nat Protoc 10, 316–333, doi:10.1038/nprot.2015.020 (2015)। [পাবমেড: 25612231]