আরিল হাইড্রোকার্বন রিসেপ্টর-নির্ভর

অনুগ্রহ করে যোগাযোগ করুনoscar.xiao@wecistanche.comআরও তথ্যের জন্য

2.2.6। প্রাথমিক মানব ইসির চাষ

মানব প্রাথমিক ইসি (লোনজা, কোলোন, জার্মানি) সম্পূর্ণ এন্ডোথেলিয়াল বেসাল মিডিয়াম (EBM) （লোনজা, কোলন, জার্মানি） 1 ug/mL হাইড্রোকর্টিসোন, 12ug/mL বোভাইন ব্রেন এক্সট্র্যাক্ট, 5/{7} এর সাথে সম্পূরক ছিল। ml gentamicin, 10ng/mL হিউম্যান এপিডার্মাল গ্রোথ ফ্যাক্টর, এবং 10 শতাংশ (o/v) ভ্রূণের বাছুরের সিরাম 37 ডিগ্রি এবং 5 শতাংশ CO, তৃতীয় উত্তরণ পর্যন্ত। 0.05 শতাংশ (o/o)Trypsin/EDTA (Thermo Scientific, Schwerte, Germany) দিয়ে বিচ্ছিন্ন হওয়ার পরে, স্থানান্তর বা চিকিত্সার কমপক্ষে 18 ঘন্টা আগে কোষগুলিকে 6 সেন্টিমিটার কালচার ডিশ বা 6টি ওয়েল কালচার প্লেটে সংষ্কৃত করা হয়েছিল।

আরো জানতে এখানে ক্লিক করুন

2.2.7। ইসির ক্ষণস্থায়ী স্থানান্তর

পূর্বে বর্ণিত হিসাবে কোষগুলি স্থানান্তরিত হয়েছিল [65]। সংক্ষেপে, প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে সুপারফেক্ট ট্রান্সফেকশন রিএজেন্ট (কিয়াজেন, হিলডেন, জার্মানি) ব্যবহার করে ইসি স্থানান্তরিত হয়েছিল। AhR এর অত্যধিক এক্সপ্রেশন বা নকডাউন যথাক্রমে 24 বা 48 ঘন্টা পরে অর্জন করা হয়েছিল। অত্যধিক এক্সপ্রেশনে স্থানান্তর দক্ষতা ছিল প্রায় 40 শতাংশ।

2.2.8। ইসির স্ক্র্যাচ ওয়াউন্ড অ্যাস

ইসির স্থানান্তর ক্ষমতার তদন্তের জন্য, স্ক্র্যাচ ক্ষত অ্যাসগুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে সঞ্চালিত হয়েছিল [66]। বিস্তারিতভাবে, ক্ষতগুলিকে একটি সেল মনোলেয়ারে একটি ট্রেস লাইন বরাবর সেল স্ক্র্যাপার দিয়ে সেট করা হয়েছিল। আঘাতের পরে, অ-সংযুক্ত কোষগুলি মৃদু ধোয়ার মাধ্যমে সরানো হয়েছিল।cistanche সালসা নির্যাসক্ষত সেট করার পরে সরাসরি কার্কিউমিন চিকিত্সা করা হয়েছিল। কার-জিরা DMSO তে দ্রবীভূত হয়েছিল এবং 7.5 uM এর চূড়ান্ত ঘনত্বে ব্যবহৃত হয়েছিল। কোষগুলিকে ঠিক করার পর 5 মিনিটের জন্য পিবিএস-এ 5 ug/mL 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)(Carl Roth, Karlsruhe, Germany) দিয়ে কোষগুলিকে দাগ দিয়ে ইসি মাইগ্রেশনের পরিমাণ নির্ধারণ করা হয়েছিল ঘরের তাপমাত্রায় 15 মিনিটের জন্য 4 শতাংশ (v/v) প্যারাফর্মালডিহাইড সহ। ছবিগুলি একটি Zeiss AxioVision Observer D1 ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোস্কোপ (Carl Zeiss, Oberkochen, Germany)) একটি 200-বিবর্ধন ব্যবহার করে তোলা হয়েছে৷ ট্রেস লাইন থেকে ক্ষতস্থানে স্থানান্তরিত কোষগুলিকে স্বয়ংক্রিয়ভাবে চিত্রের কণা বিশ্লেষণ ফাংশন ব্যবহার করে গণনা করা হয়েছিল] 1.52a ]67I ওভারল্যাপিং নিউক্লিয়াস আলাদা করার পরে।

Cistanche বিরোধী বার্ধক্য করতে পারেন

2.2.9 ইসির ইমিউনোস্টেইনিং

ঘরের তাপমাত্রায় 15 মিনিটের জন্য 4 শতাংশ (o/v) প্যারাফর্মালডিহাইড দিয়ে EC স্থির করা হয়েছিল। পিবিএস-এ 0.3 শতাংশ (o/o) Triton-X 100 এবং 3 শতাংশ (o/u) স্বাভাবিক ছাগলের সিরামে ব্যাপ্তিকরণ এবং ব্লক করার পরে, কোষগুলি AhR(1:100, Abcam, Cambridge, United Kingdom) বা Nrf2 (ক্লোন D1Z9C, 1:100, সেল সিগন্যালিং টেকনোলজি, ফ্রাঙ্কফুর্ট, জার্মানি) পিবিএস-এ রাতারাতি 4 C-এ 1 শতাংশ (o/v) স্বাভাবিক ছাগলের সিরামে মিশ্রিত করা হয়। তারপর, কোষগুলি ধুয়ে ফেলা হয়। PBS এবং একটি আলেক্সা 594-যুক্ত ছাগল-বিরোধী খরগোশ IgG(1:500, Invitrogen, Darmstadt, Germany) দিয়ে ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়।cistanche স্টেমঅ্যাক্টিন স্টেনিংয়ের জন্য, ঘরের তাপমাত্রায় 20 মিনিটের জন্য অ্যালেক্সা ফ্লুরটিএম 488 ফ্যালোইডিন (1:70, ইনভিট্রোজেন, ডার্মস্টাড্ট, জার্মানি) দিয়ে কোষগুলিকে ইনকিউব করা হয়েছিল। কক্ষ তাপমাত্রায় 5 মিনিটের জন্য পিবিএস-এ নিউক্লিয়াস 0.5 ug/mL DAPI দিয়ে কাউন্টারস্টেইন করা হয়েছিল এবং কোষগুলিকে প্রোলং'এমডিমন্ড অ্যান্টিফেড মাউন্ট্যান্ট (ইনভিট্রোজেন, ডার্মস্ট্যাড, জার্মানি) দিয়ে মাউন্ট করা হয়েছিল। ফ্লুরোসেন্ট ছবিগুলি একটি Zeiss AxioVision Observer D1 ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে 400× বা 200× ম্যাগনিফিকেশন সহ নেওয়া হয়েছিল৷

2.2.10। কোষে qPCR

প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে RNeasy Mini Kit(Qiagen(Hilden, Germany)) ব্যবহার করে ডাউনস্ট্রিম প্রক্রিয়াকরণের সাথে TRIzolTM-এ lysis একত্রিত করে মোট সেলুলার RNA বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুযায়ী 1 ug RNA সহ QuantiTect9 রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন কিট (Qiagen （Hilden, Germany）) ব্যবহার করে cDNA সংশ্লেষণ করা হয়েছিল। 2x SYBR③ সবুজ qPCR মাস্টার মিক্স এবং একটি রটার-জিন Q থার্মাল সাইক্লার (কিয়াজেন (হিলডেন, জার্মানি)) ব্যবহার করে পিসিআর দ্বারা আপেক্ষিক প্রতিলিপি স্তরগুলি নির্ধারণ করা হয়েছিল। রাইবোসোমাল প্রোটিন L32 (rpl32) এর প্রতিলিপিটি একটি রেফারেন্স হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল এবং আপেক্ষিক অভিব্যক্তিটি AC পদ্ধতি দ্বারা গণনা করা হয়েছিল [68]। নিম্নলিখিত ইন্ট্রোন-স্প্যানিং প্রাইমার জোড়া ব্যবহার করা হয়েছিল: মূলধন (জিন অ্যাক্সেস নম্বর NM_000499.5):5'-TCGCTACTACCCAACCCTT-3',5'-TGTGTCAAACCCAGCTCCAA-3';ahr(জিন) অ্যাক্সিশন নম্বর NM_001621.5):5'-CGTGGGTCAGATGCAGTACA-3',5'ACCAGGGT-CAAAATTGGGCT3';sod2(জিন অ্যাকসেসন নম্বর NM_000636.4):5'-GCCCTGGAACCTAC ATCAA -3';5'-AGCAACTCCCCTTTGGGTTC-3';rpl32(জিন অ্যাক্সেস নম্বর NM_000994.4):5'-GTGAAGCCCAAGATCGTCAA-3',5'-TTGTTGCACATCAGCAGCAC{{{ 41}}'।

2.3.ইঁদুর

2.3.1.মাউস লাইন এবং প্রজনন

মহিলা 8-12-সপ্তাহ-বয়সী ("তরুণ") এবং 18-মাস-বয়সী ("পুরানো")এএইচআর-ঘাটতি বি6৷{6}}AHRtmlBra/J (Schmidt et al.,1996; উল্লেখিত এখানে AHR-KO) ইঁদুরগুলিকে আইইউএফ-এর প্রাণী সুবিধায় হেটেরোজাইগোট হিসাবে প্রজনন করা হয়েছিল। নিয়ন্ত্রণের জন্য বন্য ধরনের লিটারমেট ব্যবহার করা হতো। 12/12 ঘন্টার আলো-অন্ধকার চক্রে ইঁদুরগুলিকে নির্দিষ্ট প্যাথোজেন-মুক্ত অবস্থার মধ্যে প্রজনন করা হয়েছিল এবং রাখা হয়েছিল এবং স্ট্যান্ডার্ড চাও (স্নিফ"এমজেড, এসএনআইএফএফ, সোয়েস্ট, জার্মানি) অ্যাড লিবিটাম পেয়েছিল। ইঁদুরে 2.3.2.qPCR

মোট আরএনএ তিনটি ডাব্লুটি এবং তিনটি এএইচআর ঘাটতিপূর্ণ ইঁদুরের অঙ্গ টিস্যু থেকে ট্রাইজোল [এর সাথে বিচ্ছিন্ন ছিল। তারপরে 400 ng RNA বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টেজ M-MLV (প্রোমেগা, ম্যাডিসন, WI, USA) এবং র্যান্ডম হেক্সামার প্রাইমার ব্যবহার করে বিপরীত প্রতিলিপি করা হয়েছিল। রটার-জিন Q (কিয়াজেন, হিলডেন, জার্মানি) তে প্রতিটি মাউস টিস্যুর জন্য জিনের এক্সপ্রেশন স্তরগুলি 15 μL চূড়ান্ত ভলিউমে, 7.5 μL রটার জিন সাইব্রগ্রিনটিএম （বিওরাড, ফেল্ডকিরচেন, জার্মানি）, প্রতিটি প্রাইম 1 ইউএম ধারণ করে প্রতি মাউস টিস্যুর জন্য সদৃশভাবে পরিমাপ করা হয়েছিল। ,1.5 μL cDNA এবং RNase মুক্ত জল। প্রাইমারের কার্যকারিতা ছিল 90 শতাংশ থেকে 146 শতাংশের মধ্যে। প্রাইমার সিকোয়েন্স এবং দক্ষতার জন্য সারণি S2 দেখুন। অভিব্যক্তি স্তরগুলি একই নমুনায় একটি হাউসকিপিং জিন হিসাবে RPS6 এর অভিব্যক্তিতে ক্যালিব্রেট করা হয়েছিল {{13} }সিটি পদ্ধতি [69]।

2.4.সিলিকো বিশ্লেষণে

সিএএইচআর এলবিডির হোমোলজি মডেলিং

C. elegans AhR LBD (অবশেষ 267-372) এর কাঠামোগত মডেল হোমোলজি মডেলিং দ্বারা তৈরি করা হয়েছিল। CeAhR PASB-এর সাথে সর্বোচ্চ সিকোয়েন্স আইডেন্টিটি (প্রায় 20 শতাংশ) ভাগ করে সমজাতীয় bHLH-PAS পরিবারের সদস্যদের PASB ডোমেনের এক্স-রে কাঠামোগুলি টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল: সার্কাডিয়ান লোকোমোটর আউটপুট চক্র কাপুট (CLOCK, PDB: 4F3L), নিউরোনাল PAS ডোমেন-ধারণকারী প্রোটিন 3(NPAS3, PDB:5SY7), হাইপোক্সিয়া-ইনডিউসিবল ফ্যাক্টর 20(HIF2o, PDB:3H82,4ZP4,3F1N) এবং lo(HIFlo, PDB:4H6J)। মডেলটি MODELLER[70-72] দিয়ে প্রাপ্ত হয়েছিল৷cistanche tubulosa উপকারিতা এবং পার্শ্ব প্রতিক্রিয়াসেরা DOPE স্কোর [73] এর উপর ভিত্তি করে তৈরি করা 10টি থেকে সর্বোত্তম মডেলটি নির্বাচন করা হয়েছিল। মডেলগুলির গুণমান প্রোচেক ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল [74]। মাধ্যমিক কাঠামোগুলি DSSPcont [75] দ্বারা দায়ী করা হয়েছিল। CASTp সার্ভার ব্যবহার করে মডেল করা LBD-এর মধ্যে বাঁধাই গহ্বরকে চিহ্নিত করা হয়েছে[76]। মডেলগুলির ভিজ্যুয়ালাইজেশন PYMOL ব্যবহার করে সম্পন্ন হয়েছিল [77]।

2.5.পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ

অন্যথায় বলা না থাকলে, গ্রাফপ্যাড প্রিজম (সংস্করণ 6.01) (গ্রাফপ্যাড সফ্টওয়্যার, Inc. সান দিয়েগো, CA, USA) পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। জীবন/স্বাস্থ্য স্প্যান অ্যাসেসের জন্য, OASIS ব্যবহার করে পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ করা হয়েছিল[53]। মাইক্রোয়ারে ডেটার পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ R (R ফাউন্ডেশন (ভিয়েনা, অস্ট্রিয়া)) এ সম্পাদিত হয়েছিল। বক্সপ্লটগুলি গ্রাফপ্যাড প্রিজমে (সংস্করণ 6.01) (গ্রাফপ্যাড সফ্টওয়্যার, Inc. সান দিয়েগো, CA, USA) তৈরি করা হয়েছিল এবং মধ্যমা (রেখা), 25-75ম পার্সেন্টাইল (বক্স), এবং 10-90ম পার্সেন্টাইল দেখান (ঘুঁটি)।

3। ফলাফল

3.1। কারকিউমিন AhR-নির্ভরশীল এবং-স্বাধীন পদ্ধতিতে স্বাস্থ্যের স্প্যানকে প্রচার করে

ahr-1 হারানো বেসাল অবস্থার মধ্যে C.elegans's' health-এবং জীবনকালকে উৎসাহিত করে[14] এবং এটি স্তন্যপায়ী AhR মডুলেটর, যেমন benzo[a]pyrene (BaP), UVB এর প্রতিক্রিয়ায় বয়স-সম্পর্কিত বৈশিষ্ট্যকে নেতিবাচকভাবে প্রভাবিত করে হালকা, এবং মাইক্রোবায়োটা [25]। খাদ্যতালিকাগত পলিফেনল, যেমন কার-জিরা, স্তন্যপায়ী AhR মডুলেটরগুলির একটি গুরুত্বপূর্ণ গোষ্ঠী গঠন করে যার সাথে সি. এলিগানস [78,79]-এ দীর্ঘায়ু প্রভাব রয়েছে। এইভাবে আমরা কারকিউমিন এর ahr{10} নির্ভরতার জন্য জীবনকাল-বর্ধিত প্রভাব তদন্ত করেছি। কারকিউমিন পুনরুৎপাদন করে এবং উল্লেখযোগ্যভাবে সি. এলিগানের জীবনকাল এবং স্বাস্থ্যের পরিধিকে ahr-1-নির্ভরশীল পদ্ধতিতে প্রসারিত করে (চিত্র 1A,B)। পূর্বে, আমরা দেখিয়েছি যে হান্টিংটন ডিজিজ এবং পারকিনসন্স ডিজিজ মডেলগুলিতেও ahr-এর ক্ষতির আয়ু বৃদ্ধি পায়, যথাক্রমে অ্যাগ্রিগেশন-প্রোন পলিগ্লুটামিন (পলিকিউ40) এবং -সিনুকলিন (-সিন) এর পেশী-ওভার এক্সপ্রেশন সহ একই সময়ে তাদের প্রোটিন সমষ্টির সামগ্রী বৃদ্ধি করে [25]। মজার বিষয় হল, কারকিউমিন চিকিত্সা পলিকিউ40 এবং -সিন এগ্রিগেটের সংখ্যা ahr-7 কার্যকারিতার ক্ষতির সমান পরিমাণে বাড়িয়েছে (চিত্র 1C)। কারকিউমিন এই রোগের মডেলগুলিতে (চিত্র 1DE) জীবনকাল এবং লোকোমোটরি ক্ষমতাকেও উন্নীত করেছে, কিন্তু Ahr-1 ক্ষতি এবং কারকিউমিনের পরিপূরকগুলির প্রভাবগুলি PolyQbackground (চিত্র 1D) তে সংযোজন ছিল, যা AHR-1-স্বাধীন প্রতিরক্ষামূলক ফাংশন প্রকাশ করে অন্তত এই আপোষহীন পটভূমিতে কারকিউমিনের।

চিত্র 1. কারকিউমিন একটি AHR-1-নির্ভর এবং-স্বাধীন পদ্ধতিতে স্বাস্থ্যের প্রচার করে। DMSO-বা কারকিউমিন-চিকিত্সা করা wt এবং ahr-1 নেমাটোডের আয়ুষ্কাল (A) এবং স্বাস্থ্যের স্প্যান (B) বক্ররেখা। সারভাইভাল কার্ভ 5টি পরীক্ষায় 290-300 কৃমি/পরিস্থিতির পুল করা ডেটা দেখায়। পরিসংখ্যানগত পরীক্ষা: লগ-র‍্যাঙ্ক পরীক্ষা, # তাৎপর্য বনাম DMSO, *তাৎপর্য বনাম ডব্লিউটি, বনফেরোনিপ-মান<0.05.(c) quantification="" of="" aggregates="" in="" 10-day-old="" polyq;wt="" and="" poly="" air-1="" (left="" panel)="" or="" 7-day-old="" async;wt="" and="" an;ahr-1="" (right="" panel).="" boxplots="" show="" pooled="" data="" from="" 59-111="" worms/conditions="" in="" 3="" experiments.="" statistical="" test:1-way="" anova="" with="" tukey's="" multiple="" comparisons=""><0.05><0.05 vs.dmso.(d,e)life/health="" span="" of="" polyq;wt="" and="" polyq;ahr-1.survival="" curves="" show="" pooled="" data="" of="" 180="" worms/conditions="" in="" 3="" experiments.="" statistical="" test:="" log-rank="" test,significance="" vs.="" dmso,="" *="" significance="" vs.="" wt,="" bonferroni="" p-value=""><>

3.2.ugt-45 কারকিউমিনের অ্যান্টি-এজিং প্রভাব এবং ahr-1 হ্রাসের মধ্যস্থতা করে

কারকিউমিনের সম্ভাব্য ডাউনস্ট্রিম ahr{0}}নির্ভর প্রভাবকগুলির সন্ধানে, আমরা লক্ষ্যবস্তু এবং নিরপেক্ষ পন্থা গ্রহণ করেছি। আমরা ধ্রুপদী স্তন্যপায়ী AhR টার্গেট জিনের অভিব্যক্তি পরীক্ষা করেছি এবং সাইপ জিনের উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করেছি যেহেতু কার্কিউমিন স্তন্যপায়ী কোষে CyplA1 এবং CyplB1 অভিব্যক্তিকে পরিবর্তন করে [80,81]। যাইহোক, সেমি-কোয়ান্টিটেটিভ রিয়েল-টাইম পিসিআর (qPCR) দ্বারা C.elegans-এ 47টি ভিন্ন সাইপের পরিমাপ প্রকাশ করে যে শুধুমাত্র cyp-13B1 উল্লেখযোগ্যভাবে হয় ahr-1 হ্রাস বা কার্কিউমিন দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল ahr-1-নির্ভর পদ্ধতিতে (চিত্র S1A-B), যখন অন্য তিনটি cyps(যেমন, cyp-13A5, cyp-13A8 এবং cyp-42A1) ছিল শুধুমাত্র ahr-1(চিত্র S1) অনুপস্থিতিতে কারকিউমিন দ্বারা বৃদ্ধি পায়। এই ডেটা, অন্যান্য কাজের সাথে [25,82], পরামর্শ দেয় যে সাইপস সম্ভবত CeAhR এর প্রধান লক্ষ্য নয়। এটি বন্য-প্রকার এবং ahr-1 মিউট্যান্টগুলিতে আমাদের ট্রান্সক্রিপ্টমিক বিশ্লেষণ দ্বারাও সমর্থিত। প্রকৃতপক্ষে, নিউরোনাল সংকল্পে AHR-1 ভূমিকার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ [37,38,40,41], বন্য-প্রকার এবং ahr-1 মিউট্যান্টগুলির মধ্যে জিনের অভিব্যক্তি পরিবর্তনগুলি নিউরোনাল বিকাশের সাথে যুক্ত প্রক্রিয়াগুলিতে সমৃদ্ধি দেখায় এবং পার্থক্য এবং ধ্রুপদী ডিটক্সিফিকেশন জিনগুলিতে কোন বড় পরিবর্তন নেই (চিত্র 2A)। ahr-1(jul45) এবং ওয়াইল্ড-টাইপ (atf-2 এর মধ্যে কিছু আপ-এবং ডাউন-নিয়ন্ত্রিত জিনের qPCR বিশ্লেষণ। , K04H4.2, egl-46, T20F5.4, ptr-4, dyf-7,clec-209, C01B4.6, C01B4.7, F56A4.3) বেশিরভাগই বেসাল অবস্থায় তাদের ahr-1-নির্ভরতা নিশ্চিত করেছে (চিত্র 2B) কিন্তু UVB [25] বা কারকিউমিন (চিত্র 2C) এই জিনের প্রকাশকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত করেনি। আমরা ভাবছিলাম যে এই জিনগুলির অভিব্যক্তি পরিবর্তনগুলি বিবর্তনীয়ভাবে সংরক্ষিত এবং 8- এবং 18-মাস বয়সী বন্য-প্রকারের বিভিন্ন টিস্যুতে (যেমন, মস্তিষ্ক, যকৃত, অন্ত্র এবং রক্তে) তাদের অভিব্যক্তি মূল্যায়ন করা হয়েছে কিনা AhR KO ইঁদুর। কিছু জিন টিস্যু-নির্দিষ্ট পদ্ধতিতে তরুণ(atf-2 homolog) বা বৃদ্ধ (lpr-4/5 homologs) ইঁদুরের মধ্যে বর্ধিত অভিব্যক্তির প্রবণতা দেখায়, কিন্তু কোনো সুস্পষ্ট প্যাটার্ন বা সংরক্ষিত পরিবর্তন ছিল না। পর্যবেক্ষণ করা হয়েছে (চিত্র S2)। এই ফলাফলগুলি স্তন্যপায়ী প্রাণীদের মধ্যে সম্ভাব্য প্রজাতি-নির্দিষ্ট পার্থক্য বা টিস্যু-নির্ভর AhR ট্রান্সক্রিপশনাল কার্যকলাপকে প্রতিফলিত করে যা সি. এলিগানসে সম্পূর্ণ-প্রাণী ট্রান্সক্রিপমিক বিশ্লেষণ দ্বারা উপেক্ষা করা হয়। C. elegans wild-type এবং ahr-1(jul45) এর মধ্যে সবচেয়ে ভিন্নভাবে প্রকাশ করা জিনগুলির একটি পুঙ্খানুপুঙ্খ পরীক্ষায় দেখা গেছে যে এই জিনের অনেকের অভিব্যক্তি সি.এলেগানে বার্ধক্যের সময় এবং খাদ্যতালিকাগত স্তন্যপায়ী AhR মডুলেটর দ্বারা প্রভাবিত হয় ( যেমন, quercetin এবং resveratrol)[25], এইভাবে পলিফেনল-মডুলেটেড জিন এক্সপ্রেশনে AHR-1 এর ভূমিকার পরামর্শ দেয়। এই দৃশ্যের সাথে সামঞ্জস্য রেখে, মাইক্রোয়ারে ডেটা দেখায় যে কার্কিউমিন চিকিত্সার উপর ভিন্নভাবে প্রকাশিত বেশিরভাগ জিন প্রকৃতপক্ষে একটি ahr-1-নির্ভর পদ্ধতিতে নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল (চিত্র 2D; টেবিল 1)।cistanche tubulosa নির্যাসবন্য-প্রকারে কারকিউমিন দ্বারা পরিবর্তিত 47টি জিনের মধ্যে (43টি আপ-এবং 4টি ডাউন-নিয়ন্ত্রিত), মাত্র 5টিও কারকিউমিন দ্বারা প্ররোচিত হয়েছিল ahr-1(ju145)৷ AHR-1-নির্ভর পদ্ধতিতে কারকিউমিন দ্বারা নিয়ন্ত্রিত জিনের মধ্যে ছিল ফেজ Il এনজাইম এবং মজার বিষয় হল, তাদের মধ্যে কিছু (ugt-9 এবং ugt-29), একই দিকে কারকিউমিন দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল orby ahr এর ক্ষতি-1 (সারণী 1)। এইভাবে, আমরা তাদের অভিব্যক্তি এবং অতিরিক্ত ugt(ugt-45 এবং ugt-57) পরীক্ষা করেছি যেগুলি একাধিক তুলনার জন্য সংশোধন করা হয়নি এমন একটি কম সীমাবদ্ধ পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ প্রয়োগ করার সময় আলাদাভাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। পরীক্ষিত জিনগুলির মধ্যে, ugt-45 ahr-1(ijul45)এবং কার্কিউমিন চিকিত্সার (চিত্র 3A,B) দ্বারা বৃদ্ধি পেয়েছিল৷ এছাড়াও আমরা বন্য-প্রকার এবং এর মধ্যে কিছু ডিটক্সিফিকেশন জিনের অভিব্যক্তিতে পরিবর্তন লক্ষ্য করেছি৷ টিস্যু-নির্ভর পদ্ধতিতে AhR KO ইঁদুর। এই জিনগুলির ডিফারেনশিয়াল এক্সপ্রেশন মস্তিষ্কে সর্বোচ্চ ছিল, যেখানে Ugt2a3 (ugt-9 এবং ugt-29 C.elegans-এ) নিচে ছিল- এবং Hpgds (gst-4 C. এলিগানসে) আপ-নিয়ন্ত্রিত ছিল (চিত্র S3A)। ইঁদুরের যকৃতের নমুনায় পরীক্ষিত কোনো জিনের অভিব্যক্তিতে কোনো পরিবর্তন ঘটেনি (চিত্র S3B)। C, এলিগানস ডেটার সাথে সামঞ্জস্য রেখে, ugt-45 murine homolog Ugt3a2 ইঁদুরের মধ্যে অতিরিক্ত এক্সপ্রেশনের দিকে একটি প্রবণতা দেখায়। আহর কেও ইঁদুরের অন্ত্র (চিত্র S3C)। উল্লেখযোগ্যভাবে, ugt-45 RNAi কারকিউমিন (চিত্র 3C,D) বা ahr-1 অবক্ষয় (চিত্র 3E,F) দ্বারা প্রচারিত জীবন ও স্বাস্থ্যের স্প্যানের উপর উপকারী প্রভাবগুলি প্রতিরোধ করেছে যা নির্দেশ করে যে দুটি হস্তক্ষেপ নির্ভর করতে পারে তাদের অ্যান্টি-এজিং অ্যাক্টিভিটি বের করতে যৌথভাবে ডাউনস্ট্রিম সিগন্যালিং মডিউল করা হয়েছে।

চিত্র 2. কার্কিউমিন দ্বারা পৃথকভাবে নিয়ন্ত্রিত জিনগুলি প্রাথমিকভাবে একটি ahr-1-নির্ভর পদ্ধতিতে নিয়ন্ত্রিত হয়। (A) Ahr-1 বনাম wt-এ GO টার্ম ফিউশনের পরে জৈবিক প্রক্রিয়াগুলির জন্য জিন অন্টোলজি(GO) সমৃদ্ধকরণ। (B, C) wt এবং ahr এর মধ্যে সবচেয়ে শক্তিশালী ডাউন- এবং আপ-নিয়ন্ত্রিত জিনের অভিব্যক্তি qPCR দ্বারা wt বনাম ahr-1(B) এবং DMSO- বনাম মূল্যায়ন করা হয়েছিল . কারকিউমিন-চিকিত্সা নিমাটোড (সি)। বক্সপ্লট 3টি পরীক্ষা থেকে ডেটা দেখায়। অভিব্যক্তিটি DMSO-চিকিত্সা করা wt (ড্যাশড লাইন) এর সাথে সম্পর্কিত দেখানো হয়েছে। পরিসংখ্যানগত পরীক্ষা:1-টুকির একাধিক তুলনা পরীক্ষা,*p-মান সহ ANOVA<0.05 vs.wt.="" (d)venn="" diagram="" of="" differentially="" expressed="" genes="" on="" the="" microarray.="" the="" number="" of="" genes="" that="" were="" differentially="" up-or="" down-regulated="" between="" the="" indicated="" conditions="" is="" shown="" in="" red="" and="" blue,="" respectively.="" the="" numbers="" in="" the="" interchanges="" refer="" to="" the="" genes="" that="" occurred="" in="" both="" comparisons.="" the="" values="" in="" the="" lower="" right="" corner="" show="" the="" number="" of="" genes="" on="" the="" array="" that="" were="" not="" differentially="">

চিত্র 3.ugt-45 কার্কিউমিন এবং ahr-1 মিউট্যান্টের আয়ুষ্কালের জন্য প্রয়োজন। (A, B) জিনের অভিব্যক্তি qPCR দ্বারা wt বনাম ahr-1(A) এবং DMSO- বনাম কারকিউমিন-চিকিত্সা করা wt নেমাটোড (B) দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। বক্সপ্লট 3টি পরীক্ষা থেকে ডেটা দেখায়। অভিব্যক্তিটি DMSO-চিকিত্সা করা wt (একটি ড্যাশড লাইন হিসাবে নির্দেশিত) এর সাথে সম্পর্কিত দেখানো হয়েছে। পরিসংখ্যানগত পরীক্ষা: 2-ওয়ে আনোভা সিডাকের একাধিক তুলনা পরীক্ষা, *পি-মান<0.05vs.wt,><0.05 vs.="" dmso.="" (c,d)effect="" of="" ugt-45="" rnai="" on="" the="" curcumin-mediated="" life/health="" span="" extension="" in="" the="" wt.="" survival="" curves="" show="" pooled="" data="" of="" 120="" worms/condition="" in="" 2="" replicates.="" statistical="" test:="" log-rank="" test,="" "significance="" vs.="" dmso,*="" significance="" vs.control="" rnai,="" bonferroni=""><0.05.(e,f)effect of="" ugt-45="" rnai="" on="" ahr-1-mediated="" life/healthspan="" extension.="" survival="" curves="" show="" pooled="" data="" of="" 120="" worms/condition="" in="" 2="" replicates.="" statistical="" test:="" log-rank="" test,#="" significance="" vs.="" wt,*="" significance="" vs.="" control="" rnai,="" bonferroni=""><>

3.3। AHR-1 এবং Curcumin স্বাধীনভাবে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে রক্ষা করে

পলিফেনলগুলির উপকারী বৈশিষ্ট্যগুলি প্রায়শই প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS)|83,84] থেকে রক্ষা করার ক্ষমতার জন্য দায়ী করা হয়। যেহেতু AhR অক্সিডেটিভ স্ট্রেস-মধ্যস্থতা প্রক্রিয়ার সাথে জড়িত [85-87], তাই আমরা ভেবেছিলাম যে কারকিউমিন AhR-নিয়ন্ত্রিত অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিক্রিয়াগুলির মাধ্যমে প্রাণীদের শারীরবৃত্তিকে প্রভাবিত করতে পারে কিনা। আমরা লক্ষ্য করেছি যে ahr-1 মিউট্যান্টরা আরও মাইটোকন্ড্রিয়াল(mt)ROS তৈরি করে এবং একটি হ্রাস পায় মাইটোকন্ড্রিয়াল ঝিল্লি সম্ভাবনা (চিত্র 4A,B), দীর্ঘায়ু [88,89] এর সাথে সম্পর্কযুক্ত দুটি প্যারামিটার। মাইটোহরমেসিস প্যারাডাইম ahr-1(jul45) এর সাথে সামঞ্জস্য রেখে কিছুটা বেশি mtROS উৎপন্ন করে এবং বেশি দিন বাঁচে, এই প্রাণীগুলি বন্য ধরণের তুলনায় অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের প্রতি বেশি সংবেদনশীল ছিল। বিশেষত, জংলি টাইপের (চিত্র 4C-F) তুলনায় ahr-1(jul45) প্রাণীদের লাফানো, গতিশীলতা এবং বেঁচে থাকার উপর juglone এবং H2O2 দ্বারা প্ররোচিত ক্ষতিকর প্রভাবগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে শক্তিশালী ছিল। এই ডেটাগুলি পরামর্শ দেয় যে AHR-1 হ্রাসের বেসাল অবস্থায় উপকারী মোটর মেটিক প্রভাব রয়েছে, যখন অক্সিডেটিভ স্ট্রেস সুরক্ষার জন্য এর উপস্থিতি প্রয়োজন, এইভাবে দুটি প্রায়শই বয়স-সম্পর্কিত পরামিতিগুলিকে মুক্ত করে, যথা জীবনকাল এবং চাপ প্রতিরোধ। পরিবর্তে, কারকিউমিন বন্য-প্রকার এবং ahr{21}} মিউট্যান্ট (চিত্র 4E,F) উভয় ক্ষেত্রেই H,O, এবং জুগ্লোন প্রতিরোধের উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নতি করেছে, পরামর্শ দেয় যে কারকিউমিন একটি ahr-1-স্বাধীন অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিক্রিয়া তৈরি করে। আয়ুষ্কাল এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস প্রতিরোধের অসংলগ্ন নিয়ন্ত্রণের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, ugt-45 নীরবতা ahr-1 মিউট্যান্ট বা কার্কিউমিন-চিকিত্সা করা প্রাণীদের জন্য অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের সংবেদনশীলতাকে প্রভাবিত করেনি (চিত্র 4G)।cistanche tubulosa পর্যালোচনাএইভাবে, ahr-1 এবং ugt-45 এর মাধ্যমে কার্কিউমিনের দীর্ঘায়ু প্রভাব রয়েছে, কিন্তু স্বাধীন প্রক্রিয়ার মাধ্যমে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে রক্ষা করে।

3.4। Nrf2/SKN-1 Curcumin এর AhR-স্বাধীন প্রভাবের মধ্যস্থতা করে

অতিরিক্ত বয়স-সম্পর্কিত বৈশিষ্ট্যগুলিতে AhR-curcumin crosstalk এর আরও মূল্যায়ন করার জন্য, আমরা মানব প্রাথমিক ইসি-তে পরিযায়ী ক্ষমতা পরিমাপ করেছি - জাহাজের কার্যকারিতার জন্য একটি হলমার্ক, যা বয়সের সাথে হ্রাস পায় [90] এবং AhR অ্যাক্টিভেশন [14] দ্বারা হ্রাস পায়। Ahr-1 দমন এবং কারকিউমিনের অ্যান্টি-বার্ধক্য ক্রিয়াকলাপের সাথে সামঞ্জস্য রেখে, AhR ওভার এক্সপ্রেশন উল্লেখযোগ্যভাবে বাধাগ্রস্ত হয়েছিল, যখন কারকিউমিন বৃদ্ধি পেয়েছে, প্রাথমিক মানব ইসির স্থানান্তর ক্ষমতা (চিত্র 5A)। উল্লেখ্য, কারকিউমিন দ্বারা পরিযায়ী ক্ষমতার আনয়ন খালি ভেক্টর- বা AhR এক্সপ্রেশন ভেক্টর-ট্রান্সফেক্ট কোষে (চিত্র 5A) তুলনীয় ছিল। যাইহোক, কারকিউমিন-চিকিত্সা করা কোষগুলির স্থানান্তর AhR ওভার এক্সপ্রেশন দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে: কার্কিউমিন খালি ভেক্টর-ট্রান্সফেক্ট কোষগুলিতে প্রতি উচ্চ শক্তি ক্ষেত্রে 60টি স্থানান্তরিত কোষ পর্যন্ত প্ররোচিত করে, যখন AhR ওভার এক্সপ্রেসিং কোষগুলিতে উচ্চ শক্তি ক্ষেত্রে প্রতি 25 কোষ পর্যন্ত (চিত্র 5A)। এই তথ্যগুলি পরামর্শ দেয় যে কার্কিউমিনের প্রো-মাইগ্রেটরি প্রভাবটি AhR-স্বাধীন প্রক্রিয়া দ্বারা পরিমিত হয় তবে সম্ভবত AhR কার্যকলাপ হ্রাস দ্বারাও। আমরা পরবর্তীতে কারকিউমিন-চিকিত্সা করা মানব ইসি-তে অন্তঃকোষীয় AhR বিতরণ এবং cVplal এর অভিব্যক্তি নির্ধারণ করেছি, Curcumin AhR-নিউক্লিয়ার ট্রান্সলোকেশন (চিত্র 5B) বা সাইপ্লাল এক্সপ্রেশন (চিত্র 5C) প্রভাবিত করেনি। AhR-স্বাধীন পদ্ধতিতে কার্কিউমিন দ্বারা সংশোধিত পথের সন্ধানে, আমরা নিমাটোড ট্রান্সক্রিপ্টোমিক প্রোফাইলে ফিরে আসি যাতে ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টরগুলি নিয়ন্ত্রন করে জিনগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে অহরহ-1 বা বন্য-প্রজাতির প্রাণীদের মধ্যে কার্কিউমিন চিকিত্সার দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয় (সারণী 1 ) সিলিকো অনুসন্ধানে এটি রেডক্স ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর SKN-1 চিহ্নিত করেছে, মানব Nrf2 (পারমাণবিক ফ্যাক্টর এরিথ্রয়েড 2-সম্পর্কিত ফ্যাক্টর 2), যার কারকিউমিন [91] দ্বারা সক্রিয়করণ প্রায়ই সম্ভাব্য মধ্যস্থতাকারী হিসাবে রিপোর্ট করা হয় এর অ্যান্টি-অক্সিডেন্ট কার্যকলাপ [92,93]। তদনুসারে, প্রোটোটাইপ C.elegans Nrf2/SKN-1-নির্ভরশীল জিন, gst-4, আলহর-1 মিউট্যান্টে অতিমাত্রায় প্রকাশ করা হয় [25] এবং বন্য-প্রকারে কার্কিউমিন দ্বারা প্ররোচিত হয় এবং আরও ahr-1 মিউট্যান্টে (চিত্র 5D)। তদুপরি, কারকিউমিন প্রাথমিক মানব ইসি (চিত্র 5E) তে Nrf2 এর স্থিতিশীলতা এবং পারমাণবিক স্থানান্তর বৃদ্ধি করেছে এবং ম্যাঙ্গানিজ সুপারঅক্সাইড ডিসম্যুটেজ (Sod2)-এর অভিব্যক্তিকে প্ররোচিত করেছে—একটি ক্লাসিক Nrf2 টার্গেট জিন——একটি খালি ভেক্টর বা কোষে স্থানান্তরিত কোষে AhR shRNA (চিত্র 5F) দ্বারা নীরব করা হয়েছে। EC-তে AhR shRNA দ্বারা Sod2 ইনডাকশনের অভাব অভিব্যক্তিতে আংশিক হ্রাস (50 শতাংশ) (চিত্র S3D) এর কারণে হতে পারে, যা Nrf2 বা অতিরিক্ত ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর (TF) সক্রিয় করার জন্য যথেষ্ট নাও হতে পারে, যা , C.elegans-এ, সম্পূর্ণ AhR হ্রাসের পরে gst-4 [94] এর আবেশের সাথে একমত হতে পারে। মজার বিষয় হল, Hpgds, C.elegans gst-4-এর একটি হোমোলগ, AhR KO ইঁদুরের মস্তিষ্কে উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছিল (চিত্র S3A) কিন্তু এটি Nrf2 এর লক্ষ্য নয়। Ahr-1 হ্রাস দ্বারা সক্রিয় সম্ভাব্য Nrf2/SKN-1 স্বাধীন সংকেতের আরও প্রমাণ হল যে কারকিউমিন দ্বারা GST-4 সক্রিয়করণ ত্বক-7 RNAi দ্বারা সম্পূর্ণরূপে দমন করে C.elegans ওয়াইল্ড টাইপ, যেখানে ahr-1 মিউট্যান্টরা এখনও ত্বক-1 অবক্ষয় হওয়া সত্ত্বেও gst-4 প্ররোচিত করে (চিত্র 5G, H)। যাইহোক, ত্বক-1 RNAi বন্য-প্রকার এবং ahr-1(ju145)(চিত্র 5I) উভয় ক্ষেত্রেই অক্সিডেটিভ স্ট্রেস প্রতিরোধ ক্ষমতা কমিয়েছে। অপ্রত্যাশিতভাবে, ত্বক-1 নীরবতা কারকিউমিন-চিকিত্সা করা প্রাণীদের জুগ্লোন প্রতিরোধকে প্রভাবিত করেনি (চিত্র 5I)। আমাদের ডেটা একটি জটিল পরিস্থিতি প্রকাশ করে যেখানে কার্কিউমিন AhR-নির্ভর বা AhR-স্বাধীন কিন্তু Nrf2/SKN-1-নির্ভর (এবং অতিরিক্ত) সংকেতের উপর নির্ভর করে বিভিন্ন অ্যান্টি-এজিং বৈশিষ্ট্য প্রচার করে।

চিত্র 4. AHR-1 এবং কার্কিউমিন স্বাধীনভাবে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে রক্ষা করে। (A) MitoSOX-stained wt বা ahr-1 নেমাটোডে প্রতিনিধিত্বমূলক চিত্র (বাম) এবং DSRed তীব্রতা পরিমাপ (ডান)। বক্সপ্লট 3টি পরীক্ষায় 129-135 কৃমি/পরিস্থিতি থেকে পুল করা ডেটা দেখায়। (বি) মাইটোকন্ড্রিয়া ঝিল্লি সম্ভাব্যতা নির্দেশিত বয়সের নেমাটোডে TRME দাগ দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। প্রতিনিধি চিত্র (বাম) এবং টিএমআরই ফ্লুরোসেন্স (ডান) এর পরিমাণ উপস্থাপন করা হয়েছে। বক্সপ্লটগুলি 3টি পরীক্ষা থেকে পুল করা ডেটা দেখায়৷ (C,D) H2O2 চিকিত্সার পরে wt এবং ahr-1 মিউট্যান্টগুলির ফ্যারিঞ্জিয়াল পাম্পিং কার্যকলাপ (C) এবং গতিশীলতা (D)৷ বক্সপ্লট 3-4পরীক্ষায় 39-54(C) বা 35-36 ওয়ার্ম/কন্ডিশন (D) থেকে পুল করা ডেটা দেখায়।*p-মান<0.05 vs.wt,$=""><0.05 vs.control="" treatment,="" statistical="" test:="" 1-way="" anova="" with="" tukey's="" multiple="" comparisons="" test.="" (e)pharyngeal="" pumping="" of="" curcumin-treated="" nematodes="" after="" h,="" o,="" treatment.="" boxplots="" show="" pooled="" data="" from="" 32="" worms/conditions="" in="" 2experiments.="" *=""><0.05><0.05cur vs.="" dmso="" treatment,="" $=""><0.05 h2o2="" vs.="" control="" statistical="" test:2-way="" anova="" with="" tukey's="" multiple="" comparisons="" test.(f)influence="" of="" curcumin="" on="" juglone-induced="" toxicity.="" survival="" curves="" show="" pooled="" data="" of="" 500="" worms/condition="" in="" 20="" experiments.="" *significance="" alhr-1="" vs.wt,#significance="" curcumin="" vs.dmso,="" bonferroni=""><0.05.(g) effect="" of="" ugt-45="" rnai="" in="" curcumin-fed="" wt="" and="" ahr-1="" worms.="" survival="" curves="" show="" pooled="" data="" of="" 150="" worms/condition="" in="" 6experiments.="" statistical="" test:="" log-rank="" test,="" *="" significance="" ahr-1="" vs.="" wt,#significance="" curcumin="" vs.dmso,="" bonferroni=""><0.05. no="" statistical="" significance="" was="" observed="" in="" ugt-45="" vs.="" control="" rnai-treated="">

চিত্র 5. কারকিউমিন AhR থেকে স্বাধীন Nrf2/SKN-1 সক্রিয় করে। (A) কারকিউমিন (cur)-এ স্ক্র্যাচ ক্ষত অ্যাস-অথবা DMSO-চিকিত্সা করা মানব প্রাথমিক ইসি একটি খালি ভেক্টর (EV) বা একটি এক্সপ্রেশন ভেক্টর দিয়ে স্থানান্তরিত মানুষের AhR। উপরের প্যানেল: প্রতিনিধি ছবি; ড্যাশড লাইন মাইগ্রেশন শুরুর প্রতিনিধিত্ব করে। স্কেল বার: 100 um. নিম্ন প্যানেল: পরিমাণ নির্ধারণ; বক্সপ্লট 4-6পরীক্ষার ডেটা দেখায়। পরিসংখ্যানগত পরীক্ষা:1-ওয়ে ANOVA,*p<0.05><0.05 ys.dmso.(b,c)human="" primary="" ec="" were="" treated="" with="" cur="" or="" dmso.="" (b)representative="" immunostainings:="" ahr="" is="" stained="" in="" red,="" nuclei="" were="" visualized="" with="" dapi="" (blue),="" the="" cytoskeleton="" is="" counterstained="" with="" phalloidin="" (green),="" merge="" shows="" an="" overlay="" of="" all="" fluorescence="" channels.="" in="" the="" negative="" control="" (-con),="" the="" first="" antibody="" was="" omitted,="" and="" cells="" were="" stained="" with="" alexa="" 488-coupled="" phalloidin="" and="" dapi.scale="" bar:50="" um.(c)="" relative="" capital="" expression="" was="" assessed="" by="" qpcr.="" mean="" expression="" in="" the="" dmso-treated="" controls="" was="" set="" to="" 1.="" boxplots="" show="" data="" from="" 7="" experiments.="" (d)pgst-4:gfp="" expression="" in="" dmso-and="" curcumin-treated="" (cur)wt="" and="" alr-1="" worms.="" boxplots="" show="" pooled="" data="" of="" 118-138="" worms/conditions="" in4=""><0.05><0.05 vs.="" dmso="" treatment,="" statistical="" test:1-way="" anova.(e)representative="" immunostaining="" images="" of="" human="" primary="" ec="" treated="" with="" cur="" or="" dmso:="" nrf2="" is="" stained="" in="" red,="" nuclei="" were="" visualized="" with="" dapi="" (blue),="" the="" cytoskeleton="" is="" counterstained="" with="" phalloidin(green),="" merge="" shows="" an="" overlay="" of="" all="" fluorescence="" channels.="" in="" the="" negative="" control(-="" con)="" the="" first="" antibody="" was="" omitted,="" and="" cells="" were="" stained="" with="" alexa="" 488-coupled="" phalloidin="" and="" dapi.="" scale="" bar:="" 50="" um.(f)="" human="" primary="" ec="" was="" transfected="" with="" an="" empty="" vector(ev)or="" an="" expression="" vector="" for="" an="" shrna="" targeting="" the="" human="" ahr="" transcript="" (shahr).="" relative="" sod2="" expression="" was="" assessed="" by="" qpcr,="" and="" mean="" expression="" in="" the="" ev="" transfected="" cells="" was="" set="" to="" 1.="" boxplots="" show="" data="" of="" 7experiments.=""><0.05 vs.="" respective="" control.="" (g,h)="" post-4:gfp="" expression="" in="" dmso-or="" cur-treated="" wt="" and="" ahr-1="" nematodes="" subjected="" to="" control="" or="" skin-1="" rnai.="" representative="" images(g)="" and="" gst-4-driven="" gfp="" quantification(h)="" are="" shown.="" boxplots="" show="" pooled="" data="" of="" 103-189="" worms/conditions="" in="" 4="" experiments.="" (i)="" juglone="" stress="" survival="" in="" curcumin-="" or="" dmso-treated="" wt="" and="" alhr-1="" nematodes="" subjected="" to="" control="" or="" skn-1="" rnai.="" kaplan="" meier="" survival="" curves="" show="" pooled="" data="" of="" 100="" worms/condition="" in="" 4="" experiments.="" statistical="" test:="" log-rank="" test,="" *="" significance="" ahr-1="" vs.="" wt,="" #significance="" curcumin="" vs.="" dmso,="" $="" significance="" skn-1="" vs.="" con="" rnai,="" bonferroni="" p-value=""><>

3.5। কারকিউমিন এবং প্রো-অক্সিডেন্ট AHR-1 কার্যকলাপে বিপরীত প্রভাব প্রদর্শন করে

কমে যাওয়া AhRexpression/ক্রিয়াকলাপের অ্যান্টি-বার্ধক্য প্রভাবের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, আমাদের ডেটা পরামর্শ দেয় যে কারকিউমিন AHR-1-নিয়ন্ত্রিত পথগুলিকে AHR-1 এক্সপ্রেশন/ক্রিয়াকলাপের হ্রাস বা অভিনয়ের মাধ্যমে দমন করে C.elegans-এর আয়ু বাড়াতে পারে সাধারণ ডাউনস্ট্রিম সিগন্যালিং পাথওয়েতে। তাই, আমরা C.elegans-এ AHR-1 ক্রিয়াকলাপ পরিমাপ করার চেষ্টা করেছি, কিন্তু অ্যান্টি-বডিগুলি (স্তন্যপায়ী AhR বা CeAhR এর বিরুদ্ধে কাস্টমাইজড অ্যান্টিবডির বিরুদ্ধে) বা ফ্লুরোসেন্টলি ট্যাগ ব্যবহার করে AHR-1 এক্সপ্রেশন এবং উপকোষীয় স্থানীয়করণের মূল্যায়ন করার অসংখ্য প্রচেষ্টা। রিপোর্টাররা (OP562, UL1709, ZG93) অর্থপূর্ণ প্রমাণ দেয়নি। বিবেচনা করে যে AHR-1 XREs in vitro [35] এর সাথে আবদ্ধ, আমরা AHR-1 কার্যকলাপের জন্য একটি রিডআউট হিসাবে XRE-চালিত জিন এক্সপ্রেশন ব্যবহার করার কথা ভেবেছিলাম। এইভাবে, আমরা বানর থেকে প্রাপ্ত Cos7 কোষের দিকে ঘুরেছি, যেগুলি অন্তঃসত্ত্বা AhR প্রকাশ করে না এবং এইভাবে কোন অন্তঃসত্ত্বা AhR কার্যকলাপ প্রদর্শন করে না [95,96] এবং AHR এর জন্য একটি রিডআউট হিসাবে XRE-চালিত লুসিফেরেজ ইন্ডাকশন নিরীক্ষণের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে-1 কার্যকলাপ (ল্যারিগোট এট আল।; এই গবেষণার সাথে জমা দেওয়া)। যখন Cos7 কোষগুলি C.elegans AhR/alr-1, ARNT/aha-1 প্রকাশকারী ভেক্টরের সাথে সহ-স্থানান্তরিত হয়েছিল, এবং মানুষের CYPIA1 জিন [64] AHR এর একটি লুসিফেরেজ-কাপলড XRE-ধারণকারী প্রোমোটার {27}} বেসাল (যানবাহন-চিকিত্সা) অবস্থায় কম কার্যকলাপ দেখায়৷ লক্ষণীয়, কারকিউমিন বা অন্যান্য নিউট্রাসিউটিক্যালস দিয়ে চিকিত্সা যা সি.এলিগানে স্বাস্থ্যকর বার্ধক্য বাড়ায়, যেমন লুটেইন [৯৭] এবং রেসভেরাট্রল [৯৮,৯৯], উল্লেখযোগ্যভাবে AHR-1 কার্যকলাপকে দমন করে (চিত্র 6A-C)। পরিবর্তে, BaP এবং leflunomide, স্তন্যপায়ী প্রাণীদের মধ্যে পরিচিত AhR অ্যাক্টিভেটর, আমাদের ব্যবহৃত ঘনত্বে AHR-1 কার্যকলাপকে (চিত্র 6A,B) প্রভাবিত করেনি। উল্লেখযোগ্যভাবে, AHR-1 কার্যকলাপটি Cos7 কোষে বিলুপ্ত করা হয়েছিল একটি ভেক্টর দ্বারা ট্রান্সফেক্ট করা ahr-1(jul45) অ্যালিলের পরিবর্তে বন্য-টাইপ অ্যালিল (চিত্র 6A-C), প্রস্তাব করে যে jul45 একটি সত্য লস-অফ-ফাংশন অ্যালিল এবং মাপা লুসিফেরেজ তীব্রতা কার্যকরী AHR-1 এর কারণে।

তারপরে আমরা তদন্ত করার চেষ্টা করেছি যে কারকিউমিন সরাসরি বাঁধাই বা পরোক্ষ মডুলেশন দ্বারা AHR-1-এর কার্যকলাপ হ্রাস করে কিনা। আজ অবধি, C.elegans AHR-1-এর কোনো লিগ্যান্ড সনাক্ত করা যায়নি, এবং যেহেতু এর LBD-এর কোনো তথ্য পাওয়া যায় না, তাই আমরা এটিকে চিহ্নিত করার জন্য একটি ইন সিলিকো বিশ্লেষণ করেছি। দুটি AHR-1 isoforms, la এবং 1b, সারিবদ্ধ ছিল এবং যদিও দৈর্ঘ্যে ভিন্ন, তাদের PASB ডোমেন ক্রম অভিন্ন। এই ক্রমটি তখন ড্রোসোফিলা মেলানোগাস্টারের PASB ডোমেনের সাথে এবং মেরুদণ্ডী প্রাণীর দুটি AhR-এর সাথে সংযুক্ত করা হয়েছিল যার জন্য পূর্বে কাঠামোগত মডেল তৈরি করা হয়েছিল, যেমন মাউস (Mus musculus)[100], এবং zebrafish (Danio rerio)[101](Figure) 6D)। সারিবদ্ধকরণটি PAS ডোমেনের সবচেয়ে পরিবর্তনশীল অঞ্চলে অমেরুদণ্ডী প্রাণীর ক্রম মোছার প্রধান বিশেষত্ব সহ প্রজাতির মধ্যে স্পষ্ট পার্থক্য দেখায়, নমনীয় অঞ্চলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, হেলিকাল বান্ডেল (C , D , E helices) এবং সংযোগকারী ছোট লুপগুলি সহ এই উপাদানগুলি (চিত্র 6D, ই)। এই মুছে ফেলা এই AhR-এর বাঁধাই গহ্বরে উপলব্ধ স্থান কমাতে পারে। আমরা তখন হোমোলজি মডেলিং দ্বারা AHR-1 PASB-এর একটি 3D মডেল তৈরি করেছি৷ এই মডেলটি সাধারণ PAS ভাঁজ উপস্থাপন করে, তবে অন্যান্য AhR-এর তুলনায় একটি ছোট Do helix সহ। যাইহোক, অভ্যন্তরীণ গহ্বর কিছু অদ্ভুততা আছে; এতে আরও হাইড্রোফোবিক অবশিষ্টাংশ রয়েছে এবং কিছু অভ্যন্তরীণ পার্শ্ব চেইন দ্বারা অর্ধেক কেটে ফেলা হয়। বিশেষ করে, H365 এবং H274 মুখোমুখি হয় এবং গহ্বরের মাঝখানে একটি হাইড্রোজেন বন্ধন গঠন করতে পারে; অধিকন্তু, Y332, L363, এবং L302 সাইড চেইনগুলি গহ্বরকে বাধা দিতে পারে, লিগ্যান্ডগুলির জন্য উপলব্ধ অভ্যন্তরীণ স্থান হ্রাস করে (চিত্র 6E)। এই ছোট এবং ছেঁটে যাওয়া গহ্বরটি সম্ভবত বড় লিগ্যান্ডগুলিকে (যেমন, TCDDor curcumin) বাঁধতে দেয় না। AHR-1 স্ট্রাকচারাল মডেলের মতো, জেব্রাফিশ zfAhRla-এর একটি মডেল দেখিয়েছে যে TCDD-বাইন্ডিং প্যারালগ zfAhR1b এবং zfAhR2 [101]-এর তুলনায় LBD গহ্বর কাটা হয়েছে। ছোট এবং নমনীয় লিগ্যান্ড, যেমন লেফ্লুনোমাইড, zfAhRla আবদ্ধ করে এবং সক্রিয় করে, কিন্তু আমরা যে লেফ্লুনোমাইড ঘনত্ব পরীক্ষা করেছি তা আমাদের Cos7 সেল সিস্টেমে AHR-1 সক্রিয় করেনি (চিত্র 6B)। আমরা তখন ভেবেছিলাম যে এলবিডির ছোট গহ্বরের জন্য দায়ী অ্যামিনো অ্যাসিডের মিউটেশনগুলি ক্লাসিক্যাল লিগ্যান্ডগুলিকে CeAhR সক্রিয় করতে দেয় কিনা। CeAhR L363 অবশিষ্টাংশ (চিত্র 6D) মাদ্রিদে mAhRb-Iand V375-এর A375-এর সাথে মিলে যায় এবং এই অবশিষ্টাংশটি লিগ্যান্ড বাঁধাই [102] এর উপর একটি বড় প্রভাব ফেলে। একইভাবে, zfAhRla-এর T386(চিত্র 6D), mAhRb-1-এ A375 এবং zfAhR1b এবং zfAhR2-তে A386-এর সাথে মিলে যাওয়া, zfAhRla-এর TCDD বাইন্ডিং-এর অভাবের ক্ষেত্রে অবদান রাখে এবং, যখন TCDH-এ মিউটেশন করা হয় তখন অ্যালানাইন 2-এ CD26-এর বিশ্রাম হয়। প্রবর্তিত [101]। অ্যামিনো অ্যাসিড Y296 ইতিমধ্যেই C.elegans(H274) এ একটি হিস্টিডিন। এইভাবে, আমরা CeAhR ভেক্টরের L363 অবস্থানে শুধুমাত্র লিউসিনকে একটি অ্যালানাইন (L363A) (চিত্র 6D, E একটি তীর দ্বারা নির্দেশিত) রূপান্তরিত করেছি। অধিকন্তু, আমরা নিকটবর্তী হিস্টিডিনকে H365 অবস্থানে গ্লুটামিনে (H365Q) রূপান্তরিত করেছি, যা ইঁদুরের Q377 (চিত্র 6D, E একটি তীর দ্বারা নির্দেশিত) যেহেতু এটি সম্ভবত H274 এর সাথে একটি হাইড্রোজেন বন্ধন গঠন করে এবং AHR এর ছোট গহ্বরে অবদান রাখতে পারে{ {49}} (চিত্র 6E)। তারপরে আমরা পরীক্ষা করেছি যে L363 এবং H365 পরিবর্তিত হলে স্তন্যপায়ী AhR লিগ্যান্ডগুলি AHR-1 কার্যকলাপকে প্রভাবিত করে কিনা। যাইহোক, এই পরিবর্তনগুলি, জেব্রাফিশের মতো জেনোবায়োটিক লিগান্ডের প্রতিক্রিয়া পুনরুদ্ধার করার পরিবর্তে [১০১], এমনকি বেসাল AHR-1 কার্যকলাপকেও বিলুপ্ত করে, যা ju145 অ্যালিলের মতো (চিত্র 6F)। এই ফলাফলগুলি C.elegans এবং zebrafish-এর LBD-এর মধ্যে স্পষ্ট পার্থক্য দেখায় কিন্তু দেখায় যে LBD বেসাল AHR-1 কার্যকলাপের জন্য মৌলিক। পূর্ববর্তী অধ্যয়নগুলি [35,38,82] সহ, আমাদের ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে AHR-1 শাস্ত্রীয় জেনোবায়োটিক-প্ররোচিত ট্রান্সঅ্যাক্টিভেশন প্রতিক্রিয়ার সাথে জড়িত হওয়ার সম্ভাবনা কম, যা এইভাবে নিয়ন্ত্রিত ahr-1-এর সাথে প্রাসঙ্গিক নাও হতে পারে শারীরবৃত্তীয় বার্ধক্য পরিবর্তে, উদ্ভিদ থেকে প্রাপ্ত যৌগগুলি AHR-1-মডুলেটেড পথের দমনের মাধ্যমে অন্তত আংশিকভাবে সংরক্ষিত প্রভাব ফেলতে পারে। আমাদের 3D মডেল পরামর্শ দেয় যে কারকিউমিন তার LBD আবদ্ধ করে AHR-1 কার্যকলাপকে সংশোধন করে না। সুতরাং, কারকিউমিন দ্বারা AHR-1 কার্যকলাপের দমন এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রভাবের কারণে হতে পারে। এই সম্ভাবনার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের প্রতি C.elegans ahr-1 মিউট্যান্টের বর্ধিত সংবেদনশীলতা, আমরা দেখতে পেয়েছি যে AHR-1 কার্যকলাপ প্রকৃতপক্ষে ROS-প্ররোচিত এজেন্টদের দ্বারা বৃদ্ধি পেয়েছে। যথা, প্রো-অক্সিডেন্ট রোটেনোন দিয়ে চিকিত্সা করা Cos7 কোষগুলি C.elegans বা murine AhR দ্বারা স্থানান্তরিত হলে AhR কার্যকলাপ বৃদ্ধি পায় কিন্তু জুল45 অ্যালিল বা এলবিডি মিউটেশনের (চিত্র 6G, H) সাথে স্থানান্তরিত হলে নয়।

সামগ্রিকভাবে, যদিও CeAhR অ্যাক্টিভেশন জীবনের প্রথম দিকে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে রক্ষা করে, এর কমে যাওয়া অভিব্যক্তি বার্ধক্যকে প্রতিরোধ করে এবং কার্কিউমিনের উপকারী অ্যান্টি-এজিং প্রভাবের মধ্যস্থতা করে (চিত্র 7)। কারকিউমিন এইভাবে রেডক্স টিএফ অ্যাক্টিভেশনকে প্রেক্ষাপট-এবং সময়-নির্ভর পদ্ধতিতে ভারসাম্য বজায় রাখতে সাহায্য করতে পারে এবং সরাসরি এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রভাবের মাধ্যমে এবং/অথবা Nrf2/SKN-1 (বা অন্যান্য TF) সক্রিয়করণের মাধ্যমে AhR দমনকে সমর্থন করতে পারে, যা একই সাথে হতে পারে কারকিউমিনের বার্ধক্য বিরোধী কার্যকলাপের মধ্যস্থতা করে।

চিত্র 6. কারকিউমিন এবং প্রো-অক্সিডেন্টের AHR-1 কার্যকলাপে বিপরীত প্রভাব রয়েছে। (AC) AHR-1 কার্যকলাপের মূল্যায়ন Cos7 কোষে নির্দেশিত যৌগগুলির সাথে চিকিত্সার পরে wt AHR-1(wt) বা AHR-1 যা ju145 পয়েন্ট মিউটেশন (ju145) বহন করে এবং AHA-1 পাশাপাশি একটি XRE-ইন্ডুসিবল লুসিফেরেস। বক্সপ্লট 3-5পরীক্ষার ডেটা দেখায়।* p-মান<0.05><0.05 vs.="" dmso/etoh,="" statistical="" test:="" 2-way="" anova="" and="" tukey's="" multiple="" comparisons="" test.="" (d)="" alignment="" of="" the="" lbds="" from="" c.elegans,="" drosophila,="" and="" zebrafish="" ahrs.="" the="" color="" scheme="" for="" residues:="" red,="" acidic;="" blue,="" basic;="" purple,="" polar;="" yellow,="" cys;="" brown,="" aromatic;="" green,="" hydrophobic;="" orange,="" ser,="" thr;="" gray,="" pro;="" white,="" gly.="" (e)="" secondary="" structures="" attributed="" by="" dsspcont="" to="" the="" ceahr="" pasb="" are="" indicated="" on="" top(light="" gray="" bars="" for="" helices="" and="" dark="" gray="" bars="" for="" β-strands)="" and="" labeled="" according="" to="" the="" pas="" domain="" nomenclature.="" asterisks="" mark="" the="" amino="" acids="" likely="" contributing="" to="" the="" inability="" of="" ceahr="" to="" bind="" big="" ligands.="" amino="" acids="" highlighted="" by="" an="" arrow="" were="" mutated="" for="" the="" investigation="" of="" the="" lbd="" function="" (panels="" f,="" h).i3dmodels="" of="" the="" ceahr="" (left)="" and="" the="" mahr="" (right)="" pasb="" domains="" were="" obtained="" by="" homology="" modeling,="" shown="" in="" a="" cartoon="" representation.="" secondary="" structures="" attributed="" by="" dsspcont="" are="" labeled="" according="" to="" the="" pas="" domain="" nomenclature.="" the="" colored="" internal="" area="" (blue="" for="" ceahr="" and="" yellow="" for="" mahr)defines="" the="" molecular="" surface="" of="" the="" binding="" cavity="" identified="" by="" castp.="" in="" the="" car="" model,="" the="" amino="" acids="" protruding="" into="" the="" binding="" cavity="" (asterisks="" in="" panel="" d)="" are="" labeled="" and="" shown="" as="" blue="" sticks.="" the="" mahr="" amino="" acids="" corresponding="" to="" those="" displayed="" in="" the="" ceahr="" model,="" are="" labeled="" and="" shown="" as="" yellow="" sticks.="" amino="" acids="" highlighted="" by="" an="" arrow="" were="" mutated="" for="" studying="" the="" lbd="" function="" (panels="" f,="" h).="" (f)="" ahr="" activity="" in="" bap-or="" mnf-treated="" cos7="" cells="" transfected="" with="" either="" ahr-1,="" an="" ahr-1="" with="" l363a="" and="" h365o="" mutations="" (lbd="" mutant),="" or="" mouse="" ahr(mahr),="" as="" well="" as="" aha-1="" and="" an="" xre-driven="" luciferase.="" boxplots="" show="" data="" from="" 3experiments.="" statistical="" analysis:2-way="" anova="" and="" tukey's="" multiple="" comparisons=""><0.05 vs.wt,"=""><0.05 vs.dmso.(g)effect="" of="" rotenone="" on="" ahr="" activity="" in="" cos7="" cells="" transfected="" with="" ahr-1(either="" wt="" or="" ju145)="" as="" well="" as="" aha-1="" and="" an="" xre-driven="" luciferase.="" boxplots="" show="" data="" from="" 3="" experiments.="" statistical="" analysis:2-way="" anova="" and="" tukey's="" multiple="" comparisons="" test.*=""><0.05vs.wt, #=""><0.05 vs.="" dmso.(h)effect="" of="" rotenone="" on="" ahr="" activity="" in="" cos7="" cells="" transfected="" with="" either="" ahr-1,="" ahr-1="" with="" l363a="" and="" h365q="" mutations(lbd="" mutant),="" or="" mouse="" ahr(mahr).boxplots="" show="" data="" from="" 3="" experiments.="" statistical="" analysis:2-way="" anova="" with="" tukey's="" multiple="" comparisons=""><0.05 vs.wt/ahr-1,="" #="" p-value=""><0.05 vs.="">

চিত্র 7. প্রো-এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্টের প্রতি C.elegan এর প্রতিক্রিয়াতে AHR-1 সংকেত পথের প্রস্তাবিত মডেল। "স্বাভাবিক" অবস্থায় (মাঝারি প্যানেল), AHR-1 আন্তঃকোষীয় ROS দ্বারা সক্রিয় হয়। এর ফলে সাইটোসোলিক AHR-1 থেকে চ্যাপেরোনগুলি বের হয়ে যায় এবং পরবর্তীতে AHR-1-এর পারমাণবিক ট্রান্সলোকেশন হয়। নিউক্লিয়াসে, AHR-1 AHR নিউক্লিয়ার ট্রান্সলোকেটার (AHA{) এর সাথে একটি হেটেরোডাইমার তৈরি করে {7}})এবং টার্গেট জিনের XRE-এর সাথে আবদ্ধ হয়, যার ফলে আন্তঃকোষীয় ROS মাত্রা হ্রাস পায়। এই পরিস্থিতিতে, ahr-1 ফাংশন হারানোর ফলে জীবনকাল বৃদ্ধি পায়। অ্যান্টিঅক্সিডেন্টের উপস্থিতিতে (বাম প্যানেল), অন্তঃকোষীয় ROS ঘনত্ব কম থাকে যার ফলে AHR-1 সাইটোপ্লাজমে অবস্থান করে, এর কোফ্যাক্টর দ্বারা আবদ্ধ। বেসাল AHR-1 কার্যকলাপের বাধা একটি বর্ধিত জীবনকালের দিকে নিয়ে যায়। প্রো-অক্সিডেন্টের উপস্থিতিতে (ডান প্যানেল) AHR-1 অতিরিক্ত ROS দ্বারা সক্রিয় হয়, যার ফলে এটির পারমাণবিক ট্রান্সলোকেশন, AHR-1-AHA-1 হেটেরোডাইমার গঠন এবং এর সূচনা হয় টার্গেট জিন ট্রান্সক্রিপশন। Ahr-1 KO-তে, AHR-1-প্ররোচিত লক্ষ্য জিনের মাধ্যমে ROS-এর ডিটক্সিফিকেশন কমে যাওয়ায় ROS জমা হয় এবং Ahr-1 KO-কে সংবেদনশীল করে তোলে।

4। আলোচনা

AhR মূলত স্তন্যপায়ী প্রাণীদের মধ্যে তার জেনোবায়োটিক প্রতিক্রিয়া ক্রিয়াকলাপের জন্য আবিষ্কৃত হয়েছিল যা পরিবেশগত বিষাক্ত পদার্থ বা অন্তঃসত্ত্বা লিগ্যান্ডগুলির আবদ্ধতার উপর প্রবর্তিত হয়েছিল, তবে লিগ্যান্ড বাঁধাইয়ের উপর নির্ভর করে না এমন মডুলেটরগুলিও বিদ্যমান কিন্তু অনেক কম তদন্ত করা হয়। C.elegans তার ক্লাসিক্যাল জেনোবায়োটিক প্রতিক্রিয়া থেকে স্বাধীন AhR ক্রিয়াকলাপ তদন্ত করার জন্য একটি অনন্য মডেল জীবের প্রতিনিধিত্ব করে কারণ CeAhR প্রোটোটাইপ AhR লিগ্যান্ডগুলিকে আবদ্ধ করে না [35,39]। এই মডেলটি ব্যবহার করে, আমরা বার্ধক্য প্রক্রিয়ায় AhR-এর জন্য একটি বিবর্তনীয়ভাবে সংরক্ষিত ফাংশন সনাক্ত করেছি [14] এবং দেখিয়েছি যে কিছু স্তন্যপায়ী AhR মডুলেটর (যেমন, ব্যাকটেরিয়া, বাল এবং UVB) AHR-1 এর মাধ্যমে বার্ধক্যের পরামিতিগুলিকে প্রভাবিত করে। প্রসঙ্গ-নির্ভর পদ্ধতি [25]। এখানে, আমরা খাদ্যতালিকাগত পলিফেনল কারকিউমিন দ্বারা প্রজাতি জুড়ে AhR-নিয়ন্ত্রিত বার্ধক্য বৈশিষ্ট্যগুলির আরও যান্ত্রিক তদন্তের সাথে আমাদের পূর্ববর্তী ফলাফলগুলি অনুসরণ করেছি। ভিভো, ইন ভিট্রো এবং সিলিকোতে আমাদের সম্মিলিত বিশ্লেষণগুলি একটি নতুন এবং জটিল পরিস্থিতি প্রকাশ করেছে: যদিও কার্কিউমিন নেমাটোড এবং মানব প্রাথমিক ইসি-তে অ্যান্টি-এজিং বৈশিষ্ট্যগুলিকে অন্তত একটি AhR-নির্ভর পদ্ধতিতে প্রচার করে, উভয় প্রজাতিতে এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রভাব নির্ভর করে AhR-স্বাধীন কিন্তু প্রাথমিকভাবে Nrf2/SKN-1 নির্ভর প্রক্রিয়ার উপর।

আমরা প্রথমবারের মতো দেখিয়েছি যে কারকিউমিন AHR-1-নির্ভর পদ্ধতিতে C.elegans-এর শারীরবৃত্তীয় বার্ধক্যকে বিলম্বিত করেছে। কারকিউমিনের সম্ভাব্য ডাউনস্ট্রিম ahr-1-নির্ভর প্রভাবকগুলির অনুসন্ধানে, আমরা লক্ষ্যযুক্ত এবং নিরপেক্ষ পদ্ধতির নিযুক্ত করেছি এবং দেখেছি যে কার্কিউমিন চিকিত্সার উপর ডিফারেনশিয়ালি নিয়ন্ত্রিত জিনগুলির বেশিরভাগই AHR-1-নির্ভর পদ্ধতিতে নিয়ন্ত্রিত হয়। তদুপরি, এই জিনগুলির মধ্যে অনেকগুলি AHR-1-ক্ষয়প্রাপ্ত এবং কারকিউমিন-চিকিত্সা করা প্রাণীদের মধ্যে একই রকম অভিব্যক্তির ধরণ প্রদর্শন করে, যা পরামর্শ দেয় যে কারকিউমিন AHR-1 কার্যকলাপকে দমন করার মাধ্যমে আয়ু বৃদ্ধির প্রচার করছে৷ আশ্চর্যজনকভাবে, লক্ষ্যযুক্ত বা ট্রান্সক্রিপ্টোমিক বিশ্লেষণ উভয়ই ক্লাসিক্যাল AhR টার্গেট জেন যেমন কাপের জন্য একটি প্রধান ভূমিকা নির্দেশ করে না, যেগুলির পরিবর্তে মূলত নিউরনে কম প্রকাশ পাওয়া গেছে (ল্যারিগোট এট আল।; এই গবেষণার সাথে জমা দেওয়া)। মজার বিষয় হল, এই ফলাফলগুলি সিপিএস জিনের মাধ্যমে এই নির্দিষ্ট ক্ষেত্রে AhR-এর নিউরোনাল-নির্দিষ্ট প্রভাবগুলিকে মুখোশ করতে পারে সমগ্র প্রাণীর ট্রান্সক্রিপ্টোমিক্স নির্দেশ করতে পারে। আমরা দেখেছি যে ভিন্নভাবে প্রকাশিত জিনের মধ্যে অনেকগুলি ফেজ-II-ডিটক্সিফিকেশন এনজাইমের অন্তর্গত, যেমন অন্ত্র-45, যা উভয় ahr-1 হ্রাস (এবং AhR KO ইঁদুরের মস্তিষ্কে) দ্বারা বৃদ্ধি পেয়েছে এবং তাদের আয়ু বাড়াতে মধ্যস্থতা করতে কারকিউমিন চিকিৎসা। পরিবর্তে, কারকিউমিন চিকিত্সা এবং ahr{12}} হ্রাস অন্য ফেজ-II-ডিটক্সিফিকেশন এনজাইম, GST-4-এর অভিব্যক্তিকে বাড়িয়েছে, বিভিন্ন প্রক্রিয়ার মাধ্যমে: পূর্বেরটি নির্ভর করে, যখন পরেরটি মূলত স্বাধীন, Nrf2/ SKN-1, C.elegans [103]-এ অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের উপর GST-4 প্রবর্তনকারী একটি ক্লাসিক্যাল রেডক্স TF। তাছাড়া, C.elegans (GST-4 এক্সপ্রেশন) এবং হিউম্যান প্রাইমারি EC (Sod2 এক্সপ্রেশন এবং মাইগ্রেটরি ক্যাপাসিটি) এ কারকিউমিন Nrf2/SKN-1-নির্ভর প্রতিক্রিয়া প্ররোচিত করে, এটি অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকেও C.eleansকে রক্ষা করে। একটি SKN-1-স্বাধীন পদ্ধতিতে। C.elegans-এ, কারকিউমিন খুব অসুস্থ ত্বকে আয়ু বাড়াতে পারে না-1(zu67) মিউট্যান্টস [104], যেখানে GST-4 EGF সিগন্যালিং দ্বারা একটি SKN-1-স্বতন্ত্র পদ্ধতিতে প্ররোচিত হতে পারে [৯৪] এবং EGF পাথওয়ে এবং AhR এর মধ্যে ক্রসস্টাল স্তন্যপায়ী প্রাণীদের মধ্যে রিপোর্ট করা হয়েছিল [105]।

মজার বিষয় হল, এবং বন্য ধরনের স্ট্রেনের বিপরীতে, আমরা যথাক্রমে হান্টিংটন এবং পারকিনসন রোগের নিমাটোড মডেলগুলিতে স্বাস্থ্যের উপর কারকিউমিনের একটি AHR-1-স্বতন্ত্র প্রভাব লক্ষ্য করেছি। এই স্ট্রেনে, কারকিউমিন চিকিত্সা প্রোটিন সমষ্টির সংখ্যা AHR-1 ঘাটতির মতো একই পরিমাণে বাড়িয়েছে, যা প্রোটিন একত্রিতকরণের একটি প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব নির্দেশ করে এবং/অথবা প্রোটিন একত্রিতকরণের বিরুদ্ধে সুরক্ষিত পথগুলির কার্কিউমিন সক্রিয়করণ ঘন্টা-1 হ্রাস। প্রোটিন একত্রিতকরণের উপর কার্কিউমিনের প্রভাব বিতর্কিত: এটি ফাইব্রিল গঠনকে বাধা দেয় তবে অ্যামাইলয়েডোজেনিক প্রোটিনের প্রাক-ফাইব্রিলার/অলিগোমেরিক প্রজাতিকে আবদ্ধ করে, যার ফলে তাদের একত্রিতকরণকে ত্বরান্বিত করে এবং সামগ্রিক নিউরোটক্সিসিটি [106] হ্রাস করে। উল্লেখ্য, ক্যাফিন, যা কার্ডিওভাসকুলার বার্ধক্য [66,107] এর বৈশিষ্ট্যগুলি থেকেও রক্ষা করে, A-প্ররোচিত পক্ষাঘাত প্রতিরোধ করে A-এগ্রিগেট না কমিয়ে কিন্তু প্রতিরক্ষামূলক Nrf2/SKN-1-নির্ভর পথ [108] সক্রিয় করার মাধ্যমে। C.elegans রোগের মডেলগুলিতে কার্কিউমিন বা সমস্ত{12}} অবক্ষয় দ্বারা প্রবর্তিত প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব অলিগোমেরিক/প্রি-ফাইব্রিলার প্রজাতিকে কম বিষাক্ত সমষ্টিতে অপসারণ করার প্রক্রিয়া এবং/অথবা দ্বারা মধ্যস্থতা করে কিনা তা মূল্যায়ন করা গুরুত্বপূর্ণ হবে অন্যান্য প্রক্রিয়ার সক্রিয়করণ, যেমন Nrf2/SKN-1, যা একযোগে প্রোটিওটক্সিসিটি থেকে রক্ষা করতে পারে। উল্লেখ্য, ডিটক্সিফিকেশন এনজাইমগুলিতে XRE এবং ARE (অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিক্রিয়াশীল উপাদান) উভয়ই থাকতে পারে এবং Nrf2/ARE এবং AhR/XRE নিয়ন্ত্রিত সংকেতগুলির মধ্যে একটি ইন্টারপ্লে বর্ণনা করা হয়েছে [109]। কারকিউমিন কীভাবে Nrf2 এবং AhR-নিয়ন্ত্রিত সিগন্যালিংয়ের মধ্যে ভারসাম্যের মাধ্যমে তার বিভিন্ন উপকারী অ্যান্টি-এজিং প্রভাবকে প্রচার করে তা স্পষ্ট করা আকর্ষণীয় হবে।

আমাদের সম্মিলিত পন্থা দেখায় যে কারকিউমিন AHR-1 কার্যকলাপকে বাধা দেয়। স্তন্যপায়ী প্রাণীদের মধ্যে, এটি পরামর্শ দেওয়া হয়েছিল যে কার্কিউমিনের AhR প্রতিরোধক প্রভাব সরাসরি LBD বাইন্ডিং [110] বা প্রোটিন কাইনেজ সি প্রতিরোধের দ্বারা মধ্যস্থতা করা হয় যা AhR[79] কে ফসফরিলেট করে। আরেকটি গবেষণায় ইঙ্গিত দেওয়া হয়েছে যে AhR-এর ট্রান্সক্রিপশনাল কার্যকলাপ সেলুলার রেডক্স অবস্থা এবং ক্রোমাটিন গঠনের উপর নির্ভরশীল, যা উভয়ই কার্কিউমিন দ্বারা প্রভাবিত হয়[111]। যদিও AHR-1 টিসিডিডিকে আবদ্ধ করে না, এটি XRE-কে ভিট্রোতে আবদ্ধ করে[36] তবে পদ্ধতিগত অধ্যয়ন, পলিয়ারোম্যাটিক হাইড্রোকার্বন বা অন্যান্য স্তন্যপায়ী এএইচআর লিগান্ডের সম্ভাব্যতাকে সম্বোধন করে AHR-1 মডিউল করার জন্য, প্রাথমিকভাবে অনুপস্থিত এটি মূল্যায়ন করার জন্য উপযুক্ত সরঞ্জামের অভাব। আমাদের অধ্যয়নগুলি এই শূন্যতা পূরণ করার চেষ্টা করে এবং লুসিফেরেজ অ্যাসেস (ল্যারিগোট এট আল।; এই গবেষণার সাথে জমা দেওয়া) এবং সি. এলিগেন্স এলবিডি-র সিলিকো মডেলিং-এ AHR প্রকাশকারী Cos7 কোষগুলিকে শোষণ করে, প্রকাশ করে যে কারকিউমিন AHR দমন করে -1 কার্যকলাপ, কিন্তু সম্ভবত সরাসরি LBD বাইন্ডিং দ্বারা নয়৷ আমাদের গবেষণায় ব্যবহৃত ইন ভিট্রো অ্যাস নিশ্চিত করেছে যে ক্লাসিক্যাল জেনোবায়োটিক সিগন্যালিংয়ের মাধ্যমে CeAhR সক্রিয় হয় না। তবুও, এটি CYP1A1-এ পাওয়া "ক্লাসিক্যাল" XRE যেমন PON1 [112,113]-এ পাওয়া পলিফেনল(quercetin)-প্রতিক্রিয়াশীল XRE ব্যতীত DNA অনুক্রমের সাথে AhR আবদ্ধ হওয়ার কারণে কার্যকলাপগুলি প্রকাশ করবে না। হিউম্যান প্রাইমারি ইসি-তে ইমিউনোস্টেইনিং কারকিউমিন ইনডিউসিং এএইচআর নিউক্লিয়ার ট্রান্সলোকেশনের বিরুদ্ধেও যুক্তি দেয়, যা, এএইচআর ওভার এক্সপ্রেসিং কোষে মাইগ্রেটরি ক্ষমতার প্রচারের প্রভাবের সাথে, এটিও নির্দেশ করতে পারে যে কারকিউমিন এএইচআর কার্যকলাপকে দমন করে।

আমরা প্রস্তাব করছি যে AhR বাইন্ডিং এর উপর নির্ভর না করে কার্কিউমিনের প্রতিরোধমূলক প্রভাব এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা জড়িত, যা প্রকৃতপক্ষে Nrf2/SKN-1 এর সক্রিয়করণের সাথে যুক্ত হতে পারে বা তার উপর নির্ভর করে। স্তন্যপায়ী AhR LBD-স্বাধীন অক্সিডেটিভ পরিবর্তন [85] এর মাধ্যমে ROS দ্বারা সক্রিয় হয়, কিন্তু আমাদের ডেটা দেখায় যে প্রো-অক্সিডেন্ট রোটেনোন দ্বারা AHR-1 কার্যকলাপের আনয়নের জন্য LBD-এর প্রয়োজন হয়। ROS-মধ্যস্থতা AhR অ্যাক্টিভেশনের একটি পরোক্ষ প্রক্রিয়া হল শক্তিশালী AhR ligand FICZ গঠন করা [114]। তবুও, FICZ হল একটি বড় প্ল্যানার অণু যা, আমাদের সিলিকো মডেল অনুসারে, AHR-1 LBD এর সাথে মানানসই হবে না। যদিও সঠিক প্রক্রিয়া যার দ্বারা AHR-1 কার্যকলাপ ROS দ্বারা প্রচারিত হয় এবং কারকিউমিন দ্বারা বাধা দেওয়া হয় (হয় সরাসরি ROS quenching বা পরোক্ষভাবে Nrf2 বা অন্যান্য অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট নিয়ন্ত্রক জিন সক্রিয়করণের মাধ্যমে), এটি আমাদের দ্বারা দৃঢ়ভাবে সমর্থিত ফলাফল: AHR-1 রোটেনোন দ্বারা সক্রিয় হয়, এবং ahr-1 মিউট্যান্টরা আরও mtROS প্রদর্শন করে, মাইটোকন্ড্রিয়াল ঝিল্লি সম্ভাবনা হ্রাস করে এবং H, O, এবং juglone এর পাশাপাশি UVB এবং BaP [25] এর প্রতি আরও সংবেদনশীল , উভয়ই ROS উত্পাদন করে[115,116]। এই প্রসঙ্গে, এটি লক্ষ্য করা আকর্ষণীয় যে ahr-1 মিউট্যান্টরা মাইটোকন্ড্রিয়াল ফাংশনের হালকা পরিবর্তন প্রদর্শন করে, যা মাইটোহরমেসিসের [117] অনুরূপ। এটি পরামর্শ দেয় যে সমস্ত-1 অবক্ষয় (এবং AHR বাধা দিয়ে সম্ভাব্য কারকিউমিন) হালকা মাইটোকন্ড্রিয়াল স্ট্রেসের মাধ্যমে স্বাস্থ্যের ব্যবধানকে উন্নীত করতে পারে, যা অন্যান্য ক্ষেত্রে একইভাবে সংশোধিত ডিটক্সিফিকেশন জিনের মাধ্যমে C.elegan এর আয়ু বাড়াতে পরিচিত-1 {20}} মিউট্যান্টস [118,119]। অধিকন্তু, Nrf2/SKN-1 এবং মাইটোকন্ড্রিয়া কারকিউমিন চিকিত্সার উপর AHR-1 ক্রিয়াকলাপ সংশোধন করার ক্ষেত্রে ভূমিকা পালন করে কিনা তা একটি আকর্ষণীয় সম্ভাবনা যা যাচাই করা বাকি রয়েছে।

সামগ্রিকভাবে, ভিভো অধ্যয়নের জন্য নিমাটোড C.elegans দ্বারা প্রদত্ত একাধিক বৈশিষ্ট্যের সুবিধা গ্রহণ করে, আমরা পরামর্শ দিই যে AhR-এর পূর্বপুরুষ ফাংশন জেনোবায়োটিক প্রতিক্রিয়ার পরিবর্তে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সম্পর্কিত ফেজ-এল-এনজাইমগুলির নিয়ন্ত্রণে হতে পারে। ROS-এর উচ্চ মাত্রার দ্বারা প্ররোচিত ক্ষতিকর প্রভাবের বিপরীতে, AhR-ঘাটতি দ্বারা প্রচারিত উপকারী প্রভাবগুলি হালকা মাইটোকন্ড্রিয়া স্ট্রেস এবং/অথবা হালকা ROS উৎপাদন (মিটোহরমেসিস) দ্বারা মধ্যস্থতা করা যেতে পারে, যা Nrf2/SKN-1-এর উপরও নির্ভর করে। আমরা কারকিউমিন এবং AhR-এর মধ্যে মিথস্ক্রিয়ার জন্য শক্তিশালী প্রমাণও সরবরাহ করি। AhR সিগন্যালিং এর কারকিউমিন বাধা বিবর্তনীয়ভাবে সংরক্ষিত এবং সম্ভবত AhR LBD এর সাথে আবদ্ধ হয়ে মধ্যস্থতা করা হয় না, বরং কার্কিউমিনের ROS-স্কেভেঞ্জিং বৈশিষ্ট্য বা Nrf2/SKN-1 সক্রিয়করণের মাধ্যমে। Nrf2 সিগন্যালিং পথটি প্রকৃতপক্ষে বিভিন্ন উপায়ে কার্কিউমিন দ্বারা সক্রিয় করা যেতে পারে [91]। পরিশেষে, আমাদের ডেটা দেখিয়েছে যে C.elegans (বর্ধিত GST-4 এক্সপ্রেশন এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস রেজিস্ট্যান্স) এবং মানুষের প্রাথমিক ইসি (বর্ধিত Sod2 এক্সপ্রেশন এবং মাইগ্রেটরি ক্ষমতা) উভয় ক্ষেত্রেই কারকিউমিন বার্ধক্য-বিরোধী প্রভাবকে উন্নীত করে। ), যা পলিকিউ-প্রকাশকারী প্রাণীদের স্বাস্থ্যের স্প্যানে কার্কিউমিনের সংযোজন প্রভাব এবং AHR-1 ফাংশনের ক্ষতিও ব্যাখ্যা করতে পারে।

5। উপসংহার

উপসংহারে, ইন সিলিকো, ভিট্রো এবং ভিভো পদ্ধতির একটি আসল সংমিশ্রণের মাধ্যমে, আমরা দেখিয়েছি যে CeAhR অ্যাক্টিভেশন জীবনের প্রথম দিকে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে রক্ষা করে, এর কমে যাওয়া অভিব্যক্তি বার্ধক্যকে প্রতিরোধ করে এবং কার্কিউমিনের উপকারী অ্যান্টি-এজিং প্রভাবের মধ্যস্থতা করে (চিত্র7) . কারকিউমিন এইভাবে ডিটক্সিফিকেশন/অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিক্রিয়াগুলির সাথে জড়িত বিভিন্ন ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টরগুলির কার্যকলাপের ভারসাম্য বজায় রাখতে সাহায্য করতে পারে (AhR দমন করুন এবং Nrf2 সক্রিয় করুন) যেখানে এইগুলি পরিবর্তিত হয় (AhR বাড়ান এবং Nrf2/SKN হ্রাস করুন-1), যেমন বার্ধক্য বা বয়স-সম্পর্কিত ব্যাধি। আমাদের কাজ জৈব স্বাস্থ্য এবং জীবনকালের উপর গুরুত্বপূর্ণ প্রতিক্রিয়া সহ AhR-এর ইতিমধ্যে বিশাল বহুমুখী এবং প্রসঙ্গ-নির্দিষ্ট ক্রিয়াকলাপগুলিতে জটিলতার আরও স্তর যুক্ত করে। অধিকন্তু, এটি অতিরিক্ত অধ্যয়নের দরজা খুলে দেয়, নেমাটোড সিস্টেম ব্যবহার করে AhR এর পূর্বপুরুষের কার্যাবলী আবিষ্কার এবং তদন্ত করতে, যা স্তন্যপায়ী প্রাণীদের মধ্যে সনাক্ত করার সম্ভাবনা কম।

এই নিবন্ধটি অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট 2022, 11, 613 থেকে নেওয়া হয়েছে। https://doi.org/10.3390/antiox11040613 https://www.mdpi.com/journal/antioxidants