Natalenamides A-C, টারমাইট-সম্পর্কিত অ্যাক্টিনোমাদুরা এসপি থেকে সাইক্লিক ট্রিপেপটাইডস। RB99

বিমূর্ত:

সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, পোকামাকড়-সম্পর্কিত ব্যাকটেরিয়ার জৈব রসায়নের তদন্ত বৃদ্ধি পেয়েছে। বিশ্লেষণাত্মক অনুকরণ প্রক্রিয়াগুলির সাথে মিলিত হলে, এই গবেষণাগুলি কাঠামোগত এবং/অথবা জৈবিকভাবে অভিনব যৌগগুলি সনাক্ত করার জন্য একটি শক্তিশালী কৌশল প্রদান করে। অ-রাইবোসোম্যালি সংশ্লেষিত সাইক্লিক পেপটাইডগুলির উচ্চ ঔষধি সম্ভাবনা সহ একটি বিস্তৃত জৈব সক্রিয়তা বর্ণালী রয়েছে।

এখানে, আমরা তিনটি নতুন চক্রাকার ট্রিপেপটাইডের আবিষ্কারের রিপোর্ট করি: ন্যাটালেনামাইড এ-সি (যৌগগুলি 1-3)। এই যৌগগুলি ছত্রাক-ক্রমবর্ধমান উষ্ণতা-সম্পর্কিত অ্যাক্টিনোমাদুরা sp-এর কালচার ব্রথ থেকে শনাক্ত করা হয়েছিল। RB99 একটি তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (এলসি)/আল্ট্রাভায়োলেট (ইউভি)/মাস স্পেকট্রোমেট্রি (এমএস)-ভিত্তিক অনুকরণ পদ্ধতি ব্যবহার করে। নতুন যৌগগুলির রাসায়নিক কাঠামো (1-3) এক-মাত্রিক (1H এবং 13C) এবং দ্বি-মাত্রিক (1H-1H-COSY, HSQC, HMBC) পারমাণবিক চৌম্বক সহ ব্যাপক বর্ণালী পদ্ধতির বিশ্লেষণের মাধ্যমে প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল রেজোন্যান্স স্পেকট্রোস্কোপি (NMR), একসাথে উচ্চ-রেজোলিউশন ইলেক্ট্রোস্প্রে আয়নাইজেশন ভর স্পেকট্রোমেট্রি (HR-ESIMS) ডেটা সহ। নতুন যৌগগুলির নিখুঁত কনফিগারেশনগুলি মার্ফেয়ের বিশ্লেষণ ব্যবহার করে ব্যাখ্যা করা হয়েছিল। ট্রিপেপটাইডের জন্য বেশ কিছু জৈব সক্রিয়তা পরীক্ষার মাধ্যমে, আমরা দেখতে পেয়েছি যে যৌগ 3 3-আইসোবিউটিল-1-মিথাইলক্সানথাইন (আইবিএমএক্স)-প্ররোচিত মেলানিন উৎপাদনের উপর উল্লেখযোগ্য প্রতিরোধমূলক প্রভাব প্রদর্শন করেছে। যৌগ 3-এর প্রভাব কোজিক অ্যাসিডের মতোই ছিল, একটি যৌগ যা ত্বক-সাদা করার প্রভাব সহ একটি প্রসাধনী উপাদান হিসাবে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়।

ফর্সা, মসৃণ এবং সূক্ষ্ম ত্বক সর্বদা প্রাচ্যের মহিলাদের দ্বারা অনুসরণ করা লক্ষ্য ছিল। ত্বকের যত্নের পণ্যগুলির জন্য সাদা করার এজেন্টগুলির গবেষণা এবং বিকাশ মূলত টাইরোসিনেজ কার্যকলাপের বাধার উপর ভিত্তি করে।

বেনজিন রিং বা ফেনোলিক হাইড্রক্সিল স্ট্রাকচার ধারণকারী যৌগগুলির সম্ভাব্য সাদা করার প্রভাব রয়েছে, যেমন বর্তমানে সাধারণত ব্যবহৃত সাদা করার এজেন্ট আরবুটিন, যা টাইরোসিনেজের কার্যকলাপকে বাধা দিয়ে সাদা করার প্রভাব প্রয়োগ করতে পারে।

এবং আমরা দেখতে পেয়েছি যে Cistanche deserticola একটি ঝকঝকে প্রভাব আছে। Cistanche deserticola এর প্রধান সক্রিয় উপাদান, phenylethanoid glycosides, হল এক ধরনের প্রাকৃতিক গ্লাইকোসাইড যৌগ। গবেষণায় দেখা গেছে যে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড টাইরোসিনেজের ক্রিয়াকলাপ এবং মানুষের এপিডার্মাল মেলানোসাইটগুলিতে মেলানিনের উত্পাদনকে বাধা দিতে পারে এবং এটি সাদা করার প্রভাব ফেলে। এজেন্টের কার্যকারিতা।

cistanche tubulosa নির্যাস পাউডার ক্লিক করুন

কীওয়ার্ড:

ছত্রাক-ক্রমবর্ধমান উইপোকা; অ্যাক্টিনোমাদুর এসপি; tripeptides; natalenamides A-C; ত্বক সাদা করার প্রভাব।

1। পরিচিতি

চাষের পোকামাকড়ের প্রতিরক্ষামূলক ব্যাকটেরিয়া প্রতীকের রাসায়নিক বিশ্লেষণ সাম্প্রতিক বছরগুলিতে প্রাকৃতিক পণ্য রসায়নবিদদের মধ্যে অনেক মনোযোগ আকর্ষণ করেছে [1-5]। অত্যাধুনিক নিউক্লিয়ার ম্যাগনেটিক রেজোন্যান্স (NMR)/ম্যাস স্পেকট্রোমেট্রি (MS)-ভিত্তিক ডিরেপ্লিকেশন প্রসেস এবং বাস্তুসংস্থানগতভাবে প্রাসঙ্গিক বায়োসেস ব্যবহার করে, বেশ কিছু অ-রাইবোসোমলি সংশ্লেষিত সাইক্লিক পেপটাইড সহ একটি চিত্তাকর্ষক পরিমাণে কাঠামোগতভাবে আকর্ষণীয় প্রাকৃতিক পণ্য উন্মোচিত হয়েছে। মাইক্রোবিয়াল সিম্বিয়ন্টস থেকে [6]। সবচেয়ে বিশিষ্ট উদাহরণগুলির মধ্যে রয়েছে অ্যান্টিফাঙ্গাল ডেন্টিজেরুমাইসিন, একটি ছত্রাক-বর্ধমান-পিঁপড়া-সম্পর্কিত সিউডোনোকার্ডিয়া এসপি থেকে বিচ্ছিন্ন একটি চক্রীয় ডেপসিপেপটাইড। [৭], এবং জেরুমাইসিন এ-সি, পিপারাজিক অ্যাসিড-বহনকারী চক্রীয় ডেপসিপেপ্টাইডগুলি সিউডোনোকার্ডিয়া এসপি থেকে সনাক্ত করা হয়েছে। [৮]।

সাইক্লিক পেপটাইডগুলি এই ফার্মাকোলজিক্যালভাবে প্রতিশ্রুতিশীল কাঠামোর [9-12] দিকে বেশ কয়েকটি সিন্থেটিক পদ্ধতির উত্সাহ দিয়ে জৈবিক ক্রিয়াকলাপের একটি বিস্তৃত পরিসর প্রদর্শন করতে দেখানো হয়েছে। 40 টিরও বেশি সাইক্লিক পেপটাইড ওষুধ বর্তমানে বাজারজাত করা হয় এবং ক্লিনিকাল পরিবেশে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয় এবং প্রতি বছর গড়ে প্রায় একটি নতুন সাইক্লিক পেপটাইড ওষুধ বাজারে প্রবেশ করে [13]।

উইপোকা-সম্পর্কিত জীবাণুগুলি [14-17] থেকে কাঠামোগতভাবে অভিনব এবং/অথবা বায়োঅ্যাকটিভ সেকেন্ডারি মেটাবোলাইটগুলি সনাক্ত করার জন্য আমাদের অব্যাহত প্রচেষ্টার অংশ হিসাবে, আমরা উইপোকা-সম্পর্কিত অ্যাক্টিনোমাদুরা এসপি-তে মনোনিবেশ করেছি। RB99, ছত্রাক-ক্রমবর্ধমান উইপোকা থেকে বিচ্ছিন্ন, ম্যাক্রোটার্মেস নাটালেনসিস। আমাদের লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (এলসি)/আল্ট্রাভায়োলেট (ইউভি)/মাস স্পেকট্রোমেট্রি (এমএস)-ভিত্তিক ডিরেপ্লিকেশন কৌশলটি সম্ভাব্য অভিনব বায়োঅ্যাকটিভ প্রাকৃতিক পণ্য তৈরি করেছে। এই সমীক্ষায়, আমরা তিনটি নতুন চক্রীয় ট্রিপেপটাইডের বিচ্ছিন্নতা এবং রাসায়নিক সনাক্তকরণের রিপোর্ট করি, ন্যাটালেনামাইড এ-সি (যৌগগুলি 1-3, চিত্র 1), একটি এলসি/ইউভি/এমএস-ভিত্তিক ডেরিপ্লিকেশন পদ্ধতি ব্যবহার করে সেইসাথে সাইটোটক্সিকের জন্য তাদের জৈবিক মূল্যায়ন। , প্রদাহ বিরোধী, এবং ত্বক সাদা করার কার্যক্রম।

2. ফলাফল এবং আলোচনা

2.1। লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (এলসি)/আল্ট্রাভায়োলেট (ইউভি)/মাস স্পেকট্রোমেট্রি (এমএস)-ভিত্তিক যৌগগুলির বিচ্ছিন্নতা 1-3

অ্যাক্টিনোমাদুর এসপি। RB99 একটি উষ্ণ কর্মী (M. natalensis) এর পৃষ্ঠ থেকে বিচ্ছিন্ন ছিল। প্রায় সম্পূর্ণ 16S রাইবোসোমাল রাইবোনিউক্লিক অ্যাসিড (rRNA) অনুক্রমের ফাইলোজেনেটিক বিশ্লেষণ পরামর্শ দেয় যে স্ট্রেন RB99 অ্যাক্টিনোমাদুরা গণের অন্তর্গত, যার নিকটতম প্রতিবেশী অ্যাক্টিনোমাদুরা নাইট্রিটিজেনেস NBRC 15918T। সমৃদ্ধ সংস্কৃতির নির্যাসগুলির পরবর্তী LC/UV/MS-ভিত্তিক বিশ্লেষণে নাইট্রোজেন পরমাণু ধারণকারী অনন্য আণবিক আয়ন শিখরগুলির সাথে বৈশিষ্ট্যযুক্ত UV শোষণের একটি সেট প্রকাশ করা হয়েছে।

সংশ্লিষ্ট বিপাক শনাক্ত করতে এবং তাদের কার্যকলাপ তদন্ত করতে, অপ্টিমাইজড বৃদ্ধির অবস্থা ব্যবহার করে বড় আকারের গাঁজন (2 L ISP2 আগর থেকে 100 আগর প্লেট, pH 6, 30 ◦C তাপমাত্রায় 10 দিন) এবং একটি প্রতিষ্ঠিত ওয়ার্ক-আপ এবং প্রাক-বিশুদ্ধকরণ পদ্ধতি ছিল। প্রয়োগ করা হয়েছে [১৭]। পরবর্তী LC-UV/MS-নির্দেশিত ভগ্নাংশ এবং পুনরাবৃত্তিমূলক আধা-প্রস্তুতিমূলক উচ্চ-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (HPLC) এর ফলে একটি অনন্য NMR/MS প্যাটার্ন সহ তিনটি বিপাককে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছে। প্রাকৃতিক পরিবেশকে অনুকরণ করতে এবং মেটাবোলাইট উৎপাদনকে উদ্দীপিত করার জন্য আমরা বিভিন্ন লবণ (NaCl, KBr 1-3 শতাংশ) এবং মিডিয়া কম্পোজিশন (ISP1-6 মিডিয়া) ব্যবহার করে বৃদ্ধি এবং মিডিয়া অধ্যয়ন করেছি, যার ফলে তিনটি নতুনের উপস্থিতিও ঘটেছে। বিপাক (পরিপূরক চিত্র S19 দেখুন)।

2.2। যৌগগুলির কাঠামোগত ব্যাখ্যা

Natalenamide A (1) একটি নিরাকার পাউডার হিসাবে অর্জিত হয়েছিল। 1-এর আণবিক সূত্রটি m/z 398.1691 [M প্লাস Na] প্লাস (C19H25N3O5Na, 398.1692-এর জন্য গণনা করা হয়েছে) ইলেক্ট্রো-আয়ন মোড উচ্চ-রেজোলিউশন ইলেক্ট্রো-রেজোলিউশন ব্যবহার করে সোডিয়াম-যুক্ত আণবিক আয়ন থেকে C19H25N3O5 হতে নির্ধারিত হয়েছিল। ESIMS) ডেটা। ইনফ্রারেড (IR) বর্ণালী 1670 cm−1 এ একটি শক্তিশালী শোষণ ব্যান্ড দেখিয়েছে, যা অণুতে অ্যামাইড গ্রুপের উপস্থিতি নির্দেশ করে। 1 এর 1H NMR ডেটার বিশদ বিশ্লেষণ (সারণী 1) একটি পেপটাইড কঙ্কালের সাধারণ সংকেত নির্দেশ করে, দুটি মিথাইল সংকেত প্রদর্শন করে (δH 0.91 (3H, d, J=7}৷{29) }} Hz, H-3) এবং 0.92 (3H, d, J=7.0 Hz, H-4), তিনটি মিথিলিন সংকেত (δH 1.95 (1H, m, H-7a), 2.27 (1H, m, H-8a), 2.36 (1H, m, H-8b), 2.48 (1H , m, H{{50}}b), 2.97 (1H, dd, J=14৷{63}}, 8৷{65}} Hz, H{{58} }a), এবং 3.20 (1H, dd, J=14৷{91}}, 5.0 Hz, H-12b)), চারটি মিথিন সংকেত (δH 2.02 (1H) , m, H-2), 4.16 (1H, d, J=7.5 Hz, H-1), 4.20 (1H, dd, J=8.5, 4.5 Hz, H-6), এবং 4.63 (1H, dd, J=8.0, 5.0 Hz, H-11)), এবং পাঁচটি ওভারল্যাপড অ্যারোমেটিক প্রোটন (δH 7.18 (1H, m, H-16), 7.23 (2H, m, H-14/18), এবং 7.24 (2H, m, H-15/17))।

13C NMR স্পেকট্রাম (সারণী 1), HSQC এবং HMBC স্পেকট্রার সহায়তায়, দুটি মিথাইল সংকেতের জন্য দায়ী মোট 19টি কার্বন অনুরণন (δC 18.9 এবং 19.9), তিনটি মিথিলিন সংকেত (δC 27৷{8}}, 30.6, এবং 38.8), নয়টি মিথিন সংকেত (δC 32.1, 55.6, 58.0, 60.4, 127.8, 129.5 (×2), এবং 130.6 (×2)), পাঁচটি সুগন্ধযুক্ত কার্বন, একটি ওলেফিনিক কার্বন সহ সংকেত (δC 138.8), এবং চারটি কার্বনিল কার্বন সংকেত (δC 173.2, 173.3, 174.8, এবং 181.3)। উপরের স্পেকট্রোস্কোপিক ডেটার সাথে মিলিত, দ্বি-মাত্রিক (2D) NMR (1H-1H COSY, HSQC, এবং HMBC পরীক্ষা) এর বিশদ পরিদর্শন 1-এ তিনটি অ্যামিনো অ্যাসিডের উপস্থিতি প্রকাশ করেছে: গ্লুটামেট (গ্লু), ফেনিল্যালানিন ( ফে), এবং ভ্যালাইন (ভাল) (চিত্র 2)। এই অ্যামিনো অ্যাসিডগুলির সংযোগ H-1/C-5 এবং C-19, H-11/C-10 এবং C{এর HMBC পারস্পরিক সম্পর্ক দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল {50}}, এবং H-6/C-5 এবং C-10 (চিত্র 2)।

1 এর নিখুঁত কনফিগারেশন শনাক্ত করার জন্য, মারফের পদ্ধতিটি -H গুণিতক (C-1, C-6, এবং C-11) এর স্টেরিওকেমিস্ট্রি নির্ধারণ করতে প্রয়োগ করা হয়েছিল। 1 এর অ্যাসিড হাইড্রোলাইসেট এবং স্ট্যান্ডার্ড অ্যামিনো অ্যাসিড (L/D-Glu, Phe, এবং Val) 1-ফ্লুরো-2,4-ডিনিট্রোফেনাইল-5-এল-অ্যালানাইন দিয়ে ডেরিভেটাইজ করা হয়েছিল amide (L-FDAA)। পর্যায়ক্রমে, 1 এর ডেরিভেটাইজড মিশ্রণ এবং স্ট্যান্ডার্ড অ্যামিনো অ্যাসিড তাদের ধরে রাখার সময় পরীক্ষা করার জন্য LC/MS দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। স্ট্যান্ডার্ড অ্যামিনো অ্যাসিডের তুলনায় 1-এর L-FDAA ডেরিভেটিভের ধারণ সময়ের উপর ভিত্তি করে Glu, Phe এবং Val moieties-এর নিখুঁত কনফিগারেশনগুলি L-ফর্ম হিসাবে নির্ধারিত হয়েছিল। এইভাবে, 1 এর গঠন চিত্র 1 এ দেখানো চক্রীয় ট্রিপেপটাইড হিসাবে ব্যাখ্যা করা হয়েছিল।

Natalenamide B (2) একটি নিরাকার পাউডার হিসাবে বিচ্ছিন্ন ছিল। এর আণবিক সূত্র (C20H27N3O5) হাইড্রোজেন এবং সোডিয়াম-যুক্ত আণবিক আয়ন শিখর থেকে 390.2032 [M প্লাস H] প্লাস (C20H28N3O5, 390.2029 এর জন্য গণনা করা হয়েছে) এবং 412.28N3O5, 390.2029 এর জন্য গণনা করা হয়েছিল, এবং 412.184N প্লাস 412। 1 এর আণবিক সূত্র এবং NMR বর্ণালী ডেটার সাথে তুলনা করে, যৌগ 2 পেপটাইড কঙ্কালে একটি অতিরিক্ত CH2 গ্রুপ রয়েছে বলে মনে হয়েছে। 2 এর এক-মাত্রিক (1D) (1H এবং 13C NMR) এবং 2D NMR (1H– 1H COSY, TOCSY, HSQC, এবং HMBC) স্পেকট্রার ব্যাপক যাচাই-বাছাই তিনটি অ্যামিনো অ্যাসিড অবশিষ্টাংশের অস্তিত্ব প্রকাশ করে: Glu, Phe এবং Leu (লিউসিন)। এই অ্যামিনো অ্যাসিডগুলির ক্রমটি H-1/C-6 এবং C-20, H-12/C-11 এবং C-এর HMBC পারস্পরিক সম্পর্কের ভিত্তিতে তৈরি করা হয়েছিল -20, এবং H-7/C-6 এবং C-11 (চিত্র 2)। 2 এর নিখুঁত কনফিগারেশন নির্ধারণ করতে, L-FDAA এর সাথে Glu, Phe এবং Leu অবশিষ্টাংশের ডেরিভাটাইজেশন করা হয়েছিল এবং তারপরে LC/MS দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। LC/MS ডেটাতে, L-Glu, L-Phe, এবং L-Leu সনাক্ত করা হয়েছিল 2-এর L-FDAA ডেরিভেটিভগুলির জন্য ধারণ সময়কে স্ট্যান্ডার্ড অ্যামিনো অ্যাসিডগুলির সাথে তুলনা করে। এইভাবে, 2-এর রাসায়নিক কাঠামো চিত্র 1-এ দেখানো সাইক্লিক ট্রিপেপটাইড হিসাবে প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল।

ন্যাটালেনামাইড C (3) এর পজিটিভ-মোড HR-ESIMS ডেটা 424.1870 [M প্লাস H] প্লাস এ হাইড্রোজেন এবং সোডিয়াম-যুক্ত আণবিক আয়ন প্রদর্শন করেছে (C23H26N3O5, 424.1872 এর জন্য গণনা করা হয়েছে) এবং 446.16694N প্লাস 3294N এর জন্য 424.1692)। এটি প্রস্তাব করেছে যে এর আণবিক সূত্রটি ছিল C23H25N3O5। 3-এর 1D এবং 2D NMR স্পেকট্রার একটি বিশদ বিশ্লেষণ ইঙ্গিত দেয় যে এর রাসায়নিক গঠন 2-এর মতো ছিল, Leu-কে 3-তে Phe-এর সাথে প্রতিস্থাপিত করা ছাড়া। H-1/C-9 এবং C-23, H-15/C-14 এবং C-23, এবং H-10/ C-9 এবং C-14 (চিত্র 2)। যৌগ 3-এ মারফেয়ের পদ্ধতি প্রয়োগ করে, -H গুণিতকগুলির (C-1, C-10, এবং C-15) সম্পূর্ণ কনফিগারেশনগুলিকে একটি এল-গ্লু এবং দুটি এল হিসাবে ব্যাখ্যা করা হয়েছিল। -Phe moieties. তদনুসারে, চিত্র 1 এ দেখানো হিসাবে 3 এর সম্পূর্ণ কাঠামো নির্ধারণ করা হয়েছিল।

Natalenamides A-C হল ট্রাইসাইক্লিক পেপটাইড, সম্ভবত অ-রাইবোসোমাল উত্সের। বর্তমানে, বেশ কিছু বায়োঅ্যাকটিভ সাইক্লিক ট্রিপেপটাইডকে প্রাকৃতিক পণ্য হিসেবে চিহ্নিত করা হয়েছে: সাইটোটক্সিক 17-মেম্বারড সাইক্লিক ট্রিপেপটাইড (যেমন, OF4949 I–IV) পেনিসিলিয়াম রুগুলোজ [18] থেকে বিচ্ছিন্ন; অ্যান্টিফাঙ্গাল স্ক্লেরোটোমিস A−K, হ্যালোটোলারেন্ট ব্যাকটেরিয়ার গাঁজন ঝোল থেকে চিহ্নিত [১০]; এবং antiproliferative সাইক্রোফিলিক E, Aspergillus গণের দুটি সামুদ্রিক শৈবাল থেকে প্রাপ্ত ছত্রাকের স্ট্রেনগুলির একটি মিশ্র সংস্কৃতি থেকে বিচ্ছিন্ন [19]।

2.3। যৌগগুলির জৈবিক কার্যকলাপ 1-3

যেহেতু সাইক্লিক পেপটাইডগুলি বিস্তৃত জৈবিক ক্রিয়াকলাপ প্রদর্শন করে বলে রিপোর্ট করা হয়েছে বিচ্ছিন্ন সাইক্লিক ট্রিপেপটাইড ({{0}}) এর জৈবিক প্রভাব তিনটি জৈব ক্রিয়াকলাপ ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। যৌগগুলির সাইটোটক্সিসিটি চারটি ক্যান্সার সেল লাইনের (MCE7 স্তন ক্যান্সার কোষ, HeLa সার্ভিকাল ক্যান্সার কোষ, A549 মানুষের ফুসফুসের ক্যান্সার কোষ, এবং HepG2 লিভার ক্যান্সার কোষ) বিভিন্ন ঘনত্বে (0, 6.25) এর বিরুদ্ধে তদন্ত করা হয়েছিল , 12.5, 25, 50, এবং 100 uM)। যৌগ 1 MCF-7, HeLa, বা A549 কোষের কোষের কার্যক্ষমতাকে প্রভাবিত করেনি। যাইহোক, 100 এম যৌগ 1 সহ HepG2 কোষের চিকিত্সা কোষের কার্যক্ষমতা 78.5 প্লাস 3.2 শতাংশে হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 3)। যৌগ 2 HeLa এবং A549 কোষের কোষের কার্যক্ষমতা কমিয়ে 82 করেছে৷{27}}.1 শতাংশ এবং 73৷{30}}.0 শতাংশ, যথাক্রমে, কিন্তু MCF-7 বা HepG2 কোষ (চিত্র 3)। যৌগ 3 কোন সেল লাইনের কার্যকারিতাকে প্রভাবিত করেনি (চিত্র 3)।

এরপরে, RAW264.7 ম্যাক্রোফেজগুলি বিচ্ছিন্ন যৌগগুলির অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি প্রভাবগুলি তদন্ত করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। কোষের বেঁচে থাকার হার পরিবর্তনের কারণে সৃষ্ট NO উৎপাদনে ত্রুটি দূর করতে, প্রতিটি যৌগের অ-বিষাক্ত ঘনত্ব পরীক্ষা করা হয়েছিল। চিত্র 4-তে দেখানো হয়েছে, যৌগ 1-3-এর RAW264.7 কোষে (চিত্র 4A–C) কিছু সাইটোটক্সিক প্রভাব ছিল এবং লিপোপলিস্যাকারাইড (LPS)-উদ্দীপিত RAW264.7 কোষে (চিত্র 4D–F) নো উৎপাদনের উপর কোনো প্রতিরোধক প্রভাব ফেলেনি। .

B16F10 কোষে মেলানিন সামগ্রীর উপর যৌগ 1-3 এর প্রতিরোধমূলক প্রভাবগুলি তাদের ত্বক-সাদা করার কার্যকলাপের প্রমাণ হিসাবে পরীক্ষা করা হয়েছিল (চিত্র 5)। যেহেতু কোষের কার্যক্ষমতার পরিবর্তনের ফলে মেলানিনের উৎপাদন এবং পরিমাপে ত্রুটি দেখা দেয়, আমরা প্রথমে B16F10 কোষের বেঁচে থাকার উপর যৌগ 1-3 এর প্রভাব পরীক্ষা করেছি। যৌগ 1-3 ব্যবহৃত কোন ঘনত্বে B16F10 কোষে কোন সাইটোটক্সিক প্রভাব ফেলেনি (চিত্র 5A-C)। তারপরে আমরা 3-আইসোবিউটিল-1-মিথাইলক্সানথাইন (IBMX)-এ B16F10 কোষে মেলানিন উৎপাদনে যৌগগুলির প্রতিরোধমূলক প্রভাবগুলি মূল্যায়ন করেছি (চিত্র 5D–F)৷ IBMX, মেলানোজেনেসিসের একটি সুপরিচিত উদ্দীপক, মেলানোমা কোষে একক চিকিত্সার পরে মেলানিন উৎপাদনে উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি ঘটায়। মূল্যায়ন করা যৌগগুলির মধ্যে, যৌগ 3 (5-100 µM এ) ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে আইবিএমএক্স-মধ্যস্থ মেলানিন সংশ্লেষণে উল্লেখযোগ্য প্রতিরোধমূলক প্রভাব প্রদর্শন করেছে। কোজিক অ্যাসিড, আমাদের ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ, ত্বক-সাদা করার প্রভাব সহ একটি প্রসাধনী উপাদান হিসাবে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়েছে [20]। IBMX-প্ররোচিত মেলানিন উৎপাদনের উপর যৌগ 3-এর প্রতিরোধমূলক প্রভাব কোজিক অ্যাসিডের (চিত্র 5F) অনুরূপ ছিল, পরামর্শ দেয় যে যৌগ 3 B16F10 মেলানোমা কোষে IBMX-প্ররোচিত মেলানিন উৎপাদনের একটি শক্তিশালী প্রতিরোধক হিসাবে কাজ করে।

অধিকন্তু, যৌগ 3 অল্প সংখ্যক অমেধ্য দ্বারা দূষিত ছিল, যা NMR স্পেকট্রোস্কোপিক ডেটা এবং LC/MS বিশ্লেষণ (পরিপূরক উপাদান, চিত্র S11–S15 এবং S23) এর ব্যাখ্যা দ্বারা ফ্যাটি অ্যাসিড অ্যানালগ হিসাবে নির্ধারিত হয়েছিল। অমেধ্যগুলির কার্যকলাপ সনাক্ত করার জন্য, ফ্যাটি অ্যাসিড অ্যানালগগুলির সাথে অতিরিক্ত পরীক্ষাগুলি B16F10 কোষে IBMX-প্ররোচিত মেলানিন উত্পাদনের উপর তাদের প্রতিরোধমূলক প্রভাবের জন্য পরিচালিত হয়েছিল, যা প্রকাশ করেছে যে পরীক্ষিত যৌগগুলির কোনও সাদা করার প্রভাব নেই (পরিপূরক উপাদান, চিত্র S24)। এইভাবে, যদিও আমরা বাদ দিতে পারি না যে যৌগ 3-এর অমেধ্যগুলি IBMX-প্ররোচিত মেলানিন উত্পাদনে বাধা প্রভাবের জন্য দায়ী, এটি অসম্ভাব্য বলে মনে হয়।

3. উপকরণ এবং পদ্ধতি

3.1। সাধারণ পরীক্ষামূলক পদ্ধতি

ইনফ্রারেড স্পেকট্রা ব্রুকার IFS-66/S FT-IR (Bruker, Billerica, MA, USA) স্পেকট্রোমিটারে অর্জিত হয়েছিল। ইলেক্ট্রোস্প্রে ionization এবং HR-ESIMS স্পেকট্রা একটি SI-2/LCQ DecaXP লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (LC)-মাস স্পেকট্রোমিটার (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) এ পরিমাপ করা হয়েছিল। NMR স্পেকট্রা, 1H–1H COSY, HSQC, এবং HMBC পরীক্ষাগুলি সহ, একটি Varian UNITY INOVA 800 NMR স্পেকট্রোমিটার (Varian, Palo Alto, CA, USA) 800 MHz (1H) এবং 200 MHz (13C) ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল। পিপিএম (δ) এ দেওয়া রাসায়নিক পরিবর্তন। প্রস্তুতিমূলক HPLC একটি Waters 1525 Binary HPLC পাম্প ব্যবহার করেছে Waters 996 Photodiode Array Detector (Waters Corporation, Milford, CT, USA) সহ। সিলিকা জেল 60 (230–400 মেশ, মার্ক, কেনিলওয়ার্থ, এনজে, ইউএসএ) এবং RP-C18 সিলিকা জেল (230-400 মেশ, মার্ক, কলাম ক্রোমাটোগ্রাফির জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল৷ আধা-প্রস্তুতিমূলক HPLC SPD সহ একটি শিমাদজু প্রমিনেন্স HPLC সিস্টেম ব্যবহার করেছিল{ {22}}A/20AV সিরিজের বিশিষ্টতা HPLC আল্ট্রাভায়োলেট-দৃশ্যমান (UV-Vis) ডিটেক্টর (Shimadzu, Tokyo, Japan)। LC/MS বিশ্লেষণগুলি একটি Agilent 1200 Series HPLC সিস্টেমে করা হয়েছিল (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) একটি ডায়োড অ্যারে ডিটেক্টর এবং একটি বিশ্লেষণাত্মক Kinetex (4.6 × 100 মিমি, 3.5 µm) সহ একটি 6130 সিরিজ ESI ভর স্পেকট্রোমিটার দিয়ে সজ্জিত। Merck প্রি-কোটেড সিলিকা জেল F254 প্লেট এবং RP-18 F254s প্লেটগুলি ব্যবহার করা হয়েছিল -লেয়ার ক্রোমাটোগ্রাফি (টিএলসি)। টিএলসি-তে ইউভি আলোর অধীনে বা অ্যানিসালডিহাইড-সালফিউরিক অ্যাসিড দ্রবণ দিয়ে স্প্রে করার পরে গরম করার মাধ্যমে দাগগুলি সনাক্ত করা হয়েছিল।

3.2। মাইক্রোবিয়াল উপাদান

অ্যাক্টিনোমাদুর এসপি। RB99 2 জানুয়ারীতে M. natalensis, (কলোনি Mn103, GPS S25 43 45.9 E28 14 08.9) গণের এক তিমির কর্মী পৃষ্ঠ থেকে বিচ্ছিন্ন হয়েছিল28 14 08.9 {13}}10। জৈব উপাদানগুলি পরিষ্কার প্লাস্টিকের ব্যাগে রাখা হয়েছিল এবং সংগ্রহের এক দিনের মধ্যে প্রক্রিয়া করা হয়েছিল। জীবাণুমুক্ত ডিআয়নাইজড জলে টেরমাইটগুলি ধুয়ে ফেলা হয়েছিল, এবং ব্যাকটেরিয়াগুলি কাইটিন (প্রতি লিটার: 4 গ্রাম কাইটিন, 0.7 গ্রাম K2HPO4, 0.3 গ্রাম KH2PO4, 0.5 গ্রাম MgSO4·5H2O, 0.01 গ্রাম FeSO4·7H2O, 0.001 গ্রাম ZnSO4, 0.001 গ্রাম MnCl2, এবং 20 গ্রাম আগর) [২১]। অ্যাক্টিনোব্যাকটেরিয়া-সদৃশ মরফোলজি সহ আইসোলেটগুলিকে আইএসপি 2 আগরে স্থানান্তর করা হয়েছিল (প্রতি লিটার: 10 গ্রাম মাল্ট নির্যাস, 4 গ্রাম ইস্টের নির্যাস, 4 গ্রাম গ্লুকোজ এবং 20 গ্রাম আগর), এবং বিশুদ্ধ বিচ্ছিন্নতা না পাওয়া পর্যন্ত উপ-সংস্কৃতি করা হয়েছিল।

3.3। ডিএনএ নিষ্কাশন এবং পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া পরিবর্ধন

অ্যাক্টিনোমাদুর এসপি। RB99 পুষ্টিসমৃদ্ধ তরল মিডিয়া ISP2-তে 30 ◦C তাপমাত্রায় পাঁচ থেকে সাত দিনের জন্য জন্মানো হয়েছিল। কোষগুলি কাটা হয়েছিল, এবং নিম্নলিখিত পরিবর্তনগুলির সাথে প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসরণ করে জেনজেট জিনোমিক ডিএনএ পিউরিফিকেশন কিট (#K0721, থার্মো সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) ব্যবহার করে জিনোমিক ডিএনএ বের করা হয়েছিল: (ক) লাইসোজাইম চিকিত্সা 40 মিনিট পর্যন্ত বাড়ানো হয়েছিল, এবং (খ) প্রোটিনেস কে চিকিত্সা 40 মিনিট পর্যন্ত বাড়ানো হয়েছিল। ন্যানোড্রপ লাইট স্পেকট্রোমিটার (থার্মো সায়েন্টিফিক) ব্যবহার করে ডিএনএ ফটোমেট্রিকভাবে পরিমাপ করা হয়েছিল।

ফাইলোজেনেটিক অধ্যয়নের জন্য, 16S rRNA জিনটি প্রাইমার সেট, 1492R/27F ব্যবহার করে প্রশস্ত করা হয়েছিল। প্রতিটি পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়া একটি 25 µL চূড়ান্ত প্রতিক্রিয়া ভলিউমে প্রস্তুত করা হয়েছিল যাতে 7.25 µL পাতিত জল, 5 µL HF বাফার, 5 µL প্রতিটি প্রাইমার (2.5 µM), {{10}}.5 µL dNTPs রয়েছে (10 µM), 0.25 µL ফিউশন হাই-ফিডেলিটি ডিএনএ পলিমারেজ (নিউ ইংল্যান্ড বায়োল্যাবস, ইপসউইচ, এমএ, ইউএসএ), এবং 2 μL নিষ্কাশিত ডিএনএ (টেমপ্লেট)। পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন (পিসিআর) নিম্নলিখিত অবস্থার অধীনে সঞ্চালিত হয়েছিল: 38 সেকেন্ডের জন্য 98 ◦C; 30 সেকেন্ডের জন্য 98 ◦ এর 32টি চক্র, 45 সেকেন্ডের জন্য 52 ◦C, 1 মিনিট 20 সেকেন্ডের জন্য 72 ◦C; এবং 8 মিনিটের জন্য 72 ◦C এর চূড়ান্ত এক্সটেনশন। পিসিআর পণ্যটি অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা কল্পনা করা হয়েছিল এবং পিসিআর প্রতিক্রিয়াগুলি একটি পিসিআর পরিশোধন কিট (থার্মো সায়েন্টিফিক) ব্যবহার করে শুদ্ধ করা হয়েছিল। ডিএনএ খণ্ডগুলি জিএটিসি (কনস্তানজ, জার্মানি) এ সিকোয়েন্স করা হয়েছিল।

3.4। সিকোয়েন্সিং এবং প্রজাতি সনাক্তকরণ

বায়োএডিট ব্যবহার করে বিশুদ্ধতা এবং অমিলের জন্য সিকোয়েন্সগুলি মূল্যায়ন করা হয়েছিল [22]। প্রতিটি স্ট্রেনের জন্য প্রাপ্ত ফরোয়ার্ড এবং রিভার্স সিকোয়েন্সগুলি বায়োএডিটের সাথে একত্রিত করা হয়েছিল এবং DECIPHER (http://decipher.cee.wisc.edu/FindChimerasOutputs.html) ব্যবহার করে কাইমেরার জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ ক্রমগুলি GenBank-এ জমা করা হয়েছিল (অ্যাক্সেশন নম্বর: KY558684)। ন্যাশনাল সেন্টার ফর বায়োটেকনোলজি ইনফরমেশন (NCBI) ডাটাবেস (রেফারেন্স RNA সিকোয়েন্স) ব্যবহার করে প্রায়-সম্পূর্ণ 16S rRNA সিকোয়েন্স (1368 bp) সহ বিস্ফোরণ বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে স্ট্রেন RB99 হল অ্যাকটিনোমাদুরা প্রজাতির সদস্য। প্রথম 10 হিটের সিকোয়েন্সগুলি NCBI ডাটাবেস থেকে ডাউনলোড করা হয়েছিল এবং অ্যাক্টিনোমাদুরা sp-এর 16S rRNA সিকোয়েন্সের সাথে সারিবদ্ধ করা হয়েছিল। RB99 সিনা সিকোয়েন্স অ্যালাইনমেন্ট পরিষেবা ব্যবহার করে [২৩]। MEGA সফ্টওয়্যার সংস্করণ 7.0.26 [24-26] ব্যবহার করে প্রতিবেশী-যোগদান বা সর্বাধিক সম্ভাবনার অ্যালগরিদমগুলির সাথে দুটি ভিন্ন ফাইলোজেনেটিক গাছ পুনর্গঠন করা হয়েছিল। Tamura এবং Nei-এর বিবর্তনীয় দূরত্ব মডেলটি সম্পূর্ণ ফাঁক এবং অনুপস্থিত ডেটা মুছে ফেলার সাথে সর্বাধিক-সম্ভাব্যতা এবং প্রতিবেশী-যোগদানকারী অ্যালগরিদমের জন্য বিবর্তনীয় দূরত্ব ম্যাট্রিক্স তৈরি করতে ব্যবহৃত হয়েছিল [27]। সর্বাধিক সম্ভাবনার অ্যালগরিদমের জন্য, বিচ্ছিন্ন গামা বিতরণ ব্যবহার করা হয়েছিল ( প্লাস জি), এবং হারের বৈচিত্র্যের মডেলটি কিছু সাইটের জন্য বিবর্তনীয়ভাবে অপরিবর্তনীয় ( প্লাস I) হতে অনুমতি দেয়। প্রতিবেশী-যোগদানকারী অ্যালগরিদমের জন্য, সাইটগুলির মধ্যে হারের ভিন্নতা একটি গামা বিতরণ ( প্লাস G) দিয়ে মডেল করা হয়েছিল৷ নোডের আত্মবিশ্বাসের মানগুলি বুটস্ট্র্যাপ বিশ্লেষণের দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল 1000টি পুনরায় নমুনা দেওয়ার পদক্ষেপের উপর ভিত্তি করে [28]।

3.5। নিষ্কাশন এবং বিচ্ছিন্নতা

অ্যাক্টিনোমাদুর এসপি। RB99 30 ◦C (প্রি-কালচার) তাপমাত্রায় সাত দিনের জন্য 50 mL ISP2 ঝোলের মধ্যে জন্মানো হয়েছিল এবং 100 ISP2 আগর প্লেট টিকা দেওয়ার জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। প্লেটগুলিকে 10 দিনের জন্য 30 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল, ছোট ছোট টুকরো করে কেটে একত্রিত করা হয়েছিল এবং MeOH-এ রাতারাতি ডুবিয়ে রাখা হয়েছিল। MeOH ফেজ ফিল্টার করা হয়েছিল এবং কম চাপে বাষ্পীভূত হয়েছিল। MeOH নির্যাস (20 গ্রাম) পাতিত জলে (700 মিলি) দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং তারপরে 1.1 গ্রাম অবশিষ্টাংশ বহন করে তিনবার EtOAc (700 mL) দিয়ে দ্রাবক-বিভাজন করা হয়েছিল। MeOH নির্যাস থেকে EtOAc-দ্রবণীয় ভগ্নাংশ (1.1 গ্রাম) ক্রোমাটোগ্রাফির জন্য একটি সিলিকা জেল (230-400 মেশ) কলামে লোড করা হয়েছিল এবং CH2Cl2-MeOH (100:1 থেকে 1: 1, v/v)। এটি ছয়টি ভগ্নাংশ (A-F) প্রদান করেছে, যা LC-UV/MS-ভিত্তিক বিশ্লেষণের শিকার হয়েছিল। একটি ইন-হাউস ইউভি স্পেকট্রাল লাইব্রেরি ব্যবহার করে ডিরেপ্লিকেশন বিশ্লেষণ ই ভগ্নাংশে ছোট পেপটাইড অ্যানালগগুলির অস্তিত্বের পরামর্শ দেয়। এগুলি প্রায় 220 এনএম এ একটি সাধারণ UV প্যাটার্ন এবং নাইট্রোজেন পরমাণু ধারণকারী অনন্য আণবিক সূত্র আয়ন শিখর প্রদর্শন করে। মেরু ভগ্নাংশ E (233 mg) CH3CN/H2O (1:9 থেকে 9:1, v) ব্যবহার করে প্রস্তুতিমূলক বিপরীত-ফেজ HPLC (Phenomenex Luna C18, 250 × 21.2 mm id, 5 µm, Torrance, CA, USA) দ্বারা ভগ্নাংশ করা হয়েছিল। /v, গ্রেডিয়েন্ট সিস্টেম, প্রবাহের হার: 5 mL/min) পাঁচটি উপ-ভগ্নাংশ (E1–E5) দিতে। উপ-ভগ্নাংশ E2 (27 mg) একটি আধা-প্রস্তুতিমূলক বিপরীত-ফেজ HPLC (Phenomenex Luna C18, 250 × 10.0 mm id, 5 µm) দ্বারা 33 শতাংশ MeOH/H2O (আইসোক্র্যাটিক সিস্টেম, প্রবাহ হার: 2 mL/min) দ্বারা বিশুদ্ধ করা হয়েছিল ) যৌগিক 1 (5.8 মিগ্রা, tR=57.0 মিনিট) ফলন করতে। যৌগ 2 (1.6 মিগ্রা, tR=42.0 মিনিট) এবং 3 (1.5 মিগ্রা, tR=55.0 মিনিট) আধা-প্রস্তুতিমূলক বিপরীত-ফেজ দ্বারা উপ-ভগ্নাংশ E3 (15 মিগ্রা) থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এইচপিএলসি এলুটিং 43 শতাংশ MeOH/H2O (আইসোক্র্যাটিক সিস্টেম, প্রবাহ হার: 2 মিলি/মিনিট)।

3.5.1। নাটালেনামাইড এ (1)

3.5.2। নাটালেনামাইড বি (2)

3.5.3। নাটালেনামাইড সি (3)

3.6। যৌগগুলির অ্যাসিড হাইড্রোলাইসিস 1-3

প্রতিটি যৌগের মোট পরিমাণ 0.4 মিলিগ্রাম (1–3) 6 N HCl (500 µL) দিয়ে 1 ঘন্টার জন্য 110 ◦C তাপমাত্রায় হাইড্রোলাইজ করা হয়েছিল। ঘরের তাপমাত্রায় ঠান্ডা হওয়ার পর, 1-3 হাইড্রোলাইসেটগুলিকে বাষ্পীভূত করা হয়েছিল HCl-এর চিহ্নগুলি অপসারণ করার জন্য। পাতিত জল (500 μL) হাইড্রোলাইজেট মিশ্রণে যোগ করা হয়েছিল এবং তারপরে এইচসিএল-এর চিহ্নগুলি অপসারণের জন্য বাষ্পীভূত করা হয়েছিল; এই প্রক্রিয়া তিনবার সঞ্চালিত হয়েছিল।

3.7। 1-3 সালে অ্যামিনো অ্যাসিডের পরম কনফিগারেশন নির্ধারণ

হাইড্রোলাইজেট মিশ্রণ (1-3), পাশাপাশি স্ট্যান্ডার্ড অ্যামিনো অ্যাসিড (L/D-Leu, Glu, Phe, এবং Val), 1 N NaHCO3 (100 μL) এ দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং তারপরে চিকিত্সা করা হয়েছিল 50 μL L-FDAA (10 mg/mL অ্যাসিটোনে) সহ। ধারাবাহিকভাবে, প্রতিটি হাইড্রোলাইজেট 80 ◦C তাপমাত্রায় 10 মিনিটের জন্য উত্তপ্ত হয়েছিল। প্রতিটি মিশ্রণ 2 N HCl (50 µL) দিয়ে নিভিয়ে শূন্যে ঘনীভূত করা হয়েছিল। অবশিষ্টাংশ MeOH এর 300 μL এ দ্রবীভূত হয়েছিল। হাইড্রোলাইজেট মিশ্রণ থেকে অর্জিত প্রতিটি অ্যালিকোট (5 µL) সরাসরি LC/MS (Phenomenex Luna C18, 4.6 × 100 mm, 3.5 µm, প্রবাহের হার 0.3 mL/min), এবং ইতিবাচক এবং নেতিবাচকভাবে একটি সম্পূর্ণ স্ক্যান করা হয়েছিল। আয়ন মোডগুলি (m/z 100 থেকে 1000 পর্যন্ত স্ক্যান পরিসীমা) L-FDAA-ডেরিভেটাইজড অ্যামিনো অ্যাসিডের ধারণ সময় সনাক্ত করতে প্রয়োগ করা হয়েছিল।

পাতিত জলে ফরমিক অ্যাসিড ({{0}}.1 শতাংশ v/v) (A) এবং অ্যাসিটোনিট্রিল (B) সমন্বিত মোবাইল ফেজটি নিম্নরূপ একটি গ্রেডিয়েন্ট দ্রাবক সিস্টেমের সাথে বহন করা হয়েছিল: 20-40 শতাংশ (B) 10 মিনিটের জন্য, 100 শতাংশ (B) 5 মিনিটের জন্য আইসোক্র্যাটিক, এবং তারপর 20 শতাংশ (B) 5 মিনিটের জন্য আইসোক্র্যাটিক, কলামের জন্য একটি পোস্ট-রান ওয়াশিং পদ্ধতি পরিচালনা করতে। মান হিসাবে ব্যবহৃত L-FDAA ডেরিভেটাইজড অ্যামিনো অ্যাসিডের ধরে রাখার সময় ছিল 16.7 মিনিট (L-Glu, m/z 400 [M প্লাস H] প্লাস), 18.2 মিনিট (D-Glu, m/z 400 [M প্লাস H] প্লাস ), 22.1 মিনিট (L-Val, m/z 370 [M প্লাস H] প্লাস), 25.1 মিনিট (D-Val, m/z 370 [M প্লাস H] প্লাস), 25.6 মিনিট (L-Phe, m/ z 418 [M প্লাস H] প্লাস ), 27.0 মিনিট (D-Phe, m/z 418 [M প্লাস H] প্লাস), 25.5 মিনিট (L-Leu, m/z 384 [M প্লাস H] প্লাস), এবং 28.2 মিনিট (D-Leu, m/z 384 [M প্লাস H] প্লাস)। 1-3 এর ডেরিভেটাইজড হাইড্রোলাইজেটগুলির ধরে রাখার সময়গুলি হল এল-গ্লু (16.9 মিনিট), এল-ফে (25.7 মিনিট), এবং 1 থেকে এল-ভাল (22.5 মিনিট); L-Glu (16.7 মিনিট), L-Phe (25.7 মিনিট), এবং 2 থেকে L-Leu (25.6 মিনিট); এবং 3 থেকে L-Glu (16.9 মিনিট) এবং L-Phe (25.7 মিনিট)।

3.8। ক্যান্সার কোষ ব্যবহার করে সাইটোটক্সিক অ্যাসেস

MCF7, HeLa, এবং A549 সেলগুলি আমেরিকান টাইপ কালচার কালেকশন (রকভিল, MD, USA) থেকে কেনা হয়েছিল। HepG2 কোষ কোরিয়ান সেল লাইন ব্যাংক (সিউল, কোরিয়া) থেকে কেনা হয়েছিল। MCF7 কোষগুলি রোজওয়েল পার্ক মেমোরিয়াল ইনস্টিটিউট (RPMI) 1640 মিডিয়ামে 10 শতাংশ ভ্রূণের বোভাইন সিরামের সাথে সম্পূরক করা হয়েছিল। HeLa এবং A549 কোষগুলি Dulbecco-এর ন্যূনতম প্রয়োজনীয় মাধ্যম (DMEM, Cellgro, Manassas, VA, USA) 10 শতাংশ ভ্রূণের বোভাইন সিরামের সাথে পরিপূরক দ্বারা সংস্কৃত করা হয়েছিল। HepG2 কোষগুলি 10 শতাংশ ভ্রূণের বোভাইন সিরামের সাথে সম্পূরক ন্যূনতম প্রয়োজনীয় মিডিয়ামে সংস্কৃত করা হয়েছিল। 5 শতাংশ CO2 ধারণকারী আর্দ্র বায়ুমণ্ডলে 37 ◦C তাপমাত্রায় সংস্কৃতির অবস্থা বজায় রাখা হয়েছিল। সাইটোটক্সিসিটি এই চারটি মানব কোষ লাইনে (MCF7, HeLa, A549, এবং HepG2) EZ-CyTox কোষের কার্যকারিতা অ্যাসে কিট (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan) ব্যবহার করে পরীক্ষা করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, 5 × 103 কোষ /ওয়েলকে 96-কূপ প্লেটে বীজ দেওয়া হয়েছিল। 24 ঘন্টা পরে, কোষগুলিকে নির্দেশিত ঘনত্বে যৌগ দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। 72 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে, EZ-CyTox সেল কার্যকারিতা অ্যাসে কিট ব্যবহার করা হয়েছিল। 2 ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে, শোষণটি 450 এনএম এ 620 এনএম রেফারেন্স সহ পরিমাপ করা হয়েছিল। কোষের কার্যক্ষমতা নিয়ন্ত্রণের শতাংশ হিসাবে গণনা করা হয়েছিল।

3.9। বিরোধী প্রদাহজনক কার্যকলাপ

মাউস ম্যাক্রোফেজ RAW264.7 সেল লাইনটি আমেরিকান টাইপ কালচার কালেকশন থেকে কেনা হয়েছিল। DMEM-তে কোষগুলিকে 10 শতাংশ ফিটাল বোভাইন সিরাম (FBS), 100 ইউনিট/mL পেনিসিলিন এবং 100 µg/mL স্ট্রেপ্টোমাইসিন দিয়ে পরিপূরক করা হয়েছিল এবং 5 শতাংশ CO2 সহ আর্দ্র বায়ুমণ্ডলে 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। Ez-Cytox সেল কার্যক্ষমতা সনাক্তকরণ কিট ব্যবহার করে কোষের কার্যক্ষমতা পরিমাপ করা হয়েছিল। 24 ঘন্টার জন্য কূপ প্রতি 2500 কোষের ঘনত্বে কোষগুলিকে 96-কূপ প্লেটে ইনকিউব করা হয়েছিল এবং 24 ঘন্টার জন্য 1-3 যৌগগুলির নির্দেশিত ঘনত্বের সাথে চিকিত্সা করা হয়েছিল। এরপরে, Ez-Cytox reagents প্রতিটি কূপে যোগ করা হয়েছিল। 450 এনএম-এ অপটিক্যাল ঘনত্ব কোষের কার্যক্ষমতা অনুমান করার জন্য একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার (পাওয়ারওয়েভ এক্সএস; বায়ো-টেক ইন্সট্রুমেন্টস, উইনোস্কি, ভিটি, ইউএসএ) ব্যবহার করে 1 ঘন্টা পরে পরিমাপ করা হয়েছিল। একটি পৃথক পরীক্ষায়, RAW264.7 কোষগুলি 24 ঘন্টার জন্য প্রতি কূপের ঘনত্বে 30,{23}} কূপযুক্ত কূপগুলিতে 96-কূপ প্লেটে ইনকিউবেট করা হয়েছিল৷ 12 ঘন্টার জন্য সিরাম অনাহারের পরে, কোষগুলিকে 1 ঘন্টার জন্য 1-3 যৌগ দিয়ে প্রিট্রিট করা হয়েছিল এবং তারপর 24 ঘন্টার জন্য 1 µg/mL LPS দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল। NO স্তর অনুমান করার জন্য একটি পাওয়ারওয়েভ XS মাইক্রোপ্লেট রিডার ব্যবহার করে গ্রিস প্রতিক্রিয়ায় সংস্কৃতি মিডিয়ার শোষণ 540 এনএম পরিমাপ করা হয়েছিল।

3.10। মেলানিন সামগ্রীর পরিমাপ

মাউস মেলানোমা সেল লাইন, B16F10, আমেরিকান টাইপ কালচার কালেকশন থেকে কেনা হয়েছিল। DMEM-তে কোষগুলিকে 10 শতাংশ FBS, 100 ইউনিট/mL পেনিসিলিন এবং 100 µg/mL স্ট্রেপ্টোমাইসিন দিয়ে পরিপূরক করা হয়েছিল এবং 5 শতাংশ CO2 সহ আর্দ্র বায়ুমণ্ডলে 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। B16F10 কোষগুলি 250 তে 6 সেন্টিমিটার কালচার ডিশে,000 DMEM-এর প্রতি কূপ কোষে 10 শতাংশ FBS, 100 µg/mL স্ট্রেপ্টোমাইসিন, এবং 100 U/mL পেনিসিলিন 24 ঘন্টার জন্য পরিপূরক ছিল। কোষগুলিকে ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইন (PBS) দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং তারপর IBMX দ্বারা উদ্দীপিত করা হয়েছিল এবং 10 শতাংশ FBS, 100 ইউনিটের সাথে সম্পূরক ফেনল রেড-ফ্রি RPMI মিডিয়ামে বিভিন্ন ঘনত্বের যৌগ 1-3 বা কোজিক অ্যাসিড (পজিটিভ কন্ট্রোল) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। /mL পেনিসিলিন, এবং 100 µg/mL স্ট্রেপ্টোমাইসিন 24 ঘন্টা এবং 48 ঘন্টার জন্য। মেলানিন সামগ্রী অনুমান করার জন্য একটি পাওয়ারওয়েভ এক্সএস মাইক্রোপ্লেট রিডার ব্যবহার করে সংস্কৃতি মাধ্যমের শোষণ 405 এনএম পরিমাপ করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি নিয়ন্ত্রণের তুলনায় ভাঁজ-পরিবর্তন হিসাবে প্রকাশ করা হয় (কোষগুলি IBMX দ্বারা উদ্দীপিত নয়)।

3.11। পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

কোষের কার্যক্ষমতা, NO, এবং মেলানিন উত্পাদন সহ সমস্ত ডেটা গড় মান এবং মানক বিচ্যুতি (SD) হিসাবে উপস্থাপিত হয়েছিল। সমস্ত অ্যাসেগুলি ত্রিগুণে করা হয়েছিল এবং কমপক্ষে তিনবার পুনরাবৃত্তি হয়েছিল। এই গবেষণায়, প্রতিটি কোষ পরীক্ষার পুনরাবৃত্তির মাত্র কয়েকটি সংখ্যা অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল, এইভাবে পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণের জন্য অ-প্যারামেট্রিক বিশ্লেষণ পদ্ধতি গৃহীত হয়েছিল। ক্রুস্কাল-ওয়ালিস পরীক্ষাটি প্রতিটি পরিবর্তনশীলের পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। SPSS পরিসংখ্যান প্যাকেজটি সমস্ত বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল (ইন্টারন্যাশনাল বিজনেস মেশিন কর্পোরেশন (IBM) SPSS পরিসংখ্যান সংস্করণ 21, Boston, MA, USA)। পরিসংখ্যানগত তাত্পর্য 0.05 এর চেয়ে কম পি-মানে বিবেচনা করা হয়েছিল।

4। উপসংহার

আমাদের প্রতিবেদনটি একটি ছত্রাক-ক্রমবর্ধমান উইপোকা থেকে মাইক্রোবিয়াল বিচ্ছিন্নতার একটি রাসায়নিক বিশ্লেষণ সরবরাহ করে। তিনটি নতুন চক্রাকার ট্রিপেপটাইড, ন্যাটালেনামাইড A–C (1–3), ছত্রাক-বর্ধমান -termite-সম্পর্কিত অ্যাক্টিনোমাদুরা sp-এর কালচার ব্রথ থেকে বিচ্ছিন্ন এবং কাঠামোগতভাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল। RB99 একটি LC-UV/MS-ভিত্তিক অনুকরণ পদ্ধতি ব্যবহার করে। সমস্ত বিচ্ছিন্ন যৌগগুলি কোষ-ভিত্তিক অ্যাসেস ব্যবহার করে জৈবিক ক্রিয়াকলাপের জন্য মূল্যায়ন করা হয়েছিল। যৌগ 1 এবং 2 যথাক্রমে HepG2 এবং HeLa/A549 কোষগুলির বিরুদ্ধে দুর্বল সাইটোটক্সিসিটি প্রদর্শন করেছে। বিচ্ছিন্ন যৌগগুলির কোনওটিই এলপিএস-উদ্দীপিত RAW264.7 কোষগুলিতে NO উত্পাদনের উপর উল্লেখযোগ্য প্রতিরোধমূলক প্রভাব দেখায়নি। যৌগ 3 ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে আইবিএমএক্স-মধ্যস্থ মেলানিন সংশ্লেষণের উপর উল্লেখযোগ্য প্রতিরোধমূলক প্রভাব প্রদর্শন করেছে। প্রভাবটি কোজিক অ্যাসিডের মতো ছিল, যা ত্বক-সাদা করার প্রভাব সহ একটি প্রসাধনী উপাদান হিসাবে ব্যবহৃত হয়।

স্বীকৃতি:

আমরা মাইকেল থমাস-পলসেন (জীববিজ্ঞান বিভাগ, কোপেনহেগেন বিশ্ববিদ্যালয়, ডেনমার্ক) আমাদের ফিল্ডওয়ার্ককে সমর্থন করার জন্য গভীরভাবে কৃতজ্ঞ।

স্বার্থের সংঘাত:

লেখক আগ্রহের কোন দ্বন্দ্ব ঘোষণা।

তথ্যসূত্র

1. নিউম্যান, ডিজে; ক্র্যাগ, 1981 থেকে 2014 পর্যন্ত নতুন ওষুধের উত্স হিসাবে জিএম প্রাকৃতিক পণ্য। জে. ন্যাট। পণ্য 2016, 79, 629–661। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

2. মিশ্র, বিবি; তিওয়ারি, ভিকে ন্যাচারাল প্রোডাক্ট: ভবিষ্যৎ ড্রাগ আবিষ্কারে একটি বিবর্তিত ভূমিকা। ইউরো. জে মেড. কেম। 2011, 46, 4769–4807। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

3. Beemelmanns, C.; গুও, এইচ.; রিশার, এম.; Poulsen, M. পোকামাকড়ের সাথে যুক্ত জীবাণু থেকে প্রাকৃতিক পণ্য। Beilstein J. Org. কেম। 2016, 12, 314-327। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

4. রামাধর, টিআর; Beemelmanns, C.; কুরি, সিআর; ক্লার্ডি, জে. কৃষি ব্যবস্থায় ব্যাকটেরিয়া সিম্বিয়ন্ট অ্যান্টিবায়োটিক আবিষ্কারের জন্য একটি কৌশলগত উৎস প্রদান করে। জে. অ্যান্টিবায়োট। 2014, 67, 53-58। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

5. হার্ভে, AL; Edrada-Ebel, R.; কুইন, আরজে জিনোমিক্স যুগে ওষুধ আবিষ্কারের জন্য প্রাকৃতিক পণ্যের পুনরুত্থান। নাট। রেভ. ড্রাগ ডিসকভ. 2015, 14, 111-129। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

6. স্যাটেলি, ইএস; ফিশবাচব, এমএ; ওয়ালশ, সিটি মোট জৈব সংশ্লেষণ: পলিকেটাইড এবং ননরাইবোসোমাল পেপটাইড পথের ভিট্রো পুনর্গঠন। নাট। পণ্য প্রতিনিধি 2008, 25, 757–793। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

7. ওহ, ডি.; স্কট, জেজে; কুরি, সিআর; Clardy, J. Mycangimycin, একজন পারস্পরিক স্ট্রেপ্টোমাইসেস এসপি থেকে একটি পলিইন পারক্সাইড। সংগঠন লেট. 2009, 11, 633-636। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

8. বসুন, সিএস; রুজিনি, এসি; ভ্যান আরনাম, ইবি; রামাধর, টিআর; কুরি, সিআর; Clardy, J. পরিবর্তনশীল জেনেটিক আর্কিটেকচারগুলি ছত্রাক-বর্ধমান পিঁপড়ার ব্যাকটেরিয়া প্রতীকে কার্যত অভিন্ন অণু তৈরি করে। Proc. Natl. আকদ। বিজ্ঞান USA 2015, 112, 13150–13154। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

9. কম, KE; Ler, S.; চেন, কেজে; ক্যাম্পবেল, আরএল; হিকি, জেএল; ট্যান, জে.; স্কালি, সিসিজি; ডেভিস, আরএল; ইউদিন, একে; জারেটস্কি, এস. ক্যালপাস্ট্যাটিন পেপটিডোমিমেটিক্সের উপর ভিত্তি করে ক্যালপেইন ইনহিবিটরগুলির যুক্তিসঙ্গত নকশা। জে মেড. কেম। 2016, 59, 5403–5415। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

10. ঝেং, জে.; জু, জেড.; ওয়াং, ওয়াই.; হং, কে.; লিউ, পি.; ঝু, ডব্লিউ. হ্যালোটোলারেন্ট ছত্রাক Aspergillus sclerotiorum PT06-1 থেকে সাইক্লিক ট্রিপেপটাইডস। জে. ন্যাট। পণ্য 2010, 73, 1133-1137। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

11. উইরাক্কোডি, ডি.; মোশনিকোভা, এ.; এল-সাইদ, এনএস; অ্যাডোকাইট, আরসি; Slaybaugh, G.; গোলিজানিন, জে.; তিওয়ারি, আরকে; আন্দ্রেভ, ওএ; পারং, কে.; Reshetnyak, YK Novel pH-সংবেদনশীল সাইক্লিক পেপটাইড। বিজ্ঞান Rep. 2016, 6, 31322। [CrossRef] [PubMed]

12. ঝাও, এম.; লিন, এইচসি; Tang, Y. -নাইট্রো-ধারণকারী চক্রীয় ট্রিপেপটাইড সাইক্রোফিলিকের জৈবসংশ্লেষণ। জে. অ্যান্টিবায়োট। 2016, 69, 571–573। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

13. জর্জি, এ.; ডেইল, কে.; হেইনিস, সি. সাইক্লিক পেপটাইড থেরাপিউটিকস: অতীত, বর্তমান এবং ভবিষ্যত। কার মতামত কেম। বায়োল 2017, 38, 24-29। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

14. কিম, কেএইচ; রামাধর, টিআর; Beemelmanns, C.; কাও, এস.; পলসেন, এম.; কুরি, সিআর; ক্লার্ডি, জে. নাটালামাইসিন এ, একটি উইপোকা-সম্পর্কিত স্ট্রেপ্টোমাইসিস এসপি থেকে একটি আনসামাইসিন। কেম। বিজ্ঞান 2014, 5, 4333–4338। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

15. কাং, এইচআর; লি, ডি.; Benndorf, R.; জং, ডব্লিউএইচ; Beemelmanns, C.; কাং, কেএস; কিম, কেএইচ টার্মিসোফ্ল্যাভোনস এ-সি, টার্মিট-সম্পর্কিত স্ট্রেপ্টোমাইসেস এসপি থেকে আইসোফ্ল্যাভোনয়েড গ্লাইকোসাইডস। RB1. জে. ন্যাট। পণ্য 2016, 79, 3072–3078। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

16. বেমেলম্যানস, সি.; রামাধর, টিআর; কিম, কেএইচ; ক্লাসেন, জেএল; কাও, এস.; Wyche, TP; Hou, Y.; পলসেন, এম.; বুগনি, টিএস; কুরি, সিআর; ইত্যাদি ম্যাক্রোটার্মাইকিনস A-D, একটি উষ্ণ-সম্পর্কিত অ্যামাইকোলাটোপসিস এসপি থেকে গ্লাইকোসিলেটেড ম্যাক্রোল্যাকটাম। M39. সংগঠন লেট. 2017, 19, 1000–1003। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

17. গুও, এইচ.; Benndorf, R.; Leichnitz, D.; ক্লাসেন, জেএল; ভলমার, জে.; Görls, H.; স্টেইনকার, এম.; ওয়েইগেল, সি.; Dahse, HM; কাস্টার, একে; ডি বিয়ার, ZW; ইত্যাদি বিচ্ছিন্নতা, জৈব সংশ্লেষণ এবং রাসায়নিক পরিবর্তন রটারলোন A–F: অ্যাক্টিনোমাদুরা এসপি থেকে বিরল ট্রপোলোন অ্যালকালয়েড। 5-2। কেম। ইউরো. জে. 2017, 23, 9338–9345। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

18. সানো, এস.; ইকাই, কে.; কাতায়ামা, কে.; তাকেসাকো, কে.; নাকামুরা, টি.; ওবায়াশি, এ.; Ezure, Y.; এনোমোটো, এইচ. OF4949, অ্যামিনোপেপ্টিডেস বি এর নতুন ইনহিবিটার। II। কাঠামোর ব্যাখ্যা। জে. অ্যান্টিবায়োট। 1986, 39, 1685-1696। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

19. সিয়াসুলো, এল.; কাসাপুলো, এ.; Cutignano, A.; বিফুলকো, জি.; ডেবিটাস, সি.; হুপার, জে.; গোমেজ-পালোমা, এল.; Riccio, R. Renieramide, ভানুয়াতু স্পঞ্জ Reniera n থেকে একটি চক্রীয় ট্রিপেপটাইড। sp জে. ন্যাট। পণ্য 2002, 65, 407-410। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

20. সোলানো, এফ.; ব্রিগ্যান্টি, এস.; পিকার্ডো, এম.; ঘানেম, জিএইচ হাইপোপিগমেন্টিং এজেন্টস: জৈবিক, রাসায়নিক এবং ক্লিনিকাল দিকগুলির উপর একটি আপডেট পর্যালোচনা। পিগম। সেল মেলানোমা রেস 2006, 19, 550-571। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

21. ভিসার, এএ; নোব্রে, টি.; কুরি, সিআর; Aanen, DK; Poulsen, M. ছত্রাক-ক্রমবর্ধমান তিমির মধ্যে প্রতিরক্ষামূলক প্রতীক হিসাবে অ্যাক্টিনোব্যাকটেরিয়ার সম্ভাব্যতা অন্বেষণ। মাইক্রোব। ইকোল। 2012, 63, 975-985। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

22. হল, টিএ বায়োএডিট: উইন্ডোজ 95/98/এনটি-এর জন্য একটি ব্যবহারকারী-বান্ধব জৈবিক সিকোয়েন্স অ্যালাইনমেন্ট এডিটর এবং বিশ্লেষণ প্রোগ্রাম। নিউক্লিক অ্যাসিডের লক্ষণ। সার্। 1999, 41, 95-98।

23. প্রুয়েস, ই.; পেপলিস, জে.; গ্লোকনার, এফও সিনা: রাইবোসোমাল আরএনএ জিনের সঠিক উচ্চ-থ্রুপুট মাল্টিপল সিকোয়েন্স অ্যালাইনমেন্ট। বায়োইনফরমেটিক্স 2012, 28, 1823-1829। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]।

24. সাইতো, এন.; Nei, M. প্রতিবেশী-যোগদান পদ্ধতি: ফাইলোজেনেটিক গাছ পুনর্গঠনের জন্য একটি নতুন পদ্ধতি। মোল। বায়োল ইভোল 1987, 4, 406-425। [পাবমেড]

25. ফেলসেনস্টাইন, জে. ডিএনএ সিকোয়েন্স থেকে বিবর্তনীয় গাছ: একটি সর্বাধিক সম্ভাবনার পদ্ধতি। জে মোল। ইভোল 1981, 17, 368-376। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

26. কুমার, এস.; স্টেচার, জি.; Tamura, K. MEGA7: আণবিক বিবর্তনীয় জেনেটিক্স বিশ্লেষণ সংস্করণ 7৷{3}} বড় ডেটাসেটের জন্য৷ মোল। বায়োল ইভোল 2016, 33, 1870-1874। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

27. তামুরা, কে.; Nei, M. মানুষ এবং শিম্পাঞ্জির মাইটোকন্ড্রিয়াল ডিএনএর নিয়ন্ত্রণ অঞ্চলে নিউক্লিওটাইড প্রতিস্থাপনের সংখ্যার অনুমান। মোল। বায়োল ইভোল 1993, 10, 512-526। [পাবমেড]

28. ফেলসেনস্টাইন, জে. ফিলোজেনিসের উপর আস্থার সীমা: বুটস্ট্র্যাপ ব্যবহার করে একটি পদ্ধতি। বিবর্তন 1985, 39, 783-791। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

নমুনা উপলব্ধতা:

যৌগগুলির নমুনা লেখকদের কাছ থেকে পাওয়া যায় না।

For more information:1950477648nn@gmail.com