Farnesyltransferase ইনহিবিটর LNK-754 অ্যাক্সোনাল ডিস্ট্রোফি কমায় এবং ইঁদুরের অ্যামাইলয়েড প্যাথলজি কমায় পার্ট 3

ফলাফল

LNK‑754‑ দীর্ঘস্থায়ীভাবে চিকিত্সা করা 5XFAD ইঁদুরের মস্তিষ্কে অ্যামাইলয়েড প্লেকের বোঝা এবং টাউ হাইপারফসফোরিলেশন হ্রাস

LNK-754 এবং লোনাফারনিব হল ছোট-অণু FTI যেগুলি আগে ক্যান্সারের ক্লিনিকাল ট্রায়ালগুলিতে মানুষের মধ্যে পরীক্ষা করা হয়েছে এবং রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা অতিক্রম করতে পরিচিত [8, 9, 41, 42]। -সিনুক্লিন [৮] এবং টাউ অন্তর্ভুক্তি [৯] যথাক্রমে LNK-754 এবং লোনাফারনিব দ্বারা হ্রাস পেয়েছে, কিন্তু এডি-এর অ্যামাইলয়েড ফেনোটাইপের বিরুদ্ধে এখনও মূল্যায়ন করা হয়নি। এই গবেষণায়, আমরা 5XFAD মাউস মডেলে অ্যামাইলয়েড প্যাথলজিতে তাদের প্রভাবগুলি তদন্ত করেছি। 5XFAD ইঁদুর 2 মাস বয়স থেকে শুরু করে একটি আমানত বিকাশ করে [36, 37], এবং ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটগুলি অ্যামাইলয়েড জমার প্রাথমিক পর্যায়ে পরিলক্ষিত হয় [39, 43]।

রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা এবং অনাক্রম্যতা মানবদেহের দুটি অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ অঙ্গ, এবং তারা অবিচ্ছেদ্যভাবে সংযুক্ত। রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা হল মস্তিষ্ক এবং রক্তের মধ্যে একটি প্রতিরক্ষামূলক বাধা যা মস্তিষ্ককে বাইরে থেকে ক্ষতিকারক পদার্থ থেকে রক্ষা করে। রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা মানবদেহের জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ প্রক্রিয়া। তাহলে, রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা এবং অনাক্রম্যতার মধ্যে নির্দিষ্ট সম্পর্ক কী?

প্রথমত, রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা কিছু ক্ষতিকর ব্যাকটেরিয়া এবং ভাইরাসকে মস্তিষ্কে প্রবেশ করতে বাধা দিতে পারে, যার ফলে মস্তিষ্ককে ক্ষতির হাত থেকে রক্ষা করে। উপরন্তু, রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা নির্দিষ্ট পদার্থের ব্যাপ্তিযোগ্যতা নিয়ন্ত্রণ করতে পারে, তাদের মস্তিষ্কে সীমিত পরিমাণে প্রবেশ করতে দেয়। এটি স্নায়ুতন্ত্রের স্বাস্থ্য রক্ষার জন্য গুরুত্বপূর্ণ, কারণ মস্তিষ্কে প্রবেশ করা কিছু অভ্যন্তরীণ পদার্থের অত্যধিক স্নায়ু কোষের ক্ষতি হতে পারে।

একই সময়ে, অনাক্রম্যতা মস্তিষ্ককে রক্ষা করতেও ভূমিকা রাখতে পারে। মানবদেহের ইমিউন সিস্টেম প্যাথোজেন এবং ক্ষতিকারক পদার্থকে চিনতে পারে এবং তারপর তাদের আক্রমণ প্রতিহত করার জন্য সংশ্লিষ্ট অ্যান্টিবডি তৈরি করতে পারে, এইভাবে শরীরকে রোগ থেকে রক্ষা করে। যাইহোক, যখন কিছু প্যাথোজেন বা পদার্থ রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা অতিক্রম করে মস্তিষ্কে প্রবেশ করে, তখন ইমিউন সিস্টেম দ্রুত প্রতিক্রিয়া জানায় এবং তাদের আক্রমণ ও নির্মূল করার জন্য অ্যান্টিবডি তৈরি করে।

তাই রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা এবং রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা মানুষের স্বাস্থ্য রক্ষায় অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা ক্ষতিকারক পদার্থকে মস্তিষ্কে প্রবেশ করতে বাধা দেয়, যখন অনাক্রম্যতা প্যাথোজেন এবং অন্যান্য ক্ষতিকারক পদার্থগুলিকে সরিয়ে দেয় যা রক্ত-মস্তিষ্কের বাধাকে বাইপাস করে মস্তিষ্কে প্রবেশ করে। মস্তিষ্কের সুস্থ কার্যকারিতা নিশ্চিত করতে দুটি একসাথে কাজ করে।

সংক্ষেপে, রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা এবং অনাক্রম্যতা তাদের নিজ নিজ প্রক্রিয়ার মাধ্যমে মানব স্বাস্থ্যে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। শরীরের সামগ্রিক স্বাস্থ্য নিশ্চিত করার জন্য আমাদের তাদের স্বাস্থ্য রক্ষায় মনোযোগ দেওয়া উচিত। দেখা যায় আমাদের স্মৃতিশক্তি উন্নত করতে হবে। Cistanche deserticola উল্লেখযোগ্যভাবে স্মৃতিশক্তি উন্নত করতে পারে কারণ Cistanche deserticola হল একটি ঐতিহ্যবাহী চীনা ঔষধি উপাদান যার অনেকগুলি অনন্য প্রভাব রয়েছে, যার মধ্যে একটি হল স্মৃতিশক্তি উন্নত করা। কিমা করা মাংসের কার্যকারিতা অ্যাসিড, পলিস্যাকারাইড, ফ্ল্যাভোনয়েড ইত্যাদি সহ অনেক সক্রিয় উপাদান থেকে আসে৷ এই উপাদানগুলি বিভিন্ন উপায়ে মস্তিষ্কের স্বাস্থ্যকে উন্নীত করতে পারে৷

মেমরি উন্নত করতে সম্পূরকগুলি জানুন ক্লিক করুন

তাই, 5XFAD ইঁদুরের অ্যামাইলয়েড প্যাথলজির বিকাশের সাথে তাল মিলিয়ে চলার জন্য, আমরা 2 মাস বয়স থেকে শুরু করে যানবাহন, LNK-754 এবং লোনাফারনিব দিয়ে 3 মাস ধরে দীর্ঘস্থায়ীভাবে ইঁদুরের চিকিত্সা করেছি। LNK-754 এবং লোনাফারনিবকে 0.5% সোডিয়াম কার্বোক্সিমিথাইলসেলুলোজ এবং ip প্রতিদিন 1mg/kg ডোজ [8, 44] দিয়ে ইনজেকশনের একটি গাড়িতে দ্রবীভূত করা হয়েছিল।

আমরা প্রথমে A 42 এর জন্য ইমিউনোফ্লোরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি দ্বারা 5XFAD ইঁদুরে একটি প্লেকের বোঝার উপর দীর্ঘস্থায়ী LNK-754 এবং লোনাফারনিব চিকিত্সার প্রভাবগুলি নির্ধারণ করার চেষ্টা করেছি যা বিচ্ছুরিত এবং একত্রিত অ্যামাইলয়েড এবং টিয়াজিন রেড (TR) উভয়ই সনাক্ত করে, যা শুধুমাত্র ফাইব্রিলার প্লেক সনাক্ত করে। কোর (চিত্র 1A; চিত্র S1)। আমরা গাড়ি-চিকিত্সা নিয়ন্ত্রণের তুলনায় LNK754-চিকিত্সা করা ইঁদুরের কর্টিকাল মস্তিষ্কের অঞ্চলে আচ্ছাদিত এলাকায় উল্লেখযোগ্য হ্রাস পেয়েছি (চিত্র 1বি)। হিপ্পোক্যাম্পাসে, লোনাফার্নিব-চিকিত্সা করা ইঁদুরের তুলনায় LNK-754-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে আচ্ছাদিত এলাকা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে এবং যানবাহন-চিকিত্সার তুলনায় LNK-754 চিকিত্সা করা ইঁদুরের হ্রাসের প্রবণতা ছিল (চিত্র . 1 গ)।

লোনাফার্নিব-চিকিত্সা করা ইঁদুরের একটি 42 আচ্ছাদিত এলাকা কর্টেক্স বা হিপ্পোক্যাম্পাসের (চিত্র 1A, B) যানবাহন দ্বারা চিকিত্সা করা ইঁদুর থেকে উল্লেখযোগ্যভাবে আলাদা ছিল না। গাড়ির চিকিত্সার তুলনায় LNK-754 চিকিত্সার মাধ্যমে কর্টিকাল এবং হিপোক্যাম্পাল মস্তিষ্কের অঞ্চলে ফলকের আকার হ্রাস করা হয়েছিল; এই পার্থক্য হিপোক্যাম্পাসে পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ ছিল (চিত্র 1D, E; চিত্র S2A, B)। লোনাফারনিব এবং এলএনকে-754 চিকিত্সার মধ্যে ফলকের আকারের একটি উল্লেখযোগ্য পার্থক্য হিপোক্যাম্পাসেও পরিলক্ষিত হয়েছে (চিত্র 1D, ই; চিত্র S2A, B)।

কর্টিকাল বা হিপ্পোক্যাম্পাল মস্তিষ্কের অঞ্চলে যানবাহন-চিকিত্সা করা ইঁদুরের তুলনায় লোনাফারনিব-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে ফলকের আকার অপরিবর্তিত ছিল (চিত্র 1D, E; চিত্র। S2A, B)। টিআর স্টেনিং দ্বারা প্লেক নম্বর বিশ্লেষণ করে একটি ফলক বীজের পরিমাণ নির্ধারণ করা হয়েছিল। যানবাহন-চিকিত্সা করা ইঁদুরের তুলনায় (চিত্র S2C, D) LNK-754-এর কর্টেক্সে ফলকের সংখ্যা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, কিন্তু হিপোক্যাম্পাস নয়। PBS এবং গুয়ানিডিন-দ্রবণীয় হেমিব্রেইন হোমোজেনেটস (চিত্র 1F, G) এলিসা দ্বারা A 42 পরিমাপের মাধ্যমে হ্রাসকৃত ফলকের বোঝা নিশ্চিত করা হয়েছিল। আমাদের ইমিউনোফ্লোরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি ফলাফলের মতো, লোনাফার্নিব-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে গুয়ানিডিনে কম A 42 এবং PBS ভগ্নাংশের দিকে একটি প্রবণতা ছিল, যেখানে LNK-754 চিকিত্সার মাধ্যমে গুয়ানিডিন ভগ্নাংশে A 42 এর উল্লেখযোগ্যভাবে নিম্ন স্তর অর্জন করা হয়েছিল (চিত্র। 1. F, G)।

যেহেতু 5XFAD মাউস মডেলে যৌন-ভিত্তিক প্রভাবগুলি স্থির-স্থিতির APP স্তর এবং ফলকের বোঝার জন্য রিপোর্ট করা হয়েছে [45, 46], আমরা পুরুষ এবং মহিলা ইঁদুরের ইমিউনোব্লটগুলি সঞ্চালিত করেছি যা যানবাহন, LNK-754, বা লোনাফারনিবের সাথে আলাদাভাবে চিকিত্সা করা হয়। ট্রান্সজেনিক APP এক্সপ্রেশনের জন্য (চিত্র S3A)। ট্রান্সজেনিক APP স্তরগুলি APP 6E10 অ্যান্টিবডি দিয়ে ইমিউনোব্লট দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল, যা শুধুমাত্র মানুষের APPকে স্বীকৃতি দেয় এবং LNK-754, লোনাফারনিব, বা যানবাহন (চিত্র S3B-D) দিয়ে চিকিত্সা করা পুরুষ বা মহিলা ইঁদুরগুলিতে অপরিবর্তিত ছিল। AD-এর একটি দ্বিতীয় সংজ্ঞায়িত বৈশিষ্ট্য হল মস্তিষ্কে হাইপারফসফরিলেটেড টাউ অন্তর্ভুক্তির উপস্থিতি এবং ফলক জমার সাথে সাথে, অন্তঃসত্ত্বা মাউস টাউ 5XFAD ইঁদুরে হাইপারফসফোরাইলেড হয় [47, 48]।

অ্যামাইলয়েড মাউস মডেলে এফটিআই চিকিত্সা দ্বারা টাউ হাইপারফসফোরিলেশন প্রভাবিত হয়েছে কিনা তা নির্ধারণ করতে, সেরিন 404 (চিত্র 1 এইচ; চিত্র S3E) এ ফসফো-টাউ-এর জন্য ইমিউনোব্লট বিশ্লেষণ করা হয়েছিল, একটি এপিটোপ যা AD মস্তিষ্ক এবং 5XFAD ইঁদুরে হাইপারফসফোরাইলেড বলে পরিচিত। 47, 49]। এখানে, আমরা লোনাফারনিব এবং LNK-754 চিকিত্সা করা ইঁদুরের মস্তিষ্কে ফসফো-টাউ ser404 মাত্রা কম পেয়েছি (চিত্র 1I), যখন মোট টাউ স্তর অপরিবর্তিত ছিল (চিত্র 1J; চিত্র S3F)। সামগ্রিকভাবে আমাদের ফলাফলগুলি প্রকাশ করে যে FTIs-এর সাথে ফার্মাকোলজিক্যাল চিকিত্সার মাধ্যমে 5XFAD মাউস মডেলে অ্যামাইলয়েড প্লেক লোড এবং প্যাথোজেনিক টাউ ফসফোরিলেশন হ্রাস করা হয়েছে, যদিও LNK-754 চিকিত্সা লোনাফারনিবের তুলনায় যথেষ্ট বেশি শক্তিশালী ছিল।

LNK-754 এর সাথে দীর্ঘস্থায়ী চিকিত্সা 5XFAD ইঁদুরের মস্তিষ্কে প্রোটিন ফার্নেসাইলেশনকে বাধা দেয়

আইপি ইনজেকশন দ্বারা LNK-754 এবং লোনাফারনিবের সাথে FTase টার্গেট করা 5XFAD ইঁদুরের মস্তিষ্কে প্রোটিন ফার্নিসিলেশনকে বাধা দেয় তা নিশ্চিত করার জন্য, আমরা 5XFAD ইঁদুরের হেমিব্রেন হোমোজেনেটে বিভিন্ন FTase সাবস্ট্রেট এবং FTase নিরোধের ডাউনস্ট্রীম মার্কার মূল্যায়ন করেছি, LNK গাড়ির সাথে চিকিত্সা করা হয়েছে। ইমিউনোব্লট বিশ্লেষণের মাধ্যমে -754 বা লোনাফারনিব। আমরা প্রথমে প্রিলামিন এ বিশ্লেষণ করেছি, যা এফটিসেসকে বাধা দিলে জমা হয় [50]। যানবাহনের তুলনায় LNK-754 দিয়ে চিকিত্সা করা ইঁদুরের মস্তিষ্কে প্রিলামিন A-এর বৃদ্ধি পরিলক্ষিত হয়েছে, যখন লোনাফার্নিব-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে (চিত্র S4A, D) কোনো পরিবর্তন ঘটেনি। আমরা পরবর্তীতে এইচডিজে-2-এর দিকে তাকাই, একটি চ্যাপেরোন প্রোটিন যা এফটিআই চিকিত্সার পরে একটি ঊর্ধ্বমুখী গতিশীলতা পরিবর্তনের মধ্য দিয়ে যায় এবং এফটিএজ ইনহিবিশন [50] এর চিহ্নিতকারী হিসাবে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। প্রিলামিন এ-এর সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, এইচডিজে{10}}-এর একটি ধীর স্থানান্তরকারী ফর্ম এলএনকে-754-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে উপস্থিত ছিল কিন্তু লোনাফারনিব-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে নয় (চিত্র S4B, E)। যানবাহন বা লোনাফার্নিব-চিকিত্সা করা ইঁদুরের (চিত্র S4E) তুলনায় LNK754 ইঁদুরের মধ্যে HDJ-2-এর ধীর স্থানান্তরকারী প্রজাতির মধ্যে উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি পাওয়া গেছে।

উপরন্তু, ফার্নেসিলেশন রাসকে সক্রিয় করে, তাই আমরা এর ডাউনস্ট্রিম ইফেক্টর অণু ERK1 (P44/P42) (চিত্র S4C) এর ফসফোরিলেশনও পরিমাপ করেছি। যেখানে HDJ-2 এবং প্রিলামিন এ লোনাফার্নিব চিকিত্সার দ্বারা অপরিবর্তিত ছিল, সেখানে pERK1 হ্রাসের প্রবণতা লক্ষ্য করা গেছে (চিত্র S4F)। LNK-754 (চিত্র S4F) দিয়ে চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতেও perK1 হ্রাস পেয়েছে। আমাদের ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে 1mg/ kg LNK-754 মস্তিষ্কে FTase বাধা দেয়, তবে, lonafarnib কম কার্যকর ছিল। এটি পূর্বে দেখানো হিসাবে লোনাফারনিবের নিম্ন ক্ষমতা এবং IC50 এর কারণে হতে পারে [41, 51], বা সম্ভবত মস্তিষ্কের এক্সপোজার হ্রাস করা হয়েছে।

দীর্ঘস্থায়ীভাবে চিকিত্সা করা 5XFAD ইঁদুরের LNK-754-এ ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটে LAMP1 সঞ্চয় হ্রাস

সুস্থ নিউরনে, লাইসোসোমাল উপাদানগুলি দূরবর্তী নিউরাইটগুলিতে এন্ডোসোম এবং অটোফ্যাজিক অর্গানেলগুলিতে সরবরাহ করা হয়, যা নিউরোনাল সোমা [52, 53] এর দিকে বিপরীতমুখী পাচারের সময় অ্যাসিডিফাইড এবং পরিপক্ক হয়। অ্যামাইলয়েড ফলকগুলি এই প্রক্রিয়াটিকে ব্যাহত করে, যার ফলে ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটগুলি অকার্যকর অটোফ্যাজিক এবং এন্ডোলাইসোসোমাল অর্গানেলকে আটকে দেয়।

ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটস BACE1 এর অ্যাক্সোনাল পরিবহনকে অবরুদ্ধ করে, যার ফলে ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটস এবং এক্সট্রা সেলুলার প্লেক ডিপোজিশনের মধ্যে একটি প্রজন্মের দিকে পরিচালিত করে [16-18]। এফটিআইগুলি লাইসোসোমাল ফাংশন এবং মাইক্রোটিউবুলের স্থিতিশীলতা বাড়াতে পরিচিত, তাই এফটিআইগুলি কীভাবে ফলকের বোঝা হ্রাস করে তা আরও তদন্ত করার জন্য, আমরা বিশেষভাবে 5XFAD ইঁদুরের ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটগুলিতে ফোকাস করেছি।

ফলকের চারপাশে ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটের জমে থাকা পরিমাপ করার জন্য, আমরা লাইসোসোমাল-সম্পর্কিত মেমব্রেন প্রোটিন 1 (এলএএমপি 1) মূল্যায়ন করেছি, যা হেটেরোজেনাস এন্ডোলাইসোসোমাল এবং অটোফ্যাজিক অর্গানেলগুলির চিহ্নিতকারী। যানবাহন, LNK-754 এবং লোনাফারনিবের সাথে চিকিত্সা করা 5XFAD ইঁদুরের হিপ্পোক্যাম্পাল এবং কর্টিকাল মস্তিষ্কের টিস্যুগুলিকে LAMP1 এবং A 42 এর জন্য সহ-দাগ দেওয়া হয়েছিল এবং কনফোকাল ইমিউনোফ্লোরেসেন্স মাইক্রোস্কোপি করা হয়েছিল (চিত্র 2A, B)।
স্বাস্থ্যকর নিউরাইটস এবং সোমাসের ভেসিকেল থেকে LAMP1 ফ্লুরোসেন্স সংকেত দূর করার জন্য একটি থ্রেশহোল্ড সেট করা হয়েছিল বিশেষভাবে ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটগুলি বিশ্লেষণ করার জন্য। LNK-754 চিকিত্সা করা ইঁদুরের কর্টিকাল এবং হিপ্পোক্যাম্পাল মস্তিষ্কের অঞ্চলে LAMP1 আচ্ছাদিত এলাকা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 2C, D), যেখানে যানবাহনের চিকিত্সার তুলনায় লোনাফার্নিব-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে কোনও পার্থক্য পরিলক্ষিত হয়নি (চিত্র 2C, D) . অ্যামাইলয়েড ফলক জমা হওয়ার ফলে আশেপাশের নিউরাইটে, প্রধানত অ্যাক্সন এবং প্রেসিন্যাপ্টিক টার্মিনালগুলিতে ডিস্ট্রোফির বিকাশ শুরু হয়।

অনুরূপভাবে, ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটের উপর LNK-754 এবং লোনাফারনিবের প্রভাবগুলি ফলকের বোঝার উপর তাদের প্রভাবের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ (চিত্র 1)। ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটের উপর FTI চিকিত্সার প্রভাবের অতিরিক্ত বিশ্লেষণ LAMP1 আচ্ছাদিত এলাকা A 42 এর অনুপাতের পরিমাপ করে সঞ্চালিত হয়েছিল যে FTIগুলি ফলকের চারপাশে ডিস্ট্রফির আকারকে সীমাবদ্ধ করে কিনা তা নির্ধারণ করতে। LAMP1-এর অনুপাতের হ্রাস: যানবাহন ইঁদুরের তুলনায় LNK-754 চিকিত্সা করা ইঁদুরের জন্য A 42 পরিলক্ষিত হয়েছে, এবং LNK-754 এবং লোনাফারনিব চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে আলাদা ছিল (চিত্র 2E, F), যা নির্দেশ করে যে LNK -754 ইঁদুর কম ডিস্ট্রফিক নিউরাইটের সাথে যুক্ত।
LNK-754 বা লোনাফার্নিব (চিত্র S5A, B) দ্বারা চিকিত্সা করা ইঁদুরের হেমিব্রেইন হোমোজেনেটে LAMP1-এর উন্নত মাত্রা পাওয়া গেছে, যা পূর্ববর্তী গবেষণার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ যে লোনাফার্নিব এবং LNK-754 অটোলাইসোসোমের সংখ্যা বৃদ্ধি করে এবং লাইসোসোমাল মেমব্রেন প্রোটিন এবং হাইড্রোলেসের মাত্রা [8, 9]। LAMP1 (চিত্র S5A, B) এর জন্য ইমিউনোব্লট বিশ্লেষণের ফলাফলের সাথে একমত, মোট LAMP1 ইমিউনোস্টেইনিংয়ের গড় ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা LNK-754 এবং লোনাফারনিব-চিকিত্সা করা ইঁদুরের মস্তিষ্কে গাড়ি-চিকিত্সা করা ইঁদুরের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র S5C, D)।

মোট LAMP1 ফ্লুরোসেন্স স্তরের বিপরীতে, ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটে গড় LAMP1 ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা যানবাহন, LNK-754, এবং লোনাফারনিব-চিকিত্সা করা ইঁদুরের মধ্যে অপরিবর্তিত ছিল (চিত্র S5E, F)। LNK-754 চিকিত্সা করা ইঁদুরের কর্টেক্সে, ডিস্ট্রোফিতে LAMP1 ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা এবং ফলকের বোঝা অত্যন্ত সম্পর্কযুক্ত ছিল, যখন লোনাফারনিব বা যানবাহন-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে LAMP1 তীব্রতা এবং প্লাকের বোঝার মধ্যে কোনও সম্পর্ক পাওয়া যায়নি (চিত্র 2, চিত্র। H), LNK-754 ইঁদুরে ডিস্ট্রোফিক নিউরাইট LAMP1 জমা এবং প্লেকের বোঝার মধ্যে একটি সংযোগ প্রকাশ করে। হিপ্পোক্যাম্পাসে ডিস্ট্রোফি এবং ফলকের বোঝার মধ্যে LAMP1 তীব্রতার মধ্যে একটি সম্পর্কের দিকে একটি প্রবণতা পরিলক্ষিত হয়েছিল। একসাথে, আমাদের ফলাফলগুলি দেখায় যে LNK-754 চিকিত্সা LAMP1 এর মোট স্তরকে বাড়িয়ে দেয় তবুও ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটগুলিতে LAMP1 এর প্যাথলজিকাল সঞ্চয়কে হ্রাস করে যা সাধারণত 5XFAD ইঁদুরে থাকে।

দীর্ঘস্থায়ীভাবে চিকিত্সা করা 5XFAD ইঁদুরের LNK-754-এ ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটে BACE1 সঞ্চয় হ্রাস

LAMP1 এন্ডোলাইসোসোমাল অর্গানেলের ঝিল্লিতে পাওয়া যায় যা অবক্ষয়ের জন্য পরিপক্ক লাইসোসোমকে অ্যাক্সোনাল BACE1 লক্ষ্য করে। অতএব, FTIs অ্যাক্সোনাল ডিস্ট্রোফি গঠন এবং ফলকের চারপাশে BACE1 জমা কমিয়ে A জেনারেশন এবং এক্সট্রা সেলুলার প্লেক জমাকে বাধা দিতে পারে। এই অনুমানের সমর্থনে, LNK-754 ইঁদুরের কর্টিকাল মস্তিষ্কের অঞ্চলে ডিস্ট্রোফিক নিউরাইট LAMP1 স্তর এবং ফলকের বোঝা অত্যন্ত সম্পর্কযুক্ত ছিল।

LAMP1 ইমিউনোস্টেইনিংয়ের আমাদের বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে, যানবাহন বা লোনাফারনিব চিকিত্সার তুলনায়, LNK-754 চিকিত্সা করা 5XFAD ইঁদুরের ফলকগুলি কম ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটের সাথে যুক্ত ছিল (চিত্র 2)। ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটে BACE1-এর মাত্রা ফলক প্রতি একইভাবে হ্রাস পেয়েছে কিনা তা নির্ধারণ করতে, আমরা LAMP1 এবং A42 ছাড়াও BACE1-এর জন্য গাড়ির কর্টিকাল এবং হিপ্পোক্যাম্পাল মস্তিষ্কের টিস্যু, LNK-754 এবং লোনাফারনিবের চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলির কনফোকাল ইমিউনোফ্লোরেসেন্স মাইক্রোস্কোপি করেছি। (চিত্র 3A, B)।

এখানে, LNK-754 চিকিত্সা করা ইঁদুরের কর্টিকাল মস্তিষ্কের অঞ্চলে BACE1 আচ্ছাদিত এলাকা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে এবং লোনাফার্নিব-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে একটি প্রবণতা লক্ষ্য করা গেছে (চিত্র 3C)। CA3 হিপ্পোক্যাম্পাল শ্যাওলা ফাইবার পাথওয়ের প্রিসিন্যাপটিক টার্মিনালে BACE1 এর উচ্চ এক্সপ্রেশন লেভেল দ্বারা হিপ্পোক্যাম্পাসের ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটে BACE1 আচ্ছাদিত অঞ্চলের টি বিশ্লেষণ বাধাগ্রস্ত হয়েছিল [17]। আমরা অতিরিক্তভাবে বিশ্লেষণ করেছি যে কম BACE1 ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটে এন্ডোলাইসোসোমে স্থানীয়করণ করেছে কিনা ডিস্ট্রোফিতে BACE1 এবং LAMP1 এর জন্য পিয়ারসনের পারস্পরিক সম্পর্ক সহগ পরিমাপ করে। গাড়ির চিকিৎসার (চিত্র 3D) তুলনায় LNK-754-চিকিত্সা করা ইঁদুরের কর্টিকাল মস্তিষ্কের অঞ্চলে ফলক প্রতি BACE1 এবং LAMP1 সহ-স্থানীয়করণে একটি উল্লেখযোগ্য হ্রাস পাওয়া গেছে।

হিপোক্যাম্পাসে, লোনাফারনিবের তুলনায় LNK-754-এর জন্য ফলক প্রতি BACE1 এবং LAMP1 সহ-স্থানীয়করণে একটি উল্লেখযোগ্য হ্রাস পাওয়া গেছে, এবং গাড়ির তুলনায় LNK-754 চিকিত্সার জন্য হ্রাসের প্রবণতা পরিলক্ষিত হয়েছে (চিত্র 3ই)। টিস ফলাফলগুলি ফলকের বোঝা এবং LAMP1 আচ্ছাদিত অঞ্চলের জন্য আমাদের অনুসন্ধানের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, এবং আরও এই ধারণাটিকে সমর্থন করে যে LNK-754 চিকিত্সা ডিস্ট্রোফিক নিউরাইট গঠনকে হ্রাস করে, প্রতিবন্ধী এন্ডোলাইসোসোমাল অর্গানেলের গঠন হ্রাস করে যা BACE1কে অবক্ষয়ের জন্য লক্ষ্য করে।

LNK-754 এর সাথে তীব্র চিকিত্সা 5XFAD ইঁদুরের লাইভ ব্রেন স্লাইসে ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটে দেরী এন্ডোসোম এবং লাইসোসোম জমা কমায়

আমরা পরবর্তীতে লাইভ মস্তিষ্কের টিস্যুগুলির কনফোকাল ইমেজিং সম্পাদন করে ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটগুলিতে LNK-754 এবং লোনাফারনিবের তীব্র প্রভাব পরীক্ষা করেছি। এই পরীক্ষায়, 5-মাস বয়সী 5XFAD ইঁদুরকে প্রতিদিন গাড়ি, LNK-754, বা লোনাফারনিব দিয়ে 3 সপ্তাহের জন্য ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। আমরা লাইসোট্র্যাকার-গ্রিন (এলটি) দিয়ে টিস্যুতে দাগ দিয়েছি, একটি প্রোব যা সাধারণত জীবিত কোষগুলিতে অ্যাসিডিফেড দেরী এন্ডোসোম এবং লাইসোসোমগুলিকে ট্র্যাকিং এবং বেছে বেছে সনাক্ত করার জন্য ব্যবহৃত হয় [53]। এলটি এবং থিয়াজিন লাল দাগের ধরণটি 5XFAD ইঁদুরের ডিস্ট্রোফিক নিউরাইট মার্কারগুলির জন্য আমাদের ইমিউনোস্টেইনিং ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল (চিত্র 2A, B; চিত্র 3A, B); এলটি-পজিটিভ দেরী এন্ডোসোম এবং লাইসোসোমগুলি জীবন্ত মস্তিষ্কের টিস্যুতে অ্যামাইলয়েড ফলকের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে যুক্ত ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটে অত্যন্ত ঘনীভূত ছিল (চিত্র 4A)।

LNK-754 বা লোনাফারনিবের সাথে 5-মাস-বয়সী 5XFAD ইঁদুরের একটি তীব্র 3-সপ্তাহের চিকিত্সা ফলকের আকার কমাতে অপর্যাপ্ত ছিল (চিত্র 4B), যদিও LNK-754 চিকিত্সার কারণে LT এর অনুপাতের একটি উল্লেখযোগ্য হ্রাস: TR প্রতি ফলক এবং ডিস্ট্রোফিক নিউরাইট আকার (চিত্র 4C, D)। মজার বিষয় হল, LAMP1 বা BACE1-এর জন্য আমাদের অনুসন্ধানের বিপরীতে, তীব্র লোনাফার্নিব চিকিত্সা ডিস্ট্রোফির আকার এবং LT: TR প্রতি ফলক (চিত্র 4C, D) এর অনুপাতকেও হ্রাস করেছে। ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটের আকার এবং ফলকের আকার LNK-754 চিকিত্সা করা 5XFAD ইঁদুরগুলিতে অত্যন্ত সম্পর্কযুক্ত (চিত্র 4F), এবং লোনাফার্নিব-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতেও একটি উল্লেখযোগ্য পারস্পরিক সম্পর্ক পরিলক্ষিত হয়েছিল (চিত্র 4G)। যানবাহন-চিকিত্সা করা ইঁদুরের মধ্যে কোন সম্পর্ক নেই (চিত্র 4ই)। আমাদের ফলাফলগুলি নিশ্চিত করে যে LNK-754 অ্যাক্সোনাল ডিস্ট্রোফি হ্রাস করেছে এবং পরামর্শ দেয় যে FTIs প্লেকের চারপাশে দেরী এন্ডোসোম এবং লাইসোসোম জমা কমিয়ে দিতে পারে, এমনকি ব্যাপক ফলক জমা এবং অ্যাক্সন অবক্ষয়ের পরেও।

LNK-754 এর সাথে স্বল্পমেয়াদী চিকিত্সার পরে hAPP/PS1 ইঁদুরের শেখার এবং স্মৃতির ঘাটতির উন্নতি

LNK-754 5XFAD ইঁদুরের ডিস্ট্রোফিক নিউরাইটে LAMP1, BACE1, এবং LT জমা হওয়া প্রতিরোধ করে, পরামর্শ দেয় যে LNK-754 চিকিত্সা A-সংশ্লিষ্ট সিনাপটিক কর্মহীনতার বিরুদ্ধে রক্ষা করে। LNK-754 চিকিত্সা জ্ঞানীয় ফাংশনের উপর উপকারী প্রভাব ফেলেছিল কিনা তা মূল্যায়ন করতে, আমরা HAPP/ PS1 AD মাউস মডেল [40] এ স্থানিক শিক্ষা এবং স্মৃতিতে মৌখিক LNK-754 চিকিত্সার স্বল্পমেয়াদী কার্যকারিতা মূল্যায়ন করেছি। . HAPP/ PS1 ইঁদুরের স্থানিক মেমরি LNK-754 দিয়ে 12 দিনের মৌখিক চিকিত্সার পরে উন্নত হয়েছিল, যেমন মরিস ওয়াটার মেজ (MWM) দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছে।

লুকানো প্ল্যাটফর্ম প্রশিক্ষণ সেশনের সময়, LNK-754 চিকিত্সা করা hAPP/PS1 ইঁদুর যানবাহন-চিকিত্সা করা hAPP/PS1 ইঁদুরের চেয়ে দ্রুত প্ল্যাটফর্মটি সনাক্ত করতে শিখেছে, যার ফলে একটি শেখার বক্ররেখা হয়েছে যা যানবাহন-চিকিত্সা করা hAPP থেকে উল্লেখযোগ্যভাবে আলাদা। /PS1 নিয়ন্ত্রণ ইঁদুর (চিত্র 5A)। ট্রেনিং ট্রায়ালের 4 এবং 7 দিনে যানবাহন-চিকিত্সা করা hAPP/PS1 ইঁদুরগুলি প্ল্যাটফর্মটি সনাক্ত করতে উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি সময় নিয়েছে, যেখানে LNK-754 চিকিত্সা করা hAPP/-এর মধ্যে কোনও উল্লেখযোগ্য পার্থক্য পাওয়া যায়নি। PS1 ইঁদুর এবং যানবাহন দ্বারা চিকিত্সা করা বন্য-টাইপ ইঁদুর (চিত্র 5A-C)।

প্রোব পরীক্ষার সময়, LNK-754-চিকিত্সা করা hAPP/PS1 প্রাণীগুলি লক্ষ্য চতুর্ভুজ (চিত্র 5D) এবং প্ল্যাটফর্ম ক্রসিংয়ের বর্ধিত ফ্রিকোয়েন্সি (চিত্র 5E), যানবাহন-চিকিত্সা করা বন্য-প্রজাতির প্রাণীর সাথে তুলনীয় দেখায় . ELISA দ্বারা একটি 42 স্তর পরিমাপ করা হয়েছিল এবং যানবাহন দ্বারা চিকিত্সা করা বা LNK-754-চিকিত্সা করা hAPP/PS1 ইঁদুর (চিত্র 5F, G) থেকে দ্রবণীয় এবং অদ্রবণীয় মস্তিষ্কের হোমোজেনেটে অপরিবর্তিত ছিল, যা পরামর্শ দেয় যে উন্নত স্মৃতিশক্তি এবং স্থানিক শিক্ষা একটি নয় LNK-754 চিকিত্সা করা hAPP/PS1 ইঁদুরে অ্যামাইলয়েডের বোঝা কম হওয়ার ফলাফল।

For more information:1950477648nn@gmail.com