তরুণ কুকুরের ডিসপ্লাস্টিক কিডনিতে নিউরোনাল নাইট্রিক অক্সাইড সিন্থেস এবং রেনিনের প্রকাশ

বিমূর্ত।

রেনিন এবংনিউরোনাল নাইট্রিক অক্সাইড সিন্থেসকিডনি নিয়ন্ত্রণেরেনিন-এনজিওটেনসিনএবংটিউবলোগ্লোমেরুলার ফিডব্যাক সিস্টেম. বর্তমান গবেষণায় রেনিন এবং নিউরোনালের অভিব্যক্তি তদন্ত করা হয়েছেনাইট্রিক অক্সাইড সিন্থেসমধ্যেডিসপ্লাস্টিক কিডনিতিনটি তরুণ কুকুরের। রেনিনিমিউনোরেঅ্যাকটিভিটি, যা ডিসপ্লাস্টিক কিডনির জুক্সটাগ্লোমেরুলার এবং টিউবুলার কোষে ঘটে, ছোট কুকুরের স্বাভাবিক কিডনির থেকে আলাদা ছিল না। স্বাভাবিক কিডনিতে ম্যাকুলা-ঘন কোষগুলি নিউরোনাল নাইট্রিক অক্সাইড সিন্থেস-ইমিউনোরঅ্যাক্টিভিটি দেখায়, কিন্তু ডিসপ্লাস্টিক কিডনিতে কোন আপাত সংকেত দেখায়নি। এই পর্যবেক্ষণটি তরুণ কুকুরের রেনাল ব্যর্থতার প্যাথলজিকাল প্রক্রিয়ার সাথে সম্পর্কিত হতে পারে।

কীওয়ার্ড: দীর্ঘস্থায়ী কিডনি রোগ, ডিসপ্লাস্টিক কিডনি, ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি, নিউরোনাল নাইট্রিক অক্সাইড সিন্থেস, রেনিন

রেচনজনিত ব্যর্থতামাঝে মাঝে অল্পবয়সী কুকুরের মধ্যে ঘটে। এই ধরনের ক্ষেত্রে, হিস্টোলজিক্যাল পরীক্ষা ঘন ঘন ডিসপ্লাস্টিক কিডনি ক্ষত প্রদর্শন করে। যাইহোক, কুকুরের ডিসপ্লাস্টিক কিডনিতে যে প্যাথোফিজিওলজিকাল প্রক্রিয়াগুলি ঘটে তা অস্পষ্ট থেকে যায়। সম্প্রতি, আমরা ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল বিশ্লেষণ ব্যবহার করে ডিসপ্লাস্টিক কিডনিযুক্ত অল্পবয়সী কুকুরের দীর্ঘস্থায়ী কিডনি রোগে সাইক্লোক্সিজেনেস (COX)-2 এর ক্ষয় প্রদর্শন করেছি [19]।

Cistanche সম্পূরক সমর্থনকিডনি ফাংশন সম্পূরক

COX-2 হল একটি ইন্ডুসিবল প্রদাহজনক এনজাইম যা ভ্রূণ এবং নবজাতক পর্যায়ে স্বাভাবিক কিডনি বিকাশের জন্য অপরিহার্য [12, 15]। জন্মের পর, COX-2 গঠনগতভাবে কিডনিতে প্রকাশ করা হয় এবং পুরু আরোহী অঙ্গগুলির ম্যাকুলা ডেনসা (MD) এর সীমাবদ্ধ এলাকায় ঘনীভূত হয় [1, 4, 22]। এমডি হল গ্লোমেরুলাসের ভাস্কুলার মেরু সংলগ্ন একটি বিশেষ অঞ্চল। এটি রেনিন নিঃসরণ এবং টিউবলোগ্লোমেরুলার ফিডব্যাক (TGF) সিস্টেম নিয়ন্ত্রণ করে। MD কোষে প্রকাশিত COX-2 এই প্রক্রিয়াগুলিকে নিয়ন্ত্রণ করে [6, 8]। COX-2 ছাড়াও, নিউরোনাল নাইট্রিক অক্সাইড সিন্থেস (nNOS), যা MD কোষেও প্রকাশ করা হয়, TGF সিস্টেমের প্রধান নিয়ন্ত্রক হিসাবে পরিচিত [3, 18]। এই দুটি অণু, যা MD-তে সহ-প্রকাশিত, একে অপরের সাথে যোগাযোগ করতে পরিচিত [2, 5, 9]। বর্তমান সমীক্ষায়, আমরা ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি দ্বারা ডিসপ্লাস্টিক কিডনিতে রেনিন এবং এনএনওএস-এর অভিব্যক্তি তদন্ত করেছি যাতে ডিসপ্লাস্টিক কিডনিতে COX-2-এর টেনশন তরুণ কুকুরের মধ্যে রেনিন-এনজিওটেনসিন সিস্টেম এবং TGF সিস্টেমের ব্যাঘাত ঘটায় কিনা তা নির্ধারণ করে।

তরুণ কুকুরের ডিসপ্লাস্টিক কিডনির ফরমালিন-স্থির প্যারাফিন ব্লক (n=3), তরুণ কুকুরের স্বাভাবিক কিডনি (n=3), এবং প্রাপ্তবয়স্ক কুকুরের স্বাভাবিক কিডনি (n=4) ছিল আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায় ব্যবহৃত হিসাবে একই, যেখানে ক্লিনিকাল ইতিহাস এবং টিস্যু প্রস্তুতি পূর্বে বর্ণনা করা হয়েছে [19]। গবেষণাটি জাপানের কাগোশিমা ইউনিভার্সিটি (VM15020) এর প্রাণী পরীক্ষার কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল। বিভাগগুলি একটি 3-µm পুরুত্বের সাথে প্রস্তুত করা হয়েছিল, এবং নিম্নলিখিত প্রোটোকল অনুসারে রেনিন এবং nNOS-এর জন্য ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল বিশ্লেষণ সম্পাদিত হয়েছিল: (1) ডিপ্যারাফিনাইজেশন; (2) nNOS-এর জন্য 10 মিমি সাইট্রেট বাফারে (pH 6.0) মাইক্রোওয়েভ গরম করে অ্যান্টিজেন পুনরুদ্ধার; (3) 30 মিনিটের জন্য 3% H2O2 দিয়ে ইনকিউবেশন; (4) রেনিনের জন্য 3% বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন (সিগমা-অলড্রিচ, সেন্ট লুইস, MO, USA) দিয়ে ব্লক করা বা nNOS-এর জন্য 0.25% কেসিন (সিগমা-অলড্রিচ), ফসফেট বাফার স্যালাইনে মিশ্রিত করা, 30 মিনিটের জন্য; (5) 1:3,000 খরগোশের অ্যান্টি-রিকম্বিন্যান্ট রেনিন পলিক্লোনাল অ্যান্টিসারাম (ড. মুরাকামি, ইউনিভার্সিটি অফ সুকুবা, জাপান দ্বারা সরবরাহ করা) বা 1:3,{{32} এর পাতলা করে 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি ইনকিউবেশন }} খরগোশের অ্যান্টি-এনএনওএস পলিক্লোনাল অ্যান্টিসারাম (কেম্যান কেমিক্যাল, অ্যান আর্বার, এমআই, ইউএসএ), ব্লকিং দ্রবণে পাতলা করা; (6) পেরক্সিডেস-পলিমার-কনজুগেটেড সার্বজনীন অ্যান্টিবডি (অ্যান্টি-মাউস ইমিউনোগ্লোবুলিন (আইজি) জি এবং অ্যান্টি-র্যাবিট আইজিজি; সাধারণ দাগ ম্যাক্স-পো [মাল্টি]; নিচিরি বায়োসায়েন্সেস, টোকিও, জাপান) সহ ঘরের তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য ইনকিউবেশন ; এবং (7) 3,3ʹ-diaminobenzidine সিস্টেম ব্যবহার করে ইমিউনোসিগন্যাল সনাক্তকরণ (3,3ʹ-diaminobenzidine বাফার ট্যাবলেট; Merck, Darmstadt, Germany)। নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ বিভাগের জন্য, প্রাথমিক অ্যান্টিবডির জায়গায় সাধারণ খরগোশ আইজিজি (ল্যাব ভিশন, ফ্রেমন্ট, সিএ, ইউএসএ) ব্যবহার করা হয়েছিল।

চিত্র 1. একটি ডিসপ্লাস্টিক ক্যানাইন কিডনিতে রেনিনের জন্য ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি। উত্তর: ভাস্কুলার খুঁটির কাছে জুক্সটাগ্লোমেরুলার কোষে এবং কিছু গ্লোমেরুলার কোষে (তীর) রেনিন-পজিটিভ সংকেত পরিলক্ষিত হয়েছে। বার: 50 µm। B: বিভাগের একটি ভিন্ন অঞ্চল প্যানেল A-তে দেখানো হয়েছে। অজ্ঞাত নেফ্রন সেগমেন্টের টিউবুলস রেনিন-ইমিউনোর অ্যাক্টিভিটি দেখায়। বার: 50 µm।

রেনিন ইমিউনোরঅ্যাকটিভিটির জন্য এলোমেলো আকারের বিশ্লেষণ পূর্বে বর্ণিত একটি পদ্ধতি [20] অনুসারে সম্পাদিত হয়েছিল। সংক্ষেপে, রেনিন সূচককে রেনিন-পজিটিভ ধমনীর মোট সংখ্যার সাথে গ্লোমেরুলির মোট সংখ্যার অনুপাত হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছিল এবং প্রতি 100টি গ্লোমেরুলিতে প্রকাশ করা হয়েছিল। SPSS সংস্করণ 24 (IBM SPSS পরিসংখ্যান, Armonk, NY, USA) এর সাথে বনফেরোনির একাধিক তুলনা পদ্ধতি ব্যবহার করে গ্রুপগুলির মধ্যে পার্থক্যগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

পিকাট এবং লুইস [১৪] দ্বারা ক্যানাইন রেনাল ডিসপ্লাসিয়ার মাইক্রোস্কোপিক মানদণ্ড অনুসারে হিস্টোপ্যাথলজিকাল নির্ণয় করা হয়েছিল। তিনটি ক্ষেত্রেই হিস্টোলজি বিভাগগুলি অসিঙ্ক্রোনাস পার্থক্য উপস্থাপন করে, যা ভ্রূণ/অপরিপক্ব গ্লোমেরুলির সাথে ক্ষতের উপস্থিতি নির্দেশ করে। পরিপক্ক রেনাল টিস্যুগুলির মধ্যে পরিবর্তনশীল তীব্রতার সেকেন্ডারি পরিবর্তন যেমন টিউবুলার ক্ষতি, ইন্টারস্টিশিয়াল ফাইব্রোসিস এবং স্ক্লেরোটিক গ্লোমেরুলি পরিলক্ষিত হয়েছিল।

ডিসপ্লাস্টিক কিডনিতে, রেনিন-ইমিউনোরেঅ্যাক্টিভিটি সংকেতগুলি জুক্সটাগ্লোমেরুলার কোষে (জেজিসি) (চিত্র 1A) পরিলক্ষিত হয়েছিল এবং টিউবুলার কোষগুলি দূরবর্তী নেফ্রনগুলিতে (চিত্র 1বি) অবস্থিত ছিল। কিছু গ্লোমেরুলিতে, কয়েকটি কোষ ভাস্কুলার খুঁটির কাছে রেনিন-পজিটিভ সংকেত দেখায় (চিত্র 1A)। তরুণ কন্ট্রোল কিডনিতে, এমডি কোষ সহ জেজিসি এবং দূরবর্তী টিউবুল উভয়েই রেনিন সংকেত সনাক্ত করা হয়েছিল। প্রাপ্তবয়স্কদের নিয়ন্ত্রণের কিডনিতে, রেনিন-পজিটিভ সংকেতগুলি জেজিসিগুলিতে সীমাবদ্ধ ছিল। পরিসংখ্যানগতভাবে, ডিসপ্লাস্টিক কিডনিতে রেনিন-পজিটিভ এলাকার সংখ্যা তরুণ এবং প্রাপ্তবয়স্ক কিডনিগুলির থেকে কোনও উল্লেখযোগ্য পার্থক্য দেখায়নি।

রেনিন উৎপাদনের উদ্দীপনা COX-2 সংকেতে ভূমিকা পালন করে বলে জানা যায়, এবং পূর্ববর্তী গবেষণায় প্রমাণিত হয়েছে যে COX-2 ইনহিবিটর বা COX-এর নকআউটে প্রশাসনের পরে প্লাজমা রেনিন কার্যকলাপ এবং ঘনত্ব হ্রাস পেয়েছে -2 জিন [১০, ১১]। যেহেতু বর্তমান গবেষণায় পরীক্ষা করা ডিসপ্লাস্টিক কিডনি রেনাল COX-2 [19] এর কোনো অভিব্যক্তি দেখায়নি, জেজিসিতে রেনিনের ইমিউনোসিগন্যাল হ্রাস প্রাথমিকভাবে ডিসপ্লাস্টিক কিডনিতে সম্ভাব্য শারীরবৃত্তীয় অস্বাভাবিকতা হিসাবে সন্দেহ করা হয়েছিল। যাইহোক, বর্তমান ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল বিশ্লেষণ এই অনুমানকে নিশ্চিত করতে পারেনি, এবং জেজিসিগুলিতে রেনিনের কোনও আপাত হ্রাসের পরামর্শ দেওয়া হয়নি। যদিও টিউবুলার রেনিনের শারীরবৃত্তীয় ভূমিকা আগে স্পষ্ট করা হয়নি, সোডিয়ামের রেনাল হ্যান্ডলিং টিউবুলার রেনিনের একটি সম্ভাব্য ভূমিকা হতে পারে, যেহেতু ইঁদুরে কম লবণযুক্ত খাবার খাওয়ানোর পরে রেনিনের অভিব্যক্তি দূরবর্তী নেফ্রনে প্ররোচিত হয়েছিল। [16], এবং বর্তমান গবেষণায় পরীক্ষা করা কুকুরের ডিসপ্লাস্টিক কিডনি এই টিউবুলার ফাংশন বজায় রাখতে পারে।

COX-2 টিজিএফ সিস্টেমের নিয়ন্ত্রণেও গুরুত্বপূর্ণ, যা গ্লোমেরুলার পরিস্রাবণ হার বজায় রাখার জন্য গুরুত্বপূর্ণ। মাইক্রোপাংচার পদ্ধতি ব্যবহার করে ইঁদুরের উপর করা একটি গবেষণা COX-2 ইনহিবিটর [২] দিয়ে চিকিত্সার পরে TGF প্রতিক্রিয়া দমন করে। রেনাল COX-2 এক্সপ্রেশনের অভাবের কারণে ডিসপ্লাস্টিক কিডনিতে TGF প্রতিক্রিয়া হ্রাস পেতে পারে। যাইহোক, কোন প্রাসঙ্গিক ফলাফল আগে রিপোর্ট করা হয়নি. কিডনিতে, এনএনওএস এমডি কোষে প্রকাশ করা হয় এবং টিজিএফ সিস্টেমকে নিয়ন্ত্রণ করতে সহায়তা করে [18]।

বর্তমান এনএনওএস বিশ্লেষণে, সমস্ত ক্ষেত্রে MD অঞ্চলে কোনও আপাত সংকেত সনাক্ত করা যায়নি (চিত্র 2)। এনএনওএস-এর এই হ্রাসকে ডিসপ্লাস্টিক কিডনিতে একটি ইটিওপ্যাথোজেনিক ঘটনা হিসাবে বিবেচিত হয়েছিল, বরং কেসগুলির রেনাল ব্যর্থতার পরে অর্জিত হওয়ার চেয়ে। টাইপ 2 ডায়াবেটিসের মডেল হিসাবে ওএলইটিএফ (ওটসুকা লং-ইভান্স টোকুশিমা ফ্যাটি) ইঁদুর ব্যবহার করে আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে এনএনওএস ডায়াবেটিক নেফ্রোপ্যাথির পরবর্তী পর্যায়ে এমডি এবং এর চারপাশের টিউবুলার কোষগুলিতে অতিরিক্ত প্রভাব ফেলেছিল [২১]। TGF সিস্টেমের নিয়ন্ত্রণে, nNOS-এর কার্যকারিতা একই রকম এবং COX-2 এর সাথে ইন্টারঅ্যাক্ট করে। কিছু গবেষণায় পরামর্শ দেওয়া হয়েছে যে nNOS সিগন্যালিং পাথওয়ের উপরের দিকে অবস্থান করে এবং COX-2 [5, 9] এর অভিব্যক্তিকে উদ্দীপিত করে। অন্যদিকে, অন্যান্য গবেষণায় বিপরীত পরামর্শ দেওয়া হয়েছে যে COX-2 NOS [2, 13] এর উজানে অবস্থিত। সিগন্যালিং পাথওয়ের পার্থক্য নির্বিশেষে, MD কোষে nNOS-ইমিউনোসিগন্যালের অভাব ডিসপ্লাস্টিক কিডনিতে রেনাল COX-2 এক্সপ্রেশনের হ্রাসকে ট্রিগার করতে পারে।