পার্ট 2: ক্যানাবিনয়েড রিসেপ্টর টাইপ 2 অর্কেস্ট্রেটিং-ক্যাটেনিন সিগন্যালিং-এর মাধ্যমে কিডনি ফাইব্রোসিস প্রচার করে

যোগাযোগ: emily.li@wecistanche.com

চিত্র 4| -আরেস্টিন 1(-arr1)/SRC প্রোটো-অনকোজিন (Src) কমপ্লেক্স মধ্যস্থতা করে ক্যানাবিনয়েড রিসেপ্টর টাইপ 2(CB2)-প্ররোচিত অ্যাক্টিভেশন-ক্যাটেনিন (-বিড়াল) সংকেত। (a) প্রতিনিধি গ্রাফগুলি -arr1 বা Src-এর সাথে CB2-এর বাঁধন দেখায়। মানবকিডনিপ্রক্সিমালনলাকার(HKC-8) কোষগুলিকে একা অ্যামিনো কাইলিন্ডোল (AM1241; 10 uM) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল বা 24 ঘন্টার জন্য XL-001(10 uM) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। পুরো-কোষ লাইসেটগুলিকে CB2 এর বিরুদ্ধে একটি অ্যান্টিবডি দিয়ে ইমিউনোপ্রিসিপিটেড করা হয়েছিল এবং -arr1 এবং Src-এর বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডি দিয়ে ব্লট করা হয়েছিল। (চলবে)

রেনাল ফাইব্রোসিসের জন্য সিস্টানচে ভালো

CB2 -arrestin 1/Src/ -catenin পাথওয়ের প্রচারের মাধ্যমে Wnt সংকেতকে প্রশস্ত করে

চিত্র 6a-c-তে দেখানো হয়েছে, CB2 বা Wnt1-এর একটোপিক অভিব্যক্তি -arrestin 1 এবং phospho-Src (Tyr15) এর আপগ্র্যুলেশনকে প্ররোচিত করেছে, Src-এর একটি সক্রিয় রূপ। -arrestin l এবং phospho-Src(Tyr416) ​​এর অভিব্যক্তি স্তরগুলি CB2 এবং Intl-এর সহ-এক্সপ্রেশন দ্বারা আরও উন্নত হয়েছিল। তারপরে আমরা CB2 এবং Wnt1-এর সহ-এক্সপ্রেশন সহ UIRI ইঁদুরে সিটু হাইব্রিডাইজেশন এবং ইমিউনোফ্লোরোসেন্স দ্বারা -ক্যাটেনিন সহ CB2-এর জন্য cos-ট্রেনিং করি। প্রায় সমস্ত CB2-পজিটিভ টিউবুলার কোষ -ক্যাটেনিন প্রকাশ করে, যা CB2 পাথওয়েতে -ক্যাটেনিন-এর সম্ভাব্য ভূমিকাকে বোঝায় (চিত্র 6d)। আমরা পরবর্তীতে ইমিউনোফ্লোরেসেন্স স্টেনিং দ্বারা -আরেস্টিন 1 এবং সক্রিয় -ক্যাটেনিন এর অভিব্যক্তি পরীক্ষা করেছি। চিত্র 6e তে দেখানো হয়েছে, CB2 তাদের অভিব্যক্তি বাড়ানোর জন্য Wntl-এর সাথে সহযোগিতা করেছে। অধিকন্তু, UIRI ইঁদুরে, CB2-অথবা Wntl-প্ররোচিত -catenin-এর সক্রিয়করণ এবং এর লক্ষ্য MMP-7 এবং Snail একে অপরের সাথে সহ-অভিব্যক্তির মাধ্যমে আরও বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র 6f-i)। ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি এবং ওয়েস্টার্ন ব্লট অ্যানালাইসিস দ্বারা মূল্যায়ন করা কিম-1-এর অনুরূপ অভিব্যক্তি প্যাটার্ন এছাড়াও প্রমাণ করে যে CB2 Wnt1-প্ররোচিত নলাকার আঘাতে (চিত্র 6e, f, এবং j) একটি synergistically উদ্দীপক প্রভাব ফেলেছিল।

সিস্তানচেউন্নত করতে পারেনকিডনিফাংশন

এক্সোজেনাস CB2 এবং Wnt1 সিনারজিস্টিকভাবে ফলিক অ্যাসিড-প্ররোচিত নেফ্রোপ্যাথিতে ক্যাটেনিন সিগন্যালিং এবং রেনাল ফাইব্রোসিসকে প্ররোচিত করে

বিস্তারিত পরীক্ষামূলক নকশা চিত্র 7a এ দেখানো হয়েছে। ফলিক অ্যাসিড-প্ররোচিত চিত্র 7b এবং c-তে দেখানো হয়েছেকিডনি, CB2 বা Wntl-এর একটোপিক এক্সপ্রেশন CB2-এর আপগ্র্যুলেশনকে প্ররোচিত করেছে, এবং CB2 এবং Wntl-এর সহ-অভিব্যক্তির দ্বারা CB2 মাত্রা আরও উন্নত হয়েছে। তারপরে আমরা -arrestin 1 এবং phospho-Src(Tyr416) ​​এর অভিব্যক্তি পরীক্ষা করেছি। চিত্র 7d-g-এ দেখানো হয়েছে, বহিরাগত CB2 এবং Wnt1-এরেস্টিন 1 এবং ফসফো-এসআরসি উভয়েরই সিনারজিস্টিকভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। তদ্ব্যতীত, সক্রিয় -ক্যাটেনিনের ইমিউনোস্টেইনিং দেখিয়েছে যে CB2 বা Wntl -ক্যাটেনিন সক্রিয়করণ বাড়িয়েছে এবং তাদের একটি সমবায় প্রভাব রয়েছে (চিত্র 7d)। একই রকম ফলাফল পাওয়া গেছে যখন সক্রিয়-ক্যাটেনিন এবং এর নিম্নমুখী লক্ষ্য MMP-7 এবং শামুকের অভিব্যক্তিকে পশ্চিমী দাগ (চিত্র 7h-k) দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। Kim-1, fibronectin, এবং a-SMA-এর অভিব্যক্তিগত মাত্রাগুলি CB2 বা Wnt1-এর একটোপিক অভিব্যক্তি দ্বারা আপগ্রেড করা হয়েছিল এবং তাদের সহ-অভিব্যক্তি দ্বারা আরও উন্নত হয়েছিল (চিত্র 7h এবং l, এবং 8a-c)। অনুরূপ ফলাফল প্রাপ্ত হয়েছিল যখন ফাইব্রোনেক্টিন, কোলাজেন I, কিম-1, এবং ম্যাসনের ট্রাইক্রোম স্টেনিং মূল্যায়ন করা হয়েছিল (চিত্র 8d)। এই ফলাফলগুলি আরও পরামর্শ দেয় যে CB2 -আরেস্টিন 1/Src-প্ররোচিত -ক্যাটেনিন পাথওয়েতে সক্রিয় ভূমিকা পালন করে।

সিস্তানচেউন্নত করতে পারেনকিডনিফাংশন

অ্যারেস্টিন 1-এর নকডাউন AM1241-প্ররোচিত UIRI ইঁদুরে -ক্যাটেনিন সিগন্যালিং এবং রেনাল ফাইব্রোসিসকে সাহায্য করে

তারপরে আমরা AM1241 (চিত্র 9a) দিয়ে ইনজেকশন দেওয়া UIRI ইঁদুরে -arrestin 1-এর vivo সাইলেন্সিং-এ ছোট হেয়ারপিন RNA-এর মধ্যস্থতার ভূমিকা পরীক্ষা করেছি। -আরেস্টিন এল-এর নীরব কার্যকারিতা পরিমাণগত রিয়েল-টাইম পিসিআর (চিত্র 9 বি) দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল। AM1241 এর প্রশাসন সিরাম ক্রিয়েটিনিন এবং রক্তে ইউরিয়া নাইট্রোজেনের মাত্রা আরও বাড়িয়েছে; যাইহোক, -arrestin 1-এর নকডাউন AM1241 প্রশাসনের (চিত্র 9c এবং d) পরেও UIRI ইঁদুরগুলিতে এই বৃদ্ধিগুলিকে উল্লেখযোগ্যভাবে বাধা দেয়। পর্যায়ক্রমিক অ্যাসিড-শিফ স্টেনিংয়ের পরিমাণ (পরিপূরক চিত্র S3) দেখায় যে -আরেস্টিন 1-এর নকডাউন AM1241-প্ররোচিত নলাকার আঘাত (চিত্র 9e) থেকে ব্যাপকভাবে সুরক্ষিত। ইমিউনোস্টেইনিং ফলাফলগুলি দেখায় যে -আরেস্টিন 1 এর নকডাউন AM1241-অনিয়ন্ত্রিত সক্রিয় -ক্যাটেনিন এক্সপ্রেশনকে বাধা দেয় (চিত্র 9f)। তদ্ব্যতীত, ফাইব্রোনেক্টিন, কোলাজেন I, এবং কিম-1-এর দাগের ফলাফল আরও নিশ্চিত করেছে -আরেস্টিন 1 এর সাথে হস্তক্ষেপের প্রতিরক্ষামূলক ভূমিকাকিডনিফাইব্রোজেনেসিস(চিত্র 9g)। সক্রিয় -ক্যাটেনিন, এমএমপি-7, শামুক, ফাইব্রোনেক্টিন, এ.-এসএমএ, বা কিম-1-এর অভিব্যক্তি যখন ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ (চিত্র 9h-n) দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল তখন অনুরূপ ফলাফল পরিলক্ষিত হয়েছিল। মজার বিষয় হল, আমরা লক্ষ্য করেছি যে -আরেস্টিন 1 নকডাউন CB2 এক্সপ্রেশনকে বাধা দেয়, যা CB2, -আরেস্টিন 1 এবং -ক্যাটেনিন (চিত্র 9h এবং o) এর মধ্যে একটি সক্রিয়করণ লুপের পরামর্শ দেয়। ম্যাসনের ট্রাইক্রোম স্টেনিং এবং ফাইব্রোটিক অঞ্চলের পরিমাপ আরও প্রমাণিত হয়েছে - অ্যারেস্টিন 1 সাইলেন্সিং শক্তিশালীভাবে বাধা AM1241- ত্বরান্বিত করেছেরেনালফাইব্রোসিস(চিত্র 9g এবং p)।

CB2 হল -ক্যাটেনিন-এর একটি ডাউনস্ট্রিম টার্গেট এবং -ক্যাটেনিন-এর সাথে একটি অ্যাক্টিভেশন লুপ সহজতর করে

মানব এবং মাউস উভয় CB2 জিনের প্রবর্তক অঞ্চলে নিখুঁত পুটেটিভ টি-সেল ফ্যাক্টর / লিম্ফয়েড বর্ধক-বাইন্ডিং ফ্যাক্টর বাইন্ডিং সাইটগুলির একাধিক কপি ছিল (চিত্র 10a)। HKC-8 কোষগুলি এন-টার্মিনাল ট্রাঙ্কেটেড, ফ্ল্যাগ-ট্যাগযুক্ত, গঠনমূলকভাবে সক্রিয় করা হয়েছে

সিস্তানচেউন্নত করতে পারেনকিডনিফাংশন