RNA M6 A রিডার YTHDF2 NK সেল অ্যান্টিটিউমার এবং অ্যান্টিভাইরাল ইমিউনিটি পার্ট 2 নিয়ন্ত্রণ করে

NK কোষের অ্যান্টিভাইরাল ফাংশনের জন্য YTHDF2 প্রয়োজন

Ythdf2 ঘাটতি NK কোষগুলির অ্যান্টিভাইরাল অ্যাক্টিভিটি প্রভাবিত করে কিনা তা নির্ধারণ করতে, আমরা Ythdf2WT ইঁদুর এবং Ythdf2ΔNK ইঁদুরগুলিতে MCMV-এর 2.5 × 104 PFU ইনজেকশন দিয়েছি।

ফলাফলগুলি দেখায় যে Ythdf2ΔNK ইঁদুরগুলি MCMV সংক্রমণের জন্য বেশি সংবেদনশীল ছিল, Ythdf2WT ইঁদুরের তুলনায় উল্লেখযোগ্য ওজন হ্রাস এবং রক্ত, প্লীহা এবং লিভারে ভাইরাল টাইটার বৃদ্ধির দ্বারা চিত্রিত হয়েছে (চিত্র 3,A এবং B; এবং চিত্র। S2, A এবং B) .

আমরা সংক্রমণের পরে Ythdf2WT ইঁদুরের তুলনায় Ythdf2ΔNK ইঁদুরের প্লীহা এবং রক্তে মোট এনকেসেলের শতাংশ এবং পরম সংখ্যার উল্লেখযোগ্য হ্রাসও লক্ষ্য করেছি (চিত্র 3, সি এবং ডি; এবং চিত্র 3, সি এবং ডি)। আরও বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে Ythdf2ΔNK ইঁদুর থেকে NK কোষে Ythdf2WT ইঁদুরের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে কম প্রকাশ ছিল Ki67 (চিত্র 3, E–G)।

যাইহোক, NK কোষের কার্যকারিতা Ythdf2WT ইঁদুর এবং Ythdf2ΔNK ইঁদুরের মধ্যে একই রকম ছিল, যেমনটি অ্যানেক্সিন ভি স্টেনিং (চিত্র S2 ই) দ্বারা দেখানো হয়েছে। এই তথ্যগুলি নির্দেশ করে যে NK কোষগুলিতে YTHDF2 এর ঘাটতির ফলে ভাইরাল সংক্রমণের সময় কোষ বেঁচে থাকার পরিবর্তে কোষের বিস্তারে ত্রুটি দেখা দেয়। NKcells Ly49H এবং Ly49D সক্রিয়কারী রিসেপ্টরগুলির মাধ্যমে MCMV সংক্রমণকে বাধা দেয় এবং প্রক্রিয়াটি একটি পারফোরিন- বা IFN--মধ্যস্থ অ্যান্টিভাইরাল প্রতিক্রিয়া দ্বারা চিহ্নিত করা হয় (Arase et al., 2002; Lee et al., 2009; Loh et al., 2005; orr et al., 2010; Sumaria et al., 2009)।

আমরা দেখতে পেলাম যে Ythdf2ΔNK ইঁদুরগুলি সংক্রমণের পরে Ythdf2WT ইঁদুরের তুলনায় প্লীহা এবং রক্তেLy49H+ এবং Ly49D+ NK কোষগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে (চিত্র 3, H–J; এবং চিত্র। S2, F–K)।

আরও বিশ্লেষণে প্রমাণিত হয়েছে যে যদিও শতাংশ প্রতি, শুধুমাত্র Ly49D+Ly49H+ কোষ Ythdf2WT ইঁদুরের তুলনায় Ythdf2ΔNK ইঁদুরের মধ্যে পার্থক্য দেখিয়েছে, Ly49D−Ly49H+ NK কোষের পরম কোষ সংখ্যা, NK কোষের Ly49D−Ly49H+ NK কোষ, Ly49D+Ly+L49 কোষ এবং N49D+L49 কোষে। সংক্রমণের পরে Ythdf2WTmice-এর তুলনায় Ythdf2ΔNK ইঁদুরে প্লীহা এবং রক্ত ​​উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (চিত্র S2, L–W)।

আমাদের ডেটা পরামর্শ দেয় যে YTHDF2 দ্বারা MCMV সংক্রমণ নিয়ন্ত্রণ করা প্রধানত Ly49D+Ly49H+ NK কোষ দ্বারা মধ্যস্থতা করে বলে মনে হয়। Ythdf2ΔNK ইঁদুরের NK কোষ দ্বারা গ্রানজাইম B এবং IFN- উৎপাদন Ythdf2WT ইঁদুরের (চিত্র S2, X এবং Y) সাথে তুলনীয় ছিল।

আমরা Ythdf2ΔNK ইঁদুর দ্বারা সংক্রমণের 7 দিন পর প্লীহা এবং রক্ত ​​উভয় ক্ষেত্রে Ythdf2WT ইঁদুরের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে কম পেরফরিন উৎপাদন পেয়েছি, ইঙ্গিত করে যে YTHDF2 প্রধানত NK কোষে MCMV-এর বিরুদ্ধে স্পারফরিন-মধ্যস্থ অ্যান্টিভাইরাল কার্যকলাপকে প্রভাবিত করে। পরামর্শ দেয় যে MCMV সংক্রমণের সময় NK কোষের প্রসারণ এবং প্রভাবকের ফাংশনের জন্য YTHDF2 গুরুত্বপূর্ণ।

YTHDF2 এনকে সেল হোমিওস্ট্যাসিস এবং টার্মিনাল পরিপক্কতা একটি স্থির অবস্থায় নিয়ন্ত্রণ করে

উপরের ফলাফলগুলি যে NK কোষগুলিতে Ythdf2 ঘাটতি টিউমার মেটাস্টেসগুলিকে বাড়িয়েছে এবং MCMV সংক্রমণ নিয়ন্ত্রণে NK কোষের ক্ষমতা দুর্বল করেছে তা আমাদেরকে NK কোষ রক্ষণাবেক্ষণের জন্য YTHDF2 একটি স্থির অবস্থায় প্রয়োজন কিনা তা তদন্ত করতে উত্সাহিত করেছে।

চিত্র 4 এ হিসাবে দেখানো হয়েছে, পেরিফেরাল রক্ত, প্লীহা, লিভার এবং ফুসফুসে NK কোষের ফ্রিকোয়েন্সি এবং পরম সংখ্যা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে কিন্তু Ythdf2ΔNK ইঁদুরের অস্থি মজ্জাতে (BM) Ythdf2WT ইঁদুরের তুলনায় নয়।

যাইহোক, Ythdf2WT এবং Ythdf2ΔNK ইঁদুরের (চিত্র S3 A) মধ্যে BM (Fathman et al.,2011) তে সাধারণ লিম্ফয়েড পূর্বপুরুষ, প্রাক-NK কোষের পূর্বপুরুষ এবং পরিমার্জিত NK কোষের পূর্বপুরুষ (NKP) এর মধ্যে কোন উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন হয়নি, যা নির্দেশ করে যে YTHDF2 আমাদের মডেলের মধ্যে NK কোষের প্রাথমিক বিকাশকে প্রভাবিত করতে পারে না।

Ythdf2ΔNK ইঁদুরের এনকে কোষের হ্রাসের জন্য দায়ী সম্ভাব্য প্রক্রিয়াগুলি অন্বেষণ করতে, আমরা একটি স্থির অবস্থায় Ythdf2 মুছে ফেলার পরে NK কোষগুলির কোষপ্রসারণ, কার্যকারিতা এবং পাচারের ক্ষমতা তদন্ত করেছি। কি 67 স্টেনিং (চিত্র S3 বি) দ্বারা প্রমাণিত, Ythdf2WT এবং Ythdf2ΔNK ইঁদুরের মধ্যে প্রসারিত NK কোষের শতাংশ তুলনীয় ছিল।

NKcells এর কার্যকারিতা Ythdf2WT এবং Ythdf2ΔNK ইঁদুরের মধ্যেও সমতুল্য ছিল, যেমনটি অ্যানেক্সিন ভি স্টেনিং (চিত্র S3 C) দ্বারা দেখানো হয়েছে। YTHDF2 BM থেকে পেরিফেরিতে NK কোষের নির্গমনকে প্রভাবিত করে কিনা তা পরীক্ষা করার জন্য, Ythdf2WT এবং Ythdf2ΔNK ইঁদুরকে iv একটি অ্যান্টিসিডি 45 অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল ইমিউন কোষ চিহ্নিত করার জন্য এবং 2 মিনিটের পরে বলি দেওয়া হয়েছিল, এবং তাদের বিএম কোষগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

এটি আমাদের বিএম-এর সাইনোসয়েডাল বনাম প্যারেনচাইমাল অঞ্চলে এনকে কোষের সংখ্যা নির্ধারণ করার অনুমতি দেয়, একটি স্থির অবস্থায় বিএম থেকে পেরিফেরাল রক্তে এনকে কোষ পাচারের একটি সূচক (লিওং এট আল।, 2015)। ফলাফলগুলি সাইনোসয়েডগুলিতে Ythdf2WT ইঁদুরের তুলনায় Ythdf2ΔNK ইঁদুরের CD45+ NK কোষের ফ্রিকোয়েন্সি উল্লেখযোগ্য হ্রাস দেখিয়েছে .

নির্দিষ্ট ভাইরাল সংক্রমণের কারণে বা কেমোথেরাপি দ্বারা সৃষ্ট লিম্ফোপেনিয়ার সময় ইমিউন কোষ হোমিওস্ট্যাটিক বিস্তারের মধ্য দিয়ে যায় (সান এট আল।, 2011)। যদিও আমরা দেখেছি যে YTHDF2 একটি স্থির অবস্থায় NK কোষের বিস্তারের জন্য ব্যবহারযোগ্য, আমরা MCMV সংক্রমণের সময় কোষের বিস্তারে উল্লেখযোগ্য হ্রাস লক্ষ্য করেছি (চিত্র 3, E–G)। তাই আমরা ভিভোতে একটি লিম্ফোপেনিক সেটিংয়ে এনকে সেল হোমিওস্ট্যাটিক প্রলিফারেশন নিয়ন্ত্রণে YTHDF2 এর ভূমিকা তদন্ত করেছি।

আমরা CD45.2 Ythdf2ΔNK ইঁদুর বা CD45.1 কনজেনিক ইঁদুরের মধ্যে লিম্ফোসাইট-ঘাটতি Rag2−/−Il2rg−/− ইঁদুর থেকে সমান সংখ্যক স্প্লেনিক NK কোষ স্থানান্তর করেছি। ফলাফলগুলি দেখায় যে কোষ স্থানান্তর (চিত্র S3 D) এর পরের 3 দিনে CD45.2 Ythdf2ΔNK ইঁদুরের তুলনায় CD45.1WT নিয়ন্ত্রণ ইঁদুর থেকে NK কোষগুলির একটি বৃহত্তর অনুপাত প্রাপ্ত হয়েছিল।

আরও বিশ্লেষণে প্রমাণিত হয়েছে যে Ythdf2ΔNK ইঁদুর থেকে NK কোষের হ্রাস প্রতিবন্ধক কোষের বিস্তার (চিত্র S3 E) এর কারণে হয়েছিল কিন্তু কোষ অ্যাপোপটোসিস (Fig.S3 F) নয়, পরামর্শ দেয় যে YTHDF2 ভিভো লিম্পেনো অবস্থার অধীনে এনকে কোষের হোমিওস্ট্যাটিক প্রলিফারেশন চালায়।

CD11b এবং CD27 স্তরের উপর ভিত্তি করে murine NK কোষগুলির আরও পার্থক্য অপরিপক্ক (CD11b−CD27+), মধ্যবর্তী পরিপক্ক (CD11b+CD27+), এবং টার্মিনাল পরিপক্ক (CD11b+CD27−) পর্যায়ে শ্রেণীবদ্ধ করা যেতে পারে ( Chiossone et al., 2009; Geiger and Sun, 2016)।

আমরা খুঁজে পেয়েছি যে Ythdf2 অভিব্যক্তি পরিপক্কতার সাথে বৃদ্ধি পেয়েছে এবং CD11b−CD27+, CD11b+CD27+, CD11b+CD27− যথাক্রমে Ythdf2-এর সর্বনিম্ন, মধ্যবর্তী এবং সর্বোচ্চ অভিব্যক্তি স্তর প্রদর্শিত হয়েছে (চিত্র S3 G), ইঙ্গিত করে যে YTHDF2 NK কোষের পরিপক্কতার সাথে জড়িত হতে পারে। তাই আমরা সেল সারফেসমার্কার CD11b এবং CD27 দ্বারা সংজ্ঞায়িত NK সেল পরিপক্কতায় YTHDF2 এর ভূমিকা তদন্ত করেছি।

আমরা দেখেছি যে এনকেসেলে Ythdf2 হারানোর ফলে প্লীহা, লিভার, ফুসফুস এবং রক্তে অপরিণত এবং মধ্যবর্তী পরিপক্ক এনকে কোষগুলির ফ্রিকোয়েন্সি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে কিন্তু বিএমে নয় (চিত্র 4 সি এবং চিত্র। S3 H), ইঙ্গিত করে যে YTHDF2 ইতিবাচকভাবে টার্মিনাল NK কোষের পরিপক্কতা নিয়ন্ত্রণ করে। এই তথ্যগুলির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, KLRG1 এর মাত্রা, যা এটারমিনাল NK কোষের পরিপক্কতা চিহ্নিতকারী, প্লীহা, যকৃত এবং ফুসফুসে Ythdf2ΔNK ইঁদুরের মধ্যে উল্লেখযোগ্যভাবে কম ছিল কিন্তু BMcom এর সাথে নয়। সংশ্লিষ্ট অঙ্গ বা টিস্যু কম্পার্টমেন্টে Ythdf2WT ইঁদুরের (চিত্র 4 ডি)।

Ythdf2 ঘাটতি আইসেল অভ্যন্তরীণ দ্বারা পরিপক্ক NK কোষের সংখ্যা কমেছে কিনা তা নির্ধারণ করতে, আমরা 1:1 এ মিশ্রিত CD45.1 WT এবং CD45.2 Ythdf2ΔNK ইঁদুর থেকে BM কোষ ইনজেকশনের মাধ্যমে Rag2−/−Il2rg−/− ইঁদুরগুলিতে কাইমেরা তৈরি করেছি। অনুপাত. প্রতিস্থাপনের পরে 8 সপ্তাহে ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা দেখানো হয়েছে, টার্মিনাল পরিপক্ক NK কোষগুলির একটি হ্রাস অনুপাত CD45.2 Ythdf2ΔNK BM কোষ থেকে CD45.1 WT কন্ট্রোল সেল (চিত্র 4 ই) থেকে প্রাপ্ত হয়েছে, পরামর্শ দেয় যে NK সেলটার্মিনাল পরিপক্কতা YDF2 দ্বারা নিয়ন্ত্রিত। কোষের অন্তর্নিহিত।

টি-বক্স ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর Eomes এবং Tbet NKcell পরিপক্কতার জন্য গুরুত্বপূর্ণ (Daussy et al., 2014; Gordon et al., 2012)। ইন্ট্রাসেলুলার স্টেনিং Ythdf2ΔNK ইঁদুর থেকে Ythdf2WT ইঁদুরের (চিত্র S3 I) তুলনায় NK কোষে Eomes-এর প্রোটিনের মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। উপরন্তু, আমরা দেখেছি যে Eomes-এর প্রোটিন এবং mRNA স্তরের হ্রাস বিশেষভাবে টার্মিনাল পরিপক্ক (CD11b+CD27−) NK কোষে (চিত্র S3,J-L) ঘটে।

যাইহোক, Eomes এর বিপরীতে, Ythdf2ΔNK এবং Ythdf2WT ইঁদুরের (চিত্র S3, I এবং K) মধ্যে NK কোষে Tbet-এর সমতুল্য, ইঙ্গিত করে যে YTHDF2 সম্ভবত Eomes টার্গেট করে NKcell টার্মিনাল পরিপক্কতা নিয়ন্ত্রণ করে।