সবচেয়ে সক্রিয় প্রোবায়োটিক স্ট্রেনের ইন ভিট্রো মূল্যায়ন অন্ত্রের বাধা ফাংশন উন্নত করতে এবং গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল সিস্টেমের প্রদাহজনিত রোগ প্রতিরোধ করতে সক্ষমⅡ

2। সামগ্রী ও পদ্ধতি

2.1। কোষ সংস্কৃতি

হিউম্যান ককেশীয় কোলন অ্যাডেনোকার্সিনোমা Caco{{0}} কোষ (ATCC® HTB-37™) এবং হিউম্যানকোলন এপিথেলিয়াল মিউকাস-সিক্রেটিং HT29-MTX কোষ (সিগমা অ্যালড্রিচ) প্রথমে আলাদাভাবে সংষ্কৃত হয়েছিল, উভয়ই ব্যবহার করে DMEM (Gibco) মাধ্যমটি 10% ভ্রূণ বোভাইন সিরাম (Gibco), 100 IU/mL পেনিসিলিন, 100 mg/mL স্ট্রেপ্টোমাইসিন (Gibco) এবং 2 mM গ্লুটামিন (Gibco), 5% CO2 বায়ুমণ্ডলে 37 ◦C তাপমাত্রায় পরিপূরক। তারপরে, কো-কালচারগুলিকে 75:25 অনুপাতে Caco-2:HT অনুপাতে বেসোলেটারাল কম্পার্টমেন্টে কোষের প্রলেপ দিয়ে 12-wellTranswell® প্লেটে (12 মিমি পলিকার্বোনেট সন্নিবেশ এবং 0.4 µm ছিদ্র সহ) সেট আপ করা হয়েছিল। 29-MTX, এবং 21 দিনের জন্য পরিচালিত হয়, প্রতি 2 দিনে মাধ্যম পরিবর্তন করে৷

দ্রুত কোষ্ঠকাঠিন্য দূর করতে ক্লিক করুন

2.2। ব্যাকটেরিয়াল স্ট্রেন

ল্যাকটোব্যাসিলাস স্ট্রেন, লিমোসিলাক্টোব্যাসিলাস ফার্মেন্টাম সহ মহিষের দুধ থেকে বিচ্ছিন্ন [৩২], লেভিল্যাক্টোব্যাসিলাস ব্রেভিস এসপি-48, ল্যাকটিসেইবাসিলাস র্যামনোসাস IMC501, লিমোসিলাক্টোব্যাসিলাস রেউটেরি LR92 এবং ল্যাকটিকাসবিল্যাস-এর দ্বারা প্রদত্ত ল্যাকটিকাসবিল্যাস 2 প্রজেক্ট। BSA Farmaceutici Italia, বায়োরিয়াক্টর গাঁজনে চাষ করা হয়েছিল প্রসেস এবং হিমায়িত-শুকনো শুরু উপাদান হিসাবে ব্যবহৃত গুঁড়ো পেতে. পরীক্ষা-নিরীক্ষার আগে, পাউডারগুলি পুনরায় স্থগিত করা হয়েছিল এবং ম্যান, রোগোসা এবং শার্প ব্রোথে (MRS-Oxoid) 37 ◦C তাপমাত্রায় মাইক্রোঅ্যারোফিলিক অবস্থায় 24 ঘন্টার জন্য জন্মানো হয়েছিল।

2.3। কোষ চিকিত্সা

সহ-সংস্কৃতি কোষগুলি ল্যাকটোব্যাসিলাস এসপিপি-এর বিভিন্ন স্ট্রেনের সাথে চিকিত্সা করা হয়েছিল। (108 CFUs/mL) 100 এর বহুবিধ সংক্রমণ (MOI) এ, একা বা S. Typhimurium-এর 20 µg/mL অফলিপোপলিস্যাকারাইড (LPS) এর সাথে, 24 ঘন্টার জন্য 37 ◦C তাপমাত্রায় 5% CO2 এন্টিবায়োটিক ছাড়া।

2.4। রিয়েল-টাইম পিসিআর

প্রো- এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন, HBD-2, এবং TJ-এর অভিব্যক্তি মূল্যায়ন করার জন্য, চিকিত্সার শেষে কোষগুলিকে জীবাণুমুক্ত পিবিএস দিয়ে তিনবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল, এবং উচ্চ বিশুদ্ধ আরএনএ আইসোলেশন কিট ব্যবহার করে মোট আরএনএ বের করা হয়েছিল ( রোচে ডায়াগনস্টিকস)। মোট 2{{20}}0 এনজি সেলুলার আরএনএ রিভার্স-ট্রান্সক্রিপ্ট করা হয়েছিল (বিস্তৃত রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ, রোচে) পরিপূরক ডিএনএ (সিডিএনএ) এ র্যান্ডম হেক্সামার প্রাইমার (র্যান্ডমহেক্সামার্স, রোচে) ব্যবহার করে প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে, 45 মিনিটের জন্য 42 ◦C। IL-6, IL-8, TNF- , IL-1 , TGF- , HBD-2, Occludin, Zonulin-1, এবং Claudin{{ এর জন্য রিয়েলটাইম PCR 14}} 2 μL cDNA ব্যবহার করে এলসি ফাস্ট স্টার্ট ডিএনএ মাস্টার এসওয়াইবিআর গ্রিন কিট (রোচে ডায়াগনস্টিকস) দিয়ে করা হয়েছিল, যা 20 µL চূড়ান্ত ভলিউমে মোট RNA-এর 10 ng, 3 mMMgCl2 এবং 0.5 µM প্রাইম সেন্স এবং অ্যান্টিসেন্স (অ্যান্টিসেন্স) 1 নং টেবিল). পরিবর্ধনের পরে, গলনাঙ্ক বিশ্লেষণটি 15 সেকেন্ডের জন্য 20 ◦সে./সেকেন্ড তাপমাত্রায় স্থানান্তরিত করে, 20 ◦সে./সেকেন্ড তাপমাত্রা পরিবর্তনের হারের সাথে 15 সেকেন্ডের জন্য 60 ◦C-তে শীতল করে, এবং তারপরে নমুনাটি 0.1 ◦C/s থেকে 95 ◦C তাপমাত্রায় গরম করা। তারপরে লাইটসাইক্লার সফ্টওয়্যার (রোচে ডায়াগনস্টিকস) ব্যবহার করে ফলাফলগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। প্রতিটি প্রাইমার জোড়ার স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা cDNA এর সিরিয়াল ডিলিউশনের সাথে প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল। সমস্ত পিসিআর তিন প্রতিলিপিতে চালিত হয়েছিল। নির্দিষ্টতাপরিবর্ধন পণ্যগুলির 2% অ্যাগারোজ জেলে ইলেক্ট্রোফোরসিস ব্যবহার করে এবং ইথিডিয়াম ব্রোমাইড স্টেনিং [6] দ্বারা ভিজ্যুয়ালাইজেশন ব্যবহার করে যাচাই করা হয়েছিল।

2.5। এলিসা অ্যাস

IL-6, IL-8, IL-1 , TNF- , TGF- , HBD-2, Zonulin-1, Occludin, and Claudin{{7 এর উপস্থিতি }} ক্যাকোর সেলুলার লাইসেটগুলিতে-2/HT29-এলপিএস সহ বা ছাড়া ল্যাকটোব্যাসিলির বিভিন্ন স্ট্রেনের দ্বারা সংক্রামিত এমটিএক্স সহ-সংস্কৃতিগুলিকে এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস (ELISA; Invitrogen, IL) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল{12 }}, IL-8, IL-1 আলফা, TNF আলফা, এবং TGF বিটা-1 HumanELISA Kit; Phoenix Pharmaceuticals, Inc. Defensin 2, beta (Human)-ELISA Kit; Elabscience Biotechnology Inc. Human Zonulin, Human OCLN(Occludin) এবং Human CLDN1(Claudin 1) ELISA Kit)।

2.6। আনুগত্য এবং আক্রমণাত্মকতা পরীক্ষা

L. brevis, L. reuteri, এবং L. rhamnosus-এর ক্ষমতা অন্ত্রের কোকালচারে S. Typhimurium এবং EIEC-এর আঠালোতা এবং আক্রমণাত্মকতা কমানোর ক্ষমতা তিনটি ভিন্ন পরীক্ষামূলক প্রকারের মধ্যে তদন্ত করা হয়েছিল: (i) প্রতিযোগিতামূলক পরীক্ষা, যাতে অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষগুলি একইভাবে সংযোজিত ছিল। ল্যাকটোব্যাসিলি (108 CFUs/mL) এবং S. Typhimuriumor EIEC (108 CFUs/mL) 2 ঘন্টার জন্য। (ii) ইনহিবিশন অ্যাস, যেখানে কোষগুলিকে 2 ঘন্টার জন্য ল্যাক্টোব্যাসিলি (108 CFUs/mL) দিয়ে প্রিঙ্কুবেট করা হয়েছিল, এবং তারপর S. Typhimurium বা EIEC (108 CFUs/mL) যোগ করা হয়েছিল এবং অতিরিক্ত 2 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। (iii) স্থানচ্যুতি পরীক্ষা যেখানে কোষগুলিকে 2 ঘন্টার জন্য S. Typhimurium বা EIEC (108 CFUs/mL) দিয়ে প্রি-ইনকিউব করা হয়েছিল এবং তারপরে ল্যাকটোব্যাসিলি (108 CFUs/mL) যোগ করা হয়েছিল এবং 2 ঘন্টার জন্য আরও ইনকিউব করা হয়েছিল। এই সময়ের শেষে, সংক্রামিত মনোলেয়ারগুলিকে পিবিএস-এ ব্যাপকভাবে ধুয়ে ফেলা হয়, তারপর 0.1% ট্রাইটন এক্স-100 (সিগমা-অলড্রিচ, সেন্ট লুইস, এমও, ইউএসএ) পিবিএস-এ 10 মিনিটের জন্য দ্রবণ দিয়ে লাইজ করা হয়। অভ্যন্তরীণ ব্যাকটেরিয়া গণনা করার জন্য তাপমাত্রা। সেল লাইসেটগুলির অ্যালিকোটগুলিকে হেক্টোয়েন আগর (OXOID) এর উপর ক্রমিকভাবে পাতলা করা হয়েছিল এবং 37 ◦C তাপমাত্রায় রাতারাতি ইনকিউবেট করা হয়েছিল যাতে টোটালভাইবল সেল-সম্পর্কিত ব্যাকটেরিয়া (CFU/mL) পরিমাপ করা হয়। আক্রমণাত্মক পরীক্ষাগুলির জন্য, ব্যাকটেরিয়া দিয়ে ইনকিউবেশনের পরে, সংক্রামিত মনোলেয়ারগুলিকে জীবাণুমুক্ত পিবিএস দিয়ে ব্যাপকভাবে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং ডিএমইএম মিডিয়ামে অতিরিক্ত 2 ঘন্টার জন্য আরও ইনকিউব করা হয়েছিল, জেন্টামাইসিনসালফেট (250 µg ml–1) (সিগমা-অ্যালড্রিচকে হত্যা করার জন্য) অভ্যন্তরীণ ব্যাকটেরিয়া (CFU/mL) এর মোট সংখ্যা পরিমাপ করার জন্য পূর্বে বর্ণিত হিসাবে কোষগুলিকে লাইজড এবং প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল।

2.7। পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

গ্রাফপ্যাড প্রিজম 8 ব্যবহার করে গোষ্ঠীগুলির মধ্যে উল্লেখযোগ্য পার্থক্যগুলি দ্বি-মুখী ANOVA-এর মাধ্যমে মূল্যায়ন করা হয়েছিল৷{2}}, এবং একটি ছাত্রের টি-টেস্ট ব্যবহার করে উপায়গুলির মধ্যে তুলনা করা হয়েছিল৷ ডেটা তিনটি স্বাধীন পরীক্ষার মানে ± স্ট্যান্ডার্ড বিচ্যুতি (SD) হিসাবে প্রকাশ করা হয়।

কোষ্ঠকাঠিন্য-সিস্তানচে উপশমের জন্য প্রাকৃতিক ভেষজ ওষুধ

Cistanche হল পরজীবী উদ্ভিদের একটি প্রজাতি যা Orobanchaceae পরিবারের অন্তর্গত। এই গাছগুলি তাদের ঔষধি গুণাবলীর জন্য পরিচিত এবং বহু শতাব্দী ধরে ঐতিহ্যবাহী চাইনিজ মেডিসিনে (TCM) ব্যবহৃত হয়ে আসছে। Cistanche প্রজাতি প্রধানত চীন, মঙ্গোলিয়া এবং মধ্য এশিয়ার অন্যান্য অংশের শুষ্ক ও মরুভূমি অঞ্চলে পাওয়া যায়। Cistanche গাছপালা তাদের মাংসল, হলুদাভ কান্ড দ্বারা চিহ্নিত করা হয় এবং তাদের সম্ভাব্য স্বাস্থ্য সুবিধার জন্য অত্যন্ত মূল্যবান। টিসিএম-এ, সিস্তানচে টনিক বৈশিষ্ট্য রয়েছে বলে বিশ্বাস করা হয় এবং এটি সাধারণত কিডনিকে পুষ্ট করতে, জীবনীশক্তি বাড়াতে এবং যৌন ক্রিয়াকে সমর্থন করতে ব্যবহৃত হয়। এটি বার্ধক্য, ক্লান্তি এবং সামগ্রিক সুস্থতার সাথে সম্পর্কিত সমস্যাগুলি সমাধান করতেও ব্যবহৃত হয়। যদিও সিস্তানচে ঐতিহ্যগত ওষুধে ব্যবহারের একটি দীর্ঘ ইতিহাস রয়েছে, তবে এর কার্যকারিতা এবং নিরাপত্তার উপর বৈজ্ঞানিক গবেষণা চলমান এবং সীমিত। যাইহোক, এতে বিভিন্ন বায়োঅ্যাকটিভ যৌগ রয়েছে যেমন ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডস, ইরিডয়েডস, লিগনানস এবং পলিস্যাকারাইড, যা এর ঔষধি প্রভাবে অবদান রাখতে পারে বলে জানা যায়।

Wecistanche এরcistanche পাউডার, cistanche ট্যাবলেট, cistanche ক্যাপসুল, এবং অন্যান্য পণ্য ব্যবহার করে উন্নত করা হয়মরুভূমিcistancheকাঁচামাল হিসাবে, যার সবগুলিই কোষ্ঠকাঠিন্য উপশমে ভাল প্রভাব ফেলে। নির্দিষ্ট প্রক্রিয়াটি নিম্নরূপ: Cistanche এর ঐতিহ্যগত ব্যবহার এবং এতে থাকা নির্দিষ্ট যৌগগুলির উপর ভিত্তি করে কোষ্ঠকাঠিন্য দূর করার জন্য সম্ভাব্য সুবিধা রয়েছে বলে মনে করা হয়। যদিও বৈজ্ঞানিক গবেষণা বিশেষত কোষ্ঠকাঠিন্যের উপর সিস্তানচে এর প্রভাব সীমিত, এটি মনে করা হয় যে একাধিক প্রক্রিয়া রয়েছে যা কোষ্ঠকাঠিন্য উপশম করার সম্ভাবনায় অবদান রাখতে পারে। রেচক প্রভাব:সিস্তানচেকোষ্ঠকাঠিন্যের প্রতিকার হিসেবে ঐতিহ্যবাহী চাইনিজ মেডিসিনে দীর্ঘদিন ব্যবহার করা হয়েছে। এটির একটি হালকা রেচক প্রভাব রয়েছে বলে বিশ্বাস করা হয়, যা অন্ত্রের গতিবিধি উন্নীত করতে এবং কোষ্ঠকাঠিন্য প্ররোচিত করতে সাহায্য করতে পারে। এই প্রভাবটি সিস্টানচে পাওয়া বিভিন্ন যৌগকে দায়ী করা যেতে পারে, যেমন ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড এবং পলিস্যাকারাইড। অন্ত্রকে আর্দ্র করা: ঐতিহ্যগত ব্যবহারের উপর ভিত্তি করে, সিস্তানচেকে ময়শ্চারাইজিং বৈশিষ্ট্য বলে মনে করা হয়, বিশেষ করে অন্ত্রকে লক্ষ্য করে। অন্ত্রের হাইড্রেশন এবং তৈলাক্তকরণের প্রচার করা সরঞ্জামগুলিকে নরম করতে এবং সহজে যাতায়াতের সুবিধার্থে সাহায্য করতে পারে, যার ফলে কোষ্ঠকাঠিন্য উপশম হয়। অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি প্রভাব: কোষ্ঠকাঠিন্য কখনও কখনও পাচনতন্ত্রের প্রদাহের সাথে যুক্ত হতে পারে। সিস্তানচে কিছু নির্দিষ্ট যৌগ রয়েছে, যার মধ্যে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড এবং লিগনান রয়েছে, যেগুলির প্রদাহ-বিরোধী বৈশিষ্ট্য রয়েছে বলে বিশ্বাস করা হয়। অন্ত্রের প্রদাহ হ্রাস করে, এটি মলত্যাগের নিয়মিততা উন্নত করতে এবং কোষ্ঠকাঠিন্য উপশম করতে সহায়তা করতে পারে।