অলিগোস্যাকারাইডগুলি পার্থক্যের ক্লাস্টার কমিয়ে তীব্র কিডনির আঘাতকে কমিয়ে দেয় 44-রেনাল টিউবুলার কোষে মধ্যস্থতামূলক প্রতিরোধমূলক প্রতিক্রিয়া

বিমূর্ত:তীব্র কিডনি আঘাত (AKI)এর একটি আকস্মিক পর্বকিডনি ক্ষতিযা সাধারণত হাসপাতালে ভর্তি রোগীদের মধ্যে ঘটে। আজ অবধি, কমানোর জন্য কোনও আদর্শ চিকিত্সা তৈরি হয়নিAKI এর তীব্রতা. অলিগো-ফুকোইডান(FC) রেনাল ইন্টারস্টিশিয়াল ফাইব্রোসিস প্রতিরোধ করতে ডিফারেনসিয়েশান 44 (CD44) এর রেনাল টিউবুলার সেল সারফেস প্রোটিন ক্লাস্টারে হস্তক্ষেপ করে; তবে, AKI-তে অলিগোস্যাকারাইডের প্রভাব অজানা রয়ে গেছে। এই গবেষণায়, FC, galacto-oligosaccharide (GOS), এবং fructo-oligosaccharide (FOS) কে AKI-তে অলিগোস্যাকারাইডের প্রভাব তদন্ত করার জন্য নির্বাচন করা হয়েছিল। তিনটি অলিগোস্যাকারাইডই অন্ত্র দ্বারা আংশিকভাবে শোষিত বলে প্রমাণিত হয়েছে। আমরা দেখতে পেয়েছি যে অলিগোস্যাকারাইড ডোজ-নির্ভরশীলভাবে CD44 অ্যান্টিজেনিসিটি হ্রাস করে এবং CD44, ফসফো-জেএনকে, MCP-1, IL-1 , এবং TNF--এর হাইপোক্সিয়া-প্ররোচিত অভিব্যক্তিকে NRK-52E-তে দমন করে রেনাল টিউবুলার কোষ। ইতিমধ্যে, CD44 siRNA ট্রান্সফেকশন এবং JNK ইনহিবিটর SP600125 ফসফো-জেএনকে এবং সাইটোকাইনের হাইপোক্সিয়া-প্ররোচিত অভিব্যক্তিকে হ্রাস করেছে। CD44 এর ligand, hyaluronan, CD44 এবং phospho-JNK-এর উপর অলিগোস্যাকারাইডের প্রভাবকে প্রতিহত করে। ইসকেমিয়া-রিপারফিউশন আঘাতের জন্য 2 দিনের অস্ত্রোপচারের পরে, অলিগোস্যাকারাইড কিডনির প্রদাহ, সিরাম ক্রিয়েটাইন, MCP-1, IL-1 , এবং TNF- AKI ইঁদুরে হ্রাস করে। অস্ত্রোপচারের 7 দিন পরে, কিডনি পুনরুদ্ধারের প্রচার করা হয়েছিল। এই ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে FC, GOS এবং FOS রেনাল টিউবুলার কোষগুলিতে হাইপোক্সিয়া-প্ররোচিত CD44/JNK ক্যাসকেড এবং সাইটোকাইনগুলিকে বাধা দেয়, যার ফলে AKI ইঁদুরের AKI এবং কিডনির প্রদাহ কমায়। অতএব,অলিগোস্যাকারাইড পরিপূরকAKI রোগীদের জন্য একটি সম্ভাব্য স্বাস্থ্যসেবা কৌশল।

কিডনি রোগের জন্য একটি নতুন ভেষজ

কীওয়ার্ড: তীব্র কিডনি আঘাত; পার্থক্যের ক্লাস্টার 44; fructo-oligosaccharide; galactooligosaccharide; oligo-fucoidan; প্রদাহ

1. ভূমিকা

তীব্র কিডনি আঘাত(AKI) গ্লোমেরুলার পরিস্রাবণ হারে আকস্মিকভাবে হ্রাস এবং সিরাম ক্রিয়েটিনিনের ফলস্বরূপ বৃদ্ধি দ্বারা চিহ্নিত করা হয়। হাসপাতালে এবং নিবিড় পরিচর্যা ইউনিটে ভর্তি হওয়া রোগীদের, বিশেষ করে বয়স্কদের ক্ষেত্রে এই ক্ষতি সাধারণ। ইসকেমিয়া, সেপসিস এবং নেফ্রোটক্সিসিটি হল AKI-এর প্রধান কারণ যা প্রায়শই সহ-অবস্থিত থাকে এবং এইভাবে, রোগ নির্ণয় এবং চিকিত্সাকে জটিল করে তোলে [1]। গুরুতর AKI স্রাবকৃত রোগীদের প্রতিকূল ঘটনাগুলির ঝুঁকিতে রাখে, যেমন দীর্ঘস্থায়ী কিডনি রোগ, কার্ডিওভাসকুলার ঘটনা, ক্যান্সার এবং সংক্রমণ [2]। AKI-এর দ্রুত বিকাশ হয়েছে, এবং এর তীব্রতা এড়াতে বা কমানোর জন্য কোনো কার্যকর চিকিৎসা পাওয়া যায় না। নির্দিষ্ট পুষ্টি গ্রহণ AKI [3] তে রেনাল টিউবুলার আঘাত কমাতে পারে। অতএব, AKI-এর উপর নির্দিষ্ট পুষ্টির প্রভাব অধ্যয়ন করা AKI-কে প্রশমিত করতে সাহায্য করবে এবং এর সাথে ডিসচার্জ হওয়া রোগীদের ঝুঁকি মোকাবেলা করবে।

প্রদাহ এবং লিউকোসাইট নিয়োগAKI এর প্রধান মধ্যস্থতাকারী। কিডনি, বিশেষ করে রেনাল টিউবুলার কোষ তৈরি করেপ্রদাহজনক সাইটোকাইনসAKI-এর সময়, যেমন IL-1, IL-6, monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), এবং টিউমার নেক্রোসিস ফ্যাক্টর- (TNF-) [4,5] . এই সাইটোকাইনগুলি আরও সিস্টেমিক প্রদাহ এবং লিউকোসাইট নিয়োগকে প্ররোচিত করে। যদিও বেশ কিছু লিউকোসাইট উপসেট AKI (যেমন T-নিয়ন্ত্রক কোষ) এর উপর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব ফেলে, বেশিরভাগ নিউট্রোফিল, মনোসাইট এবং ডেনড্রাইটিক কোষ AKI পুনরুদ্ধারের জন্য ক্ষতিকর [6]। সিস্টেমিক প্রদাহ উচ্চ সাইটোকাইনের মাত্রার কারণে AKI থেকে পুনরুদ্ধারের জন্যও ক্ষতিকর [7]। কিডনি দ্বারা নিঃসৃত সাইটোকাইনগুলির মধ্যে, MCP-1 প্রধানত লিউকোসাইট নিয়োগের জন্য দায়ী, IL-1 এবং TNF- [8,9] সহ বিভিন্ন সাইটোকাইনগুলিতে প্রতিক্রিয়া জানায় এবং প্যাথোজেনেসিসে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে বিভিন্ন কিডনি আঘাত [10]. মানুষের প্রক্সিমাল টিউবুলার কোষে HK-2, হাইপোক্সিয়া-প্ররোচিত MCP-1 এক্সপ্রেশন সি-জুন এনএইচ2- টার্মিনাল কিনেস (JNK) পাথওয়ে দ্বারা মধ্যস্থতা করা হয় [11]। p38 পথটি রেনাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষগুলিতে অ্যালবুমিন-প্ররোচিত MCP-1 অভিব্যক্তিতেও জড়িত [12]। অতএব, JNK এবং p38 পথের নিয়ন্ত্রণ AKI তে প্রদাহ এবং লিউকোসাইট নিয়োগকে প্রভাবিত করতে পারে।

অলিগোস্যাকারাইড হল স্যাকারাইড পলিমার যাতে 3-10টি মনোস্যাকারাইড থাকে যা অপাচ্য এবং খাদ্যতালিকাগত সংযোজন হিসাবে মোট উপলব্ধ প্রিবায়োটিকের একটি প্রধান উপাদান গঠন করে [13]। মানবদেহে গৃহীত বেশিরভাগ ফ্রুক্টো-অলিগোস্যাকারাইড (এফওএস) কোলনিক উদ্ভিদ দ্বারা সম্পূর্ণরূপে গাঁজন করা হয় এবং প্রস্রাবে একটি ছোট ভগ্নাংশ পুনরুদ্ধার করা হয় [14]। Galacto-oligosaccharides (GOSs) রক্তে শোষিত হতে পারে এবং পরবর্তীতে প্রস্রাবে নির্গত হতে পারে [15]। একই পরিস্থিতি বাদামী সামুদ্রিক শৈবালের ফুকোইডানের ক্ষেত্রে প্রযোজ্য [16]। শোষিত অলিগোস্যাকারাইডগুলি জৈব রাসায়নিক বিক্রিয়া এবং কোষের স্বীকৃতিকে প্রভাবিত করতে পারে [17]। আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণা প্রকাশ করে যে অলিগো-ফুকোইডান (এফসি) রেনাল টিউবুলার সেল সারফেস প্রোটিন সিডি 44 এবং এর এক্সট্রা সেলুলার লিগ্যান্ডগুলির মধ্যে মিথস্ক্রিয়ায় হস্তক্ষেপ করে, যার ফলে রেনাল ইন্টারস্টিশিয়াল ফাইব্রোসিস [18] প্রতিরোধ করে। CD44 এবং এর এক্সট্রা সেলুলার লিগ্যান্ডগুলির মধ্যে মিথস্ক্রিয়া JNK সিগন্যালিং পাথওয়েকে প্রচার করে [19]। অতএব, অলিগোস্যাকারাইডের দৈনিক গ্রহণ AKI রোগীদের কিডনির প্রদাহ কমাতে পারে। যাইহোক, AKI-তে এই পলিমারগুলির প্রভাব অজানা রয়ে গেছে। এই গবেষণায় হাইপোক্সিয়া-চিকিত্সা করা রেনাল টিউবুলার কোষ এবং ইসকেমিয়া-রিপারফিউশন ইনজুরি (আইআরআই) সহ AKI ইঁদুরের উপর FC, FOS এবং GOS-এর প্রভাব তদন্ত করা হয়েছে। ফলাফলগুলি দেখায় যে তিনটি অলিগোস্যাকারাইড CD44-কে দমন করে রেনাল ইমিউন প্রতিক্রিয়া এবং AKI-পরবর্তী তীব্রতা হ্রাস করে। অতএব, পুষ্টির সম্পূরক হিসাবে এই পলিমারগুলির ব্যবহার একটি নতুন AKI চিকিত্সার কৌশল উপস্থাপন করে

2. উপকরণ এবং পদ্ধতি

2.1। উপকরণ

FOS (পলিমারাইজেশনের গড় ডিগ্রি < 10), GOS (পলিমারাইজেশনের গড় ডিগ্রি <8), এবং FC (পলিমারাইজেশনের গড় ডিগ্রি <5) সিগমা-অলড্রিচ (সেন্ট লুইস, MO, USA,) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল ক্যাট নং F8052), কার্বোসিন্থ (বার্কশায়ার, ইউকে, ক্যাট নং. OG32134), এবং হাই-কিউ মেরিন বায়োটেক ইন্টারন্যাশনাল (তাইপেই, তাইওয়ান), অলিগোস্যাকারাইডগুলি ডাবল-ডিস্টিল্ড H2O-তে দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং 0.22 µm জীবাণুমুক্ত ফিল্টার ব্যবহার করে ফিল্টার করা হয়েছিল (মার্ক মিলিপুর, ডার্মস্ট্যাড, জার্মানি)। হায়ালুরোনান (HA) এবং রিএজেন্ট গ্রেডের অন্যান্য সমস্ত রাসায়নিক সিগমা থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। জেএনকে (sc-7345), ফসফো-জেএনকে (sc-6254), MCP-1 (sc-52701), IL-1 (sc{{17}) এর বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডি }}), এবং TNF- (sc-52746) সান্তা ক্রুজ বায়োটেকনোলজি (ডালাস, TX, USA) থেকে কেনা হয়েছে। p38 (9212) এবং ফসফো-p38 (9211) এর বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডিগুলি সেল সিগন্যালিং প্রযুক্তি (ড্যানভার্স, এমএ, ইউএসএ) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। Ly6G (ab25377) এবং F4/80 (ab100790) এর বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডিগুলি Abcam (কেমব্রিজ, ইউকে) থেকে কেনা হয়েছিল। HIF-1 (NB100-105) এর বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডি নোভাস বায়োলজিক্যালস (শতবর্ষী, CO, USA) থেকে কেনা হয়েছিল।

2.2। কোষ সংস্কৃতি

ইঁদুরের প্রক্সিমাল রেনাল টিউবুলার কোষ (NRK-52E) এবং মাউস ম্যাক্রোফেজ লাইন RAW264.7 খাদ্য শিল্প গবেষণা ও উন্নয়ন ইনস্টিটিউট (শিঞ্চু, তাইওয়ান) থেকে কেনা হয়েছিল; অ্যান্টিবায়োটিক/অ্যান্টিফাঙ্গাল দ্রবণ এবং 10% ভ্রূণ বাছুরের সিরামের সাথে সম্পূরক DMEM-তে সংষ্কৃত; এবং একটি CO2 ইনকিউবেটরে 37 ◦C এবং 95% আর্দ্রতায় রাখা হয়। 70% সঙ্গমে পৌঁছানোর পরে, কোষগুলিকে সিরাম-মুক্ত মাধ্যমে সংষ্কৃত করা হয়েছিল এবং পরীক্ষার আগে রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল। হাইপোক্সিয়া পরীক্ষার জন্য, এনআরকে-52ই কোষ এবং আনারো প্যাক (মিতসুবিশি গ্যাস কেমিক্যাল আমেরিকা, নিউ ইয়র্ক, এনওয়াই, ইউএসএ) আয়তক্ষেত্রাকার বয়ামে (মিতসুবিশি গ্যাস কেমিক্যাল আমেরিকা) জমা করা হয়েছিল এবং পুরো সেটআপটি একটি 37টিতে স্থাপন করা হয়েছিল। 4 ঘন্টার জন্য ◦C ইনকিউবেটর। কোষগুলি তখন স্বাভাবিক অবস্থায় রাতারাতি সংষ্কৃত হয়।

2.3। ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ

সংক্ষেপে, 15 µg NRK-52E প্রোটিন লাইসেট প্রতিটি লেনে প্রয়োগ করা হয়েছিল, এবং ফলাফলগুলি ওয়েস্টার্ন ব্লট দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। বায়োসফ্ট (কেমব্রিজ, ইউকে) থেকে কোয়ান্টিস্কান সফ্টওয়্যার দ্বারা পাঁচটি স্বাধীন পরীক্ষা থেকে আপেক্ষিক প্রোটিন ব্যান্ডের মাত্রা নির্ধারণ করা হয়েছিল।

2.4। CD44-এর সংক্ষিপ্ত হস্তক্ষেপ (si)RNA ট্রান্সফেকশন

ইঁদুর CD44 siRNA (4390771) Thermo Scientific (Waltham, MA, USA) থেকে কেনা হয়েছিল। 70% সঙ্গমে বৃদ্ধি পাওয়ার পর, ম্যানু ফ্যাক্টুরারের নির্দেশে কোষগুলিকে Lipofectamine 2000 transfection reagent (Thermo Scientific) ব্যবহার করে siRNA দিয়ে স্থানান্তরিত করা হয়েছিল।

2.5। কোষ বিস্তার পরীক্ষা

হাইপোক্সিক NRK-52ই কোষগুলিকে 24 ঘন্টার জন্য সংষ্কৃত করার পরে, একই মাধ্যমটি একটি 96-ওয়েল প্লেটে (2000 কোষ/কূপ) RAW264.7 কোষগুলিকে সংস্কৃতিতে ব্যবহার করা হয়েছিল। ইনকিউবেশনের 24 ঘন্টা পরে, প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে SRB অ্যাসে কিট (Abcam, Cat. No. ab235935) ব্যবহার করে RAW264.7 কোষের বিস্তার বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

2.6। CD44 অ্যান্টিজেনিসিটি টেস্ট

রিকম্বিন্যান্ট ইঁদুর CD44 R&D সিস্টেম (Minneapolis, MN, USA, Cat. No. 6577-CD) থেকে প্রাপ্ত করা হয়েছিল এবং প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে HA-এর সাথে একটি বাধ্যতামূলক প্রতিক্রিয়া তৈরি করতে নিযুক্ত করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, 20 ng/mL রিকম্বিন্যান্ট ইঁদুর CD44 কে FC, FOS, বা GOS-এর বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে 10 মিনিটের জন্য মিশ্রিত করা হয়েছিল CD44 অ্যান্টিজেনিসিটির উপর অলিগোস্যাকারাইডের প্রভাব তদন্ত করার জন্য। প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে একটি CD44 ELISA কিট (Abcam, Cat. No. ab213928) ব্যবহার করে মিশ্রণগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

2.7। পরীক্ষামূলক প্রাণী এবং রেনাল আইআরআই

আট সপ্তাহ বয়সী পুরুষ 129S1/SvImJ ইঁদুরগুলি Lasco প্রযুক্তি (তাইপেই, তাইওয়ান) থেকে কেনা হয়েছিল। সমস্ত প্রাণী পরীক্ষাগুলি তাইপেই মেডিকেল ইউনিভার্সিটি কমিটি অফ এক্সপেরিমেন্টাল অ্যানিমাল কেয়ার অ্যান্ড ইউজ (অনুমোদন নম্বর LAC-2019-0511) দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল এবং ল্যাবরেটরি প্রাণীদের যত্ন ও ব্যবহারের জন্য NIH গাইড দ্বারা গঠিত হয়েছিল৷ আইআরআই আনয়নের জন্য, ইঁদুর (21-23 গ্রাম ওজনের) একটি ফ্ল্যাঙ্ক ছেদ পরিচালনা করে 30 মিনিটের জন্য দ্বিপাক্ষিক রেনাল পেডিকল ক্ল্যাম্পিংয়ের শিকার হয়েছিল [20]। অস্ত্রোপচারের আগে ইঁদুরকে আইসোফ্লুরেন দিয়ে ইনহেল্যান্ট অ্যানেশেসিয়া দ্বারা অবেদন দেওয়া হয়েছিল। শ্যাম-চালিত ইঁদুরগুলি কিডনি পেডিকেল ক্ল্যাম্পিং ব্যতীত একই রকম অপারেশন করেছে। সমস্ত ইঁদুরকে আইআরআই সার্জারির 1 দিন আগে থেকে 2 দিন পর্যন্ত ওরাল গ্যাভেজের মাধ্যমে অলিগোস্যাকারাইড খাওয়ানো হয়েছিল। পরীক্ষামূলক ইঁদুরগুলিকে n=8 দিয়ে নিম্নলিখিত পাঁচটি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল 3 এবং 7 দিন ফলাফলের জন্য: (1) শাম গ্রুপ; (2) AKI গ্রুপ; (3) AKI গ্রুপকে FC দিয়ে খাওয়ানো হয় (10 mg/kg/day); (4) AKI গ্রুপ FOS দিয়ে খাওয়ানো (10 mg/kg/day); এবং (5) AKI গ্রুপকে GOS দিয়ে খাওয়ানো হয় (10 mg/kg/day)। অস্ত্রোপচারের 3 বা 7 দিন পরে ইঁদুরগুলিকে বলি দেওয়া হয়েছিল এবং একটি বায়োকেমিক্যাল বিশ্লেষক এবং ELISA কিট ব্যবহার করে রক্ত ​​সংগ্রহ এবং বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। একেআই-এর বিকাশের মূল্যায়ন করতে প্রতিটি মাউসের সিরাম ক্রিয়েটিনিন স্তর বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ফরমালিন-নির্ধারিত 2 µm প্যারাফিন বিভাগে পর্যায়ক্রমিক অ্যাসিড-শিফ (PAS) স্টেনিং এবং ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি স্টেনিং (IHC) দ্বারা কিডনির রূপবিদ্যা পরীক্ষা করা হয়েছিল।

2.8। ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি স্টেনিং

কিডনির টিস্যু 4% বাফার প্যারাফর্মালডিহাইড দিয়ে ঠিক করা হয়েছিল, প্যারাফিনে এম্বেড করা হয়েছিল এবং আল্ট্রাভিশন কোয়ান্টো ডিটেকশন সিস্টেম এইচআরপি ড্যাব কিটস (থার্মো সায়েন্টিফিক, ফ্রেমন্ট, CA, USA) দিয়ে দাগ দেওয়ার জন্য 2 µm বিভাগে কাটা হয়েছিল এবং প্রস্তুতকারকের অ্যান্টিবডির নির্দেশাবলী দ্বারা হাইব্রিডাইজ করা হয়েছিল। .

2.9। PAS স্টেনিং

প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে কিডনির অংশগুলি একটি PAS স্টেইন কিট (Abcam, Cat. No. ab150680) দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল।

2.10। এলিসা অ্যাস

NRK-52E কোষের সংস্কৃত মাধ্যম এবং পরীক্ষামূলক ইঁদুরের সিরাম নমুনা MCP-1 ELISA কিট (Abcam, Cat. No. ab208979) এবং IL-1 ব্যবহার করে সংগ্রহ ও বিশ্লেষণ করা হয়েছিল ELISA কিট (Abcam, Cat. No. ab197742)। একটি TNF- ELISA কিট (R&D Systems, Cat. No. MTA00B) এবং নিউট্রোফিল জেলটিনেস-সম্পর্কিত লাইপোক্যালিন (NGAL) ELISA কিট (R&D Systems, Cat. No. MLCN20) ব্যবহার করে সিরামের নমুনাগুলিও বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। প্রস্তুতকারকের নির্দেশাবলী।

2.11। পরিসংখ্যানগত পরীক্ষা

ছাত্রদের টি-পরীক্ষা ব্যবহার করে দুটি গ্রুপের মধ্যে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্ধারণ করা হয়েছিল। পার্থক্যগুলি পি মানগুলির জন্য তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল<0.05

3. ফলাফল

3.1। অলিগোস্যাকারাইডগুলি হাইপোক্সিক এনআরকে-52ই কোষে CD44 এবং সাইটোকাইনের বৃদ্ধিকে বাধা দেয়

এফসি, এফওএস, এবং জিওএস দিয়ে চিকিত্সা করা এনআরকে-52ই কোষে CD44 এক্সপ্রেশন প্রথমে রেনাল টিউবুলার কোষে অলিগোস্যাকারাইডের প্রভাব মূল্যায়নের জন্য পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। হাইপোক্সিয়া-প্ররোচিত CD44 এক্সপ্রেশনটি 0 এর পরিসরে তিনটি অলিগোস্যাকারাইড দ্বারা বাধা দেওয়া হয়েছিল। অতএব, নিম্নলিখিত কোষ পরীক্ষায় 0.1 mg/mL এর অলিগোস্যাকারাইড ডোজ ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রস্তুত পদ্ধতিতে, হাইপোক্সিয়া চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে এনআরকে-52ই কোষে হাইপোক্সিয়া মার্কার HIF-1 এর অভিব্যক্তিকে প্ররোচিত করে, যা নির্দেশ করে যে কোষগুলি একটি হাইপোক্সিয়া অবস্থায় ছিল (চিত্র 1B)। হাইপোক্সিয়া ফসফরিলেটেড JNK, MCP-1, IL-1 , এবং TNF- এর মাত্রাগুলিকে নিয়ন্ত্রণ করে কিন্তু অলিগোস্যাকারাইড দিয়ে চিকিত্সা করা কোষগুলিতে নয় (চিত্র 1B, C)। JNK এক্সপ্রেশন হাইপোক্সিক কোষগুলিতে বৃদ্ধি পেয়েছে তবে এফসি-চিকিত্সা করা বা এফওএস-চিকিত্সা করা কোষগুলিতে নয়। জিওএস হাইপোক্সিক কোষে জেএনকে অভিব্যক্তিকে প্রভাবিত করেনি তবে ফসফোরিলেটেড জেএনকে-র আপগ্র্যুলেশনকে দমন করেছে। অতএব, অলিগোস্যাকারাইড হাইপোক্সিয়া-প্ররোচিত JNK সিগন্যালিং ট্রান্সডাকশন এবং রেনাল টিউবুলার কোষে সাইটোকাইন এক্সপ্রেশনকে বাধা দিতে পারে। যদিও এফসি এবং জিওএস হাইপোক্সিক কোষে ফস ফোরিলেটেড p38 আপগ্রেগুলেট করেছে, এই প্রোটিনের অভিব্যক্তি হাইপোক্সিক কোষে বাড়েনি। এই অনুসন্ধান ইঙ্গিত করে যে p38 NRK-52E কোষে হাইপোক্সিয়া-প্ররোচিত প্রতিক্রিয়াগুলিতে মূল ভূমিকা পালন করে না।

3.2। CD44 এবং JNK হাইপোক্সিক NRK-52ই কোষে সাইটোকাইন বৃদ্ধিতে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে

রেনাল টিউবুলার কোষে সিডি 44, ফসফরিলেটেড জেএনকে এবং সাইটোকাইনগুলির অভিব্যক্তিগুলি সমস্তই অলিগোস্যাকারাইড দ্বারা প্রভাবিত হয়েছিল, তবে তাদের সংযোগটি ব্যাখ্যা করা বাকি রয়েছে। হাইপোক্সিক কোষে JNK সিগন্যালিং ট্রান্সডাকশন এবং সাইটোকাইন এক্সপ্রেশনে CD44-এর ভূমিকা তদন্ত করতে, NRK-52E কোষগুলি CD44 siRNA এর বিভিন্ন ডোজ দিয়ে স্থানান্তরিত হয়েছিল। 50 এবং 100 PM-এ CD44 siRNA কার্যকরীভাবে হাইপোক্সিয়া-বর্ধিত CD44 এক্সপ্রেশনকে অবরুদ্ধ করে এবং ফসফরিলেটেড JNK, MCP- 1, IL-1 এবং TNF- (চিত্র) এর মাত্রায় উল্লেখযোগ্যভাবে হাইপোক্সিয়া-প্ররোচিত বৃদ্ধিকে বাধা দেয়। জেএনকে এক্সপ্রেশনে সিডি 44 ব্লকিংয়ের প্রভাব সিআরএনএ ডোজগুলির সাথে সম্পর্কিত ছিল। হাইপোক্সিক কোষে জেএনকে এক্সপ্রেশন 50 পিএম এ সিডি 44 সিআরএনএ দ্বারা প্ররোচিত হয়েছিল তবে 100 পিএম এ বাধা দেওয়া হয়েছিল। উভয় ডোজ ফসফরিলেটেড জেএনকে আপগ্র্যুলেশনকে দমন করে। JNK, SP600125-এর জন্য নির্বাচনী ইনহিবিটর, হাইপোক্সিক NRK-52E কোষে MCP-1, IL-1 , এবং TNF-এর অভিব্যক্তি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে (চিত্র 2B)। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে হাইপোক্সিয়া-প্ররোচিত সাইটোকাইনের উপর CD44 siRNA ট্রান্সফেকশনের প্রতিরোধমূলক প্রভাব ফসফরিলেটেড জেএনকে হ্রাসের জন্য দায়ী।

চিত্র 1. হাইপোক্সিক NRK-52ই কোষে CD44 সিগন্যাল ট্রান্সডাকশনে অলিগোস্যাকারাইডের প্রতিরোধমূলক প্রভাব। কোষগুলিকে 30 মিনিটের জন্য FC, FOS, বা GOS দিয়ে প্রিট্রিট করা হয়েছিল এবং তারপরে হাইপোক্সিক সংস্কৃতির শিকার হয়েছিল। ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দ্বারা প্রোটিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। (A) CD44 এক্সপ্রেশনে অলিগোস্যাকারাইডের ডোজ-নির্ভর প্রভাব। (B) CD44- সম্পর্কিত সংকেতে অলিগোস্যাকারাইডের প্রভাব। অলিগোস্যাকারাইডের ঘনত্ব 0.1 মিলিগ্রাম / এমএল হিসাবে সেট করা হয়েছিল। প্রোটিন ব্যান্ডের আপেক্ষিক বৃদ্ধি বার চার্ট আকারে (C) উপস্থাপন করা হয়। ফলাফলগুলি গড় ± SD (n=4) হিসাবে প্রকাশ করা হয়।

চিত্র 2. NRK-52ই কোষে হাইপোক্সিয়া-প্ররোচিত প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াতে CD44 এবং JNK-এর ভূমিকা। প্রোটিন এক্সপ্রেশন ওয়েস্টার্ন ব্লট দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। (A) ফসফরিলেটেড JNK এবং সাইটোকাইনগুলিতে CD44 siRNA ট্রান্সফেকশনের প্রতিরোধমূলক প্রভাব। (বি) সাইটোকাইনের উপর SP600125-এর প্রতিরোধমূলক প্রভাব। কোষগুলিকে 20 µM SP600125 দিয়ে 30 মিনিট pbeforehypoxia চিকিত্সার জন্য pretreated করা হয়েছিল। প্রোটিন ব্যান্ডের আপেক্ষিক বৃদ্ধি বার চার্ট আকারে উপস্থাপন করা হয়। ফলাফলগুলি গড় ± SD (n=4) হিসাবে প্রকাশ করা হয়।

3.3। রেনাল টিউবুলার কোষে হাইপোক্সিয়া-প্ররোচিত সাইটোকাইন নিঃসরণ ম্যাক্রোফেজ বিস্তারকে উৎসাহিত করে

প্রদাহ হল AKI-তে রেনাল ইনজুরির মধ্যস্থতাকারী। সুতরাং, লিউকোসাইটের উপর অলিগোসাচা রাইডের প্রভাব পরীক্ষা করা হয়েছিল। চিত্র 3A দেখায় যে FC, FOS এবং GOS ম্যাক্রোফেজ RAW264.7 কোষের বিস্তারকে প্রভাবিত করেনি। RAW264.7 কোষের বিস্তার 24-হাইপক্সিক NRK এর জন্য ঘন্টা সংস্কৃতির মাধ্যম-52ই কোষের (চিত্র 3B) দ্বারা প্রচারিত হয়েছিল কিন্তু হাইপোক্সিক NRK-52ই কোষগুলির জন্য মাধ্যম দ্বারা নয় অলিগোস্যাকারাইড পূর্ববর্তীদের তুলনায় উচ্চতর MCP-1 এবং IL-1 স্তর ছিল (চিত্র 3C, D)। তিনটি অলিগোস্যাকারাইডই হাইপোক্সিক এনআরকে-52ই কোষের সংস্কৃতি মাধ্যমে MCP-1 এবং IL-1 উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে। অতএব, এফসি, এফওএস এবং জিওএস হাইপোক্সিক রেনাল টিউবুলার কোষে সাইটোকাইনের প্রকাশ এবং নিঃসরণ কমাতে পারে এবং ফলস্বরূপ, আহত রেনাল টিউবুলার কোষের কারণে প্রদাহ হ্রাস করতে পারে।