Sidt2 হল অটোফ্যাজি-লাইসোসোমাল ডিগ্রেডেশন পাথওয়ের একটি মূল প্রোটিন এবং এটি কিডনির গঠন ও পরিস্রাবণ ফাংশন রক্ষণাবেক্ষণের জন্য অপরিহার্য Ⅱ

আলোচনা

প্রচুর সংখ্যক গবেষণায় দেখা গেছে যে এলএমপিগুলি কিডনি ফাংশন বা স্ট্রাকচারাল হোমিওস্টেসিস [21-25] এর সাথে জড়িত। আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে LMP Sidt2 প্রদাহজনক সংকেত পথকে প্রভাবিত করে এবং মাউসের গ্লোমেরুলার মেসাঞ্জিয়াল কোষের ক্ষতি করে [২৮]। এই গবেষণায়, প্রথমবারের মতো, আমরা LMP Sidt2 দ্বারা সৃষ্ট মাউস কিডনির গঠন এবং কার্যকারিতার উপর প্রভাবগুলি তদন্ত করেছি। এটি পাওয়া গেছে যে Sidt2 মুছে ফেলার ফলে মাউসের কিডনি পায়ের প্রক্রিয়াগুলির সংমিশ্রণ ঘটে, বেসমেন্ট মেমব্রেন ঘন হয়ে যায়, রেনাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষের শোথ, মাইক্রোভিলির ক্ষতি হয় এবং 24 ঘন্টায় প্রোটিনুরিয়া বৃদ্ধি পায়, যা নির্দেশ করে যে Sidt2 এর ক্ষতি পরিস্রাবণ ফাংশনকে বাধাগ্রস্ত করে। এবং মাউসের কিডনির গঠন, কিন্তু এর বিস্তারিত প্রক্রিয়া স্পষ্ট নয়।

কারণ এলএমপিগুলি লাইসোসোমের গুরুত্বপূর্ণ কার্যকরী একক [১৭] এবংলাইসোসোমাল কর্মহীনতাঅনেক দীর্ঘস্থায়ী কিডনি রোগের (CDKs) (refs. [4, 29]) সাধারণ প্যাথোজেনিক কারণগুলির মধ্যে একটি, আমরা Sidt2 মুছে ফেলার পরে লাইসোসোমের উপর সম্পর্কিত তদন্ত চালিয়েছি এবং দেখেছি যে অ্যাসিডিক লাইসোসোমের সংখ্যা হ্রাস পেয়েছে এবং এর pH লাইসোসোম ভিট্রোতে বৃদ্ধি পায়। যাইহোক, ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি বিশ্লেষণের মাধ্যমে অটোফ্যাগোসোমের সাথে আবদ্ধ প্রাথমিক লাইসোসোমের সংখ্যা এবং মোট লাইসোসোমের কোন সুস্পষ্ট পরিবর্তন হয়নি। ক্যাথেপসিনগুলি লাইসোসোমে প্রোটিওলাইটিক এনজাইমের বৃহত্তম গ্রুপকে প্রতিনিধিত্ব করে [30], যার মধ্যে CTSB হল সবচেয়ে প্রচুর লাইসোসোমাল প্রোটিজগুলির মধ্যে একটি [31]।

যেহেতু ক্যাথেপসিনগুলি পরিপক্কতার (অ্যাক্টিভেশন) জন্য অম্লীয়করণ করা প্রয়োজন, তাই pH-তে পরিবর্তন অবশেষে প্রোটিনের অবক্ষয় একটি উল্লেখযোগ্য হ্রাসের দিকে নিয়ে যাবে [32]। ভিভো এবং ইন ভিট্রো স্তরে লাইসোসোমাল অ্যাসিড হাইড্রোলেজের কার্যকলাপ এবং বিষয়বস্তু হ্রাস পেয়েছে, আরও নিশ্চিত করে যে Sidt2 লাইসোসোমে প্রোটিজগুলির পরিপক্কতাকে প্রভাবিত করে লাইসোসোমাল ফাংশনকে বাধা দেয়।

কিডনির জন্য সিস্টানচের ভেষজ ফর্মুলেশন পেতে এখানে ক্লিক করুন

এদিকে, লাইসোসোম অটোফ্যাজির শেষে সেলুলার মেটাবোলাইট এবং বর্জ্য পণ্যগুলিকে অবনমিত করার জন্য একটি পুনর্ব্যবহার কেন্দ্র হিসাবে কাজ করে [1]। স্বাভাবিক লাইসোসোমাল অবক্ষয় ফাংশন অটোফ্যাজি, কোষের হোমিওস্ট্যাসিস বজায় রাখার জন্য এবং কোষগুলিকে শারীরবৃত্তীয় অবস্থায় টিকে থাকতে সক্ষম করার জন্য প্রয়োজনীয় [33-36]। অনেক কিডনি রোগের ঘটনা এবং বিকাশ অস্বাভাবিক অটোফ্যাজি [37-39] এর সাথে সম্পর্কিত বলে প্রমাণিত হয়েছে। সাম্প্রতিক গবেষণায় দেখা গেছে যে Sidt2 হল একটি লাইসোসোমাল ডিএনএ/আরএনএ পরিবহনকারী। RNautophagy এবং DNautophagy (RDA) এর মাধ্যমে অপ্রচলিত ধরনের অটোফ্যাজি নির্বাচনী RNA/DNA অবক্ষয়ের জন্য গুরুত্বপূর্ণ [40]। আমরা পূর্বে দেখেছি যে Sidt2 মুছে ফেলা অটোফাগোসোম এবং লাইসোসোমের ফিউশনকে ক্ষতিগ্রস্ত করে, যার ফলে ক্ষতিগ্রস্ত মাইটোকন্ড্রিয়া অবনমিত হতে পারে না, যার ফলে কঙ্কালের পেশীর গঠন এবং কার্যকারিতা ক্ষতিগ্রস্ত হয় [৪১]। অতএব, এই গবেষণায়, আমরা অটোফ্যাজি অন্বেষণ করেছি যখন Sidt2 মুছে ফেলার কারণে কিডনির ক্ষতি হয়েছিল। আমরা লক্ষ্য করেছি যে ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপির মাধ্যমে সিডট 2-/- ইঁদুরের কিডনিতে অটোফাগোলাইসোসোমগুলি জমা হয়েছিল। অটোফ্যাজি একটি গতিশীল প্রক্রিয়া, যার মধ্যে অটোফ্যাগোসোম গঠন এবং অটোফ্যাগোলাইসোসোমগুলির গঠন এবং অবক্ষয় অন্তর্ভুক্ত। প্রারম্ভিক অটোফাগোসোম গঠন Atg জিন দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয়, এবং LC3-II গঠন অটোফ্যাগোসোম গঠনের একটি চিহ্ন [42]। আমরা দেখেছি যে অটোফ্যাজি-সম্পর্কিত প্রোটিন Atg এবং LC{{14}II উভয়ের অভিব্যক্তি Sidt2 মুছে ফেলার পরে বৃদ্ধি পেয়েছে, যা নির্দেশ করে যে অটোফ্যাজি কার্যকলাপ উন্নত হতে পারে। যাইহোক, LC3-II এর জমে অটোফ্যাজির শেষে অটোফ্যাগোলাইসোসোম পথের বাধার কারণেও হতে পারে

রেনাল অটোফ্যাজি অবস্থার উপর Sidt2 এর প্রভাব আরও অন্বেষণ করতে, P62 কার্গো প্রোটিনের অভিব্যক্তি এবং গঠন পরিমাপ করা হয়েছিল, এবং অটোফ্যাজি (CQ এবং RAPA) লক্ষ্য করে এমন ওষুধের প্রভাবগুলিও তদন্ত করা হয়েছিল। P62 কে LC3B এর সাথে একত্রিত করতে হবে এবং তারপর লাইসোসোমে অবনমিত হতে হবে। P62 প্রোটিনের মাত্রা বৃদ্ধি প্রায়ই অটোফ্যাজি ফ্লাক্সের একটি বাধাকে প্রতিনিধিত্ব করে [43]। P62 উৎপাদন বৃদ্ধির কারণ নির্মূল করার জন্য, আমরা P62-এর mRNA স্তর পরিমাপ করেছি এবং দেখতে পেয়েছি যে P62-এর উৎপাদন হ্রাস পেয়েছে, তাই LC3-II-এর সঞ্চয় সম্ভবত বিঘ্নিত অবক্ষয়ের কারণে হয়েছে। অটোফ্যাজি প্রক্রিয়াটি আরও অন্বেষণ করতে, আমরা একটি ক্লোরোকুইন ফ্লিপ পরীক্ষা পরিচালনা করেছি। ক্লোরোকুইন লাইসোসোমের অম্লীয় পরিবেশকে নিরপেক্ষ করতে পারে এবং পরবর্তীকালে, লাইসোসোমের কার্যকারিতা ধ্বংস করতে পারে এবং অটোফ্যাজিকে বাধা দেয় [৪৪]। CQ চিকিত্সার আগে এবং পরে LC3-II প্রোটিনের বৃদ্ধি লাইসোসোম দ্বারা ক্ষয়প্রাপ্ত অটোফাগোসোমের সংখ্যা প্রতিফলিত করে, যা অটোফ্যাজির কার্যকলাপকে প্রতিফলিত করতে পারে। একই CQ ফ্লিপ পরীক্ষাটি অটোফাগোলাইসোসোম পথের মাধ্যমে P62 অবক্ষয়ের পরিমাণ নির্ধারণ করতেও ব্যবহার করা যেতে পারে। আমাদের ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, Sidt2 মুছে ফেলার ফলে অটোফ্যাজির অবরুদ্ধ প্রান্তের কারণে অটোফ্যাজি প্রবাহ হ্রাস পেয়েছে। একই সময়ে, RAPA পরীক্ষায়, LC3-II এবং P62 প্রোটিনের মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে Sidt2−/− গ্রুপে বৃদ্ধি পেয়েছে, যা আরও সমর্থন করতে পারে যে Sidt2 এর অভাব অটোফ্যাজির শেষ পর্যায়ে ক্ষতিগ্রস্থ করে।

অটোফ্যাজির শেষ পর্যায়ে অটোফ্যাগোলাইসোসোমগুলির গঠন এবং অবক্ষয় অন্তর্ভুক্ত। আমরা অটোফাগোসোম এবং লাইসোসোমের ফিউশন সনাক্ত করতে LAMP1 এবং LC3B ইমিউনোফ্লোরেসেন্স সহ-স্থানীয়করণ পরীক্ষাগুলি ব্যবহার করেছি [45, 46], এবং ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে Sidt2 মুছে ফেলার পরে অটোফাগোসোম এবং লাইসোসোমের ফিউশন ব্লক করা হয়েছিল। Ad-mCherry-GFP-LC3B ডাবল লেবেলিং পরীক্ষা অটোফাগোলাইসোসোমগুলির গঠন এবং অবক্ষয় সনাক্ত করে [27]। এটি আরও নিশ্চিত করেছে যে Sidt2 মুছে ফেলার পরে কিডনির গঠন এবং কার্যকারিতার ক্ষতির প্রধান কারণ অটোফ্যাগোলাইসোসোমগুলির গঠন এবং অবক্ষয়।

উপরের ফলাফলগুলি থেকে, আমরা উপসংহারে আসতে পারি যে Sidt2 এর অনুপস্থিতি অ্যাসিডিক লাইসোসোমের সংখ্যা হ্রাস করে এবং লাইসোসোমের অ্যাসিডিফিকেশন কর্মহীনতা হাইড্রোলাইজড এনজাইমের পরিপক্কতাকে প্রভাবিত করে। এটি অটোফ্যাগোসোম এবং লাইসোসোম ফিউশন ডিসঅর্ডার ছাড়াও অটোফ্যাজি-লাইসোসোম অবক্ষয় পথের ক্ষতির সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ কারণ হতে পারে। এদিকে, প্রতিবন্ধী অটোফ্যাজি প্রক্রিয়াটি Sidt2 মুছে ফেলার পরে ক্ষতিগ্রস্ত রেনাল কাঠামো এবং ফিল্টার ফাংশনের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত হতে পারে (চিত্র 8)। আমাদের অধ্যয়ন কিডনির গঠন এবং কার্যকারিতার উপর Sidt2 এর প্রভাবের কিছু অংশকে সম্বোধন করে, কিন্তু মজার বিষয় হল মূল অটোফ্যাজি প্রোটিন জমা হওয়া এবং Sidt2 মুছে ফেলার ফলে কিডনির গঠন ও কার্যকারিতা নষ্ট হওয়া মূল অটোফ্যাজি প্রোটিনের পরিবর্তনের অনুরূপ এবং ডায়াবেটিক নেফ্রোপ্যাথিতে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রোটিনুরিয়া বৃদ্ধি পেয়েছে [৩৭, ৪৭]। লাইসোসোম ফাংশন মেরামত ডায়াবেটিক নেফ্রোপ্যাথির চিকিত্সার জন্য একটি সম্ভাব্য নতুন কৌশল হতে পারে [37]। আমরা আশা করি যে Sidt2 ভবিষ্যতে কিডনি রোগের প্যাথোজেনেসিস এবং চিকিত্সা অন্বেষণ করার একটি উপায় প্রদান করবে।

ইঁদুরের প্রস্রাব প্রোটিন পরীক্ষা এলোমেলোভাবে নির্বাচিত 12- সপ্তাহের বয়সী WT ইঁদুর এবং Sidt2−/− পুরুষ ইঁদুরকে বিপাকীয় খাঁচায় রাখা হয়েছিল এবং উপবাস করা হয়েছিল কিন্তু জল দেওয়া হয়েছিল। 24 ঘন্টা প্রস্রাবের নমুনা সংগ্রহ করা হয়েছিল, এবং তারপরে প্রস্রাবের প্রোটিনের জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল (নানজিং জিয়ানচেং বায়োইঞ্জিনিয়ারিং ইনস্টিটিউট, সিএইচএন, সি035-2-1) (বিস্তারিত পদ্ধতির জন্য অনুগ্রহ করে পরিপূরক উপাদানগুলি পড়ুন)। সেল MPC5 মাউস গ্লোমেরুলার পডোসাইটগুলি BeNa কালচার কালেকশন থেকে কেনা হয়েছিল, এবং 10% FBS (Excell Bio, South America, FSP500) এবং লো-গ্লুকোজ DMEM(Sigma-Aldrich, 6046) দিয়ে কালচার করা হয়েছিল৷ SV40 MES 13 মাউস গ্লোমেরুলার মেসাঞ্জিয়াল কোষগুলি চীনা একাডেমি অফ সায়েন্সেসের সাধারণ সংস্কৃতি সংরক্ষণ কমিটির সেল ব্যাঙ্ক থেকে কেনা হয়েছিল এবং 10% FBS (Excell Bio, South America, FSP500) এবং উচ্চ গ্লুকোজ DMEM (Sigma-Aldrich, 6429) দিয়ে সংস্কৃত করা হয়েছিল। . সেল কালচার বাক্সের CO2 ঘনত্ব 5% এ বজায় রাখা হয়েছিল এবং তাপমাত্রা 37 ডিগ্রিতে বজায় রাখা হয়েছিল। ক্লোরোকুইন (সিকিউ) এবং রেপামাইসিন (আরএপিএ) সিগমা-অলড্রিচ (C6628, V900930) থেকে কেনা হয়েছিল। 10 mM CQ এবং 25 mg/mL rapamycin উভয়ই অতি-বিশুদ্ধ জলে দ্রবীভূত হয়েছিল। পেট্রি ডিশে সিকিউ যুক্ত করা হয়েছিল যাতে চূড়ান্ত ঘনত্ব 50 μM ছিল এবং অটোফ্যাজি ইনহিবিটর হিসাবে 16 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। রেপামাইসিন পেট্রি ডিশে 15 μM এর চূড়ান্ত ঘনত্বে যুক্ত করা হয়েছিল এবং একটি অটোফ্যাজি অ্যাক্টিভেটর হিসাবে 2 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেট করা হয়েছিল। CRISPR/Cas9 জিন-এডিটিং লেন্টিভাইরাস ভেক্টর সিস্টেম Sidt2 জিন Lenticrispr-v2 (AddgenePlasmid49535, Feng Zhang) প্লাজমিডগুলি অপসারণ করতে ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং sgRNA অনলাইন ডিজাইন টুল (http://crispr.mit.edu/) ব্যবহার করা হয়েছিল ডিজাইন sgRNA লক্ষ্য Sidt2.

প্রাইমারের ক্রমগুলি নিম্নরূপ ছিল: F: 5′-ACCACACCGTGACCC CAC-3′, R: 5′-GTTGCGGGTCACTGGTGT-3′, বায়োটেকনোলজি কোম্পানি (সানগন বায়োটেক, সাংহাই, CHN) দ্বারা সংশ্লেষিত৷ CRISPR/Cas9 লেন্টিভাইরাস সিস্টেম ব্যবহার করে, Lenticrispr-v2 প্লাজমিডকে লিনিয়ারাইজ করা হয়েছিল এবং লেন্টিক্রিসপ্র-ভি{{1{180}}}} Sidt2 রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড তৈরি করতে অ্যানিলড sgRNA ডুপ্লেক্সের সাথে লিঙ্ক করা হয়েছিল। Vigofect (Vigorous Biotechnology, Beijing, CHN) ট্রান্সফেকশন রিএজেন্ট লেন্টিভাইরাস তৈরির জন্য Lenticrispr-v2 প্লাজমিড এবং Lenticrispr-v2-Sidt2 রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিডকে স্থানান্তর করতে ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রাপ্ত লেন্টিভাইরাস MPC5 কোষ এবং SV40 MES 13 কোষে স্থানান্তরিত হয়েছিল। 48 ঘন্টা পরে, কোষগুলি নির্বাচন করার জন্য 72 ঘন্টার জন্য পিউরিনোমাইসিন দিয়ে ইনকিউবেট করা হয়েছিল। বেঁচে থাকা কোষগুলি ছিল সিডট2+/+ গ্রুপ এবং সিডট2−/- গ্রুপ যা সফলভাবে স্থানান্তরিত হয়েছিল। আরএনএ বিচ্ছিন্নতা এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর অ্যাস ট্রিজল (ইনভিট্রোজেন) মাউস কিডনি কোষ থেকে আরএনএ বের করতে ব্যবহৃত হয়েছিল এবং নির্দিষ্ট আরটি-পিসিআর পদ্ধতিটি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে ছিল [২১]। আরটি-পিসিআর-এর প্রাইমারের ক্রমগুলি নিম্নরূপ ছিল: অ্যাক্টিন (অর্থ: F: 5′- GGACTCC TATGTGGGTGACG-3′, R:5′-CTTCTCCATGTCGTCCCAGT-3′), P62(সেন্স: F:5 ′- GGACCCATCTACAGAGGCT G-3′, R: 5′-ATCACAATGGTGGAGGGTGC-3′), Sidt2(সেন্স: F:5′-TAGTGCCTGTTTACCACGTCTGC′, R: 5′-ATCACAATGGTGGGGTGC-3} {48}}′)। ওয়েস্টার্ন ব্লটিং নির্দিষ্ট পদ্ধতি আগে উল্লেখ করা হয়েছে [২৮]। এই গবেষণায়, প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলির মধ্যে খরগোশের অ্যান্টি-এলসি3বি (1:1000; সিগমা-অলড্রিচ L7543), খরগোশ অ্যান্টি-পি62 (1:1000; অ্যাবক্যাম ab205719), মাউস অ্যান্টি- -অ্যাক্টিন (1:1000; সিগমা অ্যালড্রিচ) অন্তর্ভুক্ত ছিল A5316), খরগোশ অ্যান্টি-Sidt2 (1:1000; Invitrogen PA5-69064), খরগোশ অ্যান্টি-Atg5 (1:1000; সেল সিগন্যালিং প্রযুক্তি 9980S), খরগোশ অ্যান্টি-Atg7 (1:1000; সেল সিগন্যালিং প্রযুক্তি 8558S) , খরগোশ বিরোধী Atg12 (1:1000; সেল সিগন্যালিং প্রযুক্তি 2011S), মাউস অ্যান্টি-LAMP1 (1:1000; সান্তা ক্রুজ বায়োটেকনোলজি H4A3), খরগোশ অ্যান্টি-ক্যাথেপসিন বি (1:1000; সেল সিগন্যালিং প্রযুক্তি 31718S)। Ad-mCherry-GFP-LC3B কোষগুলি Nunc গ্লাস-নিচের পেট্রি ডিশগুলিতে টিকা দেওয়া হয়েছিল। একটি উপযুক্ত ঘনত্বে বৃদ্ধি পাওয়ার পর, Ad-mCherry-GFP-LC3B যোগ করা হয়েছিল (বেয়ো টাইম, সাংহাই, CHN, C3011-10 mL), যার ফলে চূড়ান্ত ঘনত্ব 10 −11 vp/mL। 48 ঘন্টার জন্য উদ্দীপিত করার পরে, এমচেরি এবং জিএফপি ফ্লুরোসেন্স পয়েন্টের সংখ্যা সরাসরি লেজার কনফোকাল মাইক্রোস্কোপের (লাইকা এসপি 8, জার্মানি) অধীনে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। ইমিউনোফ্লুরোসেন্স কোষগুলিকে কাচের তলায় থাকা পেট্রি ডিশগুলিতে টিকা দেওয়া হয়েছিল এবং প্যারাফর্মালডিহাইড দিয়ে স্থির করা হয়েছিল। ব্লক করার পরে, কোষগুলিকে রাতারাতি প্রাথমিক অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল এবং তারপরে অন্ধকারে 90 মিনিটের জন্য সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। DAPI (1 ug/mL) দিয়ে নিউক্লিয়াস রঙ করার পরে লেজার স্ক্যানিং কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ (লাইকা এসপি 8, জার্মানি) ব্যবহার করে কোষগুলির ছবি তোলা হয়েছিল। প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলির মধ্যে রয়েছে P62 (1:200; Abcam ab205719), LAMP1 (1:200; সান্তা ক্রুজ বায়োটেকনোলজি H4A3), LC3B (1:200; সিগমা-অলড্রিচ L7543); সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলির মধ্যে রয়েছে অ্যান্টি-মাউস সেকেন্ড অ্যারি অ্যান্টি সাই3-কনজুগেটেড অ্যাফিনিপুর ছাগল অ্যান্টি-মাউস আইজিজি (এইচ + এল) (1:200; প্রোটিনটেক SA00009-1), কোরালাইট488-কঞ্জুগেটেড অ্যাফিনিপুর ছাগল অ্যান্টি-মাউস আইজিজি (এইচ + এল) (1:200; প্রোটিনটেক SA00013-1), কোরালাইট594- কনজুগেটেড অ্যাফিনিপুর ছাগল অ্যান্টি-র্যাবিট আইজিজি (এইচ + এল) (1:200; প্রোটিনটেক SA{{144) }})। LysoTracker (Beyotime, Shanghai, CHN, C1046) এর জন্য, আমরা কাচের নীচের পেট্রি ডিশগুলিতে কোষগুলিকে টিকা দিয়েছি। একটি উপযুক্ত ঘনত্বে বৃদ্ধি পাওয়ার পরে, 75 এনএম এর একটি লাইসোট্র্যাকার চূড়ান্ত ঘনত্ব ধারণকারী কোষ সংস্কৃতি তরল কোষগুলিতে যোগ করা হয়েছিল, যা 45 মিটার উদ্দীপনার পরে ছবি তোলা হয়েছিল। ফ্লুরোসেন্ট বিন্দুর সংখ্যা এবং পিয়ারসন পারস্পরিক সম্পর্ক সহগ গণনা করতে ImageJ ব্যবহার করুন। ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ পর্যবেক্ষণ প্রতিটি গ্রুপ থেকে, 3−5 12-সপ্তাহ-বয়সী Sidt2−/− এবং WT পুরুষ ইঁদুরকে কিডনি টিস্যুর ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি নমুনা প্রস্তুত করার জন্য এলোমেলোভাবে নির্বাচন করা হয়েছিল, এবং নির্দিষ্ট পদ্ধতিটি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে [৪৮] , এলোমেলোভাবে একটি ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে বিভাগগুলির ছবি তুলুন, প্রতিটি মাউসের জন্য কিডনি বিভাগ থেকে 10টিরও বেশি ছবি নেওয়া হয়েছে, প্রতিটি মাউসের ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপের ছবি থেকে এলোমেলোভাবে 8000× ম্যাগনিফিকেশনের 3-5টি ছবি নির্বাচন করুন, অটোফাগোলাইসোসোমের সংখ্যা গণনা করুন ছবিতে, এবং WT গ্রুপের সাথে Sidt2−/- গ্রুপের তুলনা করুন। সেল ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপের নমুনা তৈরির বিষয়ে, সেল স্ক্র্যাপার দিয়ে 105টির কম কোষ স্ক্র্যাপ করুন এবং একটি EP টিউবে সংগ্রহ করুন, তারপর 5 মিটারের জন্য 800 rpm/মিনিট সেন্ট্রিফিউজ করুন, সুপারনাট্যান্ট বাদ দিন এবং ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ ফিক্সেটিভ দিয়ে এটি পূরণ করুন। 4 ডিগ্রী রেফ্রিজারেটরে 1 ঘন্টার বেশি সংরক্ষণ করার পরে, এটি পরিদর্শনের জন্য জমা দেওয়া যেতে পারে। ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ শটটি কিংমেড ডায়াগনস্টিকস (গুয়াংজু, চীন) দ্বারা নেওয়া হয়েছিল। LysoSensor কোষগুলিকে একটি 96-কূপ প্লেটে ইনোকুলেশন করা হয়েছিল৷ উপযুক্ত ঘনত্বে বৃদ্ধি পাওয়ার পর, 1 µM LysoSensorDND-160® (থার্মো ফিশার L7545) ধারণকারী একটি প্রিহিটেড (37 ডিগ্রি) মাধ্যম যোগ করা হয়েছিল। কোষগুলিকে 37 ডিগ্রিতে 5 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করা হয়েছিল এবং তারপরে পিবিএস দিয়ে কোষগুলি তিনবার ধোয়ার পরে মাধ্যমটি সরানো হয়েছিল এবং প্রতিস্থাপন করা হয়েছিল। BioTek Citation 5 (BioTek, Winooski, VT, USA) এ প্লেট পড়ার জন্য ওয়েলস্ক্যান মোড ব্যবহার করা হয়েছিল। Ex360nm/Em450nm এবং Ex380nm/Em540nm উত্তেজনা/নিঃসরণ তরঙ্গদৈর্ঘ্য ব্যবহার করে ফ্লুরোসেন্স পরিমাপ করা হয়েছিল এবং লাইসোসোম পিএইচ Em540 থেকে Em450 এর অনুপাত থেকে নির্ধারিত হয়েছিল। পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ ফলাফলগুলিকে গড় ± SEM হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। জোড়াবিহীন টি-পরীক্ষা ব্যবহার করে দুটি গ্রুপের মধ্যে পরিসংখ্যানগত তুলনা করা হয়েছিল। যখন পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণের জন্য গ্রাফিক্স 8.0 সফ্টওয়্যার ব্যবহার করা হয়েছিল, তখন P <0.05 পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল। এই গবেষণায় প্রতিটি গ্রুপের পরীক্ষাগুলি কমপক্ষে তিনবার স্বাধীনভাবে পুনরাবৃত্তি হয়েছিল। ডেটা উপলভ্যতা বর্তমান গবেষণার সময় উত্পন্ন এবং/অথবা বিশ্লেষণ করা ডেটাসেটগুলি যুক্তিসঙ্গত অনুরোধে সংশ্লিষ্ট লেখকের কাছ থেকে পাওয়া যায়।

তথ্যসূত্র

1. Settembre C, Fraldi A, Medina DL, Ballabio A. লাইসোসোম থেকে সংকেত: সেলুলার ক্লিয়ারেন্স এবং শক্তি বিপাকের জন্য একটি নিয়ন্ত্রণ কেন্দ্র। ন্যাট রেভ মোল সেল বিওল। 2013;14:283-96।

2. Lamming DW, Bar-Peled L. Lysosome: বিপাকীয় সংকেত কেন্দ্র। ট্রাফিক। 2019;20:27–38।

3. ব্যালাবিও এ. দুর্দান্ত লাইসোসোম। EMBO Mol Med. 2016;8:73–76।

4. Yamamoto T, Takabatake Y, Takahashi A, Kimura T, Namba T, Matsuda J, et al. উচ্চ চর্বিযুক্ত খাদ্য-প্ররোচিত লাইসোসোমাল কর্মহীনতা এবং প্রতিবন্ধী অটোফ্যাজিক ফ্লাক্স কিডনির লাইপোটক্সিসিটিতে অবদান রাখে। জে এম সোক নেফ্রোল। 2017;28:1534-51।

5. Nonclercq D, Wrona S, Toubeau G, Zanen J, Heuson-Stiennon JA, Schaudies RP, et al. জেন্টামাইসিনের তীব্র এক্সপোজারের পরে ইঁদুরের কিডনিতে টিউবুলার আঘাত এবং পুনর্জন্ম: একটি সময়-কোর্স অধ্যয়ন। রেন ফেইল। 1992;14:507-21।

সাপোর্টিভ সার্ভিস অফ ওয়েসিস্তানচে- চীনের বৃহত্তম সিস্টানচে রপ্তানিকারক:

ইমেল:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/টেল:+86 15292862950

আরও স্পেসিফিকেশন বিশদ বিবরণের জন্য কেনাকাটা করুন:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

কিডনির জন্য 25% ইচিনাকোসাইড এবং 9% অ্যাকটিওসাইড সহ প্রাকৃতিক জৈব সিস্টানচ নির্যাস পান