ঘুমের বঞ্চনার মডেল ইঁদুরে শেখার জ্ঞান এবং সিনাপটিক প্লাস্টিসিটির উপর সিস্টানচে গ্লাইওসাইডের প্রভাব

বিমূর্ত

উদ্দেশ্য:'অন্বেষণ করা কিনাcistanche এর গ্লাইকোসাইডউন্নতি করতে পারেঘুম বঞ্চনার শিক্ষা এবং জ্ঞানীয় ফাংশনদ্বারা মডেল ইঁদুরসিনাপটিক প্লাস্টিকতা নিয়ন্ত্রণ. পদ্ধতি: পঞ্চাশটি পুরুষ উইস্টার ইঁদুরকে এলোমেলোভাবে ফাঁকা কন্ট্রোল গ্রুপ (কন্ট্রোল), প্ল্যাটফর্ম কন্ট্রোল গ্রুপ (পিসি), মডেল গ্রুপ (মডেল), এ বিভক্ত করা হয়েছিল।cistanche গ্রুপের গ্লাইকোসাইড(GCs), এবং estazolam গ্রুপ (Est)। ইঁদুরের ঘুম বঞ্চনার মডেলটি একটি পরিবর্তিত মাল্টি-প্ল্যাটফর্ম জল পরিবেশ পদ্ধতি দ্বারা প্রস্তুত করা হয়েছিল। ইঁদুর সনাক্ত করতে মরিস ওয়াটার মেজ এবং ওপেন ফিল্ড টেস্ট ব্যবহার করা হয়েছিলস্থানিক জ্ঞানীয় ফাংশন aমানসিক পরিবর্তন। এর পরিবর্তনগুলি পর্যবেক্ষণ করতে নিসল স্টেনিং ব্যবহার করা হয়েছিলরূপবিদ্যা এবং স্নায়ু কোষের পরিমাণইঁদুরের হিপ্পোক্যাম্পাল সিএএল এলাকায়। ওয়েস্টার্ন ব্লট এবং আর'টি - পিসিএল সিন্যাপটোফাইসিন (SYN), পোস্টসিনাপটিক মেমব্রেন ঘন পদার্থ 95 ( PSD - 95), এবং মস্তিষ্ক থেকে প্রাপ্ত নিউরোট্রফিক ফ্যাক্টর (BDNF) এর অভিব্যক্তি মাত্রা সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। ফলাফল: মরিস জল গোলকধাঁধা ফলাফল দেখায় যে নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ সঙ্গে তুলনা,শেখার এবং জ্ঞানীয় ক্ষমতামডেল গ্রুপে ইঁদুরের সংখ্যা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে ( পি<0. 05 ), and theইঁদুর শেখার এবং মেমরি ফাংশনউন্নত জিসি চিকিত্সা ছিল (পি<0. 05). The results of the open field test showed that compared with the Control group, the movement distance and standing times of the Model group were significantly increased ( P <0. 05 ), the resting time was significantly shortened( P <0.05), and the anxiety was increased, while after GCs treatment, the movement distance and standing times decreased ( P <0. 05), the resting time increased ( P<0. 05), and the anxiety was improved. The results of Western blot and R'T' - PCR showed that the protein and gene expression levels of BDNF, SYN, and PSD -95 in the Model group were significantly decreased ( P <0. 05), while after treatment with GCs, the expression levels of BDNF, SYN and PSD -95 were significantly up-regulated ( P <0.05).

উপসংহার: সিস্টানচে গ্লাইকোসাইডসিনাপটিক-সম্পর্কিত মার্কারগুলির অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রণ করে সিনাপটিক প্লাস্টিকতাকে প্রভাবিত করতে পারে, যার ফলে ঘুম বঞ্চিত মডেল ইঁদুরের শেখার এবং জ্ঞানীয় কার্যকারিতা উন্নত হয়।

মূল শব্দcistanche এর গ্লাইকোসাইড; হিপ্পোক্যাম্পাস; ঘুমের অভাব; শেখা এবং স্মৃতি; উদ্বেগ; সিনাপটিক প্লাস্টিকতা

বিক্রয়ের জন্য CISTANCHE-এর উচ্চ-স্তরের গ্লাইকোসাইড

ঘুমের ব্যাধি (SD)একটিঘুমের কার্যকরী ব্যাধিঅনিদ্রা, ঘন ঘন স্বপ্ন এবং সহজে জাগ্রত হওয়ার মতো জটিল কারণগুলির একটি সিরিজ দ্বারা সৃষ্ট। সাম্প্রতিক বছরগুলিতে SD এর ঘটনা ধীরে ধীরে বৃদ্ধি পেয়েছে। সম্পর্কিত গবেষণায় রিপোর্ট করা হয়েছে যে এসডি হতে পারেকার্ডিওভাসকুলার রোগ, বিপাকীয় কর্মহীনতা, ইমিউন রোগ, এবং কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্রের ডিজেনারেটিভ রোগ যেমন আলঝেইমার রোগ [১]। SD হিপ্পোক্যাম্পাল নিউরনের অক্সিডেটিভ ক্ষতি করতে পারে, জ্ঞানীয় কর্মহীনতার কারণ হতে পারে এবং উদ্বেগ এবং বিষণ্নতার মতো মেজাজ পরিবর্তন করতে পারে [2]। Cistanche deserticola একটি মূল্যবান চীনা ঔষধি উপাদান যা ঔষধ এবং খাদ্য হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে। এটি কিডনিকে টোনিফাই করার এবং কিউই পূরন করার, অন্ত্রকে আর্দ্র করে অন্ত্রের গতিবিধি বাড়াতে এবং ইয়াংকে শক্তিশালী করার প্রভাব রয়েছে। Cistanche deserticola এর প্রধান নির্যাস, cistanche (GCs) এর গ্লাইকোসাইড, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক, লিভার-রক্ষাকারী, এবং নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাব রয়েছে [3]। আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে জিসিগুলি একটি অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এবং অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক ভূমিকা পালন করে SAMP8 ইঁদুরের শেখার এবং জ্ঞানীয় ফাংশনকে উন্নত করতে পারে [4]। সম্পর্কিত গবেষণায় দেখা গেছে যে এসডি দ্বারা সৃষ্ট জ্ঞানীয় কর্মহীনতা সিনাপটিক প্লাস্টিসিটির সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত [৫]। যাইহোক, GCs যে পদ্ধতির দ্বারা সিনাপটিক প্লাস্টিসিটি নিয়ন্ত্রণ করে এবং ঘুমের বঞ্চনার দ্বারা প্ররোচিত ইঁদুরের শেখার ও স্মৃতিশক্তির দুর্বলতা এবং জ্ঞানীয় হ্রাসের উন্নতি করে সে সম্পর্কে কিছু প্রতিবেদন রয়েছে। অতএব, এই অধ্যয়নের লক্ষ্য হল GC গুলি সিনাপটিক-সম্পর্কিত মার্কারগুলির অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রণ করে সিনাপটিক প্লাস্টিকতাকে প্রভাবিত করে কিনা তা অন্বেষণ করা, যার ফলে ঘুম বঞ্চনার মডেলে ইঁদুরের শেখার এবং জ্ঞানীয় কার্যকারিতা উন্নত করা এবং শেখার চিকিত্সার জন্য নতুন চিকিত্সা ধারণা এবং পরিকল্পনা প্রদান করা। GC এর সাথে ঘুমের ব্যাধি দ্বারা সৃষ্ট জ্ঞানীয় বৈকল্য।

1 উপাদান এবং পদ্ধতি

1. 1 পরীক্ষামূলক প্রাণী

280 থেকে 300 গ্রাম ওজনের 6 থেকে 8 সপ্তাহ বয়সী পুরুষ উইস্টার ইঁদুর, একটি পশু উৎপাদন লাইসেন্স [SCXK (বেইজিং) 2019-0010] সহ বেইজিং সিবেইফু থেকে কেনা হয়েছিল। সমস্ত প্রাণীকে নিম্নলিখিত অবস্থার অধীনে বাওটু মেডিকেল কলেজের প্রাণী পরীক্ষা কেন্দ্রে রাখা হয়েছিল: তাপমাত্রা (24 ± 1) ডিগ্রী, আর্দ্রতা 50% থেকে 55%, 12 ঘন্টা আলো এবং 12 ঘন্টা অন্ধকার, এবং খাবার এবং জলের উপর কোনও বিধিনিষেধ নেই। এই পরীক্ষাটি স্কুল নীতিশাস্ত্র কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছে [Baoyi Lunshen 2022 No. (63)]।

1. 2 প্রধান বিকারক এবং যন্ত্র

Cistanche deserticola এর মোট গ্লাইকোসাইড কেনা হয়েছিল Shaanxi Baoji Cosmeceuticals Development Co., Ltd. থেকে (ব্যাচ নম্বর: KSM20220609011); Estazolam ট্যাবলেটগুলি CSPC ফার্মাসিউটিক্যাল গ্রুপ Ouyi ফার্মাসিউটিক্যাল (ব্যাচ নম্বর: 044220343) থেকে কেনা হয়েছিল; প্রোটিন লোডিং বাফার (P1015), RIPA lysis বাফার (R0010), chemiluminescent solution (PE0010) ইত্যাদি সবই বেইজিং সোলেবাও থেকে কেনা হয়েছিল; পোস্টসিনাপটিক ঘনত্ব পদার্থ 95 (PSD-95) অ্যান্টিবডি (AB192757), সিনাপটোফাইসিন (SYN) অ্যান্টিবডি (ab32127), Abcam, USA থেকে কেনা; মস্তিষ্ক থেকে প্রাপ্ত নিউরোট্রফিক ফ্যাক্টর (BDNF) (48503-2), -অ্যাক্টিন (52901), SAB, USA থেকে কেনা; ছাগল বিরোধী খরগোশ আইজিজি সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (SA00001-20), প্রোটিনটেক, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র থেকে কেনা; ইঁদুর মেলাটোনিন (MT), ELISA কিট (MM-0657R1), জিয়াংসু এনজাইম ইমিউনিটি ইন্ডাস্ট্রি কোম্পানি লিমিটেড থেকে কেনা। প্যারাফিন স্লাইসার (লাইকা, জার্মানি); অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ (লাইকা, জার্মানি); মরিস জলের গোলকধাঁধা, খোলা মাঠের পরীক্ষা বাক্স (সাংহাই জিনরুয়ান); উল্লম্ব ইলেক্ট্রোফোরসিস যন্ত্র

(বেইজিং লিউই কোম্পানি); বিবর্ণকরণ শেকার (বেইজিং লিউই কোম্পানি); প্রোটিন ইমেজিং বিশ্লেষণ সিস্টেম (সাংহাই ট্যানন প্রযুক্তি); ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত পিসিআর যন্ত্র (জিয়ান তিয়ানলং টেকনোলজি কোং লিমিটেড)।

1. 3 পরীক্ষামূলক পদ্ধতি

1. 3. 1 প্রাণীর গ্রুপিং এবং ড্রাগ প্রশাসন

50 পুরুষ উইস্টার ইঁদুরকে এলোমেলোভাবে ফাঁকা কন্ট্রোল গ্রুপ (কন্ট্রোল গ্রুপ), প্ল্যাটফর্ম কন্ট্রোল গ্রুপ (প্ল্যাট-ফর্ম কন্ট্রোল, পিসি গ্রুপ), মডেল গ্রুপ (মডেল গ্রুপ), সিস্তানচে ডেসার্টিকোলা গ্রুপের মোট গ্লাইকোসাইড (GCs গ্রুপ) এ বিভক্ত করা হয়েছিল , 50 mg/kg), এবং estazola গ্রুপ (Est group, 0.54 mg/kg), প্রতিটি গ্রুপে 10টি ইঁদুর। কন্ট্রোল গ্রুপ এবং পিসি গ্রুপকে গ্যাভেজ দ্বারা 0.9% স্যালাইন দেওয়া হয়েছিল। মডেলিং শুরু হওয়ার পরে প্রতিদিন সকাল 7 টায় সমস্ত গ্রুপকে গ্যাভেজ করা হয়েছিল এবং গ্যাভেজ 21 দিন ধরে চলেছিল।

1. 3. 2. ঘুম বঞ্চিত পশু মডেলের প্রস্তুতি

ঘুম বঞ্চনার মডেলটি পরিবর্তিত মাল্টি-প্ল্যাটফর্ম জল পরিবেশ পদ্ধতি ব্যবহার করে প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল [6]। পরীক্ষামূলক সরঞ্জাম ছিল একটি 130 সেমি × 50 সেমি × 45 সেমি আয়তক্ষেত্রাকার পলিথিন রজন জলের ট্যাঙ্ক। জলের ট্যাঙ্কে 5 সেন্টিমিটার ব্যাস এবং 20 সেন্টিমিটার উচ্চতার একটি ছোট প্ল্যাটফর্ম স্থাপন করা হয়েছিল। পিসি গ্রুপের প্ল্যাটফর্মের 10 সেমি ব্যাস এবং 20 সেমি উচ্চতা ছিল। জলের ট্যাঙ্কটি প্রায় 18 সেন্টিমিটার গভীরতায় জলে পূর্ণ ছিল এবং জলের তাপমাত্রা (20 ± 1) ডিগ্রি বজায় রাখা হয়েছিল। পরীক্ষা শুরুর এক সপ্তাহ আগে, পরিবেশের সাথে পরিচিত হওয়ার জন্য ইঁদুরগুলিকে প্রতিদিন 60 মিনিটের জন্য ঘুমের বঞ্চনার বাক্সে রাখা হয়েছিল। মডেলটি প্রতিষ্ঠিত হওয়ার পর, কন্ট্রোল গ্রুপ ব্যতীত, প্রতিটি গ্রুপের ইঁদুরকে একটি ছোট প্ল্যাটফর্মে প্রতিদিন সকাল 8টা থেকে রাত 8টা পর্যন্ত টানা 21 দিন ঘুমের অভাবের জন্য রাখা হয়েছিল। সমস্ত ইঁদুরকে অবাধে খাওয়া-দাওয়া করতে এবং প্ল্যাটফর্মে অবাধে চলাফেরা করার অনুমতি দেওয়া হয়েছিল, প্রতিদিন 12 ঘন্টা আলো এবং অন্ধকার পরিবর্তনের সাথে।

1.3.3 মরিস জল গোলকধাঁধা পরীক্ষা

মরিস জলের গোলকধাঁধাটি 4টি অঞ্চলে বিভক্ত ছিল, জলে ভরা, এবং প্ল্যাটফর্মটি 4র্থ চতুর্ভুজে স্থাপন করা হয়েছিল। জলের পৃষ্ঠটি প্লাটফর্মের উপরে প্রায় 2 সেন্টিমিটার ছিল। খাদ্য-গ্রেড ভোজ্য মেলানিন জলে যোগ করা হয়েছিল, এবং জলের তাপমাত্রা (25 ± 1) ডিগ্রীতে বজায় রাখা হয়েছিল। (1) পজিশনিং নেভিগেশন পরীক্ষা: প্রতিটি এলাকার কেন্দ্র নির্বাচন করা হয়েছিল এবং ইঁদুরগুলিকে আলতো করে জলে স্থাপন করা হয়েছিল। তাদের অবাধে অন্বেষণ করতে দেওয়া হয়েছিল। 60 সেকেন্ডের মধ্যে লক্ষ্য প্ল্যাটফর্ম খুঁজে পেতে ইঁদুরের যে সময় লেগেছিল তা রেকর্ড করা হয়েছিল। যে ইঁদুরগুলি প্ল্যাটফর্মটি খুঁজে পায়নি তাদের প্ল্যাটফর্মে গাইড করা হয়েছিল এবং 20 সেকেন্ডের জন্য অবস্থান করেছিল। টানা ৫ দিন প্রশিক্ষণ চলে। (2) স্থানিক অন্বেষণ পরীক্ষা: 6 তম দিনে, প্ল্যাটফর্মটি সরানো হয়েছিল এবং দেওয়ালের বিপরীতে 2য় চতুর্ভুজটির কেন্দ্র থেকে ইঁদুরগুলিকে জলে স্থাপন করা হয়েছিল। 120 সেকেন্ডের মধ্যে ইঁদুরের প্ল্যাটফর্ম অতিক্রম করার সংখ্যা এবং তারা 4র্থ কোয়াড্রেন্টে কতবার অবস্থান করেছে তা রেকর্ড করা হয়েছে।

1.3। 4 খোলা ক্ষেত্র পরীক্ষা

একটি 100 সেমি × 100 সেমি × 50 সেমি পরীক্ষামূলক বাক্স ব্যবহার করা হয়েছিল এবং বাক্সের নীচে 9টি গ্রিডে বিভক্ত ছিল। ইঁদুরের প্রতিটি দলকে 60 মিনিটের জন্য গৃহমধ্যস্থ পরিবেশের সাথে খাপ খাইয়ে নেওয়ার জন্য আগে থেকেই খোলা মাঠের পরীক্ষামূলক কক্ষে রাখা হয়েছিল। পরীক্ষার শুরুতে, পরীক্ষামূলক ইঁদুরগুলিকে খোলা মাঠের পরীক্ষামূলক বাক্সের নির্দিষ্ট কোণে পালাক্রমে স্থাপন করা হয়েছিল এবং আচরণগত বিশ্লেষণ সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে 5 মিনিটের মধ্যে ইঁদুরের দাঁড়ানোর সময়, চলাচলের দূরত্ব এবং স্ট্যাটিক সময় রেকর্ড করা হয়েছিল। . পরীক্ষার সময় পরিবেশটি শান্ত থাকার প্রয়োজন ছিল এবং পরের ইঁদুরের আচরণের বিচারকে প্রভাবিত করে আগের ইঁদুরের গন্ধ এড়াতে পরীক্ষামূলক ডিভাইসটিকে দুটি পরীক্ষার মধ্যে যথাক্রমে পরিষ্কার জল এবং অ্যালকোহল দিয়ে মুছে ফেলা হয়েছিল।

1. 3. 5 এনজাইম-সংযুক্ত ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস (ELISA)

ইঁদুরে সিরাম এমটি মাত্রা সনাক্তকরণ ইঁদুরকে ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশন দ্বারা অবেদন করা হয়েছিল এবং পেটের মহাধমনী থেকে 5 মিলি রক্ত ​​সংগ্রহ করা হয়েছিল। ঘরের তাপমাত্রায় 30 মিনিট অপেক্ষা করার পরে, সিরাম পাওয়ার জন্য রক্তকে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। প্রতিটি কূপে 40 μL নমুনা তরল যোগ করা হয়েছিল, এবং তারপরে পরীক্ষা করার জন্য নমুনার 10 μL যোগ করা হয়েছিল। সিলিং ফিল্ম দিয়ে সিল করার পরে, 30 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রীতে ইনকিউবেট করুন। 5 বার ধুয়ে ফেলুন, 50 μL এনজাইম লেবেলিং দ্রবণ যোগ করুন এবং সিলিং ফিল্ম দিয়ে সিল করার পরে 30 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রিতে ইনকিউবেট করুন। 5 বার ধোয়া, তারপর রঙ-উন্নয়নশীল সমাধান এবং প্রতিক্রিয়া স্টপ সমাধান যোগ করুন। প্রতিটি কূপের ওডি মান 450 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে এনজাইম লেবেলিং যন্ত্র দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল।

１। ３। ６ নিসল দাগ

প্রতিটি গ্রুপ থেকে তিনটি ইঁদুর নেওয়া হয়েছিল এবং মস্তিষ্কের টিস্যু শিরশ্ছেদ করে সরানো হয়েছিল। মস্তিষ্কের টিস্যুকে 4% পলিমিথাইল মেথাক্রাইলেট দ্রবণ দিয়ে স্থির করা হয়েছিল, এবং টিস্যুকে ডিহাইড্রেট করা হয়েছিল, মোমের দ্রবণে নিমজ্জিত করা হয়েছিল এবং এম্বেড করা হয়েছিল, এবং টিস্যুটি প্রচলিত পদ্ধতিতে কাটা হয়েছিল। স্লাইসগুলি 5 μm পুরুত্বের সাথে রাখা হয়েছিল, পিবিএস দিয়ে ধুয়ে 0 দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল৷ 0 এর জন্য 1% টলুইডিন নীল। 5 ঘন্টা, 95% অ্যালকোহল দিয়ে আলাদা করা, 100% অ্যালকোহল দিয়ে ডিহাইড্রেট করা, জাইলিন দিয়ে স্বচ্ছ করা এবং নিরপেক্ষ গাম দিয়ে সিল করা। ইঁদুর হিপ্পোক্যাম্পাসের CA1 অঞ্চলে আকারবিদ্যা এবং নিউরনের সংখ্যার পরিবর্তনগুলি একটি মাইক্রোস্কোপের নীচে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল এবং ছবিগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল।

１। ３। 7 ওয়েস্টার্ন ব্লট পরীক্ষা

প্রতিটি গ্রুপ থেকে চারটি ইঁদুর নির্বাচন করা হয়েছিল এবং হিপ্পোক্যাম্পাস শিরশ্ছেদ দ্বারা বিচ্ছিন্ন ছিল। হিপ্পোক্যাম্পাস টিস্যুকে বরফ স্নানের পরিবেশে আরআইপি এ লাইসিস বাফারের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং সুপারনাট্যান্ট পাওয়ার জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। বিসিএ পদ্ধতি দ্বারা প্রোটিনের ঘনত্ব সনাক্ত করা হয়েছিল। ইলেক্ট্রোফোরসিসের জন্য প্রোটিন লোডিং বাফারের সাথে 20 ইউজি প্রোটিন যুক্ত করা হয়েছিল। প্রোটিন ইলেক্ট্রোফোরেসিস সম্পন্ন হওয়ার পরে, ঝিল্লিটি 300 mA ধ্রুবক প্রবাহে স্থানান্তরিত হয়েছিল, 5% স্কিম মিল্ক পাউডার দিয়ে ব্লক করা হয়েছিল, প্রাথমিক অ্যান্টিবডিটি রাতারাতি 4 ডিগ্রিতে ইনকিউবেট করা হয়েছিল এবং সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিটি ঘরের তাপমাত্রায় 2 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। রঙ উন্নয়ন সমাধান ব্যবহার করার পরে, কেমিলুমিনেসেন্স ইমেজিং বিশ্লেষণ সিস্টেম প্রোটিন ব্যান্ডের পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।

1. 3. 8 RT-PCR পরীক্ষা

হিপোক্যাম্পাস টিস্যু হোমোজেনেট প্রস্তুত করতে প্রতিটি গ্রুপ থেকে তিনটি ইঁদুর নির্বাচন করা হয়েছিল। টিস্যু ফ্লুইডের মোট আরএনএ ট্রিজল পদ্ধতিতে বের করা হয়েছিল এবং ঘনত্ব পরিমাপ করা হয়েছিল। একটি ফাস্টিং সিডিএনএ সংশ্লেষণ কিট বিপরীত প্রতিলিপির জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল এবং একটি ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত কিট ব্যবহার করে সিনাপটিক-সম্পর্কিত প্রোটিন এমআরএনএর আপেক্ষিক অভিব্যক্তি স্তর সনাক্ত করতে একটি ফ্লুরোসেন্স পরিমাণগত পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়া ব্যবহার করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি 2-ΔΔCt ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল, এবং প্রাইমার ক্রমগুলি সারণি 1 এ দেখানো হয়েছে।

1.4 পরিসংখ্যান পদ্ধতি

সাধারণ বিতরণের সাথে সঙ্গতিপূর্ণ ডেটা ফলাফলগুলিকে গড় ± স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি (x ± s) হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল এবং গ্রাফপ্যাড প্রিজম 9.5 সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ভিন্নতার একক-ফ্যাক্টর বিশ্লেষণ একাধিক নমুনার মধ্যে তুলনা করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং P < 0.05 নির্দেশ করে যে পার্থক্যটি পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ।