মলিকুলার অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফির উপর ভিত্তি করে সিস্তানচে ডেসার্টিকোলা থেকে কম আণবিক ওজন স্যাকারাইডের ম্যাক্রোফেজ সক্রিয়করণের লক্ষ্য সনাক্তকরণ এবং প্রক্রিয়া বিশ্লেষণ

"বিমূর্ত"এই গবেষণার লক্ষ্য Cistanche deserticola (LMSC) থেকে কম আণবিক ওজন স্যাকারাইডের ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশনের জন্য লক্ষ্য এবং লক্ষ্য-সংশ্লিষ্ট প্রক্রিয়া তদন্ত করা। ফাগোসাইটিক কার্যকলাপ এবং RAW264 এর কোন রিলিজ নেই। 7 টি কোষ সনাক্ত করা হয়েছিল, এবং ফলাফলগুলি দেখায় যে LMSC ফ্যাগোসাইটিক কার্যকলাপ উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি করে এবং কোন রিলিজ না করে ইমিউন অ্যাক্টিভেশন প্রভাব প্রয়োগ করে। লক্ষ্য প্রোটিন ক্যাপচার করার জন্য এলএমএসসি-সংযুক্ত ইপোক্সি-অ্যাক্টিভেটেড সেফারোজ পুঁতিগুলি অ্যাফিনিটি রিএজেন্ট হিসাবে প্রস্তুত করা হয়েছিল। LC-MS/MS বিশ্লেষণ দ্বারা Eef2-এর মতো চব্বিশটি প্রোটিন চিহ্নিত করা হয়েছিল। পাথওয়ে সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণে দেখা গেছে LMSC সক্রিয় RAW264। Fcgamma রিসেপ্টর নির্ভর ফ্যাগোসাইটোসিস, TNF-আলফা NF-κB সিগন্যালিং পাথওয়ে, গ্লাইকোলাইসিস/গ্লুকোনোজেনেসিস এবং সাইট্রিক অ্যাসিড চক্র এবং শ্বাসযন্ত্রের ইলেক্ট্রন পরিবহন পথ নিয়ন্ত্রণ করে 7 কোষ।

"মূল কথা"Cistanche deserticola; কম আণবিক ওজন স্যাকারাইড; ম্যাক্রোফেজ সক্রিয়করণ; আণবিক সম্বন্ধীয় ক্রোমাটোগ্রাফি; লক্ষ্য শনাক্তকরণ; প্রক্রিয়া বিশ্লেষণ

মরুভূমি জিনসেং

সিস্তানচেস হারবা হল একটি বিখ্যাত ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধ যা কিডনি এবং ইয়াংকে টোনিফাই করে, সারাংশ ও রক্তের উপকার করে এবং অন্ত্র ও মলত্যাগে পুষ্টি যোগায়। এটি "মরুভূমি জিনসেং" নামে পরিচিত। আধুনিক বিশ্লেষণাত্মক রসায়ন গবেষণা দেখায় যে Cistanche deserticola বিভিন্ন কার্বোহাইড্রেট উপাদান ধারণ করে, যার মধ্যে রয়েছে মনোস্যাকারাইড যৌগ প্রধানত ফ্রুক্টোজ, অলিগোস্যাকারাইড যৌগ যেমন সুক্রোজ, এবং পলিস্যাকারাইড যেমন ACDP-2, যা সিস্তানচে মরুভূমিতে ভূমিকা পালন করতে কার্যকর পদার্থ। রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা নিয়ন্ত্রণ, মলত্যাগ ইত্যাদি। [2-5]। Cistanche deserticola পলিস্যাকারাইডগুলি ইমিউনোমোডুলেটরি প্রভাব সহ সক্রিয় উপাদানগুলির একটি শ্রেণী হিসাবে ব্যাপকভাবে রিপোর্ট করা হয়েছে, যখন কম আণবিক ওজন শর্করা (LMSCs) যেমন অলিগোস্যাকারাইড এবং মনোস্যাকারাইডগুলি খুব কমই অধ্যয়ন করা হয়েছে। Cistanche deserticola-এর প্রধান সক্রিয় উপাদানগুলির ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশনের উপর আমাদের গবেষণা গোষ্ঠীর একটি সমীক্ষায় দেখা গেছে যে কম আণবিক চিনি ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশন সহ এক ধরনের সক্রিয় উপাদান, কিন্তু এর ইমিউন অ্যাক্টিভেশন লক্ষ্য এবং কর্মের পদ্ধতি এখনও অস্পষ্ট।

Cistanche এর প্রভাব - অনাক্রম্যতা উন্নত করুন

Cistanche Enhance Immunity পণ্য দেখতে এখানে ক্লিক করুন

【আরো জন্য জিজ্ঞাসা করুন】 ইমেল:cindy.xue@wecistanche.com / Whats অ্যাপ: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

মলিকুলার অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি একটি ক্রোমাটোগ্রাফিক পদ্ধতি যা নির্দিষ্টভাবে একটি স্থির পর্যায়ে আবদ্ধ করে লক্ষ্য অণুগুলির পৃথকীকরণ এবং পরিশোধন অর্জন করে [6]। এই পদ্ধতির উচ্চ সখ্যতা এবং নির্দিষ্টতা রয়েছে এবং অত্যন্ত কম লক্ষ্য পণ্য ঘনত্ব সহ জটিল জৈব সিস্টেমের জন্য বিশেষভাবে উপযুক্ত [7]। সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, এটি ধীরে ধীরে প্রাকৃতিক ওষুধের লক্ষ্য চিহ্নিত করার জন্য একটি শক্তিশালী হাতিয়ারে বিকশিত হয়েছে। এই গবেষণায়, আণবিক অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফির উপর ভিত্তি করে ছোট অণু লক্ষ্য প্রোটিন ক্যাপচার প্রযুক্তি ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশন সহ LMSC লক্ষ্য প্রোটিন সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। বায়োইনফরমেটিক্স বিশ্লেষণের মাধ্যমে, লক্ষ্য গোষ্ঠীর সংকেত নিয়ন্ত্রক পথের তথ্য প্রাপ্ত করা হয় ইমিউন নিয়ন্ত্রক কার্যকলাপ এবং LMSC এর সম্পর্কিত প্রক্রিয়াগুলি অন্বেষণ করতে।

1 উপাদান

1.1 কোষ

মাউস ম্যাক্রোফেজ লাইন RAW264 7 চাইনিজ একাডেমি অফ মেডিকেল সায়েন্সের সেল সেন্টার থেকে কেনা।

1.2 ওষুধ এবং বিকারক

ফেটাল বোভাইন সিরাম (এফবিএস) জার্মানির প্যান বায়োটেক থেকে কেনা হয়েছিল; অ্যান্টিবায়োটিক, DMEM উচ্চ চিনির মাধ্যম, এবং 6 × প্রোটিন স্যাম্পলিং বাফারটি Zhongke Maichen Technology Co., Ltd থেকে কেনা হয়েছিল। Cistanche deserticola-এর কম আণবিক ওজনের চিনি আমাদের গবেষণা গোষ্ঠী দ্বারা স্ব-তৈরি করা হয়েছিল এবং HPLC দ্বারা প্রধানত ম্যানিটোল (ম্যানিটল) ধারণ করা হয়েছিল। 16 53 শতাংশ ), সুক্রোজ (8 34 শতাংশ), ফ্রুক্টোজ (25 38 শতাংশ), গ্লুকোজ (7 75 শতাংশ) এবং অন্যান্য মনোমেরিক উপাদান। Escherichia coli O55 থেকে Lipopolysaccharide: B5, LPS, 3 - (4,5-ডাইমিথাইল থিয়াজোল-2) - 2,5-ডিফেনাইলটেট্রাজোলিয়াম ব্রোমাইড (MTT) এবং {{ 14}} শতাংশ নিরপেক্ষ লাল সমাধান মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রের সিগমা অ্যালড্রিচ থেকে কেনা হয়েছিল। নাইট্রিক অক্সাইড (NO) রিএজেন্ট কিটটি নানজিং জিয়ানচেং বায়োটেকনোলজি রিসার্চ ইনস্টিটিউট থেকে কেনা হয়েছিল। Epoxy-activated Sepharose জেল (6B) সুইডেনের GE স্বাস্থ্যসেবা থেকে কেনা হয়েছিল। দ্রুত সিলভার স্টেনিং কিটটি Biyuntian বায়োটেকনোলজি রিসার্চ ইনস্টিটিউট থেকে কেনা হয়েছিল। ভর স্পেকট্রোমেট্রির জন্য ফর্মিক অ্যাসিড এবং অ্যাসিটোনিট্রিল উভয়ই মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রের থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক থেকে কেনা হয়েছিল। অন্যান্য সমস্ত বিকারকগুলি গার্হস্থ্য বিশ্লেষণাত্মক বিশুদ্ধ।

সিস্তানচে পাউডার

1.3 যন্ত্র

CO2 সেল ইনকিউবেটর (SANYO, জাপান); CIX100 মাইক্রোস্কোপ (অলিম্পাস কর্পোরেশন, জাপান); 5424R সেন্ট্রিফিউজ (এপেনডর্ফ, জার্মানি); স্বয়ংক্রিয় জল পরিশোধক (মিলিপুর, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র); সানরাইজ বেসিক এলিসা (TECAN, সুইজারল্যান্ড); THZ-C ডেস্কটপ ধ্রুবক তাপমাত্রা অসিলেটর (Suzhou Peiying Experimental Equipment Co., Ltd.); EAS Y-nLC - II তরল ক্রোমাটোগ্রাফ (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, USA); LTQ-অরবিট্র্যাপ আয়ন ট্র্যাপ ট্যান্ডেম ভর স্পেকট্রোমেট্রি (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ইউএসএ); কৈশিক তরল ক্রোমাটোগ্রাফি কলাম (Microm Bioresources, USA)।

2 পদ্ধতি

2.1 কোষ সংস্কৃতি এবং প্রশাসন

RAW264। 10 শতাংশ ভ্রূণের বোভাইন সিরাম এবং 1 শতাংশ দ্বৈত অ্যান্টিবডি ধারণ করে DMEM উচ্চ গ্লুকোজ মাধ্যমের মধ্যে 7টি কোষকে সংষ্কৃত করা হয়েছিল এবং 5 শতাংশ CO2 ধারণকারী একটি 37 ডিগ্রি স্যাচুরেটেড আর্দ্রতার ধ্রুবক তাপমাত্রার ইনকিউবেটরে রাখা হয়েছিল। প্রতি 2-3 দিনে একবার পাস করুন এবং কোষগুলি লগারিদমিক বৃদ্ধির পর্যায়ে প্রবেশ করলে পরীক্ষা চালান। কোষকে ফাঁকা গ্রুপ, লাইপোপলিস্যাকারাইড গ্রুপে বা সিস্তানচে ডেসার্টিকোলার কম আণবিক ওজনের চিনির গ্রুপে ভাগ করুন। এলপিএস গ্রুপের কোষগুলিকে ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে 1 মিলিগ্রাম · এল-1 এলপিএস দ্রবণ দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল; LMSC গ্রুপ কোষগুলিকে বিভিন্ন ভর ঘনত্বের LMSC সমাধানের সাথে যুক্ত করা হয়েছিল (0 25,0. 5,1,2 g·L － 1; প্রশাসনের আগে একটি ফিল্টার ঝিল্লি দিয়ে ফিল্টার); ফাঁকা গ্রুপ কোষে সিরাম-মুক্ত সংস্কৃতি মাধ্যমের সমান ভলিউম যোগ করুন।

2.2 নিরপেক্ষ লাল পদ্ধতি ব্যবহার করে ম্যাক্রোফেজ ফ্যাগোসাইটিক কার্যকলাপ নির্ধারণ

RAW264। 7টি কোষ একটি 96-কূপ প্লেটে বীজ করা হয়েছিল এবং সিরাম-মুক্ত মাধ্যম বা সিরাম-মুক্ত মাধ্যম যেখানে LPS বা LMSC-এর বিভিন্ন ঘনত্ব রয়েছে তার সাথে প্রতিস্থাপিত হওয়ার আগে রাতারাতি কালচার করা হয়েছিল। 48 ঘন্টা চাষের পরে, কোষগুলিকে 0 075 শতাংশ নিরপেক্ষ লাল দ্রবণ দিয়ে প্রতিস্থাপিত করা হয়েছিল এবং 4 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রিতে ইনকিউব করা হয়েছিল। সুপারন্যাট্যান্টকে শোষণ করে ফেলে দিন, পিবিএস দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলুন এবং সেল লাইসিস দ্রবণ ব্যবহার করুন (গ্লাসিয়াল অ্যাসিটিক অ্যাসিড ইথানল 1:1) কোষগুলিকে 4 ডিগ্রিতে লাইজ করতে। সম্পূর্ণ লিসিসের পরে, প্রতিটি কূপের শোষণ পরিমাপ করুন (A540 এনএম)।

2.3 সেল সুপারনাট্যান্টে নো রিলিজ সনাক্তকরণ

RAW264। 7টি কোষ একটি 48-কূপ প্লেটে বীজ করা হয়েছিল এবং সিরাম-মুক্ত মাধ্যম বা সিরাম-মুক্ত মাধ্যম যেখানে LPS বা LMSC-এর বিভিন্ন ঘনত্ব রয়েছে তার সাথে প্রতিস্থাপিত হওয়ার আগে রাতারাতি কালচার করা হয়েছিল। ইনডাকশন কালচারের 24 ঘন্টা পরে, সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করুন এবং বিকারক কিটের নির্দেশাবলী অনুসারে প্রতিটি ভাল কোষের সুপারনাট্যান্টে NO বিষয়বস্তু পরিমাপ করুন।

ম্যাক্রোফেজ কার্যকারিতার জন্য 2.4 MTT অ্যাস

RAW264। 7টি কোষ একটি 96-কূপ প্লেটে ইনোকুলেশন করা হয়েছিল, এবং রাতারাতি চাষের পরে, সেগুলিকে সিরাম-মুক্ত মাধ্যম বা সিরাম-মুক্ত মাধ্যম দিয়ে প্রতিস্থাপিত করা হয়েছিল যার মধ্যে LPS বা LMSC-এর বিভিন্ন ঘনত্ব রয়েছে এবং 24 ঘন্টা ধরে সংষ্কৃত করা অব্যাহত ছিল। প্রতিটি ভাল কোষ প্রতিস্থাপন করুন 0 ইনকিউবেট 5 g · L-1 MTT দ্রবণ 37 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় 4 ঘন্টা, তারপর ডাইমিথাইল সালফক্সাইড দিয়ে MTT বিক্রিয়া পণ্য দ্রবীভূত করুন এবং তরঙ্গদৈর্ঘ্যে প্রতিটি কূপের শোষণ পরিমাপ করুন একটি এনজাইম-সংযুক্ত ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস ব্যবহার করে 570 এনএম।

2.5 Cistanche deserticola কম আণবিক চিনি সম্বন্ধীয় মাধ্যম প্রস্তুতি

রেফারেন্স পদ্ধতি [৮], ইপোক্সি-সক্রিয় অ্যাগারোজ রজন 0 5 গ্রাম ওজন করুন, এটিকে ডিওনাইজড জলে 40 মিনিটের জন্য দ্রবীভূত করুন, সেন্ট্রিফিউজ করুন এবং সুপারনাট্যান্টটিকে ফেলে দিন এবং জেলটি সম্পূর্ণরূপে তৈরি করতে প্রক্রিয়াটি তিনবার পুনরাবৃত্তি করুন। ফুলে গেছে (এর আয়তন প্রায় 1 মিলি), স্ট্যান্ডবাইয়ের জন্য। 0 নিন 5 মিলি ফোলা ইপোক্সি-অ্যাগারোজ জেলের সাথে 1 মিলি এলএমএসসি দ্রবণ (1 গ্রাম · এমএল −1) বা সমপরিমাণ দ্রাবক, এবং সারারাত 37 ডিগ্রিতে একটি ধ্রুবক তাপমাত্রায় শেকারে সেঁকুন। সুপারনাট্যান্ট বর্ণহীন না হওয়া পর্যন্ত ফাঁকা বা LMSC যুক্ত অ্যাগারোজ মিডিয়ামকে ডিওনাইজড জল দিয়ে কয়েকবার ধুয়ে ফেলুন, তারপরে 1 মিলি ইথানোলামাইন দ্রবণ (1 mol · L-1) যোগ করুন এবং এটিকে 37 ডিগ্রিতে একটি ধ্রুবক তাপমাত্রা নাড়ানোর টেবিলে সিল করুন। ২ দিন. প্রতিক্রিয়া সম্পূর্ণ হওয়ার পরে, ডাবল ডিস্টিলড ওয়াটার, NaCl Hac বাফার এবং NaCl Tris HCl বাফার দিয়ে 5 বার পরিষ্কার করুন এবং অবশেষে ব্যাকআপের জন্য 01 শতাংশ NP40 ইলুয়েন্ট দিয়ে দুবার 0 ওয়াশ ব্যবহার করুন।

2.6 লক্ষ্য গোষ্ঠীর সমৃদ্ধকরণ এবং সনাক্তকরণ

RAW264 তে 7 টি কোষ থেকে মোট প্রোটিন নির্যাস (0 যোগ করুন 50 থেকে 5 g · L-1 যথাক্রমে μL ফাঁকা মাধ্যম বা LMSC অ্যাফিনিটি মাধ্যম, একটি ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ এবং LMSC বাইন্ডিং গ্রুপ হিসাবে ; একটি প্রতিযোগিতামূলক গ্রুপ সেট আপ করুন যা একই সাথে LMSC সলিউশন এবং LMSC অ্যাফিনিটি মাধ্যম যোগ করে৷ প্রতিটি গ্রুপকে মিশ্রিত করার পরে, লক্ষ্য প্রোটিনের সাথে LMSC কে সম্পূর্ণরূপে আবদ্ধ করতে রাতারাতি 4 ডিগ্রীতে ইনকিউবেট করুন৷ প্রতিক্রিয়ার পরে, 0 ব্যবহার করুন অ্যাফিনিটি মিডিয়ামটি 01 দিয়ে 6 বার ধুয়ে ফেলুন৷ অ্যাফিনিটি মাধ্যম থেকে অবশিষ্ট মুক্ত প্রোটিন অপসারণের জন্য শতাংশ NP40 ইলুয়েন্ট। 2 × স্যাম্পল লোডিং বাফারের সমান আয়তনে ধোয়া অ্যাফিনিটি মিডিয়াম যোগ করুন, বাইন্ডিং প্রোটিনকে বিচ্ছিন্ন করার জন্য 8 মিনিটের জন্য 98 ডিগ্রিতে বিকৃত করুন। সুপারনাট্যান্ট চুষুন, SDS-PAGE জেল পরিচালনা করুন ইলেক্ট্রোফোরসিস, এবং তারপরে কিটের নির্দেশাবলী অনুসারে সিলভার স্টেনিং বিশ্লেষণ পরিচালনা করুন।

2.7 লক্ষ্য প্রোটিন গ্রুপ সনাক্ত করার জন্য LC-MS/MS পদ্ধতি

রেফারেন্স পদ্ধতি [৮] একটি দ্বি-মাত্রিক ন্যানো HPLC-LTQ-Orbitrap/MS টেন্ডেম লিনিয়ার আয়ন ট্র্যাপ ভর স্পেকট্রোমেট্রি (ন্যানো HPLC-LTQ-Orbitrap/MS) ব্যবহার করে নির্দিষ্ট বাঁধাই প্রোটিন সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। নির্দিষ্ট পদ্ধতিটি নিম্নরূপ: প্রথমত, টার্গেট পেপটাইড সেগমেন্টের মিশ্রণ পেতে জেলের মধ্যে ভিন্নভাবে প্রকাশিত প্রোটিন ব্যান্ডগুলিকে হাইড্রোলাইজ করতে ট্রিপসিন ব্যবহার করা হয়। পেপটাইড মিশ্রণটি 0 বাইশ μ এর অধীন ছিল একটি মাইক্রোপোরাস মেমব্রেন দিয়ে পরিস্রাবণের পরে, কৈশিক তরল ক্রোমাটোগ্রাফি কলামে 10 শতাংশ μ এল নমুনা সমাধান যোগ করুন। ক্রোমাটোগ্রাফিক অবস্থা: মোবাইল ফেজ 0 1 শতাংশ ফর্মিক অ্যাসিড জলীয় দ্রবণ (A) - অ্যাসিটোনিট্রিল (B), গ্রেডিয়েন্ট ইলুশন শর্তগুলি সারণী 1 এ দেখানো হয়েছে। ভর বর্ণালী অবস্থা: বৈদ্যুতিক স্প্রে ভোল্টেজ হল 1 8 kV, ধনাত্মক আয়ন মোড ডেটা সংগ্রহ, সম্পূর্ণ স্ক্যান পরিসীমা m/z 350-2 000 এ সেট করা হয়েছে; 35 V এ সেকেন্ডারি সংঘর্ষ শক্তি সেট সহ 15টি শক্তিশালী শিখরে MS/MS স্ক্যানিং সম্পাদন করুন। অবশেষে, প্রাপ্ত পেপটাইড সেগমেন্ট ডেটা অনুসন্ধান এবং মেলাতে SEQUEST অনুসন্ধান সফ্টওয়্যার ব্যবহার করুন।

সারণী 1 ন্যানো-এইচপিএলসি বিশ্লেষণের গ্রেডিয়েন্ট প্রোফাইল

দ্রষ্টব্য: প্রবাহের হার সব 300 nL · মিনিট-1।

2.8 অ্যাকশন টার্গেট গ্রুপ পাথওয়ে এবং কার্যকরী বিশ্লেষণ

সাইটোস্কেপ 3-এ চিহ্নিত লক্ষ্য প্রোটিন আমদানি করুন 5.1 সফ্টওয়্যারে, ক্লুগো প্লাগইনটি কেইজিজি, রিঅ্যাক্টোম পাথওয়েস এবং উইকি পাথওয়ে বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল এবং প্রজাতিটিকে পি দিয়ে ইঁদুর হিসাবে সেট করা হয়েছিল।<0 05 as the significance threshold, and the rest use default parameters.

2.9 পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ

সমস্ত পরীক্ষামূলক তথ্য x ক্ষেত্রে ± s এ প্রকাশ করা হয়। গ্রাফপ্যাড প্রিজম-6 02 ব্যবহার করে পরিসংখ্যানগত সফ্টওয়্যারটি পি সহ বৈচিত্র্যের একমুখী বিশ্লেষণের জন্য (ANOVA) ব্যবহার করা হয়েছিল<0 01 having a very significant difference.

3। ফলাফল এবং আলোচনা

3.1 Cistanche deserticola থেকে কম আণবিক চিনি RAW264 কে প্রভাবিত করে 7- সেল ফ্যাগোসাইটিক কার্যকলাপের প্রভাব

Cistanche deserticola-এ ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশনের সক্রিয় উপাদানগুলির উপর আমাদের গবেষণা গোষ্ঠীর আরেকটি গবেষণায়, LMSC ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশন সহ এক ধরনের উপাদান হতে পারে।.

Cistanche deserticola উপর পরীক্ষামূলক অধ্যয়ন

এই পরীক্ষাটি প্রথম RAW264 নির্ধারণের জন্য নিরপেক্ষ লাল পদ্ধতি ব্যবহার করেছিল। RAW264-এ LMSC-এর প্রভাব 7 কোষের ফ্যাগোসাইটিক কার্যকলাপের প্রভাব তদন্ত করতে 7টি মাউস পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজের ইন ভিট্রো কালচার সিস্টেম LMSC-এর বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে উদ্দীপিত হয়েছিল। ফাঁকা কন্ট্রোল গ্রুপের সাথে তুলনা করে, ইতিবাচক কন্ট্রোল ড্রাগ এলপিএস 48 ঘন্টার জন্য কোষকে উদ্দীপিত করে সেলুলার ফ্যাগোসাইটিক কার্যকলাপকে উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত করে (P<0 01); LMSC at 0 Each administration group of 25-2 g · L-1 significantly increased RAW264 The phagocytic activity of 7 cells (P<0 01), and exhibit dose-dependent characteristics. The above results suggest that LMSC may have activated RAW264 The role of 7 cells is shown in Figure 1.

ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর সাথে তুলনা করে, 1) পি<0 01 (same as Figure 2).

চিত্র 1 RAW264-এর ফ্যাগোসাইটিক কার্যকলাপের উপর Cistanche deserticola থেকে কম আণবিক ওজনের স্যাকারাইডের প্রভাব। 7 কোষ

3.2 Cistanche deserticola থেকে কম আণবিক চিনি RAW264 কে প্রভাবিত করে

NO হল একটি গুরুত্বপূর্ণ সাইটোকাইন যার শরীরে প্রতিরোধ ক্ষমতা নিয়ন্ত্রণকারী প্রভাব রয়েছে [9], ব্যাপকভাবে RAW264 7-কোষ সক্রিয়করণ প্রতিক্রিয়া নিয়ন্ত্রণে জড়িত বলে রিপোর্ট করা হয়েছে। RAW264-এ LMSC-এর প্রভাবের আরও তদন্ত করার জন্য 7 টি কোষের সক্রিয়করণ প্রভাব নির্ধারণ করা হয়েছিল, এবং LMSC উদ্দীপনার পরে কোষের সুপারনাট্যান্টে NO-এর বিষয়বস্তু পরিমাপ করা হয়েছিল। ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশন পজিটিভ ড্রাগ সহ এলপিএস গ্রুপে NO রিলিজ ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল (পি<0. 05) 01), similar to it, 0 RAW264 in the LMSC administration group with 3 doses of 5, 1, 2 g · L-1 The NO release of 7 cells was significantly higher than that of the blank control group (P<0. 05) 01), and it is dose-dependent, as shown in Figure 2. The above results indicate that LMSC can promote RAW264 The effect of 7 cells releasing NO confirms its macrophage activation effect.

Fig. 2 RAW264 থেকে NO রিলিজের উপর Cistanche deserticola থেকে কম আণবিক ওজনের স্যাকারাইডের প্রভাব। 7 কোষ

3.3 Cistanche deserticola থেকে কম আণবিক চিনি RAW264 কে প্রভাবিত করে 7-কোষের কার্যক্ষমতার প্রভাব

সাইটোটক্সিসিটি একটি গুরুত্বপূর্ণ কারণ যা নতুন ওষুধের বিকাশকে সীমাবদ্ধ করে এবং তাদের কার্যকারিতা প্রভাবিত করে। এই পরীক্ষায় ব্যবহৃত LMSC এর ডোজ সম্ভাব্য সাইটোটক্সিসিটি আছে কিনা তা তদন্ত করতে, MTT পদ্ধতি LMSC প্রশাসন 7 সেল কার্যকারিতা পরে RAW264 সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। LMSC এ 0 25-2 g · L-1 হস্তক্ষেপ RAW264 7 কোষের 24 ঘন্টা পরে, কোষের কার্যক্ষমতার উপর কোন উল্লেখযোগ্য প্রভাব ছিল না এবং উপরের ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে 0 25-2 g · L{{8 }} LMSC বনাম RAW264 7-এর কোনো সাইটোটক্সিসিটি নেই, যেমনটি চিত্র 3-এ দেখানো হয়েছে।

চিত্র 3 RAW264-এ Cistanche deserticola থেকে কম আণবিক ওজনের স্যাকারাইডের প্রভাব। 7 কোষের কার্যক্ষমতা

3. 4 সিস্তানচে মরুভূমিতে কম আণবিক ওজনের চিনির ম্যাক্রোফেজ সক্রিয়করণের লক্ষ্য গোষ্ঠীর সমৃদ্ধকরণ এবং সনাক্তকরণ

Epoxide-activated agarose জেল হল একটি কঠিন ফেজ ক্যারিয়ার যা ব্যাপকভাবে স্যাকারাইড, প্রোটিন এবং হাইড্রোক্সিল বা অ্যামিনো গ্রুপ ধারণকারী অন্যান্য অণুগুলিকে জোড়া দেওয়ার জন্য ব্যবহৃত হয়। LMSC প্রধানত হাইড্রক্সিল সমৃদ্ধ ফ্রুক্টোজ, ম্যানিটল এবং অন্যান্য উপাদানের সমন্বয়ে গঠিত। এই সমীক্ষায়, হাইড্রক্সিলটি ইপোক্সি সক্রিয় গ্রুপের সাথে প্রতিক্রিয়া করতে পারে যাতে সিস্টানচে ডেসার্টিকোলার কম আণবিক চিনিকে ইপোক্সি-সক্রিয় অ্যাগারোজ জেল মাইক্রোস্ফিয়ারের পৃষ্ঠে বন্ধন করতে পারে যাতে LMSC অ্যাফিনিটি মাধ্যম তৈরি করা যায়, যেমন চিত্র 4A তে দেখানো হয়েছে। মলিকুলার অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি প্রযুক্তি ব্যবহার করে, LMSC অ্যাফিনিটি মাধ্যমটি RAW264 ইনকিউবেট 7 টি কোষের মোট প্রোটিন নির্যাস সরাসরি লক্ষ্য প্রোটিন গ্রুপকে ক্যাপচারের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল। সিলভার স্টেনিং টার্গেট গ্রুপে সঞ্চালিত হয়েছিল, যেমন চিত্র 4B-তে দেখানো হয়েছে। LMSC অ্যাফিনিটি মিডিয়াম বাইন্ডিং গ্রুপের প্রোটিন ব্যান্ডগুলি অসংলগ্ন LMSC ফাঁকা মাঝারি গোষ্ঠীর তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল, যখন LMSC প্রতিযোগিতামূলক গোষ্ঠী লক্ষ্য প্রোটিনের সাথে অত্যধিক ফ্রি LMSC প্রতিযোগিতামূলক বাঁধার কারণে অ্যাফিনিটি মিডিয়াম ক্যাপচার করা লক্ষ্যগুলির সংখ্যা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে। পরবর্তীকালে, প্রতিটি প্রোটিন ব্যান্ড শনাক্ত করার জন্য HPLC MS/MS পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং Eef2 এর মতো মোট 24 টার্গেট প্রোটিন পাওয়া গিয়েছিল, যা ইঙ্গিত করে যে Cistanche deserticola থেকে কম আণবিক চিনি এই লক্ষ্য প্রোটিনের সম্মিলিত ক্রিয়াকলাপের মাধ্যমে ম্যাক্রোফেজ সক্রিয়করণের কারণ হতে পারে।

3. 5 সিস্তানচে মরুভূমিতে কম আণবিক চিনির ম্যাক্রোফেজগুলির সক্রিয়করণ লক্ষ্য গোষ্ঠীর সাথে সম্পর্কিত ক্রিয়া পদ্ধতির বিশ্লেষণ

Cistanche deserticola-এর কম আণবিক চিনির টার্গেট প্রোটিন তদন্ত করতে, যার ফলে RAW264 ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশনের মেকানিজম LMSC টার্গেট প্রোটিন গ্রুপে জড়িত জৈবিক পাথওয়ের তদন্তের জন্য KEGG, REACTOME এবং উইকি সিগন্যালিং পাথওয়ে ডাটাবেস ব্যবহার করে এই গবেষণায় বিশ্লেষণ করা হয়েছে। সিগন্যাল পাথওয়ে সমৃদ্ধির বিশ্লেষণের ফলাফল চিত্র 5 এবং সারণি 2-এ দেখানো হয়েছে। LMSC ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশন টার্গেট প্রোটিন প্রধানত 10টি ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশন-সম্পর্কিত সিগন্যাল পাথওয়েতে অংশগ্রহণ করে, যাকে নিম্নলিখিত 4টি বিভাগে সংক্ষিপ্ত করা যেতে পারে: Fc রিসেপ্টর নির্ভর ফ্যাগোসাইটোসিস, TNF-NF। - κ B সংকেত পথ, গ্লাইকোলাইসিস/গ্লুকোনোজেনেসিস, সাইট্রিক অ্যাসিড (TCA) চক্র, এবং শ্বাসযন্ত্রের ইলেক্ট্রন পরিবহন।

4। আলোচনা

আধুনিক গবেষণা রিপোর্ট করে যে ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধ এবং প্রাকৃতিক ওষুধের জৈবিক ক্রিয়াকলাপের একটি বিস্তৃত পরিসর রয়েছে, কিন্তু তাদের জটিল রাসায়নিক গঠনের কারণে, ঐতিহ্যগত চীনা ওষুধ এবং প্রাকৃতিক ওষুধের জটিল উপাদান সিস্টেমগুলির ক্রিয়াকলাপের প্রক্রিয়া ব্যাখ্যা করার ক্ষেত্রে এখনও চ্যালেঞ্জ রয়েছে। মলিকুলার অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফির ছোট অণু লক্ষ্য প্রোটিন ক্যাপচার প্রযুক্তির উপর ভিত্তি করে, এই গবেষণায় রাসায়নিক সংমিশ্রণ সাধারণতার সাথে মিলিত হয় যে Cistanche deserticola (LMSC) এর আণবিক চিনির প্রধান উপাদানগুলির সকলেই হাইড্রক্সিল গ্রুপ রয়েছে এবং LMSC বন্ডেড epoxy সক্রিয় মাইক্রোসফেরজেল তৈরি করেছে। অ্যাফিনিটি মাধ্যম হিসাবে, ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশন সহ LMSC টার্গেট প্রোটিন গ্রুপগুলি সনাক্ত করতে এবং টার্গেট গ্রুপের সাথে সম্পর্কিত সিগন্যাল ট্রান্সডাকশন পথগুলি বিশ্লেষণ করতে, উপরন্তু, LMSC ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশনের প্রক্রিয়া প্রকাশ করা হয়েছিল।

Cistanche এর প্রভাব - অনাক্রম্যতা উন্নত করুন

ম্যাক্রোফেজগুলি শরীরের এক ধরণের গুরুত্বপূর্ণ ইমিউন প্রতিক্রিয়া কোষ যা দানাদার অ্যান্টিজেনগুলি ফ্যাগোসাইটোজ করতে পারে। বহিরাগত উদ্দীপনা দ্বারা সৃষ্ট ম্যাক্রোফেজগুলির সক্রিয়করণ প্রধানত ফ্যাগোসাইটিক ফাংশন বৃদ্ধি এবং সংকেত পথের একটি সিরিজ দ্বারা সৃষ্ট NO এবং অন্যান্য কারণের মুক্তির দ্বারা উদ্ভাসিত হয়। LMSC ডোজ-নির্ভর উন্নতি RAW264 7 কোষের ফ্যাগোসাইটিক কার্যকলাপ এবং NO রিলিজের একটি উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি নির্দেশ করে যে LMSC-এর একটি ম্যাক্রোফেজ সক্রিয়করণ প্রভাব রয়েছে। বায়োইনফরমেটিক্স ব্যবহার করে আণবিক সম্বন্ধীয় ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা ক্যাপচার করা এলএমএসসি ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশন লক্ষ্যগুলির সংকেত পথগুলির সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণ প্রস্তাব করে যে LMSC রিসেপ্টর নির্ভর ফ্যাগোসাইটোসিস, TNF- NF- κ The B সিগন্যালিং পাথওয়ে, গ্লুকোনসিজিসিএ/এসিড, গ্লুকোসিজিসিএ/এসিড, এবং এফসি-কে নিয়ন্ত্রণ করে। শ্বাসযন্ত্রের ইলেক্ট্রন পরিবহন ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশন ভূমিকা পালন করে।

A. অ্যাফিনিটি মিডিয়ামের মাইক্রোস্কোপিক চরিত্রায়ন (বার=25 μm); B. সমৃদ্ধ লক্ষ্যের সিলভার স্টেইনড জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস।

চিত্র 4 সিস্তানচে মরুভূমি থেকে কম আণবিক ওজন স্যাকারাইডের লক্ষ্য সনাক্তকরণ

চিত্র 5 সিস্তানচে মরুভূমি থেকে কম আণবিক ওজন স্যাকারাইডের লক্ষ্যগুলির জন্য পথ সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণ

এফসি রিসেপ্টর হল কোষের পৃষ্ঠের রিসেপ্টর এবং ম্যাক্রোফেজ প্যাটার্ন স্বীকৃতি রিসেপ্টরগুলির মধ্যে একটি [১১]। এগুলি কোষের পৃষ্ঠে অবস্থিত এবং বিশেষভাবে বহিরাগত কণাগুলিকে চিনতে পারে, যার ফলে সেগুলি কোষের পৃষ্ঠের সাথে আবদ্ধ হয়। Fc রিসেপ্টর-মিডিয়াটেড ফ্যাগোসাইটোসিস সিগন্যাল ট্রান্সডাকশন ডাউনস্ট্রিম অ্যাক্টিন পলিমারাইজেশন এবং ফ্যাগোসাইট গঠনের কারণ হতে পারে [১১]। LMSC উল্লেখযোগ্যভাবে RAW264 7 কোষের ফ্যাগোসাইটিক কার্যকলাপের উন্নতি করে, যা বিভিন্ন Fcs-এর বাঁধনের সাথে সম্পর্কিত হতে পারে যেমন Hsp90 রিসেপ্টর সিগন্যালিং সম্পর্কিত প্রোটিন Fc রিসেপ্টর নির্ভর ফ্যাগোসাইটোসিস নিয়ন্ত্রণ করে। NF- κ বি সিগন্যালিং পাথওয়ে ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশনের জন্য একটি মূল সংকেত পথ হিসাবে বিবেচিত হয় [12]। NF- κ B হল নিউক্লিয়াসের একটি গুরুত্বপূর্ণ ট্রান্সক্রিপশন নিয়ন্ত্রক ফ্যাক্টর, NF- κ B সংকেত পথের সক্রিয়করণ সাইটোপ্লাজমে NF সৃষ্টি করতে পারে- κ B সক্রিয় এবং নিউক্লিয়াসে স্থানান্তরিত হয়, যার ফলে বিভিন্ন সাইটোকাইনের জিনের প্রকাশের মধ্যস্থতা হয়, এবং NO। মধ্যস্থতাকারী LMSC উদ্দীপনা RAW264 7 কোষগুলিকে প্রচুর পরিমাণে NO মুক্ত করতে পারে, যা বিভিন্ন কারণের সাথে আবদ্ধ হয়ে TNF এর সাথে সম্পর্কিত হতে পারে যেমন Eef2- NF- κ B সিগন্যালিং পাথওয়ে এবং অন্যান্য সম্পর্কিত প্রোটিনগুলি NF সক্রিয় করে - κ বি সিগন্যালিং পাথওয়ে এবং এর সাথে যুক্ত ইউক্যারিওটিক অনুবাদ সূচনা এবং এক্সটেনশন প্রক্রিয়াগুলি বাস্তবায়িত হয়। এছাড়াও, LMSC-সম্পর্কিত লক্ষ্যগুলিতে দুটি কার্বোহাইড্রেট বিপাকীয় পথ জড়িত: গ্লাইকোলাইসিস/গ্লুকোনোজেনেসিস, সাইট্রিক অ্যাসিড (টিসিএ) চক্র এবং শ্বাসযন্ত্রের ইলেকট্রন পরিবহন। এটা অনুমান করা হয় যে LMSC-তে বিভিন্ন কম আণবিক শর্করা রয়েছে যেমন ফ্রুক্টোজ এবং ম্যানিটল, যা RAW264 7 কোষকে শক্তি সরবরাহ করতে পারে এবং গ্লুকোজ বিপাকের সাথে সম্পর্কিত Aldoa এর মতো প্রোটিনের সাথে আবদ্ধ হতে পারে, যার ফলে গ্লুকোজ বিপাক সংক্রান্ত পথগুলি নিয়ন্ত্রণ করে।

সংক্ষেপে, এই গবেষণায় আণবিক সম্বন্ধীয় ক্রোমাটোগ্রাফি-সম্পর্কিত লক্ষ্য প্রোটিন স্বীকৃতি প্রযুক্তি ব্যবহার করে LMSC ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশনের জন্য 24টি ভিন্ন কার্যকরী লক্ষ্য প্রোটিন চিহ্নিত করা হয়েছে; লক্ষ্য প্রোটিন-সম্পর্কিত সিগন্যালিং পাথওয়ের সমৃদ্ধি বিশ্লেষণ পরামর্শ দেয় যে LMSC Fc রিসেপ্টর নির্ভর ফ্যাগোসাইটোসিস, TNF- NF- κ B সিগন্যালিং পাথওয়ে এবং গ্লুকোজ বিপাক প্রক্রিয়া শেষ পর্যন্ত RAW264 7 প্রয়োগ করে। ম্যাক্রোফেজ সক্রিয়করণ। এই অধ্যয়নটি Cistanche deserticola-এ সক্রিয় উপাদান এবং প্রতিরোধ ক্ষমতা নিয়ন্ত্রণের সম্পর্কিত প্রক্রিয়া প্রকাশের জন্য তাত্ত্বিক সমর্থন প্রদান করে এবং প্রাকৃতিক ওষুধের জটিল সক্রিয় উপাদানগুলির লক্ষ্য স্বীকৃতি এবং প্রক্রিয়া গবেষণার জন্য ধারণা প্রদান করে।

সারণি 2 LMSC এর লক্ষ্যগুলির জন্য পাথওয়ে সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণ

[রেফারেন্স]

［1］ চাইনিজ ফার্মাকোপিয়া পার্ট 1 [এস]। 2010:126

［2］ জু ওয়েনহাও, কিউ শেংজিয়াং, ঝাও জিহং, এট আল সিস্তানচে মরুভূমির রাসায়নিক উপাদানগুলির উপর একটি স্টাডি ［ জে］। চাইনিজ হারবাল মেডিসিন, 1994, 25 (10): 509

［3］ Wu XM, Gao XM, Tsim KW, et al. Cistanche deserticola-এর ডালপালা থেকে বিচ্ছিন্ন একটি অ্যারাবিনোগাল্যাক্টান কালচারড লিম্ফোসাইটের বিস্তারকে প্ররোচিত করে৷ Int J Biol Macromol, 2005,37 ( 5): 278.

［4］ Wang Xiangyan, Qi Yun, Cai Runlan, et al Macrophage Cistanche deserticola থেকে পলিস্যাকারাইডের সক্রিয়করণ ［ J］। চাইনিজ ফার্মাকোলজিক্যাল বুলেটিন, 2009, 25 (6): 787

［5］ গাও ইউনজিয়া, জিয়াং ইয়ং, দাই ফাং, এট আল একটি অধ্যয়ন অন দ্য ফার্মাকোডাইনামিক পদার্থের সিস্তানচে মরুভূমির পুষ্টিকর অন্ত্র এবং রিলিভিং স্টুল ［ জে ］। আধুনিক চাইনিজ মেডিসিন, 2015, 17 (4): 307

6］ লিউ ওয়াংকাই, ঝু জিয়াওয়েন অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি প্রযুক্তিতে গবেষণার অগ্রগতি [জে]। সাংহাই কেমিক্যাল ইন্ডাস্ট্রি, 2007, 32 (4): 27

7］ হং মিনহান অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি। রাসায়নিক বিশ্ব, 1981, 9:281

8］ Liao LX, Song XM, Wang LC, et al. IMPDH2-এর উচ্চ নির্বাচনী বাধা অ্যান্টিনিউরোইনফ্লেমেশন থেরাপির ভিত্তি প্রদান করে। Proc Natl Acad Sci USA,2017,114 ( 29): E5986）

［9］ ওয়াং জিং, ঝাং চুন্দান, ইয়াং লিমিন, এট আল মাউস ম্যাক্রোফেজগুলিতে প্লুরোটাস ফেরুলা থেকে এক্সট্রা সেলুলার পলিস্যাকারাইডের সক্রিয়করণ প্রভাব [জে]। খাদ্য শিল্প প্রযুক্তি, 2016, 37 (10): 356

［10］ ঝাং পেঙ্গিউ, রুয়ান ইংক্সিন, ওয়াং ইয়িনান, এট আল অ্যাক্টিভিন এ মাউস পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজ ［ জে ］ এর ফ্যাগোসাইটিক কার্যকলাপের প্রচার করে। একাডেমি অফ মিলিটারি মেডিকেল সায়েন্সের জার্নাল, 2009, 33 (4): 330

［11］ Xie Zhijian, Xiong Xiaodong, Zuo Yun Fc সিগন্যাল ট্রান্সডাকশন মেকানিজম এর R মধ্যস্থতাকারী ম্যাক্রোফেজ ফ্যাগোসাইটোসিস ［ J］। ফরেন মেডিসিন ইমিউনোলজি, 2002, 25 (1): 5

［12］ ইউয়ান জিয়াওলিন, ঝাং চুনলেই, লি দিয়ানজুন ম্যাক্রোফেজ এবং তাদের সিগন্যালিং প্রক্রিয়া ［ জে ］ সক্রিয়করণের উপর গবেষণার অগ্রগতি। ইমিউনোলজির আন্তর্জাতিক জার্নাল, 2007, 30 (5): 333