Pinocembrin Nrf2/HO-1 সিগন্যালিং পাথওয়ে পার্ট 1 সক্রিয়করণের মাধ্যমে ইনফার্ক-পরবর্তী হার্ট ফেইলিওর কমিয়ে দেয়

অনুগ্রহ করে যোগাযোগ করুনoscar.xiao@wecistanche.comআরও তথ্যের জন্য

বিমূর্ত

পটভূমি:অক্সিডেটিভ স্ট্রেস হৃদযন্ত্রের ব্যর্থতার অগ্রগতির সাথে জড়িত একটি গুরুত্বপূর্ণ কারণ। পিনোসেমব্রিন পোস্ট-ইনফার্ক হার্ট ফেইলিউর (পিআইএইচএফ) এবং অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াগুলিকে উন্নত করতে সক্ষম হয়েছিল কিনা তা তদন্ত করার জন্য বর্তমান গবেষণাটি করা হয়েছিল।

আরো জানতে এখানে ক্লিক করুন

পদ্ধতি:মায়োকার্ডিয়াল ইনফার্কশন প্ররোচিত করার জন্য ইঁদুরের বাম অগ্রবর্তী অবরোহী ধমনী বন্ধন করা হয়েছিল এবং পরবর্তীতে দীর্ঘস্থায়ী হৃদযন্ত্রের ব্যর্থতা তৈরির জন্য 6 সপ্তাহের জন্য উত্থাপিত হয়েছিল। তারপরে পিনোসেমব্রিন 2 সপ্তাহের জন্য প্রতি অন্য দিন দেওয়া হয়েছিল। ইকোকার্ডিওগ্রাফি, ওয়েস্টার্ন ব্লট, ম্যাসনের দাগ, জৈব রাসায়নিক পরীক্ষা, ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি এবং ফ্লুরোসেন্স দ্বারা প্রভাবগুলি মূল্যায়ন করা হয়েছিল। ভিট্রোতে, আমরা প্রক্রিয়াগুলি আরও সাক্ষ্য দেওয়ার জন্য H9c2 কার্ডিওমায়োসাইটস এবং কার্ডিয়াক মায়োফাইব্রোব্লাস্টগুলিকেও সংস্কৃতি করেছি।

ফলাফল:আমরা দেখতে পেয়েছি যে পিনোসেমব্রিন প্রশাসনের মাধ্যমে কার্ডিয়াক ফাংশনের পিআইএইচএফ-প্ররোচিত অবনতি উল্লেখযোগ্যভাবে প্রশমিত হয়েছিল। এছাড়াও, পিনোসেমব্রিন চিকিত্সাটি কোলাজেন জমা এবং বর্ধিত ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়াল গ্রোথ ফ্যাক্টর রিসেপ্টর 2 এর সাথে ইনফার্ক বর্ডার জোনে অ্যাটেনুয়েটেড অ্যাপোপটোসিস, যা টিস্যুতে প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন হার্টের (ROS) প্রজাতির হ্রাস দ্বারা প্রমাণিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের উন্নতির সাথে সম্পর্কিত ছিল। এবং সিরামে ম্যালোন্ডিয়ালডিহাইড (এমডিএ), এবং সুপারঅক্সাইড ডিসমুটেজ (এসওডি) বৃদ্ধি। এটির সাথে পারমাণবিক ফ্যাক্টর এরিথ্রয়েড 2-সম্পর্কিত ফ্যাক্টর 2 (Nrf2)/হিম অক্সিজেনেস-1(HO-1) পথের আপ-রেগুলেশন ছিল। ভিট্রো পরীক্ষায় আমরা দেখতে পেলাম যে নির্দিষ্ট Nrf2 ইনহিবিটর উল্লেখযোগ্যভাবে পিনোসেমব্রিনের ফলে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোসিস, অ্যান্টি-ফাইব্রোসিস এবং নিওভাসকুলারাইজেশনের প্রভাবগুলিকে উল্টে দিয়েছে, যা আরও নির্দেশ করে যে পিনোসেমব্রিন দ্বারা PIHF-এর উন্নতি একটি Nrf2/HO-তে ছিল{{11} পথ-নির্ভর পদ্ধতি।

Cistanche রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা উন্নত করতে পারে

উপসংহার:Pinocembrin ROS স্ক্যাভেঞ্জিং এবং Nrf2/HO-1 পাথওয়ে অ্যাক্টিভেশনের মাধ্যমে PIHF এর ফলে কার্ডিয়াক ফাংশন এবং রিমডেলিং উন্নত করে যা কোলাজেন ফাইবার জমা এবং অ্যাপোপটোসিসকে আরও কমিয়ে দেয় এবং অ্যাঞ্জিওজেনেসিসকে সহজতর করে।

কীওয়ার্ড:পিনোসেমব্রিন, হার্ট ফেইলিউর, অক্সিডেটিভ স্ট্রেস, Nrf2/HO-1

ভূমিকা

হার্ট ফেইলিউর (HF), হার্টের গঠনগত এবং/অথবা কার্যকরী বৈকল্যের ফলে বিভিন্ন টার্মিনাল ক্লিনিকাল সিনড্রোম দ্বারা চিহ্নিত, এটি একটি বিশ্বব্যাপী স্বাস্থ্যের বোঝা হিসাবে রয়ে গেছে, যার প্রধান কারণ হিসাবে মায়োকার্ডিয়াল ইনফার্কশন (MI) (Ziaeian and Fonarow 2016; Galli and Fonarow) Lombardi 2016; Rengo et al.2013)। এইচএফ-এ থেরাপিতে এবং যত্নের মানের ক্ষেত্রে প্রচুর অগ্রগতি অর্জন করা সত্ত্বেও, সারা বিশ্বে প্রতি বছর 37.7 মিলিয়ন ব্যক্তির আনুমানিক প্রবণতা রয়েছে, যার সাথে এইচএফ রোগ নির্ণয়ের 5 বছর পর 50 শতাংশ মৃত্যুহার রয়েছে (গো এট আল .2014)। বর্তমান সংশয় আংশিকভাবে দায়ী হতে পারে যে পোস্ট-ইনফার্ক এইচএফ (PIHF) বিভিন্ন ধরণের প্যাথোফিজিওলজিকাল মেকানিজম নিয়ে গঠিত যেখানে বর্তমান থেরাপিউটিক পদ্ধতিগুলি সম্পূর্ণভাবে উল্লেখ করতে সক্ষম নয়।

জমা হওয়া গবেষণায় দেখা গেছে যে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস (OS) প্রধানত PIHF এর রোগগত অগ্রগতির সাথে জড়িত (Dubois-Deruy et al.2020; Ma et al. 2019; Bubb et al.2017; Habtemariam 2019) OS, প্রধানত একটি দ্বারা উপস্থাপিত হাইড্রোক্সিল র‌্যাডিক্যাল, সুপারঅক্সাইড, নাইট্রিক অক্সাইড, ইত্যাদি যুক্ত ফ্রি র‌্যাডিকেল/রিঅ্যাকটিভ অক্সিজেন প্রজাতির (ROS) অত্যধিক সঞ্চয় (Dubois-Deruy et al. 2020; Habtemariam 2019), লিপিডক্সের ক্ষতির উদ্রেক করতে সক্ষম হতে প্রমাণিত হয়েছে। , প্রোটিন, এবং ডিএনএ, অর্গানেল ডিসঅর্ডার সহ, প্রদাহ, মায়োসাইটগুলিতে অ্যাপোপটোসিস এবং ইন্টারস্টিশিয়াল ফাইব্রোসিস সুপারভেনিং (ডুবোইস-ডেরুই এট আল.2020; বুব এট আল.2017; হারমিডা এট আল। 2018)। ROS-এর একাধিক ক্ষতিকারক প্রভাবের কারণে, PIHF থেরাপিতে অ্যান্টিঅক্সিডেন্টগুলিকে বিবেচনায় নেওয়া হয়েছে যার প্রক্রিয়াগুলি সরাসরি ROS স্ক্যাভেঞ্জিং এবং/অথবা অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিরক্ষার উদ্দীপনা যার মধ্যে রয়েছে গ্লুটাথিওন, সুপারঅক্সাইড ডিসম্যুটেজ (এসওডি), ক্যাটালেস ইত্যাদি। Habtemar-iam 2019)। যাইহোক, এটা দুঃখজনক যে কিছু অ্যান্টিঅক্সিডেন্টের প্রয়োগ, না ভিটামিন E(Lee et al.2005) বা resveratrol(Made et al. 2015; Olesen et al. 2014), কার্ডিওভাসকুলার রোগের থেরাপিতে সন্তুষ্টি পূরণ করতে ব্যর্থ হয়, কার্ডিয়াক ফাংশন উন্নতিতে ব্যর্থতার দ্বারা প্রমাণিত। অতএব, পিআইএইচএফ থেরাপিতে আরও দক্ষ অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রয়োজন।

Pinocembrin (Pino)(রাসায়নিক গঠন চিত্র.1A-এ দেখানো হয়েছে) হল একটি প্রাকৃতিক ফ্ল্যাভোনয়েড যৌগ, যা মধু, প্রোপোলিস এবং অন্যান্য গাছপালা (Lan et al.2015; Rasul et al.2013) থেকে বের করা যেতে পারে। কৃত্রিম সংশ্লেষণ (কোস্টা এবং লেইটাও 2011), অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি, অ্যান্টিব্যাকটেরিয়াল, অ্যান্টি এবং অ্যান্টিক্যান্সার প্রভাব (রাসুল এট আল.2013; ইয়ে এট আল.2019), জোর দেওয়া অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রভাব সহ (কিম এট আল.2020; সাংওয়েনি এট আল .2020)। যেমন পূর্বে প্রদর্শিত হয়েছে, পিনোর ফেনোলিক কাঠামো সরাসরি ROS নির্মূলের জন্য দায়ী এবং সেইসাথে ফেনোলিক এবং ননফেনলিক উভয় কাঠামো যা অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিরক্ষাকে তীব্র করে তোলে বিভিন্ন রোগ, যেমন নিউরোডিজেনারেটিভ রোগ, এথেরোস্ক্লেরোসিস, ডক্সোরুবিসিন-প্ররোচিত কার্ডিওমায়োসাইট বিষাক্ততা (সাংওয়েনি এট আল। 2020; সাং এট আল। 2012; লিউ এট আল।2014)। যাইহোক, মায়োকার্ডিয়াল ইনফার্কশন এবং এইচএফ-এর জন্য বেশ কয়েকটি অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্লিনিকাল ব্যবহারে রূপান্তর করার জন্য অবৈধ বা অপর্যাপ্ত, PIHF-এর থেরাপিতে পিনোর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রভাব পরিপূর্ণ হতে পারে কিনা তা খারাপভাবে বোঝা যায় না। এইভাবে এই গবেষণাটি করা হয়েছিল যে পিনোর প্রশাসন PIHE-এর উপর অভিনন্দনমূলক প্রভাব ফেলতে পারে কিনা, একটি উপন্যাস হওয়ার প্রতিশ্রুতি ধারণ করে, বা প্রভাবশালী না হলেও অন্তত সহায়ক চিকিত্সা।

পদ্ধতি এবং উপকরণ

প্রাণী মডেল এবং পরীক্ষা প্রোটোকল

56টি পুরুষ স্প্রাগ-ডাউলি ইঁদুর, চীন থ্রি গর্জেস বিশ্ববিদ্যালয়ের প্রাণী পরীক্ষা কেন্দ্র থেকে কেনা,

উহান নং 3 হাসপাতালের পশু প্রশাসনে বেড়ে উঠেছেন। সমস্ত পরীক্ষা-নিরীক্ষা আনুষ্ঠানিকভাবে অনুমতি দেওয়া হয়েছিল এবং কার্ডিওলজির হুবেই কী ল্যাবরেটরিতে সঞ্চালিত হয়েছিল, যা ইউএস ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট অফ হেলথ (এনআইএইচ পাবলিকেশন নং৷{1}}, 1996 সালে সংশোধিত) দ্বারা প্রকাশিত ল্যাবরেটরি অ্যানিম্যালসের যত্ন এবং ব্যবহারের নির্দেশিকা মেনে চলেছিল।

ইঁদুররা প্রাথমিকভাবে লেফট অ্যান্টিরিয়র ডিসেন্ডিং করোনারি আর্টারি (এলএডি) লাইগেশন বা শ্যাম সার্জারি পেয়েছে। সংক্ষেপে, ইঁদুরকে 3 শতাংশ পেন্টোবারবিটাল (2 মিলি/কেজি; সিগমা-অ্যালড্রিজ, সেন্ট লুইস, ইউএসএ, ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল) দ্বারা অবেদন করা হয়েছিল, তারপরে শ্বাসনালী ইনটিউবেশন এবং শ্বাসযন্ত্রের সহায়তা (জোয়ারের ভলিউম: 5-10 মিলি, হার: 70 বার/মিনিট)। পরবর্তী হার্ট এক্সপোজার সঞ্চালিত হয়েছিল এবং LAD 7-0 মনোফিলামেন্ট নাইলন সেলাই দ্বারা বন্ধন করা হয়েছিল। ইলেক্ট্রোকার্ডিওগ্রামের I লিডে এপেক্সকর্ডিস বা ST-সেগমেন্ট উচ্চতার ফ্যাকাশে হওয়ার ঘটনা MI এর আবেশকে নির্দেশ করে। LAD লাইগেশন ব্যতীত শ্যাম অপারেশনটি অভিন্ন পদ্ধতির মধ্য দিয়ে গেছে। পেনিসিলিন (200,000 IU) অপারেশনের পর এক সপ্তাহের জন্য দিনে একবার ইন্ট্রামাসকুলারভাবে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল।

Afterward, the rats were carefully raised for 6 weeks to produce PIHF. Rats were then randomly split into 4 groups:(i) sham+saline (sham group);(i)sham+Pino group;(ii)LAD ligation+saline(HF group);(iv)LAD ligation+Pino(HF+Pino group). Pinocembrin(5 mg/kg, purity>98 শতাংশ; সিগমা-অ্যালড্রিজ) বা একই পরিমাণ স্যালাইন 2 সপ্তাহের জন্য প্রতি অন্য দিন লেজের শিরার মাধ্যমে শিরায় ইনজেকশন করা হয়েছিল। ডোজটি পূর্ববর্তী গবেষণায় উল্লেখ করা হয়েছে (Lan et al.2017)। প্রোটোকল Fig.1B এ চিত্রিত করা হয়েছে।

কন্ট্রোল পজিটিভ কন্ট্রোল ইঁদুরে 3টি গ্রুপ রয়েছে: শ্যাম প্লাস স্যালাইন (শাম গ্রুপ); এলএডি লাইগেশন প্লাস স্যালাইন (এইচএফ গ্রুপ); LAD ligation প্লাস enalapril (HF প্লাস ACEI গ্রুপ)। এইচএফ প্লাস এসিইআই গ্রুপের ইঁদুরগুলিকে 20 মিলিগ্রাম/কেজি এনালাপ্রিল মৌখিকভাবে খাওয়ানো ছাড়া ইঁদুরগুলি সংশ্লিষ্ট অপারেশনগুলি করেছে।

ইকোকার্ডিওগ্রাফি পরিমাপ

একটি আল্ট্রাসাউন্ড ইমেজিং সিস্টেম (Vevo 2100, Visual Sonics Inc., Toronto, Canada) ব্যবহার করে ট্রান্সথোরাসিক ইকোকার্ডিওগ্রাফির মাধ্যমে কার্ডিয়াক ফাংশনগুলি মূল্যায়ন করা হয়েছিল, যেমনটি পূর্বে আমাদের গ্রুপে রিপোর্ট করা হয়েছিল (Fo et al.2020)। এন্ড-ডায়াস্টোলিক স্টেজ (LVIDd) এবং এন্ড-সিস্টোলিক স্টেজে (LVIDs), বাম ভেন্ট্রিকুলার এন্ড-সিস্টোলিক এবং এন্ড-ডায়াস্টোলিক ভলিউম (LVESV এবং LVEDV) এ বাম ভেন্ট্রিকুলার অভ্যন্তরীণ মাত্রা কমপক্ষে 3টির জন্য দ্বি-মাত্রিক এম-মোড ইকোকার্ডিওগ্রাম দ্বারা রেকর্ড করা হয়েছিল। প্রতিটি ইঁদুরের জন্য পরপর চক্র। বাম ভেন্ট্রিকুলার ইজেকশন ভগ্নাংশ (LVEF) এবং ভগ্নাংশ শর্টনিং (FS), যা সিস্টোলিক ফাংশন প্রতিফলিত করে, পরবর্তীতে গণনা করা হয়েছিল।

নমুনা প্রস্তুতি

পিনো এবং ইকোকার্ডিওগ্রাফি পরীক্ষার পরে, ইঁদুরগুলিকে আবার অবেদন দেওয়া হয়েছিল। লেজের শিরা থেকে ইথিলেনেডিয়ামিনেটেট্রাসেটিক অ্যাসিড (ইডিটিএ)-এ 2 মিলি-এর বেশি শিরাস্থ রক্ত ​​ধারণ করা হয়েছিল - 15 মিনিটের জন্য 3000 r/মিনিট গতিতে ক্রমাগত সেন্ট্রিফিউগেশন সহ ভ্যাকুয়াম রক্ত-সংগ্রহকারী টিউব এবং 4 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায়, তারপরে বিচ্ছিন্নতা। সিরাম সুপারন্যাট্যান্ট এবং সংরক্ষণ 24 ঘন্টার বেশি সময়ের জন্য শতাংশ প্যারাফর্মালডিহাইড।

ম্যাসন এর দাগ

ইনফার্ক বর্ডার জোনে কোলাজেন জমা শনাক্ত করতে আমরা ম্যাসনের স্টেনিং করেছি। প্যারাফর্মালডিহাইড-স্থির ভেন্ট্রিকলগুলি প্যারাফিন দ্বারা এম্বেড করা হয়েছিল এবং তারপরে 5-μm বিভাগে কাটা হয়েছিল। বিভাগগুলি পরবর্তীতে ম্যাসন ট্রাইক্রোম দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল যেখানে কোলাজেন নীল রঙে, মায়োকার্ডিয়াম গোলাপী এবং নিউক্লিয়াস কালো রঙে রঞ্জিত হয়েছিল। কোলাজেন জমার অনুপাত চিত্র জে সফ্টওয়্যার (এনআইএইচ, বেথেসদা, এমডি) × 200 ম্যাগনিফিকেশন দ্বারা গণনা করা হয়েছিল।

ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল বিশ্লেষণ

ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়াল গ্রোথ ফ্যাক্টর রিসেপ্টর 2 (VEGFR2) এর ঘনত্ব মূল্যায়ন করার জন্য ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল বিশ্লেষণ সম্পাদিত হয়েছিল যার আপগ্র্যুলেশন অ্যাঞ্জিওজেনেসিসকে উন্নীত করেছিল যা পুনঃনির্মাণের ক্ষয়করণে কল্যাণকর এবং গুরুত্বপূর্ণ ছিল (রেঙ্গো এট আল। 2013)। ভেন্ট্রিকুলার অংশগুলি ম্যাসন স্টেনিংয়ের মতো তৈরি করা হয়েছিল, তারপরে ডিপ্যারাফিনাইজড এবং রিহাইড্রেট করা হয়েছিল। তারপর বিভাগগুলি তাপ-মধ্যস্থিত অ্যান্টি-জেন পুনরুদ্ধার পেয়েছে এবং 3 শতাংশ H, O দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল এন্ডোজেনাস পারক্সিডেস ব্লক করার জন্য, 1 ug/mL VEGFR2 অ্যান্টিবডি (Abcam, ab9530) 4 ডিগ্রীতে 12 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেশন করা হয়েছিল। তারপরে, অংশগুলিকে ঘোড়া-মূলা পেরোক্সিডেস (HRP)-লেবেলযুক্ত সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (1:200, সার্ভিস, G1213) দ্বারা 50 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রিতে ইনকিউব করা হয়েছিল। উপরন্তু, 3,3'-ডায়ামিনোবেনজিডিন ইতিবাচক দাগ তৈরি করতে ব্যবহার করা হয়েছিল যা ছিল গাঢ় রঙে দেখানো হয়েছে। অবশেষে, VEGFR2 এর গড় অপটিক্যাল ঘনত্ব চিত্র-প্রো প্লাস 6.0 সফ্টওয়্যার (মিডিয়া সাইবারনেটিক্স, ইউএসএ) দ্বারা বিশ্লেষণ এবং গণনা করা হয়েছিল।

টার্মিনাল-ডিঅক্সিনিউক্লিওটিডিল ট্রান্সফারেজ-মিডিয়াটেড নিক-এন্ড লেবেলিং (TUNEL) অ্যাস

Apoptosis পরবর্তীকালে TUNEL অ্যাস দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। পূর্বে তৈরি করা প্যারাফিন ভর যা ভেন্ট্রিকুলার টিস্যু এম্বেড করে TUNEL অ্যাসয়ের জন্য অন্যান্য স্লাইসগুলিতে কাটা হয়েছিল, তারপরে বাণিজ্যিক অ্যাস কিট (Roche, Switzerland;11684817910) প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে TUNEL স্টেনিং করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, ভেন্ট্রিকুলার বিভাগগুলি TUNEL রিএজেন্টের সংস্পর্শে এসেছিল, যেখানে TdT এবং dUTP 1:9 অনুপাতে, ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য মিশ্রিত হয়েছিল, প্রোটিনেস কে এবং কোষের ঝিল্লি ফেটে যাওয়ার পরে। অবশেষে, ফ্লুরোসেন্ট চিত্রগুলি 530 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে পরিলক্ষিত হয়েছিল যা 450 এনএম (×400 বিবর্ধন) এর নির্গমন তরঙ্গদৈর্ঘ্য দ্বারা ট্রিগার হয়েছিল। প্রতিটি গ্রুপে ভেন্ট্রিকুলার টিস্যুগুলির অ্যাপোপটোটিক হার চিত্র সফ্টওয়্যার দ্বারা বিশ্লেষণ এবং গণনা করা হয়েছিল।

পশ্চিম ফোঁটার

আমরা ওয়েস্টার্ন ব্লট প্রয়োগ করি অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াগুলি ব্যাখ্যা করার জন্য যার দ্বারা পিনো পিআইএইচএফকে উন্নত করেছে। প্রোটিন নমুনা নিষ্কাশন এবং প্রস্তুতির পদ্ধতিগুলি পূর্বে আমাদের গবেষণায় রিপোর্ট করা (চেন এট আল.2020a) অনুরূপ। ঝিল্লিগুলি পারমাণবিক ফ্যাক্টর এরিথ্রয়েড 2-সম্পর্কিত ফ্যাক্টর 2(Nrf2), হেম অক্সিজেনেসের বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডি দিয়ে পরীক্ষা করা হয়েছিল{{ 4}}(HO-1;1:2000, Abcam, ab189491),p53(1:1000,সেল সিগন্যালিং প্রযুক্তি,2524S), BCL-2 (1:1000, সেল সিগন্যালিং প্রযুক্তি,2870P) ,bax (1:1000, Abcam, ab32503), ক্লিভড ক্যাসপেস-3(1:1000, সেল সিগন্যালিং প্রযুক্তি, 9664 T), কোলাজেন I(1:1000, অ্যাফিনিটি, AF7001), গ্লিসারালডিহাইড-3- ফসফেট ডিহাইড্রোজেনেস (GAPDH, সার্ভিস, GB12002), এইচআরপি-লেবেলযুক্ত সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (পরিষেবা, G1213 এবং G1214) এবং কেমিলুমিনেসেন্স সনাক্তকরণ বিকারক দ্বারা পরবর্তী ভিজ্যুয়ালাইজেশন সহ। ব্লট ইমেজগুলি অবশেষে ইমেজ জে সফ্টওয়্যার দ্বারা বিশ্লেষণ এবং পরিমাপ করা হয়েছিল।

H9c2 কার্ডিওমায়োসাইট সংস্কৃতি এবং ভিট্রোতে নিষ্পত্তি ইঁদুরের হার্ট ভেন্ট্রিকুলার থেকে প্রাপ্ত H9c2 কার্ডিওমায়োসাইট, যা আমেরিকান টাইপ কালচার কালেকশন (CRL-1446) থেকে ক্রয় করা হয়েছিল, পিনো ইন ভিট্রোর দ্বারা প্রয়োগ করা প্রভাবগুলি আরও যাচাই করার জন্য সংস্কৃতি করা হয়েছিল। H9c2 কার্ডিওমায়োসাইটগুলি e Dulbecco-এর পরিবর্তিত ঈগলস মিডিয়াম (DMEM)/ F12 মিডিয়ামে সংষ্কৃত হয়েছিল যেটিতে 10 শতাংশ ভ্রূণের বোভাইন সিরাম (সিজিকিং, হ্যাংঝো, চীন) 37 ডিগ্রি তাপমাত্রা এবং 95 শতাংশ বায়ু এবং 5 শতাংশ CO কোষ রয়েছে৷ 90 শতাংশে বাড়তে বাড়তে 6-ওয়েল প্লেটে বীজ বপন করা হয়েছিল, উপরন্তু, 25 uM আইসোপ্রেনালাইন (ISO) ধারণকারী একটি সিরাম মাধ্যম পরবর্তীতে 3 টি কূপে স্বাভাবিক মাধ্যম হিসাবে প্রতিস্থাপিত হয়েছিল যাতে 48 ঘণ্টার জন্য কোষগুলিকে এইচএফ অবস্থার অনুকরণ করা যায়। HF সহানুভূতিশীল টোনের অতিরিক্ত সক্রিয়তা এবং -অ্যাড্রেনারজিক রিসেপ্টর ROS(Velusamy et al.2020) তৈরি করে। তারপর কোষগুলিকে 6টি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল:(i)কন্ট্রোল গ্রুপ;(ii) কন্ট্রোল মিডিয়াম 4 ঘন্টার জন্য 25 μM পিনোর সাথে যোগ করা হয়েছে （নিয়ন্ত্রণ প্লাস পিনো গ্রুপ）; (i）) 4 ঘন্টার জন্য 25 μM পিনো এবং 5 μM ML385 দ্বারা সহ-ইনকিউটেড মাধ্যম নিয়ন্ত্রণ করুন（Nrf2 ইনহিবিটর; MCE, নিউ জার্সি, USA)(কন্ট্রোল প্লাস পিনো প্লাস ML385 গ্রুপ);(iv)ISO ​​গ্রুপ; v. 25 μM পিনো （ISO প্লাস পিনো গ্রুপ） দ্বারা 4-h ইনকিউবেশন সহ ISO মাধ্যম; vi ISO প্লাস 25 μM পিনো প্লাস 5 μM ML385 গ্রুপ। পূর্ববর্তী অধ্যয়ন বা নির্দেশাবলী উল্লেখ করা ওষুধের ঘনত্ব এবং সেবনের সময় (জিন এট আল.2015; অলিভেইরা এট আল.2017)।

নবজাতক ইঁদুরের কার্ডিয়াক মায়োফাইব্রোব্লাস্ট সংস্কৃতি এবং বিস্তার পরীক্ষা

নবজাতক ইঁদুরের কার্ডিয়াক মায়োফাইব্রোব্লাস্টস (সিএমএফ) কোলাজেন নিঃসরণে পিনোর প্রভাবগুলি তদন্ত করার জন্য সংস্কৃতিবান হয়েছিল। CMFগুলিকে 3 দিন বয়সী নবজাতক ইঁদুর ব্যবহার করে আলাদা করা হয়েছিল, পূর্বে প্রদর্শিত পদ্ধতিগুলি উল্লেখ করে (Cui et al. 2021)। বিচ্ছিন্ন এবং কিমা করা হৃৎপিণ্ডগুলিকে 0.125 শতাংশ ট্রিপসিন দ্বারা হজম করা হয়েছিল এবং তারপরে একটি ককটেল রয়েছে যার মধ্যে রয়েছে 0.25 শতাংশ ট্রিপসিন এবং 0.08 শতাংশ কোলাজেনেজ, কয়েকবার সেন্ট্রিফিউগেশন এবং পেট্রি ডিশে ট্রান্সপ্লান্ট করা হয়েছিল। সুপারনাট্যান্ট থেকে কোষ। তারপর মিডিয়াটি 90 মিনিটের আনুগত্যের পরে H9c2 কার্ডিওমায়োসাইট সংস্কৃতির জন্য ব্যবহৃত সিরাম মাধ্যম দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয়েছিল। CMFগুলি H9c2 কার্ডিওমায়োসাইটগুলির মতো অভিন্ন নিষ্পত্তি পেয়েছে৷ এছাড়াও প্রতিটি কূপে 1.5×10 ডিগ্রী ঘনত্বে পৌঁছানোর সময় একটি মাইক্রোপ্লেট রিডারকে কাজে লাগিয়ে CMF-এর বিস্তার শনাক্ত করতে আমরা একটি কোষ গণনা কিট-8(CCK-8) অ্যাস (Dojindo, Japan) প্রয়োগ করেছি 450 এনএম একটি তরঙ্গদৈর্ঘ্য, যেখানে একটি উচ্চ মান একটি বর্ধিত বিস্তার কার্যকলাপ নির্দেশ করে।

ROS সনাক্তকরণ

ROS স্ক্যাভেঞ্জ করার জন্য পিনোর ক্ষমতা ফ্লুরোসেন্ট প্রোব ডাইহাইড্রোইথিডিয়াম (DHE; বেয়োটাইম, সাংহাই, চীন) দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল। ডিএইচএল, যা DMSO-তে দ্রবীভূত হয়েছিল, হিমায়িত অংশগুলির জন্য 5 μM এ পাতলা করা হয়েছিল বা নির্দেশাবলী অনুসারে একই ঘনত্বে পাতলা করার জন্য সিরাম মিডিয়ামে যুক্ত করা হয়েছিল। প্যারাফর্মালডিহাইড-স্থির হৃৎপিণ্ডগুলি হিমায়িত করা হয়েছিল এবং তারপরে 4-μm অংশ পর্যন্ত কাটা হয়েছিল৷ বিভাগ বা H9c2 কার্ডিওমায়োসাইটগুলি 37 ডিগ্রি তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য DHE দ্রবণের সাথে সহ-ইনকিউবেট করা হয়েছিল, পরে একটি উল্টানো ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোস্কোপ (IX70; অলিম্পাস, টোকিও, জাপান) দ্বারা চিত্রিত হয়েছিল। সংক্ষেপে, নিউক্লিয়াস যেটি ডিএনএ এবং আরএনএ দিয়ে পূর্ণ ছিল তা নিউক্লিক অ্যাসিড এবং ডিএইচই-এর মধ্যে একটি সখ্যতার কারণে স্বতন্ত্র লাল রঙে রঞ্জিত হয়েছিল। উপরন্তু, একটি শক্তিশালী ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা ROS এর আরও সঞ্চয়কে নির্দেশ করে।

জৈব রাসায়নিক পরীক্ষা

জৈব রাসায়নিক পরীক্ষাগুলি সিরাম এবং সেলুলার সুপারনাট্যান্টে সিরাম BNP, SOD, এবং ম্যালন্ডিয়ালডিহাইড (MDA) এর পরিবর্তনগুলি তদন্ত করার জন্য সঞ্চালিত হয়েছিল যা যথাক্রমে HF ফেনোটাইপ এবং অক্সিডেন্ট প্রতিরক্ষা নির্দেশ করে। প্রস্তুতকারকের নির্দেশাবলী (জিয়ানচেং, নানজিং, চীন) অনুযায়ী সংশ্লিষ্ট জৈব রাসায়নিক অ্যাস কিট ব্যবহার করে ঘনত্ব পরিমাপ করা হয়েছিল।

এই নিবন্ধটি চেন এট আল থেকে নেওয়া হয়েছে। মোল মেড (2021) 27:100 https://doi.org/10.1186/s10020-021-00363-7