গসিপিট্রিন, একটি প্রাকৃতিকভাবে ঘটতে থাকা ফ্ল্যাভোনয়েড, আয়রন-প্ররোচিত নিউরোনাল এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল ক্ষতির অংশ 3 কমিয়ে দেয়

অনুগ্রহ করে যোগাযোগ করুনoscar.xiao@wecistanche.comআরও তথ্যের জন্য

4. উপাদান এবং পদ্ধতি 4.1. রিএজেন্ট

সমস্ত রিএজেন্ট সিগমা-অলড্রিচ কর্পোরেশন (সেন্ট লুইস, এমও, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। Gos-এর স্টক সলিউশনগুলি DMSO-তে প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং 1/1000 (o/o) dilution এ সেল কালচার বা মাইটোকন্ড্রিয়াল প্রস্তুতিতে যোগ করা হয়েছিল।

আরো জানতে এখানে ক্লিক করুন

4.2.উদ্ভিদের উপাদান

Talipariti elatum (Sw.)(Syn. Hisbiscus elatus Sw.)(Malvaceae) থেকে উদ্ভিদ সামগ্রী (ফুল) 2020 সালের মার্চ মাসে সেন্টার ফর রিসার্চ অ্যান্ড বায়োলজিক্যাল ইভালুয়েশন, ইনস্টিটিউট অফ ফার্মাসিউটিক্যাল অ্যান্ড ফুড সায়েন্সেস, লা লিসা এর আশেপাশের এলাকা থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল , হাভানা, কিউবা। এগুলি কামাগুয়ে বিশ্ববিদ্যালয়ের হার্বেরিয়ার বিশেষজ্ঞদের দ্বারা প্রমাণিত হয়েছে "ইগনাসিও অ্যাগ্রামোন্টে লয়নাজ", যেখানে ভাউচারের নমুনাগুলি জমা করা হয়েছিল: G. Pardo., HPC-12 520 (HIPC)৷

Cistanche রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা উন্নত করতে পারে

4.3। নির্যাস এবং নমুনা প্রস্তুতি

দ্যইথানোলিকতেলাটামের লাল ফুল থেকে নির্যাস প্রস্তুত করা হয়েছিল যেমন পূর্বে রিপোর্ট করা হয়েছিল [২৯]। রোটোবাষ্পীভবনের পরে, কঠিন পদার্থগুলিকে পুনরায় স্ফটিককরণ পদ্ধতি দ্বারা শুদ্ধ করা হয়েছিল[29]। বিচ্ছিন্ন যৌগগুলি 1D 'H(400 MHz) এবং 13C (100 MHz) NMR দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল। NMR ডেটা প্রক্রিয়াকরণ MestReNova সফ্টওয়্যার সংস্করণ 6.1 দিয়ে সম্পাদিত হয়েছিল৷{9}} Windows এর জন্য (পরিপূরক সামগ্রী, চিত্র S1-S3)৷ Gos থেকে সংগৃহীত NMR ডেটা পূর্ববর্তী ফলাফলের সাথে তুলনা করা হয়েছিল [56]।

4.4। UV/Vis এবং IR স্পেকট্রোস্কোপিক স্টাডিজ

UV/Vis স্পেকট্রা 10 মিমি অপটিক্যাল পাথ দৈর্ঘ্যের কোয়ার্টজ কিউভেটে সঞ্চালিত হয়েছিল এবং একটি UV-Vis-এ শোষণ রেকর্ড করা হয়েছিলস্পেকট্রোফটোমিটারAmersham BioSci (Little Chalfont, UK) থেকে Ultrospec 2100 Pro ঘরের তাপমাত্রায় ওয়েভ স্ক্যান সফটওয়্যার (SWIFT I, 1.2) সহ একটি কম্পিউটারের সাথে সংযুক্ত। Gos এবং লৌহঘটিত আয়নগুলির মধ্যে মিথস্ক্রিয়া UV/Vis বর্ণালীতে পরিবর্তনগুলি পর্যবেক্ষণ করে পরিমাপ করা হয়েছিল। Gos এবং Fe(II) আয়নের মধ্যে stoichiometric অনুপাত নির্ধারণ করতে কাজের পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল। Gos এবং Fe(lI) এর স্টক সমাধানগুলি প্রতিদিন যথাক্রমে মিথানল এবং ফসফেট বাফারে প্রস্তুত করা হয়েছিল। IR স্পেকট্রা একটি JASCO FI/IR-440 স্পেকট্রোমিটারে নমুনাগুলি প্রস্তুত করার জন্য পটাসিয়াম ব্রোমাইড পেলেট ব্যবহার করে 4000-400 সেমি-I পরিসরে রেকর্ড করা হয়েছিল।

4.5। কোষ সংস্কৃতি

মাউসহিপ্পোক্যাম্পালএইচটি-22 কোষ (এটিসিসি) 10 শতাংশ এফসিএস, এল-গ্লুটামিন (1 মিমি), এবং পেনিসিলিন/স্ট্রেপ্টোমাইসিন (1 শতাংশ), এবং আর্দ্র 5 শতাংশ CO2-তে 37 ডিগ্রিতে রক্ষণাবেক্ষণ করা একটি DMEM মাধ্যমের মধ্যে সংষ্কৃত হয়েছিল ইনকিউবেটর কোষগুলিকে (2×104 কোষ/কূপ) 37C তাপমাত্রায় 24 ঘন্টার জন্য 200 μL কালচার মিডিয়ামে 96-ওয়েল প্লেট (Nunc, Roskilde, Denmark）) তে বীজ করা হয়েছিল।

4.6.কোষের অক্সিডেটিকো ক্ষতি এবং Gos এর সাথে চিকিত্সার আনয়ন

Gos এর নিউরোপ্রোটেক্টিভ অ্যাকশন （0। , এবং সাইট্রেট (1 মিমি)। 24 ঘন্টা পরে, কোষের সুপারনাট্যান্ট সরানো হয়েছিল এবং কোষের কার্যক্ষমতা [3-(4,5- দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল)ডাইমেথাইলথিয়াজল-2-yl)-2,5-ডিফেনাইল টেট্রাজোলিয়াম ব্রোমাইড] (এমটিটি) বর্ণমিত্রিক অ্যাস।

4.7। কোষের কার্যকারিতা পরীক্ষা

চিকিত্সার পরে, কোষগুলি (2 × 104) 10 uM MTT দিয়ে 3 ঘন্টা 37C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। রঙিন MTT ডেরিভেটিভটি তখন DMSO-এর 50μL-এ দ্রবীভূত হয় এবং একটি মাইক্রোপ্লেট রিডারে (FLUOstar Omega, BMG LABTECH, Ortenberg, Germany) শোষণকে 570 nm গণনা করা হয়। কোষের কার্যক্ষমতা অপরিশোধিত কোষগুলির নিয়ন্ত্রণের বিরুদ্ধে শতাংশ হিসাবে প্রকাশ করা হয়।

4.8. HT-22 কোষে মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন পটেনশিয়াল (△Y) অ্যাস

মাইটোকন্ড্রিয়ালফ্লুরোসেন্ট ক্যাটানিক প্রোব রোডামাইন 123 [57,58] এর কোষ ধরে রাখার ভিত্তিতে ঝিল্লির সম্ভাব্যতা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। 2 ঘন্টা আয়রন/অ্যাসকরবেট আঘাতের পরে （নিয়ন্ত্রণ） বা Gos এর উপস্থিতি （0৷{5}} μM） বা Trolox（500 μM）), নিউরোনাল কোষ ×10*）কে 1 μM রোডামাইন 123 দিয়ে 10 মিনিট ইনকিউব করা হয়েছিল। সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে এবং 0.1 শতাংশ ট্রাইটন এক্স-100 এর 1 মিলি লিটারে পুনরুদ্ধার করার পরে, একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার (FLUOstar Omega, BMG, BMG) ব্যবহার করে সুপারনাট্যান্টে প্রোবের ঘনত্ব নির্ধারণ করা হয়েছিল। LABTECH, Ortenberg, Germany) 505/535 nm উত্তেজনা/নিঃসরণ তরঙ্গদৈর্ঘ্য জোড়ায়। উপাত্তগুলিকে শতকরা হিসাবে প্রকাশ করা হয় বনাম অপরিশোধিত কোষগুলির নিয়ন্ত্রণ।

4.9.ATP পরীক্ষা

সেলুলার ATP ফায়ারফ্লাই লুসিফেরিন/লুসিফেরেস অ্যাস সিস্টেম [59] AY এর মতো একই অবস্থার অধীনে নির্ধারিত হয়েছিল। মাইক্রোপ্লেট রিডার (ফ্লুওস্টার ওমেগা, বিএমজি ল্যাবটেক, ওর্টেনবার্গ, জার্মানি) এর লুমিনেসেন্স বিকল্প ব্যবহার করে নির্মাতার নির্দেশ অনুসারে সিগমা-অলড্রিচ অ্যাস কিট দিয়ে বায়োলুমিনেসেন্স পরিমাপ করা হয়েছিল।

4.10.প্রাণী

পুরুষ উইস্টার ইঁদুর (200 গ্রাম) সেন্টার ফর দ্য প্রোডাকশন অফ ল্যাব-ওরেটরি অ্যানিম্যালস (CENPALAB এর স্প্যানিশ সংক্ষিপ্ত রূপ, হাভানা, কিউবা অনুসারে) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল এবং তাপমাত্রায় পরীক্ষা-নিরীক্ষার আগে 1 সপ্তাহের জন্য প্রাণীদের যত্নের সুবিধায় রাখা হয়েছিল- নিয়ন্ত্রিত পরিবেশ (22-24 ডিগ্রী), একটি 12-ঘন্টা আলো/অন্ধকার চক্রের সাথে এবং খাদ্য ও জলের অ্যাড লিবিটাম অ্যাক্সেস সহ।

4.11.মাইটোকন্ড্রিয়াল আইসোলেশন

ইঁদুরের ফোরব্রেন মাইটোকন্ড্রিয়া ডিফারেনশিয়াল সেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল যেমন পূর্বে বর্ণিত হয়েছে [60]। ডিজিটোনিন 10 শতাংশ, সিনাপটোসোমগুলিকে ব্যাহত করতে এবং নন-সিনাপটোসোমাল প্লাস সিনাপটোসোমাল মাইটোকন্ড্রিয়ার মিশ্রণ তৈরি করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। পুরো প্রক্রিয়াটি 4 ডিগ্রিতে বাহিত হয়েছিল। শ্বাসযন্ত্রের নিয়ন্ত্রণ অনুপাত (স্টেট 3/স্টেট 4 রেসপিরেটরি রেট) সবসময় 4.5 থেকে 6.0 রেঞ্জের মধ্যে ছিল, সাবস্ট্রেট হিসাবে 5 মিমি সাক্সিনেট ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়।

4.12। ক্রমাগত-মনিটরিং মাইটোকন্ড্রিয়াল অ্যাসেস

মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেন পটেনশিয়াল স্পেকট্রোফ্লোরিমেট্রিকভাবে 10 μM safranine O ব্যবহার করে একটি মাইক্রোপ্লেট রিডারে প্রোব 【58,61】 ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল এই অ্যাসগুলি 0.1 মিমি ইজিটিএ এবং 2 মিমি কে, এইচপিওএ-এর উপস্থিতিতে সম্পাদিত হয়েছিল। মাইটোকন্ড্রিয়াল ফোলা 540 এনএম-এ স্পষ্ট শোষণ হ্রাস থেকে বর্ণালী ফোটোমেট্রিকভাবে অনুমান করা হয়েছিল। অ্যাসেসের জন্য, 30 ডিগ্রিতে 125 মিমি সুক্রোজ, 65 মিমি কেসি, এবং 10 মিমি HEPES-KOH, pH 7.4, সমন্বিত একটি স্ট্যান্ডার্ড মিডিয়ামে মাইটোকন্ড্রিয়াকে 5 মিমি পটাসিয়াম সক্সিনেট (প্লাস 2.5 ইউএম রোটেনোন) দিয়ে শক্তিশালী করা হয়েছিল।

4.13.লিপিড পারক্সিডেশন অ্যাসেস

ম্যালন্ডিয়ালডিহাইড (এমডিএ) প্রজন্ম [২৮,৬২] থেকে লিপিড পারক্সিডেশন অনুমান করা হয়েছিল। মাইটোকন্ড্রিয়া(1 mg/mL) 4 mM tert-butylhydroperoxide বা 50uM Fe(II) প্লাস 1 mM সোডিয়াম সাইট্রেট 37 ডিগ্রী C.MDA ঘনত্বের সংস্পর্শে এসেছিল তার বিলুপ্ত-tion সহগ (c =1) ব্যবহার করে গণনা করা হয়েছিল। 56×105 M-1.cm-1)।

4.14। Fe(II) ঘনত্ব নির্ধারণ

Fe(ⅡI) এর ঘনত্ব 10 mM ফসফেট বাফার pH 6.5(2 mL) এ 1,10-ফেনানথ্রোলিন (5 মিমি), যেমন পূর্বে বর্ণিত হয়েছে [২৪,২৮] সহ একটি লাল কমপ্লেক্স গঠনের মাধ্যমে নির্ধারিত হয়েছিল।

4.15.অক্সিজেন খরচ মনিটরিং

Fe(ⅡI) অক্সিডেশনের সাথে সম্পর্কিত O-এর ব্যবহার একটি ক্লার্ক-টাইপ ইলেক্ট্রোড (হ্যানসেটেক ইন্সট্রুমেন্টস, পেন্টনি, কিংস লিন, ইউকে) দিয়ে পরিমাপ করা হয়েছিল একটি 1।{2}}মিলি গ্লাস চেম্বারে একটি চৌম্বকীয় আলোড়ন দিয়ে সজ্জিত, 30 ডিগ্রী। অক্সিজেন খরচের হার (ROC) প্রতি মিনিটে nmol O2/mL হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল।

4.16৷{2}}ডিঅক্সিরাইবোজ অক্সিডেশন অ্যাসালি৷

হাইড্রক্সিল("OH) র্যাডিকালগুলির গঠন অনুমান করা হয়েছিল 2-এমডিএ-তে ডিঅক্সিরাইবোজ অবক্ষয় অনুসরণ করে, যা এর বিলুপ্তি সহগ (e=1.56×10 ডিগ্রি M-1) থেকে গণনা করা হয়েছিল cm-) পূর্বে রিপোর্ট হিসাবে [26,27].

4.17। Gos-Fe(II) কমপ্লেক্স সনাক্তকরণ

Fe（ⅡI）（FeCl,0.4-1.6 μM）2 mL（10 mM）ফসফেট বাফার（pH 6.5）এ যোগ করা হয়েছিল যাতে 2 mM সাইট্রেট এবং 1.6 μM Gos রয়েছে। হিটাচি 2001 স্পেকট্রোফটোমিটারে (হিটাচি, টোকিও) 28 ডিগ্রিতে 200-600 এনএম থেকে একটি তরঙ্গদৈর্ঘ্য স্ক্যান করা হয়েছিল।

4.18। পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

গ্রাফপ্যাড প্রিজম 5৷{1}}(গ্রাফপ্যাড সফ্টওয়্যার, Inc., সান দিয়েগো, CA, USA) ব্যবহার করা হয়েছিল৷ একমুখী ANOVA ব্যবহার করে পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ করা হয়েছিল, তারপরে জোড়া-ভিত্তিক তুলনার জন্য স্টুডেন্ট-নিউম্যান-কিউলস পোস্টহক পরীক্ষা করা হয়েছিল। পি সঙ্গে ফলাফল<0.05 were="" considered="" statistically="" significant.="" the="" half-effective="" or="" inhibitory="" concentrations="" were="" estimated="" following="" a="" non-linear="" regression="">

সম্পূরক উপকরণ: নিম্নলিখিত অনলাইন উপলব্ধ. চিত্র S1: DMSO-do-তে গসিপিট্রিন-এর lH-NMR(400 MHz) বর্ণালী, চিত্র S2:13C-NMR(101 MHz) DMSO-d-এ গসিপিট্রিনের বর্ণালী, চিত্র S3: DMSO-dg-এ গসিপিট্রিনের HSQC স্পেকট্রাম। সারণি S1:'H (400 MHz) এবং 13C (100 MHz) আগের রিপোর্টের বিপরীতে গসিপিট্রিনের ডেটা।

লেখকের অবদান:ধারণাগতকরণ, G.LP.-A.; পদ্ধতি, MAB-V., RFD, YM-P. এবং GLP-A.; বৈধতা, MAB-V., JM-P., YM-P, এবং RFD; আনুষ্ঠানিক বিশ্লেষণ, YM-P, JM-P, RF-A। এবং GLP-A.; তদন্ত, MAB-V, AA-L., DA-A., YM-P., RFDand GLP-A.; ডেটা কিউরেশন, MAB-V.YM.-PJM-P. এবং RF-A.; লেখা—মূল খসড়া প্রস্তুতি, MAB-V.; লেখা—পর্যালোচনা এবং সম্পাদনা, IM.-P, RF-A., YM-P এবং GLP-A.; ভিজ্যুয়ালাইজেশন, YM-P., এবং GLP-A.; তত্ত্বাবধান, GLP-A.; তহবিল অধিগ্রহণ, GLP-A. সমস্ত লেখক পাণ্ডুলিপির প্রকাশিত সংস্করণ পড়েছেন এবং সম্মত হয়েছেন৷

অর্থায়ন: এই গবেষণা VLIR (বেলজিয়াম) দ্বারা অর্থায়ন করা হয়েছিল; অনুদান নম্বর CU2018TEA457A103, এবং Ministrio de Ciencia Tecnologia y Medio Ambiente (Cuba); অনুদান নম্বর PN223LH010-035। APC VLIR (বেলজিয়াম) দ্বারা অর্থায়ন করা হয়েছিল; অনুদান নম্বর CU2018TEA457A103।

প্রাতিষ্ঠানিক পর্যালোচনা বোর্ডের বিবৃতি:অধ্যয়নটি হেলসিঙ্কির ঘোষণার নির্দেশিকা অনুসারে পরিচালিত হয়েছিল এবং দ্য ইনস্টিটিউট অফ ফার্মাসিউটিক্যাল অ্যান্ড ফুডস সায়েন্সেস, হাভানা ইউনিভার্সিটি, কিউবা (প্রটোকল কোড IFAL-CEI 087-2019, অক্টোবর 2019) থেকে প্রাতিষ্ঠানিক নীতিশাস্ত্র কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল। .

অবহিত সম্মতি বিবৃতি: প্রযোজ্য নয়। ডেটা উপলব্ধতা বিবৃতি: প্রযোজ্য নয়।

স্বীকৃতি:এই কাজটি আংশিকভাবে Vlaamse Interuniversitaire Raad (VLIR)-Belgium/Ministerio de Educacion Superior (MES)-Cuba Project CU2018TEA457A103 দ্বারা সমর্থিত ছিল, যা নিবন্ধ প্রক্রিয়াকরণের ফিও কভার করে, এবং প্রকল্প PN223LH010-035 দ্বারা "Ministerio de" Ciencia Tecnologia y Medio Ambiente (Cuba), Programa de Ciencias Basicas y Naturales"। স্বার্থের দ্বন্দ্ব: লেখক কোন স্বার্থের দ্বন্দ্ব ঘোষণা করেন না।

নমুনা প্রাপ্যতা: যৌগগুলির নমুনা সংশ্লিষ্ট লেখকের কাছ থেকে পাওয়া যায়।