কিডনি ইন্টারক্যালেটেড কোষগুলি ফ্যাগোসাইটিক এবং অভ্যন্তরীণ ইউরোপ্যাথোজেনিক এসচেরিচিয়া কোলিকে অ্যাসিডিফাই করে
Feb 28, 2022
কিডনিইন্টারক্যালেটেড কোষগুলি ভ্যাক্যুলার ATPase এক্সপ্রেশনের মাধ্যমে অ্যাসিড-বেস হোমিওস্ট্যাসিসে জড়িত। এখানে আমরা একক কোষের ট্রান্সক্রিপ্টোমিক্স থেকে চিহ্নিত হাইব্রিড প্রধান ইন্টারক্যালেটেড কোষ সহ ছয়টি মানব ইন্টারক্যালেটেড সেল সাব-টাইপ রিপোর্ট করি। ফাগোসোম পরিপক্কতা হল একটি জৈবিক প্রক্রিয়া যা দুটি আন্তঃক্যালিত কোষ উপপ্রকারে ইউরোপ্যাথোজেনিক এসচেরিচিয়া কোলির সংস্পর্শে আসার পরে জৈবিক পথ বিশ্লেষণের র্যাঙ্কে বৃদ্ধি পায়। মুরিনের রিয়েল টাইম কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি ভিজ্যুয়ালাইজেশনরেনালসবুজ ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিন দ্বারা পারফিউজ করা টিউবিউলগুলি Escherichia coli বা pHrodo Green E. coli Bioparticles প্রকাশ করে যে ইন্টারক্যালেটেড কোষগুলি সক্রিয়ভাবে ফ্যাগোসাইটোজ ব্যাকটেরিয়া তারপর ফ্যাগোলাইসোসোমগুলিকে অ্যাসিডিফাই করে৷ অতিরিক্তভাবে, ইন্টারক্যালেটেড কোষগুলি ভিভো পরীক্ষামূলক ইউটিআই অনুসরণ করে ভ্যাক্যুলার ATPase এক্সপ্রেশন বাড়িয়েছে। একসাথে নেওয়া, ইন্টারক্যালেটেড কোষগুলির জন্য সহায়ক একটি ট্রান্সক্রিপশনাল প্রতিক্রিয়া প্রদর্শন করেকিডনিরপ্রতিরক্ষা, ব্যাকটেরিয়াকে আচ্ছন্ন করে এবং অভ্যন্তরীণ ব্যাকটেরিয়াকে অ্যাসিডিফাই করে। ইন্টারক্যালেটেড কোষগুলি ম্যাক্রোফেজের মতো পেশাদার ফ্যাগোসাইটের বৈশিষ্ট্য সহ একটি এপিথেলিয়াল কোষের প্রতিনিধিত্ব করে।
কীওয়ার্ড:কিডনি রোগ;কিডনি টিস্যু;কিডনি কোষ;কিডনি; রেনাল
কিডনি-সংগ্রহকারী টিউবুল হল অ্যাসিড-বেস রেগুলেশন 1 এর টার্মিনাল অবস্থান। সংগ্রহকারী টিউবুলে প্রধান কোষ এবং ইন্টারক্যালেটেড কোষ (ICs) থাকে। প্রধান কোষগুলি (পিসি) লবণ এবং জলের শোষণের মধ্যস্থতা করে এবং সাইটোপ্লাজমিক অ্যাকোয়াপোরিন 2 (AQP2) 2 দ্বারা চিহ্নিত করা হয়। ICগুলি অ্যাসিড-বেস হোমিওস্ট্যাসিস বজায় রাখতে সাহায্য করে এবং তিনটি বর্ণিত সাবটাইপ আছে, টাইপ A (A-IC), টাইপ B (B-IC), এবং nonA–nonB 2,3। A-ICs apical vacuolar H-ATPase (V-ATPase) এর মাধ্যমে প্রোটন নিঃসরণ করে এবং বেসিলার ক্লোরাইড/বাইকার্বনেট (Cl − /HCO 3 ) ট্রান্সপোর্টার, অ্যানিয়ন এক্সচেঞ্জ 1 (AE1/band 3/SLC4A1) 1,4 এর মাধ্যমে বাইকার্বোনেট পুনরুত্পাদন করে। B-ICs HCO 3 − একটি apical Cl − /HCO 3 ট্রান্সপোর্টার, পেনড্রিন (SLC26A4), এবং এক্সপ্রেস বেসোলেটারাল V-ATPase 2,3 এর মাধ্যমে। রডেন্ট ননএ–ননবি আইসি-তে অ্যাপিক্যাল পেন্ড্রিন এবং ভি-এটিপেস থাকে, তবে কোন AE1 নেই এবং সংগ্রহকারী নালী এবং সংযোগকারী টিউবুলে (CNT) 3 শনাক্ত করা হয়েছে। ক্রমবর্ধমান প্রমাণ আইসিগুলির জন্য তাদের পিএইচ নিয়ন্ত্রণের প্রথাগত ফাংশন সহ একটি সহজাত ইমিউন ভূমিকা সমর্থন করে। প্রথমত, দূরবর্তী সঙ্গে দশটি সম্পর্কহীন রোগীদের সংখ্যাগরিষ্ঠরেনালটিউবুলার অ্যাসিডোসিস, আইসি কর্মহীনতার দ্বারা চিহ্নিত একটি অবস্থা, একটি ইউটিআই ইতিহাস 5 আছে বলে জানা গেছে। দ্বিতীয়ত, uropathogenic Escherichia coli (UPEC), জীবটি পুরুষদের মধ্যে তীব্র পাইলো-নেফ্রাইটিসের 70 শতাংশ এবং মহিলাদের মধ্যে 80 শতাংশে বিচ্ছিন্ন, বেছে বেছে ICs 6,7-এর সাইটোপ্লাজমে স্থানীয়করণ করে। তৃতীয়ত, আমরা শনাক্ত করেছি যে ICs অ্যান্টিমাইক্রোবিয়াল পেপটাইড (AMPs) প্রকাশ করে যেমন রাইবোনুক্লিজ 7 (RNASE7) 8-11। এই এএমপিগুলির বেসলাইনে এবং/অথবা সংক্রমণ 8-11 এর প্রতিক্রিয়া হিসাবে ব্যাকটেরিয়া সহ বিভিন্ন ধরণের প্যাথোজেনের বিরুদ্ধে সরাসরি কার্যকলাপ রয়েছে। চতুর্থত, আমরা এবং অন্যরা স্বাধীনভাবে রিপোর্ট করেছি যে অস্বাভাবিক আইসি বিকাশ সহ ইঁদুর মূত্রনালীর সংক্রমণ (ইউটিআই) এবং/অথবা পাইলোনেফ্রাইটিস 12,13-এর সংবেদনশীলতা বাড়িয়েছে। পঞ্চম, ICs উভয় ইন্দ্রিয় এবং মধ্যস্থতা প্রদাহ 14. সর্বশেষ, আমরা বিচ্ছিন্ন মুরিন আইসি 15,16-এ সহজাত ইমিউন জিনের অভিব্যক্তি প্রদর্শন করেছি
CISTANCHE কিডনি/রেনাল ফাংশন উন্নত করবে
কিভাবে ICs মূত্রনালীকে সংক্রমণ থেকে রক্ষা করে তা বোঝা গুরুত্বপূর্ণ কারণ UTIs প্রায়শই সম্মুখীন হয়। 50 শতাংশেরও বেশি মহিলারা তাদের জীবদ্দশায় ইউটিআই অনুভব করেন, এবং ইউটিআইগুলি সমস্ত মেডিকেল ভিজিটের 1-6 শতাংশের জন্য দায়ী 17৷ ব্যাকটেরিয়া যখন আরোহণ করেকিডনিপাইলোনেফ্রাইটিসের ফলে, সম্ভাব্য জটিলতার মধ্যে রয়েছে উচ্চ রক্তচাপ, দীর্ঘস্থায়ীকিডনীর রোগ, এবং ইউরোসেপসিস 18,19। মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রে বছরে আনুমানিক 250,000টি পাইলোনেফ্রাইটিসের ঘটনা ঘটে 17। মাল্টিড্রাগ রেজিস্ট্যান্স ইউটিআই এবং অন্যান্য সংক্রমণের চিকিৎসার ক্ষেত্রে একটি জটিল চ্যালেঞ্জ হিসেবে আবির্ভূত হচ্ছে 20। তাই, ICs যে পদ্ধতিগুলিকে ঊর্ধ্বমুখী ইউরোপ্যাথোজেনগুলির বিরুদ্ধে রক্ষা করতে ব্যবহার করে তা হতে পারে থেরাপিউটিক লক্ষ্য যা বিকাশের জন্য কাজে লাগানো যেতে পারে।কিডনি- নির্দিষ্ট পাইলোনেফ্রাইটিস থেরাপি। যেহেতু বেশিরভাগ আইসি গবেষণায় প্রাণীর মডেল জড়িত, তাই উন্নত ক্লিনিকাল কেয়ারে মৌলিক বিজ্ঞান অধ্যয়ন পরিচালনার জন্য মানব আইসি সম্পর্কে আরও ভাল বোঝার প্রয়োজন হবে।
কারনকিডনিএকটি জটিল অঙ্গ, mRNA প্রোফাইল ব্যাখ্যা করা কঠিন হতে পারে। উদাহরণস্বরূপ, নেফ্রনের স্বতন্ত্র নলাকার অংশ এবং কোষের উপপ্রকার সহ আঞ্চলিক বিশেষত্ব রয়েছে। দ্যকিডনিএন্ডোথেলিয়াল, এপিথেলিয়াল, ইন্টারস্টিশিয়াল এবং নিয়োগকৃত প্রদাহজনক কোষ রয়েছে, সবগুলোই স্বতন্ত্র জৈবিক ফাংশন এবং জিন এক্সপ্রেশন প্যাটার্ন সহ। একক-কোষ আরএনএ সিকোয়েন্সিং (scRNA-seq) বেসলাইনে বা স্ট্রেসর 21-এর প্রতিক্রিয়া হিসাবে স্বতন্ত্র কোষের ধরন সনাক্ত এবং প্রোফাইল করার জন্য একটি দ্রুত অগ্রসরমান পদ্ধতির প্রতিনিধিত্ব করে। এখানে, আমরা scRNA-seq প্রযুক্তি ব্যবহার করে দেখাই যে মানুষকিডনিICs ছয়টি ভিন্ন উপসেট নিয়ে গঠিত যার মধ্যে তিনটি A-IC, একটি হাইব্রিড IC–PC, একটি nonA–nonB IC, এবং একটি B-IC অন্তর্ভুক্ত। RNA বেগ বিশ্লেষণ পিসি থেকে UPEC এক্সপোজারে A-IC সাবসেটের দিকে ট্রান্সক্রিপশনাল স্থানান্তর প্রকাশ করেছে। ইনজিনিউটি পাথওয়ে অ্যানালাইসিস ইউপিইসি এক্সপোজারে একটি A-IC সাবসেটে প্রধান জৈবিক পথ হিসাবে ফাগোসোম পরিপক্কতা প্রকাশ করেছে। এই পথের মধ্যে, V-ATPases হল মূল জড়িত উপাদান। আমরা ICs দ্বারা ভিভো ইউপিইসি গ্রহণের ভিজ্যুয়ালাইজ করার জন্য ইন্ট্রাভিটাল মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করেছি এবং এই আইসিগুলিতে UPEC-এর অভ্যন্তরীণ অ্যাসিডিফিকেশন নিশ্চিত করেছি। অবশেষে, একটি মুরিন ইউটিআই মডেল V-ATPase (Atp6v1b1) mRNA এক্সপ্রেশনে বৃদ্ধি প্রদর্শন করেছে। এই অধ্যয়নটি ভি-এটিপেসকে ব্যাকটেরিয়া ফ্যাগোসাইট হিসাবে প্রকাশকারী এপিথেলিয়াল কোষগুলিকে অন্বেষণ এবং থেরাপিউটিকভাবে ম্যানিপুলেট করার ভিত্তি প্রদান করবে।
ফলাফল
মাস্ট/স্টেম সেল গ্রোথ ফ্যাক্টর রিসেপ্টর (CD117/c-KIT) প্রলিপ্ত চৌম্বক পুঁতির সাহায্যে ম্যাগনেটিক-অ্যাক্টিভেটেড সেল সর্টিং (MACS) এর মাধ্যমে মানুষের ICs সমৃদ্ধ করা যেতে পারে। মানবকিডনিটিস্যু, প্রাথমিকভাবে এর স্বাভাবিক মার্জিন থেকেকিডনিভর ছেদন, 2–4-মিমি টুকরো করে বিচ্ছিন্ন করা হয় তারপর রাতারাতি কোঅপারেটিভ হিউম্যান টিস্যু নেটওয়ার্ক [https://www.chtn.org] দ্বারা বরফের উপর Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) এর আমাদের ল্যাবে পাঠানো হয়। আমরা মানুষের আইসি বাছাই করার জন্য কোষের পৃষ্ঠ চিহ্নিতকারী হিসাবে সি-কেআইটি মূল্যায়ন করেছি কারণ সি-কেআইটি সফলভাবে ইঁদুর 22 এ এই উদ্দেশ্যে ব্যবহার করা হয়েছে। c-KIT অভিব্যক্তি মানুষের IC-তে স্থানীয়করণ করা হয়েছে এই অনুসন্ধানের ভিত্তিতে যে c-KIT এবং মানব আইসি চিহ্নিতকারী V-ATPase, B1 সাবুনিট (জিন ATP6V1B1), মানুষের একই কোষে সহ-লেবেলযুক্তকিডনিবিভাগ (সাপ্লি-মেন্টারি চিত্র 1) 22,23। চৌম্বকীয় বাছাই অনুসরণ করে যার মধ্যে CD45 প্লাস ইমিউন কোষ এবং মৃত কোষ অপসারণ অন্তর্ভুক্ত; সি-কেআইটি-পজিটিভ অনুমিত আইসিগুলির সমৃদ্ধি ATP6V1B1 mRNA এক্সপ্রেশন দ্বারা প্রদর্শিত হয়েছিল যা c-KIT-নেগেটিভ কোষের তুলনায় সি-কিট-পজিটিভ-এ 8–12-গুণ বৃদ্ধি পেয়েছে। SLC4A1 এবং SLC26A4 উভয়ই পরিবর্তনশীলভাবে IC-তে সমৃদ্ধ হয়েছিল যা দেখায় যে এই পদ্ধতি ব্যবহার করে A-IC এবং/ অথবা B-IC উভয়ই সমৃদ্ধকরণ সম্ভব (পরিপূরক চিত্র 2)। এই গবেষণায় ব্যবহৃত কিডনি টিস্যুর পটভূমি পরিপূরক সারণী 1 এ উপস্থাপন করা হয়েছে।
ইন্টিগ্রেটেড ক্লাস্টার বিশ্লেষণ ছয়টি আইসি উপপ্রকার চিহ্নিত করেছে।ScRNA-seq 1861 সালে বিচ্ছিন্ন হয়ে সম্পন্ন হয়েছিলকিডনিকোষগুলি যা উপরে বর্ণিত হিসাবে আইসিগুলির জন্য সমৃদ্ধ হয়েছিল। সমৃদ্ধ আইসিগুলি একটি এককের স্বাভাবিক মার্জিন থেকে প্রাপ্ত হয়েছিলকিডনিভর ছেদন কোয়ালিটি কন্ট্রোল (QC) ফিল্টারিং 1 ঘন্টার জন্য UPEC ইন ভিট্রোর সংস্পর্শে থাকা 859টি কোষ এবং 1 ঘন্টার জন্য ভিট্রোতে স্যালাইনের সংস্পর্শে থাকা 1002 কোষ দ্বারা পাস করা হয়েছিল। Seurat ফাংশন বিশ্লেষণ বাছাই করা সেল প্রস্তুতিতে 12 টি ক্লাস্টার চিহ্নিত করেছে (চিত্র 1a)। প্রতিটি ক্লাস্টারের মধ্যে নয়টি সর্বাধিক সংরক্ষিত মার্কার পরিপূরক ডুমুরে উপস্থাপন করা হয়েছে। 3-14। সামগ্রিকভাবে, 1861 টি কোষের 1066 (57 শতাংশ) জন্য IC সাবটাইপগুলি দায়ী। ক্লাস্টারগুলির মধ্যে ছয়টি IC উপপ্রকারের প্রতিনিধিত্ব করে। বিশেষ করে, আমরা তিনটি A-IC, একটি B-IC, একটি nonA–nonB-IC, এবং একটি হাইব্রিড PC–IC সাবটাইপ(গুলি) পেয়েছি।কিডনিচেন এবং সহকর্মীদের দ্বারা সুপারিশকৃত এপিথেলিয়াল কোষের নামকরণ, সংরক্ষিত নির্মাতারা যেগুলিকে আগে সেল-টাইপ মার্কার বা কনসার্ভ মার্কার হিসাবে রিপোর্ট করা হয়েছে যেগুলি অন্যদের থেকে 12টি ক্লাস্টারের মধ্যে একটিকে আলাদা করে প্রতিটি ক্লাস্টারে একটি সেল টাইপ বরাদ্দ করতে ব্যবহার করা হয়েছিল (পরিপূরক সারণী 2 , চিত্র 1b, c, চিত্র 2) 24–28।
A-IC সাবটাইপ এবং হাইব্রিড PC–IC প্রোটিন এক্সপ্রেশন scRNA-seq ফলাফলের সাথে সম্পর্কযুক্ত। আমরা মূল scRNA-seq ফাইন্ডিংগুলিকে যাচাই করেছি, উল্লেখযোগ্যভাবে যে SLC8A1 (Na plus/Ca plus exchanger 1 (NCX1) নামেও পরিচিত) হল হাইব্রিড PC–ICs এবং সেই হিট শক প্রোটিন ফ্যামিলি A (Hsp70) সদস্য 1A (HSPA1A) এর জন্য একটি চিহ্নিতকারী। প্রারম্ভিক বৃদ্ধির প্রতিক্রিয়া 1 (EGR1) সহ চিহ্নিতকারী যা A-IC সাবটাইপগুলিকে আলাদা করতে পারে (চিত্র 3)। কারণ আমরা এর স্বাভাবিক মার্জিন ব্যবহার করেছিকিডনিক্যান্সার রেসেকশন, আমরা যাচাই করেছি যে আমাদের SLC8A1, HSPA1A, এবং EGR1কিডনিঅভিব্যক্তি নিদর্শন স্বাভাবিক দেখা যে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিলকিডনিhttp://www.proteinatlas.org থেকে পাওয়া হিউম্যান প্রোটিন অ্যাটলাসের টিস্যু (পরিপূরক চিত্র 15) 29
মুরিনে পূর্বে প্রদর্শিত ডাক্ট সেল সাবটাইপ মার্কার প্রোফাইল সংগ্রহ করাকিডনিকোষগুলি মানুষের মধ্যে অনেকাংশে অক্ষত থাকেকিডনিকোষ যেহেতু মানব প্যাথোফিজিওলজিতে ভবিষ্যতের মুরিন মডেলের ফলাফলগুলিকে প্রাসঙ্গিক করা গুরুত্বপূর্ণ হবে, আমরা চেন এট আল দ্বারা সম্পাদিত scRNA-seq গবেষণায় পূর্বে চিহ্নিত মুরিন-সংগ্রহকারী ডাক্ট সেল মার্কারগুলির মানব আইসি অভিব্যক্তিকে মূল্যায়ন করেছি। 22 এবং Ransick et al. 30 ফলাফলের একটি ডট প্লট চিত্র 4-এ উপস্থাপিত হয়েছে। মুরিন-সংগ্রহকারী নালী কোষ-টাইপ মার্কারগুলি বেশিরভাগই মানুষের সংগ্রহ নালী কোষে সংরক্ষিত হয়।
A-IC সাবটাইপ A UPEC এক্সপোজারের 1 ঘন্টার সাথে আপেক্ষিক শতাংশে বৃদ্ধি পায়। ক্লাস্টারের মধ্যে কোষের শতাংশগুলি A-IC সাবটাইপ A/ক্লাস্টার 0 বাদ দিয়ে এক্সপোজার টাইপের মধ্যে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল, যা 16.2 থেকে 20.1 শতাংশে বেড়েছে, এবং A-IC সাবটাইপ C/ক্লাস্টার 5, যা 9.4 থেকে কমেছে 6.6 শতাংশ পর্যন্ত, স্যালাইন বনাম UPEC এক্সপোজার, P =0.03 (সারণী 1)।
হাইব্রিড PC-IC কোষগুলি তাদের RNA বেগ পরিবর্তন করে PC থেকে দূরে এবং A-IC-এর দিকে UPEC এক্সপোজারের 1 ঘন্টার প্রতিক্রিয়ায়। এমআরএনএ প্রাচুর্যের পরিবর্তন গণনা করতে সম্প্রতি ট্রান্সক্রিপ্ট করা অপরিবর্তিত প্রাক-এমআরএনএ বনাম পরিপক্ক বিভক্ত এমআরএনএর আপেক্ষিক প্রাচুর্য ব্যবহার করা যেতে পারে, যাকে বলা হয় mRNA বেগ 31। একক-কোষ গবেষণায় একটি ইতিবাচক mRNA বেগ নির্দেশ করে যে জিনগুলিকে নিয়ন্ত্রণ করা হচ্ছে যেখানে একটি নেতিবাচক mRNA বেগ মানে জিনগুলিকে নিয়ন্ত্রিত করা হচ্ছে 31৷ আরএনএ বেগের দিক নির্দেশ করে যে একটি কোষের অন্য একটি কোষ 31,32 এর দিকে একটি mRNA অভিব্যক্তির গতিপথ রয়েছে। UPEC এক্সপোজারের প্রতিক্রিয়াতে mRNA বেগ চিত্র 5-এ উপস্থাপিত হয়েছে। গুরুত্বের সাথে, হাইব্রিড PC-ICs তাদের RNA বেগ পরিবর্তন করে PCs থেকে দূরে এবং ICs এর দিকে UPEC এর প্রতিক্রিয়ায়। উপরন্তু, ICs তাদের ট্রান্সক্রিপশন কার্যকলাপ বজায় রাখে, যেখানে ট্রান্সক্রিপশনাল কার্যকলাপ অন্যান্য ক্ষেত্রে ন্যূনতম হয়ে যায়কিডনিকোষের ধরন।
কিডনির সহজাত ইমিউন প্রোফাইল UPEC এক্সপোজারের 1 ঘন্টার পরে কিছু প্রাথমিক একক কোষের অভিব্যক্তি পরিবর্তন দেখায়।1 ঘন্টার জন্য ইউপিইসি বনাম স্যালাইন এক্সপোজার অনুসরণ করে নির্বাচিত সহজাত ইমিউন জিনের scRNA-seq এক্সপ্রেশন প্যাটার্নগুলি পরিপূরক ডুমুরে উপস্থাপন করা হয়েছে। 16 এবং 17. মূল অনুসন্ধানগুলি A-IC সাবটাইপ A এবং B, হাইব্রিড PC-ICs, এবং B-ICs-এ AMP অ্যাড্রেনোমেডুলিন (ADM) এর উচ্চ প্রকাশ অন্তর্ভুক্ত করে। পিসি বেসলাইনে অ্যাড্রেনোমেডুলিন প্রকাশ করে না তবে ইউপিইসি এক্সপোজারের প্রতিক্রিয়ায় অভিব্যক্তি উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। সাইটোকাইন-ইনডিউসিবল SH2- প্রোটিন (CISH) ধারণকারী এবং অটোইন্টিগ্রেশন ফ্যাক্টর 1 (BANF1) এক্সপ্রেশনে বাধা UPEC এক্সপোজারের পরে ননএ-ননবি আইসিগুলিতে উল্লেখযোগ্যভাবে প্ররোচিত হয়। ইন্টারলিউকিন 18 (IL18), গ্যালেক্টিন 3 (এলজিএএলএস৩), বিটা ডিফেনসিন 1 (ডিইএফবি1), এবং সিগন্যাল ট্রান্সডিউসার সিডি 24 লিপোক্যালিন 2/নিউট্রোফিল জেলটিনেস-সম্পর্কিত লিপোক্যালিন (এলসিএন2/এনজিএএল) শুধুমাত্র শনাক্ত করা হয়েছিল
হাইব্রিড পিসি-আইসিতে এবং শুধুমাত্র ন্যূনতম টোল-জাতীয় রিসেপ্টর 4 এমআরএনএ এক্সপ্রেশন উপস্থিত ছিল। আমরা scRNA-seq এ রিবো-নিউক্লিজ 7 (RNASE7) এর অভিব্যক্তি সনাক্ত করিনি। আমরা চৌম্বকীয়ভাবে সাজানো পুল আইসি এবং নন-আইসিতে RNASE7 mRNA এক্সপ্রেশন মূল্যায়ন করেছিকিডনিকোষ আরএনএএসই 7 এমআরএনএ এক্সপ্রেশনটি চারটির মধ্যে একটি থেকে আইসিতে সনাক্ত করা হয়েছিলকিডনি(পরিপূরক চিত্র 18)।
ফাগোসোম পরিপক্কতার জৈবিক প্রক্রিয়া 1 ঘন্টার জন্য UPEC-এর সংস্পর্শে থাকা IC-এর সাথে যুক্ত।প্রতিটি ক্লাস্টারের সাথে যুক্ত দশটি নেতৃস্থানীয় জৈবিক পাথওয়েগুলিকে ইনজেনুইটি পাথওয়ে অ্যানালাইসিস দ্বারা নির্ধারিত p মানের দ্বারা স্থান দেওয়া হয়েছিল। তিনটি সংগ্রহকারী নালী দ্বারা নির্ধারিত ক্লাস্টার A-IC সাবটাইপ A/ ক্লাস্টার 0, A-IC সাবটাইপ B/ ক্লাস্টার 3 এবং A-IC সাবটাইপ C/ ক্লাস্টার 5 এর স্যালাইনের তুলনায় UPEC এক্সপোজারের পরে ডিফারেনশিয়াল জৈবিক পাথওয়ে প্রক্রিয়া ছিল (চিত্র 6a–c)। A-IC সাবটাইপ C/ক্লাস্টার 5-এ UPEC এবং স্যালাইনের সংস্পর্শে আসা কোষগুলির মধ্যে ফাগোসোম পরিপক্কতা ছিল শীর্ষস্থানীয় ফাংশন, A-IC সাবটাইপ A/ক্লাস্টার 0-এ দ্বিতীয় থেকে প্রথম অবস্থানে এবং চতুর্থ থেকে তৃতীয় সর্বোচ্চ অবস্থানে A-IC সাবটাইপ B/ ক্লাস্টারে 3. অবশিষ্ট সংগ্রহকারী নালী কোষের সাব-টাইপগুলির কোনটিতেই (পরিপূরক চিত্র 19) শীর্ষ দশটি সম্পর্কিত পথ ছিল না যা স্যালাইনের তুলনায় ইউপিইসি এক্সপোজারের পরে ভিন্ন ছিল। A-IC সাবটাইপ A/ক্লাস্টার 0-এর জন্য ফ্যাগোসোম পরিপক্কতা র্যাঙ্কিংয়ের ফলে জিন এক্সপ্রেশন প্রোফাইলটি পরিপূরক সারণি 3-এ উপস্থাপিত হয়েছে।
IC Atp6v1b1 mRNA এক্সপ্রেশন এর প্রতিক্রিয়ায় বৃদ্ধি পায়ভিভোতে পরীক্ষামূলক পাইলোনেফ্রাইটিস।Ingenuity phagosome maturation pathway V-ATPase কে IC-তে জড়িত হিসাবে হাইলাইট করেছে (পরিপূরক সারণী 3)। UPEC এক্সপোজারে V-ATPase সক্রিয় হয়েছে কিনা তা নির্ধারণ করতে, আমরা একটি মুরিন ইউটিআই মডেল ব্যবহার করেছি। ট্রান্সুরেথ্রাল ইউপিইসি বনাম স্যালাইন ইনোকুলেশন "আইসি রিপোর্টার" ইঁদুরের এক ঘণ্টা পর, যেগুলির IC-তে tdTomato (tdT, একটি লাল ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিন বৈকল্পিক) অভিব্যক্তি রয়েছে, euthanized হয়েছিল এবং ICগুলিকে বিচ্ছিন্ন থেকে সমৃদ্ধ করা হয়েছিলকিডনি কোষ. স্যালাইন কন্ট্রোলের তুলনায় সমৃদ্ধ আইসি-তে UPEC ইনোকুলেশন সহ ইঁদুরে বেশি Atp6v1b1 mRNA এক্সপ্রেশন ছিল (চিত্র 6d)।
আইসিগুলি ভিভোতে ইউপিইসিকে ফ্যাগোসাইটাইজ করে।আমরা একটি একক পারফিউজ করার পদ্ধতি তৈরি করেছিকিডনিএকটি অক্ষত সঙ্গে একটি লাইভ মাউস মধ্যে UPEC সঙ্গে টিউবুলকিডনিগ্রীন ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিন (GFP)-এক্সপ্রেসিং ইউপিইসি অ্যাগ্রিগেটগুলি "IC রিপোর্টার" ইঁদুরের একক কিডনি টিউবুল লুমেনে মাইক্রোপারফিউজ করা হয়েছিল, যা টিউবুলের মধ্য দিয়ে প্রবাহিত হয়, বেছে বেছে লুমিনাল পৃষ্ঠের সাথে লেগে থাকে এবং ইন্ট্রাভিটাল মাইক্রোস্কোপির সময় ICs (চিত্র 7) দ্বারা অভ্যন্তরীণ করা হয়।
ICs UPEC কে অ্যাসিডিফাই করে যা ভিভোতে ফ্যাগোলাইসোসোম রয়েছে এবংভিট্রোতেএছাড়াও আমরা pHrodo Green E. coli Bioparticles দিয়ে টিউবুলগুলিকে পারফিউজ করেছি যেগুলি শুধুমাত্র অ্যাসিডিফাইড হলেই প্রতিপ্রভ হয়। এই জৈব কণাগুলির গ্রহণ এবং প্রতিপ্রভ শুধুমাত্র IC-তে ইন্ট্রাভিটাল মাইক্রোস্কোপির সময় কল্পনা করা হয়েছিল (চিত্র 8)। ইমারিস সেগমেন্টেশন বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে কন্ট্রোল টিডিটি প্লাস টিউবিউলের তুলনায় পিএইচরোডো গ্রীন ই কোলি বায়োপার্টিকলসের সাথে পারফিউজ করা ২ টি টিডিটি প্লাস আইসি-তে সবুজ প্রতিপ্রভা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র 9a, b)। যখন সেলুলার ভিত্তিতে ফ্লুরোসেন্স মূল্যায়ন করা হয়, 12/16 (75 শতাংশ )tdT প্লাস কোষগুলি pHrodo Green E. coli Bioparticles (Fig. 9b) এর সাথে টিউবুলার পারফিউশনের পরে সময়ের সাথে সাথে সবুজ প্রতিপ্রভ বৃদ্ধির প্রমাণ দেয়। প্রতিটি কোষের রৈখিক রিগ্রেশন ফলাফল পরিপূরক সারণী 4-এ উপস্থাপিত হয়েছে। ICs দ্বারা PHrodo Green E. coli Bioparticles-এর ফাগোসাইটোসিস এবং অ্যাসিডিফিকেশনের লাইভ ইন ভিভো ইনট্রাভিটাল ইমেজিং ফলাফলগুলি একটি ইন ভিট্রো ফ্লো সাইটোমেট্রি অ্যাস ব্যবহার করে যাচাই করা হয়েছিল। মুরিনকিডনি কোষ"আইসি রিপোর্টার" ইঁদুর থেকে সাসপেনশন যেখানে ICs (CD45 − tdT প্লাস ) অন্তঃসত্ত্বাভাবে tdT প্রকাশ করে pHrodo Green E. coli Bioparticles বনাম কোষের সাথে একা মিডিয়ার সংস্পর্শে আসে। সেল সাসপেনশনে CD45 প্লাস রেসিডেন্ট ইমিউন কোষগুলিকে ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে গেট করা হয়েছিল এবং CD45 − tdT − (নন-আইসি) কোষগুলিকে নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে গেট করা হয়েছিল। একা মিডিয়ার সাথে তুলনা করা
বায়োপার্টিকেল এক্সপোজার, বায়োপার্টিকেল অধিগ্রহণের সবুজ প্রতিপ্রভ নির্দেশক এবং অম্লকরণ {{0}}.7 থেকে CD45 প্লাস কোষের 62.8 শতাংশে বৃদ্ধি পেয়েছে। এই আবিষ্কারটি পেশাদার ফ্যাগোসাইট যেমন নিউট্রোফিলস দ্বারা প্রত্যাশিত ব্যাকটেরিয়া গ্রহণকে প্রদর্শন করে। মজার বিষয় হল, 22.2 শতাংশ IC-তে সবুজ জৈব কণা গ্রহণ করা হয়েছে যেখানে 5.6 শতাংশ নন-ICs (পরিপূরক চিত্র 20), মিডিয়া নিয়ন্ত্রণ 0.7 শতাংশ IC এবং 0 শতাংশ নন-ICs গ্রহণ করেছে৷
আলোচনা
ICs অধ্যয়ন করা কঠিন, বিশেষ করে মানুষের মধ্যে, কারণ তারা মাত্র 7 শতাংশ নিয়ে গঠিতকিডনিকোষ, উপ-প্রকারের একটি পরিসীমা নিয়ে গঠিত এবং সংস্কৃতিতে তাদের ফেনোটাইপ ধরে রাখে না 33। চেন এট আল। 22 মুরিনে একক-কোষ বিশ্লেষণের রিপোর্ট করেছেকিডনিকোষ এবং লেক এট আল। মানুষের উপর একটি একক-নিউক্লিয়াস আরএনএ সিকোয়েন্সিং পাইপলাইন রিপোর্ট করেছেকিডনিকোষ 34,35। এই গবেষণাগুলি A-IC এর দুটি উপপ্রকার সনাক্ত করেছে। এখানে, আমরা কার্যকরী সমৃদ্ধ মানব আইসিগুলিতে একক-কোষ সিকোয়েন্সিং সঞ্চালনের জন্য পদ্ধতি তৈরি করেছি। আমরা সবগুলো সিকোয়েন্স করার পরিবর্তে কার্যকরী আইসিগুলির জন্য সমৃদ্ধ করেছিকিডনিকোষ এই কোষ ধরনের উপর ফোকাস বৃদ্ধি করার অনুমতি দেয়. আমাদের প্রাথমিক অনুসন্ধানগুলি ছিল (ক) শনাক্তকরণ যে হাইব্রিড পিসি-আইসিগুলি তাদের আরএনএ বেগের দিক পরিবর্তন করতে পারে পিসি থেকে দূরে এবং ইউপিইসি এক্সপোজারের প্রতিক্রিয়ায় এ-আইসি-এর দিকে, (খ) এ-আইসিগুলির কমপক্ষে তিনটি উপপ্রকার বিদ্যমান এবং তাদের আপেক্ষিক UPEC এক্সপোজারের প্রতিক্রিয়ায় ফ্রিকোয়েন্সিগুলি পরিবর্তন হতে পারে, (c) ফ্যাগোসোম পরিপক্কতা একাধিক A-IC সাব-টাইপের একটি অগ্রণী জৈবিক পথ এবং UPEC এক্সপোজারের সাথে আপেক্ষিক তাত্পর্য বৃদ্ধি করতে পারে এবং (d) লাইভ ইমেজ করার সময় ভিভোতে ICs ফ্যাগোসাইটোজ এবং UPEC এসিডিফাই করে। ইঁদুর
ICs তাদের পোলারিটি 36,37 বিপরীত করে অ্যাসিডোসিসের প্রতিক্রিয়ায় পার্থক্য করে। ICগুলি AQP2- প্রকাশকারী কোষ 38 থেকে উদ্ভূত বলে রিপোর্ট করা হয়েছে। 2017 সালে, চেন এবং সহকর্মীরা ডবল-পজিটিভ কোষ শনাক্ত করেছেন যা মুরিন একক-কোষ প্রোফাইলিং দ্বারা Slc4a1 বা Slc26a4 এর সাথে Aqp2 প্রকাশ করেছে। এই ফলাফলগুলি পার্ক এবং সহকর্মীদের দ্বারা পরের বছর 22,35 দ্বারা যাচাই করা হয়েছিল। 2019 সালে, আমরা প্রোটিন এবং mRNA ইমিউনোলেবেলিং দ্বারা প্রমাণ করেছি যে হাইব্রিড PC–ICs 15টি বিদ্যমান। বিশেষত, V-ATPase B1 ফ্লুরোসেন্ট ইমিউনোলেবেলিং দ্বারা সংজ্ঞায়িত 9 শতাংশ মুরিন আইসিও সিটু হাইব্রিডাইজেশন 15-এ ফ্লুরোসেন্ট দ্বারা সংজ্ঞায়িত Aqp2 mRNA প্রকাশ করে। বর্তমান গবেষণায় মানুষের জনসংখ্যা সংজ্ঞায়িত করা হয়েছেকিডনি- হাইব্রিড PC–ICs-এর সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ AQP2, ATP6V1G3, এবং SLC4A1 প্রকাশ করে এমন নালী কোষ সংগ্রহ করা। tSNE এবং UMAP প্লটে, এই হাইব্রিড কোষগুলি PC-এর সবচেয়ে কাছের ক্লাস্টার, কিন্তু IC মার্কার এক্সপ্রেশনের উপর ভিত্তি করে প্রচলিত পিসি থেকে আলাদা। SLC8A1 অভিব্যক্তিটি এই কোষের ধরণের থেকে আলাদা ছিল। মজার বিষয় হল SLC8A1 এপিথেলিয়াল থেকে মেসেনকাইমাল ট্রানজিশনের সাথে অত্যন্ত জড়িত। বিশেষত, SLC8A1-এর অনুপস্থিতি E-cadherin 39-এর ক্যাটেনিন-মধ্যস্থিত অস্থিতিশীলকরণের মাধ্যমে এপিথেলিয়াল সেল ফেনোটাইপগুলিকে রূপান্তরিত করে। এখানে, আমরা দেখাই যে আইসিগুলি ইউরোপ্যাথোজেন এক্সপোজারের প্রতিক্রিয়াতে পার্থক্য করে। হাইব্রিড পিসি-আইসি কোষগুলি তাদের আরএনএ বেগ পরিবর্তন করে, এমআরএনএ এক্সপ্রেশনের সময় ডেরিভেটিভ, পিসি থেকে দূরে এবং UPEC এর প্রতিক্রিয়ায় A-IC এর দিকে। ইঁদুরে, Ransick et al. 30 চিহ্নিত Slc8a1 অভিব্যক্তি প্রাথমিকভাবে দূরবর্তী আবর্তিত টিউবুলে এবং সংযোগকারী টিউবুলে পিসি সদৃশ কোষে। আমাদের কনফোকাল মাইক্রোকপি ইমেজ মূল্যায়নকিডনিSLC8A1 অভিব্যক্তি, আমরা বিচ্ছিন্ন কোষ খুঁজে পেয়েছি যেগুলি AQP2-পজিটিভ টিউবুলে (যেমন, নালী সংগ্রহ করা বা সংযোগকারী টিউবুলে) SLC8A1 প্রকাশ করেছে। এছাড়াও আমরা AQP2-নেতিবাচক টিউবুল শনাক্ত করেছি যেখানে বেশিরভাগ কোষ SLC8A1 প্রকাশ করেছে, সম্ভাব্যভাবে ইঁদুরের মধ্যে পূর্বোক্ত ডিস্টাল কনভোলুটেড টিউবুল Slc8a1 এক্সপ্রেশনের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। কিছু A-IC উপপ্রকারের ডিফারেনশিয়াল লিডিং জৈবিক পথ রয়েছে যা UPEC এক্সপোজার অনুসরণ করে এবং A-IC সাবটাইপ A UPEC এর প্রতিক্রিয়ায় আপেক্ষিক ফ্রিকোয়েন্সি বৃদ্ধি পায়। এই ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে A-IC সাবটাইপ A একটি সহজাত ইমিউন বৈকল্পিক প্রতিনিধিত্ব করতে পারে। আইসি পার্থক্যে SLC8A1 এর ভূমিকা ভবিষ্যতের গবেষণায় তদন্তের পরোয়ানা দেয়।
CISTANCHE কিডনি/রেনাল ব্যর্থতার উন্নতি ঘটাবে
আমরা 1861 মানুষের উপর scRNA-seq করেছিকিডনিযার মধ্যে 1066 টি IC ছিল। মানব প্যাথোফিজিওলজিতে মুরিন পরীক্ষামূলক মডেলগুলিকে প্রাসঙ্গিক করার জন্য, মানব এবং মুরিন আইসিগুলির তুলনা করা গুরুত্বপূর্ণ হবে। চেন এবং সহকর্মীরা সি-কেআইটি দিয়ে মুরিন আইসিগুলির জন্য সমৃদ্ধ করেছেন এবং scRNA-seq 22 সম্পাদন করেছেন। তারা 74 টি কোষকে PC, 87 টি A-ICs এবং 23 টি কোষকে B-ICs 22 হিসাবে শ্রেণীবদ্ধ করেছে। Ransick et al. 30টি 688 IC-তে scRNA-seq সম্পাদন করেছে। তারা IC এর জন্য সমৃদ্ধ করেনি বরং ভাগ করেছেকিডনিকর্টেক্স, ভিতরের মেডুলা এবং বাইরের মেডুলায় জোনাল পার্থক্য মূল্যায়ন করতে 30। আমরা দেখিয়েছি যে মুরিন-সংগ্রহকারী নালী কোষ-টাইপ মার্কার এক্সপ্রেশনটি মানুষের সংগ্রহ নালী কোষে মূলত সংরক্ষিত বলে মনে হয়েছে। মানুষের সাথে ইঁদুরের তুলনামূলক A-IC সাব-টাইপ আছে কিনা তার জন্য সম্ভবত বৃহত্তর সংখ্যক মুরিন আইসিগুলির লক্ষ্যযুক্ত একক-কোষ মূল্যায়নের প্রয়োজন হবে।
আমরা ইমিউন এবং প্রদাহজনক মধ্যস্থতাকারী গ্যালেক্টিন 3 (এলজিএএলএস৩) এবং এডিএমের মতো সহজাত ইমিউন প্রোটিনের scRNA-seq IC এক্সপ্রেশন সনাক্ত করেছি যা আমরা পূর্বে রডেন্ট আইসি 15,40–42 এ রিপোর্ট করেছি। যাইহোক, কিছু মূল সহজাত ইমিউন প্রোটিন যা পূর্বে IC-তে রিপোর্ট করা হয়েছিল, যেমন Lipocalin 2 (LCN2/NGAL), RNASE7, এবং টোল-লাইক রিসেপ্টর 4 (TLR4) ন্যূনতম অভিব্যক্তি ছিল বা একক-কোষ স্তরে মানব আইসিগুলিতে দেখা যায়নি। আমাদের বিশ্লেষণ 6,9. ICs-এ LCN2/NGAL এবং TLR4 এক্সপ্রেশনের ঘাটতি র্যানসিক এট আল-এর সাথে আমাদের গবেষণা গোষ্ঠীর দ্বারা মুরিন আইসি-তে রিপোর্ট করা হয়েছে তার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। 30কিডনিসেল এক্সপ্লোরার/] ১৫. চেন এট আল। 22 IC-তে কিছু TLR4 এবং NGAL mRNA এক্সপ্রেশন রিপোর্ট করেছে, কিন্তু পিসির তুলনায় অনেকগুণ কম। আমরা RNASE7 এক্সপ্রেশনের জন্য পুল করা মানব আইসি মূল্যায়ন করেছি এবং 4টির মধ্যে 1টি থেকে ICগুলিতে এটি চিহ্নিত করেছিকিডনি(পরিপূরক চিত্র 18), ইঙ্গিত করে যে এর অভিব্যক্তিটি অঞ্চল, সময় বিন্দু এবং শারীরবৃত্তীয় অবস্থার উপর নির্ভর করে বিরতিহীন হতে পারে। সিআইএসএইচ এক্সপ্রেশন, যা UPEC-এর প্রতিক্রিয়া হিসাবে ননএ ননবি আইসি-তে প্ররোচিত হয়, ফুসফুস এবং প্লীহা 43-এ মাইকোব্যাকটেরিয়াম যক্ষ্মার সহজাত প্রতিরোধ ক্ষমতা নিয়ন্ত্রণ করতে প্রদর্শিত হয়েছে। ICs কয়েক মিনিট ধরে ব্যাকটেরিয়া ফ্যাগোসাইটোসড করেছে, এবং scRNA-seq-এর জন্য আমাদের কোষগুলি তুলনামূলকভাবে সংক্ষিপ্ত 1 ঘন্টা সময় পয়েন্টের জন্য UPEC-এর সংস্পর্শে এসেছে। অন্যান্য IC পথ, যেমন AMP এক্সপ্রেশন বা কোষের মৃত্যুর নিয়ন্ত্রণ, UPEC এক্সপোজারের পরে পরবর্তী সময়ে আরও বিশিষ্ট হয়ে ওঠে কিনা তা নির্ধারণ করার জন্য ভবিষ্যতের অধ্যয়নের প্রয়োজন।
Phagocytosis involves the cellular uptake of particulates >প্লাজমা ঝিল্লি খাম দ্বারা 0.5 μm 44 । "পেশাদার ফ্যাগোসাইট", ম্যাক্রোফেজ, নিউট্রোফিলস এবং অস্টিওক্লাস্ট সহ ম্যালোয়েড থেকে প্রাপ্ত ইমিউন কোষগুলি মাইক্রোবায়োটা এবং সুস্থ কোষ থেকে আক্রমণকারী জীবাণুকে আলাদা করে, লক্ষ্যটিকে একটি ফ্যাগোসোমে আবদ্ধ করে, প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) তৈরি করে, এবং অ্যান্টিজেন ক্ষরণ করে। অন্যান্য কোষ 45-49। তাৎপর্যপূর্ণভাবে, ফ্যাগোলাইসোসোমের ভি-এটিপেসের দ্বারা শক্তিশালী অম্লকরণ একটি অম্লীয় মাইক্রোএনভায়রনমেন্ট তৈরি করে যা বেশিরভাগ জীবাণুকে হত্যা করার জন্য যথেষ্ট। উদাহরণস্বরূপ, ব্যাফিলোমাইসিন A1 এর সাথে V-ATPase বাধা দেওয়া ম্যাক্রোফেজ ব্যাকটেরিয়াঘটিত কার্যকলাপকে দমন করে 51। কিছু এপিথেলিয়াল কোষ ফ্যাগোসাইটোজ জীবাণু তৈরি করে তবে পেশাদার ফাগোসাইটের তুলনায় ব্যাকটেরিয়া হত্যার ক্ষেত্রে কম দক্ষ এবং অ-পেশাদার ফাগোসাইট 52 হিসাবে বর্ণনা করা হয়েছে। ICs একটি এপিথেলিয়াল বংশের প্রতিনিধিত্ব করে যেটিতে ফ্যাগোসাইটোসিস এবং অ্যান্টিজেন-প্রেজেন্টেশন ক্ষমতা রয়েছে (ডুমুর। 6-9) সাথে শক্তিশালী AMP এক্সপ্রেশন এবং ROS তৈরির জন্য উদার মাইটোকন্ড্রিয়া; এইভাবে, ICs-এর উপরে উল্লিখিত অ-পেশাদার ফ্যাগোসাইট 8,53-55 এর তুলনায় ম্যাক্রোফেজগুলির সাথে তুলনামূলক ব্যাকটেরিয়া-হত্যার সম্ভাবনা বেশি বলে মনে হয়। এ-আইসিগুলি পূর্বে সাইটোপ্লাজমিক ভেসিকেল 56-এ ডেক্সট্রানের অ্যাপিক্যাল এন্ডোসাইটোসিসের উচ্চ হারে সক্ষম বলে প্রমাণিত হয়েছে। আমরা অনুমান করি যে UPEC-এর IC ফ্যাগোসাইটোসিস হল ম্যাক্রোফেজগুলির সাথে ভাগ করা বৈশিষ্ট্যগুলির একটি সম্প্রসারণ, যার মধ্যে রয়েছে V-ATPase এক্সপ্রেশন, রেডক্স সম্ভাবনা, এএমপি নিঃসরণ এবং এন্ডোসাইটোসিস ক্ষমতা 8,16,49,57,58। ICs UPEC ব্যতীত সেলুলার ধ্বংসাবশেষ এবং ব্যাকটেরিয়াকে পেশাদার ফ্যাগোসাইটের অনুরূপভাবে ফ্যাগোসাইটোজ করতে পারে কিনা তা নির্ধারণ করা বাকি রয়েছে।
একক-এর কনফোকাল ইমেজিং-কিডনিব্যাকটেরিয়া সহ ভিভোতে পারফিউজ করা টিউবিউল কোষ কালচার এবং বিচ্ছিন্ন টিউবুলের পারফিউশনের মতো পূর্বের ভিট্রো কৌশলগুলিতে প্রসারিত হয়। এখানে, ফ্যাগোসাইটোসিস একটি আইসি ফাংশন কিনা তা সরাসরি জীবিত ইঁদুরে পরীক্ষা করার জন্য আমরা পদ্ধতি তৈরি করেছি। ইন্ট্রাভিটাল মাইক্রোস্কোপি কার্যকরী মুরিনের মধ্যে গতিশীল সেলুলার প্রক্রিয়াগুলির জটিল অধ্যয়নের অনুমতি দেয়কিডনি59। ইন্ট্রাভিটাল মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করার অতীত কৌশলগুলি প্রক্সিমাল টিউবুল এন্ডোসাইটোসিস অধ্যয়ন করার জন্য ইঁদুরের মধ্যে ইনট্রাভিটাল রঞ্জক বা মার্কারগুলির সিস্টেমিক ইনজেকশন জড়িত ছিল,কিডনিরক্ত প্রবাহের গতিবিদ্যা, এবং ভাস্কুলার বা গ্লোমেরুলার ব্যাপ্তিযোগ্যতা 60। যখন ইন্ট্রাভিটাল মাইক্রোস্কোপি অত্যাধুনিক অস্ত্রোপচারের কৌশলগুলির সাথে একত্রিত হয়, তখন সংক্রামক প্রক্রিয়াগুলির প্রাথমিক সময়ের পয়েন্টগুলি মূল্যায়ন করা কঠিন 61 অধ্যয়ন করা যেতে পারে। পূর্বে, রক্ত প্রবাহ, নিউট্রোফিল নিয়োগ এবং মূত্রনালীর বাধা 62,63 মূল্যায়নের জন্য ইঁদুরের প্রক্সিমাল টিউবুলে ব্যাকটেরিয়া মাইক্রোপারফিউজ করা হয়েছিল। ইউটিআই-এর অধিকাংশই ঊর্ধ্বমুখী প্যাথোজেনের কারণে হয় এবং প্রাথমিকভাবে সংগ্রহকারী নালী 64,65-এর সম্মুখীন হয়। এইভাবে, আমরা প্রস্তাব করি যে হোস্ট-প্যাথোজেন মিথস্ক্রিয়া মূল্যায়নের জন্য সংগ্রহকারী নালীটি একটি গুরুত্বপূর্ণ নলাকার অঞ্চল। আমাদের ইন্ট্রাভিটাল মডেল সিস্টেম কার্যকরভাবে একটি ক্লাসিক্যাল পুনরায় তৈরি করে
CISTANCHE কিডনি/রেনাল রোগের উন্নতি ঘটাবে
একক সংগ্রহ নল পারফিউশন স্টাডি, কিন্তু একটি অক্ষত সঙ্গে একটি লাইভ মাউসকিডনি,রক্ত, লিম্ফ্যাটিক, এবং নিউরোনাল সরবরাহ সহ প্রতিরোধ ক্ষমতা কোষের সাথে যোগাযোগ করার ক্ষমতা বজায় রাখে। পাইলোনেফ্রাইটিস প্যাথোফিজিওলজিতে পুরুষ বনাম মহিলা পার্থক্য রয়েছে। উদাহরণস্বরূপ, মানুষের মধ্যে, মহিলাদের মধ্যে তীব্র পাইলোনেফ্রাইটিস হওয়ার সম্ভাবনা পাঁচগুণ বেশি কিন্তু পুরুষ ইঁদুরের মধ্যে অ্যান্ড্রোজেন-মধ্যস্থতা বৃদ্ধি পায়লোনেফ্রাইটিসের তীব্রতা 66,67। র্যানসিক এবং সহকর্মীরা প্রক্সিমাল টিউবিউল কোষে বিশেষত জৈব অ্যানিয়ন ট্রান্সপোর্টার 30-এ পুরুষ ও মহিলার পার্থক্য প্রদর্শন করেছেন। পুরুষ আইসিগুলি আমাদের একক-কোষ সিকোয়েন্সিং এবং ইনট্রাভিটাল স্টাডিতে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। কারণ ব্যাকটেরিয়ার প্রতিরক্ষায় IC-এর ভূমিকা রয়েছেকিডনিএবং ইলেক্ট্রোলাইট ভারসাম্য, আইসি ফাংশনে লিঙ্গ-সম্পর্কিত বৈচিত্র্য, যেমন ফ্যাগোসাইটোসিস এবং একক-কোষ জিন অভিব্যক্তি, ভবিষ্যতের গবেষণার মূল ক্ষেত্র হবে। এই গবেষণার সীমাবদ্ধতা আছে। আমাদের scRNA-seq-এ হিউম্যান আইসি-তে UPEC এক্সপোজার এককভাবে ভিট্রোতে ছিলকিডনিএবং ভিভো UPEC এক্সপোজারের তুলনায় পার্থক্য থাকতে পারে। এছাড়াও, আমাদের অনুসন্ধানগুলি মানুষের শারীরবৃত্তীয় অঞ্চলকে প্রতিনিধিত্ব করেকিডনিবিভিন্ন অবস্থানের সাথে নমুনাযুক্ত এবং ভবিষ্যত গবেষণায় আঞ্চলিক বৈচিত্র্য থাকতে পারে যেমনটি র্যানসিক এট আল দ্বারা প্রদর্শিত হয়েছে। 30 ICs আমাদের scRNA-seq-এর 57 শতাংশ কোষ নিয়ে গঠিত, যা ~7 শতাংশ IC কম্পোজিশন থেকে সমৃদ্ধকিডনিবেসলাইন 33 এ আমাদের নমুনাটিতে কিছু অন্যান্য এপিথেলিয়াল এবং এন্ডোথেলিয়াল কোষের ধরন রয়েছে, কিন্তু CD45 প্লাস ইমিউন কোষগুলির জন্য নেতিবাচক ছিল যেগুলি IC-এর সমৃদ্ধকরণের আগে বাছাই করা হয়েছিল (চিত্র 1, পরিপূরক চিত্র। 1)। scRNA-seq-এর সাহায্যে টার্গেট IC গুলি আলাদাভাবে চিহ্নিত এবং মূল্যায়ন করা যেতে পারে। হেমাটোপয়েটিক স্টেম সেল সি-কেআইটি প্রকাশ করে, তবে তারা সম্ভবত প্রতিনিধিত্ব করে নাকিডনিআবাসিক মাইলয়েড কোষের জনসংখ্যা 68 . আমরা সুস্থ মানুষের মধ্যে উপস্থিত অন্যান্য সি-কেআইটি-প্রকাশকারী কোষগুলি সনাক্ত করিনিকিডনি, যেমন স্ট্রোমাল কোষ/টেলোসাইট 69। হেনলের কিছু বিচ্ছিন্ন লুপ এবং প্রক্সিমাল টিউবল সি-কেআইটি ইতিবাচকতা পূর্বে রিপোর্ট করা হয়েছেকিডনিইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি আমাদের scRNA-seq ফলাফল 70 এর সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ