অলিভ লিফ এক্সট্র্যাক্ট (OLE) ক্যালসিয়াম-সেন্সিং রিসেপ্টর সক্রিয়করণের মাধ্যমে প্রতিবন্ধী ভ্যাসোপ্রেসিন-প্ররোচিত অ্যাকোয়াপোরিন-2 ট্র্যাকিং

আরও তথ্যের জন্য. যোগাযোগ:tina.xiang@wecistanche.com

ভাসোপ্রেসিন(AVP) পানির ব্যাপ্তিযোগ্যতা বাড়ায়রেনালঅ্যাকোয়াপোরিন-2 (AQP2) পাচার নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে নালী সংগ্রহ করা। হাইপারটেনশন এবং অনুপযুক্ত অ্যান্টিডিউরেটিক হরমোন ক্ষরণ (SIADH) সহ বেশ কিছু ব্যাধি জলের হোমিওস্ট্যাসিসের অস্বাভাবিকতার সাথে যুক্ত। এটি দেখানো হয়েছে যে নির্দিষ্ট কিছু ফাইটোকম্পাউন্ড মানব স্বাস্থ্যের জন্য উপকারী। এখানে, ভিট্রো এবং ভিভো মডেল ব্যবহার করে অলিভ লিফ এক্সট্রাক্ট (OLE) এর প্রভাবগুলি মূল্যায়ন করা হয়েছে। কনফোকাল গবেষণায় দেখা গেছে যে OLE MCD4 কোষ এবং ইঁদুরের প্লাজমা ঝিল্লিতে ভ্যাসোপ্রেসিন-প্ররোচিত AQP2 ট্রান্সলোকেশনকে বাধা দেয়কিডনি. OLE এর সাথে ইনকিউবেশন অসমোটিক ওয়াটার ব্যাপ্তিযোগ্যতা সহগ (Pf) এর AVP-নির্ভর বৃদ্ধিকে হ্রাস করে। OLE এর সম্ভাব্য প্রভাবকগুলিকে ব্যাখ্যা করার জন্য, অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়ামের মূল্যায়ন করা হয়েছিল। OLE ক্যালসিয়াম সেন্সিং রিসেপ্টর (CASR) সক্রিয় করার মাধ্যমে অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়াম বৃদ্ধি করে। NPS214। , একটি নির্বাচনী CaSR ইনহিবিটার, AVP-নির্ভর জলের ব্যাপ্তিযোগ্যতার উপর OLE-এর প্রতিরোধমূলক প্রভাবকে বাতিল করেছে। ভিভো পরীক্ষায় দেখা গেছে যে OLE এর সাথে চিকিত্সা CaSR mRNA এর অভিব্যক্তি বাড়ায় এবং AQP2-টার্গেটিং miRNA-137 বৃদ্ধির সমান্তরালে AQP2 mRNA হ্রাস করে। একসাথে, এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে OLE CaSR এর উদ্দীপনার মাধ্যমে ভাসোপ্রেসিনের ক্রিয়াকে বিরোধিতা করে যা নির্দেশ করে যে এই নির্যাসটি অস্বাভাবিক CaSR সংকেত দ্বারা চিহ্নিত ব্যাধিগুলি হ্রাস করার জন্য উপকারী হতে পারে এবং রেনাল জলের পুনর্শোষণকে প্রভাবিত করে।

জলপাই গাছের পাতাগুলি বিভিন্ন রোগ নিরাময়ের জন্য ঐতিহ্যগত প্রতিকার হিসাবে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়, বিশেষ করে ভূমধ্যসাগরীয় দেশগুলিতে। আধান বা ভেষজ চা প্রস্তুত করার জন্য পাতাগুলি সাধারণত মানুষের খাদ্যের নির্যাস বা গুঁড়া হিসাবে খাওয়া হয়। রাসায়নিক বৈশিষ্ট্য বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে জলপাই গাছের পাতায় বেশ কিছু বায়োঅ্যাকটিভ যৌগ রয়েছে যা বিপাকীয় সিন্ড্রোম, ডিসলিপিডেমিয়া এবং উচ্চ রক্তচাপের মতো কিছু রোগের ক্ষেত্রে উপকারী প্রভাব ফেলতে পারে। অপরিহার্য উচ্চ রক্তচাপের রোগীদের ক্ষেত্রে OLE রক্তচাপ হ্রাস করে এবং গ্লাইসেমিয়া এবং ক্যালসেমিয়া কিছুটা কমিয়ে দেয়। অলিউরোপেইন, হাইড্রোক্সিটাইরোসল এবং টাইরোসলের মতো অসংখ্য পলিফেনল সবুজ জলপাই পাতার নির্যাস (OLE)5-এ সমৃদ্ধ পাওয়া গেছে এবং তারা অক্সিডেটিভ স্ট্রেস দ্বারা চিহ্নিত কিছু রোগ প্রতিরোধে জড়িত বলে পরিচিত। তাই, গত কয়েক বছরে, গবেষণার বিভিন্ন ক্ষেত্রে বিজ্ঞানীদের মধ্যে জলপাই পাতার নির্যাসের সম্ভাব্য উপকারী প্রভাবগুলি তদন্ত করার আগ্রহ বাড়ছে৷ OIE অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়াম গতিবিদ্যা পরিবর্তন করে ম্যালিগন্যান্ট মেসোথেলিওমা কোষগুলিতে একটি উল্লেখযোগ্য অ্যান্টিপ্রোলিফেরেটিভ প্রভাব প্রদর্শন করেছে, সম্ভবত T-কে লক্ষ্য করে৷ Ca2 প্লাস চ্যানেল টাইপ করুন। মজার বিষয় হল, OLE কে স্বতঃস্ফূর্তভাবে হাইপারটেনসিভ ইঁদুরের (SHR) মধ্যে জেনেটিক হাইপারটেনশনের উপর অ্যান্টিহাইপারটেনসিভ প্রভাব দেখা গেছে, যা ভাস্কুলার ফাংশন* এর উন্নতির সাথে সম্পর্কিত। অতিরিক্ত জলের পুনঃশোষণ রক্তচাপের প্যাথোজেনেসিসে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। হাইপারটেনসিভ রোগীদের মধ্যে, জলপাই পাতার নির্যাস দিয়ে চিকিত্সা করা হলে, রক্তচাপ হ্রাসের সাথে যুক্ত বিভিন্ন প্রদাহজনক কারণের একটি উল্লেখযোগ্য হ্রাস পাওয়া গেছে। এছাড়াও, অত্যধিক জল ধরে রাখা লিভার সিরোসিস, হার্ট ফেইলিওর এবং অনুপযুক্ত অ্যান্টিডিউরেটিক হরমোন নিঃসরণ (SIADH) এর মতো বিভিন্ন ব্যাধিকে চিহ্নিত করে। শরীরের জলের হোমিওস্টেসিস শক্তভাবে নিয়ন্ত্রিত হয় অ্যান্টিডিউরেটিক হরমোন ভ্যাসোপ্রেসিন (AVP) দ্বারা যা ডিহাইড্রেটেড অবস্থায় নিঃসৃত হয়। AVP এর বেসোল্যাটারাল মেমব্রেনে স্থানীয়কৃত তার জ্ঞানীয় V2R রিসেপ্টরকে আবদ্ধ করেরেনালএর মাধ্যমে প্রধান কোষগুলি সিএএমপি সংকেত পথকে সক্রিয় করে যার ফলে অ্যাকোয়াপোরিন-2(AQP2) একটি অন্তঃকোষীয় পুল থেকে এপিকাল প্লাজমা মেমব্রেনে বাহক ভেসিকেল স্থানান্তরিত হয় যেখানে জল পুনঃশোষণ ঘটে। একটি আণবিক স্তরে, বেশ কয়েকটি কারণ রেনাল জলের ভারসাম্য পরিবর্তন করতে পারে, লুমিনাল ক্যালসিয়ামের একটি উচ্চ স্তর ক্যালসিয়াম-সেন্সিং রিসেপ্টর (CaSR)1,12 সক্রিয়করণের মাধ্যমে স্বল্পমেয়াদী ভ্যাসোপ্রেসিন-নির্ভর AOP2 পাচারকে নিয়ন্ত্রণ করে। অন্যদিকে, মানুষের প্রস্রাব থেকে বিচ্ছিন্ন রেনাল প্রক্সিমাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষে CaSR সক্রিয়করণ, সাইটোসোলিক ক্যালসিয়ামের উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি ঘটায় এবং ফোরসকোলিন (FK) দ্বারা নির্গত সিএএমপি বৃদ্ধিকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করে, যা অ্যাডেনিলেট মোরওভার3 সিভিক্লেসের প্রত্যক্ষ অ্যাক্টিভেটর। , রেনাল সংগ্রহ নালী MCD4 কোষে, স্থিরভাবে জলের চ্যানেল AOP2 প্রকাশ করে, CaSR-এর উদ্দীপনা সেরিন 256-এ AQP2 ফসফোরিলেশনে CAMP-নির্ভর বৃদ্ধিকে ক্ষীণ করে যা ভাসোপ্রেসিন দ্বারা সক্রিয় সংকেত ট্রান্সডাকশন ক্যাসকেডের একটি গুরুত্বপূর্ণ ঘটনা এবং অবশেষে জলের পারমিবিলিটি বৃদ্ধি পায়। ,15 উপরন্তু, মধ্যেকিডনিঅভ্যন্তরীণ মেডুলা মাউস কিডনি থেকে স্লাইস, ক্যালসিমিমেটিক NPS-R568 এর সাথে CaSR সক্রিয় করার ফলে AQP2-টার্গেটিং miRNA-137, CaSR সিগন্যাল পাথওয়ে এবং AQP এর মধ্যে একটি শক্ত ইন্টারপ্লে নিশ্চিত করে-137 {4}}নির্ভর জলের ব্যাপ্তিযোগ্যতা। নির্যাস দিয়ে ইঁদুরের চিকিৎসা করা হয়। আমরা প্রমাণ সরবরাহ করি যে OLE চিকিত্সা রেনাল কোষে ভাসোপ্রেসিন প্রতিক্রিয়াকে প্রতিহত করে, যা আংশিকভাবে এর মূত্রবর্ধক প্রভাবকে ব্যাখ্যা করতে পারে। মজার বিষয় হল, এই প্রভাবটি CaSR-এর OLE-প্ররোচিত অ্যাক্টিভেশনের সাথে সম্পর্কিত বলে মনে হয়, একটি রিসেপ্টর যা ভ্যাসোপ্রেসিন রিসেপ্টরl2 এর সাথে নেতিবাচক ইন্টারপ্লে বলে পরিচিত।

কিডনির ওপর cistanche-এর প্রভাব আরও জানুন

ফলাফল

MCD4 কোষে ভাসোপ্রেসিন-প্ররোচিত AQP2 ফাংশনে OLE-এর প্রভাব। ভাসোপ্রেসিন-নির্ভর AQP2 ফাংশনে OLE এর সম্ভাব্য জড়িত থাকার তদন্ত করতে,রেনালনালী MCD4 কোষ সংগ্রহ, স্থিরভাবে ভাসোপ্রেসিন রিসেপ্টর 2(V2R) এবং মানব AQP2 প্রকাশ করে, একটি পরীক্ষামূলক মডেল হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল18। কন-ফোকাল স্টাডিজ (চিত্র 1A) প্রকাশ করেছে যে, dDAVP চিকিত্সা করা কোষের সাথে তুলনা করে, যেখানে AQP2 স্টেনিং অ্যাপিক্যাল প্লাজমা ঝিল্লিতে স্থানীয়করণ করে, OLE এর সাথে চিকিত্সা dDAVP এর সাথে উদ্দীপনা দ্বারা প্ররোচিত AOP2 এর ঝিল্লি স্থানীয়করণকে বাধা দেয়। এই পর্যবেক্ষণগুলির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, OLE চিকিত্সা অস্থায়ী অসমোটিক প্রতিক্রিয়ার dDAVP-প্ররোচিত বৃদ্ধিকে দুর্বল করে (চিত্র.1B-তে 1/t হিসাবে নির্দেশিত)(OLE/dDAVP=88.70±1৷{15}} শতাংশ , n=292 কোষ বনাম dDAVP=206.8±5.49 শতাংশ ,n=186 কোষ;p<0.001).altogether these="" findings="" suggested="" that="" treatment="" with="" ole="" reduced="" principal="" cell="" permeability="" by="" preventing="" aqp2="" translocation="" from="" an="" intracellular="" vesicle="" pool="" to="" the="" apical="" plasma="" membrane.="" vasopressin-induced="" aop2="" trafficking="" is="" controlled="" by="" intracellular="" camp="" which="" stimulated="" the="" camp-dependent="" kinase="" (pka)1.="" further,="" to="" evaluate="" the="" functionality="" of="" the="" v2r="" in="" the="" presence="" of="" ole="" in="" terms="" of="" camp="" production,="" permeable="" 8-br-camp="" was="" used="" as="" an="" external="" source="" of="" camp.="" treatment="" with="" 8-br-camp="" abolished="" the="" inhibitory="" effect="" elicited="" by="" ole="" on="" osmotic="" water="" permeability(ole/8-br-camp="188.7±3.56%,n=293" cells="" vs="" ole="85.93±2.27%," n="238"><0.001).therefore, to="" evaluate="" whether="" treatment="" with="" ole="" regulates="" aqp2="" trafficking="" by="" fine-tuning="" intracellular="" camp="" level,="" fluorescence="" resonance="" energy="" transfer(fret)technology="" was="" applied.="" compared="" to="" untreated="" cells="" (ctr),="" normalized="" netfret="" signals="" are="" reduced="" with="" ddavp="" stimulation(ddavp="77.86±3.13%," n="173" cells="" vs="" ctr="100.00±3.56%,n=276" cells;=""><0.00l; fig.2a),consistent="" with="" a="" significant="" increase="" of="" intracellular="" camp.="" conversely,="" treatment="" with="" ole="" prevented="" the="" ddavp="" dependent="" decrease="" of="" netfront="" signals="" consistent="" with="" a="" decrease="" of="" the="" vasopressin="" dependent="" camp="" release="" (ole/ddavp="92.97±3.46%," n="211" cells="" vs="" ddavp="77.86±3.13%," n="173" cells;=""><0.05; fig.2a).treatment="" with="" ole="" alone="" did="" not="" affect="" the="" intracellular="" cgmp="" level="" compared="" with="" cells="" left="" under="" basal="" conditions(ole="96.15±3.80%," n="184" cells="" vs="" ctr="100.00±3.56%,n=276" cells;=""><0.05).besides, western="" blotting="" studies(fig.2b)revealed="" that="" treatment="" with="" ole="" significantly="" reduced="" the="" ddavp="" induced="" increase="" of="" aqp2="" phosphorylation="" at="" serine="" 256(aqp2-ps256),="" indicating="" that="" aqp2="" phosphorylation="" and="" trafficking,="" in="" response="" to="" ole,="" are="" dependent="" on="" camp-pka="" function.="" the="" phosphorylation="" level="" of="" aqp2-ps256="" in="" response="" to="" ole="" was="" not="" statistically="" different="" from="" the="" control="" even="" though="" it="" tended="" to="" be="" reduced.="" to="" gain="" insight="" into="" the="" molecular="" signals="" underlying="" the="" action="" of="" ole,="" intracellular="" calcium="" dynamics="" were="" evaluated.="" mcd4="" cells="" endogenously="" express="" a="" functional="" calcium-sensing-receptor(casr)20,="" which="" plays="" an="" important="" role="" in="" controlling="" aqp2="" expression="" and="" trafficking'4.long="" term="" incubation="" with="" ole(0.1="" mg/ml)slightly="" increased="" the="" intracellular="" calcium="" level="" compared="" with="" untreated="" cells(fig.3;="" ole="209.0±13.45" nm,n="128" cells="" ys="" ctr="163.3±8.957" nm,n="97cells:"><0.05).co-incubation with="" ole(0.1="" mg/ml)="" and="" the="" selective="" nps2143(1um)antagonist="" of="" the="" casr="" abolished="" the="" ole="" induced="" intracellular="" calcium="" mobilization(ole/nps2143="168.8±11.43" nm,n="144" cells="" ys="" ole="209.0+13.45" nm.="" n="128"><0.05).to dissect="" further="" intracellular="" calcium="" signals="" in="" response="" to="" ole,="" functional="" experiments="" were="" also="" performed="" under="" acute="" stimulation="" with="" ole="" and="" nps2143.="" short-term="" treatment="" with="" ole="" (1="" mg/ml)="" evoked="" specific="" calcium="" oscillations(fig.4a)="" that="" were="" prevented="" when="" cells="" were="" pretreated="" with="" the="" selective="" casr="" inhibitor="" nps2143（10="" μm）.="" statistical="" analysis="" of="" the="" fluorescence="" responses（fig.="" 4b）revealed="" that="" incubation="" with="" ole="" increased="" cytosolic="" calcium="" by="" 97.06±6.93%(vs="" atp="" 100.00±2.28%).pretreatment="" with="" nps2143="" reduced="" the="" ole="" induced="" intracellular="" calcium="" increase(ole/nps2143="18.87±2.17%,n=59" cells="" vs="" ole="97.06±6.93%," n="50" cell;=""><0.001).to deeper="" investigate="" whether="" the="" effect="" of="" ole="" on="" avp-dependent="" water="" reabsorption="" occurred="" through="" the="" activation="" of="" the="" casr="" signaling,="" functional="" studies="" were="" performed="" as="" previously="" shown="" (fig.1b).="" interestingly,="" treatment="" with="" nps2143="" abolished="" the="" inhibitory="" effect="" of="" ole="" on="" avp-regulated="" osmotic="" water="" permeability="" (fig.5;="" ole/ddavp/nps2143="190.4±7.15%," n="191 cells" vs="" ole/ddavp="88.70±1.86%,n=292"><0.001), suggesting="" that="" treatment="" with="" ole="" attenuated="" the="" avp-dependent="" water="" reabsorption="" through="" the="" activation="" of="" the="" casr="" signaling.="" compared="" to="" untreated="" cells,="" treatment="" with="" only="" nps2143="" did="" not="" affect="" the="" osmotic="" water="" permeability="" (fig.="">

<0.001 vs="" ctr;=""><0.05 vs="" ddavp).="" (b)="" lysates="" from="" mcd4="" cells="" were="" subjected="" to="" immunoblotting="" using="" abs="" against="" aqp2-ps256="" and="" totalaqp2.="" densitometric="" analysis="" of="" aqp2-ps256="" bands="" normalized="" to="" total="" aqp2="" bands="" (total="" aqp2)="" is="" reported="" in="" the="" histogram.="" data="" are="" expressed="" as="" means±s.e.m=""><0.05 or=""><0.001 vs="" ctr;=""><0.001 vs="" ddavp)."="" alt="Figure 2. Efects of OLE on AQP2 phosphorylation and cAMP production in MCD4 cells. (A) Evaluation of cAMP production by FRET experiments in MCD4 cells transiently transfected with H96 as described in the " materials="" and="" methods"="" section.="" histogram="" reports="" netfret="" measured="" in="" cells="" under="" basal="" conditions,="" treated="" with="" ddavp="" (100 nm="" for="" 30 min),="" ole="" (0.1 mg/ml="" o/n),="" or="" co-treated="" with="" ole="" and="" ddavp.="" te="" treatment="" with="" ddavp="" displayed="" a="" signifcantly="" higher="" camp="" production="" depicted="" as="" a="" reduced="" netfret="" signal.="" data="" are="" shown="" as="" single="" values="" in="" a="" scatter="" plot="" reporting="" means±s.e.m=""><0.001 vs="" ctr;=""><0.05 vs="" ddavp).="" (b)="" lysates="" from="" mcd4="" cells="" were="" subjected="" to="" immunoblotting="" using="" abs="" against="" aqp2-ps256="" and="" totalaqp2.="" densitometric="" analysis="" of="" aqp2-ps256="" bands="" normalized="" to="" total="" aqp2="" bands="" (total="" aqp2)="" is="" reported="" in="" the="" histogram.="" data="" are="" expressed="" as="" means±s.e.m=""><0.05 or=""><0.001 vs="" ctr;=""><0.001 vs="" ddavp)."="" width="480" height="320" border="0" vspace="0" style="width: 480px; height: 320px;">

OLE ইনজেকশন দেওয়া ইঁদুরের কিডনিতে OLE এর প্রভাব।

OLE-এর ক্রিয়াগুলি আরও তদন্ত করতে, ভিভোতে গবেষণা করা হয়েছে। বিশেষত, ইঁদুরকে তিন দিনের জন্য দিনে একবার OLE (250 মিগ্রা/কেজি/দিন) দিয়ে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছে। বিকল্পভাবে, ইঁদুরগুলিকে OLE-এর সাথে 3 দিনের জন্য এবং dDAVP-এর সাথে 30 মিনিটের জন্য সহ-চিকিত্সা করা হয়েছিল৷ CaSR mRNA এর মূল্যায়ন যা ইঁদুরের রেনাল সংগ্রহ নালী থেকে বিচ্ছিন্ন ছিল এবং রিয়েল-টাইম PCR (চিত্র.6) এর জন্য প্রক্রিয়া করা হয়েছিল OLE(OLE=1.87±0.29, n{{) তে CaSR mRNA-তে একটি উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি প্রকাশ করেছে 10}} ইঁদুর বনাম CTR=1.02±0.17, n=5 ইঁদুর; p<0.05) and="" ole/ddavp(ole/ddavp="2.77±0.25," n="5" rats="" vs="" ctr="1.02±0.17,n=5" rats="" and="" ddavp="1.08±0.11," n="5" rats;=""><0.001)injected rats="" compared="" with="" control="" and="" ddavp="" animals,="" casr="" signaling="" can="" regulate="" the="" expression="" level="" of="" selective="" mirnas,="" which="" downregulated="" the="" expression="" level="" of="" aqp216.based="" on="" these="" findings,="" and="" considering="" that="" treatment="" with="" ole="" attenuated="" aqp2="" function,="" the="" level="" of="" mir-137,="" a="" known="" aqp2-targeting="" mir="" in="" the="" renal="" collecting="" duct,="" was="" evaluated.="" compared="" to="" control="" rats="" (fig.7),="" the="" level="" of="" mir-137="" in="" the="" renal="" collecting="" ducts="" of="" ole(ole="4.18.10-8±1.07.10-8ng,n=5" rats="" vs="" ctr="1.35.10-8±2.89.10-ng," n="5" rats;=""><0.05)and ole/ddavp="" rats="" was="" increased="" indicating="" that="" treatment="" with="" ole="" upregulates="" the="" casr="" signaling="" and="" the="" expression="" level="" of="" the="" mir-137(ole/ddavp="4.38.10-8±47.01·10-9ng," n="5" rats="" vs="" ctr="1.35.10-8±2.89.10-ng," n="5" rats;=""><0.01 and="" vs="" ddavp="2.1610-8±3.52.10-°ng," n="5"><0.05). to="" verify="" whether="" the="" increase="" of="" mir-137="" affected="" the="" expression="" level="" of="" aqp2,="" renal="" samples="" were="" processed="" for="" real-time="" pcr.="" data(fig.8a)revealed="" that="" the="" expression="" levels="" of="" aqp2="" mrna="" were="" lower="" in="" ole(ole="0.36±0.06,n=5" rats="" vs="" ctr="1.00±0.08," n="5"><0.01)and ole/ddavp(ole/ddavp="0.65±0.12," n="5" rats="" vs="" ctr="1.00±0.08," n="5" rats="" and="" ddavp="1.03±0.16,n=5" rats;=""><0.05)renal samples="" compared="" with="" specimens="" obtained="" from="" control="" animals.="" besides,="" western="" blotting="" analysis(fig.="" 8b)showed="" that="" treatment="" with="" ole="" reduced="" the="" abundance="" of="" aop2="" regardless="" of="" ddavp="" stimulation(ole/ddavp="0.62±0.13,n=5" rats="" vs="" ddavp="1.04±0.16,n=5"><0.05)indicating that="" the="" ole-induced="" reduction="" of="" aqp2="" mrna="" expression="" level="" coincided="" with="" a="" decrease="" of="" aqp2="" protein="" content.="" to="" evaluate="" the="" effect="" of="" ole="" on="" aqp2="" phosphorylation="" and="" trafficking="" in="">কিডনি, ওয়েস্টার্ন ব্লটিং বিশ্লেষণ, এবং কনফোকাল অধ্যয়ন করা হয়েছিল (চিত্র.9)। OLE/dDAVP ইনজেকশনযুক্ত ইঁদুরগুলিতে, dDAVP চিকিত্সা করা প্রাণীদের রেনাল টিস্যু (OLE/dDAVP=0) এর তুলনায় সেরিন 256-এ AQP2 এর ফসফোরিলেশন উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। 77±0.16, n=5 ইঁদুর বনাম dDAVP=2.16±0.25,n=5 ইঁদুর; p<0.001,fig.9a),thereby confirming="" the="" in="" vitro="" findings(fig.2b).="" besides,="" confocal="" studies="" (fig.9b)="" of="" kidney="" sections="" revealed="" that="" exposure="" to="" ole="" prevented="" the="" aop2="" mem-brane="" localization="" that="" instead="" was="" observed="" in="" ddavp="" treated="">

আলোচনা

ক্যালসিয়াম হল একটি গুরুত্বপূর্ণ অন্তঃকোষীয় মেসেঞ্জার যা সেলুলার ফাংশনগুলির আধিক্যকে সংশোধন করে। অস্বাভাবিক ক্যালসিয়াম সংকেত হার্ট ফেইলিওর, ক্যান্সার এবং হাইপারটেনশন সহ বিভিন্ন রোগের কারণ হতে পারে। অভিব্যক্তির সুনির্দিষ্ট নিয়ন্ত্রণ এবং একাধিক অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়াম সংকেত নিয়ন্ত্রণকারী প্রোটিনগুলির কার্যকলাপ অসংখ্য ব্যাধির মুখোমুখি হতে সফল প্রমাণিত হয়েছে এবং তাই ওষুধের বিকাশের জন্য আকর্ষণীয়। এই অধ্যয়নটি CaSR-এর উদ্দীপনার মাধ্যমে অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়াম সংকেত মডিউল করার ক্ষমতা দেখিয়ে OLE-এর ক্রিয়াকলাপের পদ্ধতিতে অভিনব অন্তর্দৃষ্টি প্রদান করে যা ভাসোপ্রেসিন-প্ররোচিত AQP2 পাচার এবং অভিব্যক্তিকে সূক্ষ্ম-টিউনিংয়ের সাথে জড়িত। শারীরবৃত্তীয় অবস্থার অধীনে, AQP2 শরীরের জল হোমিওস্ট্যাসিস নিয়ন্ত্রণে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। অন্তঃকোষীয় যন্ত্রের উদ্দীপনা, যা এপিকাল প্লাজমা ঝিল্লিতে AQP2-এর স্থানীয়করণের দিকে পরিচালিত করে, ফলে অস্বাভাবিক জল ধরে রাখা এবং ফলস্বরূপ হাইপোনাট্রেমিয়া যেমন অনুপযুক্ত অ্যান্টিডিউরেটিক হরমোন (SIADH) নিঃসরণ, লিভার সিরোসিস এবং কনজেস্টিভ হার্ট ফেইলিউর-এর সিন্ড্রোমের মতো। SIADH এর মডেল, পলিসিস্টিক কিডনি রোগ 1 হ্যাপ্লোইনসফিসিয়েন্সির সাথে যুক্ত, বেসাল আন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়াম স্তর বন্য ধরণের ইঁদুরের সংগ্রহ নালীতে পরিমাপ করা স্তরের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। কম অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়াম প্রোটিন ফসফেটেস PP2A সহ নির্দিষ্ট এনজাইমের কার্যকলাপকে নিয়ন্ত্রণ করে যার ফলে সেরিন 2561-এ AOP2 ফসফোরিলেশন আপগ্র্যুলেশন হয়। বিপরীতে। ক্যালসিমিমেটিক NPS-R568 এর সাথে CaSR সক্রিয়করণ অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়ামের ঘনত্ব বৃদ্ধি করে এবং PKD1 ঘাটতি কোষে CAMP স্তরকে হ্রাস করে। গুরুত্বপূর্ণভাবে, সাইটোসোলিক ক্যালসিয়াম ক্যালসিয়াম-ইনহিবিটেবল অ্যাডিনাইলেটেড সাইকেলেস3কে নিয়ন্ত্রণ করতে পারে যার ফলে সিএএমপি-এর অন্তঃকোষীয় স্তরকে সূক্ষ্ম-টিউনিং করতে পারে। MCD4 কোষে, প্রকৃতপক্ষে, NPS-R568-এর সাথে CaSR-এর উদ্দীপনা AQP2-pS256 এর মাধ্যমে কমে যায়। cyclase4.এই সমীক্ষায়, OLE-এর সাথে চিকিত্সা CAMP এবং AOP2-pS256-এর ভাসোপ্রেসিন-নির্ভর বৃদ্ধিকে প্রতিরোধ করে, সম্ভবত অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়াম ঘনত্ব বৃদ্ধির জন্য গৌণ। উল্লেখ্য, প্রবেশযোগ্য 8-Br-cAMP ব্যবহার করে সিএএমপি-এর একটি বাহ্যিক উত্সের সংস্পর্শ, V2R পাথওয়েতে OLE-এর প্রতিরোধমূলক প্রভাবকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রতিহত করেছে।

সাইটোসোলিক ক্যালসিয়ামের উচ্চ স্তর কোষের মৃত্যু এবং অ্যাপোপটোসিস হতে পারে। যাইহোক, 250 nM থেকে 600 nM থেকে 600 nM-এর বেশি হওয়া অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়ামের স্থায়িত্ব বৃদ্ধির ফলে স্নায়ুতন্ত্রের বেঁচে থাকা ৪. MCD4 কোষে, 0.1 mg/ml-এ OLE দিয়ে চিকিত্সা প্রদর্শিত হয় না একটি সাইটোটক্সিক প্রভাব। এই ঘনত্বে, OLE (0.1 mg/ml) অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়ামের মাত্রা কিছুটা বাড়িয়ে দেয়। ক্যালসিয়াম ইমেজিং প্রকাশ করেছে যে OLE এর সাথে তীব্র উদ্দীপনা CaSR সক্রিয়করণের মাধ্যমে অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়ামের একটি ক্ষণস্থায়ী বৃদ্ধি ঘটায় যা বিলুপ্ত হয় যখন কোষগুলি নির্বাচনী CaSR বিরোধী NPS2143 এর সাথে প্রিঙ্কুবেট করা হয়, রেনাল প্রক্সিমাল টিউবুল কোষে, I-ornithine এর সাথে CaSR এর অ্যালোস্টেরিক অ্যাক্টিভেশন। ROS উত্পাদন হ্রাস করে যার ফলে মাইটোকন্ড্রিয়াল অক্সিডেটিভ স্ট্রেস হ্রাস পায় যা কোষের অ্যাপোপটোসিস 356 সৃষ্টি করে। অধিকন্তু, আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে CaSR-এর লাভ-অফ-ফাংশন ভেরিয়েন্টের অভিব্যক্তি ROS রিলিজ এবং AQP237 এর S-গ্লুটাথিওনিলেশনকে হ্রাস করেছে। OLE এর সাথে ইনকিউবেশন MCD4 কোষে ROS জেনারেশন হ্রাস করে 35এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা দেখায়। তা সত্ত্বেও, OLE AOP2-S-glutathionylation কে প্রভাবিত করে কিনা তা এই মুহূর্তে স্পষ্ট নয়। অসংখ্য গবেষণায় দেখা গেছে যে OLE বা oleuropein, যা OLE এর প্রধান উপাদান, কোষের মৃত্যুকে বাধা দিয়ে প্রতিরক্ষামূলক ভূমিকা রাখতে পারে, 39 তবে, OLE গ্রহণকারী ইঁদুরের ক্ষেত্রে ডোজ-নির্ভর প্রভাব বর্ণনা করা হয়েছে। 250 এবং 500 মিলিগ্রাম/কেজি ডোজে উপকারী প্রতিক্রিয়া পাওয়া গেছে। বিপরীতে, উচ্চ ঘনত্বে, OLE এর সাথে চিকিত্সার ক্ষতিকারক প্রভাব হতে পারে সম্ভবত বেশ কয়েকটি ফাইটোকম্পাউন্ডের প্রো-অক্সিডেন্ট ক্রিয়াগুলির কারণে। এই সমীক্ষায়, ইঁদুরকে 250 মিলিগ্রাম/কেজি ডোজে ওএলই দিয়ে তিন দিনের জন্য ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল যা CaSR এর আপগ্র্যুলেশন দেখায়। CaSR এর অভিব্যক্তি স্তর নির্দিষ্ট যৌগ দ্বারা বৃদ্ধি পায় যা রিসেপ্টরের অ্যালোস্টেরিক অ্যাক্টিভেটর হিসাবে কাজ করে। ক্যালসিমিমেটিক্স, প্রকৃতপক্ষে, মানুষের ভাস্কুলার মসৃণ পেশী কোষে CaSR এর জৈব সংশ্লেষণ বৃদ্ধি করে ভাস্কুলার ক্যালসিফিকেশন হ্রাস করে। এই প্রতিযোগিতায়, OLE-তে নির্দিষ্ট যৌগগুলি CaSR-এর অ্যালোস্টেরিক মডুলেটর হিসাবে কাজ করতে পারে এমন সম্ভাবনাকে বাদ দেওয়া যায় না। অন্য দিকে, ভাসোপ্রেসিনের সাথে উদ্দীপনা IL-6 প্রকাশের দিকে নিয়ে যেতে পারে যা CaSR42-এর প্রকাশের মাত্রা বাড়াতে ভূমিকা রাখতে পারে।

কিডনিতে, CaSR সংকেতের উদ্দীপনাটি সম্ভবত miR-137 জেনারেশনের মাধ্যমে AQP2 এক্সপ্রেশনের একটি নিম্ননিয়ন্ত্রণের সাথে সম্পর্কিত। miRNA হল মূল পোস্টট্রান্সক্রিপশনাল মডুলেটর। AQP2 অভিব্যক্তিকে লক্ষ্য করে বেশ কয়েকটি ভাসোপ্রেসিন-নির্ভর miRNA-র বর্ণনাও করা হয়েছে43। miR-32 এবং miR-137 এর সাথে স্থানান্তর উল্লেখযোগ্যভাবে mpkCCDc14 কোষে AOP2 এর অভিব্যক্তি স্তরকে হ্রাস করেছে। মজার বিষয় হল, ওএলই প্রদাহজনক সংকেত কমিয়ে দিতে পারে এবং বেশ কিছু miRNA-এর এক্সপ্রেশন লেভেল মড্যুলেট করে প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব প্রয়োগ করতে পারে৷ বিশেষ করে, গ্লিওব্লাস্টোমা মাল্টিফর্ম কোষে, ওএলই miR-13745 সহ বিভিন্ন miRNA-এর অভিব্যক্তি প্রচার করেছে যা নিম্ন নিয়ন্ত্রণের সাথে জড়িত৷ Akt/mTOR সিগন্যালিং পাথওয়ে 46. উল্লেখ্য, অলিউরোপেইনের সাথে চিকিত্সা ক্যালসিয়াম-প্ররোচিত CAMK এবং AMPK সক্রিয়করণের মাধ্যমে Akt/mTOR সংকেতকে বাধা দেয়। NPS-R568 এর সাথে CaSR সক্রিয়করণ AMPK সক্রিয় করে এবং মানুষের প্রক্সিমাল টিউবুলার কোষে mTOR কার্যকলাপ হ্রাস করে। এই ফলাফলগুলির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, OLE এর সাথে ইনকিউবেশন সাইটোসোলিক ক্যালসিয়াম বাড়ায়, পিকেএ কার্যকলাপকে নিয়ন্ত্রিত করে এবং একটি 3D-সেল সংস্কৃতি মডেল48-এ সিস্টের আকার হ্রাস করে। একসাথে এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে OLE সিএএসআর সিগন্যালিং এর ডাউনরেগুলেশন সম্পর্কিত অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়াম গতিবিদ্যার dysregulation দ্বারা চিহ্নিত ব্যাধিগুলির চিকিত্সার ক্ষেত্রে কার্যকর হতে পারে।

জলপাই পাতার নির্যাস পলিফেনল, ফাইবার এবং খনিজ সহ বেশ কয়েকটি জৈব সক্রিয় উপাদান নিয়ে গঠিত। এই মুহুর্তে, এটি স্পষ্ট নয় যে একটি যৌগ বা OLE তে ফাইটোকম্পাউন্ডগুলির একটি সিনার্জিক সংমিশ্রণ অন্তঃকোষীয় প্রতিক্রিয়াগুলিকে সংশোধন করতে উপকারী হতে পারে। এই গবেষণায় ব্যবহৃত নির্যাস একটি সম্ভাব্য খাদ্য সংযোজন হিসাবে প্রয়োগ করা হয়েছে এবং তাই নির্যাসের শারীরবৃত্তীয় প্রভাবকে সংজ্ঞায়িত করা গুরুত্বপূর্ণ যে হাইড্রোক্সিটাইরোসল সহ বেশ কয়েকটি ফেনল কিডনি দ্বারা ফিল্টার করা যেতে পারে এবং প্রস্রাবে পুনরুদ্ধার করতে পারে। আরও অধ্যয়নগুলি নির্দিষ্ট উপাদানগুলির কার্যকারিতা প্রদান করবে যা সক্রিয়ভাবে CaSR এর মাধ্যমে অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়াম সংকেত নিয়ন্ত্রণ করতে পারে। উপসংহারে, এই গবেষণাটি প্রমাণ সরবরাহ করে যে OLE একটি অভিনব সম্ভাব্য সহায়ক হিসাবে বিবেচিত হতে পারে যা ক্যাএসআর এক্সপ্রেশনের হ্রাসের পাশাপাশি রেনাল জলের ব্যাপ্তিযোগ্যতাকে সংকেত এবং প্রভাবিত করে এমন ব্যাধিগুলি প্রশমিত করতে কার্যকর।

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

রাসায়নিক এবং অ্যান্টিবডি।সমস্ত রাসায়নিক এবং অ্যান্টিবায়োটিকগুলি Merck (Merck KGaA, Darmstadt, Germany) থেকে কেনা হয়েছিল। ক্যালসিন-এএম, ফুরা-2-এএম, সেল কালচার মিডিয়া, ফেটাল বোভাইন সিরাম (এফবিএস), এবং সুপার সিগন্যাল ওয়েস্ট পিকো কেমিলুমিনেসেন্ট সাবস্ট্রেটগুলি থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) থেকে কেনা হয়েছিল। অ্যাকোয়াপোরিন{ {2}}(AQP2) নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডি (C-tail Ab) ব্যবহার করে শনাক্ত করা হয়েছে যা মানুষের AQP2 এর শেষ 15টি সি-টার্মিনাল অ্যামিনো অ্যাসিডের সাথে সম্পর্কিত একটি সিন্থেটিক পেপটাইডের বিরুদ্ধে উত্থাপিত হয়েছে! AQP2-pS256 অ্যান্টিবডি প্রফেসর পিটার ডিন দয়া করে উপহার দিয়েছিলেন। সেকেন্ডারি গোট অ্যান্টি-রবিট হর্সরাডিশ পেরোক্সিডেস-কাপলড অ্যান্টিবডিগুলি মার্ক (মার্ক কেজিএ, ডার্মস্ট্যাড, জার্মানি) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) থেকে আলেক্সা-488 এর সাথে মিলিত একটি মাধ্যমিক ছাগল-বিরোধী-খরগোশ অ্যান্টিবডি কেনা হয়েছিল।

ফেনোলিক্স-সমৃদ্ধ নির্যাস উত্পাদন এবং রাসায়নিক বৈশিষ্ট্য।জলপাইয়ের পাতা থেকে ফেনোলিক-সমৃদ্ধ নির্যাস তৈরি করা হয়েছিল যেমন Ranieri et al.35-এ রিপোর্ট করা হয়েছে। ব্লেন্ডার (ওয়ারিং-কমার্শিয়াল, টরিংটন, সিটি, ইউএসএ) দিয়ে মিল করার পরে, ddH2O জল যোগ করা হয়েছিল (অনুপাত 1/20, w/y) এবং তারপরে তিনবার আল্ট্রাসাউন্ড (CEIA, Viciomaggio, Italy) করা হয়েছিল , প্রতিবার 35±5 ডিগ্রীতে 30 মিনিটের জন্য। অবশেষে, নির্যাসগুলিকে ফিল্টার পেপারের মাধ্যমে ফিল্টার করা হয়েছিল, লাইওফিলাইজড করা হয়েছিল এবং -20 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করা হয়েছিল৷ প্রাপ্ত নির্যাসগুলিকে 0.45 μm（Merck KGaA, Darmstadt, Germany）-এর নাইলন ফিল্টার দিয়ে ফিল্টার করা হয়েছিল এবং রাসায়নিক বৈশিষ্ট্যের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল৷ ডিফনজো এট আল অনুযায়ী মোট ফেনল উপাদান, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ, এবং একক ফেনোলিক যৌগ সনাক্তকরণ করা হয়েছিল। OLE পলিফেনলের একটি বিষয়বস্তু দেখিয়েছিল, ফোলিন-সিওকালটিউ দ্বারা নির্ধারিত, 195 মিলিগ্রামের সমান। গ্যালিক অ্যাসিড সমতুল্য (GAE) এবং একটি অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ, যা ABTS (2,2'-অ্যাজিনো-বিস(3-ইথাইলবেনজোথিয়াজোলিন-6-সালফোনিক অ্যাসিড ডায়ামোনিয়াম লবণ）) দ্বারা নির্ধারিত, 750 μmol TE （ট্রোলক্স সমতুল্য) .

কোষ সংস্কৃতি এবং চিকিত্সা।মাউস কর্টিকাল সংগ্রহ নালী MCD4 কোষ, স্থিরভাবে মানব AQP2 প্রকাশ করে এবং কাইমেরিক V2R-Rluc একটি পরীক্ষামূলক মডেল হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল 18। ডালবেক-কস মডিফাইড ঈগলস মিডিয়ামের 1:1 মিশ্রণে এবং F-12 5 শতাংশ (y/y) ভ্রূণের বোভাইন সিরামের সাথে সম্পূরক মিশ্রণে কোষগুলি জন্মানো হয়েছিল। 1 শতাংশ (y/y)L-গ্লুটামিন এবং 1 শতাংশ পেনিসিলিন/স্ট্রেপ্টোমাইসিন, 5 μM ডেক্সামেথাসোন, 400 ug/ml G418（AQP2 প্রতিরোধের জন্য） এবং 1 ug/ml puromycin (V2R-Rluc প্রতিরোধের জন্য) , 5 শতাংশ CO এর আর্দ্র বায়ুমণ্ডলে, 37 ডিগ্রিতে। MCD4 কোষগুলিকে বেসাল অবস্থার (CTR) অধীনে রেখে দেওয়া হয়েছিল বা 0.1 mg/ml O/N এ OLE দিয়ে দীর্ঘমেয়াদী চিকিত্সা করা হয়েছিল, 30 মিনিটের জন্য 100 nM এ dDAVP, অথবা l μM O/N এ OLE এবং dDAVP বা NPS2143 এর সাথে সহ-চিকিত্সা করা হয়েছিল .বিকল্পভাবে, কোষগুলিকে 45 মিনিটের জন্য 500 μM-এ 8-Br-cAMP-এর সংস্পর্শে আনা হয়েছিল, 5 মিনিটের জন্য 1 mg/ml-এ OLE এবং 15 মিনিটের জন্য 10 μM-এ NPS2143-এর সাথে স্বল্প-মেয়াদী পরীক্ষা চালানো হয়েছিল৷ বিভিন্ন প্যাসেজ থেকে সেল ব্যবহার করে পরীক্ষাগুলি 3-5 স্বাধীন বার করা হয়েছিল৷

পশু মডেল এবং চিকিত্সা.পরীক্ষামূলক প্রাণীদের যত্ন এবং পরিচালনার জন্য ডেনিশ জাতীয় নির্দেশিকা এবং ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট অফ হেলথের প্রকাশিত নির্দেশিকাগুলির সাথে চুক্তিতে সমস্ত পদ্ধতি সম্পন্ন করা হয়েছিল, প্রোটোকলগুলি ইনস্টিটিউট অফ ক্লিনিক্যাল মেডিসিন দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল৷ আরহাস ইউনিভার্সিটি, পরীক্ষামূলক প্রাণী ব্যবহারের লাইসেন্স অনুযায়ী ডেনমার্কের বিচার মন্ত্রণালয় (অনুমোদন নম্বর 2015-15-0201-00658) জারি করেছে। 200-225 গ্রাম প্রারম্ভিক ওজন সহ প্রাপ্তবয়স্ক পুরুষ উইস্টার ইঁদুরের উপর গবেষণা করা হয়েছিল। প্রাণীদের একটি স্ট্যান্ডার্ড ইঁদুরের খাদ্যে (অ্যালট্রোমিন, লেজ, জার্মানি) রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল এবং ট্যাপের জলে বিনামূল্যে অ্যাক্সেস ছিল। পরীক্ষা-নিরীক্ষার সময়, ইঁদুরগুলিকে প্রতি খাঁচায় দুটি দলে রাখা হয়েছিল, একটি 12:12 ঘন্টা আলো-অন্ধকার চক্র, তাপমাত্রা 21±2 ডিগ্রি সেলসিয়াস এবং আর্দ্রতা 55±2 শতাংশ। 200 উল স্যালাইন/প্রাণীতে 1 এনজি ডিডিএভিপি (সিগমা-অলড্রিচ, গ্লোস্ট্রুপ, ডেনমার্ক) এর সাবকুটেনিয়াস ইনজেকশন দিয়ে পাঁচটি ইঁদুরকে চিকিত্সা করা হয়েছিল এবং পাঁচটি যানবাহন-চিকিত্সা করা ইঁদুরকে নিয়ন্ত্রণ হিসাবে পরিবেশন করা হয়েছিল। 30 মিনিটের পরে, ইঁদুরগুলিকে মেরে ফেলা হয়েছিল এবং নীচে বর্ণিত হিসাবে কিডনিগুলি প্রক্রিয়া করা হয়েছিল।

কোষ এবং IMCD lysates.কোষগুলিকে {{0}}মিমি থালা-বাসনে জন্মানো হয়েছিল এবং 220 মিমি ম্যানিটল, 70 মিমি সুক্রোজ, {{10}} ধারণকারী একটি বাফারে পুনঃস্থাপন করা হয়েছিল। 5 M EGTA pH 8.0,0.5 M EDTA pH 8.0,1 M Tris-HCl pH 7.4 প্রোটিজের উপস্থিতিতে (1 mM PMSF, 2 mg/ml leupeptin, এবং 2 mg/ml pepstatin A) এবং ফসফেটেস (10 mM NaF এবং 1 মিমি সোডিয়াম অরথোভানাডেট) ইনহিবিটার। 1i8 mM NaCl, 16 mM Hepes, 17 mM Na-Hepes, 14 mM গ্লুকোজ, 3.2 mM KCl, 2.5 mM, এবং M2.5 mGM Caf, 3.2 mM KCl, 1i8 mM NaCl সমন্বিত একটি বাফারে প্রায় 0.5 মিমি-এর কিডনি বিভাগগুলিকে 10 মিনিটের জন্য প্রস্তুত এবং ভারসাম্যপূর্ণ করা হয়েছিল। 1.8 mM KH2PO4 (pH7.4)। রেনাল প্যাপিলা একই বাফারে কাঁচি দিয়ে কিমা করা হয়েছিল প্রোটিয়াসের উপস্থিতিতে (1 mM PMSF, 2 mg/mlleupeptin, এবং 2mg/mlpepstatin A) এবং ফসফেটেস (10 mM NaF এবং 1 mM sodium) অরথোভানাডেট) ইনহিবিটর। সোনিকা-টেশনের পর (5 সেকেন্ডের জন্য 60 kHz), 10 মিনিটের জন্য 12,000×g এ সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। সুপারন্যাট্যান্টগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং ইমিউনোব্লটিং স্টাডিজ'8 এর জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।

কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি।কনফোকাল অধ্যয়নগুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে সম্পাদিত হয়েছিল। সংক্ষেপে, কোষগুলি সেল কালচার পিইটি সন্নিবেশে জন্মানো হয়েছিল এবং উপরে বর্ণিত হিসাবে চিকিত্সা করা হয়েছিল। বিকল্পভাবে, নিয়ন্ত্রণ থেকে প্রাপ্ত কিডনি বিভাগগুলি, OLE, dDAVP, এবং dDAVP চিকিত্সা করা ইঁদুরের সাথে OLE পূর্বে বর্ণিত হিসাবে ইমিউনোফ্লুরোসেন্স পরীক্ষার শিকার হয়েছিল। চিত্রগুলি একটি কনফোকাল লেজার-স্ক্যানিং ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ লাইকা টিসিএস এসপি 2 (লাইকা মাইক্রোসিস্টেম, হিরব্রুগ, সুইজারল্যান্ড) দিয়ে প্রাপ্ত হয়েছিল। জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস এবং ইমিউনোব্লটিং। প্রোটিনগুলিকে 12 শতাংশ দাগ-মুক্ত পলিঅ্যাক্রিলামাইড জেলে (বায়ো-র্যাড ল্যাবরেটরিজ, ইনক., হারকিউলিস, সিএ, ইউএসএ) পূর্বে বর্ণিত অবস্থার অধীনে পৃথক করা হয়েছিল=5,52৷ সংক্ষেপে, প্রোটিন ব্যান্ডগুলি Immobilon-P মেমব্রেনে (Merck KGaA, Darmstadt, Germany) স্থানান্তরিত হয়েছিল এবং অ্যান্টি-AQP2 (প্রি-সি-টেইল Ab) এবং অ্যান্টি-AQP2-pS256 অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে ইমিউনোব্লট করা হয়েছিল। কেমিডোক সিস্টেমের সাথে সুপার সিগন্যাল ওয়েস্ট পিকো কেমিলুমিনেসেন্ট সাবস্ট্রেটস (বায়ো-র্যাড ল্যাবরেটরিজ, ইনক।, হারকিউলিস, সিএ, ইউএসএ) ব্যবহার করে ইমিউনোর্যাকটিভ সংকেত প্রাপ্ত করা হয়েছিল। দাগ-মুক্ত প্রযুক্তি ব্যবহার করে ব্যান্ডগুলিকে মোট প্রোটিনে স্বাভাবিক করা হয়েছিল (বায়ো-র্যাড ল্যাবরেটরিজ, ইনক।, হারকিউলিস, CA, USA)। ডেনসিটোমেট্রি বিশ্লেষণ ImageLab(Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA) ব্যবহার করে করা হয়েছিল এবং GraphPad Prism(GraphPad Software, San Diego, CA, USA) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

জল ব্যাপ্তিযোগ্যতা পরীক্ষা.অসমোটিক জল ব্যাপ্তিযোগ্যতা পূর্বে বর্ণিত হিসাবে পরিমাপ করা হয়েছিল43. সংক্ষেপে, MCD4 কোষগুলি 40-মিমি কাচের কভারস্লিপে জন্মেছিল। চিকিত্সার পরে, কোষগুলি DMEM/F-12-এ 37 ডিগ্রি ,5 শতাংশ CO-এ 45 মিনিটের জন্য 10 μM ঝিল্লি-ভেদ্য ক্যালসিন-এএম দিয়ে লোড করা হয়েছিল। কভারস্লিপগুলি একটি পারফিউশন চেম্বারে মাউন্ট করা হয়েছিল (FCS2 ক্লোজড চেম্বার সিস্টেম, BIOPTECHS, বাটলার, USA)। একক-কোষ ফ্লুরোসেন্স পরিমাপের জন্য সজ্জিত একটি উল্টানো TE{11}S মাইক্রোস্কোপ (নিকন ইক্লিপস মাইক্রোস্কোপ, টোকিও, জাপান) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল। এবং ইমেজিং বিশ্লেষণ। ক্যালসিন-এএম-লোড করা নমুনাগুলি 490 এনএম-এ উত্তেজিত হয়েছিল। ফ্লুরোসেন্স পরিমাপ, নিম্নলিখিত আইসোমটিক (140 mM NaCl.5 mM KCl, 1 mM MgCl..1 mM CaCl., 10 mM হেপিস সালফোনিক অ্যাসিড, 5 mM গ্লুকোজ, pH7.4) বা হাইপারসমোটিক (135 মিমি ম্যানিটল দ্রবণের সাথে আইসোমোটিক দ্রবণ যোগ করা হয়েছে) . মেটাফ্লুর সফ্টওয়্যার (মলিকুলার ডিভাইস, এমডিএস অ্যানালিটিক্যাল টেকনোলজিস, টরন্টো, কানাডা) ব্যবহার করে করা হয়েছিল। আইসো-এবং হাইপারসমোটিক দ্রবণ সহ কোষগুলিকে পারফিউজ করার পরে টাইম কোর্স ফ্লুরোসেন্স ডেটা রেকর্ড করা হয়েছিল। কোষের সংকোচনের সময়ক্রমটি সময় ধ্রুবক হিসাবে পরিমাপ করা হয়েছিল (Ki, 1/r, সেকেন্ড হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছে), জলের ব্যাপ্তিযোগ্যতার সাথে সম্পর্কিত একটি প্যারামিটার, গ্রাফপ্যাড প্রিজম (গ্রাফপ্যাড সফ্টওয়্যার, সান দিয়েগো) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা সূচকীয় ফাংশনের সাথে ডেটা ফিটিং করে প্রাপ্ত , CA, USA)।

ফ্লুরোসেন্স অনুরণন শক্তি স্থানান্তর পরিমাপ.আন্তঃকোষীয় সিএএমপি পরিবর্তনগুলি মূল্যায়ন করতে, ফ্লুরোসেন্স রেজোন্যান্স এনার্জি ট্রান্সফার (FRET) প্রযুক্তি প্রয়োগ করা হয়েছিল। FRET পরীক্ষা-নিরীক্ষার জন্য, পূর্বে দেখানো ৩২.৩৩.৫৪ হিসাবে সায়ান ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিন (CFP) এবং cp173Venus-Venus-এর মধ্যে এমবেড করা EPAC1-এর সিএএমপি-বাইন্ডিং কনসেনসাস মোটিফ ধারণকারী H96 সেন্সর এনকোডিং প্লাজমিড দিয়ে কোষগুলি স্থানান্তরিত হয়েছিল। H96 প্রোবের এনকোডিং প্লাজমিড ছিল ডাঃ কে। জালিঙ্ক। ECFP-এবং/অথবা EYFP-প্রকাশকারী কোষগুলির ভিজ্যুয়ালাইজেশন এবং FRET সনাক্তকরণ একটি উল্টানো TE{11}S মাইক্রোস্কোপ (নিকন ইক্লিপস মাইক্রোস্কোপ, টোকিও, জাপান) ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল। প্রতিটি চিত্র পূর্বে দেখানো হিসাবে সংশোধন এবং বিশ্লেষণ করা হয়েছিল55।

অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়াম পরিমাপ। অন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়াম পরিমাপ পূর্বে দেখানো হিসাবে সঞ্চালিত হয়েছিল56। সংক্ষেপে, MCD4 কোষগুলি 4 μM Fura-2 AM দিয়ে 15 মিনিটের জন্য DMEM/F-12 তে 37 ডিগ্রিতে লোড করা হয়েছিল৷ 140 mM NaCl, 5 mM KCl 1 mM MgCl, 10 mM HEPES, 5 mM গ্লুকোজ, 1.8 mM CaCl, pH 7.4 সমন্বিত পরীক্ষার সময় রিংগারের দ্রবণ কোষকে পারফিউজ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। ফ্লুরোসেন্স পরিমাপে, ওভারলোডেড কোষ সহ কভারস্লিপগুলি একটি পারফিউশন চেম্বারে (FCS2 ক্লোজড চেম্বার সিস্টেম। BIOPTECHS। বাটলার, USA) মাউন্ট করা হয়েছিল। পরিমাপগুলি একটি উল্টানো TE2000-S মাইক্রোস্কোপ (নিকন ইক্লিপস মাইক্রোস্কোপ, টোকিও। জাপান), 340 এবং 380 nm-এ ফ্লুরোসেন্স তীব্রতার অনুপাত প্লট করা হয়েছিল এবং প্রতিপ্রভের পরিবর্তন হিসাবে গণনা করা হয়েছিল। বিশেষ করে, OLE（1 mg/ml） বা NPS2143（10 μM） এর সাথে উদ্দীপনাকে একই কোষের প্রকারে ক্যালসিয়াম-মধ্যস্থ অ্যাগোনিস্ট ATP（100 μM）-এর সর্বাধিক ডোজ দিয়ে উদ্দীপনার পর প্রাপ্তদের সাথে তুলনা করা হয়েছিল যেটি একটি হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ (100 শতাংশ)।

আন্তঃকোষীয় ক্যালসিয়াম স্তরটি স্থির-অবস্থায় পরিমাপ করা হয়েছিল এবং গ্রিঙ্কিউইজ 57 দ্বারা বর্ণিত হিসাবে ক্যালিব্রেট করা হয়েছিল। OLE এবং NPS2143 দীর্ঘমেয়াদে যথাক্রমে 0.1 mg/ml এবং l uM ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং প্রতিটি নমুনা 1 mM EGTA（Rm.） এর উপস্থিতিতে 5 μM ionomycin যোগ করে ক্রমাঙ্কিত হয়েছিল 5 মিমি CaCl, (RMA) এ μM আয়নোমাইসিন।

AQP2 এবং CaSR mRNA নিয়ন্ত্রণ এবং চিকিত্সা করা ইঁদুরের রিয়েল-টাইম পিসিআর বিশ্লেষণ।নিয়ন্ত্রণ থেকে বিচ্ছিন্ন এবং চিকিত্সা করা ইঁদুরের কিডনি প্যাপিলে অভ্যন্তরীণ মেডুলা সংগ্রহ নালী (আইএমসিডি) এ এমআরএনএর আপেক্ষিক অভিব্যক্তি পরিমাপের জন্য রিয়েল-টাইম পিসিআর পরীক্ষাগুলি করা হয়েছিল। 118 mM NaCl, 16 mM HEPES, 17 mM Na-Hepes, 14 mM গ্লুকোজ, 3.2 mM KCl, 2.5 mM CaCl2,1 সমন্বিত একটি বাফারে প্রায় 0.5 মিমি কিডনি স্লাইস তৈরি এবং 10 মিনিটের জন্য ভারসাম্যপূর্ণ করা হয়েছিল। mM MgSO4, এবং 1.8 mM KH2PO4 (pH 7.4)। রেনাল প্যাপিলা একটি স্টেরিওমাইক্রোস্কোপের অধীনে বিচ্ছিন্ন ছিল। নিয়ন্ত্রণ এবং চিকিত্সা করা ইঁদুরের নমুনাগুলিকে তারপর সরাসরি ট্রাইজলে একটি কাঁচি দিয়ে কিমা করা হয়েছিল (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ)। সুপারস্ক্রিপ্টভিলো মাস্টার মিক্স (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ওয়াল্টহাম, এমএ, ইউএসএ) ব্যবহার করে মোট RNA-এর 2.5 ugs-এ রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন করা হয়েছিল। USA), প্রস্তুতকারকের পরামর্শ অনুযায়ী (10 মিনিটের জন্য 25C; 60 মিনিটের জন্য 42C; 5 মিনিটের জন্য 85C)। স্টেপওন রিয়েল-টাইম পিসিআর সিস্টেমে (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) CaSR, AOP2 এবং GAPDH অ্যাসেস (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) এর সাথে ট্যাগম্যান ফাস্ট অ্যাডভান্সড মাস্টার মিক্স ব্যবহার করে রিয়েল-টাইম পিসিআর পরিবর্ধন করা হয়েছিল। ), প্রস্তুতকারকের দ্বারা নির্দিষ্ট করা থার্মাল সাইক্লিং শর্তগুলি সেট করা (20 সেকেন্ডের জন্য 95 ডিগ্রী সে; 40 সাইকেল পর্যায়ক্রমে 1 সেকেন্ডের জন্য 95·সে এবং 20 সেকেন্ডের জন্য 60 ডিগ্রি সেলসিয়াসে)। ফলাফলগুলি 2- হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল △ACt=(Ct টার্গেট-Ct GAPDH) চিকিত্সা করা-(Ct টার্গেট-Ct GAPDH)Sham1 সহ মান (আপেক্ষিক পরিমাণ নির্ধারণ)।

নিয়ন্ত্রণ এবং চিকিত্সা করা ইঁদুরে miRNA-137 মূল্যায়ন।ট্যাগম্যান অ্যাডভান্সড miRNA অ্যাসেস (has-miR-137; Assay ID;477904 mir; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) ব্যবহার করে নিয়ন্ত্রণে miRNA{{0}} বিষয়বস্তু এবং চিকিত্সা করা ইঁদুরের অভ্যন্তরীণ মেডুলা সংগ্রহ নালী মূল্যায়ন করা হয়েছিল .US.A), যা পরিমাণগত পিসিআর ব্যবহার করে পরিপক্ক miRNA-এর অত্যন্ত সংবেদনশীল এবং নির্দিষ্ট বিজ্ঞপ্তি সক্ষম করে। 118 mM NaCl, 16 mM HEPES, 17 mM Na-Hepes, 14 mM গ্লুকোজ, 3.2 mM KCl, 2.5 mM CaCl2,1.8 mM, এবং M1 M.4 মিমি সমন্বিত একটি বাফারে প্রায় 0.5 মিমি কিডনি স্লাইস তৈরি এবং 10 মিনিটের জন্য ভারসাম্যপূর্ণ করা হয়েছিল। KH2PO4(pH7.4)। রেনাল প্যাপিলা একটি স্টেরিওমাইক্রোস্কোপের অধীনে বিচ্ছিন্ন ছিল। নিয়ন্ত্রণ এবং চিকিত্সা করা ইঁদুরের নমুনাগুলিকে মোট আরএনএ বের করার জন্য সরাসরি ট্রাইজলে (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) কাঁচি দিয়ে কিমা করা হয়েছিল। TaqMan অ্যাডভান্সড miRNA cDNA সিন্থেসিস কিট (ক্যাটালগ n²∶A25576; থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ）সিডিএনএ সংশ্লেষণ প্রাপ্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল, প্রস্তুতকারকের দ্বারা প্রদত্ত প্রোটোকল অনুসারে (পলি(এ) টেইলিং প্রতিক্রিয়া; বন্ধন প্রতিক্রিয়া; বিপরীত প্রতিলিপি প্রতিক্রিয়া; miR-অ্যাম্প প্রতিক্রিয়া)। 59-ফসফর সহ সিন্থেটিক RNA(UUAUUGCUUAAGAAUACGCGUAG) থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক দ্বারা সংশ্লেষিত হয়েছিল এবং miRNA নমুনা মানগুলিকে প্রসারিত করার জন্য একটি ক্রমাঙ্কন বক্ররেখা সঞ্চালন করতে এবং miR সামগ্রীর একটি সুনির্দিষ্ট মূল্যায়ন (ন্যানোগ্রামে) পেতে ব্যবহার করা হয়েছিল{{29} নমুনা 16, গ্রাফপ্যাড প্রিজম ব্যবহার করে (গ্রাফপ্যাড সফ্টওয়্যার, সান দিয়েগো, CA, USA)।

পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ.সমস্ত মান হিসাবে রিপোর্ট করা হয় ±SEM পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ একমুখী ANOVA দ্বারা সঞ্চালিত হয়েছিল তারপরে নিউম্যান-কেউলস একাধিক তুলনা পরীক্ষা *p এর সাথে<0.05 considered="" statistically="" different="">

বিবৃতি, নৈতিক অনুমোদন, এবং অংশগ্রহণের সম্মতি।পরীক্ষামূলক প্রাণীদের যত্ন ও পরিচালনার জন্য ডেনিশ জাতীয় নির্দেশিকা এবং জাতীয় স্বাস্থ্য ইনস্টিটিউটের প্রকাশিত নির্দেশিকাগুলির সাথে একমত হয়ে প্রাণী অধ্যয়ন করা হয়েছিল। ক্লিনিকাল মেডিসিন ইনস্টিটিউট, আরহাস ইউনিভার্সিটির পশু যত্নের নীতিশাস্ত্র কমিটি ডেনিশ মন্ত্রনালয়ের (অনুমোদন নম্বর 2015-15-0201-00658) দ্বারা জারি করা পরীক্ষামূলক প্রাণীদের ব্যবহারের লাইসেন্স অনুসারে, গবেষণা প্রোটোকল অনুমোদন করেছে। লেখকরা নিশ্চিত করেছেন যে সমস্ত পদ্ধতি প্রাসঙ্গিক নির্দেশিকা এবং প্রবিধান অনুসারে পরিচালিত হয়েছিল। তদুপরি, লেখকরা নিশ্চিত করেছেন যে গবেষণাটি ARRIVE নির্দেশিকাগুলির সাথে সম্মতিতে করা হয়েছিল।

তথ্যসূত্র

1. El, SN এবং Karakaya, S. জলপাই গাছ (Olea europaea) মানুষের স্বাস্থ্যের উপর সম্ভাব্য উপকারী প্রভাব ফেলে। পুষ্টি রেভ. 67, 632-638।

2. জাভাদি, এইচ., ইয়াঘুবজাদেহ, এইচ., এসফাহানি, জেড., রেজা মেমারজাদেহ, এম. এবং মেহেদি মিরহাশেমি, এস. বিপাকীয় প্রতিক্রিয়া, লিভার এবং কিডনি ফাংশন এবং হাইপারটেনসিভ রোগীদের মধ্যে প্রদাহজনক বায়োমার্কারের উপর জলপাই পাতার নির্যাসের প্রভাব। PJBS 22, 342–348।

3. সাইবন্দিথ, বি., স্পেন্সার, জেপিই, রোল্যান্ড, আইআর অ্যান্ড কমেন, ডিএম অলিভ পলিফেনলস, এবং বিপাকীয় সিনড্রোম। অণু

4. শেরিফ, এস. এট আল। অত্যাবশ্যক ধমনী উচ্চ রক্তচাপের চিকিৎসায় টাইট্রেটেড ওলিয়া নির্যাসের একটি ক্লিনিকাল ট্রায়াল। জে ফার্ম। বেলগ. 51, 69-71 (1996)।

5. Difonzo, GRA et al. কর্টিনা জলপাই চাষ থেকে সবুজ নির্যাস অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বৈশিষ্ট্য এবং জৈবিক কার্যকলাপ পাতা. জে. ফাংশন। খাদ্য 31, 8.

6. হেরেরো, এম. এট আল। জলপাই তেলের উপ-পণ্যের মূল্যায়নের জন্য নতুন সম্ভাবনা। জে. ক্রোমাটোগ্র 1218, 7511–7520।

7. মার্চেটি, সি. এবং অন্যান্য। Oleuropein-সমৃদ্ধ জলপাই পাতার নির্যাস ক্যালসিয়াম গতিশীলতাকে প্রভাবিত করে এবং ম্যালিগন্যান্ট মেসোথেলিওমা কোষের কার্যক্ষমতা নষ্ট করে। eCAM 2015, 908493।

8. রোমেরো, এম. এট আল। স্বতঃস্ফূর্তভাবে হাইপারটেনসিভ ইঁদুরে ওলিউরোপেইন-সমৃদ্ধ জলপাই পাতার নির্যাসের অ্যান্টিহাইপারটেনসিভ প্রভাব। খাদ্য ফাংশন 7, 584-593।

9. হল, জেই রেনাল ডিসফাংশন, ননরেনাল ভাস্কুলার ডিসফাংশনের পরিবর্তে। লবণ-প্ররোচিত উচ্চ রক্তচাপের মধ্যস্থতা করে। সার্কুলেশন 133, 894-906।

10. উইলসন, জেএল, মিরান্ডা, সিএ এবং নেপার, এমএ ভাসোপ্রেসিন এবং অ্যাকোয়াপোরিনের নিয়ন্ত্রণ-2। ক্লিন। মেয়াদ। নেফ্রোল। 17, 751-764।