কোষ্ঠকাঠিন্য উপশমের জন্য অ্যাঞ্জেলিকা সিনেনসিস সিস্তানচে ফাইবার যৌগের কার্যকারিতা এবং প্রক্রিয়া

বিমূর্ত:কোষ্ঠকাঠিন্যএকটি প্রচলিত ব্যাধি যা মানুষের জীবনের মানকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত করতে পারে এবং কিছু সম্পর্কিত রোগের ঝুঁকি বাড়াতে পারে। এই গবেষণায়, লোপেরামাইড হাইড্রোক্লোরাইড ব্যবহার করে দীর্ঘস্থায়ী কোষ্ঠকাঠিন্যের মাউস মডেলটি প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল। ইঁদুরকে একটি অ্যাঞ্জেলিকা সিনেনসিস সিস্তানচে ফাইবার যৌগ তৈরি করা হয়েছিল, যার মধ্যে ডাং গুই [অ্যাঞ্জেলিকা সিনেনসিস (অলিভ) ডিলস],রউ কং রং (Cistanche deserticolaY.C.Ma), গমের ফাইবার, এবং কম আণবিক-ওজন জাইলান উচ্চ ডোজে (3.6 g·kg-1, 30বার প্রস্তাবিত মানব ডোজ) এবং কম ডোজ (0.6 g·kg{{8} }, 5 বার প্রস্তাবিত মানব ডোজ) 14 দিনের জন্য। সমীক্ষাটি মল আকারবিদ্যা পর্যবেক্ষণ করে, জলের পরিমাণ পরিমাপ করে এবং ছোট অন্ত্রের গতিশীলতা পরীক্ষা পরিচালনা করে যৌগটির থেরাপিউটিক কার্যকারিতা মূল্যায়ন করে। উপরন্তু, মোটিলিন (MTL), গ্যাস্ট্রিন (GAS), ইনফ্ল্যামেটরি ফ্যাক্টর ইন্টারলিউকিন-1 (IL-1), এবং টিউমার নেক্রোসিস সহ গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল হরমোনের সিরাম স্তরের মূল্যায়নের জন্য এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস (ELISA) পরিচালিত হয়েছিল। - (TNF-)। কোলনিক টিস্যুর ক্ষতির মূল্যায়ন করার জন্য H&E স্টেনিং সহ হিস্টোপ্যাথোলজিক্যাল পরীক্ষা নিযুক্ত করা হয়েছিল। উপরন্তু, কোলনে অ্যাকোয়াপোরিন-3 (AQP3) এবং সি-কিটের এক্সপ্রেশন লেভেল পরীক্ষা করার জন্য ওয়েস্টার্ন ব্লট এবং ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি পরীক্ষা করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে অ্যাঞ্জেলিকা সিনেনসিস সিস্তানচে ফাইবার যৌগ মলের অঙ্গসংস্থানের উন্নতি করতে পারে, মল জলের পরিমাণ বাড়াতে পারে এবং ইঁদুরের ছোট অন্ত্রের ট্রানজিট হার বাড়াতে পারে। উপরন্তু, গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল হরমোনের সিরাম স্তরে একটি উল্লেখযোগ্য উচ্চতা এবং প্রদাহজনক উপাদানগুলির স্তরে একটি উল্লেখযোগ্য হ্রাস ছিল। কোলনিক হিস্টোপ্যাথোলজিকাল ক্ষতির উন্নতির সাথে কোলোনিক ওয়াটার চ্যানেল প্রোটিন AQP3 এর অভিব্যক্তিতে উল্লেখযোগ্য হ্রাস এবং সি-কিট এক্সপ্রেশনে উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি ছিল। এই ফলাফলগুলি সম্মিলিতভাবে একটি ডোজ-প্রতিক্রিয়া সম্পর্কের উপস্থিতির পরামর্শ দিয়েছে। এই ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে অ্যাঞ্জেলিকাসিনেনসিস সিস্তানচে ফাইবার যৌগ কার্যকরভাবে ইঁদুরের কোষ্ঠকাঠিন্য দূর করে। ইটাস্যাকশন কোলোনিক ওয়াটার চ্যানেল প্রোটিন AQP3 andc-Kit এক্সপ্রেশনের নিয়ন্ত্রণের সাথে, সিরাম প্রদাহজনক কারণ এবং গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল হরমোনের মডুলেশনের সাথে যুক্ত। এই পরীক্ষাটি জিনান ইউনিভার্সিটির অ্যানিমাল এক্সপেরিমেন্ট এথিক্স কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল।

কীওয়ার্ড:কোষ্ঠকাঠিন্য; অন্ত্রের তৈলাক্তকরণ এবং কোষ্ঠকাঠিন্য উপশম; ফাংশানাল খাদ্য; কোলন; প্রথাগত চীনা মেডিসিন

CISTANCHE কাজ করতে কতক্ষণ সময় নেয়?

কোষ্ঠকাঠিন্যইহা একটিসাধারণ গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল রোগ. The global prevalence of constipation in the elderly (>60 বছর বয়সী) হল 18.9%[1], এবং মহিলাদের মধ্যে প্রাদুর্ভাব প্রায়ই বেশি হয়[2]। এটি মলত্যাগে অসুবিধা এবং ঘন ঘন কোষ্ঠকাঠিন্য দ্বারা চিহ্নিত করা হয়। মল হ্রাস এবং শক্ত হয়ে যাওয়া, ইত্যাদি, যা শারীরিক অস্বস্তি এবং গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল কর্মহীনতার দিকে পরিচালিত করে এবং এমনকি গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল রোগ, কার্ডিওভাসকুলার রোগ [3], ইত্যাদিকে প্ররোচিত বা বাড়িয়ে তোলে, যা জীবনের মানকে গুরুতরভাবে প্রভাবিত করে। ঐতিহ্যগত চীনা ওষুধের প্রেসক্রিপশনগুলি কোষ্ঠকাঠিন্যের উন্নতির জন্য ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয় এবং এর ভাল এবং নির্দিষ্ট ক্লিনিকাল প্রভাব রয়েছে [4,5]। এই গবেষণায় ব্যবহৃত অ্যাঞ্জেলিকা এবং সিস্তানচে ডেসার্টিকোলা ফাইবার যৌগটি সিস্তানচে ডেজার্টিকোলা, অ্যাঞ্জেলিকা সাইনেনসিস, গমের ফাইবার এবং জাইলোলিগোস্যাকারাইড থেকে প্রস্তুত করা হয়েছে। Cistanche deserticola এবং Angelica sinensis হল ল্যাক্সেটিভের দুটি সাধারণভাবে ব্যবহৃত ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধ, যা অন্ত্রের কার্যকারিতা নিয়ন্ত্রণে এবং কোষ্ঠকাঠিন্যের উন্নতির প্রভাব রাখে। [6-9], দুটি ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধের উৎস আমার দেশে ওষুধ এবং খাবারের মতোই। তাদের সম্মিলিত ব্যবহার কিউই এবং রক্ত ​​পুনরায় পূরণ এবং ইয়িন এবং ইয়াংকে সামঞ্জস্যপূর্ণ করার প্রভাব অর্জন করতে পারে। গমের ফাইবার অদ্রবণীয় এবং দ্রবণীয় খাদ্যতালিকাগত ফাইবার সমৃদ্ধ, যা অন্ত্রের পেরিস্টালসিস এবং মলত্যাগকে উন্নীত করতে পারে এবং প্রায়ই কোষ্ঠকাঠিন্যের চিকিত্সার জন্য একটি সহায়ক ওষুধ হিসাবে ব্যবহৃত হয়; xylo-oligosaccharide হল একটি কার্যকরী অলিগোস্যাকারাইড যা অন্ত্রের উদ্ভিদকে নিয়ন্ত্রণ করতে পারে, যার ফলে অন্ত্রের পেরিস্টালসিসকে উদ্দীপিত করে। , মলের আর্দ্রতা বৃদ্ধি [১০], চারটি স্বাদ একত্রিত করুন এবং রোগের মূল কারণের চিকিৎসা করুন। এই অধ্যয়নের লক্ষ্য কোষ্ঠকাঠিন্য ইঁদুরের উপর এই অ্যাঞ্জেলিকা এবং সিস্টানচে ডেজার্টিকোলা ফাইবার যৌগটির কার্যকারিতা মূল্যায়ন করা এবং এর সম্ভাব্য কার্যপ্রণালী অন্বেষণ করা।

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

পরীক্ষামূলক প্রাণী: 40টি নির্দিষ্ট প্যাথোজেন-মুক্ত (SPF) গ্রেডের পুরুষ কুনমিং ইঁদুর, 4 থেকে 5 সপ্তাহ বয়সী, বেইজিং ওয়েইটং লিহুয়া এক্সপেরিমেন্টাল অ্যানিমাল টেকনোলজি কোং, লিমিটেড, লাইসেন্স নম্বর SCXK (গুয়াংডং) 2021-0011 থেকে কেনা হয়েছিল পরিবেষ্টিত তাপমাত্রা 22 ± 2 ডিগ্রী, আর্দ্রতা 50% ± 10%, এবং দিন এবং রাতের চক্র 12 ঘন্টা/12 ঘন্টা। পরীক্ষামূলক প্রোটোকল এবং পদ্ধতিগুলি প্রাণীর ব্যবহার এবং যত্নের নৈতিক নীতিগুলি মেনে চলে এবং জিনান বিশ্ববিদ্যালয়ের অ্যানিমেল এক্সপেরিমেন্টেশন এথিক্স কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল।

পরীক্ষার উপাদান: অ্যাঞ্জেলিকা সিনেনসিস এবং সিস্তানচে ডেসার্টিকোলা ফাইবার যৌগ তৈরি করা হয় অ্যাঞ্জেলিকা সিনেনসিস এবং সিস্তানচে ডেজার্টিকোলা থেকে, যা জল দিয়ে বের করা হয়, ঘনীভূত করা হয়, শুকানো হয় এবং একটি শুকনো পেস্ট পাউডার পেতে চূর্ণ করা হয় (পেস্টের ফলন 52.95%)। শুকনো পেস্ট পাউডার গমের ফাইবার এবং জাইলো-অলিগোস্যাকারাইডের সাথে মিশ্রিত করা হয় পরবর্তীতে ব্যবহারের জন্য। Angelica sinensis (ব্যাচ নম্বর 230404CP108) এবং Cistanche deserticola (ব্যাচ নম্বর 230303CP109) Hebei Wanxiu Pharmaceutical Co., Ltd. থেকে কেনা হয়েছিল এবং চীনা ফার্মাকোপিয়ার 2020 সংস্করণ মেনে চলার জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল৷ Xylo-oligosaccharides Shandong Bailong Chuangyuan Biotechnology Co., Ltd থেকে কেনা হয়েছিল। ব্যাচ নম্বর হল 20210829026, এবং পরিদর্শন GB/T35545 এর সাথে সঙ্গতিপূর্ণ; গমের ফাইবার আসে J. Rettenmaier & Söhne GmbH + Co KG থেকে, এবং ব্যাচ নম্বর হল 07501230126। একজন 60 কেজি প্রাপ্তবয়স্কের উপর ভিত্তি করে, মানুষের জন্য অ্যাঞ্জেলিকা এবং সিস্টানচে ফাইবার যৌগের প্রস্তাবিত ডোজ হল 7.118 g·d-1 , যার মধ্যে গমের ফাইবারের ডোজ হল 3.5g·d-1। এই যৌগটির সামঞ্জস্য হল angelica: cistanche: wheat fiber: xylooligosaccharides=2:2:3:2 (অশোধিত ওষুধের উপর ভিত্তি করে ক্বাথ টুকরার ডোজ)। উচ্চ-ডোজ গ্রুপ হিসাবে প্রস্তাবিত মানব ডোজ 30 গুণ এবং নিম্ন-ডোজ গ্রুপ হিসাবে প্রস্তাবিত মানব ডোজ 5 গুণ গ্রহণ করুন, যথাক্রমে 3.6 এবং 0.6 g·kg{{32}·d-1। বিশুদ্ধ জল দিয়ে একটি সাসপেনশন প্রস্তুত করুন, ভালভাবে মেশান এবং একপাশে সেট করুন।

ওষুধ এবং বিকারক লোপেরামাইড হাইড্রোক্লোরাইড (লোপেরামাইড, এলওপি), স্পেসিফিকেশন: প্রতিটি ট্যাবলেটে লোপেরামাইড হাইড্রোক্লোরাইড থাকে

Amine 2 mg, 12 ক্যাপসুল/বক্স, পণ্য ব্যাচ নম্বর: MIJ3102, Xi'an Janssen Pharmaceutical Co., Ltd. থেকে কেনা; মোসাপ্রাইড সাইট্রেট ট্যাবলেট (কোয়ালি), স্পেসিফিকেশন: প্রতিটি ট্যাবলেটে রয়েছে 5 মিলিগ্রাম মোসাপ্রাইড সাইট্রেট, 24টি ট্যাবলেট/বক্স, পণ্যের ব্যাচ নম্বর: 25220603, লুনান বেইট ফার্মাসিউটিক্যাল কোং লিমিটেড থেকে কেনা; সক্রিয় কার্বন পাউডার, স্পেসিফিকেশন: 200 মেশ ব্রাউন পাউডার, ব্যাচ নম্বর A805337, Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd. থেকে কেনা; গাম আরবি, স্পেসিফিকেশন: পাউডার, ব্যাচ নম্বর A108975, Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd থেকে কেনা।

পরম ইথানল (তিয়ানজিন দামাও রাসায়নিক বিকারক কারখানা, 64-17-5); অ্যামোনিয়াম পারসালফেট (সাংহাই ম্যাকলিন বায়োকেমিক্যাল টেকনোলজি কোং লিমিটেড, এ6295-500জি); Tris-Base (FD2010), 5× লোডিং বাফার (FD002), -অ্যাক্টিন অ্যান্টিবডি (FD0060), ছাগল অ্যান্টি-রবিট সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (FDR007), ছাগল অ্যান্টি-মাউস সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (FDM007), এবং ECL কালার ডেভেলপমেন্ট কিট (FD8020) সবগুলোই Hangzhou Fude Biotechnology Co., Ltd. থেকে কেনা হয়েছে; RIPA লাইসিস বাফার ( সাংহাই বিয়ুনটিয়ান বায়োটেকনোলজি কোং, লিমিটেড, P0013B); 4% প্যারাফর্মালডিহাইড (বায়োশার্প কোম্পানি, BL539A); ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি কিট (জিয়াংসু কেজিআই বায়োটেকনোলজি কোং, লিমিটেড, কেজিওএস60); bicinchoninic অ্যাসিড (BCA) প্রোটিন পরিমাণ নির্ধারণ কিট (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, SLZ60212); মোটিলিন (এমটিএল), গ্যাস্ট্রিন (জিএএস), এবং প্রদাহজনক উপাদান ইন্টারলিউকিন-1 (আইএল-1), টিউমার নেক্রোসিস ফ্যাক্টর (টিউমার নেক্রোসিস ফ্যাক্টর- , টিএনএফ-) এলিসা কিট (সাংহাই এনজাইম বায়োটেকনোলজি কো., লিমিটেড ., YJ201829, YJ037432, YJ002095, YJ301814); aquaporin 3 (aquaporin 3, AQP3) অ্যান্টিবডি (অ্যাফিনিটি কোম্পানি, AF5222); c -কিট অ্যান্টিবডি (সেল সিগন্যালিং প্রযুক্তি, 3074S)।

যন্ত্র: সুপার পিওর ওয়াটার মিটার (মিলিপুর কোম্পানি, ইউএসএ, মিলি কিউ); ইলেকট্রনিক ব্যালেন্স (সারটোরিয়াস, জার্মানি)

কোম্পানি, BS224S); বৈদ্যুতিন বিশ্লেষণাত্মক ভারসাম্য (Shanghai Benpu Instrument Technology Co., Ltd., FA2204N); উচ্চ-গতির রেফ্রিজারেটেড সেন্ট্রিফিউজ (সিগমা কোম্পানি, জার্মানি, 3K15); মাইক্রোপ্লেট রিডার (থার্মো কোম্পানি, ইউএসএ, মাল্টিস্কান এমকে 3); প্যারাফিন মাইক্রোটোম (লাইকা, জার্মানি) কোম্পানি, RM2255); ধ্রুব তাপমাত্রার ধাতব স্নান (সাংহাই ইহেং টেকনোলজি কোং লিমিটেড, টিইউ-100সি); সম্পূর্ণ স্বয়ংক্রিয় নমুনা দ্রুত গ্রাইন্ডার (Shanghai Jingxin Technology Co., Ltd., JXFSTPRP-24); ইলেক্ট্রোফোরেসিস যন্ত্র (বেইজিং লিউই বায়োটেকনোলজি কোং লিমিটেড, ডিওয়াইওয়াই-6সি); স্ক্যানিং মাইক্রোস্কোপ (Precipoint Company, Precipoint M8); chemiluminescence ইমেজিং সিস্টেম (Shanghai Tianneng Technology Co., Ltd., Tanon 5200)।

গ্রুপিং এবং মডেল প্রতিষ্ঠা: 40 টি ইঁদুরকে 5 দিনের জন্য অভিযোজিতভাবে উত্থাপিত করা হয়েছিল এবং তারপরে এলোমেলোভাবে নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীতে বিভক্ত করা হয়েছিল।

(নিয়ন্ত্রণ), মডেল গ্রুপ (LOP), যৌগিক উচ্চ এবং নিম্ন ডোজ গ্রুপ (LOP+PF-H, OP+PF-L), পজিটিভ কন্ট্রোল গ্রুপ (মোসাপ্রাইড সাইট্রেট, LOP+MOS)। প্রতিদিন সকাল 9 থেকে 10 এ, নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ ব্যতীত সমস্ত গ্রুপকে 10 mg·kg-1 লোপেরামাইড হাইড্রোক্লোরাইড দেওয়া হয়েছিল একটি মাউসের কোষ্ঠকাঠিন্য মডেল স্থাপনের জন্য, এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ গ্রুপকে দেওয়া হয়েছিল গ্যাভেজ দ্বারা বিশুদ্ধ জল সমান পরিমাণ। 14 থেকে 15 ঘন্টা পর্যন্ত, যৌগিক উচ্চ-ডোজ এবং কম-ডোজ গ্রুপগুলিকে যথাক্রমে যৌগিক 3.6 এবং 0.6 g·kg-1 দেওয়া হয়েছিল, এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ গ্রুপকে দেওয়া হয়েছিল মোসাপ্রাইড সাইট্রেট (MOS) 5 mg·kg{{ 19}}।

, নেতিবাচক কন্ট্রোল গ্রুপ এবং মডেল কন্ট্রোল গ্রুপকে পরপর 14 দিন ধরে গ্যাভেজ দ্বারা সমান পরিমাণে বিশুদ্ধ জল দেওয়া হয়েছিল।

ওষুধের হস্তক্ষেপের সময়কালে ইঁদুরের অবস্থা এবং মলের বৈশিষ্ট্যগুলি পর্যবেক্ষণ এবং রেকর্ড করা হয়েছিল। প্রতিটি গ্রুপে ইঁদুরের মৌলিক অবস্থা এবং মল রেকর্ড করা হয়েছিল।

অক্ষর, সপ্তাহে 3 বার ওজন করুন এবং ডোজ সামঞ্জস্য করুন। প্রশাসনের পরে 3, 7, 10 এবং 14 দিনে, প্রতিটি ইঁদুর থেকে 3 থেকে 4 টি তাজা মল সংগ্রহ করা হয়েছিল, অবিলম্বে ওজন করা হয়েছিল, এবং ভেজা ওজন হিসাবে রেকর্ড করা হয়েছিল, একটি চুলায় শুকানো হয়েছিল এবং শুকনো ওজন হিসাবে রেকর্ড করা হয়েছিল এবং মলের আর্দ্রতা। বিষয়বস্তু গণনা করা হয়েছিল। মল আর্দ্রতার পরিমাণ গণনা করুন (%)=(ভেজা ওজন - শুকনো ওজন)/ভেজা ওজন × 100%।

ছোট অন্ত্রের প্রপালশন ফাংশন নির্ধারণ করা হয়েছিল রেফারেন্স সাহিত্য [১১] এবং "স্বাস্থ্যের খাবারের কার্যকরী কার্যাবলীর পরীক্ষা ও মূল্যায়নের পদ্ধতি (২0২৩ সংস্করণ)" দ্বারা প্রয়োজনীয় পরীক্ষামূলক পদ্ধতি অনুসারে। শেষ ডোজ পরে, প্রতিটি গ্রুপের ইঁদুর 16 ঘন্টার জন্য উপবাস এবং জলমুক্ত ছিল। মডেল গ্রুপ, যৌগিক সূত্র উচ্চ- এবং কম-ডোজ গ্রুপ এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ গ্রুপকে গ্যাভেজ দ্বারা লোপেরামাইড হাইড্রোক্লোরাইড সাসপেনশন (10 mg·kg-1) দেওয়া হয়েছিল, এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ গ্রুপকে দেওয়া হয়েছিল একটি গ্যাভেজ দ্বারা বিশুদ্ধ জল সমান পরিমাণ। 0.5 ঘণ্টা পরে, যৌগিক উচ্চ-ডোজ এবং কম-ডোজ গ্রুপ এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ গ্রুপকে কালি দেওয়া হয়েছিল (5% সমন্বিত) যার মধ্যে সংশ্লিষ্ট পরীক্ষার নমুনা ডোজ (3.6 g·kg-1, যথাক্রমে 0.6 g·kg-1, 5 mg·kg-1)। (অ্যাক্টিভেটেড চারকোল পাউডার, 10% গাম আরবি), এবং সমান পরিমাণে কালি নেতিবাচক এবং মডেল গ্রুপগুলিতে পরিচালিত হয়েছিল। জরায়ুর স্থানচ্যুতির 0.5 ঘন্টা পরে প্রাণীগুলিকে হত্যা করা হয়েছিল এবং "ছোট অন্ত্রের মোট দৈর্ঘ্য" এবং "কালি অগ্রগতির দৈর্ঘ্য" পরিমাপ করা হয়েছিল। কালি অগ্রগতির হার গণনা করুন=কালি অগ্রগতির দৈর্ঘ্য (সেমি)/ছোট অন্ত্রের মোট দৈর্ঘ্য (সেমি) × 100%।

সিরামে MTL, GAS, TNF- এবং IL-1 এর মাত্রা সনাক্ত করতে, মাউসের চোখের বল থেকে রক্ত ​​নেওয়া হয়েছিল, 4 ডিগ্রিতে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল, 3 500 r·min-1 10 মিনিট, উপরের সিরাম নেওয়া হয়েছিল, এবং মাউস সিরামের MTL এবং GAS ELISA কিট অনুসারে নির্ধারিত হয়েছিল। এবং TNF- , IL-1 স্তর।

H&E কোলন টিস্যুতে রোগগত পরিবর্তন সনাক্ত করে। ইঁদুরের কোলন সাধারণ স্যালাইন দিয়ে ধুয়ে 4% প্যারাফর্মালডিহাইডে ইনকিউব করা হয়।

এগুলিকে অ্যালডিহাইডে স্থির করা হয়েছিল, 24 ঘন্টা পরে নিয়মিতভাবে এম্বেড করা হয়েছিল, বিভাগযুক্ত, বেকড এবং এইচএন্ডই দাগযুক্ত, এবং কোলন টিস্যুর প্যাথলজিকাল পরিবর্তনগুলি একটি হালকা মাইক্রোস্কোপের নীচে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।

ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল পদ্ধতিটি কোলন টিস্যুতে AQP3 এবং c-Kit এর অভিব্যক্তি সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। প্রতিটি গ্রুপ থেকে ইঁদুরের কোলন টিস্যু সংগ্রহ করা হয়েছিল।

প্যারাফিন বিভাগ, ডিওয়াক্সিং, হাইড্রেশন, অ্যান্টিজেন পুনরুদ্ধার, অন্তঃসত্ত্বা ক্যাটালেজ ব্লক করা, 2% ছাগলের সিরাম দিয়ে ব্লক করা, যথাক্রমে AQP3 এবং সি-কিট অ্যান্টিবডি যোগ করা এবং 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি ইনকিউব করা, ফসফেট বাফার স্যালাইন, পিবিএস) 5 মিনিটের জন্য কাউন্টারেণ্ট, হেমাটেইনডক্স, ইথানল ডিহাইড্রেশন, জাইলিন ট্রান্সপারেন্সি, নিউট্রাল গাম সিলিং, স্ক্যানিং মাইক্রোস্কোপের নিচে স্ক্যান করা এবং ফলাফল বিশ্লেষণ করার জন্য ইমেজ জে সফটওয়্যার ব্যবহার করা।

কোলন টিস্যুতে AQP3 এবং c-Kit এর অভিব্যক্তি সনাক্ত করতে ওয়েস্টার্ন ব্লট পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল। 10 মিলিগ্রাম হিমায়িত মাউস কোলন টিস্যু নিন এবং এটিকে 150 μL RIPA লাইসিস বাফার সহ একটি সেন্ট্রিফিউজ টিউবে রাখুন যাতে 1% প্রোটেজ ইনহিবিটর থাকে। টিস্যু একত্রিত করতে একটি দ্রুত গ্রাইন্ডার ব্যবহার করুন। , 10 মিনিটের জন্য 10 000 r·min-1 কম-তাপমাত্রার সেন্ট্রিফিউজ দিয়ে হোমোজেনেটকে সেন্ট্রিফিউজ করুন, সুপারনাট্যান্ট নিন, বিসিএ প্রোটিন পরিমাপ পদ্ধতি দ্বারা প্রোটিনের ঘনত্ব নির্ধারণ করুন, এটি লোডিং বাফারের সাথে মিশ্রিত করুন, ডিনেচার প্রোটিন, এবং প্রতিটি নমুনা অনুযায়ী ফলাফল বিশ্লেষণ. 30 ug প্রোটিন লোড করা হয়েছিল, SDS-PAGE ইলেক্ট্রোফোরেসিসের শিকার হয়েছিল, ঝিল্লিতে ভেজা স্থানান্তর করা হয়েছিল, এবং তারপর 1.5 ঘন্টার জন্য ঘরের তাপমাত্রায় 5% স্কিমড মিল্ক পাউডার দিয়ে ব্লক করা হয়েছিল, TBST দিয়ে তিনবার ধুয়ে, প্রাথমিক অ্যান্টিবডিটিকে একটি শেকারে রাখা হয়েছিল এবং রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল। 4 ডিগ্রী, তারপর সরান, এবং TBST বাফার দিয়ে ধুয়ে 3 বার দ্রবণ দিয়ে ধুয়ে নিন, ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউব করুন এবং তারপর TBST দিয়ে 3 বার ধুয়ে ফেলুন। ইসিএল কেমিলুমিনেসেন্স ওয়ার্কিং সলিউশনটি রঙের বিকাশের জন্য ব্যবহৃত হয় এবং একটি সম্পূর্ণ স্বয়ংক্রিয় কেমিলুমিনেসেন্স ইমেজিং সিস্টেম বিকাশের জন্য ব্যবহৃত হয়। ফলাফল বিশ্লেষণ করতে ইমেজ জে সফটওয়্যার ব্যবহার করা হয়।

পরিসংখ্যান পদ্ধতি এই পরীক্ষায় জড়িত সমস্ত ডেটা গড় ± মান বিচ্যুতি আকারে প্রকাশ করা হয়। গ্রাফপ্যাড প্রিজম পরীক্ষামূলক ডেটা প্লট করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং একমুখী আনোভা বা দ্বিমুখী আনোভা ব্যবহার করে গ্রুপগুলির মধ্যে তুলনা করা হয়েছিল; যখন গ্রুপের মধ্যে পার্থক্য পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ ছিল, তখন সর্বনিম্ন উল্লেখযোগ্য পার্থক্য (এলএসডি) পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল। ) গোষ্ঠীর মধ্যে যুগলভিত্তিক তুলনা করুন, এবং P < 0.05 একটি পরিসংখ্যানগতভাবে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য হিসাবে বিবেচিত হয়।