বিমূর্ত

বিষণ্নতা বিশ্বব্যাপী একটি অত্যন্ত প্রচলিত এবং অক্ষম মানসিক ব্যাধিকে প্রতিনিধিত্ব করে। ক্রমবর্ধমান প্রমাণগুলি নির্দেশ করে যে হিপ্পোক্যাম্পাসের মধ্যে অত্যধিক নিউরোইনফ্ল্যামেটরি অ্যাক্টিভেশন হতাশাজনক লক্ষণগুলির সূচনা এবং অগ্রগতিতে যথেষ্ট অবদান রাখে। Cistanche phenylethanol glycosides (CPhGs), প্রথাগত ভোজ্য-ওষুধী ভেষজ থেকে আহরিত প্রধান জৈব সক্রিয় উপাদানCistanche deserticolaএবংCistanche tubulosa, পূর্ববর্তী গবেষণায় একাধিক নিউরোপ্রোটেক্টিভ ফার্মাকোলজিকাল বৈশিষ্ট্য প্রদর্শন করেছে। এই বর্তমান তদন্তের লক্ষ্য C57BL/6 ইঁদুরে দীর্ঘস্থায়ী অপ্রত্যাশিত হালকা চাপ (CUMS) দ্বারা উদ্ভূত বিষণ্নতার মতো আচরণগত ফিনোটাইপগুলিতে CPhGs দ্বারা প্রয়োগ করা থেরাপিউটিক প্রভাব এবং আণবিক প্রক্রিয়াগুলি অন্বেষণ করা।

ষাটটি SPF-গ্রেড C57BL/6 ইঁদুরকে এলোমেলোভাবে ছয়টি পরীক্ষামূলক দলে বিভক্ত করা হয়েছিল: কন্ট্রোল গ্রুপ, CUMS-মডেল গ্রুপ, হাই-ডোজ CPhGs গ্রুপ (700 mg/kg), মাঝারি-ডোজ CPhGs গ্রুপ (350 mg/kg), কম CPHGs গ্রুপ (350 mg/kg), এবং কম CPhGs গ্রুপ পজিটিভ-কন্ট্রোল ফ্লুওক্সেটিন গ্রুপ (15 মিলিগ্রাম/কেজি)। CUMS মডেলিংয়ের পরে চার সপ্তাহের ওষুধ গ্যাভেজ হস্তক্ষেপের পর, সুক্রোজ পছন্দ পরীক্ষা (SPT), ওপেন-ফিল্ড টেস্ট (OFT), টেল সাসপেনশন পরীক্ষা (TST), এবং জোরপূর্বক-সাঁতার পরীক্ষা (FST) সহ বিস্তৃত নিউরোবিহেভিওরাল মূল্যায়ন বাস্তবায়িত হয়েছিল। এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস (ELISA) কিটগুলি হিপোক্যাম্পাল প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনস এবং প্রদাহজনক মধ্যস্থতার পাশাপাশি সিরাম মনোমাইন নিউরোট্রান্সমিটার ঘনত্বের পরিমাণ নির্ধারণ করে। হিপোক্যাম্পাল ডেন্টেট গাইরাস অঞ্চলে হেমাটোক্সিলিন-ইওসিন (HE) স্টেনিং এবং নিসল স্টেনিং ভিজ্যুয়ালাইজড নিউরোনাল প্যাথলজিকাল ইনজুরি। ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি গ্লিয়াল ফাইব্রিলারি অ্যাসিডিক প্রোটিন (GFAP), ionized ক্যালসিয়াম-বাইন্ডিং অ্যাডাপ্টার অণু-1 (Iba-1), NLRP3, এবং ক্যাসপেস-1 প্রোটিনের প্রকাশের তীব্রতা সনাক্ত করেছে। ইমিউনোফ্লোরেসেন্স স্টেনিং আপস্ট্রিম TLR4/NF‑κB সিগন্যালিং ক্যাসকেডের অ্যাক্টিভেশন স্ট্যাটাসকে আরও মূল্যায়ন করেছে।

আমাদের পরীক্ষামূলক ফলাফলগুলি প্রমাণ করেছে যে মৌখিক CPhGs প্রশাসন বিষণ্নতা-সম্পর্কিত আচরণগত অস্বাভাবিকতাগুলিকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রশমিত করেছে। CPhGs উন্নত সুক্রোজ পছন্দ শতাংশ এবং হতাশা-ভিত্তিক আচরণগত দৃষ্টান্তে অচলতার সময়কাল হ্রাস পেয়েছে। অধিকন্তু, CPhGs চিকিত্সার ফলে ক্ষয়প্রাপ্ত সিরাম এবং হিপ্পোক্যাম্পাল সেরোটোনিন (5-HT) পাশাপাশি ডোপামিন (DA) স্তর পুনরুদ্ধার করা হয়েছে। জৈব রাসায়নিক সনাক্তকরণ হিপোক্যাম্পাল প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি মধ্যস্থতাকারী এবং সাইটোকাইন অতিরিক্ত উত্পাদনের উল্লেখযোগ্য দমন প্রকাশ করেছে। হিস্টোপ্যাথলজিকাল পর্যবেক্ষণগুলি CUMS-প্ররোচিত হিপোক্যাম্পাল নিউরোনাল ক্ষতির ডোজ-নির্ভর ত্রাণকে চিত্রিত করেছে। ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে CPhGs GFAP দ্বারা চিহ্নিত অ্যাস্ট্রোসাইটের ঘনত্বকে বৃদ্ধি করেছে, Iba-1-পজিটিভ মাইক্রোগ্লিয়ার প্যাথলজিকাল হাইপার-অ্যাক্টিভেশনকে বাধা দিয়েছে এবং NLRP3 প্রদাহ-সম্পর্কিত প্রোটিনের প্রাচুর্যকে নিম্ন-নিয়ন্ত্রিত করেছে। ইমিউনোফ্লোরোসেন্স অ্যাসেস প্রমাণ করেছে যে CPhGs হিপ্পোক্যাম্পাল টিস্যুর মধ্যে অত্যধিক TLR4 এবং ফসফরিলেটেড NF-κB p65 সক্রিয়করণকে বাধা দেয়।

সমষ্টিগতভাবে, এই ফলাফলগুলি নিশ্চিত করে যে CPhGs ইঁদুরের মধ্যে CUMS-উদ্দীপিত বিষণ্নতার মতো প্রকাশের বিরুদ্ধে বিশিষ্ট অ্যান্টিডিপ্রেসেন্ট-এর মতো কার্যকারিতা প্রয়োগ করে। এর ফার্মাকোলজিক্যাল মেকানিজম আংশিকভাবে দ্বৈত নিয়ন্ত্রক ফাংশনের মাধ্যমে মধ্যস্থতা করা হয়: মনোমাইন নিউরোট্রান্সমিটার হোমিওস্ট্যাসিস পুনরুদ্ধার করা এবং TLR4/NF‑κB/NLRP3 সিগন্যালিং অক্ষ দ্বারা মধ্যস্থতা করা নিউরোইনফ্ল্যামেটরি প্রতিক্রিয়াকে নিয়ন্ত্রণ করা। এই প্রাণী অধ্যয়ন প্রাক-ক্লিনিক্যাল পরীক্ষামূলক ভিত্তি সরবরাহ করে যা CPhG-এর প্রতিশ্রুতিশীল প্রাকৃতিক প্রার্থী এজেন্ট বা হতাশা-অনুষঙ্গিক হস্তক্ষেপের জন্য কার্যকরী খাদ্য উপাদান হিসাবে আরও শোষণকে সমর্থন করে।

কীওয়ার্ড: Cistanche phenylethanol glycosides (CPhGs); বিষণ্নতা; দীর্ঘস্থায়ী অপ্রত্যাশিত হালকা চাপ; নিউরোইনফ্লেমেশন; astrocytes; মাইক্রোগ্লিয়া; TLR4/NF‑κB/NLRP3 প্রদাহজনক পথ

1. ভূমিকা

বিষণ্নতা একটি বহুমুখী আবেগপূর্ণ মানসিক অসুস্থতা যা ক্রমাগত নিম্ন মেজাজ, অ্যানহেডোনিয়া, সাইকোমোটর প্রতিবন্ধকতা, ঘুম-জাগ্রত ব্যাঘাত এবং সোমাটিক কর্মহীনতা সমন্বিত মূল ক্লিনিকাল প্রকাশ দ্বারা চিহ্নিত করা হয়। গুরুতর বিষণ্নতামূলক পর্বগুলি সম্ভাব্যভাবে আত্ম-ক্ষতি এবং আত্মহত্যার ধারণার দিকে পরিচালিত করে, যা বিশ্বব্যাপী জনস্বাস্থ্যের উপর ব্যাপক বোঝা চাপিয়ে দেয়। চীনের মহামারী সংক্রান্ত সমীক্ষার তথ্য জানিয়েছে যে জাতীয় বিষণ্নতার প্রকোপ 2.1% এ পৌঁছেছে এবং বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থা শীর্ষস্থানীয় রোগগুলির মধ্যে প্রধান বিষণ্নতাজনিত ব্যাধিকে শ্রেণীবদ্ধ করেছে যা বিশ্বব্যাপী অক্ষমতা-সামঞ্জস্যপূর্ণ জীবন-বছরের ক্ষতিতে অবদান রাখে।

তথাপি, সম্পূর্ণ আণবিক ইটিওলজি অন্তর্নিহিত বিষণ্নতা প্যাথোজেনেসিস অসম্পূর্ণভাবে ব্যাখ্যা করা রয়ে গেছে, নিখুঁত ক্লিনিকাল থেরাপিউটিক সমাধানকে বাধা দেয়। সমসাময়িক প্যাথোফিজিওলজিকাল হাইপোথিসিসগুলি নিউরো-ইমিউন ক্রসস্টাল মেকানিজমের দিকে ফোকাস স্থানান্তরিত করেছে। প্রাক-ক্লিনিক্যাল এবং ক্লিনিকাল গবেষণা জমা করা অবিরাম নিউরোইনফ্লেমেশনকে বিষণ্নতাজনিত ব্যাধিগুলির জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ প্যাথোজেনিক ড্রাইভার হিসাবে হাইলাইট করে। দীর্ঘস্থায়ী মনস্তাত্ত্বিক বা শারীরবৃত্তীয় চাপের চ্যালেঞ্জের অধীনে, হিপ্পোক্যাম্পাল গ্লিয়াল কোষের জনসংখ্যা অস্বাভাবিক সক্রিয়করণের মধ্য দিয়ে যায়। ওভার-অ্যাক্টিভেটেড মাইক্রোগ্লিয়া এবং অকার্যকর অ্যাস্ট্রোসাইট একাধিক প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি মিডিয়েটরদের শক্তিশালী রিলিজ ট্রিগার করে, প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন ক্যাসকেড অ্যামপ্লিফিকেশন ইফেক্ট তৈরি করে। এই ধরনের নিউরো-ইনফ্ল্যামেটরি অপমান আরও স্নায়ুসংক্রান্ত অঙ্গসংস্থানগত অবনতি, নিউরোট্রান্সমিটার বিপাকীয় ব্যাঘাত এবং সিনাপটিক প্লাস্টিসিটি বৈকল্যকে প্ররোচিত করে, শেষ পর্যন্ত হতাশার মতো প্যাথলজিকাল অগ্রগতিকে সহজতর করে।

বর্তমান মূলধারার ক্লিনিকাল অ্যান্টিডিপ্রেসেন্ট হস্তক্ষেপগুলি প্রধানত ফ্লুওক্সেটিন দ্বারা উপস্থাপিত সিন্থেটিক রাসায়নিক অ্যান্টিডিপ্রেসেন্টের উপর নির্ভর করে, একটি নির্বাচনী সেরোটোনিন রিউপটেক ইনহিবিটর (SSRI)। নির্দিষ্ট কিছু রোগীর জন্য আংশিক উপসর্গ উপশম হওয়া সত্ত্বেও, সিন্থেটিক অ্যান্টিডিপ্রেসেন্টগুলির সু-স্বীকৃত ত্রুটি রয়েছে: অসন্তোষজনক সম্পূর্ণ মওকুফ অনুপাত, ঘন ঘন অবশিষ্ট বিষণ্ণ উপসর্গ, ওষুধ বন্ধ করার পরে উচ্চ পুনরুত্থানের সম্ভাবনা, এবং দীর্ঘ সময় প্রশাসনের সময় প্রতিকূল গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল, হেপাটিক এবং বিপাকীয় পার্শ্ব প্রতিক্রিয়া। বিপরীতভাবে, ঐতিহ্যবাহী ভেষজ ওষুধে বহু-লক্ষ্য মডুলেটরি বৈশিষ্ট্য এবং তুলনামূলকভাবে হালকা নিরাপত্তা প্রোফাইল রয়েছে, তাই মেজাজ-ব্যাধি সহায়ক থেরাপির জন্য গবেষণার আগ্রহ বাড়ছে।

Cistanche deserticolaএবংCistanche tubulosa, সাধারণত "মরুভূমি জিনসেং" নামে পরিচিত, Orobanchaceae পরিবারের অন্তর্গত। তাদের মাংসল কান্ড ঐতিহ্যগত এশিয়ান ভেষজ অনুশীলনে ক্লাসিক সমজাতীয় ঔষধি-খাদ্য কাঁচামাল হিসাবে কাজ করে। আধুনিক ফার্মাকোলজিকাল তদন্ত একাধিক নিউরোপ্রোটেক্টিভ বায়োঅ্যাক্টিভিটি নথিভুক্ত করেসিস্তানচেনির্যাস, অ্যান্টি-নিউরোডিজেনারেশন প্রভাব সহ আলঝাইমার রোগ এবং পারকিনসন রোগের বিরুদ্ধে। ফেনিলেথানল গ্লাইকোসাইডগুলি ভিতরে প্রধান জৈব সক্রিয় ভগ্নাংশ গঠন করেসিস্তানচেনির্যাস, প্রধানত echinacoside এবং verbascoside ধারণকারী। Cistanche phenylethanol glycosides (CPhGs) একাধিক পরীক্ষামূলক প্ল্যাটফর্ম জুড়ে অ্যান্টি-টিউমার, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, ইমিউনোমোডুলেটরি এবং নিউরো-প্রতিরক্ষামূলক জৈব সক্রিয়তা প্রদর্শন করে।

পূর্বের প্রাথমিক পরীক্ষাগারের কাজ প্রমাণ করেছে যে CPhGs স্ট্রাইটাল ডোপামিন ঘনত্বকে বাড়িয়ে তুলতে পারে এবং ইঁদুর প্রাণীর মডেলগুলিতে মেনোপজ-সম্পর্কিত বিষণ্নতা-সদৃশ ফেনোটাইপগুলি হ্রাস করতে পারে। যাইহোক, CPhGগুলি দীর্ঘস্থায়ী-স্ট্রেস-ট্রিগারড ডিপ্রেশনের উপর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব তৈরি করে কিনা এবং এই ধরনের জৈব ক্রিয়াকলাপের মধ্যস্থতাকারী বিশদ সংকেত ট্রান্সডাকশন ক্যাসকেডগুলির এখনও পদ্ধতিগত অন্বেষণের অভাব রয়েছে। ক্রনিক আনপ্রেডিক্টেবল মাইল্ড স্ট্রেস (CUMS) পশুর দৃষ্টান্ত একটি সু-প্রতিষ্ঠিত প্রাক-ক্লিনিক্যাল ডিপ্রেশন মডেল হিসেবে দাঁড়িয়েছে। পরীক্ষাগার ইঁদুরগুলিকে পরপর কয়েক সপ্তাহ ধরে বৈচিত্র্যময় এলোমেলো হালকা স্ট্রেসারে উন্মুক্ত করে, CUMS নির্ভরযোগ্যভাবে মূল হতাশাজনক হলমার্কগুলি যেমন অ্যানহেডোনিয়া, আচরণগত হতাশা এবং হিপোক্যাম্পাল নিউরোপ্যাথোলজিকাল ক্ষতি পুনরুদ্ধার করে।

তদনুসারে, এই গবেষণাটি সিপিএইচজি-এর তিনটি গ্রেডিয়েন্ট ডোজের ইন-ভিভো অ্যান্টিডিপ্রেসেন্ট-সদৃশ ক্ষমতা পদ্ধতিগতভাবে মূল্যায়ন করার জন্য CUMS-প্ররোচিত বিষণ্নতামূলক মাউস মডেল তৈরি করেছে। আমরা বিশেষ করে মনোমাইন নিউরোট্রান্সমিটার পুনরুদ্ধার, হিপ্পোক্যাম্পাল গ্লিয়াল সেল ফেনোটাইপিক ট্রান্সফরমেশন এবং TLR4/NF‑κB-শাসিত NLRP3 প্রদাহজনক নিউরো-ইনফ্ল্যামেটরি পাথওয়ের উপর ফোকাস করেছি। এই অধ্যয়নটি হতাশাজনক উপসর্গের উন্নতি লক্ষ্য করে CPhG-এর ভবিষ্যত ফার্মাসিউটিক্যাল উন্নয়ন এবং কার্যকরী-খাদ্য প্রয়োগকে সমর্থন করার জন্য উদ্দেশ্যমূলক পরীক্ষামূলক প্রমাণ সরবরাহ করতে চায়।

2. উপকরণ এবং পদ্ধতি

2.1 পরীক্ষামূলক উপকরণ, বিকারক এবং যন্ত্র

মানসম্মত CPhGs কাঁচা নির্যাস Hotan Dichen Pharmaceutical Biological Co., Ltd (ব্যাচ নং. 20231221, Xinjiang, China) থেকে অর্জিত হয়েছিল। মোট ফেনাইলেথানল গ্লাইকোসাইড সামগ্রী 85% এর চেয়ে বেশি বা সমান, যার মধ্যে ইচিনাকোসাইড 40% এর চেয়ে বেশি বা সমান এবং ভার্বাস্কোসাইড 16% এর চেয়ে বেশি বা সমান। ফ্লুওক্সেটিন হাইড্রোক্লোরাইড ক্যাপসুল প্যাথিওন ফ্রান্স থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। 5‑HT, DA, iNOS, COX‑2, PGE2, TNF‑ , IL‑1 , IL‑18, IL‑6, IFN‑ এর জন্য বাণিজ্যিক ELISA অ্যাসে কিটগুলি যোগ্য জৈবিক বিকারক সরবরাহকারীদের কাছ থেকে নেওয়া হয়েছিল৷ ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি এবং ইমিউনোফ্লোরোসেন্সের জন্য প্রয়োগ করা প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলির মধ্যে রয়েছে অ্যান্টি-GFAP, অ্যান্টি-Iba-1, অ্যান্টি-NLRP3, অ্যান্টি-ক্যাস্পেস-1, অ্যান্টি-TLR4 এবং অ্যান্টি-ফসফো-NF-κB p65 অ্যান্টিবোডি। HE এবং Nissl স্টেনিংয়ের জন্য হিস্টোলজিকাল স্টেনিং কিটগুলি প্যারাফিন ব্রেন-সেকশন প্রক্রিয়াকরণের জন্য প্রস্তুত করা হয়েছিল।

উচ্চ-নির্ভুলতা ইলেকট্রনিক বিশ্লেষণাত্মক ভারসাম্য, মিলি-কিউ আল্ট্রাপিওর-ওয়াটার পিউরিফিকেশন ওয়ার্কস্টেশন, স্পেকট্রাম্যাক্স মাল্টি-মোড মাইক্রোপ্লেট রিডার, লেইকা আপরাইট ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ, প্লাস সম্পূর্ণ ইঁদুর আচরণ-বিশ্লেষণ হার্ডওয়্যার এবং ট্র্যাক 3SMART সফ্টওয়্যার সিস্টেম।

ষাট-পুরুষ SPF-গ্রেড C57BL/6 ইঁদুর, সাত সপ্তাহ বয়সী প্রাথমিক শারীরিক-ওজন পরিসীমা 18-22 গ্রাম, বেইজিং ভাইটাল রিভার ল্যাবরেটরি অ্যানিমেল টেকনোলজি কোং, লিমিটেড থেকে কেনা হয়েছিল। সমস্ত মাউসের পরীক্ষামূলক ম্যানিপুলেশনগুলি চীনা ইউনিভার্সিটির শাওন ইউনিভার্সিটির আনুষ্ঠানিক এথিক্যাল অ্যাপ্লিকেশান কমিটি দ্বারা প্রাপ্ত। (নৈতিকতা অনুমোদন আইডি: SUCMDL20231015003)। ইঁদুরগুলি নির্দিষ্ট-প্যাথোজেন-মুক্ত প্রাণীর আবাসন সুবিধার ভিতরে রাখা হয়েছিল। পরিবেশগত পরামিতিগুলি পরিবেষ্টিত তাপমাত্রা (21 ± 2) ডিগ্রী, আপেক্ষিক আর্দ্রতা 60 % ± 10 %, স্ট্যান্ডার্ড 12‑ঘন্টা আলো-অন্ধকার আলোকসজ্জার চক্র বাস্তবায়নে বজায় রাখা হয়েছিল৷ ইঁদুর চৌ এবং পানীয় জল অ্যাক্সেসযোগ্য বিজ্ঞাপন লিবিটাম ছিল. আনুষ্ঠানিক পরীক্ষামূলক কর্মপ্রবাহ শুরু করার আগে এক-সপ্তাহ অভিযোজিত অভিযোজন সময়কাল সঞ্চালিত হয়েছিল।

2.2 প্রাণী গ্রুপিং, CUMS মডেলিং এবং ড্রাগ অ্যাডমিনিস্ট্রেশন

এক-সপ্তাহ অভিযোজিত উত্থাপনের পরে, প্রাথমিক সুক্রোজ-অভিরুচি স্ক্রীনিং সহজাত কম চিনি-পান পছন্দ সহ পৃথক ইঁদুরগুলিকে বাদ দিয়েছিল। যোগ্য পরীক্ষামূলক ইঁদুর ছয়টি অধ্যয়ন গ্রুপে এলোমেলো করা হয়েছিল (প্রতিটি গ্রুপে = 10টি প্রাণী):

কন্ট্রোল গ্রুপ (কন): কোন CUMS স্ট্রেস নেই, আইসোভোলিউমেট্রিক ডিওনাইজড জলের ইন্ট্রাগাস্ট্রিক প্রশাসন;

CUMS মডেল গ্রুপ (Mod): সম্পূর্ণ CUMS উদ্দীপনা গ্রহণ, সমান-আয়তনের ডিওনাইজড জলের সাথে গ্যাভেজ;

উচ্চ-ডোজ CPhGs গ্রুপ (CPhGs‑H): CUMS এক্সপোজার, CPhGs 700 mg/kg শরীরের ওজন দৈনিক গ্যাভেজ দ্বারা;

মিডিয়াম ডোজ CPhGs গ্রুপ (CPhGs‑M): CUMS এক্সপোজার, CPhGs 350 mg/kg দৈনিক গ্যাভেজ দ্বারা;

কম ডোজ CPhGs গ্রুপ (CPhGs‑L): CUMS এক্সপোজার, CPhGs 175 mg/kg দৈনিক গ্যাভেজ দ্বারা;

ফ্লুওক্সেটাইন পজিটিভ-কন্ট্রোল গ্রুপ (FLX): CUMS এক্সপোজার, ফ্লুওক্সেটিন 15 মিগ্রা/কেজি গ্যাভেজ প্রতিদিন একবার।

CUMS মডেল নির্মাণের জন্য, দশটি বিভিন্ন ধরণের হালকা চাপ গৃহীত হয়েছিল: শারীরিক সংযম (60 মিনিট), অনুভূমিক কাঁপানো আন্দোলন (60 মিনিট), টেল সাসপেনশন (60 মিনিট), খাঁচা কাত করা 45‑ডিগ্রি কোণ (24 ঘন্টা), স্যাঁতসেঁতে বিছানা পরিবেশ (24 ঘন্টা), খালি-ঘন্টা আলো (24 ঘন্টা) h), গরম জলে 41 ডিগ্রিতে 5 মিনিটের জন্য সাঁতার কাটা, 5 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রিতে ঠান্ডা জলে সাঁতার কাটা এবং 2 মিনিট স্থায়ী টেল-ক্লিপ স্টিমুলেশন। দুটি স্বতন্ত্র স্ট্রেসর প্রতি একক দিনে এলোমেলোভাবে প্রয়োগ করা হয়েছিল; অভিন্ন মানসিক চাপ পরপর দুই সন্নিহিত দিনে প্রদর্শিত হবে না। CUMS মডেলিং পদ্ধতি চার সপ্তাহ ধরে অব্যাহত ছিল।

চার-সপ্তাহের স্ট্রেস মডেলিং শেষ করার পরে, সংশ্লিষ্ট পরীক্ষার পদার্থ বা দ্রাবক গাড়িগুলি আরও একটানা চার সপ্তাহের জন্য প্রতিদিন একবার ইন্ট্রাগাস্ট্রিকভাবে বিতরণ করা হয়েছিল। অষ্টম পরীক্ষামূলক সপ্তাহে, সমস্ত নিউরোবিহেভিওরাল সনাক্তকরণ প্রকল্পগুলি ক্রমানুসারে বাস্তবায়িত হয়েছিল।

2.3 নিউরো-আচরণমূলক টেস্ট ব্যাটারি

2.3.1 সুক্রোজ পছন্দ পরীক্ষা (SPT)

সুক্রোজ পছন্দ পরীক্ষা ইঁদুরের মধ্যে অ্যানহেডোনিয়া-সদৃশ কোর ডিপ্রেসিভ ফেনোটাইপ মূল্যায়ন করে। আনুষ্ঠানিক পরিমাপের আগে, প্রতিটি মাউস পৃথকভাবে রাখা হয়েছিল। তিন দিনের সুক্রোজ-পানীয় অভিযোজন পর্যায়টি কার্যকর করা হয়েছিল। প্রথম দিন: 1% সুক্রোজ দ্রবণের দুটি বোতল প্রতিটি খাঁচার মধ্যে 24 ঘন্টার জন্য রাখা হয়। দ্বিতীয় দিন: একটি সুক্রোজ-সলিউশন বোতল একটি বিশুদ্ধ-পানির বোতলের সাথে যুক্ত। দিন-তিন: অবস্থানের পক্ষপাতের প্রভাব দূর করতে চিনি-জল এবং বিশুদ্ধ-পানির পাত্রের অদলবদল অবস্থান। অভিযোজন চক্রের পরে, ইঁদুর 24 ঘন্টা খাবার এবং জল থেকে উপবাস করে। পরবর্তীকালে, পূর্ব-ওজন 1% সুক্রোজ জলের বোতল এবং বিশুদ্ধ-পানির বোতল সরবরাহ করা হয়েছিল। বোতলের অবস্থান 12 ঘন্টা পরে বিনিময় করা হয়েছিল। মোট 24‑ঘন্টা পরীক্ষার সময়কালের পরে, উভয় বোতলের অবশিষ্ট তরল ওজন সঠিকভাবে রেকর্ড করা হয়েছিল। সুক্রোজ-পছন্দের হার (%)=(সুক্রোজ-সলিউশন খরচ)/(সুক্রোজ-সলিউশন খরচ + বিশুদ্ধ-জল ব্যবহার) × 100%।

2.3.2 ওপেন-ফিল্ড টেস্ট (OFT)

ওপেন-ফিল্ড যন্ত্রপাতি একটি 50 সেমি × 50 সেমি × 50 সেমি ওপেন-টপ কিউবিক বক্স তৈরি করে। কেন্দ্রীয় বর্গাকার অঞ্চলকে 25 সেমি × 25 সেমি কেন্দ্রীয় অঞ্চল হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছিল যা অঙ্গনের অভ্যন্তরে কেন্দ্রীভূত ছিল। প্রতিটি মাউস আলতোভাবে খোলা মাঠের বাক্সের কেন্দ্রীয় পৃষ্ঠে অবস্থান করা হয়েছিল। পাঁচ মিনিট বিনামূল্যে অভিযোজন সময় অনুমোদিত ছিল. আচরণগত রেকর্ডিং এবং ডেটা বিশ্লেষণ পরবর্তী পাঁচ মিনিটের পর্যবেক্ষণ সময়ের উপর কেন্দ্রীভূত। প্রাথমিক পঠন-আউট সূচকগুলিতে মোট চলাচলের দূরত্ব, কেন্দ্রীয় অঞ্চলের ভিতরে ব্যয় করা সময় এবং কেন্দ্রীয়-জোন এন্ট্রিগুলির ফ্রিকোয়েন্সি রয়েছে৷ এই পরামিতিগুলি অপরিচিত পরিবেশগত পরিস্থিতিতে স্বতঃস্ফূর্ত লোকোমোটর কার্যকলাপ এবং অনুসন্ধানমূলক ইচ্ছা প্রতিফলিত করে।

2.3.3 টেল সাসপেনশন টেস্ট (TST)

মাউসের লেজের অংশটি নিরাপদে স্থির করা হয়েছিল যাতে প্রাণীটিকে মাটির পৃষ্ঠের উপরে উল্টো ঝুলতে দেয়। মোট রেকর্ডিং সময় ছিল ছয় মিনিট। পরবর্তী চার মিনিটের সেগমেন্টে অচল সময়ের সময়কাল নথিভুক্ত করা হয়েছিল। বর্ধিত অচলতার সময় বর্ধিত আচরণগত-হতাশা হতাশাজনক-মত অবস্থার প্রতিনিধিত্ব করে।

2.3.4 জোরপূর্বক-সাঁতার পরীক্ষা (FST)

স্বচ্ছ নলাকার সাঁতারের ব্যারেল (ব্যাস 15 সেমি, উচ্চতা 50 সেমি) জলে ভরা ছিল (25 ± 2) ডিগ্রি ; জলের গভীরতা 20 সেমি পৌঁছেছে। প্রতিটি মাউস আলতোভাবে ছয় মিনিটের রেকর্ডিং ব্যবধানের জন্য সাঁতারের পাত্রে রাখা হয়েছিল। শেষ চার মিনিটের ভাসমান অচলতার সময় পরিসংখ্যানগতভাবে পরিমাপ করা হয়েছিল। দীর্ঘস্থায়ীতা সময়কাল তীব্র হতাশা-সম্পর্কিত আচরণগত কর্মক্ষমতা নির্দেশ করে।

2.4 নমুনা সংগ্রহ এবং টিস্যু প্রস্তুতি

সপ্তাহ-8 পরীক্ষামূলক টার্মিনাল পয়েন্টে, গভীর অ্যানেস্থেশিয়ার জন্য ইঁদুরের 3% পেন্টোবারবিটাল সোডিয়াম (10 মিলি/কেজি) ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। চোখের বল অপসারণ রক্তপাত কৌশলের মাধ্যমে রক্তের নমুনা সংগ্রহ করা হয়েছিল। পরে সার্ভিকাল-ডিসলোকেশন ইউথানেশিয়া সঞ্চালিত হয়েছিল। ঠাণ্ডা স্বাভাবিক-স্যালাইন কার্ডিয়াক পারফিউশন সেরিব্রাল টিস্যুর অভ্যন্তরে সঞ্চালিত রক্ত ​​পরিষ্কার করে। সম্পূর্ণ মস্তিষ্কের নমুনাগুলি দ্রুত বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। পরবর্তী হিস্টোলজির জন্য 72 ঘন্টা টিস্যু-ফিক্সেশনের জন্য 4% প্যারাফর্মালডিহাইড দ্রবণের মধ্যে অর্ধেক মস্তিষ্কের টিস্যু নিমজ্জিত করা হয়েছিল। হিপ্পোক্যাম্পাল মস্তিষ্কের অঞ্চলগুলি প্রি-কুলড আইস প্ল্যাটফর্মে অবশিষ্ট মস্তিষ্কের নমুনাগুলি থেকে দ্রুত বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং তরল-নাইট্রোজেন স্টোরেজ পরিবেশের মধ্যে সংরক্ষণ করা হয়েছিল। জৈব রাসায়নিক পরিমাপের জন্য, 10 মিলিগ্রাম হিপ্পোক্যাম্পাল টিস্যুর নমুনা বরফ-স্নানের যান্ত্রিক সমজাতকরণের মধ্য দিয়ে ভর-আয়তনের অনুপাত 1:9 অনুসরণ করে প্রি-কুলড নরমাল স্যালাইনের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল। টিস্যু হোমোজেনেট 15 মিনিটের জন্য 4000 r/min এর নিচে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল এবং ELISA বায়োমার্কার পরিমাপের জন্য সুপারনাট্যান্ট ভগ্নাংশ সংগ্রহ করা হয়েছিল।

2.5 জৈব রাসায়নিক সূচক পরিমাপ

বাণিজ্যিক ELISA কিটগুলির প্রস্তুতকারকের অপারেটিং ম্যানুয়াল অনুসারে, 5‑HT এবং DA সহ মনোমাইন নিউরোট্রান্সমিটারের ঘনত্বের মান অর্জনের জন্য সিরাম এবং হিপ্পোক্যাম্পাল হোমোজেনেটের সুপারনাট্যান্ট নমুনাগুলি পরিমাপ করা হয়েছিল। হিপ্পোক্যাম্পাল হোমোজেনেট সুপারনাট্যান্টকে আরও প্রদাহজনক-মধ্যস্থ সূচক iNOS, COX-2, PGE2, প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন TNF-, IL-1, IL-18, IL-6 এবং IFN-এর পাশাপাশি পরীক্ষা করা হয়েছিল৷ অপটিক্যাল-ঘনত্ব শোষণ রিডিং মাইক্রোপ্লেট স্পেকট্রোফোটোমিটারের মাধ্যমে ক্যাপচার করা হয়েছিল। সাইটোকাইন সনাক্তকরণের আগে বিসিএ প্রোটিন-পরিমাণ নির্ধারণ কিট প্রয়োগ করে নমুনা প্রোটিন ঘনত্ব ক্যালিব্রেট করা হয়েছিল।

2.6 হিপোক্যাম্পাল হিস্টোপ্যাথলজিকাল স্টেনিং

স্থির মস্তিষ্কের টিস্যুর নমুনাগুলি প্যারাফিন মোমের মধ্যে এম্বেড করা হয়েছিল এবং 4‑μm-পুরুত্বের হিস্টোলজিক্যাল বিভাগে কাটা হয়েছিল। HE স্টেনিংয়ের জন্য: প্যারাফিন বিভাগগুলি জাইলিন ডিওয়াক্সিং, গ্রেডিয়েন্ট ইথানল হাইড্রেশন, হেমাটক্সিলিন নিউক্লিয়ার স্টেনিং, ইওসিন সাইটোপ্লাজমিক কাউন্টার-স্টেইনিং, হাইড্রোক্লোরিক-অ্যালকোহল ডিফারেন্সিয়েশন, গ্রেডিয়েন্ট ইথানল ডিহাইড্রেশন, জাইলিন ট্রান্সপারেন্সি ট্রিটমেন্ট এবং নিউট্রালিং মাউন্টের মাধ্যমে গেছে। মাইক্রোস্কোপিক পর্যবেক্ষণ হিপোক্যাম্পাল ডেন্টেট গাইরাস অঞ্চলের মধ্যে সেলুলার রূপবিদ্যা, পারমাণবিক অবস্থা এবং সাইটোপ্লাজমিক কাঠামোগত অখণ্ডতার উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করে।

Nissl staining নিউরোনাল Nissl corpuscles কে কল্পনা করে যা নিউরোনাল বায়োসিন্থেটিক কার্যকলাপ এবং কোষের জীবনীশক্তি প্রতিফলিত করে। ডিওয়াক্সড প্যারাফিন স্লাইসগুলি নিসল স্টেনিং ওয়ার্কিং সলিউশনে ইনকিউবেট করা হয়েছিল। পাতিত-জল ধোয়ার পদক্ষেপের পরে, বিভাগগুলি ডিহাইড্রেশন, স্বচ্ছতা পদ্ধতি এবং সিলিং পেয়েছে। হিপোক্যাম্পাল নিউরনের হিস্টোমরফোলজিকাল বৈচিত্র অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের অধীনে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।

2.7 ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি অ্যাসে

প্যারাফিন-এম্বেডেড হিপোক্যাম্পাল টিস্যু বিভাগগুলি ডিওয়াক্সড এবং হাইড্রেটেড ছিল। অ্যান্টিজেন পুনরুদ্ধার, অন্তঃসত্ত্বা পারক্সিডেস ব্লকিং এবং অ-নির্দিষ্ট প্রোটিন-বাইন্ডিং ব্লকিং পদক্ষেপগুলি ক্রমানুসারে প্রয়োগ করা হয়েছিল। টিস্যু স্লাইসগুলি মিশ্রিত প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলির সাথে 4 ডিগ্রী তাপমাত্রায় রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল: অ্যান্টি-জিএফএপি (1:400), অ্যান্টি-ইবা-1 (1:400), অ্যান্টি-এনএলআরপি3 (1:300), অ্যান্টি-ক্যাস্পেস-1 (1:400)। সেকেন্ডারি-অ্যান্টিবডি ইনকিউবেশনের পরে, DAB ক্রোমোজেনিক প্রতিক্রিয়া সঞ্চালিত হয়েছিল। নিউক্লিয়াস কাউন্টার-স্টেইনিং, ডিহাইড্রেশন এবং মাউন্টিং প্রক্রিয়া সম্পন্ন হয়েছিল। আলো-অণুবীক্ষণ ধারণ করা ডিজিটাল ফিল্ড-অফ-ভিউ ছবি। ইমেজ-জে ইমেজ-প্রসেসিং সফ্টওয়্যার অর্ধ-পরিমাণগতভাবে লক্ষ্য-প্রোটিন প্রকাশের তীব্রতা মূল্যায়ন করতে গড় অপটিক্যাল-ঘনত্বের মান গণনা করে।

2.8 ইমিউনোফ্লোরেসেন্স স্টেনিং

প্রস্তুত প্যারাফিন হিপ্পোক্যাম্পাল বিভাগগুলি ডিওয়াক্সিং, অ্যান্টিজেন পুনরুদ্ধার এবং ব্লকিং অপারেশন অনুভব করেছে। প্রাথমিক অ্যান্টিবডি অ্যান্টি-TLR4 (1:400) এবং অ্যান্টি-ফসফো-NF-κB p65 (1:200) প্রয়োগ করা হয়েছিল এবং চার ডিগ্রি সেলসিয়াস অবস্থায় রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল। ফ্লুরোসেন্ট-লেবেলযুক্ত সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলি আলো-রক্ষার স্থিতিতে এক ঘন্টার ইনকিউবেশনের জন্য যুক্ত করা হয়েছিল। DAPI পারমাণবিক কাউন্টার-দাগ মাউন্টিং মাধ্যমের মধ্যে অন্তর্ভুক্ত ছিল। লেজার-ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ ছবি তোলা ফ্লুরোসেন্স সংকেত। ইমেজ-জে সফ্টওয়্যার টিএলআর4 এবং p-NF-κB p65 প্রোটিন অ্যাক্টিভেশন মাত্রার প্রতিনিধিত্বকারী গড় ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা গণনা করেছে।

2.9 পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ

SPSS 26.0 পরিসংখ্যান সফ্টওয়্যার এবং গ্রাফপ্যাড প্রিজম 9.0 গ্রাফিং প্রোগ্রাম ব্যবহার করে আসল পরীক্ষামূলক ডেটা প্রক্রিয়া করা হয়েছিল। সমস্ত পরিমাণগত ফলাফলের ডেটা গড় ± স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি (\\(\\bar{x} \\pm s\\)) হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। উপযুক্ত পরিসংখ্যান পরীক্ষার মাধ্যমে আন্তঃ-গ্রুপ পরিসংখ্যানগত তুলনা করা হয়েছিল। 0.05 এর কম P-মান পরিসংখ্যানগতভাবে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য হিসাবে বিচার করা হয়েছিল; পৃ< 0.01 represented highly significant statistical distinction.

3. পরীক্ষামূলক ফলাফল

3.1 CPhGs উন্নত অ্যানহেডোনিয়া লক্ষণ এবং মনোমাইন নিউরোট্রান্সমিটার স্তর পুনরুদ্ধার করেছে

CUMS মডেলিং সূচনার আগে, বেসলাইন সুক্রোজ-অভিরুচির হার সমস্ত পরীক্ষামূলক প্রাণী দল জুড়ে কোনও সুস্পষ্ট পরিসংখ্যানগত পার্থক্য প্রদর্শন করেনি। চার-সপ্তাহের CUMS স্ট্রেস প্লাস চার-সপ্তাহের হস্তক্ষেপ চক্রের পরে, CUMS-মডেল গ্রুপ অ-স্ট্রেসড কন্ট্রোল প্রাণীর তুলনায় সুক্রোজ-অভিরুচি অনুপাত স্পষ্টভাবে হ্রাস পেয়েছে (P< 0.01), demonstrating successful establishment of anhedonia depressive‑like phenotype. Serum and hippocampal tissue 5‑HT and DA concentrations in Mod group were significantly reduced compared with Con group (P < 0.05 or P < 0.01).

মোড মডেল কোহর্টের সাথে তুলনা করে, উচ্চ-, মাঝারি- এবং কম-ডোজে CPhGs চিকিত্সা গোষ্ঠীগুলির পাশাপাশি ফ্লুওক্সেটাইন পজিটিভ গ্রুপ সুক্রোজ-অভিরুচি শতাংশ, সিরাম 5‑HT, সিরাম DA, হিপ্পোক্যাম্পাল 5‑হিপ্পাওসাম্পাল এবং ডিএপিএইচটি সামগ্রীতে বিশিষ্ট উচ্চতা তৈরি করেছে< 0.05 or P < 0.01). Pharmacological improvement effect exhibited apparent dose‑dependent tendency; high‑dose CPhGs group achieved more robust biomarker‑rescue outcome than medium‑dose and low‑dose subgroups. This set of findings illustrated CPhGs could ameliorate anhedonic behavioral performance and reverse stress‑provoked depletion of key mood‑regulating monoamine neurotransmitters inside peripheral circulation and hippocampal brain tissue.

3.2 ওপেন-ফিল্ড টেস্টে CPhGs উন্নত অনুসন্ধানমূলক কার্যকলাপ

খোলা-ক্ষেত্রের আচরণগত মূল্যায়নে, CUMS-মডেল ইঁদুরগুলি মোট চলাচলের দূরত্ব, কেন্দ্রীয়-জোনে থাকার সময় এবং নিয়ন্ত্রণ ইঁদুরের বিপরীতে কেন্দ্রীয়-অঞ্চলের প্রবেশের ফ্রিকোয়েন্সি (P< 0.01). Chronic unpredictable stress suppressed spontaneous exploratory behaviors. Following CPhGs or fluoxetine intervention, those three open‑field‑test indicators increased observably (P < 0.05 or P < 0.01). High‑dose CPhGs‑treated mice displayed 46.63 % increase of total travel distance, 127.92 % growth of central‑zone residence time compared against Mod group. Medium‑dose and low‑dose CPhGs also produced measurable but weaker improvement effects. It indicated CPhGs alleviated stress‑induced suppression of autonomous exploration activity.

3.3 CPhGs হতাশা-ভিত্তিক আচরণগত দৃষ্টান্তে অস্থিরতার সময়কে সংক্ষিপ্ত করেছে

টেল সাসপেনশন পরীক্ষা এবং জোরপূর্বক-সাঁতার পরীক্ষা আচরণগত হতাশা সনাক্ত করে, যা মূল হতাশাজনক-সদৃশ আচরণগত রিড-আউটগুলির প্রতিনিধিত্ব করে। মোড গ্রুপ টিএসটি এবং এফএসটি (পি< 0.01) relative to Con group. After drug intervention, CPhGs‑H, CPhGs‑M, CPhGs‑L and FLX groups generated statistically significant shortening of immobility durations (P < 0.05 or P < 0.01). For forced‑swim immobility time, high‑dose CPhGs brought 34.67 % reduction; medium‑dose 30.71 % reduction; low‑dose 20.78 % reduction. For tail‑suspension immobile time: CPhGs‑H achieved 35.91 % decrease. Results suggested CPhGs mitigated despair‑related passive coping behavioral patterns triggered by long‑term unpredictable stress stimulation.

3.4 সিপিএইচজি ওভার-প্রকাশিত হিপোক্যাম্পাল প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনস হ্রাস

হিপ্পোক্যাম্পাল প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন ঘনত্ব (TNF-, IL-1, IL-18, IL-6, IFN-) CUMS-মডেল প্রাণীদের নিয়ন্ত্রণ প্রতিপক্ষের তুলনায় তীব্রভাবে উন্নত ছিল (P)< 0.01). After CPhGs intervention, these pro‑inflammatory cytokine contents descended in dose‑responsive fashion. High‑dose CPhGs generated the most powerful inhibitory influence. For instance, relative to Mod group, CPhGs‑H decreased TNF‑α level by 42.93 %, lowered IL‑1β by 45.72 %, and reduced IL‑18 by 35.17 %. Medium‑dose CPhGs delivered moderate anti‑inflammatory potency, and low‑dose group exerted limited but detectable inhibitory impacts. This data demonstrated CPhGs could suppress excessive pro‑inflammatory‑cytokine release inside hippocampal tissue under chronic‑stress challenge.

3.5 CPhGs ডাউন-নিয়ন্ত্রিত হিপ্পোক্যাম্পাল ইনফ্ল্যামেটরি-মধ্যস্থ বায়োমার্কার

CUMS মডেলের ইঁদুরগুলিতে হিপোক্যাম্পাল প্রদাহজনক মধ্যস্থতাকারী iNOS, COX-2 এবং PGE2 উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে (P< 0.01). After drug intervention, CPhGs‑H, CPhGs‑M markedly diminished iNOS, COX‑2 and PGE2 concentrations (P < 0.05 or P < 0.01). Low‑dose CPhGs‑L group showed limited statistical significance for partial indicators. High‑dose CPhGs treatment group exhibited iNOS reduction rate reaching 49.55 %, COX‑2 reduction 39.58 %. Collectively, CPhGs suppressed stress‑induced up‑regulation of inflammatory‑mediator molecules inside hippocampus.

3.6 CPhGs অ্যাটেনুয়েটেড CUMS- ট্রিগারড হিপ্পোক্যাম্পাল নিউরোনাল প্যাথলজিকাল ইনজুরি

HE দাগের ফলাফল: Mod গ্রুপের হিপ্পোক্যাম্পাল ডেন্টেট-গাইরাস নিউরনগুলি গুরুতর প্যাথলজিকাল ক্ষত উপস্থাপন করেছে: বিকৃত সেলুলার বিন্যাস, নিউক্লিয়াস পাইকনোসিস, সাইটোপ্লাজমিক ভ্যাক্যুলার অবক্ষয়, বিশিষ্ট নিউরোনাল ক্ষতি প্রকাশ করে। CPhGs‑L গ্রুপ শুধুমাত্র তুচ্ছ উন্নতির প্রভাব দেখিয়েছে। মাঝারি-ডোজ এবং উচ্চ-ডোজ CPhGs স্পষ্টতই এই ধরনের রোগগত পরিবর্তনগুলিকে উল্টে দেয়; উচ্চ ডোজ CPhGs‑H গ্রুপ আংশিক চাক্ষুষ ক্ষেত্রে ফ্লুওক্সেটিন গ্রুপের তুলনায় উচ্চতর নিউরোনাল-সুরক্ষা প্রভাব প্রদর্শন করেছে।

নিসল-স্টেইনিং ফলাফল: মোড-গ্রুপ হিপ্পোক্যাম্পাল নিউরনগুলি বিশৃঙ্খল বিন্যাস, নিসল কর্পাস্কেল পরিমাণের সুস্পষ্ট হ্রাস প্রদর্শন করে, যা প্রতিবন্ধী নিউরোনাল সিন্থেটিক ফাংশন এবং কম সেলুলার জীবনীশক্তি প্রতিফলিত করে। CPhGs প্রশাসন ডোজ-নির্ভরশীলভাবে নিসল-বডি প্রাচুর্য পুনরুদ্ধার করে। CPhGs-H গ্রুপের মধ্যে নিউরোনাল অঙ্গসংস্থানবিদ্যা এবং নিসল-কর্পাস্কেল ঘনত্ব স্বাভাবিক নিয়ন্ত্রণ-গ্রুপ স্তরের কাছে পৌঁছেছে। হিস্টোপ্যাথলজিকাল অনুসন্ধানগুলি নিশ্চিত করেছে যে CPhGs দীর্ঘস্থায়ী-স্ট্রেস-মধ্যস্থতা ধ্বংসের বিরুদ্ধে হিপ্পোক্যাম্পাল নিউরনের অখণ্ডতা রক্ষা করেছে।

3.7 CPhGs নিয়ন্ত্রিত হিপ্পোক্যাম্পাল গ্লিয়াল-সেল অ্যাক্টিভেশন স্থিতি

GFAP অ্যাস্ট্রোসাইট জনসংখ্যার জন্য নির্দিষ্ট বায়োমার্কার। কন গ্রুপের সাথে তুলনা করে, মোড-গ্রুপ হিপ্পোক্যাম্পাল জিএফএপি ইতিবাচক-সংকেত তীব্রতা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (পি< 0.01), indicating massive astrocyte functional impairment induced by CUMS stress. CPhGs‑H and CPhGs‑M intervention groups distinctly elevated GFAP expression level (P < 0.05 or P < 0.01); high‑dose CPhGs‑H enhanced GFAP average optical density by 64.23 % relative to Mod group. Low‑dose CPhGs‑L generated upward trend without statistical significance.

Iba-1 প্রোটিন মার্কার মাইক্রোগ্লিয়া প্রতিনিধিত্ব করে। CUMS মডেল গ্রুপ নাটকীয়ভাবে Iba-1 পজিটিভ-অভিব্যক্তি সংকেত (P) বৃদ্ধি পেয়েছে< 0.01), implying robust microglia hyper‑activation. After CPhGs intervention, Iba‑1 expression intensity decreased dose‑dependently. CPhGs‑H produced 23.73 % reduction of Iba‑1 optical‑density value versus Mod group. It illustrated CPhGs preserved astrocyte abundance while dampening pathological microglia over‑activation inside hippocampal compartments.

3.8 CPhGs হিপ্পোক্যাম্পাল NLRP3-ইনফ্ল্যামাসোম-সম্পর্কিত-প্রোটিন প্রকাশ

ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি সনাক্তকরণ উদ্ভাসিত NLRP3 এবং ক্যাসপেস-1 প্রোটিন অভিব্যক্তি মোড-গ্রুপ হিপ্পোক্যাম্পাসের মধ্যে স্পষ্টভাবে আপ-নিয়ন্ত্রিত ছিল (P< 0.01). Following CPhGs treatment, NLRP3 and Caspase‑1 protein abundance declined dose‑responsively. High‑dose CPhGs‑H decreased NLRP3 expression by 50.00 %, lowered Caspase‑1 expression level by 57.65 %. It demonstrated CPhGs suppressed pathological NLRP3 inflammasome complex activation in CUMS‑damaged hippocampal tissue.

3.9 CPhGs চাপা TLR4/NF‑κB সিগন্যালিং পাথওয়ের অতিরিক্ত সক্রিয়করণ

ইমিউনোফ্লোরেসেন্স সনাক্তকরণ প্রমাণ করেছে যে CUMS-মডেল ইঁদুরগুলি TLR4 রিসেপ্টর এবং ফসফরিলেটেড NF‑κB p65 সাবুনিটের উল্লেখযোগ্যভাবে বর্ধিত ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা প্রদর্শন করেছে (P< 0.01). CPhGs intervention obviously reduced TLR4 and p‑NF‑κB p65 fluorescence signal strength (P < 0.05 or P < 0.01). Combined with above‑mentioned NLRP3 inflammasome‑protein detection results, these observations supported the inference: CPhGs inhibited TLR4/NF‑κB upstream signal‑cascade hyper‑activation, which sequentially restrained downstream NLRP3 inflammasome assembly and neuro‑inflammatory cascade amplification.

4. আলোচনা

প্রধান বিষণ্নতাজনিত ব্যাধি গুরুতর নিউরো-সাইকিয়াট্রিক রোগ গঠন করে। সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, বিষণ্নতার নিউরো-ইনফ্লেমেটরি তত্ত্বটি ব্যাপক গবেষণার মনোযোগ আকর্ষণ করেছে। ক্রনিক বারবার মানসিক চাপ কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্রের ভিতরে সহজাত-ইমিউন-সিস্টেম সক্রিয়করণকে ট্রিগার করতে পারে। হিপ্পোক্যাম্পাস, একটি মস্তিষ্কের অঞ্চল যা স্ট্রেস অপমানের জন্য অত্যন্ত ঝুঁকিপূর্ণ, মেজাজ মড্যুলেশন, পুরষ্কার প্রক্রিয়াকরণ এবং মেমরি ফাংশনের সাথে শক্তভাবে সম্পর্কযুক্ত। টেকসই স্ট্রেস স্টিমুলেশনের অধীনে, হিপ্পোক্যাম্পাল গ্লিয়াল-সেল হোমিওস্টেসিস ভেঙে যায়। হাইপার-অ্যাক্টিভেটেড মাইক্রোগ্লিয়া এবং ক্ষতিগ্রস্ত অ্যাস্ট্রোসাইটগুলি প্রচুর পরিমাণে প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন নিঃসরণ করে, যা নিউরোনাল স্ট্রাকচারাল ইনজুরি, মনোমাইন-নিউরোট্রান্সমিটার মেটাবলিক ডিসঅর্ডার, অবশেষে হতাশার মতো আচরণগত উত্থানকে উন্নীত করে।

ঐতিহ্যবাহী ভেষজ-ওষুধ থেকে প্রাপ্ত সক্রিয় প্রাকৃতিক পণ্য বহু-লক্ষ্যযুক্ত ফার্মাকোলজিক্যাল সুবিধার অধিকারী, যা এন্টিডিপ্রেসেন্ট ড্রাগ আবিষ্কারের জন্য প্রতিশ্রুতিশীল প্রার্থীর সম্পদ হয়ে উঠেছে। CPhG হল স্বাক্ষর জৈব-সক্রিয় উপাদান থেকে বিচ্ছিন্নসিস্তানচেঔষধি ঔষধি. এই গবেষণাটি CUMS-প্ররোচিত দীর্ঘস্থায়ী-স্ট্রেস ডিপ্রেশন মাউস মডেল তৈরি করেছে, ব্যাপকভাবে ইন-ভিভো অ্যান্টিডিপ্রেসেন্ট-এর মতো গ্রেডিয়েন্ট-ডোজে CPhG-এর কার্যকারিতা যাচাই করে। আচরণগত পরীক্ষামূলক ফলাফলগুলি প্রমাণ করেছে যে CPhG-এর চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে অ্যানহেডোনিয়া লক্ষণ, উন্নত অনুসন্ধানমূলক কার্যকলাপ, এবং হতাশা-সম্পর্কিত অচলতার সময় হ্রাস করেছে- হতাশা-মডেল ইঁদুরের মধ্যে, স্পষ্ট ডোজ-প্রভাব পারস্পরিক সম্পর্ক দেখায়।

মনোমাইন নিউরোট্রান্সমিটার হাইপোথিসিস হল ক্লাসিক ডিপ্রেশন-প্যাথোজেনেসিস তত্ত্ব। সেরোটোনিন এবং ডোপামিন মানসিক স্থিতিশীলতা, পুরষ্কার-প্রতিক্রিয়া উপলব্ধি এবং প্রেরণা-সম্পর্কিত আচরণগত মড্যুলেশন কভার করে সমালোচনামূলক নিয়ন্ত্রক ভূমিকা গ্রহণ করে। CUMS চাপ আমাদের মডেল প্রাণীদের মধ্যে সিরাম এবং হিপ্পোক্যাম্পাল টিস্যুর মধ্যে 5‑HT এবং DA ঘনত্বের সুস্পষ্ট পতনের দিকে পরিচালিত করে। CPhGs হস্তক্ষেপ কার্যকরভাবে এই দুটি মনোমাইন নিউরোট্রান্সমিটার স্তর পুনরুদ্ধার করেছে। এই ফলাফল সম্পর্কিত পূর্বে প্রকাশিত গবেষণা প্রতিবেদনের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণসিস্তানচেমস্তিস্কের মনোমাইন নিউরোট্রান্সমিটার মডিউলেটিং করে।

আরও জৈব রাসায়নিক বায়োমার্কার পরীক্ষায় দেখা গেছে যে CUMS একাধিক প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনস (TNF‑, IL‑1, IL‑18, IL‑6, IFN‑) প্লাস প্রদাহজনক মধ্যস্থতাকারীর (iNOS, COpp2alm-এর মধ্যে) শক্তিশালী উচ্চতাকে প্ররোচিত করেছে। CPhG-এর হস্তক্ষেপ উল্লেখযোগ্যভাবে এই ধরনের প্রদাহজনক ওভার-অভিব্যক্তি স্থিতিকে বিপরীত করেছে। হিস্টোপ্যাথলজিকাল HE এবং Nissl স্টেনিং স্বজ্ঞাতভাবে প্রমাণিত CPhGs চাপ-সৃষ্ট হিপ্পোক্যাম্পাল-নিউরনের ক্ষতি এবং সুরক্ষিত নিউরোনাল আকারগত অখণ্ডতা প্রশমিত করেছে।

গ্লিয়াল-সেলের জনসংখ্যা নিউরো-প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াগুলির মধ্যস্থতাকারী কেন্দ্রীয় অংশগ্রহণকারী হিসাবে কাজ করে। অ্যাস্ট্রোসাইটগুলি নিউরোট্রান্সমিটার পুনর্ব্যবহার, রক্ত-মস্তিষ্ক-বাধা কাঠামোগত স্থিতিশীলতা এবং নিউরোনাল পুষ্টি সরবরাহ বজায় রাখে। মাইক্রোগ্লিয়া মস্তিষ্কের প্যারেনকাইমার ভিতরে বসবাসকারী সহজাত-ইমিউন প্রভাবক কোষ হিসাবে কাজ করে। দীর্ঘস্থায়ী চাপ মাইক্রোগ্লিয়া প্যাথলজিকাল হাইপার-অ্যাক্টিভেশনের পাশাপাশি অ্যাস্ট্রোসাইটের ক্ষতি বা কার্যকরী অক্ষমতাকে উস্কে দেয়। আমাদের ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি ডেটা নির্দেশ করে যে CPhGs চিকিত্সা GFAP-পজিটিভ অ্যাস্ট্রোসাইটের ঘনত্বকে উন্নত করেছে, এদিকে হিপোক্যাম্পাসে Iba-1-চিহ্নিত ওভার-অ্যাক্টিভেটেড মাইক্রোগ্লিয়ার পরিমাণ কমিয়েছে। এই গ্লিয়াল-সেল-ফেনোটাইপ নিয়ন্ত্রক সম্পত্তি আংশিকভাবে CPhG-এর নিউরো-প্রতিরক্ষামূলক এবং অ্যান্টি-ডিপ্রেশন ফার্মাকোলজিকাল ক্ষমতাকে আন্ডারলি করতে পারে।

NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম নিউরো-ইনফ্ল্যামেটরি ক্যাসকেড মধ্যস্থতাকারী গুরুত্বপূর্ণ আণবিক প্ল্যাটফর্মের প্রতিনিধিত্ব করে। এর অ্যাক্টিভেশন ডাউনস্ট্রিম IL-1 এবং IL-18 প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনগুলির পরিপক্কতা এবং নিঃসরণকে চালিত করে। TLR4/NF‑κB সংকেত অক্ষ NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম অ্যাক্টিভেশনের জন্য অপরিহার্য আপস্ট্রিম প্রাইমিং সংকেত হিসাবে কাজ করে। TLR4 রিসেপ্টর স্টিমুলেশন NF-κB সাবুনিট ফসফোরিলেশন এবং নিউক্লিয়ার ট্রান্সলোকেশনকে উৎসাহিত করে, আরও ট্রান্স-অ্যাক্টিভেট করে NLRP3, প্রো-IL-1 জিন ট্রান্সক্রিপশন। আমাদের বর্তমান গবেষণায়, CUMS স্ট্রেস TLR4, ফসফরিলেটেড NF-κB p65, NLRP3 এবং ক্যাসপেস-1 প্রোটিন এক্সপ্রেশনের জন্য সমসাময়িক বর্ধনের সূত্রপাত করেছে। CPhGs হস্তক্ষেপ এই সম্পূর্ণ সিগন্যাল ক্যাসকেডের সক্রিয়করণকে স্পষ্টভাবে বাধা দেয়। তাই আমরা এই উপসংহারে পৌঁছেছি যে CPhGs TLR4/NF-κB-মধ্যস্থ NLRP3 প্রদাহজনক অ্যাক্টিভেশনকে রোধ করে আংশিকভাবে নিউরো-প্রদাহজনিত আঘাতকে উপশম করে।

একসাথে নেওয়া, আমাদের পশু-মডেল পরীক্ষামূলক প্রমাণ যান্ত্রিক মডেলকে সমর্থন করে: CPhGs দুটি প্রাথমিক মাত্রার মাধ্যমে CUMS-প্ররোচিত বিষণ্ণ ইঁদুরগুলিতে অ্যান্টিডিপ্রেসেন্ট-সদৃশ প্রভাব তৈরি করে: (1) মেজাজ-সম্পর্কিত মনোমাইন নিউরোট্রান্সমিটারের হোমিওস্ট্যাসিস পুনরুদ্ধার করা (5‑DAHT); (2) হিপ্পোক্যাম্পাল গ্লিয়াল-সেল হোমিওস্ট্যাসিস মডিউল করা এবং TLR4/NF-κB-চালিত NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম-নির্ভর নিউরো-ইনফ্ল্যামেটরি প্যাথলজিকাল ক্যাসকেডকে দমন করা।

এই তদন্তের বেশ কয়েকটি সীমাবদ্ধতা বিবেচনার যোগ্য। এই কাজটি শুধুমাত্র প্রাণী-স্তরের ইন-ভিভো পরীক্ষাগুলিকে বাস্তবায়িত করেছে। আমরা সেলুলার-স্তরের যান্ত্রিক বৈধতা বা মানব ক্লিনিকাল ট্রায়াল করিনি। অতএব, মানব-বিষণ্নতা থেরাপির প্রতি অনুবাদমূলক অনুমান বিচক্ষণ থাকা উচিত। এছাড়াও, এই গবেষণাটি মিশ্র CPhGs নির্যাসের মধ্যে পৃথক মনোমার যৌগগুলির (ইচিনাকোসাইড, ভার্বাস্কোসাইড) অবদানকে বিচ্ছিন্ন করেনি। ভবিষ্যত গবেষণা কোষ-সংস্কৃতি যান্ত্রিক যাচাইকরণ, ব্যক্তি-উপাদান কার্যকলাপ তুলনা, সেইসাথে প্রাথমিক মানব-বিষয় পাইলট পর্যবেক্ষণে মনোনিবেশ করতে পারে।

5. উপসংহার

Cistanche phenylethanol glycosides (CPhGs) C57BL/6 ইঁদুরের দীর্ঘস্থায়ী অপ্রত্যাশিত মৃদু-স্ট্রেস-উস্কে বিষণ্নতার মতো আচরণগত ফেনোটাইপগুলির বিরুদ্ধে উল্লেখযোগ্য অ্যান্টিডিপ্রেসেন্ট-সদৃশ ফার্মাকোলজিক্যাল অ্যাকশন তৈরি করে। এর থেরাপিউটিক-সম্পর্কিত প্রক্রিয়াগুলি সিরাম এবং হিপ্পোক্যাম্পাল সেরোটোনিন এবং ডোপামিন নিউরোট্রান্সমিটারের মাত্রা পুনরুদ্ধার, হিপ্পোক্যাম্পাল নিউরোনাল স্ট্রাকচারের অখণ্ডতা সংরক্ষণ, অ্যাস্ট্রোসাইট-মাইক্রোগ্লিয়া কার্যকরী ভারসাম্যের মড্যুলেশন, সেইসাথে TRPNF/4RNF/κ-এর দমনের সাথে যুক্ত। ইনফ্ল্যামাসোম-মধ্যস্থ নিউরো-ইনফ্ল্যামেটরি প্যাথলজিকাল ক্যাসকেড। এই প্রাক-ক্লিনিকাল পশু অধ্যয়নটি CPhG-এর আরও বিকাশের জন্য প্রাকৃতিক থেরাপিউটিক সহায়ক পদার্থ বা কার্যকরী-খাদ্য উপাদান হিসাবে বিষণ্নতা-লক্ষণের উন্নতির লক্ষ্যে পরীক্ষামূলক রেফারেন্স সরবরাহ করে।

তথ্যসূত্র

রেন এল, শাও ওয়াইটি, কিন এসএইচ। লক্ষ্য শনাক্তকরণ এবং বিষণ্নতাজনিত ব্যাধিতে স্যাপোনিন এ এর ​​প্রভাবের উপর অধ্যয়ন। Nat Prod Res Dev, 2024, 36:44-51.

ফ্যান L, Peng Y, Wang JW, et al. সিস্তানচে টিউবুলোসার ডালপালা থেকে মোট গ্লাইকোসাইডগুলি হতাশার মতো আচরণকে উপশম করে: ফাইটোকেমিক্যাল এবং অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার দ্বিমুখী মিথস্ক্রিয়া। ফাইটোমেডিসিন, 2021, 83:153471।

ফ্যান এল, পেং ওয়াই, চেন এক্সএন, এট আল। ফাইটোকেমিক্যাল কম্পোজিশন, ফার্মাকোকিনেটিক্স, এবং নেটওয়ার্ক ফার্মাকোলজির সমন্বিত বিশ্লেষণ সিস্তানচে ডেসার্টিকোলা এবং সি. টিউবুলোসার কান্ডের মধ্যে পার্থক্য অনুসন্ধান করার জন্য অ্যান্টিডিপ্রেসেন্ট কার্যকলাপের উপর ভিত্তি করে। খাদ্য ও কার্যকারিতা, 2022,13:8542-8557।

Yirmiya R, Rimmerman N, Reshef R. একটি মাইক্রোগ্লিয়াল রোগ হিসাবে বিষণ্নতা। স্নায়ুবিজ্ঞানের প্রবণতা, 2015, 38:637-658।

জিয়া এক্সএন, গাও জেডএইচ, হু এইচএল। বিষণ্নতায় মাইক্রোগ্লিয়া: বর্তমান দৃষ্টিকোণ। বিজ্ঞান চীন-জীবন বিজ্ঞান, 2021, 64:911-925।

Wu B, Gan AN, Wang RX, et al. আলপিনিয়া অক্সিফিলা মিক। উদ্বায়ী তেল হতাশাজনক আচরণকে প্রশমিত করে এবং TLR4-মধ্যস্থিত MyD88/NF-κB সংকেত পথকে বাধা দিয়ে CUMS-উন্মুক্ত ইঁদুরের নিউরোইনফ্লেমেশনকে বাধা দেয়। জার্নাল অফ কেমিক্যাল নিউরোঅ্যানটমি, 2023,130:102270।