হিউম্যান অ্যামনিওটিক মেসেনকাইমাল স্টেম সেলগুলি অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং অন্ত্রের অনাক্রম্যতার মধ্যে মিথস্ক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে অ্যালো-এইচএসসিটি-র পরে AGVHD উপশম করে

বিমূর্ত

অ্যালোজেনিক হেমাটোপয়েটিক স্টেম সেল প্রতিস্থাপনের পরে তীব্র গ্রাফ্ট-বনাম-হোস্ট ডিজিজ (এজিভিএইচডি) সবচেয়ে বিরক্তিকর চ্যালেঞ্জগুলির মধ্যে একটি। অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা ডিসবায়োসিস এজিভিএইচডি এর সাথে এগিয়ে যেতে পারে এবং মেসেনকাইমাল স্টেম সেল (এমএসসি) এজিভিএইচডি এর জন্য প্রতিশ্রুতিবদ্ধ থেরাপিউটিক সম্ভাবনা রয়েছে। যাইহোক, এজিভিএইচডি প্রশমনের সময় এইচএএমএসসিগুলি অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাকে প্রভাবিত করে কিনা তা অজানা থেকে যায়। তদনুসারে, আমরা এজিভিএইচডি-তে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং অন্ত্রের অনাক্রম্যতা নিয়ন্ত্রণকারী হিউম্যান অ্যামনিওটিক মেমব্রেন থেকে প্রাপ্ত MSCs (hAMSCs) এর প্রভাব এবং অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াগুলি সংজ্ঞায়িত করার চেষ্টা করেছি। হিউম্যানাইজড এজিভিএইচডি মাউস মডেল এবং এইচএএমএসসি চিকিত্সা প্রতিষ্ঠা করে, আমরা দেখতে পেয়েছি যে এইচএএমএসসিগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে এজিভিএইচডি লক্ষণগুলিকে প্রশমিত করেছে, টি সেল উপসেট এবং সাইটোকাইনগুলির প্রতিরোধ ক্ষমতা ভারসাম্যহীনতাকে বিপরীত করেছে এবং অন্ত্রের বাধা পুনরুদ্ধার করেছে। অধিকন্তু, অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার বৈচিত্র্য এবং সংমিশ্রণ এইচএএমএসসিগুলির সাথে চিকিত্সার পরে উন্নত হয়েছিল। স্পিয়ারম্যানের পারস্পরিক সম্পর্ক বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং টাইট জংশন প্রোটিন, ইমিউন কোষ এবং সাইটোকাইনগুলির মধ্যে একটি সম্পর্ক ছিল। আমাদের গবেষণায় পরামর্শ দেওয়া হয়েছে যে এইচএএমএসসিগুলি অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা স্বাভাবিককরণের প্রচার করে এবং অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং অন্ত্রের বাধা, অনাক্রম্যতার মধ্যে মিথস্ক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে এজিভিএইচডি হ্রাস করেছে।

পুরুষদের জন্য cistanche উপকারিতা-প্রতিরোধ ক্ষমতা শক্তিশালী করে

কীওয়ার্ড

তীব্র গ্রাফ্ট-বনাম-হোস্ট ডিজিজ · অ্যামনিওটিক মেসেনকাইমাল স্টেম সেল · অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা · অন্ত্রের বাধা · অন্ত্রের অনাক্রম্যতা

ভূমিকা

অ্যালোজেনিক হেমাটোপয়েটিক স্টেম সেল ট্রান্সপ্লান্টেশন (অ্যালো-এইচএসসিটি) এর প্রাথমিক সুবিধা হল গ্রাফ্ট-বনাম-লিউকেমিয়া (জিভিএল) প্রভাবের কারণে শক্তিশালী অ্যান্টি-টিউমার প্রতিক্রিয়া যা রোগী এবং রোগীর মধ্যে জিনোমিক পলিমরফিজমের পার্থক্য থেকে উদ্ভূত পেপটাইডের স্বীকৃতির ফলে উদ্ভূত হয়। দাতা যাইহোক, অ্যাকিউট গ্রাফ্ট-বনাম-হোস্ট ডিজিজ (এজিভিএইচডি) অ্যালো-প্রতিক্রিয়াশীল দাতা টি কোষ দ্বারা আক্রমণের কারণে প্রাপকের টিস্যুর ক্ষতির বিকাশের চারপাশে ঘোরে এবং অ্যালোএইচএসসিটি [1, 2]-তে একটি প্রাণঘাতী প্রধান জটিলতার প্রতিনিধিত্ব করে। অন্ত্রের মাইক্রোবায়াল ডিসঅর্ডারটি প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া প্ররোচিত করে এবং প্রদাহজনিত-সম্পর্কিত রোগগুলির সাথে সম্পর্কযুক্ত বলে জানা গেছে [3, 4]। অসংখ্য গবেষণায় ইঙ্গিত দেওয়া হয়েছে যে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাতে অস্থিরতা একটি অপরিহার্য কারণ যা অ্যালো-এইচএসসিটি-এর পরে এজিভিএইচডিকে ট্রিগার করে এবং চিকিত্সার জন্য একটি অভিনব লক্ষ্য হয়ে ওঠে [5, 6]। বিশেষত, এজিভিএইচডি-তে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা ডিসবায়োসিস সাধারণত অন্ত্রের ব্যাকটেরিয়া বৈচিত্র্যের ক্ষতি এবং সুবিধাবাদী প্যাথোজেনগুলির বৃদ্ধি দ্বারা চিহ্নিত করা হয় [6]। গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল GVHD-তে, আপোসকৃত মিউকোসাল বাধা হোস্ট অ্যান্টিজেন-উপস্থাপক কোষ এবং দাতা টি কোষগুলির সক্রিয়করণ শুরু করে যা টলারোজেনিক নিয়ন্ত্রক টি-এর ব্যয়ে প্যাথোজেনিক প্রকার-1 এবং টাইপ-17 দৃষ্টান্তগুলির সাথে টি-কোষের পার্থক্যে পরিণত হয়। কোষ নিদর্শন [7]. প্রাথমিকভাবে 16S রাইবোসোমাল আরএনএ (16S rRNA) সিকোয়েন্সিং এর ভিত্তিতে নির্দেশ করে যে GVHD এর সাথে একাধিক প্রজাতির অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা যুক্ত করা হয়েছে এবং উদাহরণস্বরূপ, বুটিরেট-উৎপাদনকারী ক্লোস্ট্রিডিয়া এপিথেলিয়াল বাধা ফাংশন এবং তীব্র GVHD এর ক্ষয়ক্ষতির সাথে যুক্ত। ]। মেসেনকাইমাল স্টেম সেল (এমএসসি) তাদের স্ব-পুনর্নবীকরণ এবং বহুজাতিগত পার্থক্য সম্ভাবনা, সেইসাথে ইমিউনোমোডুলেটরি বৈশিষ্ট্যগুলির কারণে বিগত দশকে ব্যাপক মনোযোগ অর্জন করেছে [৯]। এমএসসিগুলি শক্তিশালী প্রদাহের উপস্থিতিতে সুষম প্রদাহজনক এবং পুনরুত্পাদনকারী মাইক্রোএনভায়রনমেন্টগুলি থেকে ক্ষতিগ্রস্ত টিস্যুগুলিকে সক্ষম করে বলে মনে করা হয় এবং ইমিউন-ভিত্তিক ব্যাধিগুলির চিকিত্সার জন্য ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়েছে, যার মধ্যে সবচেয়ে সফল ক্লিনিকাল অ্যাপ্লিকেশন GVHD চিকিত্সার সাথে জড়িত [10]। হিউম্যান অ্যামনিওটিক মেসেনকাইমাল স্টেম সেল (এইচএএমএসসি) হল পেরিনাটাল স্টেম সেল যা ভ্রূণ স্টেম সেলের মতো ডিফারেনিয়েশন ক্ষমতা এবং প্রাপ্তবয়স্ক স্টেম সেলের মতো ইমিউনোমোডুলেটরি বৈশিষ্ট্যের অধিকারী। সাধারণ MSC-এর মতো ফেনোটাইপগুলি ভাগ করে নেওয়া, hAMSCগুলি স্টেম সেলগুলির একটি প্রতিশ্রুতিশীল উত্স হয়ে উঠেছে কারণ টিস্যু অধিগ্রহণের সহজ, অনাক্রম্য এবং সুরক্ষা, প্রচুর কোষের ফলন এবং অন্যান্য উত্স থেকে স্টেম সেলের তুলনায় খুব কম নৈতিক ও নৈতিক বিরোধের কারণে। হিউম্যান AMSC-এর কম ইমিউনোজেনিসিটির সুবিধা রয়েছে এবং টিউমারিজেনিসিটি নেই, যা তাদের সেল থেরাপির জন্য আদর্শ সেল উৎস করে তোলে [১১, ১২]। ইন ভিট্রো পরীক্ষাগুলি নিশ্চিত করেছে যে এইচএএমএসসিগুলি অস্থি মজ্জা থেকে প্রাপ্ত এমএসসিগুলির তুলনায় একটি উচ্চ প্রসারিত ক্ষমতা এবং দীর্ঘমেয়াদী বৃদ্ধির ক্ষমতা প্রদর্শন করেছে [13, 14]। অসংখ্য গবেষণায় প্রমাণিত হয়েছে যে এইচএএমএসসিগুলি প্রদাহজনক অন্ত্রের রোগ, অস্টিওআর্থারাইটিস এবং অটোইমিউন রোগ সহ অনেক প্রদাহজনক রোগকে উপশম করার সম্ভাবনা রাখে [১১]। আমাদের সাম্প্রতিক গবেষণায় দেখানো হয়েছে যে এইচএএমএসসিগুলি টি ইফেক্টর এবং ট্রেগ কোষের ভারসাম্য নিয়ন্ত্রণ করে এজিভিএইচডিকে উন্নত করেছে [15]। যাইহোক, GVHD-এ অন্ত্রের মাইক্রোবিয়াল ডিসঅর্ডারের উপর hAMSC-এর প্রভাব এবং প্রক্রিয়া অজানা। এখানে, আমরা agVHD এর পাশাপাশি অন্ত্রের মাইক্রোইকোসিস্টেমের উপর hAMSC-এর সম্ভাব্য প্রভাব তদন্ত করার লক্ষ্য রাখি। AGVHD-এর hAMSC-এর চিকিত্সার পরে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং অন্ত্রের অনাক্রম্যতার সাথে এর পারস্পরিক সম্পর্ক প্রকাশ করা এটিই প্রথম গবেষণা।

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

বিচ্ছিন্নতা, সংস্কৃতি, এবং hAMSCs সনাক্তকরণ

এইচএএমএএসসিগুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে বের করা হয়েছিল [15]। CD34 (581, BD Pharmingen, USA), CD45 (HI30, BD Pharmingen, USA), HLA-DR (G46-6, BD Pharmingen) এর বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডি দিয়ে স্টেনিংয়ের মাধ্যমে ফেনোটাইপ শনাক্তকরণ থেকে তৃতীয়-প্যাসেজ (P3) কোষ সংগ্রহ করা হয়েছিল। , USA), CD11b (ICRF44, BD Pharmingen, USA), CD90 (5E10, BD Pharmingen, USA), CD73 (AD2, BD Pharmingen, USA) এবং CD105 (SN6, bioscience, USA), এবং তারপর ফ্লো সাইটোমিটার দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছে BD FACS Canto II)। কোষগুলিকে একটি নির্দিষ্ট আনয়ন মাধ্যম (BGscience, China) ব্যবহার করে তাদের মাল্টিলাইনেজ পার্থক্যের জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল এবং যথাক্রমে অ্যাডিপোজেনেসিস এবং অস্টিওজেনিক পার্থক্যের জন্য অয়েল রেড-ও এবং অ্যালিজারিন রেড দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল। পরীক্ষার জন্য 3 থেকে 6 প্যাসেজে hAMSC ব্যবহার করা হয়েছিল।

cistanche tubulosa- ইমিউন সিস্টেম উন্নত

মানব PBMCs সংগ্রহ

লিখিত অবহিত সম্মতিতে সুস্থ স্বেচ্ছাসেবকদের কাছ থেকে প্লাজমা নমুনা সংগ্রহ করা হয়েছিল। হিউম্যান পেরিফেরাল ব্লাড মনোনিউক্লিয়ার সেল (PBMCs) ফিকোল-হাইপ্যাক (তিয়ানজিন হাওয়াং, চীন) ঘনত্বের সেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা পেরিফেরাল রক্ত ​​থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল, পিবিএস দিয়ে ধুয়ে লাল রক্তের লাইসিস বাফারে (সোলারবিও, চীন) 4 মিনিটের জন্য 4 মিনিটের জন্য স্থগিত করা হয়েছিল। আবার ধুয়ে নিন এবং তারপর এনপিজি ইঁদুরে লেজের শিরা ইনজেকশনের জন্য পিবিএস-এ সাসপেন্ড করুন।

ইঁদুর

8-10 সপ্তাহ বয়স এবং 25-30 গ্রাম পুরুষ ও মহিলা NPG ইঁদুর বেইজিং ভাইটালস্টার বায়োটেকনোলজি কোং, লিমিটেড থেকে কেনা হয়েছিল এবং 12 ঘন্টা হালকা-অন্ধকার চক্রে ধ্রুব তাপমাত্রা এবং আর্দ্রতার সাথে এসপিএফ অবস্থার অধীনে পালন করা হয়েছিল। সমস্ত প্রাণী পদ্ধতিগুলি সাউদার্ন মেডিক্যাল ইউনিভার্সিটি ইনস্টিটিউশনাল অ্যানিমাল কেয়ার অ্যান্ড ইউজ কমিটি (নং L2019132) দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল প্রাণী পরীক্ষা সংক্রান্ত চীনের ন্যাশনাল হেলথ অ্যান্ড মেডিকেল রিসার্চ কাউন্সিলের নির্দেশিকা অনুসারে।

তীব্র জিভিএইচডি প্রাণীর মডেল এবং চিকিত্সা

এজিভিএইচডি মাউস মডেলটি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল [15]। চিকিত্সার জন্য, প্রতি মাউস প্রতি 5 × 105 hAMSCs (এখানে hAMSCs গ্রুপ) এবং PBS (এখানে AGVHD গ্রুপ) প্রতি মাউস প্রতিস্থাপনের তৃতীয় দিনে লেজের শিরার মাধ্যমে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। সমস্ত মাউস মডেলগুলিতে, অসুস্থতা এবং ওজন পরিবর্তনের জন্য প্রতি দুই দিনে ইঁদুরগুলি পরীক্ষা করা হয়েছিল। প্রতিটি মাউসকে ওজন হ্রাস, কুঁচকানো অঙ্গবিন্যাস, রাফ্ড পশম, ত্বকের ক্ষত, গতিশীলতা হ্রাস এবং ডায়রিয়া সহ প্যাথলজিকাল বৈশিষ্ট্যগুলির জন্য স্কোর করা হয়েছিল এবং তারপরে কুক [16] দ্বারা বর্ণিত একটি থেকে অভিযোজিত AGVHD ক্লিনিকাল স্কোরিং সিস্টেম অনুসারে গ্রেড করা হয়েছিল। কিছু কিছু ক্ষেত্রে, AGVHD গ্রুপের ইঁদুররা গুরুতর AGVHD-তে ভুগছিল এবং চিকিত্সার পর তৃতীয় দিনে hAMSCs গ্রুপের ইঁদুরগুলিকে যকৃত, প্লীহা, ফুসফুস এবং অন্ত্র সহ পেরিফেরাল রক্ত ​​এবং লক্ষ্য অঙ্গগুলি সংগ্রহ করার জন্য বলি দেওয়া হয়েছিল। কোরবানির আগে এসব ইঁদুরের মল সংগ্রহ করা হতো।

GFP-লেবেলযুক্ত hAMSC এবং ভিভো ট্রেসিং-এ

GFP-লেবেলযুক্ত hAMSC গুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে প্রতিষ্ঠিত এবং চিহ্নিত করা হয়েছিল [15]। সংক্ষেপে, আমরা একটি ভেক্টর হিসাবে লেন্টিভাইরাস সহ গ্রিন ফ্লুরোসেন্স প্রোটিন (GFP) জিনকে hAMSC তে স্থানান্তরিত করেছি। 500 μL পিবিএস-এ স্থগিত 5×105 GFP-লেবেলযুক্ত hAMSCগুলিকে লেজের শিরার মাধ্যমে এজিভিএইচডি ইঁদুরে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। 24 ঘন্টা এবং 72 ঘন্টা পরে, ইঁদুরগুলিকে অন্ত্র সংগ্রহ করার জন্য euthanized করা হয়েছিল এবং তারপরে হিমায়িত বিভাগ তৈরি হয়েছিল। DAPI কাউন্টারস্টেইনিং প্রাপক কোষগুলিকে আলাদা করতে ব্যবহৃত হয়েছিল।

হিস্টোপ্যাথলজিকাল মূল্যায়ন

AGVHD টার্গেট অঙ্গগুলি নেক্রোপসির সময় সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং তারপরে প্যারাফিন-এম্বেডেড ব্লকগুলিতে প্রক্রিয়া করা হয়েছিল যাতে হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন স্টেনিং (H&E) এর জন্য 5-μm-পুরু বিভাগ তৈরি করা হয়। হিস্টোলজিকাল স্কোরগুলি টিস্যু গঠন ধ্বংস এবং লিম্ফোসাইট অনুপ্রবেশের উপর ভিত্তি করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল [17]। ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রির জন্য, অন্তঃসত্ত্বা পারক্সিডেস কার্যকলাপকে নিষ্ক্রিয় করার জন্য বিভাগগুলিকে 20 মিনিটের জন্য মিথানলে 3% H2O2 দিয়ে ডিপারাফনাইজড, রিহাইড্রেট করা এবং চিকিত্সা করা হয়েছিল। তারপরে বিভাগগুলিকে অ্যান্টিজেন পুনরুদ্ধার করা হয়েছিল এবং 1 ঘন্টার জন্য সিরাম অ্যালবুমিন দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। পরবর্তীকালে, বিভাগগুলি খরগোশের মানব-বিরোধী CD45 অ্যান্টিবডি (EP322Y, Abcam, England) বা ZO-1 অ্যান্টিবডি (EPR19945-296, Abcam, England) দিয়ে 37 ডিগ্রি তাপমাত্রায় 1 ঘণ্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। এইচআরপি-কনজুগেটেড সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি (জেনেনটেক, ইউএসএ) দিয়ে অ্যান্টিবডি সনাক্ত করা হয়েছিল এবং ডিএবি-এর সাহায্যে কল্পনা করা হয়েছিল৷ ইমেজ জে দ্বারা ইতিবাচক এলাকা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল৷

cistanche উদ্ভিদ-বৃদ্ধি প্রতিরোধ ক্ষমতা

ফেকাল মাইক্রোবায়োটার 16S rRNA সিকোয়েন্সিং

প্রস্তুতকারকের প্রোটোকল অনুসরণ করে একটি EZNA® স্টুল DNA কিট (Omega BioTek, Norcross, GA, US) ব্যবহার করে 0.1 গ্রাম হিমায়িত মল নমুনা থেকে ফেকাল জিনোমিক ডিএনএ বের করা হয়েছিল। টেমপ্লেট হিসাবে জিনোমিক ডিএনএ ব্যবহার করে, নির্দিষ্ট প্রাইমারগুলি (338F: 5′-ACTCCTACGGGGGGCAGCA-3′, এবং 806R: 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′) বারকোডের সাথে এবং প্রিমিকসটিএকে চীনে amTaplify ব্যবহার করা হয়েছিল) ব্যাকটেরিয়া 16S rRNA জিনের V3-V4 হাইপারভেরিয়েবল অঞ্চল। পরিবর্ধন এবং বিশুদ্ধকরণের পরে, FASTQ বিন্যাসে কাঁচা ডেটা প্রাপ্ত করার জন্য Magigene Technology Co., Ltd. (Guangzhou, China) দ্বারা Illumina Hiseq বা Miseq হাই-থ্রুপুট সিকোয়েন্সিং প্ল্যাটফর্মে নমুনার পুরো জিনোমটি সিকোয়েন্স করা হয়েছিল। সিকোয়েন্স ডেটা বিশ্লেষণগুলি মূলত ম্যাজিচাঁদ প্ল্যাটফর্ম ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল।

ফ্লো সাইটোমেট্রিক বিশ্লেষণ

এজিভিএইচডি টার্গেট অঙ্গ এবং ইঁদুরের পেরিফেরাল রক্ত ​​প্রাপ্ত করা হয়েছিল এবং একক-কোষ সাসপেনশনে প্রস্তুত করা হয়েছিল। কোষগুলি CD3 (UCHT1, Biolegend, USA), CD4 (RPA-T4, Invitrogen, USA), CD8 (RPA-T8, Biolegend, USA), CD25 (BC96, Biolegend, USA) বা আইসোটাইপ-মিলের বিরুদ্ধে মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি দিয়ে দাগযুক্ত ছিল। অন্ধকারে ঘরের তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য IgG (eBioscience, USA) নিয়ন্ত্রণ করুন। তারপর কোষগুলি 15 মিনিটের জন্য অন্ধকারে 4 ডিগ্রিতে লাইসিং বাফার (বিডি ফার্ম লাইজ™) দিয়ে প্রক্রিয়া করা হয়েছিল। ইন্ট্রাসেলুলার ফক্স 3 (236A/E7, ইনভিট্রোজেন, ইউএসএ) স্টেনিং প্রস্তুতকারকের সুপারিশ অনুসারে সঞ্চালিত হয়েছিল (ফিক্সেশন/পারমিবিলাইজেশন সলিউশন কিট; ইবায়োসায়েন্স)। তারপরে একটি ফ্লো সাইটোমিটারে পলিক্রোম্যাটিক ফ্লো সাইটোমেট্রিক বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

সাইটোকাইনের পরিমাণ

ইঁদুরের সিরাম এবং টিস্যু সুপারন্যাট্যান্টে সাইটোকাইনের মাত্রা সাইটোমেট্রিক বিড অ্যারে (CBA) হিউম্যান Th1/Th2/Th17 সাইটোকাইন কিট (BD Pharmingen, USA) ব্যবহার করে নির্মাতার নির্দেশ অনুসারে নির্ধারণ করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, প্রতিটি সুপারনাট্যান্ট নমুনার 50 μL মিশ্র মানুষের 50 μL Th1/Th2/Th17 সাইটোকাইন ক্যাপচার পুঁতি এবং 50 μL মানুষের Th1/Th2/Th17 PE সনাক্তকরণ বিকারক দিয়ে অন্ধকারে ঘরের তাপমাত্রায় স্থগিত করা হয়েছিল, তারপর স্থগিত করা হয়েছিল। প্রবাহ সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণের জন্য 3 ঘন্টা পরে।

পরিমাণগত রিয়েল-টাইম পিসিআর

Trizol Reagent (TaKaRa, China) ব্যবহার করে বিচ্ছিন্নতার পরে মাউস কলোনিক টিস্যু থেকে মোট আরএনএ বের করা হয়েছিল। সিডিএনএ প্রতিলিপি বিপরীত করার জন্য মোট আরএনএ একটি টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। -অ্যাক্টিন একটি অভ্যন্তরীণ রেফারেন্স হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। এমআরএনএ এক্সপ্রেশনটি qPCR দ্বারা নিম্নলিখিত প্রাইমারগুলি ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল: ZO-1-F, 5'-ACCACCACCCGAGAAGAC-3', এবং ZO- 1-R, 5'-CAGGAGTCATGGACGCACA-3 '; Occludin-F, 5'-TTGAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3', এবং OccludinR, 5'-CCGGATAAAAAAGAGTACGCTGG-3'; -অ্যাক্টিন-এফ, 5'-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3', এবং -অ্যাক্টিন-R, 5'-CCAGTTGGTAACACAATGCCATGT-3'। RNA এক্সপ্রেশন মাত্রা পরিমাপ করতে 2-ct পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল।

এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস (ELISA)

প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে প্লাজমাগুলিতে D-LA এবং DAO-এর মাত্রা ELISA কিট (জিংমেই, চীন) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল। সংক্ষিপ্তভাবে, সংগৃহীত প্লাজমা সুপারন্যাট্যান্টগুলি যথাক্রমে 96-সুনির্দিষ্ট অ্যান্টিবডি-কোটেড প্লেটে রাখা হয়েছিল। একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার (মাল্টিসকান এমকে 3, থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) ব্যবহার করে শোষণ 450 এনএম রেকর্ড করা হয়েছিল।

পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

ডেটা গড় ± SD হিসাবে উপস্থাপিত হয়েছিল। গ্রাফপ্যাড প্রিজম 8 ব্যবহার করে স্বাধীন নমুনা টি-টেস্ট করা হয়েছিল এবং ভিজ্যুয়ালাইজ করা হয়েছিল৷{2}}৷ 16S rRNA সিকোয়েন্সিং ডেটা বিশ্লেষণগুলি ম্যাজিচ্যান্ড প্ল্যাটফর্ম ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল (http://cloud.magigenecom/)। একটি পারস্পরিক সম্পর্ক ম্যাট্রিক্স প্রদর্শন করতে R প্যাকেজ (v3.6.3) দ্বারা অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং অনাক্রম্যতার মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। পি মান<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.

ফলাফল

এইচএএমএসসিগুলির সনাক্তকরণ

hAMSCs সংস্কৃতিতে বহুভুজ বা ফাইব্রোব্লাস্ট-সদৃশ রূপবিদ্যা প্রদর্শন করেছে (চিত্র 1A) এবং MSC-নির্দিষ্ট মার্কার CD90, CD105, এবং CD73-এর পৃষ্ঠের অভিব্যক্তির জন্য দৃঢ়ভাবে ইতিবাচক ছিল, কিন্তু CD34, CD45, HLA-DR, এবং CD11b (চিত্র) এর জন্য নেতিবাচক . 1 গ)। মাল্টিলাইনেজ ডিফারেন্সিয়েশনের জন্য, আমাদের ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে এইচএএমএসসিগুলি অ্যাডিপোসাইটিক এবং অস্টিওব্লাস্টিক পার্থক্য (চিত্র 1 বি) প্রদর্শন করেছে।

hAMSC ইঁদুরের মধ্যে উল্লেখযোগ্যভাবে উপশম করা AGVHD উপসর্গ

আমরা প্রথমে AGVHD-তে hAMSC-এর থেরাপিউটিক প্রভাব মূল্যায়ন করেছি। এজিভিএইচডি গ্রুপের সাথে তুলনা করে, এইচএএমএসসি উল্লেখযোগ্যভাবে এজিভিএইচডিকে উন্নত করেছে, যেমনটি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাসকৃত ওজন হ্রাস (চিত্র 2বি) এবং এজিভিএইচডি ক্লিনিকাল স্কোর (চিত্র 2সি) হ্রাস দ্বারা প্রমাণিত। অধিকন্তু, hAMSCs গ্রুপের বেঁচে থাকার হার উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল যখন aGVHD ইঁদুরের (চিত্র 2D) তুলনায়। প্যাথলজিকাল হিস্টোলজি বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে AGVHD টিস্যুর মারাত্মক ক্ষতি এবং লিউকোসাইট অনুপ্রবেশ ঘটায়। hAMSCs, যেমন H&E দ্বারা প্রদর্শিত হয়েছে, AGVHD টার্গেট অঙ্গে (চিত্র 2E) বহিরাগত টি কোষের ক্ষয়প্রাপ্ত টিস্যু ব্যাঘাত এবং অনুপ্রবেশ। ধারাবাহিকভাবে, IHC-এর ফলাফলগুলিও নিশ্চিত করেছে যে hAMSC-গুলি অস্বাভাবিক প্যাথলজিকাল প্রকাশের উন্নতি করেছে (চিত্র 2F)। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে এইচএএমএসসিগুলির এজিভিএইচডি ইঁদুরগুলিতে এজিভিএইচডি লক্ষণগুলি কমানোর সম্ভাবনা রয়েছে।

hAMSCs এজিভিএইচডি ইঁদুরে হোস্ট ইমিউনিটি প্রভাবিত করে

অন্তর্নিহিত ইমিউনোমোডুলেটরি প্রক্রিয়াগুলি বোঝার জন্য যার দ্বারা এইচএএমএসসিগুলি এজিভিএইচডি হ্রাস করে, আমরা পেরিফেরাল রক্ত ​​এবং লক্ষ্য অঙ্গগুলিতে টি কোষগুলির সক্রিয়করণ এবং প্রসারণ পরিমাপ করেছি। ফ্লো সাইটোমেট্রি অ্যাস থেকে জানা যায় যে hAMSCs উল্লেখযোগ্যভাবে রক্ত ​​এবং লক্ষ্য অঙ্গে CD3+CD4+T এবং CD3+CD8+T কোষের সংখ্যাকে বাধা দেয় (চিত্র 3A, খ)। তাছাড়া, hAMSCs গ্রুপের ইঁদুরের রক্তে এবং লক্ষ্য অঙ্গে CD4+CD25+Foxp3+এর অনুপাত এজিভিএইচডি গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল (চিত্র 3C) . আমরা পরবর্তীতে সাইটোকাইন প্রোফাইলে (চিত্র 4) hAMSC-এর প্রভাব তদন্ত করেছি। hAMSCs প্রশাসনের ফলে লক্ষ্য অঙ্গ ও রক্তে IL-17A, IFN- , TNF, IL-6, এবং IL-2 স্তরগুলি এজিভিএইচডি গ্রুপের তুলনায় স্পষ্টভাবে হ্রাস পেয়েছে, প্লীহায় TNF স্তর ছাড়া। ইতিমধ্যে, লিভারে IL-10 মাত্রা ছাড়াও, hAMSCs চিকিত্সা ইঁদুরগুলি লক্ষ্য অঙ্গ এবং রক্তে IL-10 এবং IL-4 এর মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে৷ একসাথে নেওয়া, এইচএএমএসসিগুলি টি সেল উপসেট এবং সাইটোকাইন ঝড়ের প্রতিরোধ ক্ষমতা ভারসাম্যহীনতাকে বিপরীত করে AGVHD-এ একটি প্রতিরক্ষামূলক ভূমিকা পালন করেছে।

cistanche tubulosa এর উপকারিতা- ইমিউন সিস্টেমকে শক্তিশালী করা

Cistanche Enhance Immunity পণ্য দেখতে এখানে ক্লিক করুন

【আরো জন্য জিজ্ঞাসা করুন】 ইমেল:cindy.xue@wecistanche.com / Whats অ্যাপ: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

hAMSCs এজিভিএইচডি ইঁদুরে অন্ত্রের বাধা ক্ষতির উন্নতি করেছে

এইচএএমএসসিগুলি এজিভিএইচডি-তে অন্ত্রের বাধা মেরামত করতে পারে কিনা তা তদন্ত করার জন্য, আমরা প্রথমে পর্যবেক্ষণ করেছি যে এইচএএমএসসিগুলি অন্ত্রে স্থানান্তর করতে পারে কিনা। চিত্র 5A-তে দেখানো হয়েছে, HAMSC-তে ইনজেকশন দেওয়ার পরে GFP-লেবেলযুক্ত hAMSCগুলি অন্ত্রে সনাক্ত করা হয়েছিল এবং অন্ত্রে খোদাই এবং অনুপ্রবেশ করতে পারে। তারপরে আমরা ছোট অন্ত্রের টিস্যুর একটি হিস্টোপ্যাথলজিকাল মূল্যায়ন ডিজাইন করেছি। এজিভিএইচডি গ্রুপে, অন্ত্রটি ক্ষয়প্রাপ্ত হয়েছিল এবং নেক্রোটিক হয়েছিল, অন্ত্রের ভিলি স্পষ্টতই ধ্বংস হয়েছিল, ভিলি ভেঙে গিয়েছিল এবং অন্ত্রের মিউকোসা, সাবমিউকোসা এবং ল্যামিনা প্রোপ্রিয়াতে বিশাল লিউকোসাইট অনুপ্রবেশ করেছিল। অন্ত্রের ভিলি নিয়মিতভাবে সাজানো ছিল, এবং hAMSC-এর চিকিত্সার পরে অন্ত্রের ভিলাস ভাঙ্গন বা ভিলাস এপিথেলিয়ামের বিচ্ছিন্নতা ছিল না (চিত্র 5বি)। এজিভিএইচডি গ্রুপের অন্ত্রে ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি দ্বারা মানুষের লিম্ফোসাইট অনুপ্রবেশও পরিলক্ষিত হয়েছিল, যেখানে hAMSC-এর চিকিত্সা তাদের অনুপ্রবেশ হ্রাস করতে পারে (চিত্র 5C)। অন্ত্রের মিউকোসাল অখণ্ডতার উপর hAMSC-এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব মূল্যায়ন করার জন্য, আমরা ZO-1-এর উপর প্রভাব সনাক্ত করতে ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি করেছি। hAMSCs চিকিত্সা গ্রুপে, টাইট জংশন প্রোটিন ZO-1-এর এক্সপ্রেশন লেভেল উল্লেখযোগ্যভাবে AGVHD গ্রুপের তুলনায় বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র 5D)। আমরা অন্ত্রের বাধা ফাংশন এবং অন্ত্রের ব্যাপ্তিযোগ্যতা নির্ধারণ করতে অন্ত্রের টাইট জংশন প্রোটিন (TJs) এবং D-ল্যাকটিক অ্যাসিড (D-LA) এবং ডায়ামিন অক্সিডেস (DAO) এর mRNA এক্সপ্রেশন স্তরগুলিও পরীক্ষা করেছি। যখন শিরায় প্রশাসিত হয়, তখন hMASCs উল্লেখযোগ্যভাবে ZO-1 এবং Occludin-এর mRNA এক্সপ্রেশন মাত্রা বৃদ্ধি করতে পারে, TJs (চিত্র 5E, F) এর মূল প্রোটিন, যখন D-LA এবং DAO (চিত্র 5G,) এর মাত্রা হ্রাস করে। জ)। তাই, যখন এজিভিএইচডি ঘটেছিল, তখন অন্ত্রের টাইট জংশন প্রোটিন হ্রাস এবং অন্ত্রের ব্যাপ্তিযোগ্যতা বৃদ্ধির সাথে অন্ত্রের বাধা ক্ষতিগ্রস্ত হয়েছিল। ইতিমধ্যে, এইচএএমসিএসগুলি অন্ত্রের বাধার ব্যাঘাতকে উল্লেখযোগ্যভাবে বিপরীত করতে পারে।

চিত্র 1 hAMSC-এর ফিনোটাইপিক এবং কার্যকরী বৈশিষ্ট্য। (ক) প্যাসেজ 0 থেকে 3 পর্যন্ত hAMSC-এর প্রতিনিধি মাইক্রোগ্রাফ (কোনও দাগ নেই, 100×)। (বি) এইচএএম এসসি-র মাল্টিলাইনেজ ডিফারেনশিয়ান ক্ষমতা। এইচএএমএসসিগুলির অ্যাডিপোজেনিক ডিফারেনসিয়েশন (বাম) তেল রেড-ও দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল এবং এইচএএমএসসিগুলির অস্টিওব্লাস্টিক ডিফারেনসিয়েশন (ডান) অ্যালিজারিন রেড (স্টেইনিং, 100 ×) দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল। (C) ফ্লো সাইটোমেট্রিক বিশ্লেষণ CD90, CD105 এবং CD73 এর জন্য hAMSCs ইতিবাচক এবং CD34, CD45, CD11b এবং HLA-DR এর জন্য নেতিবাচক

চিত্র 2 এইচএএমএসসি এনপিজি ইঁদুরে এজিভিএইচডি হ্রাস করেছে। (A) AGVHD মাউস মডেলগুলিতে hAMSC-এর প্রশাসনিক সময়সূচী চিত্রিত করে একটি পরিকল্পিত চিত্র। (খ) বিভিন্ন গ্রুপে শরীরের ওজনের পরিবর্তন (n=10)। (C) বিভিন্ন গ্রুপে (n=10) এজিভিএইচডি ক্লিনিকাল স্কোর (ওজন হ্রাস, কুঁকানো অঙ্গবিন্যাস, রুক্ষ পশম, ত্বকের ক্ষত, গতিশীলতা হ্রাস এবং ডায়রিয়ার উপর ভিত্তি করে)। (D) বিভিন্ন গোষ্ঠীর মধ্যে বেঁচে থাকা (n=10)। (E) H&E স্টেনিং (400×) এবং হিস্টোলজি স্কোর (টিস্যু কাঠামো ধ্বংস এবং লিম্ফোসাইট স্ফীতির উপর ভিত্তি করে) এর প্রতিনিধি মাইক্রোস্কোপিক ছবি (n=4)। (F) ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রির প্রতিনিধি মাইক্রো স্কোপিক ছবি (400×) এবং CD45 পজিটিভ এলাকার অনুপাত (n=4)। মানগুলি গড় ± SD হিসাবে উপস্থাপিত হয়েছিল

চিত্র 3 hAMSCs ডোনার টি কোষের সম্প্রসারণকে বাধা দেয় যখন ভিভোতে ট্রেগস জেনারেশন বা সম্প্রসারণ হয়। (A) CD3+CD4+T কোষ(n=6) এর ফ্লো সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণ, (B) CD3+CD8+ এর ফ্লো সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণ T কোষ(n=6), (C) CD4+CD25+Foxp3+Tregs (n=6) এর ফ্লো সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণ। মানগুলি গড় ± SD হিসাবে উপস্থাপিত হয়েছিল

চিত্র 4 এইচএএমএসসিগুলি প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনগুলি IL-17A, IFN-, TNF, IL-6, IL-2, এবং প্রদাহ-বিরোধী সাইটোকাইনগুলি IL-10 এবং IL-কে নিয়ন্ত্রণ করে ভিভোতে -4 (n=5)। মানগুলি গড় ± SD হিসাবে উপস্থাপিত হয়েছিল

এজিভিএইচডি ইঁদুরে এইচএএমএসসি চিকিত্সার পরে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা বিকল্প

16S rRNA সিকোয়েন্সিংটি ইঁদুরের বিভিন্ন গ্রুপ থেকে বিচ্ছিন্ন মল ব্যাকটেরিয়া ডিএনএতে সঞ্চালিত হয়েছিল। OUT, Chao1 এবং শ্যানন সূচক সহ -বৈচিত্র্য সূচকগুলি একই রকমের প্রবণতা প্রকাশ করেছে, এবং hAMSC-এর চিকিত্সা ইঁদুরগুলি AGVHD গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে উচ্চ বৈচিত্র্য সহ একটি মাইক্রোবায়োটা আশ্রয় দিয়েছে (চিত্র 6A)। প্রধান সমন্বয় বিশ্লেষণ (পিসিওএ) আন ওয়েটেড-ইউনিফ্র্যাক দূরত্ব, ম্যানহাটান দূরত্ব এবং ব্রা-কার্টিস মেট্রিক দূরত্বের উপর ভিত্তি করে, দুটি গ্রুপের প্লটে বিচ্ছুরিত ডেটা পয়েন্ট পাওয়া যায়, যদিও পার্থক্য উল্লেখযোগ্য ছিল না (চিত্র 6বি)। পরবর্তীকালে, আমরা দুটি গ্রুপের মধ্যে সম্ভাব্য রচনা পার্থক্য আরও তদন্ত করতে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার ল্যান্ডস্কেপ মূল্যায়ন করেছি। মোট 773টি ওটিইউ গণনা করা হয়েছিল, এবং এইচএএমএসসি গ্রুপের এজিভিএইচডি গ্রুপের তুলনায় বেশি ওটিইউ ছিল (চিত্র 6C)। ফাইলাম স্তরে ব্যাকটেরিয়া গঠনের ক্ষেত্রে, Firmicutes এবং Bacteroidetes ছিল দুটি সর্বাধিক প্রভাবশালী ফাইলাম (চিত্র 6D)। আমরা দুটি গ্রুপের মধ্যে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার বিশ্লেষণের জন্য একটি তুলনা হিটম্যাপও সংগঠিত করেছি (চিত্র 6E)। ওডোরিব্যাক্টর এবং রুমিনোকোকাস{11}} এর জেনাস এইচএএমএসসি গ্রুপে তুলনামূলকভাবে উচ্চ প্রাচুর্য প্রদর্শন করে, যা অন্ত্রের হোমিওস্টেসিস বজায় রাখার জন্য গুরুত্বপূর্ণ জীবাণু (চিত্র 6এফ, জি)। এইচএএমএসসি চিকিত্সার মাধ্যমে কোন ব্যাকটেরিয়াটি পরিবর্তিত হয়েছিল তা নিশ্চিত করতে এবং ফলস্বরূপ AGVHD-এর বিরুদ্ধে রোগের অগ্রগতিকে প্রভাবিত করেছিল, আমরা প্রভাব আকারের (LEfSe) রৈখিক বৈষম্য বিশ্লেষণ (এলডিএ) ব্যবহার করে উচ্চমাত্রিক শ্রেণি তুলনা করেছি যা ব্যাকটেরিয়া সম্প্রদায়ের মধ্যে প্রাধান্যের মধ্যে চিহ্নিত পার্থক্য সনাক্ত করেছে। দুই দল। (চিত্র 6H, I), স্ট্রেপ্টোকক্কাসি (পরিবার এবং স্ট্রেপ্টোকক্কাস প্রজাতি), পালুডিব্যাক্টেরেসি, F0058 এবং ডেলফ্টিয়া হল প্রধান ধরনের ব্যাকটেরিয়া যা এজিভিএইচডি গ্রুপে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা ডিসবায়োসিসে অবদান রাখে। তা সত্ত্বেও, উপকারী ব্যাকটেরিয়া Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, এবং Clostridia (class and order Clostridiales) hAMSCs গোষ্ঠীতে একটি আপেক্ষিক সমৃদ্ধি প্রদর্শন করেছে, যা hAMSC-এর মধ্যস্থতা উপশমের সাথে যুক্ত হতে পারে। সম্মিলিতভাবে, HAMSCs প্রশাসনের পরে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার বৈচিত্র্য এবং সংমিশ্রণ উন্নত হয়েছিল এবং শরীরের জন্য উপকারী একটি সামগ্রিক প্রবণতায় স্থানান্তরিত হয়েছিল।

cistanche tubulosa- ইমিউন সিস্টেম উন্নত

এইচএএমএসসিগুলি অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং অন্ত্রের অনাক্রম্যতার মধ্যে মিথস্ক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে

অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং অন্ত্রের মিউকোসাল বাধার মধ্যে সম্ভাব্য সম্পর্ক বোঝার জন্য, জেনাস স্তরে টিজে এবং অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক স্পিয়ারম্যানের পারস্পরিক সম্পর্ক বিশ্লেষণ দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। চিত্র 7-এ দেখানো হয়েছে, ZO-1 এবং উপকারী ব্যাকটেরিয়া, Ruminococcaceae_UCG.014, Muribaculum, Ruminococcus_1, এবং Ruminiclostridium_9 এর মধ্যে একটি ইতিবাচক সম্পর্ক ছিল। উপকারী ব্যাকটেরিয়ার আপেক্ষিক প্রাচুর্য, রোজবুরিয়া, ওডোরিব্যাক্টর, রুমিনোকোকাস_1, এবং রুমিনোকক্কাসি_UCG.014 অক্লুডিনের সাথে নাটকীয়ভাবে ইতিবাচক সম্পর্ক দেখিয়েছে। আমরা পরবর্তীতে স্পিয়ারম্যানের র্যাঙ্ক পারস্পরিক সম্পর্ক পদ্ধতি (চিত্র 7) দ্বারা অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং অন্ত্রের প্রতিরক্ষা বাধার মধ্যে একটি পারস্পরিক সম্পর্ক বিশ্লেষণ করেছি। আমরা লক্ষ্য করেছি যে রোজবুরিয়া, মুরিবাকুলাম, এবং রুমিনোকোকাস _1, CD3 +CD4+টি কোষের শতাংশের সাথে নেতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত। উপরন্তু, উপকারী ব্যাকটেরিয়া বৃদ্ধি, রুমিনোকোকাস_1 এবং রুমিনিক্লোস্ট্রিডিয়াম _9, ট্রেগসের শতাংশের সাথে ইতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত যেখানে IL-17-এর সাথে নেতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত। ল্যাকটোব্যাসিলাস এবং ক্যান্ডিডেটাস_আর্থোমিটাসের প্রাচুর্য IFN-এর সাথে নেতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত ছিল। মুরিবাকুলাম এবং IL-2 এর প্রাচুর্যের মধ্যে একটি নেতিবাচক সম্পর্ক ছিল। ক্যান্ডিডেটাস_স্যাকারিমোনাসের প্রাচুর্য বৃদ্ধি এবং এসচেরিচিয়াতে হ্রাস। শিগেলার প্রাচুর্য ইতিবাচকভাবে IL-10 স্তরের সাথে সম্পর্কযুক্ত ছিল (চিত্র 7)। পারস্পরিক সম্পর্ক বিশ্লেষণের ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে এইচএএমএসসিগুলি হোস্টের প্রদাহজনক পরিবেশকে উন্নত করে এবং অন্ত্রের হোমিওস্টেসিস নিয়ন্ত্রিত করে যা অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা মড্যুলেশনের সাথে যুক্ত হতে পারে এবং ফলস্বরূপ AGVHD প্রতিরোধ করে।

Fig. 5 hAMSCs এজিভিএইচডি ইঁদুরের অন্ত্রের বাধা কর্মহীনতার উন্নতি করেছে। (A) GFP-লেবেলযুক্ত hAMSC গুলি অন্ত্রে অনুপ্রবেশ করেছে। (B) অন্ত্রের H&E স্টেনিং (400×) এবং হিস্টোলজি স্কোর (টিস্যু গঠন ধ্বংস এবং লিম্ফোসাইট অনুপ্রবেশের উপর ভিত্তি করে) এর প্রতিনিধি মাইক্রোস্কোপিক ছবি (n=4)। (C) অন্ত্রের ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রির (400×) প্রতিনিধিত্বমূলক মাইক্রোস্কোপিক ছবি এবং CD45 পজিটিভ এলাকার অনুপাত (n=4)। (D) অন্ত্রের ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রির (400×) প্রতিনিধিত্বমূলক মাইক্রোস্কোপিক ছবি এবং ZO-1 পজিটিভ এলাকার অনুপাত (n=4)। (E) ZO-1 এবং Occludin (n=3) এর mRNA এক্সপ্রেশন লেভেল। (F) D-LA এবং DAO এর প্লাজমা স্তর (n=4)।মানগুলি গড় ± SD হিসাবে উপস্থাপিত হয়েছিল

আলোচনা

উন্নত মাইক্রোবিয়াল বিশ্লেষণ হোস্ট এবং অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার মধ্যে জটিল মিথস্ক্রিয়াগুলিতে নতুন অন্তর্দৃষ্টি প্রদান করেছে [18]। অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা অ্যালো-এইচএসসিটি-এর পরে পরিবর্তন করা যেতে পারে এবং এটি এজিভিএইচডির সাথে ঘনিষ্ঠভাবে জড়িত, পরামর্শ দেয় যে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এজিভিএইচডি চিকিত্সার জন্য একটি নতুন লক্ষ্য হতে পারে [5]। আমাদের সাম্প্রতিক অধ্যয়ন সহ অসংখ্য অধ্যয়ন এজিভিএইচডি [15, 19, 20] এ MSC-এর থেরাপিউটিক্যাল প্রভাব অন্বেষণ এবং নিশ্চিত করেছে। যাইহোক, এই সময়ের মধ্যে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার উপর প্রভাব অস্পষ্ট থেকে যায়। এই সমীক্ষায়, আমরা এজিভিএইচডিতে এইচএএমএসসিগুলির প্রভাব এবং ভিভোতে এর সম্ভাব্য প্রক্রিয়াগুলি তদন্ত করেছি। পূর্ববর্তী অধ্যয়নগুলির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ [15, 21-23], আমাদের ফলাফলগুলি ইঙ্গিত করে যে এইচএএমএসসিগুলি ইঁদুরের এজিভিএইচডি-তে একটি অনুকূল প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব ফেলে, যেমনটি এজিভিএইচডি উপসর্গ এবং দীর্ঘায়িত বেঁচে থাকার প্রমাণ। আমরা আরও দেখিয়েছি যে এইচএএমএসসিগুলি এজিভিএইচডিতে ট্রেগস জেনারেশন বাড়ানোর সময় দাতা টি কোষের প্রসারণ হ্রাস করার মাধ্যমে একটি ইমিউনোসপ্রেসিভ প্রভাব প্রদর্শন করেছে। এদিকে, hAMSC গুলি প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনগুলিকে হ্রাস করতে পারে এবং ভিভোতে প্রদাহ-বিরোধী সাইটোকাইনগুলিকে আপগ্রেগুলেট করতে পারে, যাতে প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াগুলিকে বাধা দেওয়া যায়। অন্ত্রের বাধা, অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষগুলির একটি মনোলেয়ার দ্বারা গঠিত একটি ঘন কাঠামো, এটির অখণ্ডতা বজায় রাখে এবং একটি সুস্থ অবস্থায় লুমিনাল মাইক্রোবায়োটার স্থানান্তরকে বাধা দেয় [24]। অ্যালো-এইচএসসিটি চলাকালীন, কন্ডিশনার রেজিমেন্টগুলি অন্ত্রের বাধাকে ক্ষতিগ্রস্ত করে, যা AGVHD-এর বিকাশের প্রাথমিক পদক্ষেপ, কারণ এটি ব্যাকটেরিয়াকে বাধা জুড়ে স্থানান্তরিত করার অনুমতি দেয় এবং অন্ত্রের ইমিউন হোমিওস্ট্যাসিসকে ব্যাহত করে [24, 25]। জমা হওয়া প্রমাণগুলি দেখায় যে MSC গুলি টিস্যু মেরামতের ক্ষমতা রাখে, যা কোলাইটিস ইঁদুরগুলিতে অন্ত্রের বাধা অখণ্ডতা মেরামত করতে প্রমাণিত হয়েছিল [26]। ZO-1 এবং Occludin সহ টাইট জংশন প্রোটিনগুলি অন্ত্রের বাধা ফাংশন এবং প্রতিবন্ধী অন্ত্রের বাধার উপর অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার স্থানান্তর প্রদাহকে প্ররোচিত করে [27] একটি অপরিহার্য ভূমিকা রাখে। D-LA অন্ত্রের ব্যাকটেরিয়া থেকে উদ্ভূত, এবং DAO প্রধানত অন্ত্রের শ্লেষ্মায় কেন্দ্রীভূত হয়। এইভাবে, প্লাজমা ডি-এলএ এবং ডিএও-এর উচ্চ ঘনত্ব আংশিকভাবে অন্ত্রের ব্যাপ্তিযোগ্যতা এবং অন্ত্রের বাধা ফাংশনের পরিবর্তনগুলি প্রতিফলিত করতে পারে [২৮]। বর্তমানে, আমরা দেখতে পেয়েছি যে এইচএএমএসসি প্রশাসনের পরে টিজে-এর প্রকাশের মাত্রা নাটকীয়ভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে, যেখানে ডি-এলএ এবং ডিএও-র প্লাজমা স্তর উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, যা ইঙ্গিত করে যে এইচএএমএসসিগুলি অন্ত্রের বাধা কর্মহীনতা এবং পুনরুদ্ধার অন্ত্রের ব্যাপ্তিযোগ্যতাকে প্রশমিত করতে পারে। অন্ত্র হল AGVHD দ্বারা সবচেয়ে মারাত্মকভাবে প্রভাবিত অঙ্গগুলির মধ্যে একটি এবং গবেষণায় হাইলাইট করা হয়েছে যে ব্যাকটেরিয়া, বিশেষ করে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা AGVHD প্যাথোজেনেসিস এবং বিকাশে কেন্দ্রীয় ভূমিকা পালন করে [5, 6]। পূর্ববর্তী গবেষণায় যেমন রিপোর্ট করা হয়েছে, অ্যালো এইচএসসিটি রোগীদের ব্যাকটেরিয়া বৈচিত্র্যের ক্ষতি এজিভিএইচডি [২৯, ৩০] থেকে বর্ধিত মৃত্যুর সাথে যুক্ত ছিল। সুবিধাবাদী প্যাথোজেন এন্টারোকোকাস এবং প্রোটিওব্যাকটেরিয়া দ্বারা মল আধিপত্য এছাড়াও বৃদ্ধি GVHD [6, 31] এর সাথে যুক্ত করা হয়েছে। গত কয়েক দশক ধরে, প্রদাহজনিত রোগে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং MSC-এর চিকিত্সার মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্কের দিকে বর্ধিত মনোযোগ দেওয়া হয়েছে। MSC গুলি রিউমাটয়েড আর্থ্রাইটিস, সেপসিস এবং প্রদাহজনক অন্ত্রের রোগ [32-34] এর অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা ডিসবায়োসিসকে উপশম করতে প্রমাণিত হয়েছে। এইচএএমএসসিগুলি এজিভিএইচডিকে উন্নত করে এমন প্রক্রিয়াটি আরও অন্বেষণ করতে, আমরা অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার উপর এইচএএমএসসিগুলির প্রভাব তদন্ত করেছি। বর্তমান গবেষণায়, hAMSCs প্রশাসন কোন প্রতিস্থাপনের তুলনায় জীবাণু সম্প্রদায়ের বৈচিত্র্যের উপর যথেষ্ট প্রভাব দেখিয়েছে, যা ইঙ্গিত করে যে hAMSCs চিকিত্সার পরে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার প্রাচুর্য পরিবর্তন করা যেতে পারে। যাইহোক, -বৈচিত্র্য পরিমাপের মধ্যে কোন উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না, সম্ভবত উভয় গ্রুপের ছোট নমুনার আকার বা এইচএএমএসসি-এর অপর্যাপ্ত চিকিত্সা চক্রের কারণে। জেনাস স্তরে তুলনামূলক হিটম্যাপ ব্যবহার করে বিশ্লেষণে ইঙ্গিত দেওয়া হয়েছে যে এইচএএমএএসসি প্রশাসন অন্ত্রের উদ্ভিদে উপকারী ব্যাকটেরিয়া, ওডোরিব্যাক্টর এবং রুমিনোকোকাস_1 এর প্রাচুর্য বাড়িয়েছে, যা প্রদাহবিরোধী বৈশিষ্ট্য সহ শর্ট-চেইন ফ্যাটি অ্যাসিড (এসসিএফএ) উত্পাদনকারী ছিল [৩৫] , 36]। hAMSCs ট্রান্সপ্লান্টেশনের মাধ্যমে মধ্যস্থতাকারী অন্তর্নিহিত প্রভাবশালী ব্যাকটেরিয়া সনাক্ত করতে, দুটি গ্রুপের মধ্যে LEfSe বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। AGVHD গোষ্ঠীর তুলনায়, hAMSC-এর চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে প্রদাহ-বিরোধী প্রভাব সম্পর্কিত কিছু উপকারী জীবাণুর প্রাচুর্যকে বাড়িয়ে তোলে, যেমন Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, Clostridia, যেগুলিকে মাইক্রোবিটাস উৎপাদনের জন্য উপকারী বলে বর্ণনা করা হয়েছিল। 37-42]। অতএব, আমাদের পর্যবেক্ষণগুলি ইঙ্গিত করেছে যে এইচএএমএসসি প্রশাসনের পরে, অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা ডিসবায়োসিস উন্নত করা হয়েছিল, যা উন্নত বৈচিত্র্য এবং উপকারী ব্যাকটেরিয়ার বর্ধিত আপেক্ষিক প্রাচুর্য দ্বারা প্রকাশিত হয়।

চিত্র 6 এজিভিএইচডি ইঁদুরে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা পরিবর্তন। (ক) -বৈচিত্র্যের তুলনা। (খ) -বৈচিত্র্যের তুলনা। (C) OTU-এর ভেন ডায়াগ্রাম। (D) ফাইলাম স্তরে আপেক্ষিক ব্যাকটেরিয়ার প্রাচুর্য। (ঙ) জিনাস স্তরে প্রজাতির প্রাচুর্যের তাপম্যাপ। (চ) জিনাস স্তরে ওডোরিব্যাক্টরের আপেক্ষিক প্রাচুর্য। (G) জিনাস স্তরে রুমিনোকোকাস_1 এর আপেক্ষিক প্রাচুর্য। (H) LEfSe বিশ্লেষণের উপর ভিত্তি করে Cladogram। (I) AGVHD এবং hAMSCs গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্যগতভাবে প্রচুর বৈশিষ্ট্যগুলি থেকে গণনা করা এলডিএ স্কোর। (AI) n=3 গ্রুপ প্রতি ইঁদুর। মানগুলি গড় ± SD হিসাবে উপস্থাপিত হয়েছিল

aGVHD হল একটি জটিল প্রদাহজনক প্রক্রিয়া যা অন্ত্রের বাধার অখণ্ডতা ধ্বংসের মাধ্যমে শুরু হয় এবং তারপরে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং তাদের উপাদানগুলির স্থানান্তরিত হয়। অ্যান্টিজেন-উপস্থাপক কোষ দ্বারা ক্ষতি-সম্পর্কিত আণবিক নিদর্শন এবং প্যাথোজেন-সম্পর্কিত আণবিক নিদর্শনগুলির স্বীকৃতি অন্ত্রের বাধা ক্ষতিকে বাড়িয়ে তুলতে এবং এজিভিএইচডি [24, 43] এর বিকাশকে উন্নীত করতে টি কোষ এবং সাইটোকাইন ঝড়ের সক্রিয়করণ সহ প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি প্রতিক্রিয়া প্ররোচিত করে। অন্যদিকে, অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং মাইক্রোবায়োটা থেকে প্রাপ্ত মেটাবোলাইট যেমন এসসিএফএগুলি অন্ত্রের বাধা অখণ্ডতা এবং অন্ত্রের হোমিওস্ট্যাসিস বজায় রাখার পাশাপাশি মিউকোসাল ইমিউন সিস্টেমকে গঠন করতে এবং জীবাণু উপাদান এবং বিপাকীয় উপাদানগুলির সাথে হোস্ট প্রতিরক্ষার ভারসাম্য বজায় রাখতে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। . অন্ত্রের বাধায় হোস্ট এবং অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার মধ্যে আন্তঃযোগাযোগ মিউকোসাল এবং সিস্টেমিক ইমিউন প্রতিক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে এবং প্যাথলজিকাল অবস্থায়, একটি GVHD [6, 45, 46] হতে পারে। এটি পরামর্শ দিয়েছে যে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা টাইট জংশন প্রোটিনের প্রকাশের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত [47]। বর্তমান গবেষণায় দেখা গেছে যে TJs ZO-1 এবং Occludin-এর mRNA এক্সপ্রেশন ক্ষতিকারক ব্যাকটেরিয়ার আপেক্ষিক প্রাচুর্যের সাথে নেতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত যেখানে উপকারী ব্যাকটেরিয়ার সাথে একটি ইতিবাচক সম্পর্ক ছিল, যা নির্দেশ করে যে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা অখণ্ডতা বজায় রাখার জন্য গুরুত্বপূর্ণ ছিল। অন্ত্রের বাধা। অতিরিক্তভাবে, অন্ত্রের অনাক্রম্য বাধা বজায় রাখতে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাও খুব গুরুত্বপূর্ণ [47]। আমরা লক্ষ্য করেছি যে কিছু উপকারী ব্যাকটেরিয়া CD3+CD4+টি কোষের শতাংশের সাথে নেতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত, কিন্তু ট্রেগসের শতাংশের সাথে ইতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত। এখানে, আমরা প্রকাশ করেছি যে উপকারী ব্যাকটেরিয়া, বেশিরভাগ এসসিএফএ প্রযোজক, নেতিবাচকভাবে প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনের সাথে সম্পর্কযুক্ত কিন্তু ইতিবাচকভাবে অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনের সাথে সম্পর্কযুক্ত, যখন ক্ষতিকারক ব্যাকটেরিয়া বিপরীতভাবে সম্পর্কযুক্ত। সংক্ষেপে, চিকিত্সার মধ্যে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার উল্লেখযোগ্য পার্থক্য অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং অন্ত্রের বাধা, অনাক্রম্যতার মধ্যে মিথস্ক্রিয়াগুলির সম্পূর্ণ চিত্রের পরামর্শ দেয়। আমাদের পরীক্ষায় আলোচনা করার মতো বেশ কয়েকটি সীমাবদ্ধতা ছিল। প্রথমত, যদিও আমাদের অধ্যয়নটি এজিভিএইচডি-তে অনাক্রম্যতা, অন্ত্রের বাধা এবং অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার উপর এইচএএমএসসি-এর প্রভাবগুলি অন্বেষণ করেছে, তবুও আরও অধ্যয়নে অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াটি যাচাই করা দরকার। দ্বিতীয়ত, অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা, অন্ত্রের বাধা এবং অনাক্রম্যতার মধ্যে কার্যকারণ সম্পর্ককে মোকাবেলা করার জন্য অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা হ্রাস এবং মল মাইক্রোবায়োটা প্রতিস্থাপন প্রয়োজন। তৃতীয়ত, মাইক্রোবায়োটা থেকে প্রাপ্ত এসসিএফএ এবং অন্যান্য বিপাকগুলিতে এইচএএমএসসিগুলির প্রভাব তদন্ত করে আরও গবেষণা নিশ্চিত করা হয়েছে। উপসংহারে, আমাদের গবেষণায় পরামর্শ দেওয়া হয়েছে যে এইচএএমএসসিগুলি অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা স্বাভাবিককরণের প্রচার করে এবং অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং অন্ত্রের বাধা, অনাক্রম্যতার মধ্যে মিথস্ক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে এজিভিএইচডি হ্রাস করেছে। এজিভিএইচডি-তে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং অন্ত্রের অনাক্রম্যতা নিয়ন্ত্রণকারী এইচএএমএসসিগুলির প্রভাব এবং অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াগুলিকে সংজ্ঞায়িত করার জন্য আমাদের অধ্যয়নটি প্রথম পদ্ধতিগতভাবে।

চিত্র 7 অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং অন্ত্রের অনাক্রম্যতার মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক বিশ্লেষণ। স্পিয়ারম্যানের পারস্পরিক সম্পর্ক বিশ্লেষণ 15টি ভিন্ন অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার আপেক্ষিক প্রাচুর্য (জেনাস স্তরে) এবং TJs-এর mRNA এক্সপ্রেশন স্তর, রোগ প্রতিরোধক কোষের শতাংশের পাশাপাশি দুটি গ্রুপের মধ্যে অন্ত্রে সাইটোকাইনের ঘনত্বের মধ্যে পরিচালিত হয়েছিল। স্পিয়ারম্যান r এর মান -0.5 (নীল) থেকে 0.5 (লাল) পর্যন্ত

তথ্যসূত্র

1. Schmid, C. (2021)। GVHD ছাড়া GVL-এর এক ধাপ কাছাকাছি। রক্ত, 137(19), 2565–2566। https://doi.org/10.1182/blood.2020010132

2. Chang, Y., Zhao, X., & Huang, X. (2018)। গ্রাফ্ট বনাম হোস্ট ডিজিজকে বাড়িয়ে না দিয়ে অ্যান্টি-লিউকেমিয়া প্রভাব বাড়ানো ও সংরক্ষণের কৌশল। ইমিউনোলজিতে ফ্রন্টিয়ার্স, 9, 3041। https:// doi.org/10.3389/fmmu.2018.03041

3. Zhu, W., Winter, MG, Byndloss, MX, Spiga, L., Duerkop, BA, Hughes, ER, Büttner, L., de Lima Romão, E., Behrendt, CL, Lopez, CA, Sifuentes- Dominguez, L., Huf-Hardy, K., Wilson, RP, Gillis, CC, Tükel, Ç., Koh, AY, Burstein, E., Hooper, LV, Bäumler, AJ, & Winter, SE (2018)। অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার নির্ভুল সম্পাদনা কোলাইটিসকে কমিয়ে দেয়। প্রকৃতি, 553(7687), 208-211। https://doi.org/10.1038/nature25172

4. Zhao, L., Zhang, F., Ding, X., Wu, G., Lam, YY, Wang, X., Fu, H., Xue, X., Lu, C., Ma, J. , Yu, L., Xu, C., Ren, Z., Xu, Y., Xu, S., Shen, H., Zhu, X., Shi, Y., Shen, Q., … Zhang, C (2018)। অন্ত্রের ব্যাকটেরিয়া বেছে বেছে ডায়েটারি ফাইবার দ্বারা প্রচারিত টাইপ 2 ডায়াবেটিস উপশম করে। বিজ্ঞান (নিউ ইয়র্ক, এনওয়াই), 359(6380), 1151–1156। https:// doi.org/10.1126/science.aao5774

5. Shono, Y., & van den Brink, MRM (2018)। অ্যালোজেনিক হেমাটোপয়েটিক স্টেম সেল ট্রান্সপ্লান্টেশনে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার আঘাত। প্রকৃতি পর্যালোচনা. কর্কট, 18(5), 283-295। https://doi.org/10.1038/ nrc.2018.10

6. Stafas, A., Burgos da Silva, M., & van den Brink, MRM (2017)। অ্যালোজেনিক হেমাটোপয়েটিক সেল ট্রান্সপ্ল্যান্ট এবং গ্রাফ্ট-বনাম-হোস্ট ডিজিজে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা। রক্ত, 129(8), 927-933। https://doi.org/10.1182/blood-2016-09-691394

7. Wu, K., Yuan, Y., Yu, H., Dai, X., Wang, S., Sun, Z., Wang, F., Fei, H., Lin, Q., Jiang, H ., এবং চেন, টি. (2020)। অন্ত্রের মাইক্রোবিয়াল মেটাবোলাইট ট্রাইমেথাইলামাইন এন-অক্সাইড ইঁদুরের মধ্যে M1 ম্যাক্রোফেজ পোলারাইজেশন প্ররোচিত করে GVHD কে বাড়িয়ে তোলে। রক্ত, 136(4), 501-515। https://doi.org/10.1182/blood.2019003990

8. Mathewson, ND, Jenq, R., Mathew, AV, Koenigsknecht, M., Hanash, A., Toubai, T., Oravecz-Wilson, K., Wu, S., Sun, Y., Rossi, C ., ফুজিওয়ারা, এইচ., ব্যুন, জে., শোনো, ওয়াই., লিন্ডেম্যানস, সি., ক্যালাফোর, এম., শ্মিড্ট, টিএম, হোন্ডা, কে., ইয়াং, ভিবি, পেন্নাথুর, এস., … রেড্ডি, পি. (2016)। অন্ত্রের মাইক্রোবায়োম থেকে প্রাপ্ত বিপাকগুলি অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষের ক্ষতিকে সংশোধন করে এবং গ্রাফ্ট-বনাম-হোস্ট রোগ প্রশমিত করে। প্রকৃতি ইমিউনোলজি, 17(5), 505-513। https://doi.org/10.1038/ni.3400

9. ডেভ, জেআর, চান্দেকার, এসএস, বেহেরা, এস., দেশাই, কিউ, সালভে, পিএম, সাপকাল, এনবি, মাস্কে, এসটি, দেউলে, এএম, পোকারে, পিএস, পেজ, এম., জোগ, এ., চিভতে , PA, শ্রীবাস্তব, RK, & Tomar, GB (2022)। মানুষের জিঞ্জিভাল মেসেনকাইমাল স্টেম সেলগুলি তাদের বৃদ্ধি এবং ইমিউনোমোডুলেটরি বৈশিষ্ট্যগুলিকে দাতার বয়স থেকে স্বাধীনভাবে ধরে রাখে। বিজ্ঞান অগ্রগতি, 8(25), m6504. https://doi.org/10। 1126/sciadv.abm6504

10. Zhao, K., & Liu, Q. (2016)। হেমাটোপয়েটিক স্টেম সেল ট্রান্সপ্লান্টেশনে মেসেনকাইমাল স্ট্রোমাল কোষের ক্লিনিকাল প্রয়োগ। হেমাটোলজি অ্যান্ড অনকোলজি জার্নাল, 9(1), 46. https://doi.org/ 10.1186/s13045-016-0276-z

11. Liu, Q., Huang, Q., Wu, H., Zuo, G., Gu, H., Deng, K., & Xin, H. (2021)। মানব অ্যামনিয়ন থেকে প্রাপ্ত স্টেম সেলগুলির বৈশিষ্ট্য এবং থেরাপিউটিক সম্ভাবনা। ইন্টারন্যাশনাল জার্নাল অফ মলিকুলার সায়েন্সেস, 22(2), 970। https://doi.org/10.3390/ijms22020970

12. Li, J., Zhou, Z., Wen, J., Jiang, F., & Xia, Y. (2020)। মানুষের অ্যামনিওটিক মেসেনকাইমাল স্টেম সেল অন্তঃসত্ত্বা হাড়ের পুনর্জন্মকে উৎসাহিত করে। ফ্রন্টিয়ার্স ইন এন্ডোক্রিনোলজি, 11, 543623। https:// doi.org/10.3389/fendo.2020.543623

13. Díaz-Prado, S., Muiños-López, E., Hermida-Gómez, T., Cicione, C., Rendal-Vázquez, ME, Fuentes-Boquete, I., de Toro, FJ, Blanco, FJ ( 2011)। রিজেনারেটিভ মেডিসিনের জন্য স্টেম সেলের বিকল্প উৎস হিসেবে হিউম্যান অ্যামনিওটিক মেমব্রেন। পৃথকীকরণ; জৈবিক বৈচিত্রে গবেষণা, 81(3), 162-171। https:// doi.org/10.1016/j.dif.2011.01.005

14. Hong, J., Gao, Y., Song, J., Zhuo, W., Sun, H., & Ping, B. (2016)। মানুষের অ্যামনিওটিক মেসেনকাইমাল স্টেম সেল এবং মানুষের অস্থি মজ্জা মেসেনকাইমাল স্টেম সেলের মধ্যে জৈবিক বৈশিষ্ট্য এবং ইমিউনোসপ্রেসিভ কার্যকলাপের তুলনা। Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi, 24(3), 858–864। https:// doi.org/10.7534/j.issn।{8}}.2016.03.041

15. গাও, ওয়াই, লি, ডব্লিউ, বু, এক্স, জু, ওয়াই, কাই, এস, ঝং, জে, ডু, এম, সান, এইচ., হুয়াং, এল., হে, ওয়াই ., Hu, X., Liu, Q., Jin, H., Wang, Q., & Ping, B. (2021)। হিউম্যান অ্যামনিওটিক মেসেনকাইমাল স্টেম সেল ট্রেগ এবং টি ইফেক্টর কোষের ভারসাম্য নিয়ন্ত্রণ করে এজিভিএইচডিকে বাধা দেয়। প্রদাহ গবেষণা জার্নাল, 14, 3985–3999। https://doi.org/10.2147/ JIR.S323054

16. Cooke, KR, Kobzik, L., Martin, TR, Brewer, J., Delmonte, JJ, Crawford, JM, & Ferrara, JL (1996)। অস্থি মজ্জা প্রতিস্থাপনের পরে ইডিওপ্যাথিক নিউমোনিয়া সিন্ড্রোমের একটি পরীক্ষামূলক মডেল: I. ক্ষুদ্র এইচ অ্যান্টিজেন এবং এন্ডোটক্সিনের ভূমিকা। রক্ত, 88(8), 3230–3239।

17. ইয়ানেজ, আর., লামানা, এমএল, গার্সিয়া-কাস্ত্রো, জে., কলমেনেরো, আই., রামিরেজ, এম., এবং বুয়েরেন, জেএ (2006)। অ্যাডিপোজ টিস্যু থেকে প্রাপ্ত মেসেনকাইমাল স্টেম সেলগুলিতে ভিভো ইমিউনোসপ্রেসিভ বৈশিষ্ট্য রয়েছে যা গ্রাফ্ট-বনাম-হোস্ট রোগ নিয়ন্ত্রণের জন্য প্রযোজ্য। স্টেম সেল (ডেটন, ওহিও), 24(11), 2582–2591।

18 হুপার, এলভি, লিটম্যান, ডিআর, এবং ম্যাকফারসন, এজে (2012)। মাইক্রোবায়োটা এবং ইমিউন সিস্টেমের মধ্যে মিথস্ক্রিয়া। বিজ্ঞান (নিউ ইয়র্ক, এনওয়াই), 336(6086), 1268–1273। https://doi.org/10.1126/ science.1223490

19. কেলি, কে., এবং রাস্কো, জেইজে (2021)। গ্রাফ্ট বনাম হোস্ট রোগের চিকিত্সার জন্য মেসেনকাইমাল স্ট্রোমাল কোষ। ইমিউনোলজিতে ফ্রন্টিয়ার্স, 12, 761616। https://doi.org/10.3389/fmmu.2021.761616

20. Macías-Sánchez, MDM, Morata-Tarifa, C., Cuende, N., Cardesa-Gil, A., Cuesta-Casas, M. Á., Pascual-Cascon, MJ, Pascual, A., Martín-Calvo , সি., জুরাডো, এম., পেরেজ-সিমন, জেএ, এসপিগাডো, আই., গারজোন লোপেজ, এস., কারমোনা সানচেজ, জি., মাতা-আলকাজার-ক্যাবলেরো, আর., এবং সানচেজ-পার্নাউট, আর. (2022) ) স্টেরয়েড-প্রতিরোধী তীব্র এবং দীর্ঘস্থায়ী গ্রাফ্ট বনাম হোস্ট রোগের চিকিত্সার জন্য মেসেনকাইমাল স্ট্রোমাল কোষ: একটি মাল্টিসেন্টার সহানুভূতিশীল ব্যবহারের অভিজ্ঞতা। স্টেম সেল ট্রান্সলেশনাল মেডিসিন, 11(4), 343–355। https://doi.org/10.1093/ stcltm/szac003

21. Tago, Y., Kobayashi, C., Ogura, M., Wada, J., Yamaguchi, S., Yamaguchi, T., Hayashi, M., Nakaishi, T., Kubo, H., & Ueda, Y. (2021)। মানব অ্যামনিয়ন থেকে প্রাপ্ত মেসেনকাইমাল স্টেম সেলগুলি টি কোষ সক্রিয়করণ এবং বিস্তার রোধ করে জেনোজেনিক গ্রাফ্ট-বনাম-হোস্ট রোগকে কমিয়ে দেয়। Scientifc Reports, 11(1), 2406. https://doi. org/10.1038/s{{10}y

22. ইয়ামাহারা, কে., হারাদা, কে., ওহশিমা, এম., ইশিকানে, এস., ওহনিশি, এস., সুদা, এইচ., ওটানি, কে., তাগুচি, এ., সোমা, টি., ওগাওয়া, এইচ. ., Katsuragi, S., Yoshimatsu, J., Harada-Shiba, M., Kangawa, K., & Ikeda, T. (2014)। মানব অ্যামনিয়ন- এবং কোরিয়ন থেকে প্রাপ্ত মেসেনকাইমাল স্টেম সেলের অ্যাঞ্জিওজেনিক, সাইটোপ্রোটেকটিভ এবং ইমিউনোসপ্রেসিভ বৈশিষ্ট্যের তুলনা। PLOS One, 9(2), e88319। https:// doi.org/10.1371/journal.pone.0088319

23. ইয়ামাহারা, কে।, হামাদা, এ।, সোমা, টি।, ওকামোটো, আর।, ওকাদা, এম।, ইয়োশিহারা, এস।, ইয়োশিহারা, কে।, ইকেগেম, কে।, তামাকি, এইচ।, কায়দা, কে। ., Inoue, T., Ohsugi, Y., Nishikawa, H., Hayashi, H., Ito, YM, Iijima, H., Ohnishi, S., Hashimoto, D., Isoe, T., … Fujimori, Y (2019)। অ্যালোজেনিক হেমাটোপয়েটিক স্টেম সেল ট্রান্সপ্লান্টেশনের পর স্টেরয়েড-রিফ্র্যাক্টরি অ্যাকিউট গ্রাফ্ট-বনাম-হোস্ট রোগে আক্রান্ত রোগীদের মধ্যে অ্যামনিয়ন-প্রাপ্ত মেসেনকাইমাল স্টেম সেল (AM01) এর নিরাপত্তা এবং কার্যকারিতা: একটি ফেজ I/II জাপানি ট্রায়ালের জন্য একটি স্টাডি প্রোটোকল। বিএমজে ওপেন, 9(7), e26403। https://doi.org/10.1136/bmjop en-2018-026403

24. Lin, D., Hu, B., Li, P., Zhao, Y., Xu, Y., & Wu, D. (2021)। তীব্র GVHD-এ অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা এবং মাইক্রোবিয়াল বিপাকের ভূমিকা। পরীক্ষামূলক হেমাটোলজি অ্যান্ড অনকোলজি, 10(1), 49. https:// doi.org/10.1186/s40164-021-00240-3

25. ঘিমিরে, এস., ওয়েবার, ডি., মাভিন, ই., ওয়াং, এক্সএন, ডিকিনসন, এএম, এবং হলার, ই. (2017)। জিভিএইচডি এবং অন্যান্য এইচএসসিটি-সম্পর্কিত প্রধান জটিলতার প্যাথোফিজিওলজি। ইমিউনোলজিতে ফ্রন্টিয়ার্স, 8, 79। https://doi.org/10.3389/fmmu.2017.00079

26. Xu, J., Wang, X., Chen, J., Chen, S., Li, Z., Liu, H., Bai, Y., & Zhi, F. (2020)। ভ্রূণের স্টেম সেল থেকে প্রাপ্ত মেসেনকাইমাল স্টেম কোষ কোলন এপিথেলিয়াল অখণ্ডতা এবং কোলাইটিস ইঁদুরে সঞ্চালিত IGF-1কে উন্নীত করে পুনরুত্থান করে। থেরানোস্টিকস, 10(26), 12204– 12222। https://doi.org/10.7150/thno.47683

27. Zhao, Y., Huang, J., Li, T., Zhang, S., Wen, C., & Wang, L. (2022)। বারবেরিন অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা রিমডেলিং, TLR4 সিগন্যালিং দমন এবং এনএলআরপি3 প্রদাহজনিত বাধার জন্য কোলনিক বাধা মেরামতের মাধ্যমে এজিভিএইচডিকে উন্নত করে। জার্নাল অফ সেলুলার অ্যান্ড মলিকুলার মেডিসিন, 26(4), 1060-1070। https://doi.org/10। 1111/jcm.17158

28. Yuan, M., Lin, L., Cao, H., Zheng, W., Wu, L., Zuo, H., Tian, ​​X., & Song, H. (2022)। অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা HO-1/BMMSCs-এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবে অংশ নেয় লিভার প্রতিস্থাপনে ইঁদুরের স্টেটোটিক লিভার গ্রাফ্টস সহ। মাইক্রোবায়োলজিতে ফ্রন্টিয়ার্স, 13, 905567। https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.905567

29. Taur, Y., Jenq, RR, Perales, M., Littmann, ER, Morjaria, S., Ling, L., No, D., Gobourne, A., Viale, A., Dahi, PB, Ponce , DM, Barker, JN, Giralt, S., van den Brink, M., & Pamer, EG (2014)। অ্যালোজেনিক হেমাটোপয়েটিক স্টেম সেল ট্রান্সপ্লান্টেশনের পরে মৃত্যুহারে অন্ত্রের ট্র্যাক্টের ব্যাকটেরিয়া বৈচিত্র্যের প্রভাব। রক্ত, 124(7), 1174-1182। https://doi.org/10.1182/ রক্ত-2014-02-554725

30. Jenq, RR, Taur, Y., Devlin, SM, Ponce, DM, Goldberg, JD, Ahr, KF, Littmann, ER, Ling, L., Gobourne, AC, Miller, LC, Docampo, MD, Peled, JU, Arpaia, N., Cross, JR, Peets, TK, Lumish, MA, Shono, Y., Dudakov, JA, Poeck, H., … van den Brink, MRM (2015)। অন্ত্রের ব্লাউটিয়া গ্রাফ্ট-বনাম-হোস্ট রোগ থেকে মৃত্যুর হ্রাসের সাথে যুক্ত। ব্লাড অ্যান্ড ম্যারো ট্রান্সপ্লান্টেশনের জীববিজ্ঞান: ব্লাড অ্যান্ড ম্যারো ট্রান্সপ্লান্টেশনের জন্য আমেরিকান সোসাইটির জার্নাল, 21(8), 1373-1383। https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2015.04.016

31. Le Bastard, Q., Chevallier, P., & Montassier, E. (2021)। অ্যালোজেনিক হেমাটোপয়েটিক স্টেম সেল ট্রান্সপ্ল্যান্টেশনে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োম এবং তীব্র গ্রাফ্ট বনাম হোস্ট ডিজিজের সাথে সম্পর্কিত নির্দিষ্ট পরিবর্তন। ওয়ার্ল্ড জার্নাল অফ গ্যাস্ট্রোএন্টারোলজি, 27(45), 7792–7800। https:// doi.org/10.3748/wjg.v27.i45.7792

32. Li, X., Lu, C., Fan, D., Lu, X., Xia, Y., Zhao, H., Xu, H., Zhu, Y., Li, J., Liu, H ., এবং Xiao, C. (2020)। আরিল হাইড্রোকার্বন রিসেপ্টরের মাধ্যমে অনাক্রম্যতা এবং অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার মধ্যে মিথস্ক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে রিউমাটয়েড আর্থ্রাইটিসে মানুষের নাভির মেসেনকাইমাল স্টেম সেলগুলি থেরাপিউটিক সম্ভাব্যতা প্রদর্শন করে। কোষ এবং উন্নয়নমূলক জীববিজ্ঞানের ফ্রন্টিয়ার্স, 8, 131। https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00131

33. Sun, J., Ding, X., Liu, S., Duan, X., Liang, H., & Sun, T. (2020)। অ্যাডিপোজ থেকে প্রাপ্ত মেসেনকাইমাল স্টেম সেলগুলি ফুসফুসের তীব্র আঘাতকে কমিয়ে দেয় এবং সেপটিক ইঁদুরের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা উন্নত করে। স্টেম সেল রিসার্চ অ্যান্ড থেরাপি, 11(1), 384. https://doi.org/10.1186/ s13287-020-01902-5

34. Soontararak, S., Chow, L., Johnson, V., Coy, J., Wheat, W., Regan, D., & Dow, S. (2018)। মেসেনকাইমাল স্টেম সেল (এমএসসি) ইনডুসড প্লুরিপোটেন্ট স্টেম সেল (আইপিএসসি) থেকে প্রাপ্ত যা অন্ত্রের নিরাময় এবং মাউসের প্রদাহজনক আন্ত্রিক রোগের মডেলে মাইক্রোবায়োম স্বাভাবিককরণের প্রচারে অ্যাডিপোজ-ডরিয়েভড এমএসসির সমতুল্য। স্টেম সেল ট্রান্সলেশনাল মেডিসিন, 7(6), 456–467। https://doi.org/ 10.1002/sctm৷{9}}

35. Li, J., Zou, C., & Liu, Y. (2022)। সায়ানিডিন-3-ও-গ্লুকোসাইডের টার্গেটেড রেকটাল এবং কোলনিক ডেলিভারি দ্বারা ইঁদুরের ওভালবুমিন-প্ররোচিত খাদ্য অ্যালার্জির উন্নতি। খাবার (বাসেল, সুইজারল্যান্ড), 11(11), 1542। https://doi.org/10.3390/foods11111542

36. Maruyama, S., Matsuoka, T., Hosomi, K., Park, J., Nishimura, M., Murakami, H., Konishi, K., Miyachi, M., Kawashima, H., Mizuguchi, K. ., Kobayashi, T., Ooka, T., Yamagata, Z., & Kunisawa, J. (2022)। বার্লি খাওয়ার সাথে সম্পর্কিত অন্ত্রের ব্যাকটেরিয়ার উপর ভিত্তি করে ডিসলিপিডেমিয়ার ঘটনার শ্রেণীবিভাগ। পুষ্টিতে সীমান্ত, 9, 812469। https://doi.org/10.3389/fnut.2022.812469

37. Lee, SH, Park, H., Kang, CD, Choi, DH, Park, SC, Park, JM, Nam, S., Chae, GB, Lee, KY, Cho, H., & Lee, SJ ( 2022)। উচ্চ-ডোজ ইন্ট্রামাসকুলার ভিটামিন D3 সাপ্লিমেন্টেশন ক্লোস্ট্রিডিওয়েডস ডিফিসিল সংক্রমণে আক্রান্ত রোগীদের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটাকে প্রভাবিত করে। ফ্রন্টিয়ার্স ইন সেলুলার অ্যান্ড ইনফেকশন মাইক্রোবায়োলজি, 12, 904987। https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.904987

38. Meyer, RK, Lane, AI, Weninger, SN, Martinez, TM, Kangath, A., Laubitz, D., & Duca, FA (2022)। অলিগোফ্রাক্টোজ উচ্চ চর্বি খাওয়ানোর সময় পোস্টপ্র্যান্ডিয়াল শর্ট-চেইন ফ্যাটি অ্যাসিডের মাত্রা পুনরুদ্ধার করে। স্থূলতা (সিলভার স্প্রিং, মো.), 30(7), 1442-1452। https://doi.org/ 10.1002/oby.23456

39. Sang, J, Zhuang, D, Zhang, T, Wu, Q, Yu, J, Zhang, Z (2022) মানুষ এবং অমানবিক প্রাইমেটদের মধ্যে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা বৈচিত্র্যের অভিসারী এবং ভিন্ন বয়সের প্যাটার্নিং। এম-সিস্টেম: e151221। https:// doi.org/10.1128/msystems৷{6}}

40. Ge, X., He, X., Liu, J., Zeng, F., Chen, L., Xu, W., Shao, R., Huang, Y., Farag, MA, Capanoglu, E. , El-Seedi, HR, Zhao, C., & Liu, B. (2022)। বায়োকেমিক্যাল মেকানিজম এবং অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা মিথস্ক্রিয়া মাধ্যমে টাইপ 2 ডায়াবেটিসের উন্নতি, 8-গুয়ানিডিল লুটেওলিন কুইনোন-ক্রোমিয়াম সমন্বয়। জার্নাল অফ অ্যাডভান্সড রিসার্চ, S2090-1232(22), 121-129। https://doi.org/ 10.1016/j.jare.2022.06.003

41. Ding, Q., Cao, F., Lai, S., Zhuge, H., Chang, K., Valencak, TG, Liu, J., Li, S., & Ren, D. (2022)। ল্যাকটোব্যাসিলাস প্লান্টারাম ZY08 অন্ত্রের ফোরা হোমিওস্ট্যাসিস পুনরুদ্ধারের মাধ্যমে ইঁদুরের দীর্ঘস্থায়ী অ্যালকোহল-প্ররোচিত হেপাটিক স্টেটোসিস এবং লিভারের আঘাত থেকে মুক্তি দেয়। ফুড রিসার্চ ইন্টারন্যাশনাল (অটোয়া, ওন্ট।), 157, 111259। https://doi.org/10। 1016/j.foodres.2022.111259

42. Rees, NP, Shaheen, W., Quince, C., Tselepis, C., Horniblow, RD, শর্মা, N., Beggs, AD, Iqbal, TH, & Quraishi, MN (2022)। আলসারেটিভ কোলাইটিস রোগীদের মধ্যে মল মাইক্রোবায়োটা প্রতিস্থাপনের প্রতিক্রিয়ার দাতা এবং প্রাপক ভবিষ্যদ্বাণীমূলক বায়োমার্কারগুলির একটি পদ্ধতিগত পর্যালোচনা। EBioMedicine, 81, 104088. https:// doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104088

43. Li, A., Abraham, C., Wang, Y., & Zhang, Y. (2020)। তীব্র গ্রাফ্ট-বনাম-হোস্ট-রোগের মৌলিক জীববিজ্ঞানের নতুন অন্তর্দৃষ্টি। হেমাটোলজিকা, 105(11), 2540-2549। https://doi.org/10.3324/haematol। 2019।{12}}। Kayama, H., Okumura, R., & Takeda, K. (2020)। অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা, এপিথেলিয়া এবং ইমিউন কোষের মধ্যে মিথস্ক্রিয়া। ইমিউনোলজির বার্ষিক পর্যালোচনা, 38, 23-48। https://doi.org/ 10.1146/Annu rev-immunol-070119-115104

45. Schluter, J., Peled, JU, Taylor, BP, Markey, KA, Smith, M., Taur, Y., Niehus, R., Stafas, A., Dai, A., Fontana, E., Amoretti , LA, Wright, RJ, Morjaria, S., Fenelus, M., Pessin, MS, Chao, NJ, Lew, M., Bohannon, L., Bush, A., … Xavier, JB (2020)। অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা মানুষের অনাক্রম্য কোষের গতিশীলতার সাথে যুক্ত। প্রকৃতি, 588(7837), 303–307। https://doi.org/10.1038/ s41586-020-2971-8

46. ​​ইয়াং, জে, ইয়াং, এইচ, লি, ওয়াই (2022) অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা, মাইকোবিওটা এবং হোস্ট ইমিউনিটির মধ্যে ট্রিপল মিথস্ক্রিয়া। খাদ্য বিজ্ঞান এবং পুষ্টির সমালোচনামূলক পর্যালোচনা: 1-21। https://doi.org/10.1080/10408 398.2022.2094888

47. An, J., Liu, Y., Wang, Y., Fan, R., Hu, X., Zhang, F., Yang, J., & Chen, J. (2022)। অটোইমিউন রোগে অন্ত্রের মিউকোসাল বাধার ভূমিকা: একটি সম্ভাব্য লক্ষ্য। ইমিউনোলজিতে ফ্রন্টিয়ার্স, 13, 871713। https://doi.org/10.3389/fmmu.2022.871713