নেটওয়ার্ক ফার্মাকোলজি এবং পরীক্ষামূলক বৈধতা ব্যবহার করে সিসঞ্চে ডেজার্টিকোলা আলঝাইমার রোগের সাথে চিকিত্সা করে এমন প্রক্রিয়াটি তদন্ত করে

[বিমূর্তি]

 

উদ্দেশ্য: অন্বেষণ করাআলঝাইমার রোগে সিসঞ্চে ডেজার্টিকোলার সম্ভাব্য প্রক্রিয়া (এডি)মাধ্যমেনেটওয়ার্ক ফার্মাকোলজিএবং প্রাণী পরীক্ষা।

পদ্ধতি:ভবিষ্যদ্বাণী করানেটওয়ার্ক ফার্মাকোলজি ব্যবহার করে সিসঞ্চে এবং আলঝাইমার রোগ সম্পর্কিত লক্ষ্যগুলি; 40 পুরুষ 7- মাস বয়সী এসএএমপি 8 ইঁদুরগুলি এলোমেলোভাবে একটি মডেল কন্ট্রোল গ্রুপ (মডেল), একটি নিম্ন-ডোজ (এল-জিসিএস), একটি মাঝারি-ডোজ (এম-জিসিএস), এবং একটি উচ্চ-ডোজ (এইচ-জিসিএস) চিকিত্সা গ্রুপ এবং একই বয়সের 10 পুরুষ অ্যান্টি-এজিং এসএএমআর 1 ইঁদুরকে এসএমআর 1 নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। জিসিএসের 30 ডি ইন্ট্রাগাস্ট্রিক প্রশাসনের পরে, মরিস ওয়াটার গোলকধাঁধা এবং ওয়াই ধাঁধা পরীক্ষাগুলি প্রতিটি ইঁদুরের প্রতিটি গ্রুপের শেখার এবং মেমরির দক্ষতা পরীক্ষা করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। ইঁদুরের হিপ্পোক্যাম্পাল সিএ 1 অঞ্চলে নিউরনের সংখ্যা এবং রূপচর্চা পর্যবেক্ষণ করতে নিসএল স্টেইনিং ব্যবহার করা হয়েছিল। ইঁদুরের হিপ্পোক্যাম্পাসে পিআই 3 কে, পি-আক্ট এবং পি-টাউয়ের অভিব্যক্তি সনাক্ত করতে ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেইনিং এবং ওয়েস্টার্ন ব্লট পরীক্ষাগুলি ব্যবহার করা হয়েছিল। ফলাফল: ভার্বাস্কোসাইড সহ 8 টি কার্যকর উপাদানগুলি সিসঞ্চে ডেজার্টিকোলা থেকে স্ক্রিন করা হয়েছিল এবং এডি চিকিত্সার সাথে জড়িত মূল জিনগুলি ছিল আক্ট 1, টিএনএফ, সিএএসপি 3 ইত্যাদি। সিসঞ্চে ডেজার্টিকোলা দ্বারা বিজ্ঞাপন চিকিত্সার সাথে সম্পর্কিত সিগন্যালিং পথগুলি পিআই 3 কে-আক্ট, টিএনএফ পথ এবং বয়স-রেজেজ পথের অন্তর্ভুক্ত ছিল। প্রাণী পরীক্ষাগুলি দেখিয়েছে যে মডেল গ্রুপের সাথে তুলনা করে, মরিস ওয়াটার ম্যাজ নেভিগেশন পরীক্ষায় পালানোর বিলম্ব এবং মোট দূরত্ব উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (পি<0.05), and the number of platform crossings significantly increased (P<0.05) in the spatial exploration test of the GCs group. In the immunohistochemical staining and Western blot experiments, the ratio of PI3K and P-Akt/Akt in the GCs group significantly increased (P<0.05), while the expression of P-Tau/Tau significantly decreased (P<0.05). Conclusion: GCs may improve the learning and cognitive abilities of SAMP8 mice by regulating the PI3K-AkT signaling pathway and regulating the expression of P-Tau protein.

[কীওয়ার্ডস]নেটওয়ার্ক ফার্মাকোলজি;আলঝাইমার রোগ; সিসঞ্চে ডেজার্টিকোলা; স্যাম্প 8 ইঁদুর; অ্যাপোপটোসিস

 

 

 

উচ্চমানের সিসঞ্চে ভেষজ পরিপূরক

 

1 উপকরণ এবং পদ্ধতি

1.1 উপকরণ

1.1.1 ডাটাবেস এবং বিশ্লেষণ প্ল্যাটফর্ম

এই গবেষণায় ব্যবহৃত প্রধান ডাটাবেস এবং বিশ্লেষণ প্ল্যাটফর্মগুলি (সারণী 1)।

 

ট্যাব 1 এই গবেষণায় ব্যবহৃত প্রাসঙ্গিক বিশ্লেষণাত্মক প্ল্যাটফর্ম এবং ডাটাবেস

নাম	ওয়েবসাইট	সংস্করণ
Traditional তিহ্যবাহী চীনা মেডিসিন সিস্টেম ফার্মাকোলজি ডাটাবেস (টিসিএমএসপি)	https://www.tcmsp-e.com/	2.3
ইউনিপ্রোট	https://www.uniprot.org/
পাবচেম	https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/
ভেনি	https://bioinfo.cis.cornell.edu/tools/venn/
জেনকার্ডস	https://www.genecards.org/
এনসিবিআই ডাটাবেস	https://www.ncbi.nlm.nih.gov/
ওমিম	https://omim.org/
স্ট্রিং ডাটাবেস	https://cytoscape.org/	11
সাইটোস্কেপ সফ্টওয়্যার	https://cytoscape.org/	3.8.0 - 3.9.1
মেটাস্কেপ	https://metascape.org/

 

1.1.2 পরীক্ষামূলক প্রাণী

এই পরীক্ষায় ব্যবহৃত পরীক্ষামূলক প্রাণীগুলি ছিল পুরুষ এসপিএফ-গ্রেড সেন্সেন্সেন্স-এক্সিলারেটেড মাউস প্রোন 8 (এসএএমপি 8) ইঁদুর, যা 2 মাস বয়সী থেকে 7 মাস বয়সী এবং পরীক্ষায় অন্তর্ভুক্ত ছিল। সমস্ত প্রাণী অভ্যন্তরীণ মঙ্গোলিয়া বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি বিশ্ববিদ্যালয়ের বাওটো মেডিকেল কলেজের প্রাণী পরীক্ষা কেন্দ্রের এসপিএফ-গ্রেড অ্যানিমাল রুমে উত্থিত হয়েছিল [সিক্সকে (এমইএনজি) 2018-0001], তাপমাত্রা সহ (24। {{9} ± 1। ± {11 ±}}) ডিগ্রি এবং 3%এ এমডিডিটি নিয়ন্ত্রিত। পর্যাপ্ত ফিড এবং পানীয় জল সরবরাহ করা হয়েছিল, এবং ইঁদুরগুলি খেতে এবং পান করতে মুক্ত ছিল। ইঁদুরের সাধারণ সার্কেডিয়ান ছন্দ নিশ্চিত করতে হালকা/গা dark ় চক্রটি 12 ঘন্টা/12 ঘন্টা ছিল। এই পরীক্ষায় জড়িত সমস্ত প্রাণী অপারেশন এবং পরীক্ষামূলক প্রোটোকলগুলি বাওটো মেডিকেল কলেজের পরীক্ষামূলক অ্যানিমাল এথিক্স কমিটি (বাউই এথিক্স 2018 নং 011) দ্বারা অনুমোদিত প্রোটোকল অনুসারে পরিচালিত হয়েছিল।

1.1.3 প্রধান রিএজেন্টস এবং যন্ত্রপাতি

উচ্চ-দক্ষতা রিপা লিসিস বাফার (R0010), ইসিএল প্লাস অতি সংবেদনশীল লুমিনসেন্ট সলিউশন (পিই 10010), ইলেক্ট্রোফোরেসিস বাফার (টি 1070), ট্রান্সফার বাফার (ডি 1060), প্রোটিন লোডিং বাফার (পি 1015) ইত্যাদি সমস্ত বেইজিং সোলেবাও থেকে কেনা হয়েছিল; ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি কিট (পিভি -9000}) বেইজিং ঝিঙশন জিনকিয়াও থেকে কেনা হয়েছিল; বিসিএ প্রোটিন সনাক্তকরণ কিট (23227) মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রের থার্মো সায়েন্টিফিক থেকে কেনা হয়েছিল। ফসফিনোসিটাইড 3- কিনেস (পিআই 3 কে) অ্যান্টিবডি, প্রোটিন কিনেস বি প্রোটিন কিনেস বি (আক্ট) অ্যান্টিবডি (এএফ 0016), পি -আক্ট অ্যান্টিবডি (এএফ 6261) সমস্তই উহান কুইক জৈবিক গবেষণা কেন্দ্র কো, লিটেড, লিটেন, লিটাইন থেকে কিনেছিলেন, লিটেন, লিটেন। ছাগলের অ্যান্টি-খরগোশের মাধ্যমিক অ্যান্টিবডি (এসএ 00001-2) মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রের প্রোটিনটেক থেকে কেনা হয়েছিল।
প্যারাফিন স্লিকার (লাইকা, জার্মানি), অপটিকাল মাইক্রোস্কোপ (লাইকা, জার্মানি), ওপেন ফিল্ড টেস্ট চেম্বার (সাংহাই জিনরুয়ান), মরিস ওয়াটার গোলকধাঁধা -80 ডিগ্রি আল্ট্রা-লো তাপমাত্রা রেফ্রিজারেটর (থার্মো ফিশার, ইউএসএ), ইলেক্ট্রোফোরেসিস অ্যাপার্টাস (বিইজিং লাইওরিজেশন) লিউই বায়োটেকনোলজি কোং, লিমিটেড), প্রোটিন জেল ইমেজিং অ্যানালাইসিস সিস্টেম (সাংহাই ট্যানন টেকনোলজি), এবং মাইক্রোপ্লেট রিডার (থার্মো ফিশার, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র)।

 

1.2 পদ্ধতি

1.2.1 নেটওয়ার্ক ফার্মাকোলজি বিশ্লেষণ

1.2.1.1 সক্রিয় উপাদানগুলির স্ক্রিনিং এবং সিসঞ্চে মরুভূমির লক্ষ্য পয়েন্ট

Screening of target points of Cistanche deserticola: All chemical active ingredients were searched in the TCMSP database (https://www.tcmsp-e.com) with Cistanche deserticola as the keyword, and oral bioavailability (OB) Greater than or equal to 30% and drug likeness (DL) Greater than or equal to 0.18 were used as limiting সংগৃহীত যৌগগুলি স্ক্রিন করার শর্ত; সুইস এডিএমই প্ল্যাটফর্মটি টিসিএমএসপি প্ল্যাটফর্মে "উচ্চ" এর গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল শোষণ (জিআই শোষণ) স্কোর এবং স্ট্যান্ডার্ড হিসাবে কমপক্ষে 2 "হ্যাঁ" এর ড্রাগের সদৃশতার সাথে পাওয়া যায় না এমন রাসায়নিক উপাদানগুলির পরিপূরক হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল এবং টার্গেটের মাধ্যমে সিসটানচেস ডেসারিটিকোলার সাধারণ সক্রিয় উপাদানগুলির সাথে একত্রিত ছিল, মেন্টাল নামগুলি ছিল,
(https://www.uniprot.org) [10]।

 

1.2.1.2 বিজ্ঞাপন রোগের লক্ষ্যমাত্রা অধিগ্রহণ

অনুসন্ধানের শব্দ হিসাবে "আলঝাইমার রোগ" ব্যবহার করে ওএমআইএম, জেনকার্ডস এবং এনসিবিআই ডাটাবেসে রোগের লক্ষ্যগুলি অনুসন্ধান করুন।

 

1.2.1.3 ভেন ডায়াগ্রাম ক্রিয়েশন এবং প্রোটিন-প্রোটিন ইন্টারঅ্যাকশন নেটওয়ার্ক (পিপিআই) নির্মাণ

ভেনি ডায়াগ্রাম ওয়েবসাইটে ওষুধের লক্ষ্য এবং রোগের লক্ষ্যগুলি লিখুন, একটি ভেন ডায়াগ্রাম তৈরি করুন এবং লক্ষ্যগুলির ছেদটি পান। একটি প্রোটিন ইন্টারঅ্যাকশন নেটওয়ার্ক তৈরি করতে স্ট্রিং ডাটাবেস আমদানি করুন, জৈবিক প্রজাতিগুলিকে "হোমো সেপিয়েন্স" এ সেট করুন এবং একটি প্রোটিন ইন্টারঅ্যাকশন নেটওয়ার্ক ডায়াগ্রাম পান। লক্ষ্যমাত্রার ডিগ্রি, ঘনিষ্ঠতা এবং মধ্যকার মানগুলির উপর ভিত্তি করে মূল লক্ষ্যগুলি ফিল্টার করতে সাইটোস্কেপ সফ্টওয়্যার ব্যবহার করুন এবং গ্রাফটি আঁকতে বিশ্লেষণ প্লাগ-ইন ব্যবহার করুন।

1.2.1.4 যান এবং কেজি বিশ্লেষণ

উপরোক্ত উল্লিখিত সম্পর্কিত মূল লক্ষ্যগুলিতে জিও এবং কেজি সমৃদ্ধ বিশ্লেষণ সম্পাদন করতে ডেভিড অনলাইন প্ল্যাটফর্ম এবং মেটাস্কেপ অনলাইন প্ল্যাটফর্মটি ব্যবহার করুন এবং 0। 05 এর চেয়ে কম বা সমান পি সহ আইটেমগুলি স্ক্রিন করুন। জিও এবং কেজি সমৃদ্ধ বিশ্লেষণের বুদ্বুদ চিত্রগুলি অনলাইন অঙ্কন প্ল্যাটফর্মের মাইক্রো-তথ্য ব্যবহার করে আঁকা হয়েছিল।

 

1.2.2 পরীক্ষামূলক প্রাণী গ্রুপিং এবং মডেল প্রস্তুতি

40 এসএএমপি 8 ইঁদুরগুলি এলোমেলোভাবে মডেল গ্রুপে, লো-ডোজ সিসঞ্চে ডেজার্টিকোলা গ্রুপ (এল-জিসিএস), মিডিয়াম-ডোজ সিসঞ্চে ডেজার্টিকোলা গ্রুপ (এম-জিসিএস) এবং উচ্চ-ডোজ সিস্টিঞ্চে ডেজার্টিকোলা গ্রুপ (এইচ-জিসিএস), প্রতিটি গ্রুপে 10 ইঁদুর সহ বিভক্ত ছিল; 10 সাম্র 1 ইঁদুর একই লিঙ্গ এবং ওজনের এসএএমআর 1 নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। এল-জিসিএস গ্রুপ, এম-জিসিএস গ্রুপ এবং এইচ-জিসিএস গ্রুপটি 25 মিলিগ্রাম/(কেজি · ডি), 50 মিলিগ্রাম/এর একটি ডোজে জিসিএসের সাথে জড়িয়ে পড়েছিল
(কেজি · ডি), এবং 100 মিলিগ্রাম/(কেজি · ডি) যথাক্রমে। SAMR1 গ্রুপ এবং মডেল গ্রুপটিকে সাধারণ স্যালাইনের একই ডোজ দেওয়া হয়েছিল এবং সমস্ত গ্রুপকে টানা 30 দিন ধরে গ্যাভ করা হয়েছিল।

 

1.2.3 আচরণগত পরীক্ষা

1.2.3.1 মরিস ওয়াটার গোলকধাঁধা পরীক্ষা

অবস্থান নেভিগেশন পরীক্ষা: জিসিএস প্রশাসনের 24 তম থেকে 30 তম দিনে, অবস্থান নেভিগেশন পরীক্ষাটি প্রথম 1 থেকে 5 দিনের মধ্যে পরিচালিত হয়েছিল। জলের ধাঁধাটি চারটি কোয়াড্রেন্টে বিভক্ত ছিল এবং প্ল্যাটফর্মটি তৃতীয় কোয়াড্রেন্টে স্থাপন করা হয়েছিল, এটি 2 সেন্টিমিটার দ্বারা জলের পৃষ্ঠের চেয়ে কিছুটা উঁচু। মাউসটি পুলের প্রাচীরের মুখের মাথা দিয়ে জলে স্থাপন করা হয়েছিল এবং এটি নির্দিষ্ট 60 সেকেন্ডের মধ্যে প্ল্যাটফর্মটি খুঁজে পেতে পারে এবং 2 থেকে 3 সেকেন্ডের জন্য প্ল্যাটফর্মে থাকতে পারে কিনা তা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। প্রতিটি মাউসের প্রশিক্ষণের ফ্রিকোয়েন্সি দিনে চারবার ছিল এবং প্রতিটি সময়ের সূচনা পয়েন্টটি ছিল আলাদা চতুর্ভুজ। প্রতিটি দুটি প্রশিক্ষণের মধ্যে সময়ের ব্যবধান 15 মিনিটেরও কম হওয়া উচিত নয়। যদি মাউসটি 60 সেকেন্ডের মধ্যে প্ল্যাটফর্মটি না খুঁজে পায় তবে এটি 3 থেকে 5 সেকেন্ডের জন্য প্ল্যাটফর্মে থাকার জন্য গাইড করা হয়েছিল। পরীক্ষার সময়, ইঁদুরের প্রতিটি গ্রুপের পালানোর বিলম্ব এবং পথের দৈর্ঘ্য রেকর্ড করা হয়েছিল; 6-7 দিন পরে, একটি স্থানিক অনুসন্ধানের পরীক্ষা ব্যবহার করা হয়েছিল: তৃতীয় কোয়াড্রেন্টের প্ল্যাটফর্মটি সরানো হয়েছিল, এবং ইঁদুরগুলি প্রথম কোয়াড্রেন্ট থেকে অনুসন্ধান পরীক্ষা শুরু করেছিল। অনুসন্ধানের সময়টি ছিল 60 এস, এবং প্ল্যাটফর্ম ক্রসিংয়ের সংখ্যা এবং ইঁদুরের প্রতিটি গ্রুপের লক্ষ্য চতুর্ভুজটিতে সময়ের শতাংশ রেকর্ড করা হয়েছিল।

 

1.2.3.2 ওয়াই-ম্যাজ পরীক্ষা

ওয়াই-ম্যাজে একই আকার এবং আকারের তিনটি বাহু নিয়ে গঠিত: প্রাথমিক বাহু, উপন্যাস বাহু এবং অন্যান্য বাহু। পরীক্ষার আগে, উপন্যাসের বাহুর প্রবেশদ্বারটি অবরুদ্ধ করা হয়েছিল, যা ইঁদুরগুলি 10 মিনিটের জন্য অবশিষ্ট দুটি বাহু অবাধে অন্বেষণ করতে দেয়। 1 ঘন্টা অনুসন্ধানের পরে, উপন্যাসের বাহুতে প্রবেশদ্বারটি খোলা হয়েছিল এবং প্রাথমিক বাহুর শুরুতে মাউসটি স্থাপন করা হয়েছিল। মাউসটি যখন 5 মিনিটের মধ্যে উপন্যাসের বাহুটি অন্বেষণ করেছিল তখন রেকর্ড করা হয়েছিল এবং মাউসটি সফলভাবে প্রবেশ করেছে এবং উপন্যাসের বাহুটি থেকে বেরিয়ে এসেছিল তার সংখ্যা গণনা করা হয়েছিল। মাউসের স্বতঃস্ফূর্ত বিকল্প হার গণনা করা হয়েছিল [বিকল্প হার (%)=সফল বিকল্পগুলির সংখ্যা/(বাহু এন্ট্রিগুলির মোট সংখ্যা -2) × 100%] [14]।

 

1.2.4 নিসল স্টেইনিং

30 দিনের ওষুধ প্রশাসনের পরে, ইঁদুরগুলি অ্যানাস্থেসিটাইজড এবং হৃদয়ে স্যালাইনের সাথে সুগন্ধযুক্ত ছিল। রক্ত শুকানোর পরে, ইঁদুরগুলি হত্যা করা হয়েছিল এবং মস্তিষ্কের টিস্যু নেওয়া হয়েছিল। ইঁদুরের মস্তিষ্কের টিস্যুগুলি 24-48 H, আরোহণের গ্রেডিয়েন্ট অ্যালকোহল দিয়ে ডিহাইড্রেটেড, জাইলিনের সাথে স্বচ্ছ এবং প্যারাফিনে এম্বেড থাকা 4% প্যারামফর্মালডিহাইডে নিমজ্জন দ্বারা স্থির করা হয়েছিল। স্লাইস বেধ 5 মিমি ছিল। জল থেকে রুটিন ডিওয়াক্সিং, মিথাইলিন নীল দাগ, পার্থক্য, ইথানল ডিহাইড্রেশন, জাইলিন স্বচ্ছ এবং রজন সিলিং। মাউস হিপ্পোক্যাম্পাসের সিএ 1 অঞ্চলে মরফোলজি এবং নিউরনের সংখ্যা 200 বার একটি মাইক্রোস্কোপের অধীনে পরিলক্ষিত হয়েছিল।

1.2.5 ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেইনিং

মস্তিষ্কের টিস্যু বিভাগগুলি নিয়মিতভাবে পানিতে ডিউক্স করা হত, সোডিয়াম সিট্রেট অ্যান্টিজেন মেরামত দ্রবণে স্থাপন করা হয়েছিল এবং উচ্চ-চাপের মাইক্রোওয়েভ দ্বারা উত্তপ্ত করা হয়েছিল, 5 মিনিট × 3 বার পিবিএস বাফার দিয়ে ধুয়ে দেওয়া হয়েছিল, যোগ করা এন্ডোজেনাস পেরোক্সিডেস ব্লকার, 5 মিনিট × 3 বার পিবিএস দিয়ে রিন্স করা হয়, এবং 4 ডিগ্রি পর্যন্ত ইনকিউবেটেড। পরের দিন, পিবিএস বাফার দিয়ে 5 মিনিট × 3 বারের জন্য ধুয়ে ফেলা হয়েছে, তারপরে প্রতিক্রিয়া বর্ধন সমাধান যুক্ত করা হয়েছে, পিবিএস দিয়ে আবার 5 মিনিট × 3 বার ধুয়ে, 20 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রি এ গৌণ অ্যান্টিবডি দিয়ে সজ্জিত, 5 মিনিটের জন্য পিবিএস দিয়ে ধুয়ে ফেলা, ড্যাব স্টেইনিং সলিউশন, হেমাটক্সিলিন কাউন্টারটিড, হেমাটক্সিলিন কাউন্টার জাইলিন

 

1.2.6 ওয়েস্টার্ন ব্লট

মাউস হিপ্পোক্যাম্পাল টিস্যুগুলির কিছু অংশ প্রোটিন রিপা লিসিস বাফারে যুক্ত করা হয়েছিল, পুরোপুরি গ্রাইন্ডিং রডের সাথে গ্রাউন্ড, একটি বরফ স্নানের আল্ট্রাসাউন্ড দ্বারা একত্রিত হয়ে 30 মিনিটের জন্য বরফের উপরে রেখে দেওয়া হয়েছিল। তারপরে 15 মিনিটের জন্য 12, 000 r/মিনিট সেন্ট্রিফিউজে একটি নিম্ন-তাপমাত্রা আল্ট্রাসেন্ট্রিফিউজ ব্যবহার করুন, সুপারেনট্যান্ট নিন এবং এর প্রোটিনের ঘনত্ব নির্ধারণের জন্য বিসিএ পদ্ধতিটি ব্যবহার করুন। প্রোটিন 20 ইউজি নিন এবং এটি প্রোটিন লোডিং বাফারে যুক্ত করুন, এটি 5 মিনিটের জন্য 100 ডিগ্রীতে অস্বীকার করুন, ইলেক্ট্রোফোরেসিস ট্যাঙ্কে প্রাক-কনফিগার করা ঘন জেল এবং বিচ্ছেদ জেলটি ইনস্টল করুন এবং লোডের পরে 60 মিনিটের জন্য 80 ভি ধ্রুবক ভোল্টেজ ইলেক্ট্রোফোরেসিস সম্পাদন করুন এবং তারপরে এটি 80 মিনিটের জন্য 120 ভি কনস্ট্যান্ট ভোল্টেজ ইলেক্ট্রোফোরেসিসে সামঞ্জস্য করুন। তারপরে 300 এমএ ধ্রুবক কারেন্ট ব্যবহার করুন এবং 130 মিনিটের জন্য ঝিল্লিটি স্থানান্তর করুন। ঘরের তাপমাত্রায় 2 ঘন্টা স্কিম দুধের সাথে ব্লক করুন, প্রাথমিক অ্যান্টিবডিটিকে 1: 1 500 বার মিশ্রিত করুন, এটি রাতারাতি 4 ডিগ্রি এ একটি ফ্রিজে ইনকিউবেট করুন, ঝিল্লিটি ধুয়ে ফেলুন এবং 2 ঘন্টা জন্য ঘরের তাপমাত্রায় গৌণ অ্যান্টিবডি ইনকিউবেট করুন। একটি ইমেজিং বিশ্লেষণ সিস্টেমের সাথে বিকাশের পরে, ব্যান্ডের প্রতিটি গ্রুপের ধূসর মান বিশ্লেষণ করুন।

 

1.2.7 পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ

সমস্ত ডেটা গড় হিসাবে প্রকাশিত হয়েছিল ± স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি (x  s), এবং এসপিএসএস 25। 0 এবং গ্রাফপ্যাড প্রিজম 9.5 সফ্টওয়্যার ডেটা বিশ্লেষণ এবং গ্রাফিংয়ের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। এসএনকে-কিউ পরীক্ষা জোড়াযুক্ত তুলনার জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল এবং একাধিক নমুনা তুলনার জন্য একমুখী আনোনা ব্যবহৃত হয়েছিল। পি<0.05 indicated statistically significant differences.