টিউলিপোসাইডস এইচ-জে এবং আমনা এডুলিসের বাল্ব থেকে বায়োঅ্যাকটিভ উপাদান

বিমূর্ত:

তিনটি নতুন টিউলিপ পাশ H–J (1–3) এবং 11টি পরিচিত যৌগ প্রথমবারের মতো আমনা এডুলিসের বাল্বের মিথানোলিক নির্যাস থেকে পাওয়া গেছে। তাদের গঠনগুলি NMR, MS, এবং IR স্পেকট্রোস্কোপিক ডেটা, অপটিক্যাল ঘূর্ণন এবং মোশারের পদ্ধতি দ্বারা ব্যাখ্যা করা হয়েছিল। সমস্ত বিচ্ছিন্নতার মেলানোজেনেসিস বৈশিষ্ট্যগুলি B16 মেলানোমা কোষগুলিতে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ, ট্রিবিটাইল সাইট্রেট (9) এর মেলানোজেনেসিস বিরোধী কার্যকলাপ ছিল তবে B16 এর দিকে সাইটোটক্সিক ছিল। ( প্লাস)-পাইরোগ্লুটামিক অ্যাসিড (৪), ( প্লাস)-বুটাইল 5-অক্সো পাইরোলিডিন-2-কারবক্সিলেট (6), (–)-3-হাইড্রক্সি-2-মিথাইল বুটিরোলাকটোন (10 ), এবং 5- (হাইড্রোক্সিমিথাইল) ফারফুরাল (12) মেলানিন উৎপাদন এবং টাইরোসিনেজ কার্যকলাপ বৃদ্ধি করেছে। এই সক্রিয় উপাদানগুলিকে মেলানোমা এবং ত্বকের রোগ বা চুলের জন্য হাইপোপিগমেন্টেশনের জন্য মেলানোমা এবং ভিটিলিগোর বিরুদ্ধে প্রার্থী হিসাবে আরও অধ্যয়ন করা যেতে পারে।

সাদা করার গবেষণায়, আমরা দেখতে পেয়েছি যে সিস্তানচেও সাদা করার প্রভাব রয়েছে

প্রথমত, সিস্তানচে পলিস্যাকারাইড এবং ফ্ল্যাভোনয়েড সমৃদ্ধ। এই যৌগগুলি অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট হিসাবে কাজ করে এবং শরীরকে মুক্ত র‌্যাডিকেলগুলি অপসারণ করতে সাহায্য করতে পারে, ত্বকের বার্ধক্যকে ধীর করে দেয় এবং এইভাবে ত্বকের উন্নতি করে।

দ্বিতীয়ত, সিস্টানচে বিভিন্ন ধরণের অ্যামিনো অ্যাসিড, খনিজ এবং ভিটামিন রয়েছে, যা ত্বকের মেরামত এবং পুনর্জন্মের জন্য খুব উপকারী। Cistanche ত্বকের কোষগুলির বিপাককে উন্নীত করতে পারে, ত্বকের স্ব-মেরামত ক্ষমতা বাড়াতে পারে এবং ত্বককে একটি স্বাস্থ্যকর রঙে ফিরিয়ে আনতে পারে।

অবশেষে, Cistanche এ কিছু জৈব অ্যাসিড এবং ক্ষারীয় পদার্থও রয়েছে এবং এই উপাদানগুলি ত্বকের কিউটিকলের কন্ডিশনিং এবং বিপাকের উপর একটি নির্দিষ্ট প্রভাব ফেলে। এই পদার্থগুলি কার্যকরভাবে ত্বকের pH মানকে ভারসাম্যপূর্ণ করতে পারে, স্ট্র্যাটাম কর্নিয়ামের পুরুত্ব উন্নত করতে পারে এবং ত্বককে আরও স্বচ্ছ এবং সূক্ষ্ম করে তুলতে পারে।

cistanche কিনতে যেখানে ক্লিক করুন

1। পরিচিতি

আমানা এডুলিস (A. edulis; Miq.) Honda, syn. Tulipa edulis (Miq.) Baker Liliaceae পরিবারের অন্তর্গত এবং এটি একটি লোক ঔষধি উদ্ভিদ যা ক্যান্সার রোগের চিকিৎসায় ব্যবহৃত হয় [1,2]। যাইহোক, এই প্রজাতির কিছু ফাইটোকেমিক্যাল এবং জৈবিক গবেষণা আজ পর্যন্ত রিপোর্ট করা হয়েছে।

উদাহরণস্বরূপ, 95 শতাংশ এবং 50 শতাংশ EtOH নির্যাস যথাক্রমে মানুষের গ্যাস্ট্রিক (SGC7901) [1] এবং হেপাটোমা (BEL7404, HepG2, এবং Huh7) [2] কার্সিনোমা কোষগুলিতে অ্যাপোপটোসিস প্ররোচিত করতে পারে। A. edulis থেকে প্রস্তুত করা পলিস্যাকারাইডগুলিতে DPPH, OH−, এবং ABTS প্লাস স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ সহ অ্যান্টি-অক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্য রয়েছে [3-5]। ত্বকের রোগের জন্য প্রাকৃতিক পণ্য থেকে নতুন এজেন্টের গবেষণায়, আমরা দেখেছি যে A. edulis এর বাল্বের MeOH নির্যাস সম্ভাব্য মেলানোজেনেসিস নিয়ন্ত্রণ দেখায় যা এখনও গবেষণা করা হয়নি। সৌর আলো বা ক্ষতিকারক রাসায়নিক এবং প্যাথোজেনিক কারণগুলির অতিবেগুনী বিকিরণের সংস্পর্শে এলে, মাঝারি মেলানোজেনেসিস আমাদের ত্বককে কেরাটিনোসাইট এবং মেলানোসাইটগুলিতে প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির সৃষ্টি থেকে রক্ষা করতে পারে [6]। টাইরোসিনেজ হল মেলানোজেনেসিসের একটি গুরুত্বপূর্ণ এনজাইম যা আমাদের জন্য উপরে উল্লিখিত বিপজ্জনক অবস্থার বিরুদ্ধে রক্ষা করার জন্য আরও মেলানিন তৈরি করে [7]।

অতএব, A. edulis-এর সক্রিয় উপাদানগুলি আরও চিকিৎসা প্রয়োগের জন্য পরিষ্কার করার যোগ্য। এই তদন্তে, তিনটি নতুন টিউলিপ পার্শ্ব H–J (1–3) এবং 11টি পরিচিত যৌগ (4–14) (চিত্র 1) এ. এডুলিস থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং NMR, MS, এবং IR স্পেকট্রোস্কোপিক ডেটা, অপটিক্যাল ঘূর্ণন দ্বারা কাঠামোগতভাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল। , বা Mosher ester প্রতিক্রিয়া. যৌগ 9 মেলানিনের বিষয়বস্তু হ্রাস করতে পারে তবে B16 মেলানোমা কোষের দিকে সাইটোটক্সিক হতে পারে। যৌগ 4, 6, 10, এবং 12 মেলানিন উত্পাদন এবং টাইরোসিনেজ কার্যকলাপ বৃদ্ধি করেছে। সামগ্রিকভাবে, এই কাজটি প্রমাণ করেছে যে A. edulis এবং এর সক্রিয় উপাদানগুলি মেলানিন-সম্পর্কিত রোগের জন্য নতুন এজেন্ট হতে পারে, যেমন মেলানোমা এবং হাইপোপিগমেন্টেশন (ত্বকের ভিটিলিগো বা চুল সাদা করা)।

2. ফলাফল এবং আলোচনা

2.1। বিচ্ছিন্ন 1-3 এর গঠন ব্যাখ্যা

A. edulis-এর বাল্বের MeOH নির্যাস (TEM) আলাদাভাবে EtOAc-দ্রবণীয় (TEE), n-BuOH-দ্রবণীয় (TEB), এবং HO-দ্রবণীয় (TEW) ভগ্নাংশে বিভক্ত করা হয়েছিল। ভগ্নাংশ। TEE এবং TEB নির্যাসগুলির ক্রিয়া নতুন আইসোপ্রেনয়েড গ্লাইকোসাইড 1-3 এবং পরিচিত যৌগগুলি 4-14 (চিত্র 1) সরবরাহ করে। উপরন্তু, TEW নির্যাসের প্রধান উপাদান ছিল কার্বোহাইড্রেট।

1-এর HRESIMS (উচ্চ-রেজোলিউশন ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন ভর স্পেকট্রোমেট্রি) একটি (M - H- আয়ন m/z 351.1652 এ দেখিয়েছে, যা CsH2gOg এর একটি আণবিক সূত্র নির্দেশ করে (calcd forC;5HoOg; 351.1655) এবং IR-এর দুটি স্পেক্ট্রোম ডিগ্রী। হাইড্রক্সিল (3376 cm-l) এবং কার্বনিল (1725 cm-l) কার্যকারিতার জন্য শোষণ দেখায়৷ দুইটি মিথাইল, পাঁচটি মিথিলিন, সাতটি মিথিন এবং একটি চতুর্মুখী কার্বন সহ পনেরটি কার্বন সংকেত এক-মাত্রিক (1D) NMR-এ পরিলক্ষিত হয়েছিল৷ 1 এর বর্ণালী (সারণী 1)। রাসায়নিক স্থানান্তর 6c 176.6 এর উপর ভিত্তি করে কোয়াটারনারি কার্বনকে কার্বনাইল কার্বন হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল। 1D এবং HSOC (হেটেরোনিউক্লিয়ার একক কোয়ান্টাম কোহেরেন্স) NMR স্পেকট্রা একটি অ্যানোমেরিক (0/8c: 4.27) প্রদর্শন করেছে (d, J=8.0 Hz)/1{{30}}4.9), পাঁচটি অক্সিমেথলোন (0h/8c: 3.21(t, J { {34}}৷{49}} Hz)/75.1, 3.28 (ওভারল্যাপ)/71.6, 3.28 (ওভারল্যাপ)/78৷{55}}, 3.35 (t, J=8৷{67} } Hz)/77.9, and3.89 (td, I=7.0, 2.5 Hz)/73.6), এবং তিনটি অক্সিমিথিলিন (6,/6c: 3.57 (dd, J {{64}) }.5, 7৷{81}} Hz)4৷{85}}1 (dd, I {{70}}.5, 2.5 Hz)/73.1, 3.66 (dd, I { {78}}.0, 5.0 Hz), 3.85 (brd, I=12.0 Hz)/62.7 এবং 4.10 (2H, t, J=7.5 Hz)/65.5) সংকেত৷ মিথিন প্রোটন H-2 (8 2.67, C-1 (6 176) এর সাথে কুইন্ট 1-এর HMBC (হেটেরোনিউক্লিয়ার মাল্টিপল বন্ড পারস্পরিক সম্পর্ক) পারস্পরিক সম্পর্ক (চিত্র 2)। 6)/C-3 (6 73.6)/C-4 (6 73.1)/C-5 (6 13.9) , H-3 (6 3.89, td) সঙ্গে C-1/C-2(6 44.6)/C-4/C -5, H-1' (6 4.27, d) C-4 সহ, এবং মিথাইল প্রোটন H-5 (8 1.14 , d) withC-1/C-2/C-3 পরামর্শ দিয়েছে যে মিথাইল এবং হাইড্রক্সিল ময়েটিগুলি যথাক্রমে C-2 এবং C-3 এ অবস্থিত ছিল, উপরন্তু, H,-1" (8 4.10, t) এবং H-4 (6 3.57dd; 4.01, dd) এ মিথিলিন প্রোটনগুলি C{{ এর সাথে 3টি মিথস্ক্রিয়া প্রদর্শন করেছে 142}} এবং C-1' (8 104.9), যথাক্রমে, এইচএমবিসিস্পেকট্রামে (চিত্র 2) যা C-1 এবং একটি বিটাতে এন-বুটিল গ্রুপের অ্যাসাইনমেন্ট সমর্থন করে -গ্লুকোজ (H-1', 8 4.27, d, J=8.0 Hz) C-4 8]।

চিত্র 2 1-এর জন্য পর্যবেক্ষণ করা মূল COZY এবং HMBC পারস্পরিক সম্পর্ক দেখায়। 1-এর C-2 এবং C-3 (3-হাইড্রক্সি-2-মিথাইল ময়েটি) এ আপেক্ষিক কনফিগারেশনগুলি বিরোধী নির্ধারণ করা যেতে পারে -ফর্ম 3 JH2-H3 এর 7 এর মান। 9]। নিখুঁত কনফিগারেশন নির্ধারণ করতে, যৌগ 1 আলাদাভাবে (R)- এবং (S)- -মিথক্সি- -(ট্রাইফ্লুরোমিথাইল)-ফিনাইল এসিটাইল ক্লোরাইড [(R)- এবং (S)-MTPA- দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। Cl] যথাক্রমে (S)- এবং (R)-MTPA এস্টার (1a এবং 1b) পেতে পাইরিডিন-ডি5-এর উপস্থিতিতে। MTPA এস্টারগুলি সফলভাবে C-3 এবং C-20/C-30/C-40 এ তৈরি হয়েছে, যেমনটি 1H NMR এবং 1H-1H COZY থেকে ব্যাখ্যা করা হয়েছে বর্ণালী (1a, H-3, δ 5.82, m; H-20 , δ 5.70, t, J=9.5 Hz; H-30 , δ 4.39, t, J=9.5 Hz; H-40 , δ 5.76, t, J=9.5 Hz; 1b, H-3, δ 5.81, m; H{{64 }} , δ 5.56, t, J=9.5 Hz; H-30 , δ 4.12, t, J=9.5 Hz; H-40 , δ 5.66, t, J=9.5 Hz)। 1a এবং 1b (∆ মান চিত্র 3 তে দেখানো হয়েছে) এর জন্য 1H NMR রাসায়নিক পরিবর্তনের মধ্যে পার্থক্যগুলি যথাক্রমে C-3 এবং C-2 এ S- এবং R- কনফিগারেশনের অ্যাসাইনমেন্টের দিকে পরিচালিত করে। ফলস্বরূপ, যৌগ 1 বিউটাইল 4- -ডি-গ্লুকোপাইরানোস-(এস)-3-হাইড্রক্সি-(আর)-2-মিথাইল বিউটানোয়েট এবং টিউলিপ সাইড এইচ নামে ব্যাখ্যা করা হয়েছিল।

যৌগ 2, টিউলিপ সাইড I, আণবিক সূত্র দিয়েছে, C15H28O8, HRESIMS দ্বারা প্রতিষ্ঠিত (m/z 359.1686 [M plus Na] প্লাস , 359.1682 এর জন্য calcd)। 2-এর 1D NMR স্পেকট্রাও 1-এর মতোই ছিল, শুধুমাত্র মিথিলিন সিগন্যালের রাসায়নিক পরিবর্তন δH 1.65 (sext, J=7.0 Hz) এবং 1.96 (sext, J) ছাড়া।=7। COZY এবং HMBC ডেটার (চিত্র 2) উপর ভিত্তি করে, যৌগ 2 একটি আইসোপ্রেনয়েড, একটি গ্লুকোজ এবং এন-বুটিল গ্রুপগুলির সমন্বয়ে গঠিত বলে অনুমান করা হয়েছিল। H2-1" (δ 4.04, 2H, t, J=7.5 Hz/δC 65.4) এর সাথে C-1 (δ) এর HMBC 3 J পারস্পরিক সম্পর্ক 178.5) এবং H-10 (δ 4.19, d, J=8.0 Hz/δC 104.4) সঙ্গে C-4 (δ 68.4) পরামর্শ দিয়েছে যে n-বুটিল গ্রুপ এবং এক -গ্লুকোজ moiety [8] যথাক্রমে C-1 এবং C-4 এ সংযুক্ত ছিল (চিত্র 2)। মূল HMBC এবং COZY পারস্পরিক সম্পর্ক চিত্র 2-এ দেখানো হয়েছে। H3-5-এর R-কনফিগারেশন 2-এর C-2 2-এর অ্যাসিড হাইড্রোলাইসিস দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল সংশ্লিষ্ট টিউলিপালিন যৌগ, 3-মিথাইলডিহাইড্রোফুরান-2(3H)-one (চিত্র S28) [8] একটি ইতিবাচক অপটিক্যাল ঘূর্ণন সহ মান ([ ] 23 D প্লাস 18.7, CH2Cl2) (R: [ ] 25 D প্লাস 14.7, CHCl3) [10]। যৌগ 2 এর গঠনটি বিউটাইল 4- -ডি-গ্লুকোপাইরানোজ-(R){{ হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল 81}মিথাইল বিউটানোয়েট।

HRESIMS-এ m/z 303.1049 (303.1050 এর জন্য calcd) এ একটি [M প্লাস Na] প্লাস আয়নের উপস্থিতির কারণে 3-এর আণবিক সূত্রটি C11H20O8 হিসাবে অনুমান করা হয়েছিল। একটি মিথাইল (δ 17.6), তিনটি মিথিলিনস (δ 34.7, 62.8, এবং 68.6), ছয়টি মিথিন (δ 37.6, 71.6, 75.1, 77.9, 78.0, এবং 104.4), এবং একটি চতুর্মুখী কার্বন (δ18) সহ এগারোটি কার্বন সংকেত। , 3 (সারণী 1) এর 1D NMR স্পেকট্রাতে পরিলক্ষিত হয়েছিল। δ 180.6 এ কার্বন রাসায়নিক স্থানান্তরের উপর ভিত্তি করে চতুর্মুখী কার্বনকে কার্বনাইল কার্বন হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল। তদ্ব্যতীত, যৌগ 3 এন-বুটিল সংকেত ব্যতীত 2-এর অনুরূপ বর্ণালীবীক্ষণিক ডেটা দেখিয়েছে। HMBC বর্ণালীতে (চিত্র S15), δ 4.23 (d, J=8.0 Hz) এ অ্যানোমেরিক প্রোটন C-4 (δ 68.6) এর সাথে 3 J মিথস্ক্রিয়া প্রদর্শন করেছে যা -গ্লুকোজ-এ অবস্থিত সি-4। কী HMBC এবং COZY সংযোগগুলি চিত্র 2-এ দেখানো হয়েছে৷ C-2-এ পরম কনফিগারেশন নির্ধারণের জন্য যৌগ 3 যথেষ্ট পরিমাণে বিচ্ছিন্ন ছিল না৷ অবশেষে, টিউলিপ সাইড J (3), 4- -D-glucopyranose-(R)-2-মিথাইল বুটানোইক অ্যাসিড, এই গবেষণায় 1 এবং 2 এর উপরোক্ত কাঠামোগত ব্যাখ্যার কারণে চিহ্নিত করা হয়েছিল।

যৌগ 1-3 হল টিউলিপ পার্শ্ব, 4-হাইড্রক্সি2-মিথিলিন বুটানোইক অ্যাসিড (HMBA) এবং/অথবা (3S)-3,4-ডাইহাইড্রক্সি সমন্বিত এক ধরনের বিশেষ পণ্য -2-মিথিলিন বুটানোইক অ্যাসিড (DHMBA) গ্রুপগুলি C-1 এবং/অথবা C-6 অবস্থানে অ্যাসিলেটেড একটি -D-গ্লুকোজ (Glc) প্রধানত টিউলিপা [8,11] গণে পাওয়া যায় . এখন পর্যন্ত, টিউলিপ সাইড এনালগ, যার মধ্যে রয়েছে 1-টিউলিপ সাইড A, 6-টিউলিপ সাইড A, 1-টিউলিপ সাইড B, 6-টিউলিপ সাইড B এবং টিউলিপ সাইড D–G , টিউলিপা [8,11] থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছে। যাইহোক, টিউলিপ সাইড সি এর গঠন রিপোর্ট করা হয়নি এবং পূর্ববর্তী সাহিত্যে অনুপস্থিত হতে পারে [১১]। টিউলিপালিন, যেমন টিউলিপালিন A এবং (–)-টুলিপালিন বি হল টিউলিপ পার্শ্বের এগ্লাইকোন অংশ, যা টিউলিপ পার্শ্ব-রূপান্তরকারী এনজাইম [8,11] দ্বারা HMBA এবং/অথবা DHMBA গ্রুপগুলিকে মুক্ত করার পরে স্বতঃস্ফূর্তভাবে ল্যাকটোন তৈরি করে। এই সমীক্ষায়, টিউলিপ পার্শ্ব H–J নামক যৌগগুলি 1-3 টিউলিপ পার্শ্বগুলির অন্তর্গত, কিন্তু C-2 এ তাদের দ্বৈত বন্ধন হ্রাস করা হয়েছিল এবং -D-গ্লুকোজ গ্রুপগুলি C-4 (অক্সিমিথিলিন) এর সাথে সংযুক্ত ছিল , HMBA বা DHMBA তে C-1 (O-acyl কার্যকারিতা) এর পরিবর্তে (চিত্র 1)। উপরন্তু, যৌগ 10 (2S,3S) হল টিউলিপালিন কিন্তু C-2-এ বিভিন্ন কনফিগারেশনের কারণে 1 (2R,3S) থেকে বিপাক করা যায়নি। টিউলিপ পার্শ্ব 1-3 এর সম্ভাব্য জৈব সংশ্লেষণ চিত্র S29 [8,11] এ দেখানো হয়েছে।

এছাড়াও, তিনটি পাইরোগ্লুটামিক অ্যাসিড অ্যানালগ (4-6), তিনটি সাইট্রিক অ্যাসিড ডেরিভেটিভস (7-9), দুটি ফুরানন (10-11), একটি ফুরান (12), এবং দুটি স্টেরয়েড (13-14) সহ 11টি পরিচিত যৌগ ছিল। প্রথমবার এ. এডুলিস থেকে বিচ্ছিন্ন। যৌগগুলি 1-9 এবং 10-14 যথাক্রমে TEB এবং TEE অশোধিত ভগ্নাংশ থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। তাদের চিহ্নিত করা হয়েছিল ( প্লাস)-পাইরোগ্লুটামিক অ্যাসিড (4) [12], ( প্লাস)-মিথাইল 5-অক্সো পাইরোলিডিন-2-কারবক্সিলেট (5) [12], (প্লাস)- বিউটাইল {{23} }}অক্সো পাইরোলিডিন-2-কারবক্সিলেট (6) [12], 1-বুটাইল সাইট্রেট (7) [13], 1,10 -ডিবিউটাইল 5-মিথাইল সাইট্রেট (8) [ 13], ট্রিবিউটাইল সাইট্রেট (9) [13], (–)-3-হাইড্রক্সি-2-মিথাইল বিউটিরোলাকটোন (10) [14-16], (–)- মিথাইল 3-হাইড্রক্সি{{ 44}}অক্সো টেট্রাহাইড্রোফুরান-3-কারবক্সিলেট (11) [17], 5-(হাইড্রোক্সিমিথাইল) ফারফুরাল (12) [18], সিটোস্টেরল (13) [19], এবং সিটোস্টেরল-3- -ডি -গ্লুকোজ (14) [20] বর্ণালী তথ্য থেকে এবং সাহিত্যের সাথে তুলনা করা হয়।

2.2। TEW এর রাসায়নিক উপাদানের ব্যাখ্যা

TEW এর 1H এবং 13C NMR স্পেকট্রা, TEM নির্যাস থেকে একটি জল-দ্রবণীয় অপরিশোধিত ভগ্নাংশ, কার্বোহাইড্রেটের (চিত্র S16 এবং S17) এর সাথে খুব মিল দেখায়। মনোস্যাকারাইড বিশ্লেষণের পরে এই প্রজাতি থেকে তৈরি পলিস্যাকারাইডগুলিতে র্যামনোজ, জাইলোজ, অ্যারাবিনোস, গ্যালাকটোজ, ম্যানোজ, গ্লুকোজ এবং ফ্রুক্টোজ রয়েছে বলে জানা গেছে [3,8]। NMR স্পেকট্রোস্কোপিক ডেটা এবং TLC (পাতলা-স্তর ক্রোমাটোগ্রাফি) চিনির মানগুলির সাথে তুলনা করে TEW এর TLC (পাতলা-স্তর ক্রোমাটোগ্রাফি) ধরে রাখার ফ্যাক্টর (চিত্র S18-S23) পরামর্শ দিয়েছে যে TEW নির্যাসের প্রধান উপাদান ছিল ডি-গ্লুকোজ এবং ডি-ফ্রুক্টোজ।

2.3। মেলানোজেনেসিসের উপর নির্যাস এবং বিচ্ছিন্নতার প্রভাব

এই প্রজাতির MeOH নির্যাস (TEM) TEE, TEB, এবং TEW অশোধিত ভগ্নাংশে বিভক্ত করা হয়েছিল, এবং উপরে উল্লিখিত চারটি নির্যাস 12.5 থেকে 200 μL200 Sigure (L2mg/Fg) B16 মেলানোমা কোষে সাইটোটক্সিসিটি এবং মেলানোজেনেসিস প্রভাবের জন্য মূল্যায়ন করা হয়েছিল। . TEE B16 এর দিকে 200 µg/mL এবং TEB এর দিকে সুস্পষ্ট সাইটোটক্সিসিটি দেখিয়েছে সেইসাথে TEW-এর ঘনত্বে 12.5 থেকে 200 μg/mL (চিত্র S24A-1, B-1, C-1 এর ঘনত্বে সাইটোটক্সিক কার্যকলাপ ছিল }, ডি-1)। জৈবসারে, -মেলানোসাইট-উত্তেজক হরমোন (-MSH) B16 কোষকে আরও মেলানিন সংশ্লেষণ করতে সক্রিয় করতে ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং TEM মাঝারিভাবে মেলানোজেনেসিসকে উদ্দীপিত করতে পারে (চিত্র S24A-2)।

13 এবং 14 ব্যতীত বেশিরভাগ বিচ্ছিন্ন (চিত্র 1), 10 থেকে 40 μM ঘনত্বে মেলানোজেনেসিস প্রভাব নিয়ন্ত্রণের জন্য আরও পরীক্ষা করা হয়েছিল, আরবুটিন একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল (চিত্র 4)। চিত্র 4-এ দেখানো হয়েছে, যৌগ 9 স্পষ্টতই এবং ডোজ-নির্ভর মেলানিন উৎপাদনকে বাধা দেয় যা 81.9 µM (চিত্র S25) এর IC50 (অর্ধ সর্বাধিক নিরোধক ঘনত্ব) মান সহ B16 কোষের দিকে সাইটোটক্সিসিটির ফলে। বিচ্ছিন্ন 4, 6, 10 এবং 12 মেলানিনের বিষয়বস্তুর ডোজ-নির্ভর সর্বোচ্চ শতাংশ পর্যন্ত যথাক্রমে 11.9 শতাংশ, 29.8 শতাংশ, 27.2 শতাংশ, এবং 17.6 শতাংশ, 40 µM এ কোন সেলুলার বিষাক্ততা ছাড়াই। মেলানোজেনেসিসের প্রথম দুটি ধাপে টাইরোসিনেজ একটি মূল ভূমিকা পালন করে [৬]; সুতরাং, অন্তঃকোষীয় টাইরোসিনেজের উপর যৌগ 4, 6, 10 এবং 12 এর প্রভাবগুলি আরও মূল্যায়ন করা হয়েছিল। -এমএসএইচ কন্ট্রোল গ্রুপ (100 শতাংশ) (চিত্র 5 এবং টেবিল S1) এর সাথে তুলনা করলে 254.3-305.5 শতাংশ পর্যন্ত টাইরোসিনেজ কার্যকলাপ বৃদ্ধি করেছে।

ফলস্বরূপ, 4 (14.1–21.9 শতাংশ), 6 (15.8–21.9 শতাংশ), 10 (8.5–13.1 শতাংশ), এবং 12 (7.5–11.8 শতাংশ) ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে এনজাইম, টাইরোসিনেজের কার্যকলাপ মাঝারিভাবে বাড়িয়েছে। 10 থেকে 40 µM ঘনত্বে, যখন -MSH গ্রুপের সাথে তুলনা করা হয় (চিত্র 5 এবং টেবিল S1)। সেলুলার মেলানিন বিষয়বস্তু এবং যৌগ 4, 6, 10 এবং 12 এর টাইরোসিনেজের প্রভাবগুলির মধ্যে একটি পারস্পরিক সম্পর্ক গ্রাফ চিত্র S26 এ দেখানো হয়েছে। তদ্ব্যতীত, 4, 6, 10 এবং 12-এর মেলানোজেনেসিস-প্ররোচিত প্রভাবগুলি নিশ্চিত করার জন্য, প্রতিটি যৌগ বি 16 কোষে সহ-চিকিত্সা ছাড়াই যুক্ত করা হয়েছিল -এমএসএইচ যা এই পরীক্ষায় ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল (চিত্র S27)। ফলস্বরূপ, 4, 6, 10, এবং 12 ব্যক্তিরা চিত্র 4-এ দেখানো অনুরূপ মেলানিন উৎপাদনকে একাই (চিত্র S27) বাড়ায়নি। এটি পরামর্শ দেওয়া হয়েছিল যে উপরে উল্লিখিত চারটি যৌগ শুধুমাত্র -এমএসএইচ-এর মেলানোজেনেসিস প্রভাবকে বাড়িয়ে তুলতে পারে। তদনুসারে, মেলানোজেনেসিসের অতিরিক্ত সংকেত পথ, যেমন টাইরোসিনেজ-সম্পর্কিত প্রোটিন-1 (TRP-1), TRP-2, মাইক্রোফথালমিয়া-সম্পর্কিত ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর, মেলানোকোর্টিন 1 রিসেপ্টর, সাইক্লিক অ্যাডেনোসিন মনোফসফেট, প্রোটিন kinase A, cAMPresponse এলিমেন্ট-বাইন্ডিং প্রোটিন, c-Jun N-টার্মিনাল কাইনেস, এক্সট্রা সেলুলার সিগন্যাল-নিয়ন্ত্রিত কাইনেস, p38, এবং ফসফোইনোসাইটাইড 3-কিনেস/প্রোটিন কিনেস বি [7,21], আরও পরীক্ষা করা এবং নিশ্চিত করা উচিত যারা সক্রিয় উপাদান।

3. উপকরণ এবং পদ্ধতি

3.1। সাধারণ পরীক্ষামূলক পদ্ধতি

NMR স্পেকট্রা 1H এর জন্য একটি Bruker Avance Ill 500 MHz যন্ত্রে (BrukerBillerica, America) এবং 13C-NMR এর জন্য 125 MHz পরিমাপ করা হয়েছিল। রাসায়নিক স্থানান্তর (0) মানগুলি ছিল পিপিএম, এবং কাপলিং কনস্ট্যান্ট () CD সহ Hz-এ ছিল; OD, CDCl, এবং/অথবা D, O দ্রাবক হিসাবে ব্যবহৃত হত। একটি JASCO-P-2000 পোলারিমিটারে (JASCO, TokyoJapan) (কোষের দৈর্ঘ্য 10 মিমি) অপটিক্যাল ঘূর্ণন প্রাপ্ত হয়েছিল। IR স্পেকট্রা একটি PerkinElmer স্পেকট্রাম TwoFT-IR স্পেকট্রোমিটারে রেকর্ড করা হয়েছিল (PerkinElmer, Waltham, MA, USA)। নিম্ন- এবং উচ্চ-রেজোলিউশন ESIMSelectrospray ionization ভর স্পেকট্রোমেট্রি) যথাক্রমে একটি Bruker Daltonics EsquireHCT অতি উচ্চ ক্ষমতার ফাঁদ ভর স্পেকট্রোমিটার এবং একটি অরবিট্র্যাপ ভর স্পেকট্রোমিটার (LIOOrbitrap XL, Thermo Fisher Scientific) এ পরিমাপ করা হয়েছিল। TLC Kieselgel60 F254 (0.25 মিমি; মার্ক) এবং / অথবা RP-18 F254S (0.25 মিমি; মার্ক), প্রলিপ্ত প্লেটগুলিতে সঞ্চালিত হয়েছিল এবং তারপর 5 শতাংশ (o/u) সালফিউরিক স্প্রে করে দাগ দেওয়া হয়েছিল একটি MeOH দ্রবণে অ্যাসিড এবং একটি হট প্লেটে গরম করা। সিলিকা জেল (সিলিসাইকেল: 70 230 এবং 230 400 জাল), RP-18 (LiChroprepe 4063 um: Merck. Sephadexn C20 CE পর্ব 0 pe open w Bre প্রয়োগ করা foSupelcoTM, Bellefonte), এবং MCI CHP20P (SupelcoTcolumn ক্রোমাটোগ্রাফি। একটি Shimadzu LC-20AT পাম্প এবং একটি Shimadzu RID-10একটি প্রতিসরণকারী সূচক আবিষ্কারক (Shimadzu Inc, Kyoto, Japan), সাথে একটি Cosmosil 5C18-MS-II ( 250 x10 মিমি আইডি, 5 um) কলাম 2.0 মিলি/মিনিট প্রবাহ হারে, HPLC-এর জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। D-গ্লুকোজ (MP বায়োমেডিকেলস, ​​এলএলসি, ইলকির্চ, ফ্রান্স) এবং ডি-ফ্রুক্টোজ (টিসিআই, টোকিওপান) সহ চিনির বিকারকগুলি ছিল জল-দ্রবণীয় অপরিশোধিত ভগ্নাংশ (TEW) বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহৃত হয়।

3.2। উদ্ভিদ উপাদান

A. edulis (পূর্বে T. edulis) এর শুকনো বাল্ব 2018 সালের সেপ্টেম্বরে তাইওয়ানের তাইচুং-এ একটি ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধের ফার্মেসি থেকে কেনা হয়েছিল এবং লেখক অধ্যাপক চ্যাং দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল। একটি ভাউচার নমুনা (TE201809) চীনা মেডিসিন রিসার্চ অ্যান্ড ডেভেলপমেন্ট সেন্টার, CMUH তাইওয়ানে জমা করা হয়েছে।

3.3। নিষ্কাশন এবং বিচ্ছিন্নতা

A. edulis (5.0 kg) এর বাল্বগুলি একটি অপরিশোধিত নির্যাস পাওয়ার জন্য ঘরের তাপমাত্রায় MeOH (8.0 L প্রতিটি) দিয়ে আট বার নিষ্কাশন করা হয়েছিল। MeOH নির্যাস (TEM, 525.0 g) একটি EtOAc দেওয়ার জন্য ইথাইল অ্যাসিটেট (EtOAc) এবং H2O (1500:1500, v/v) এর মধ্যে তিনবার বিভাজন করা হয়েছিল। -দ্রবণীয় ভগ্নাংশ (TEE, 45.0 g) এবং একটি জলীয় পর্যায়, যা পরবর্তীতে n-BuOH/H2O (1500:1500, v/v × 3) দিয়ে বিভক্ত করা হয়েছিল এবং তারপর n-BuOH-দ্রবণীয় (TEB, 53.6 g) তে বিভক্ত করা হয়েছিল ) এবং H2O-দ্রবণীয় (TEW, 410.0 g) ভগ্নাংশ।

TEE একটি সিলিকা জেলে খোলা কলাম ক্রোমাটোগ্রাফির শিকার হয়েছিল ({{0}}৷{8}}63–0.200 মিমি, কলাম: 7 × 26 সেমি, ব্যাস × দৈর্ঘ্য), হেক্সেন–EtOAc–MeOH এর গ্রেডিয়েন্ট ব্যবহার করে (3{{20}}:1:0; 1:1:0; { {67}}:0:1, v/v/v) এবং 14টি উপভগ্নাংশ দিয়েছেন (TEE1–TEE14)। Precipitate 14 (249.0 mg; বিচ্ছিন্নতা ফলন: 0.{{100}}0498 শতাংশ ) সাবফ্রাকশন TEE12 থেকে প্রাপ্ত (2.2 গ্রাম) ফিল্টার করা হয়েছিল এবং MeOH দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল৷ TEE9 (3.6 গ্রাম) সিলিকা জেল (কলাম: 5 × 24 সেমি; CH2Cl2–MeOH, 7:1; 1:1; 0:1) দ্বারা সাতটি উপভগ্নাংশে (TEE9-1 থেকে 9-7) ভাগ করা হয়েছিল , v/v), সাবফ্রাকশন TEE9-4 (1.1 গ্রাম) সহ, এবং তারপর Sephadex LH-20 কলাম ক্রোমাটোগ্রাফি (কলাম: 5 × 54 সেমি; CH2Cl2–MeOH, 1:1 থেকে 0: 1, v/v), সাতটি উপভগ্নাংশ দিতে (TEE9-4-1 থেকে 9-4-7)। TEE9- 4-5 এবং TEE9-4-6 একত্রিত হয়েছিল (মোট 551.7 মিলিগ্রাম) এবং বারবার RP-HPLC (MeOH–H2O, 45:55; 20:80, v/v) দ্বারা 12 (21.0 mg) দিয়ে বিশুদ্ধ করা হয়েছিল ; tR=13 মিনিট; বিচ্ছিন্নতা ফলন: 0.00042 শতাংশ ) এবং একটি মাদার লিকার (131.2 মিলিগ্রাম), যা আরও RP-HPLC (MeOH–H2O; 10:90, v/v) যৌগগুলি দেওয়ার জন্য 10 ( 35.5 মিলিগ্রাম; টিআর=13 মিনিট; বিচ্ছিন্নতা ফলন: 0.00071 শতাংশ) এবং 11 (1.2 মিলিগ্রাম; টিআর=15 মিনিট; বিচ্ছিন্নতা ফলন: 0.000024 শতাংশ)। ভগ্নাংশ TEE6 (2.7 গ্রাম) Sephadex LH-20 (কলাম: 2.5 × 45 সেমি; CH2Cl2–MeOH, 1:1; 0:1, v/v) দ্বারা 13 (6.8 মিগ্রা; বিচ্ছিন্নতা ফলন) দ্বারা বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল: 0.000136 শতাংশ)।

TEB একটি Diaion HP{{0}} কলামে ক্রোমাটোগ্রাফ করা হয়েছিল (6 × 60 সেমি; H2O–MeOH– অ্যাসিটোন, 100:{{15} }:0; 25:75:0; 50:5{{20}:0; 75:25:{{41 }}; 0:10{{70}}:{{90}; {{1{{105} }0}}:0:100, v/v/v) ছয়টি উপভগ্নাংশ দিতে (TEB1–TEB6)। সাবফ্রাকশন TEB5 (502.0 mg) RP-HPLC (MeOH–H2O, 85:15, v/v) দ্বারা 8 (9.3 mg; tR {{34}) যৌগগুলি পেতে বিশুদ্ধ করা হয়েছিল } মিনিট; বিচ্ছিন্নতা ফলন: 0।{173}}00186 শতাংশ ) এবং 9 (144.2 মিগ্রা; tR {{4{{2{{20 }9}}3}}}} মিনিট; বিচ্ছিন্নতা ফলন: 0.002884 শতাংশ)। ভগ্নাংশ TEB3 (5.5 গ্রাম) RP-18 ক্রোমাটোগ্রাফি (কলাম: 7 × 25 সেমি; MeOH–H2O, 1:1; 1:0, v/v), এবং উপভগ্নাংশ TEB3-6 ( 1.0 গ্রাম) সাতটি উপভগ্নাংশ (TEB3-6-1 থেকে 3-6-7) পেতে Sephadex LH-20 (কলাম: 5 × 54 সেমি; MeOH) দ্বারা আরও বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। TEB3-6-4 (377.1 mg) MCI জেল ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা পৃথক করা হয়েছিল (কলাম: 2.5 × 23 সেমি; H2O–MeOH, 100:0; 80:20; 60:40; 40:60; 20:80; 0: 100, v/v) সাতটি উপভগ্নাংশ দিতে (TEB3-6-4-1 থেকে 3-6-4-7)। TEB3-6-4-4 (38.1 mg) RP-HPLC (MeOH–H2O, 45:55 ইন 0.1 শতাংশ ফরমিক অ্যাসিড, v/v) দ্বারা বিশুদ্ধ করা হয়েছিল বিশুদ্ধ 1 (12.2 mg; tR=17 মিনিট; বিচ্ছিন্নতা ফলন: 0.000244 শতাংশ)। অতিরিক্তভাবে, TEB3-6-4-6 (31.0 mg) RP-HPLC (MeOH–H2O, 40:60 ইন 0.1 শতাংশ ফরমিক অ্যাসিড, v/v) দ্বারা পরিচালিত হয়েছিল যাতে 6 (7.1 mg; tR=28 মিনিট) ; বিচ্ছিন্নতা ফলন: 0.000142 শতাংশ)। TEB3-6-5 (410.7 mg) MCI জেল ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল (কলাম: 2.5 × 23 সেমি; H2O–MeOH, 100:0; 80:20; 60:40; 50:50; 40:60; 30: 70; 20:80; 0:100, v/v) আটটি উপভগ্নাংশ দিতে (TEB3-6-5-1 থেকে 3-6-5-8)। TEB3-6-5-3 (75.1 mg) MCI জেল ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা বিশুদ্ধ করা হয়েছিল (কলাম: 1 × 20 সেমি; H2O–MeOH, 80:20; 70:30; 0:100, v/v) যৌগ 4 (59.3) সামর্থ্যের জন্য মিলিগ্রাম; বিচ্ছিন্নতা ফলন: 0.001186 শতাংশ ) এবং 5 (10.2 মিলিগ্রাম; বিচ্ছিন্নতা ফলন: 0.000204 শতাংশ)। সাবফ্রাকশন TEB3-6-5-4 (97.0 mg) RP-HPLC (MeOH–H2O, 40:60 ইন 0.1 শতাংশ ফর্মিক অ্যাসিড, v/v) দ্বারা 7 (46.4 mg; tR=18 মিনিট; বিচ্ছিন্নতা ফলন: 0.000928 শতাংশ)। TEB3-10 (925.4 mg) একটি MCI জেল ক্রোমাটোগ্রাফির উপর ক্রোমাটোগ্রাফ করা হয়েছিল (কলাম: 2.5 × 28 সেমি; H2O–MeOH, 100:0; 80:20; 60:40; 50:50; 40:60; :70; 10:90; 0:100, v/v) আটটি উপভগ্নাংশ দিতে (TEB3-10-1 থেকে 3-10-8) এবং বিশুদ্ধ 2 (393.4 মিগ্রা; বিচ্ছিন্নতা ফলন: 0.007868 শতাংশ)। যৌগ 3 (6.3 মিলিগ্রাম; tR=8 মিনিট; বিচ্ছিন্নতা ফলন: 0.000126 শতাংশ ) টিইবি3-10-2 (20.9 মিলিগ্রাম) থেকে RP-HPLC পরিশোধন দ্বারা প্রাপ্ত হয়েছিল (MeOH–H2O, 0.1 শতাংশের জন্য 30:70 শতাংশ অ্যাসিড, v/v)।

3.3.1। টিউলিপোসাইড এইচ (1)

[ ] 23 D −23.1 (c 0.12, MeOH); IR (পরিচ্ছন্ন) νmax 3376 (OH), 2960, 2934, 2875 (CH), 1725 (C{10}}O), 1640, 1589, 1459, 1382, 1259, 1167, 1075-1010-10 গ), 926, 900, 632, 521 cm−1; 1H এবং 13C NMR স্পেকট্রোস্কোপিক ডেটা, সারণি 1 দেখুন; HRESIMS m/z 351.1652 [M − H]− (C15H27O9, 351.1655 এর জন্য calcd)।

3.3.2। টিউলিপোসাইড I (2)

[ ] 23 D −25.8 (c 0.2, MeOH); IR (পরিচ্ছন্ন) νmax 3404 (OH), 2961, 2934, 2876 (CH), 1729 (C=O), 1638, 1461, 1378, 1277, 1185, 1165, 10767, 1076 (C30) গ), 897, 736, 625, 517 cm−1; 1H এবং 13C NMR স্পেকট্রোস্কোপিক ডেটা, সারণি 1 দেখুন; HRESIMS m/z 359.1686 [M প্লাস Na] প্লাস (C15H28O8Na, 359.1682 এর জন্য calcd)।

3.3.3। টিউলিপোসাইড জে (3)

[ ] 23 D প্লাস 9৷{2}} (c 0.1, MeOH); IR (পরিচ্ছন্ন) νmax 3424 (OH), 2953, 2924, 2853 (CH), 1740 (C{10}}O), 1632, 1441, 1401 (C–O–C), 1284, 1205, 1120, 1120 , 1078, 1039, 893, 768, 721 cm−1; 1H এবং 13C NMR স্পেকট্রোস্কোপিক ডেটা, সারণি 1 দেখুন; HRESIMS m/z 303.1049 [M প্লাস Na] প্লাস (C11H20O8Na, 303.1050 এর জন্য calcd)।

3.4। (R)- এবং (S)-MTPA 1 এর ডেরিভেটিভস

1 এর (S)-MTPA এস্টার ডেরিভেটিভের প্রস্তুতি একটি সুবিধাজনক মোশার এস্টার পদ্ধতি [22,23] দ্বারা পরিচালিত হয়েছিল। যৌগ 1 (3.4 মিলিগ্রাম, 0।{11}}1 মিমিওল) একটি পরিষ্কার NMR টিউবে স্থানান্তরিত হয়েছিল এবং তারপরে নাইট্রোজেন পূর্ণ হওয়ার আগে ভ্যাকুয়ামের নীচে সম্পূর্ণরূপে শুকানো হয়েছিল। অধিকন্তু, C5D5N ({{20}}.5 mL) এবং (R)-(−)- -methoxy- -(trifluoromethyl)-phenyl-acetyl ক্লোরাইড (MTPA ক্লোরাইড, 12.2) mg, 0.05 mmole) অবিলম্বে সিল করা NMR টিউবে যোগ করা হয়েছিল যা নমুনা এবং MTPA ক্লোরাইড মিশ্রিত করার জন্য আরও সাবধানে ঝাঁকুনি দেওয়া হয়েছিল। 1H NMR এবং 1H-1H COZY স্পেকট্রা রুম তাপমাত্রায় 24 ঘন্টা ধরে বিক্রিয়ার পরে রেকর্ড করা হয়েছিল। 1-এর (R)-MTPA এস্টারও একইভাবে পূর্বোক্ত প্রক্রিয়া দ্বারা প্রস্তুত করা হয়েছিল। যৌগ 1: 1H NMR (C5D5N, 500 MHz) δ 0.78 (H-400, t), 1.26 (H-300, sext), 1.28 (H3-5, d), 1.52 ( H-200, কুইন্ট), 3.08 (H-2, কুইন্ট), 3.95 (H-50, m), 4.03 (H-4a, dd), 4.05 (H -20, ওভারল্যাপ), 4.15 (H-100, t), 4.23 (H-30, ওভারল্যাপ), 4.23 (H-40, ওভারল্যাপ), 4.36 (H{{ 68}}a, dd), 4.39 (H-3, ওভারল্যাপ), 4.43 (H-4b, dd), 4.53 (H-60b, d), এবং 4.95 (H -10, ঘ)।

3.4.1। (S)-1 (1a) এর MTPA এস্টার

1H NMR (C5D5N, 500 MHz) δ 0.77 (H-400, t), 1.17 (H-300, sext), 1.21 (H3-5, d) , 1.37 (H-200, quint), 3.18 (H-2, quint), 3.92 (H-100, t), 3.97 (H-4a, dd), 4.33 (H-50 , m), 4.39 (H-30 , t), 4.49 (H-4b, brd), 4.64 (H-60a, dd), 4.96 (H-10 , d), 5.05 (H-60b, d), 5.70 (H-20 , t), 5.76 (H-40 , t), এবং 5.82 (H-3, m)

3.4.2। (R)-MTPA এস্টার অফ 1 (1b)

1H NMR (C5D5N, 500 MHz) δ 0.79 (H-400, t), 1.26 (H-300, sext), 1.30 (H3-5, d) , 1.50 (H-200, quint), 3.33 (H-2, quint), 3.60 (H-50 , m), 3.94 (H-4a, dd), 4.11 (H-100, t), 4.12 (H-30 , t), 4.13 (H-60a, dd), 4.50 (H-4b, brd), 4.70 (H-10 , d), 4.85 (H-60b, d), 5.56 (H-20 , t), 5.66 (H-40 , t), এবং 5.81 (H-3, m)

3.5। টিউলিপোসাইড আই এর অ্যাসিড হাইড্রোলাইসিস (2)

Isolate 2 (78.6 mg) 1 M HCl (1.5 mL) তে 100 ◦C 2 ঘন্টার জন্য হাইড্রোলাইজ করা হয়েছিল [8]। ঠাণ্ডা হওয়ার পর, টিউলিপালিন অ্যানালগ, 3-মিথাইলডিহাইড্রোফুরান-2(3H)-one (11.1 মিলিগ্রাম) অফার করতে CH2Cl2 (2.0 mL × 3) দিয়ে বিক্রিয়া মিশ্রণটি বের করা হয়েছিল। [ ] 23 D প্লাস 18.7 (c 1.1, CH2Cl2); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1.30 (3H, d, J=7.0 Hz), 1.94 (m), 2.45 (m), 2.61 (m), 4.20 (ddd, J {{43}) }.8, 6.8, 6.4 Hz), 4.33 (ddd, J=8.8, 8.8, 2.8 Hz)। 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 15.2, 30.7, 34.1, 66.2, 180.1 (চিত্র S28); ESIMS m/z 101.06 [M প্লাস H] প্লাস।

3.6। সেল সংস্কৃতি

মুরিন B16 মেলানোমা কোষগুলিকে Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; GIBCO Invitrogen Corporation, New York, NY, USA) তে 10 শতাংশ ভ্রূণের বোভাইন সিরাম, 100 U/mL পেনিসিলিন এবং 100 µg/mL এর পরিপূরক হিসাবে সংষ্কৃত করা হয়েছিল। একটি 5 শতাংশ CO2 ইনকিউবেটরে ◦C।

3.7। B16 কোষের কার্যক্ষমতার পরিমাপ

পরীক্ষার যৌগগুলির জন্য B16 কোষগুলির সাইটোটক্সিসিটি MTT দ্বারা সামান্য পরিবর্তন সহ পূর্বে বর্ণিত প্রোটোকলের সাথে পরিমাপ করা হয়েছিল [6]। কোষগুলিকে 96-কূপ প্লেটে (1 × 103টি কোষ/কূপ) বীজ দেওয়া হয়েছিল এবং আরও 72 ঘন্টা যৌগ দিয়ে চিকিত্সা করার আগে 24 ঘন্টার জন্য সংষ্কৃত করা হয়েছিল। এর পরে, মাধ্যমটি সরানো হয়েছিল, প্রতিটি কূপে 100 μL MTT বিকারক (থার্মো সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) (0.5 mg/mL এর চূড়ান্ত ঘনত্বে) যোগ করা হয়েছিল এবং তারপর 1 ঘন্টার জন্য 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। ফরমাজান ক্রিস্টালটি 100 μL DMSO-তে দ্রবীভূত হয়েছিল এবং 570 এনএম-এ একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার (SPECTORstar® Nano, BMG LABTECH, Ortenberg, Germany) ব্যবহার করে অপটিক্যাল ঘনত্ব পরিমাপ করা হয়েছিল।

3.8। B16 কোষে মেলানিন সামগ্রীর পরিমাপ

বি 16 কোষে মেলানিনের সামগ্রীটি পূর্বে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে সামান্য পরিবর্তন [6] সহ করা হয়েছিল। কোষগুলিকে 5 × 103টি কোষ/কূপ 24-কূপ প্লেটে 24 ঘন্টার জন্য ঘনত্বে বীজ করা হয়েছিল। মাধ্যমটিকে 500 μL তাজা সংস্কৃতির মাধ্যম দ্বারা প্রতিস্থাপিত করা হয়েছিল যাতে 0.5 µM -MSH যৌগ সহ বা 72 ঘন্টার জন্য ছাড়া থাকে। আরবুটিন (1 মিমি) ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। এর পরে, মাঝারিটি সরানো হয়েছিল এবং পিবিএস (পিএইচ 6.8) দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। কোষগুলি NaOH (200 µL, 2 N) দ্বারা সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং তারপর 30 মিনিটের জন্য 85 ◦C তাপমাত্রায় উত্তপ্ত করা হয়েছিল। ঘরের তাপমাত্রায় শীতল হওয়ার পরে এবং সেন্ট্রিফিউজ হওয়ার পরে, একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার ব্যবহার করে শোষণ 405 এনএম পরিমাপ করা হয়েছিল।

3.9। অন্তঃকোষীয় টাইরোসিনেজ কার্যকলাপ

আন্তঃকোষীয় টাইরোসিনেজ কার্যকলাপ অ্যাস একটি সামান্য পরিবর্তিত পদ্ধতি দ্বারা সঞ্চালিত হয়েছিল, যা পূর্বে রিপোর্ট করা হয়েছিল [6]। কোষগুলিকে 24 ঘন্টার জন্য 5 × 1 এর ঘনত্বে 24-কূপ প্লেটে0৩টি কোষ/কূপে বীজ দেওয়া হয়েছিল। কোষগুলিকে DMEM-এ 0.5 µM -MSH সহ বা যৌগ ছাড়াই 72 ঘন্টার জন্য চিকিত্সা করা হয়েছিল। মাধ্যমটি অপসারণের পরে, কোষগুলি দুবার ঠান্ডা পিবিএস (পিএইচ 6.8) দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। কোষগুলিকে 100 μL লাইসিস বাফার (PBS-এ 1 শতাংশ ট্রাইটন X-100) দিয়ে লাইজ করা হয়েছিল এবং 15 মিনিটের জন্য −80 ◦C তাপমাত্রায় হিমায়িত করা হয়েছিল।

তারপরে, সেল লাইসেটগুলিকে 13,200×g 4 ◦C তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য সুপারনেট্যান্ট প্রাপ্ত করার জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। সুপারনাট্যান্টের মোট প্রোটিন সামগ্রী বিসিএ প্রোটিন অ্যাস দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল। এর পরে, প্রতিটি পরিমাপযুক্ত লাইসেট (30 µg/90 µL) একটি 96-কূপ প্লেটে 10 µL L-DOPA (15 mM) এর সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং তারপর 1 ঘন্টার জন্য 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল, এবং শোষণ পরিমাপ করা হয়েছিল একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার ব্যবহার করে 405 এনএম এ।

4। উপসংহার

সামগ্রিকভাবে, 14টি বিশুদ্ধ যৌগ, যার মধ্যে তিনটি নতুন আইসোপ্রেনয়েড গ্লাইকোসাইড এবং টিউলিপ সাইড এইচ-জে (1-3), এ. এডুলিস থেকে বিচ্ছিন্ন ছিল। সাইট্রিক অ্যাসিড ডেরিভেটিভ 9, ট্রিবিটাইল সাইট্রেট, উল্লেখযোগ্যভাবে মেলানোজেনেসিস বিরোধী কার্যকলাপ ছিল কিন্তু B16 মেলানোমা কোষের দিকে সাইটোটক্সিসিটি দেখায় যা অ্যান্টি-মেলানোমা ওষুধের জন্য আরও গবেষণা করা যেতে পারে। পাইরোগ্লুটামিক অ্যাসিড অ্যানালগ 4 এবং 6, ফুরানোন 10, এবং ফুরান 12-এ ডোজ-নির্ভরভাবে মেলানিন সামগ্রী এবং সক্রিয় টাইরোসিনেজ ছিল যা ভিটিলিগো চর্মরোগ বা চুলের জন্য অ্যান্টি-হোয়াইটেনিং এবং অ্যান্টি-হাইপোপিগমেন্টেশন এজেন্টগুলির জন্য আরও অধ্যয়ন করা যেতে পারে। যাইহোক, সক্রিয় উপাদানগুলির কার্যকারিতা যাচাই করার জন্য ইন ভিট্রো মেকানিজম এবং/অথবা ভিভো অধ্যয়নগুলি আরও বিশদে তদন্ত করা প্রয়োজন।

সম্পূরক উপকরণ:

নিম্নলিখিতগুলি অনলাইনে উপলব্ধ, চিত্র S1–S5: যৌগ 1-এর NMR বর্ণালী ডেটা, চিত্র S6–S10: যৌগ 2-এর NMR বর্ণালী ডেটা, চিত্র S11–S15: যৌগ 3-এর NMR বর্ণালী ডেটা, চিত্র S16-S22: NMR বর্ণালী ডেটা TEW এর, চিত্র S23: TEW-এর TLC বিশ্লেষণ, চিত্র S24: সাইটোটক্সিসিটি এবং TEM, TEE, TEB, এবং TEW-এর মেলানোজেনেসিস প্রভাবের নিয়ন্ত্রণ, চিত্র S25: যৌগগুলির সাইটোটক্সিসিটি ডেটা 1-12, চিত্র S26: একটি গ্রাফের মধ্যে সেলুলার মেলানিন বিষয়বস্তু এবং যৌগ 4, 6, 10, এবং 12 এর টাইরোসিনেজের উপর প্রভাব, চিত্র S27: -MSH ছাড়া একা যৌগ 4, 6, 10 এবং 12 এর মেলানোজেনেসিস প্রভাব, চিত্র S28: NMR বর্ণালী এবং অপটিক্যাল ঘূর্ণন ডেটা যৌগ 2 এর অ্যাসিড হাইড্রোলাইসিস থেকে প্রাপ্ত পণ্য, চিত্র S29: যৌগের সম্ভাব্য জৈব সংশ্লেষণ 1−3, টেবিল S1: যৌগ 4, 6, 10, এবং 12 এর টাইরোসিনেজ কার্যকলাপের প্রভাব।

লেখকের অবদান:

ধারণা, সি.-এলএল; উদ্ভিদ উপাদান সনাক্তকরণ, Y.-SC; বিচ্ছিন্নতা এবং পরিশোধন পরিচালনা, C.-LL এবং Z.-AG; জৈব গবেষণার আচার, Y.-LJ; সমস্ত বর্ণালী বিশ্লেষণ এবং গঠন নির্ধারণ, C.-LL এবং C.-JC; মূল খসড়া প্রস্তুতির লেখা, C.-LL সমস্ত লেখক পাণ্ডুলিপির প্রকাশিত সংস্করণ পড়েছেন এবং সম্মত হয়েছেন।

অর্থায়ন:

এই গবেষণাটি বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি মন্ত্রণালয় (MOST 108-2320-B039-035-) এবং চায়না মেডিকেল ইউনিভার্সিটি (CMU108-MF-84), তাইওয়ানের দ্বারা অর্থায়ন করা হয়েছে। APC তাইওয়ানের শিক্ষা মন্ত্রণালয় (MOE) দ্বারা উচ্চ শিক্ষা স্প্রাউট প্রকল্পের কাঠামোর মধ্যে বৈশিষ্ট্যযুক্ত এলাকা গবেষণা কেন্দ্র প্রোগ্রাম থেকে "চীনা মেডিসিন রিসার্চ সেন্টার, চায়না মেডিকেল ইউনিভার্সিটি" দ্বারা অর্থায়ন করা হয়েছিল (CMRC-CHM{{5} })।

প্রাতিষ্ঠানিক পর্যালোচনা বোর্ডের বিবৃতি:

প্রযোজ্য নয়।

অবহিত সম্মতি বিবৃতি:

প্রযোজ্য নয়।

ডেটা উপলব্ধতা বিবৃতি:

প্রযোজ্য নয়।

স্বীকৃতি:

এই কাজটি বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি মন্ত্রণালয় (MOST 108-2320-B-039-035-) এবং চায়না মেডিকেল ইউনিভার্সিটি (CMU108-MF-84), তাইওয়ান দ্বারা আর্থিকভাবে সমর্থিত ছিল তাইওয়ানের শিক্ষা মন্ত্রণালয় (MOE) দ্বারা উচ্চ শিক্ষা স্প্রাউট প্রকল্পের কাঠামোর মধ্যে বৈশিষ্ট্যযুক্ত এলাকা গবেষণা কেন্দ্র প্রোগ্রাম থেকে "চীনা মেডিসিন রিসার্চ সেন্টার, চায়না মেডিক্যাল ইউনিভার্সিটি" (CMRC-CHM-1) সি কে পুরস্কৃত করা হয়েছে .-এলএল

স্বার্থের সংঘাত:

লেখক আগ্রহের কোন দ্বন্দ্ব ঘোষণা।

নমুনা উপলব্ধতা:

1-14 যৌগের নমুনা লেখকদের কাছ থেকে পাওয়া যায়।

তথ্যসূত্র

1. লিন, আর.; লি, জেড.; লিন, জে.; ইয়ে, জে.; Cai, Q.; চেন, এল.; পেং, জে. টিউলিপা এডুলিস বাকের ইথানোলিক নির্যাস মাইটোকন্ড্রিয়াল সিগন্যালিং পাথওয়ের মাধ্যমে SGC-7901 মানুষের গ্যাস্ট্রিক কার্সিনোমা কোষে অ্যাপোপটোসিসকে প্ররোচিত করে। অনকল। লেট. 2015, 10, 2371–2377। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

2. ফ্যান, Y.; হাউ, এক্স।; গুও, পি.; Lv, X.; ঝাও, এল.; ওয়াং, এইচ.; Zhou, L.; ফেং, ওয়াই. আমনা এডুলিসের নিষ্কাশন লিভার ক্যান্সার এপোপ্টোসিসকে প্ররোচিত করে। Evid.-ভিত্তিক পরিপূরক। বিকল্প মেড. 2018, 2018, 3927075। [CrossRef] [PubMed]

3. জি, ওয়াইএইচ; লিয়াও, এএম; হুয়াং, জেএইচ; ঠাকুর, কে.; লি, এক্সএল; ওয়েই, জেডজে পলিস্যাকারাইডের ফিজিকোকেমিক্যাল এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সম্ভাবনা ক্রমান্বয়ে আমানা এডুলিস থেকে বের করা হয়েছে। int. জে. বিওল। ম্যাক্রোমল। 2019, 131, 453–460। [ক্রসরেফ]

4. জি, ওয়াইএইচ; লিয়াও, এএম; হুয়াং, জেএইচ; ঠাকুর, কে.; লি, এক্সএল; ওয়েই, জেডজে পলিস্যাকারাইডের রিওলজিকাল বৈশিষ্ট্য এবং ইমালসিফাইং আচরণ ক্রমানুসারে আমানা এডুলিস থেকে বের করা হয়েছে। int. জে. বিওল। ম্যাক্রোমল। 2019, 137, 160-168। [ক্রসরেফ]

5. Cao, YY; জি, ওয়াইএইচ; লিয়াও, এএম; হুয়াং, জেএইচ; ঠাকুর, কে.; লি, এক্সএল; হু, এফ.; ঝাং, জেজি; ওয়েই, জেডজে অ্যামানা এডুলিস থেকে ক্রমাগতভাবে নিষ্কাশিত পলিস্যাকারাইডের ইন-ভিট্রো অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপের উপর সালফেটেড, ফসফরিলেটেড এবং কার্বোক্সিমিথাইলেড পরিবর্তনের প্রভাব। int. জে. বিওল। ম্যাক্রোমল। 2020, 146, 887-896। [ক্রসরেফ]

6. লাই, কেওয়াই; হু, এইচসি; চিয়াং, এইচএম; লিউ, ওয়াইজে; ইয়াং, জেসি; লিন, ইয়া; চেন, সিজে; চ্যাং, ওয়াইএস; লি, সিএল লিওনুরাস জাপোনিকাস থেকে নতুন ডিটারপেনস লিওজাপোনিনস G−L। ফিটোথেরাপিয়া 2018, 130, 125−133। [ক্রসরেফ]

7. উল্লাহ, এস.; চুং, ওয়াইসি; Hyun, P-JNK এবং P-p38 সিগন্যালিং পথগুলিকে আপগ্রেগুলেট করার মাধ্যমে B16F10 কোষে ফসফোমাইসিন দ্বারা মেলানোজেনেসিসের সিজি আবেশ। অ্যান্টিবায়োটিক 2020, 9, 172। [CrossRef] [PubMed]

8. ক্রিস্টেনসেন, এলপি; ক্রিস্টিয়ানসেন, কে. উচ্চ-কার্যক্ষমতা সম্পন্ন তরল ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা টিউলিপ পাশ এবং টিউলিপস (টিউলিপা) এর বিচ্ছিন্নতা এবং পরিমাপ। যোগাযোগ 1999, 40, 300−309। [ক্রসরেফ]

9. ত্রিপাঠী, এ.; পুডিক, জে.; প্রিন্সেপ, এমআর; লি, পিপিএফ; ট্যান, এলটি হান্টুপেপটিনস বি এবং সি, সামুদ্রিক সায়ানোব্যাকটেরিয়াম লিংব্যা মাজুসকুলা থেকে সাইটোটক্সিক সাইক্লোডেপসিপেপটাইডস। ফাইটোকেমিস্ট্রি 2010, 71, 307−311। [ক্রসরেফ]

10. কাবাজা, জি.; উইলেন্ট, জেই; বেনাভিডস, এআর; বুলার্ড, জিই; পিটারসেন, KS একটি ব্রোন্সটেড অ্যাসিড অনুঘটক গতিশীল রেজোলিউশনের মাধ্যমে বহুমুখী এন্যান্টিওএনরিচড-প্রতিস্থাপিত হাইড্রক্সি এস্টারের সহজ সংশ্লেষণ। সংগঠন লেট. 2013, 15, 1266−1269। [ক্রসরেফ]

11. নোমুরা, টি.; Kato, Y. টিউলিপোসাইড জি সনাক্তকরণ, একটি অভিনব গ্লুকোসাইড এস্টার-টাইপ টিউলিপোসাইড, এবং টিউলিপে এর বিতরণ। Z. Naturforsch. সিজে বায়োসি। 2020, 75, 75−86। [ক্রসরেফ]

12. গ্যাং, FL; ঝু, এফ.; লি, এক্সটি; ওয়েই, জেএল; উ, ডব্লিউজে; ঝাং, জেডব্লিউ সংশ্লেষণ এবং প্রাকৃতিক পণ্যের সীসা থেকে এল-পাইরোগ্লুটামিক অ্যাসিড অ্যানালগগুলির বায়োঅ্যাকটিভিটি মূল্যায়ন। বায়োর্গ। মেড. কেম। 2018, 26, 4644–4649। [ক্রসরেফ]

13. ভেরেশচাগিন, এএল; অনিকিনা, ইভি; সিরচিনা, এআই; ল্যাপিন, এমএফ; আজিন, এলএ; সেমেনভ, এএ লনিসেরা ক্যারুলিয়া ফলের তিক্ত পদার্থের রাসায়নিক তদন্ত। কেম। নাট। কমপিডি 1989, 25, 289−292। [ক্রসরেফ]

14. জেইম, সি.; Ortuño, RM; Font, J. Di- এবং trisubstituted -lactones. আণবিক মেকানিক্স গণনা এবং কাপলিং ধ্রুবক বিশ্লেষণ দ্বারা একটি গঠনমূলক গবেষণা। J. Org. কেম। 1986, 51, 3946−3951। [ক্রসরেফ]

15. লার্চেভেক, এম.; Henrot, S. Enantiomerically বিশুদ্ধ, -hydroxylactones থেকে epoxyesters: -hydroxyesters এবং (−)-GABOB এর সংশ্লেষণ। টেট্রাহেড্রন 1990, 46, 4277−4282। [ক্রসরেফ]

16. জেইম, সি.; সেগুরা, সি.; দিনারেস, আই.; হরফ, জে. প্রতিস্থাপিত - ভিসিনাল হাইড্রোজেন পরমাণুর সাথে ল্যাকটোন। MM2 গণনা এবং কাপলিং ধ্রুবক বিশ্লেষণ দ্বারা কনফর্মেশন স্টাডি। J. Org. কেম। 1993, 58, 154−158। [ক্রসরেফ]

17. মরি, কে.; Fukamatsu, K. (1R,5S)-( প্লাস)-ফ্রন্টালিন থেকে (S)-(−)-2-হাইড্রক্সিপ্যারাকোনিক অ্যাসিডের সংশ্লেষণ। লিবিগস অ্যান। কেম। 1992, 11, 1191−1193।

18. মিয়াজাওয়া, এম.; আনজাই, জে.; ফুজিওকা, জে.; ইশিকাওয়া, ওয়াই. কর্নাস অফিসিয়ালিস সিব থেকে ড্রোসোফিলা মেলানোগাস্টারের বিরুদ্ধে কীটনাশক যৌগ। এবং Zucc. নাট। পণ্য Res. 2003, 17, 337−339। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

19. লি, সিএল; ওয়াং, সিএম; হু, এইচসি; ইয়েন, এইচআর; গান, YC; ইউ, এসজে; চেন, সিজে; লি, WC; ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধ কিং ডাই-এর স্ট্রোবিল্যান্থেস খাবারের বায়বীয় অংশ থেকে উ, ওয়াইসি ইন্ডোল অ্যালকালয়েড ইন্ডিগো-ডোল এ-সি-তে অ্যান্টি-আইএল-17 বৈশিষ্ট্য রয়েছে। ফাইটোকেমিস্ট্রি 2019, 162, 39−46। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

20. ফাইজি, এস.; আলী, এম.; সেলিম, আর.; ইরফানুল্লাহ; বিবি, এস. স্টিগমা-5-এন-3-ও- -গ্লুকোসাইড এবং এর এসিটাইল ডেরিভেটিভের 1H- এবং 13C-NMR অ্যাসাইনমেন্ট সম্পূর্ণ করুন। ম্যাগন রেসন। কেম। 2001, 39, 399-405। [ক্রসরেফ]

21. কুও, ওয়াইএইচ; চেন, সিসি; উ, পিওয়াই; উ, সিএস; সং, পিজে; লিন, সিওয়াই; চিয়াং, এইচএম এন-(4-মিথোক্সিফেনাইল) ক্যাফেমাইড-প্ররোচিত মেলানোজেনেসিস ইনহিবিশন মেকানিজম। BMC পরিপূরক। বিকল্প মেড. 2017, 17, 71। [CrossRef] [PubMed]

22. ওহতানি, আই.; কুসুমি, টি.; কাশমান, ওয়াই।; কাকিসাওয়া, এইচ. হাই-ফিল্ড এফটি এনএমআর মোশারের পদ্ধতির প্রয়োগ। সামুদ্রিক টেরপেনয়েডের পরম কনফিগারেশন। জে. এম. কেম। সমাজ 1991, 113, 4092−4096। [ক্রসরেফ]

23. লি, সিএল; চ্যাং, এফআর; Hsieh, PW; চিয়াং, আমার; উ, সিসি; হুয়াং, জেডওয়াই; ল্যান, ওয়াইএইচ; চেন, এম.; লি, কেএইচ; ইয়েন, এইচএফ; ইত্যাদি Gelonium aequoreum থেকে সাইটোটক্সিক ent-abietane diterpenes. ফাইটোকেমিস্ট্রি 2008, 69, 276−287। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

1 প্রসাধনী বিভাগ, চায়না মেডিকেল ইউনিভার্সিটি, তাইচুং 406040, তাইওয়ান।

2 চাইনিজ মেডিসিন রিসার্চ অ্যান্ড ডেভেলপমেন্ট সেন্টার, চায়না মেডিকেল ইউনিভার্সিটি হাসপাতাল, তাইচুং 40402, তাইওয়ান।

3 চাইনিজ মেডিসিন রিসার্চ সেন্টার, চায়না মেডিকেল ইউনিভার্সিটি, তাইচুং 40402, তাইওয়ান।

4 চাইনিজ ফার্মাসিউটিক্যাল সায়েন্সেস এবং চাইনিজ মেডিসিন রিসোর্স বিভাগ, চায়না মেডিকেল ইউনিভার্সিটি, তাইচুং 40402, তাইওয়ান।

5 গ্র্যাজুয়েট ইনস্টিটিউট অফ ইন্টিগ্রেটেড মেডিসিন, চায়না মেডিকেল ইউনিভার্সিটি, তাইচুং 40402, তাইওয়ান।

6 প্রোটিওমিক্স কোর ল্যাবরেটরি, মেডিকেল রিসার্চ বিভাগ, চায়না মেডিকেল ইউনিভার্সিটি হাসপাতাল, তাইচুং 40402, তাইওয়ান।

For more information:1950477648nn@gmail.com