মাইটোকন্ড্রিয়াল বায়োজেনেসিস এবং ইঁদুর লিভার 2-এ এমটিডিএনএ ক্ষতির উপর ক্যালোরি সীমাবদ্ধতার বয়স-সংবেদনশীল কার্যকারিতা

অনুগ্রহ করে যোগাযোগ করুনoscar.xiao@wecistanche.comআরও তথ্যের জন্য

2.4.mtDNA বিষয়বস্তু এবং ক্ষতির উপর বয়স এবং CR এর প্রভাব

যেহেতু মাইটোকন্ড্রিয়াল গতিবিদ্যা mtDNA [16,18] এর রক্ষণাবেক্ষণের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত, তাই আমরা পরিমাণগত পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া (qPCR) (চিত্র 8) দ্বারা সমস্ত ইঁদুরের মধ্যে mtDNA বিষয়বস্তু নির্ধারণ করেছি।

এমটিডিএনএ সামগ্রীতে বয়স-সম্পর্কিত হ্রাস AL-28(-27 শতাংশ) এবং AL-32 ইঁদুরগুলিতে (-23 শতাংশ) AL{{ এর তুলনায় পাওয়া গেছে 5}} প্রাণী, যেখানে AL-28 এবং AL-32 গোষ্ঠীর মধ্যে কোনও পরিসংখ্যানগত পার্থক্য ছিল না। CR শুধুমাত্র 28 মাসে mtDNA বিষয়বস্তুতে বয়স-সম্পর্কিত হ্রাস রোধে অত্যন্ত কার্যকরী ছিল যার ফলে AL- খাওয়ানো বয়স-মিলিত কাউন্টারপার্টের তুলনায় CR-28 গোষ্ঠীতে ক্রমবর্ধমান ( প্লাস 19 শতাংশ ) মান হয়েছে৷ উপরন্তু, AL-18 মান এবং CR-28 গোষ্ঠীর মধ্যে কোনো পরিসংখ্যানগত পার্থক্য ছিল না। বর্তমান কাজের অন্যান্য মার্কারের ক্ষেত্রে দেখা যায়, 32 মাসে CR এতটা কার্যকর ছিল না কারণ AL-32 মান এবং CR-32 কাউন্টারপার্টের মধ্যে কোনও পার্থক্য ছিল না। mtDNA ক্ষতির স্তরে বিশ্লেষণকে গভীর করার জন্য, আমরা qPCR (চিত্র 9) দ্বারা 4.8 Kb "সাধারণ মুছে ফেলা" এর আপেক্ষিক বিষয়বস্তু পরিমাপ করেছি।

সমস্ত পরীক্ষিত গোষ্ঠীতে 4.8 Kb মুছে ফেলার আপেক্ষিক সামগ্রীতে বয়সের সাথে বা CR এর সাথে কোনও উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন পাওয়া যায়নি।

অবশেষে, আমরা অক্সিডাইজড পিউরিনের ঘটনার জন্য mtDNA-এর তিনটি নির্দিষ্ট অঞ্চল স্ক্রীন করেছি, প্রধানত 8-অক্সো-ডিঅক্সিগুয়ানোসিন (8-অক্সাইড), অক্সিডাইজড পিউরিন-সংবেদনশীল এনজাইম ফর্মমিডোপাইরিমিডিন ডিএনএ গ্লাইকোসিলেজ (এফপিজি) ব্যবহার করে। তিনটি অঞ্চলকে ঘিরে রয়েছে, যথাক্রমে, স্থানচ্যুতি লুপ (ডি-লুপ), লাইট-স্ট্র্যান্ড রেপ্লিকেশনের উত্স (ওরি-এল), এবং উভয় NADH ডিহাইড্রোজেনেস (ND) সাবুনিট 1 এবং 2 (ND1/ND2) (ND1/ND2)( চিত্র 10)।

আরো জানতে এখানে ক্লিক করুন

চিত্র 10-এ দেখানো হয়েছে, প্রতিটি বিশ্লেষিত অঞ্চলে ইঁদুর গোষ্ঠীর মধ্যে অক্সাইডের ঘটনাগুলির শতাংশ উল্লেখযোগ্যভাবে ভিন্ন ছিল, যদিও একই প্যাটার্নের সাথে। পোস্ট-ডক পরীক্ষাটি AL-18 এবং AL-28 উভয় গ্রুপের ({{7}) তুলনায় 8-CR-28 ইঁদুরে অক্সাইডের উপস্থিতি হ্রাসের তাত্পর্য প্রকাশ করেছে D-লুপে } শতাংশ CR-28 বনাম AL-18 এবং-43 শতাংশ CR-28 বনাম AL-28;-48 শতাংশ CR -28 বনাম AL-18এবং-49 শতাংশ CR-28বনামCistanche এক্সট্র্যাক্ট অ্যান্টি রেডিয়েশনOri-L-এ AL-28;-54 শতাংশ CR-28 বনাম AL-18 এবং -56 শতাংশ CR-28 বনাম AL{{ 7}} ND1/ND2 এ)। CR 28 মাস পর্যন্ত mtDNA অক্সিডেটিভ ক্ষতি প্রতিরোধে কার্যকর বলে প্রমাণিত হয়েছে, যখন একই ক্ষতির ঘটনা AL-32 এবং CR-32 এর মধ্যে আলাদা ছিল না। ইঁদুর অক্সিডাইজড পিউরিনগুলি ইতিমধ্যেই AL-18 ইঁদুরের মধ্যে সনাক্ত করা হয়েছে AL-28 প্রাণীদের বয়স-সম্পর্কিত বৃদ্ধি না দেখিয়ে৷ AL-32 গ্রুপ এবং CR-32 একের মধ্যে তুলনা উল্লেখযোগ্য পার্থক্য দেখায়নি৷ নির্দিষ্ট অঞ্চলের মান বিবেচনা করে এটি হাইলাইট করা আকর্ষণীয় যে প্রতিটি গ্রুপের পরীক্ষিত অঞ্চলের মানগুলির মধ্যে ডি-লুপ ঘটনাটি সর্বাধিক ছিল, এইভাবে পূর্ববর্তী অনুসন্ধানগুলিকে সমর্থন করে যা এই অঞ্চলটিকে অক্সিডেটিভ ক্ষতির জন্য একটি হটস্পট হিসাবে নির্দেশ করে [17,{{ 20}}]।

চিত্র 10. AL-18, AL-28, CR-28, AL থেকে যকৃতের D-লুপ, Ori-L, এবং ND1/ND2 mtDNA অঞ্চলে অক্সিডাইজড পিউরিনের ক্ষতির ঘটনা -32, এবং CR-32-মাস বয়সী ইঁদুর। (ক)। বারগুলি ত্রিপ্রকারে পরিচালিত দুটি স্বাধীন পরীক্ষা থেকে প্রাপ্ত ডেটা উপস্থাপন করে এবং একমুখী ANOVA পরীক্ষা এবং Tukey এর একাধিক তুলনা পরীক্ষা ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়। গ্রাফিকাল উপস্থাপনায়, AL-18 ইঁদুরের মানের বিপরীতে ডেটা স্বাভাবিক করা হয়েছে, 1 হিসাবে স্থির করা হয়েছে এবং গড় মান এবং SD হিসাবে দেখানো হয়েছে।*p<0.05 versus=""><0.05versus al-28="" rats.n:="" number="" of="" analyzed="" animals.="" (a)d-loop;(b)ori-l;(c)="" nd1/nd2.(b).representative="" gel="" of="" formamidopyrimidine="" dna="" glycosylase="" (fpg)-treated="" and="" untreated="" total="" dna="" from="" one="" cr-28="" and="" one="" al-28="" rat;="" 5="" ng="" total="" dna="" were="" amplified="" using="" the="" d-loop="" primers.="">cistanche herbaপ্রতিটি পিসিআর পরিবর্ধনের একটি অ্যালিকোট অ্যাগারোজ ইথিডিয়াম ব্রোমাইড-দাগযুক্ত জেলে লোড করা হয়েছিল এবং ব্যান্ডের তীব্রতার জন্য বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

বয়সের সাথে মিলে যাওয়া গোষ্ঠীতে সিআর কার্যকারিতার বিষয়ে রিপোর্ট করা সমস্ত অনুসন্ধানগুলি সারণি 1 এ সংক্ষিপ্ত করা হয়েছিল।

3. আলোচনা

বার্ধক্যের প্রগতিশীল পতনকে প্রতিরোধ করতে সক্ষম পদ্ধতির দীর্ঘস্থায়ী অনুসন্ধানে, CR এর ইতিবাচক প্রভাবের কারণে সর্বাপেক্ষা প্রাসঙ্গিকতা অর্জন করেছে, যা খামির থেকে একজন মানুষ পর্যন্ত বিস্তৃত জীবের মধ্যে রিপোর্ট করা হয়েছে [22]। বিপুল সংখ্যক আণবিক পথকে প্রভাবিত করার জন্য সিআর প্রদর্শিত হয়েছে। এর মধ্যে, কিছু মাইটোকন্ড্রিয়াল বায়োজেনেসিস এবং কার্যকলাপের মড্যুলেশনে বিশেষভাবে কার্যকর, কারণ যারা পুষ্টি এবং/অথবা শক্তির মাত্রা অনুভব করে যেমন AMP-নির্ভর কাইনেস (AMPK) এবং sirtuins, যেখানে সবাই মাইটোকন্ড্রিয়ালের CR-প্ররোচিত পুনঃপ্রোগ্রামিং-এর সাথে সহযোগিতা করে। বিপাক [২৩]। অক্সিডেটিভ মেটাবলিজমের উন্নতির মাধ্যমে, CR ROS-এর মাইটোকন্ড্রিয়াল উত্পাদন এবং এই প্রতিক্রিয়াশীল প্রজাতির বয়স-সম্পর্কিত বৃদ্ধির কারণে আণবিক ক্ষতি হ্রাস করে [8-10]। যদিও বেশ কয়েকটি গবেষণা মাইটোকন্ড্রিয়াল স্তরে CR এর প্রভাবগুলি তদন্ত করেছে [3,13-15,24], অর্গানেলগুলিতে এই পুষ্টির হস্তক্ষেপের প্রভাবগুলির উপর একটি বিস্তৃত কাজ এখনও অনুপস্থিত। অতএব, এই অধ্যয়নটি মাইটোকন্ড্রিয়াল মার্কারগুলির একটি বৃহৎ সেটে সিআর-এর কার্যকারিতার সীমানার অস্তিত্ব পরীক্ষা করার চেষ্টা করেছিল। বিশেষ করে, আমরা বয়স্ক (28-মাস-বয়সী) এবং অত্যন্ত বয়স্ক (32-মাস-বয়সী) ইঁদুরের মধ্যে এই খাদ্যতালিকা দ্বারা প্রবর্তিত প্রভাবগুলির মধ্যে তুলনা করার উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করেছি যাতে CR-এর মধ্যে একটি ইন্টারপ্লে বিদ্যমান কিনা তা যাচাই করতে এবং বার্ধক্যের অগ্রগতি। ফলাফলের বিশ্লেষণে মাইটোকন্ড্রিয়াল বায়োজেনেসিস এবং এমটিডিএনএ ক্ষতিতে সিআর-এর কার্যকারিতার একটি জটিল চিত্র প্রকাশিত হয়েছে, যা সারণী 1 এ সংক্ষিপ্ত করা হয়েছে।

Cistanche বিরোধী বার্ধক্য করতে পারেন

3.1.মাস-পুরোনো ইঁদুরে 28- মাইটোকন্ড্রিয়াল মার্কার

একটি বড় সংখ্যক মাইটোকন্ড্রিয়াল মার্কার ইতিবাচকভাবে 28-মাস বয়সী ইঁদুরে CR দ্বারা প্রভাবিত হয়েছিল। যথা, TFAM, MFN2 এবং DRP1 প্রোটিনের পরিমাণে এবং AL-18 কন্ট্রোল গ্রুপের সাথে AL-28 একের তুলনা করে mtDNA সামগ্রীতে সাইট্রেট সিন্থেস কার্যকলাপে বয়স-সম্পর্কিত হ্রাসের খবর পাওয়া গেছে। . এই ধরনের পরিবর্তনগুলি CR দ্বারা 28-মাস-বয়সী ইঁদুরে (CR-28) প্রতিরোধ করা হয়েছিল৷ এই ফলাফলগুলি ইঁদুরের লিভারে এই বয়স পর্যন্ত সিআর-এর অ্যান্টি-এজিং প্রভাবকে সমর্থন করে। একইভাবে, সিআর দ্বারা প্ররোচিত তিনটি অ্যাসেইড এমটিডিএনএ অঞ্চলে অক্সিডাইজড পিউরিনের ঘটনা হ্রাস এই দৃষ্টিভঙ্গিকে আরও শক্তিশালী করে। লক্ষণীয়, এই অক্সিডেটিভ ক্ষতিটি ইতিমধ্যেই AL-18 প্রাণীদের মধ্যে উপস্থিত ছিল যেখানে AL-28 ইঁদুরের বয়স-সম্পর্কিত কোনো বৃদ্ধি ছিল না যা পরামর্শ দেয় যে এটির চেহারা বার্ধক্যের প্রাথমিক চিহ্নিতকারী হিসাবে চিহ্নিত করা যেতে পারে। পাঁচটি মাইটোকন্ড্রিয়াল মার্কারের উপর বিশেষ মনোযোগ দেওয়া দরকার যেগুলি 28-মাস-বয়সী ইঁদুরের মধ্যে CR দ্বারা প্রভাবিত হয়নি যেমন LonP1 প্রোটিনের পরিমাণ। Cvt c, OGGl, এবং APE1 এবং 4.8 Kb মুছে ফেলা সামগ্রী। প্রকৃতপক্ষে, LonP1 এবং Cyt c হিসাবে, CR AL-28 প্রাণীদের মধ্যে পাওয়া বয়স-সম্পর্কিত হ্রাস রোধ করতে পারেনি, যেখানে OGG1 এবং APE1 এর প্রোটিনের পরিমাণ, সেইসাথে 4.8 Kb মুছে ফেলার সামগ্রী ছিল না। বয়স বা CR দ্বারা প্রভাবিত। LonP1 ক্লান্ত TFAM [25-27] এর অবক্ষয়ের জন্য দায়ী এবং 27 মাস বয়স পর্যন্ত ইঁদুরের যকৃতে [29] বার্ধক্যের সাথে [28] হ্রাস পাওয়ার জন্য রিপোর্ট করা হয়েছে। আমরা পূর্বে পরামর্শ দিয়েছিলাম যে LonP1 [16] এর এই ধরনের বার্ধক্য-হ্রাসিত অভিব্যক্তিটি MtDNA [26] এর সাথে TFAM অপসারণের ক্ষেত্রে এর কার্যকলাপের সাথে সম্পর্কিত হতে পারে। পুনরুদ্ধার করা TFAM অভিব্যক্তি এবং mtDNA-নির্দিষ্ট অঞ্চলে TFAM- বাঁধাই করা সত্ত্বেও LonP1 অভিব্যক্তিতে বয়স-সম্পর্কিত হ্রাস রোধ করার জন্য CR-এর অকার্যকরতার সম্ভাব্য ব্যাখ্যা হিসাবে (বর্তমান ডেটা এবং পিকা এট আল। [15]), হল CR - Sirt3 [30] এর মধ্যস্থতামূলক সক্রিয়করণ যা প্ররোচিত ডিসিটাইলেশনের মাধ্যমে LonP1 এর প্রোটিনের পরিমাণকেও প্রভাবিত করতে পারে। Cyt c এর পরিমাণে বয়স-সম্পর্কিত হ্রাস রোধ করতে CR এর অকার্যকারিতা ব্যাখ্যা করার জন্য একটি ভিন্ন অনুমান প্রস্তাব করা যেতে পারে। এই প্রোটিনটি সাইটোসোলে মুক্তির মাধ্যমে মাইটোকন্ড্রিয়াল অ্যাপোপটোটিক পথের প্রধান ট্রিগার, এইভাবে AL-28 ইঁদুরের মধ্যে এর ইন্ট্রা-মাইটোকন্ড্রিয়াল পরিমাণ AL-18 মানের বৃদ্ধি নির্দেশ করে বার্ধক্যের সাথে অন্তর্নিহিত অ্যাপোপটোটিক প্রক্রিয়া [16,31]। অধিকন্তু, LonP1 হিসাবে, CR-28 ইঁদুরের মধ্যে Cyt c পরিমাণ এখনও AL-18 প্রাণীর মানের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে কম ছিল, যা ইঙ্গিত করে যে CR Cyt c অভিব্যক্তির চূড়ান্ত নিয়ন্ত্রণকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত করেনি /সাইটোসোল থেকে মুক্তি এবং, সম্ভবত, বা মাইটোকন্ড্রিয়াল অ্যাপোপটোটিক পথের বয়স-সম্পর্কিত বৃদ্ধি। এটি সিআর [২৩] দ্বারা মধ্যস্থতা করা অ্যাপোপটোসিসের পূর্বে রিপোর্ট করা প্রচারের সাথে একমত।cistanche লিঙ্গ বৃদ্ধিযেহেতু অ্যাপোপটোটিক পাথওয়েটি ডিএনএ ক্ষতি [32,33] জমে যাওয়ার দ্বারাও ট্রিগার করা যেতে পারে, আমরা OGG1 এবং APE1 নামক দুটি প্রধান মাইটোকন্ড্রিয়াল BER এনজাইমের প্রোটিন অভিব্যক্তি নির্ধারণ করেছি। উভয়ের প্রোটিনের পরিমাণ বার্ধক্য এবং CR 18 থেকে 28 মাস বয়সের দ্বারা প্রভাবিত হয়নি। একটি সম্ভাব্য ব্যাখ্যা হল যে দুটি BER এনজাইমের অভিব্যক্তি ইতিমধ্যেই AL-18 ইঁদুরের মধ্যে বৃদ্ধি পেয়েছে এবং mtDNA-তে বয়স-সম্পর্কিত বর্ধিত ক্ষতি প্রতিরোধ করার জন্য যথেষ্ট। প্রকৃতপক্ষে, মাইটোকন্ড্রিয়াল OGG1 [34,35] এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল APE1[36]-এর কার্যকলাপে বয়স-সম্পর্কিত বৃদ্ধির রিপোর্ট করা হয়েছে ইঁদুরের লিভারে 3-6-মাস বয়সী প্রাণী থেকে 20-23-মাসে -পুরোনো, সম্ভবত দক্ষতার সাথে mtDNA ক্ষতির বয়স-সম্পর্কিত বৃদ্ধি প্রতিরোধ করতে প্ররোচিত। এই সবগুলি আমাদের অনুমানকে আরও সমর্থন করে যে MtDNA ক্ষতিগুলি, যা OGG1 এবং APE1 দ্বারা মেরামত করা হয়েছিল, ইঁদুরের জীবদ্দশায় খুব প্রথম দিকে উপস্থিত হয়েছিল (এগুলি ইতিমধ্যে AL{21}} ইঁদুরগুলিতে উপস্থিত ছিল) এবং মাইটোকন্ড্রিয়ন-নিউক্লিয়াস রেট্রোগ্রেড যোগাযোগের মাধ্যমে প্ররোচিত হয়েছিল, BER এনজাইমগুলির প্রকাশের প্রাথমিক বৃদ্ধি। OGG1 এবং APE1-এ একটি CR প্রভাবের অনুপস্থিতির জন্য, আমরা পরামর্শ দিই যে ROS-এর CR-হ্রাসিত উপস্থিতি এবং সম্পর্কিত অক্সিডেটিভ ক্ষতিগুলি উভয় এনজাইমের একটি অভিব্যক্তি দ্বারা কার্যকরভাবে প্রতিরোধ করা হয়েছিল যা বয়সের সাথে মিলে যাওয়া AL-প্রাণীদের থেকে আলাদা নয়। 4.8 Kb মুছে ফেলার বিষয়বস্তু হিসাবে, AL-18 প্রাণী থেকে AL-28 প্রাণীদের মধ্যে বয়স-সম্পর্কিত কোনো বৃদ্ধি ঘটেনি যেন এই mtDNA ক্ষতি ইঁদুরের জীবনকাল এবং তার বয়সের শুরুতে দেখা যায়। -সম্পর্কিত বৃদ্ধি শুধুমাত্র অল্পবয়সী প্রাণীদের তুলনায় যাচাই করা যেতে পারে, যেমন অন্যান্য গবেষণায় রিপোর্ট করা হয়েছে [19,37-39]। AL-28 এবং AL-18 প্রাণীদের তুলনায় CR-28 ইঁদুরগুলিতে 4.8 Kb মুছে ফেলার বিষয়বস্তু উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করতে CR-এর অকার্যকারিতা আরও ইঙ্গিত করে যে দীর্ঘমেয়াদী CR প্ররোচিত করেছে যকৃতে ROSin উপস্থিতিতে চিহ্নিত হ্রাস। এটি 4.8 Kb মুছে ফেলার এক ধরণের স্থির-স্থিতি স্তরের দিকে নিয়ে যেতে পারে, যা AL-18 কাউন্টারপার্টের থেকে আলাদা নয় এবং সংশ্লিষ্ট mtDNA সামগ্রীর সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। যদিও বার্ধক্যের কারণে mtDNA মেরামত হ্রাস পায়নি, তবে AL-18 ইঁদুর থেকে AL-28-এ যাওয়ার সময় mtDNA সামগ্রীতে বয়স-সম্পর্কিত হ্রাস এখনও উপস্থিত ছিল, যেমনটি পূর্বে বিভিন্ন টিস্যুতে বর্ণিত হয়েছে। বয়স্ক ইঁদুর [3,15,19,39-42]। এটি নির্দিষ্ট এমটিডিএনএ অঞ্চলে টিএফএএম-এর বয়স-সম্পর্কিত বর্ধিত বাঁধাই দ্বারা ব্যাখ্যা করা যেতে পারে যেগুলি হটস্পটগুলিও ক্ষতিগ্রস্ত হয়েছিল [19]। এই অনুমানটি এইভাবে বয়স-সম্পর্কিত mtDNA ক্ষতিকে মেরামত এনজাইমের অপরিবর্তিত অভিব্যক্তি এবং কার্যকলাপের সাথে মিলিত করবে। এই অনুমানের আরও সমর্থনে CR-28 ইঁদুরে mtDNA ক্ষতির অনুপস্থিতি। প্রকৃতপক্ষে, আমরা পূর্বে দেখিয়েছি যে সিআর নির্দিষ্ট এমটিডিএনএ অঞ্চলে টিএফএএম-বাইন্ডিংয়ের বয়স-সম্পর্কিত বৃদ্ধিকে বাধা দেয় [15]। অতএব, বর্তমান এবং আমাদের পূর্ববর্তী তথ্য অনুসারে, টিএফএএম-বাইন্ডিংয়ের মড্যুলেশন মাইটোকন্ড্রিয়াল বায়োজেনেসিসের বার্ধক্য- এবং সিআর-মধ্যস্থতা নিয়ন্ত্রণের সাথে জড়িত আণবিক প্রক্রিয়াগুলির মধ্যে হতে পারে। বার্ধক্য এবং CR দ্বারা এই নিয়ন্ত্রণটি মাইটোকন্ড্রিয়াল গতিবিদ্যার ভারসাম্যের মাধ্যমে অনুসরণ করাও দেখানো হয়েছে যা বার্ধক্য দ্বারা প্রভাবিত হয় [43] এবং ফিশনের উপর ফিউশনের প্রবণতার দিকে পরিচালিত করে [44,45]। অতএব, আমরা সমস্ত assayed প্রাণীর মধ্যে ফিউশন সূচক (FI) গণনা করেছি (চিত্র 6) এবং এমন মানগুলি খুঁজে পেয়েছি যা আমাদের পূর্ববর্তী ফলাফলগুলিকে নিশ্চিত ও প্রসারিত করেছে [16]।cistanche সালসা সুবিধাবর্তমান অধ্যয়ন দ্বারা কিছু অভিনব ইঙ্গিত সংগ্রহ করা যেতে পারে, যথা, AL-18 ইঁদুরগুলিতে FI মানগুলি একটি ছোট পরিসর কভার করে, যখন AL-28 তে FI পরিসীমা অনেক বড় ছিল, একটি চিহ্নিত স্বতন্ত্র মানগুলির বয়স-সম্পর্কিত বৃদ্ধি, CR-28 ইঁদুরগুলিতে ছোট পরিসরের মানগুলি বিদারণ আনয়নে CR-এর একটি ইতিবাচক প্রভাব নির্দেশ করে, যার তুলনায় DRP1 পৃথক পরিমাণে সাধারণ বৃদ্ধির সাথে AL-28 গ্রুপ। যদিও দক্ষ বিদারণ ক্ষতিগ্রস্থ অর্গানেলগুলিকে অপসারণ করতে পারে, একটি অনুরূপ সত্তা ফিউশন মাইটোকন্ড্রিয়াল নেটওয়ার্কে ক্ষতিগ্রস্থ ম্যাক্রোমোলিকিউলগুলির বিস্তার নিশ্চিত করতে পারে, এইভাবে তাদের নেতিবাচক প্রভাবগুলিকে পাতলা করে দেয় [46]। অতএব, মাইটোকন্ড্রিয়াল ডায়নামিক্সের সূক্ষ্মভাবে সুরক্ষিত ভারসাম্যের CR-মধ্যস্থতা পুনরুদ্ধার, মাইটোকন্ড্রিয়াল বায়োজেনেসিসের মড্যুলেশনের উপর ইতিবাচক পরিণতি আনতে পারে, এমটিডিএনএ ক্ষতির বিপরীতমুখী যোগাযোগের সাথে সমন্বয়মূলকভাবে কাজ করে। এটি বিদ্যমান সাহিত্য প্রতিবেদনের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ যে পুষ্টির অবস্থা এবং বিপাকীয় পরিবর্তনগুলি মাইটোকন্ড্রিয়াল গতিবিদ্যার ভারসাম্যকে সংশোধন করতে পারে [৪৭] এবং এইভাবে, অর্গানেল বায়োজেনেসিসকেও প্রভাবিত করে। বিশেষ করে, মাইটোকন্ড্রিয়াল বায়োজেনেসিসের ROS-সংবেদনশীল নিয়ন্ত্রণ অর্গানেল সংখ্যা [48] বৃদ্ধির মাধ্যমে শুধুমাত্র ROS-এর সীমিত বৃদ্ধির সম্মুখীন হতে পারে এবং ROS [15]-এর CR-হ্রাসিত উপস্থিতি একটি থ্রেশহোল্ড-সদৃশ স্তরকে অতিক্রম করতে বাধা দিতে পারে যা নেতৃত্ব দিতে পারে। মাইটোকন্ড্রিয়াল ক্ষতির জন্য। ROS-এর উপস্থিতি হ্রাসে CR কার্যকারিতা বর্তমান গবেষণায় CR-28 ইঁদুরের mtDNA বিশ্লেষিত অঞ্চলে অক্সিডাইজড পিউরিনের হ্রাস দ্বারা প্রমাণিত হয়েছে যা মাইটোকন্ড্রিয়াল বিপাকের সামগ্রিক উন্নতিকে সমর্থন করে, বয়সের প্রতিকার করতে সক্ষম - সম্পর্কিত পতন। প্রকৃতপক্ষে, ROS-এর CR-হ্রাসিত উপস্থিতি মাইটোকন্ড্রিয়াল প্রোটিন এবং লিপিডের স্তরেও ব্যাপকভাবে প্রদর্শিত হয়েছে। বিশেষ করে, CR ইঁদুরের হৃদয়ে মাইটোকন্ড্রিয়াল প্রোটিনের অক্সিডেটিভ পরিবর্তন কমাতে দেখা গেছে|49] এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল মেমব্রেনে স্যাচুরেশন/অস্যাচুরেশন সূচক পরিবর্তন করে অক্সিডেটিভ ক্ষতি প্রতিরোধ করে এবং ঝিল্লির তরলতা বজায় রাখে [8]। তদ্ব্যতীত, মিউরিন কঙ্কালের পেশী এবং লিভার উভয় ক্ষেত্রেই মাইটোকন্ড্রিয়াল শ্বাসযন্ত্রের কমপ্লেক্স দ্বারা ROS এর উত্পাদন হ্রাস করার জন্য সিআর প্রদর্শিত হয়েছে [8]। ROS স্তরে CR উপকারী প্রভাবগুলির মধ্যে ROS-এর একটি উন্নত নিরপেক্ষকরণ এবং ROS-ক্ষতিগ্রস্ত অণুগুলির একটি বর্ধিত মেরামত অন্তর্ভুক্ত রয়েছে [10]। এই প্রভাব ছাড়াও, মাইটোকন্ড্রিয়াল কার্যকারিতার পরিবর্তনগুলি CR-সংবেদনশীল AMPK এবং sirtuins সক্রিয়করণ দ্বারা পরিমিত হয় যা ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর পারক্সিসোম প্রলিফেরেটর-অ্যাক্টিভেটেড রিসেপ্টর গামা কোঅ্যাক্টিভেটর 1-আলফা (PGC-1 এর কার্যকলাপকে নিয়ন্ত্রণ করে। ), এবং কাঁটাচামচ বক্স (ফক্সও), পরবর্তীটি বায়োজেনেসিস, অক্সিডেটিভ বিপাক এবং মাইটোকন্ড্রিয়ার টার্নওভারের সাথে জড়িত [২৩]। এইভাবে, মাইটোকন্ড্রিয়াল বিপাকের উপর সিআর-মধ্যস্থতামূলক ইতিবাচক প্রভাব নিউক্লিয়াসের সাথে বিপরীতমুখী যোগাযোগের একটি মডেল অনুসারে মাইটোকন্ড্রিয়াল বায়োজেনেসিসের চূড়ান্ত ট্রিগারকে সংশোধন করার জন্য অন্যান্য পথের সাথে যোগাযোগ করা উচিত [50]।

3.2.মাস-পুরোনো ইঁদুরে 32- মাইটোকন্ড্রিয়াল মার্কার

AL-32 এবং CR-32 ইঁদুরের মধ্যে তুলনা করার জন্য, আমাদের ডেটা উল্লেখযোগ্য পার্থক্যের একটি সাধারণ অনুপস্থিতি দেখায়। এটি 28 থেকে 32 মাস অতিক্রম করার সময় বয়স-সম্পর্কিত পতন প্রতিরোধে CR এর কার্যকারিতার জন্য একটি বয়স সীমাবদ্ধতার পরামর্শ দিতে পারে। বয়সের প্রভাবের বিষয়ে, যদিও, বিশ্লেষণ করা মার্কারের উপর নির্ভর করে বিভিন্ন সিদ্ধান্তে চালিত হতে পারে। প্রকৃতপক্ষে, উভয় 32-মাস-পুরোনো গোষ্ঠীতে, সাইট্রেট সিন্থেস কার্যকলাপে বয়স-সম্পর্কিত হ্রাস, TFAM, LonP1, OGG1, APE1 এর পরিমাণ, mtDNA এর বিষয়বস্তু এবং 4.8 Kb মুছে ফেলা একটি স্তরে বজায় ছিল যেটি AL-28 ইঁদুরের মধ্যে পর্যবেক্ষণের অনুরূপ ছিল অথবা এটি Cyt c, MFN2, DRP1 এবং নির্দিষ্ট mtDNA অঞ্চলে অক্সিডাইজড পিউরিনের ঘটনা হিসাবে আংশিক/সম্পূর্ণভাবে প্রতিরোধ করা হয়েছিল। বিশ্লেষিত মার্কারগুলির সাথে জড়িত বিভিন্ন পথের আন্তঃপ্রক্রিয়ার কারণে এই বিভিন্ন আচরণ সম্ভবত হতে পারে। MFN2 এবং DRP1 রাশির জন্য AL-18 এবং AL-28 উভয়ের সাথে 32-মাস-পুরোনো গ্রুপের তুলনা করে আরেকটি উপসংহার হাইলাইট করা যেতে পারে। প্রকৃতপক্ষে, বয়স-সম্পর্কিত হ্রাস দুটি গতিশীল প্রোটিনের জন্য AL-18 গ্রুপ থেকে AL-32 এবং CR-32 উভয় গ্রুপে পাস করা উপস্থিত ছিল না। বিবেচনা করে যে AL-18 গ্রুপ এবং উভয় 32-মাস-বয়সীর মধ্যে তুলনা করলে অন্যান্য মার্কারের ক্ষেত্রে বয়স-সম্পর্কিত হ্রাস ছিল AL{{ এর তুলনায় আকারে সমান বা ছোট। 30}} এবং AL-28 গ্রুপ, আমরা কিছু পরিণতি চালাতে পারি। এটি ইঙ্গিত দিতে পারে যে মার্কারগুলির বয়স-সম্পর্কিত পরিবর্তনগুলি শুরু হতে পারে বা ইতিমধ্যেই 18 মাসে উপস্থিত হতে পারে, এবং তারপরে "গতি" সহ মাস বয়সী প্রাণীদের মধ্যে তাদের সর্বনিম্ন/সর্বোচ্চ মান পৌঁছেছে যা বার্ধক্য প্রক্রিয়ার আদর্শ। বিপরীতভাবে, অত্যন্ত বয়স্ক প্রাণীদের মধ্যে (32-মাস-বয়সী), প্রক্রিয়াটির "গতি" ধীর হতে দেখা যায় কারণ মানগুলি AL-18 সমকক্ষগুলির তুলনায় কম বা সমান, কিন্তু কম নয় AL-28-এর থেকে /উচ্চতর, দীর্ঘ সময় অতিবাহিত হওয়া সত্ত্বেও পাওয়া গেছে। বার্ধক্য প্রক্রিয়ায় দুটি ভিন্ন গতির অনুমান [১৬] বোঝায় যে ক্ষতি, বিভিন্ন কারণে, প্রতিটি ইঁদুরের প্রাপ্তবয়স্ক হওয়ার সময় শারীরিক এবং বিপাকীয় কার্যকলাপকে প্রভাবিত করতে শুরু করে। এই ধরনের ক্ষয়ক্ষতিগুলি ক্ষতিপূরণমূলক প্রক্রিয়া দ্বারা কার্যকরভাবে প্রতিহত করা হয় এবং ক্ষতিগুলি প্রকাশ্যে প্রদর্শিত হয় না, সফল হোমিওস্টেসিস দ্বারা চিহ্নিত একটি স্থিতিশীল "মধ্য" বয়সের সাথে মিলে যায়। এই গবেষণায়, আমরা ইঁদুরগুলিকে "দ্রুত" বার্ধক্য হিসাবে চিহ্নিত করেছি যেগুলির মধ্যে হস্তক্ষেপকারী ক্ষতি এবং ক্ষতিপূরণমূলক প্রক্রিয়াগুলির মধ্যে ভারসাম্য পরবর্তী জীবনে বিবর্ণ হতে শুরু করে।cistanche tubulosa ডোজ redditএই প্রাণীগুলিতে, AL-28 গোষ্ঠীর বৃহত্তর ভগ্নাংশ গঠন করে, ক্ষতিগুলি স্বাভাবিক ক্রিয়াকলাপের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ প্রান্তিক সীমা অতিক্রম করে এবং একটি পরিবর্তিত অবস্থা দেখা দেয়। বিপরীতভাবে, পরীক্ষিত বার্ধক্য জনসংখ্যার অবশিষ্ট, ছোট অংশ দীর্ঘ সময়ের জন্য ক্ষতি এবং মেরামতের মধ্যে হোমিওস্ট্যাটিক ভারসাম্য বজায় রাখে এবং AL-32 এবং CR{{2} উভয়ই সহ "ধীরে ধীরে" বার্ধক্যপ্রাপ্ত প্রাণীদের দল গঠন করে } ইঁদুর। বার্ধক্যের বিভিন্ন গতি সম্পর্কে একটি অনুরূপ অনুমান সম্প্রতি মানুষের জন্যও প্রস্তাব করা হয়েছে [51]। সামগ্রিকভাবে নেওয়া, এই ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে অত্যন্ত বয়স্ক প্রাণীগুলি CR দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত না হয়ে দীর্ঘায়ুতে পৌঁছে থাকতে পারে এবং সম্ভবত বয়স-সম্পর্কিত মাইটোকন্ড্রিয়াল কর্মহীনতার সাথে আরও ভালভাবে মোকাবেলা করার জন্য জেনেটিক প্রবণতার কারণে, তবে এই জাতীয় অনুমান ভবিষ্যতের গবেষণার নিশ্চয়তা দেয়। এই অভিনব অনুসন্ধানগুলি সিআর-এর কার্যকারিতার সীমাবদ্ধতার অস্তিত্বের মূল এবং গুরুত্বপূর্ণ প্রশ্নের উত্তর দিতে পারে, যা ইনগ্রাম এবং ডি কাবো এই বিষয়ে তাদের অত্যন্ত গভীর গবেষণায় উত্থাপিত l52l, বয়সের সাথে এই ধরনের সীমা চিহ্নিত করার অনুমতি দেয়। ইঁদুরের লিভারের জন্য 28 মাস। তা সত্ত্বেও, এই উপসংহারে যে সিআর বা কোনো খাদ্য সেই ইঁদুরগুলিতে উপকারী ফলাফল প্রকাশ করেনি যেগুলি স্বাভাবিকভাবে দীর্ঘায়ু হওয়ার জন্য প্রবণ ছিল, এই পুষ্টির হস্তক্ষেপের কার্যকারিতার উপর সামগ্রিক আস্থাকে প্রভাবিত করবে না, আসলে, সিআর এখনও উপকারী প্রভাবগুলি প্রকাশ করতে সক্ষম ছিল কারণ এটি সক্ষম ছিল। 28-মাস বয়সী ইঁদুরের লিভারে মাইটোকন্ড্রিয়াল বায়োজেনেসিস এবং এমটিডিএনএ ক্ষতির বেশিরভাগ বয়স-সম্পর্কিত পরিবর্তন প্রতিরোধ করে। এটি আরও নিশ্চিত করে যে সাধারণ জনসংখ্যার বার্ধক্য হ্রাসকে দক্ষতার সাথে মোকাবেলা করার জন্য একটি সুপ্রতিষ্ঠিত কৌশল হিসাবে CR।

4. উপকরণ এবং পদ্ধতি

4.1.প্রাণী

গবেষণাটি ফ্লোরিডা বিশ্ববিদ্যালয়ের ইনস্টিটিউশনাল অ্যানিমাল কেয়ার অ্যান্ড ইউজ কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল। পরীক্ষাগার প্রাণীদের যত্ন এবং ব্যবহারের জন্য জাতীয় স্বাস্থ্য ইনস্টিটিউট (এনআইএইচ) নির্দেশিকা অনুসারে সমস্ত পদ্ধতি সম্পাদিত হয়েছিল। লিভারের নমুনাগুলি ফিশার 344× ব্রাউন নরওয়ে (F344BNF1) পুরুষ ইঁদুর থেকে ছিল যা ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট অফ এজিং কলোনি (ইন্ডিয়ানাপোলিস, IN, USA) থেকে প্রাপ্ত এবং তাপমাত্রা- (20 প্লাস /-2 ডিগ্রি) এবং হালকা-তে পৃথকভাবে রাখা হয়েছিল নিয়ন্ত্রিত পরিবেশ (12-ঘন্টা আলো/অন্ধকার চক্র) নিয়মিত ইঁদুরের চাউ এবং জলের সাথে উপলব্ধ বিজ্ঞাপন লিবিটাম ডিপার্টমেন্ট অফ এজিং অ্যান্ড জেরিয়াট্রিক রিসার্চ, ডিভিশন অফ বায়োলজি অফ এজিং, কলেজ অফ মেডিসিন, ইউনিভার্সিটি অফ ফ্লোরিডা, গেইনসভিল, FL( আমেরিকা). 3.5 মাস বয়সে (10 শতাংশ সীমাবদ্ধতা) ক্যালোরি সীমাবদ্ধতা শুরু করা হয়েছিল, 3.75 মাসে 25 শতাংশ সীমাবদ্ধতা বৃদ্ধি করা হয়েছিল, এবং 4 মাস থেকে প্রতিটি প্রাণীর জীবন শেষ না হওয়া পর্যন্ত 40 শতাংশ সীমাবদ্ধতা রাখা হয়েছিল, যা 28 মাস (CR{ {17}}) বা 32 মাস (CR-32) বয়স। ক্যালোরি-সীমাবদ্ধ প্রাণীদের NIH31-এনআইএ ফোর্টিফাইড ডায়েট খাওয়ানো হয়েছিল যাতে তারা অপুষ্টিতে ভুগছে না, যেখানে অ্যাড লিবিটাম-খাওয়া প্রাণীদের NIH31 ইঁদুরের খাদ্য দেওয়া হয়েছিল। প্রাণীগুলি নিম্নলিখিত গোষ্ঠীগুলি নিয়ে গঠিত: 18-মাস-পুরোনো অ্যাড লিবিটাম-ফেড (AL-18, n=6),28-মাস-বয়সী অ্যাড লিবিটাম-ফেড (AL -28, n=6),28-মাস-পুরনো ক্যালোরি-সীমাবদ্ধ(CR-28, n=6), 32-মাস-পুরোনো বিজ্ঞাপন libitum-fed(AL-32, n=6), এবং 32-মাস-বয়সী ক্যালোরি-সীমাবদ্ধ (CR-32, n =6) ইঁদুর। কোরবানির আগে পশুদের চেতনানাশক করা হয়েছিল এবং যকৃতের নমুনাগুলি অবিলম্বে অপসারণ করা হয়েছিল, তরল নাইট্রোজেন দ্বারা ঠান্ডা আইসোপেন্টেনে স্ন্যাপ-ফ্রোজেন করা হয়েছিল এবং পরবর্তী বিশ্লেষণ না হওয়া পর্যন্ত তরল নাইট্রোজেনে সংরক্ষণ করা হয়েছিল।

4.2। সাইট্রেট সিন্থেস কার্যকলাপ নির্ধারণ

সাইট্রেট সিন্থেস ক্রিয়াকলাপ নির্ধারণ [17] এর মতো সঞ্চালিত হয়েছিল। সংক্ষেপে, লিভারের নমুনা থেকে বিশুদ্ধ মোট প্রোটিনের 80 ug বিক্রিয়া বাফারে (0.31 মিমি এসিটাইল-কোএ, 100 মিমি ট্রিস বাফার ( pH 8.1), 0.25 শতাংশ Triton X-100, 0.1 mM 550-dithiol-bis-2-nitrobenzoic acid, এবং 0.5 mM oxaloacetate (1 mL) 30 ডিগ্রি।

সাইট্রেট সিন্থেস কার্যকলাপ (umol× min-I× g tissue-) 412 nm এ থায়োনিট্রোবেনজোয়িক অ্যাসিড (TNB) উৎপাদনের হার পরিমাপ করে স্পেকট্রোফটোমেট্রিকভাবে নির্ধারণ করা হয়েছিল।

4.3। ওয়েস্টার্ন ইমিউনোব্লটিং

লিভার মাইটোকন্ড্রিয়াকে 220 মিমি ম্যানিটল, 70 মিমি সুক্রোজ, 20 মিমি ট্রিস-এইচসিএল, 1 মিমি ইডিটিএ, এবং 5 মিমি ইজিটিএ, পিএইচ 7.4, 【16】 অনুযায়ী 4 ডিগ্রিতে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। এছাড়াও, 10 ইউজি মাইটোকন্ড্রিয়াল প্রোটিন পশ্চিমী ইমিউনোব্লটিং বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। Anti-TFAM(1:50,000), অ্যান্টি-VDAC(1:50,000, Abcam, Cambridge, UK), anti-OGG1(1:2500, Abcam, Cambridge, UK) , anti-APE1(1:5000, Abcam, Cambridge, UK), anti-MFN2(1:5000, Abnova, তাইপেই, তাইওয়ান), anti-DRP1(1:2500, Abnova, তাইপেই, তাইওয়ান) , অ্যান্টি-সাইট সি (1:500, ফার্মিংজেন, সান দিয়েগো, CA, USA), এবং অ্যান্টি-লন প্রোটিজ (1:10,000) প্রাথমিক অ্যান্টিবডি হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। টিএফএএম এবং লনের বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডিগুলি যথাক্রমে ড. এইচ. হিনাগাকি (রসায়ন বিভাগ, নাগোয়া জাতীয় শিল্প গবেষণা ইনস্টিটিউট, নাগোয়া-শি, আইচি, জাপান) এবং ড. সি. সুজুকি (বিভাগ) দ্বারা কাস্টম-মেড এবং দয়া করে দান করা হয়েছিল বায়োকেমিস্ট্রি অ্যান্ড মলিকুলার বায়োলজি, নিউ জার্সি মেডিকেল স্কুল, ইউনিভার্সিটি অফ মেডিসিন অ্যান্ড ডেন্টিস্ট্রি অফ নিউ জার্সি, নিউয়ার্ক, এনজে, ইউএসএ)। প্রোটিনগুলি কেমিলুমিনেসেন্স দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল এবং ইমিউনোর্যাক্টিভ ব্যান্ডগুলি ইমেজ ল্যাব সফ্টওয়্যার (বায়োরাড ল্যাবরেটরিজ ইনক।, হারকিউলিস, সিএ, ইউএসএ) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল এবং ভিডিএসি এক্সপ্রেশনের বিরুদ্ধে স্বাভাবিক করা হয়েছিল।

4.4.mtDNA এবং mtDNA 4.8 Kb"সাধারণ মুছে ফেলা" বিষয়বস্তুর নির্ধারণ

পরিমাণগত রিয়েল টাইম পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া (qPCR) mtDNA এবং mtDNA 4.8 Kb "সাধারণ মুছে ফেলা" এর আপেক্ষিক বিষয়বস্তু নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। একটি টেমপ্লেট এবং নিম্নলিখিত প্রাইমার হিসাবে মোট DNA এর 3 ng ব্যবহার করে SYBR সবুজ রসায়নের মাধ্যমে প্রতিক্রিয়া সম্পাদিত হয়েছিল: 5-GGTTCTTACTTCAGGGCCATCA-3'(nt 15.785-15.806), mtDNA এর জন্য MtDNA 5'-TGATTAGACCCGTTACCATCGA-3'(nt 15,868-15,847); -অ্যাক্টিন 5'-CCCAGCCATGTACGTAGCCA-3'(nt 2181-2200), -actinrev5'-CGTCTCGGAGTCCATC AC-3'(nt 2266-2248); {{26} এর জন্য 4.8 ডেল }AAGGACGAACCTGAGCCCTAATA-3'(nt8109-8131), 4.8 del rev 5'-CGAAGTAGATGATGCGTATACTGTA-3'(nt 13,020-12,996)। পারমাণবিক সম্পর্কিত mtDNA বিষয়বস্তু ডিএনএ এবং এমটিডিএনএ সম্পর্কিত 4.8 কেবি "সাধারণ মুছে ফেলা" বিষয়বস্তু নির্ধারণ করা হয়েছিল, যেমনটি [19] এ রিপোর্ট করা হয়েছে।

4.5। অক্সিডাইজড পিউরিনের বিশ্লেষণ

ফরমামিডোপাইরিমিডিন ডিএনএ গ্লাইকোসিলেজ (এফপিজি)(নিউ ইংল্যান্ড বায়োল্যাবস, বেভারলি, এমএ, ইউএসএ) মোট ডিএনএর হজম অক্সিডাইজড পিউরিন সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল [53]।

এমটিডিএনএর ডি-লুপ, ওরি-এল, এবং এনডি1/এনডি2 অঞ্চলের পিসিআর পরিবর্ধন সংশ্লিষ্ট প্রাইমার জোড়া ব্যবহার করে পরিচালিত হয়েছিল:

ডি-লুপ ফর5'-TCTGGTCTTGTAAACCAAAAATGA-3'(nt 15,302-15,325),D-লুপ রেভ 5'-TGGAATTTTGGGGTAGGC-3'(nt 16,302-16, 282); Ori-L 5'-AACCAGACCCAA ACACGAAA-3' (nt 4414-4433), Ori-L Rev 5'-CTATTCCTGCTCAGGCTCCA-3'(nt 5407-5388);ND1 এর জন্য 5 '-AGGACCATTCGCCCTATTCT-3'(nt3390-3409),ND1 Rey 5'-CGCCAAC AAAGACTGATGAA3'(nt 4399-4380) Fpg-চিকিত্সা করা এবং চিকিত্সা না করা মোট ডিএনএর 5 এনজিতে৷ সাইক্লিংয়ের শর্তগুলি ছিল: 95 ডিগ্রিতে 10 মিনিটের প্রাক-ইনকিউবেশন, তারপরে 15s95 ডিগ্রি, 15s 58 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডের 18টি চক্র এবং 1 মিনিট 72 ডিগ্রি। প্রতিটি পিসিআর পরিবর্ধনের একটি অ্যালিকোট 1.3 শতাংশ অ্যাগারোজ জেলে লোড করা হয়েছিল। ইথিডিয়াম ব্রোমাইড-দাগযুক্ত ব্যান্ডগুলির ব্যান্ডের তীব্রতা ইমেজ ল্যাব সফ্টওয়্যার (বায়োরাড ল্যাবরেটরিজ ইনক।, সিএ, ইউএসএ) দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। গ্রাফিকাল ভিজ্যুয়ালাইজেশন উন্নত করতে, Fpg-চিকিত্সা করা এবং অপরিশোধিত ব্যান্ড তীব্রতার মধ্যে অনুপাত 100-এর পরিপূরকের শতাংশ হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল।

4.6। পরিসংখ্যান

ডেটা গড় এবং মানক বিচ্যুতি (SD) হিসাবে প্রকাশ করা হয়। Tukey এর একাধিক তুলনা পরীক্ষার সাথে একমুখী ANOVA ব্যবহার করা হয়েছিল। সমস্ত পরীক্ষার জন্য, পরিসংখ্যানগত গুরুত্ব 5 শতাংশ স্তরে সেট করা হয়েছিল। একটি নির্দিষ্ট পরিসংখ্যান প্যাকেজ ব্যবহার করে বিশ্লেষণ চালানো হয়েছিল (Stata Corp. 2005. Stata Statistical Software: Release. College Station, TX, USA)।

এই নিবন্ধটি Int থেকে নেওয়া হয়েছে। জে মোল। বিজ্ঞান 2021, 22, 1665। https://doi.org/10.3390/ijms22041665 https://www.mdpi.com/journal/ijms