স্ট্রেপ্টোজোটোসিন-নিকোটিনামাইড-প্ররোচিত ডায়াবেটিক ইঁদুর-এ পুরুষ প্রজনন কার্যের উপর সিস্টানচে টিউবুলোসার নির্যাসের প্রভাব-Ⅰ

1। পরিচিতি

ডায়াবেটিস মেলিটাস (ডিএম) এমন একটি অবস্থা যেখানে বেড়ে যায়গ্লুকোজ মাত্রাপর্যাপ্ত ইনসুলিন উত্পাদনে অগ্ন্যাশয়ের অদক্ষতার কারণে বা শরীরের এটি কার্যকরভাবে ব্যবহার করতে অক্ষমতার কারণে রক্তে। WHO এর মতে, ডায়াবেটিস আক্রান্ত মানুষের সংখ্যা 1980 সালে 108 মিলিয়ন থেকে বেড়ে 2014 সালে 422 মিলিয়নে উন্নীত হয়েছে [1]। চারটি প্রধান বিভাগ রয়েছে: প্রাক-ডায়াবেটিস (ডায়াবেটিসের আগে একটি পর্যায়), টাইপ 1 (যেখানে অগ্ন্যাশয় ইনসুলিন তৈরি করতে ব্যর্থ হয়), টাইপ 2 (শরীর ইনসুলিন ব্যবহার করতে ব্যর্থ হয়), এবং গর্ভকালীন ডায়াবেটিস (যা গর্ভাবস্থায় ঘটে)। প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্টগুলির মধ্যে ভারসাম্যহীনতার কারণে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস ঘটে [২] অবশেষে ডায়াবেটিক অবস্থার দিকে পরিচালিত করে। ডায়াবেটিসের জটিলতার মধ্যে রয়েছে কিডনির ব্যর্থতা, স্নায়ুর ক্ষতি, অন্ধত্ব, স্ট্রোক, হার্ট অ্যাটাক, ভ্রূণের মৃত্যু এবং বন্ধ্যাত্ব। [১]। অধ্যয়নগুলি দেখায় যে পুরুষ ডায়াবেটিক রোগীদের মধ্যে শুক্রাণু নিউক্লিয়াস, ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিড (ডিএনএ) এবং মাইটোকন্ড্রিয়া উল্লেখযোগ্যভাবে ক্ষতিগ্রস্ত হয়েছিল [3]। শুক্রাণু পরিবহনের সময় অক্সিডেটিভ স্ট্রেস পুরুষ প্রজনন সিস্টেমের প্রক্রিয়াকে পরিবর্তন করবে [4,5]।

PHGS75% ECH 30% ACT 12%

স্পার্মাটোজেনেসিসের প্রক্রিয়া হাইপোথ্যালামাস-পিটুইটারি-গোনাডাল (এইচপিজি) অক্ষ দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয়। হাইপোথ্যালামাস দ্বারা উত্পাদিত গোনাডোট্রপিন-রিলিজিং হরমোন (GnRH) লুটিনাইজিং হরমোন (LH) এবং ফলিকল-স্টিমুলেটিং হরমোন (FSH) উৎপাদনকে উদ্দীপিত করে। লেডিগ কোষগুলি সেমিনিফেরাস টিউবুলের সংলগ্ন পাওয়া যায় এবংটেস্টোস্টেরন উত্পাদনএলএইচ এর নিয়ন্ত্রণে। এফএসএইচ অ্যান্টিজেন-বাইন্ডিং প্রোটিন (এবিপি) উত্পাদন শুরু করে যা পুরুষ হরমোন পাস করতে সহায়তা করে। এইভাবে, বন্ধ্যাত্ব এবং অন্যান্য সমস্যাগুলি প্রধানত এইচপিজি অক্ষে ঘটে যাওয়া ব্যাঘাতের কারণে দেখা দেয়। স্ট্রেপ্টোজোটোসিন-নিকোটিনামাইডের সংমিশ্রণের প্রশাসন পরীক্ষামূলক ইঁদুরে ডায়াবেটিস প্ররোচিত করে। স্ট্রেপ্টোজোটোসিন হল একটি রাসায়নিক যৌগ যা অগ্ন্যাশয়ের ইনসুলিন-উৎপাদনকারী কোষগুলির জন্য বিষাক্ত এবং নিকোটিনামাইড হল একটি জল-দ্রবণীয় ভিটামিন যা কোষগুলিকে সম্পূর্ণ ক্ষতি থেকে রক্ষা করে [6]।

Cistanche tubulosa হল একটি মরুভূমির উদ্ভিদ প্রজাতি যা "Rou Cong-Rong" [৭] নামেও পরিচিত। এটি একটি নন-ক্লোরোফিলিক পরজীবী উদ্ভিদ যা মূলত ক্যালোট্রপিস প্রোসেরা গাছের মূলে জন্মায় এবং গানসু, কিংহাই, জিনজিয়াং, মঙ্গোলিয়া, ইরান এবং ভারতের শুষ্ক ভূমিতে ব্যাপকভাবে বিতরণ করা হয়। Cistanche tubulosa-এর সাধারণ নাম "Desert Hyacinth"। এটি চীনা ঐতিহ্যগত ওষুধে ব্যাপকভাবে গৃহীত এবং "মরুভূমির জিনসেং" নাম দেওয়া হয়েছে। এটি রোগাক্রান্ত লিউকোরিয়া, প্রচুর পরিমাণে মেট্রোরেজিয়া, দীর্ঘস্থায়ী রেনাল রোগ, কোষ্ঠকাঠিন্য, পুরুষত্বহীনতা এবং বন্ধ্যাত্বের চিকিত্সার জন্য ঔষধি ক্ষেত্রে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। এর রাসায়নিক উপাদানCistanche tubulosa অ-উদ্বায়ী ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড নিয়ে গঠিত(PHGs), iridoids, lignans, volatile oils, alditols, oligosaccharides, and polysaccharides [8]। স্টাডিজ দেখায় যেইচিনাকোসাইডএই ভেষজ থেকে ROS মাত্রা নিয়ন্ত্রণ করে ক্ষতিগ্রস্ত ফাইব্রোব্লাস্ট রক্ষা করে [9]। এই যৌগটি নিউরোপ্রোটেকশন এবং অস্টিওপরোসিস প্রতিরোধ [10,11] সহ অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, ভাসোরেলেক্সেশন এবং অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি ক্রিয়াকলাপ তৈরি করে।

এই গবেষণার প্রভাব তদন্ত করার লক্ষ্যেCistanche tubulosa নির্যাসস্ট্রেপ্টোজোটোসিন-নিকোটিনামাইড-প্ররোচিত ডায়াবেটিক ইঁদুরের প্রজনন কর্মহীনতার উপর ECH ধারণকারী।

2। সামগ্রী ও পদ্ধতি

2.1। উপকরণ

ECH এবং CTE সিনফার ফার্মাসিউটিক্যাল কোং, লিমিটেড (ইলান, তাইওয়ান) থেকে কেনা হয়েছিল। উন্নত গ্লাইকেশন শেষ পণ্য (AGEs) বায়োভিশন (সান ফ্রান্সিসকো, CA, USA) থেকে কেনা হয়েছিল। LC-540 এবং TM3 সেল লাইনগুলি ফুড ইন্ডাস্ট্রি রিসার্চ অ্যান্ড ডেভেলপমেন্ট ইনস্টিটিউট (সিঞ্চু, তাইওয়ান) থেকে কেনা হয়েছে। ন্যাশনাল ল্যাবরেটরি অ্যানিমেল সেন্টার (তাইপেই, তাইওয়ান) থেকে পাঁচ সপ্তাহ বয়সী স্প্রাগ-ডাওলি (এসডি) পুরুষ ইঁদুর কেনা হয়েছিল। ফিড ল্যাব ডায়েট® PMI নিউট্রিশন ইন্টারন্যাশনাল, Inc. (তাইপেই, তাইওয়ান) থেকে কেনা হয়েছে। 2,2-ডিফেনাইল-1-পিক্রিলহাইড্রাজিল (DPPH) সিগমা (সেন্ট লুইস, MO, USA) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। সিগমা থেকে মিথানল এবং 4-(2-হাইড্রোক্সিইথাইল)-1-পাইপরাজিনিথানেসালফোনিক অ্যাসিড (এইচইপিইএস)ও কেনা হয়েছিল। Dulbecco এর পরিবর্তিত Eagle medium/F12 এবং trypsin-EDTA GIBCO (নিউ ইয়র্ক, NY, USA) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। 3-(4, 5-ডাইমেথাইলথিয়াজল-2-ইএল)-2, 5-ডিফেনাইলটেট্রাজোলিয়াম ব্রোমাইড (এমটিটি), ডিক্লোরো-ডাইহাইড্রো-ফ্লুরোসেসিন ডায়াসেটেট (ডিসিএফএইচ-ডিএ), ডাইমিথাইল সালফক্সাইড (DMSO), এবং নাইট্রোব্লু টেট্রাজোলিয়াম (NBT) সিগমা থেকে কেনা হয়েছিল। গ্লুকোজ এনজাইমেটিক কিটগুলি কিয়োকুটোসেইয়াকু, টোকিও, জাপান থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। ইনসুলিন ELISA কিটগুলি Mercodia AB Inc., Sylveniusgatan 8A (Uppsala, Sweden) থেকে কেনা হয়েছিল। T-PER টিস্যু প্রোটিন নিষ্কাশন বিকারক থার্মো সায়েন্টিফিক (শিকাগো, IL, USA) থেকে অর্জিত হয়েছিল। মানব/মাউস/ইঁদুর বিরোধী নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টর-কাপ্পা B NF-κB পলিক্লোনাল অ্যান্টিবডিগুলি সান্তা ক্রুজ বায়োটেকনোলজি, সান্তা ক্রুজ, CA, USA থেকে কেনা হয়েছিল৷ উন্নত গ্লাইকেশন এন্ড প্রোডাক্ট (RAGE) পলিক্লোনাল অ্যান্টিবডি, অ্যান্টি-হিউম্যান/মাউস/ইঁদুর স্টার পলিক্লোনাল অ্যান্টিবডি, এবং অ্যান্টি-হিউম্যান/মাউস/ইঁদুর সাইটোক্রোম পি450 17A1 মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডিগুলির জন্য অ্যান্টি-মাউস/ইঁদুর রিসেপ্টর জিন থেকে কেনা হয়েছিল Tex (Irvine, CA, USA)। অ্যান্টি-হিউম্যান/মাউস/ইঁদুর CYP11A1 পলিক্লোনাল অ্যান্টিবডিগুলি সেল সিগন্যালিং প্রযুক্তি (বেভারলি, পিএ, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। ইজি-ব্লু রিএজেন্ট Invitrogen, Thermo Fisher Scientific (Carlsbad, CA, USA) থেকে কেনা হয়েছিল। Agarose এবং DNA চিহ্নিতকারী 100 bp প্রোমেগা, কর্পোরেশন (ম্যাডিসন, WI, USA) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। RNeasy লিপিড টিস্যু মিনি কিট কিয়াগেন, হিলডেন, জার্মানি থেকে কেনা হয়েছিল।

PHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.2। পদ্ধতি

2.2.1। ভিট্রো বিশ্লেষণে

LC{{0}} এবং TM3 সেল কালচার: LC-540 সেল লাইনগুলি আর্লে'স ব্যালেন্সড সল্ট সলিউশন (EBSS) মিডিয়ামে সোডিয়াম বাইকার্বনেট (1.5 g/L) এর সাথে সম্পূরক 37 ◦C তাপমাত্রায় সংষ্কৃত হয়েছিল। এল-গ্লুটামিন (2 মিমি), অ-প্রয়োজনীয় অ্যামিনো অ্যাসিড (0.1 মিমি), সোডিয়াম পাইরুভেট (10 মিমি), এবং ভ্রূণের বোভাইন সিরাম (এফবিএস) (10%) 5% CO2 ইনকিউবেটর (CO2 ইনকিউবেটর, Napco 5410, তাইওয়ান)। টিএম৩ সেল লাইনটি ডালবেকোর পরিবর্তিত ঈগল মিডিয়ামে (DMEM) গ্লুকোজ (4.5 g/L), সোডিয়াম পাইরুভেট (0.5 mM), L-glutamine (2.5 mM), সোডিয়াম বাইকার্বোনেট (1.2 g/L), {{ 28}}(2-হাইড্রোক্সিইথাইল)-1-পাইপারাজিনিথানেসালফোনিক অ্যাসিড (এইচইপিইএস, 15 মিমি), এবং ভ্রূণের বাছুরের সিরাম (এফসিএস, 10%) বা ঘোড়ার সিরাম (5%) 37 ◦C তাপমাত্রায় 5% CO2 ইনকিউবেটর।

এর কোষের কার্যক্ষমতা নির্ধারণএচিনাকোসাইড (ইসিএইচ): 3-(4, 5-ডাইমেথাইলথিয়াজল-2-yl)-2,5- ডিফেনাইলটেট্রাজোলিয়াম ব্রোমাইড (MTT) বিকারক কোষের কার্যক্ষমতা পরীক্ষা করার জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। একটি 96-ওয়েল প্লেটে কোষের ঘনত্ব 2 × 105 কোষ / এমএল এ সামঞ্জস্য করা হয়েছিল। তারপর, একটি 5% CO2 ইনকিউবেটরে 20 μL ECH (মাঝারিটির 2% পাতলা) যোগ করা হয়েছিল এবং 37 ◦C তাপমাত্রায় 24 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। পরে, 100 μL এমটিটি বিকারক যোগ করা হয়েছিল এবং অন্ধকার অবস্থায় 37 ◦C তাপমাত্রায় 4 ঘন্টার জন্য সেদ্ধ করা হয়েছিল। শোষণ 570 এনএম (ELISA রিডার, Dynatech MR5000, Kloten, সুইজারল্যান্ড) এ পরিমাপ করা হয়েছিল।

আপেক্ষিক কোষের কার্যক্ষমতা (%)=[(570 nm-এ অ্যাসাম্পল − 570 nm-এ অ্যাব্রাঙ্ক)]/[(570-এ অ্যাকন্ট্রোল − অ্যাব্রাঙ্ক 570)] × 100।

নাইট্রোব্লু টেট্রাজোলিয়াম (এনবিটি) রিডাকশন অ্যাস এবং 2,2-ডিফেনাইল-1-পিক্রিলহাইড্রাজিল (ডিপিপিএইচ) অ্যাস: কোষের সংখ্যা 1×1{{10}}6 কোষে সমন্বয় করা হয়েছিল/ mL তারপর, 50 mg/mL ECH, resveratrol (RES), এবং উন্নত গ্লাইকেশন এন্ড-প্রোডাক্ট (AGEs) (নিয়ন্ত্রণ) যোগ করা হয়েছিল এবং 37 ◦C তাপমাত্রায় 18 ঘন্টার জন্য সহ-সংস্কৃতি করা হয়েছিল। তারপর, 0.3 mL NBT দ্রবণ (0.1 mg/mL NBT, 5% FBS, এবং 3% ডাইমিথাইল সালফোক্সাইড (DMSO) 10 mL DMEM-এ দ্রবীভূত করা হয়) যোগ করা হয় এবং 1 ঘন্টার জন্য 5% CO2-তে 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়। সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে (3 মিনিটের জন্য 800 × g এ) সুপারনাট্যান্টটি সরানো হয়েছিল এবং 200 μL DMSO যোগ করা হয়েছিল এবং একটি অতিস্বনক অসিলেটর (ডেল্টা আল্ট্রাসনিক ক্লিনার ডি 200, কিলুং, তাইওয়ান) 5 মিনিটের জন্য ঝাঁকুনি দেওয়া হয়েছিল। শোষণ 630 এনএম এ পরিমাপ করা হয়েছিল। DPPH র‌্যাডিকাল অ্যাসের জন্য, ট্রলক্স (95% অ্যালকোহলে) মান হিসাবে নেওয়া হয়েছিল। তারপর, 0.5 মিমি ডিপিপিএইচ দ্রবণের 75 μL 25 μL নমুনার সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং 30 মিনিটের জন্য একটি অন্ধকার জায়গায় ঘরের তাপমাত্রায় প্রতিক্রিয়া করার অনুমতি দেওয়া হয়েছিল। মিশ্রণটি ঝাঁকানো হয়েছিল এবং শোষণ 517 এনএম এ পরিমাপ করা হয়েছিল।

প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) বিষয়বস্তু বিশ্লেষণ: 2% FBS সমন্বিত একটি 12-ওয়েল প্লেটে সেল নম্বরটি 2 × 105 কোষ/mL এ সামঞ্জস্য করা হয়েছিল। তারপরে, 50 μL/mL ECH, RES, এবং AGEs প্লেটে যোগ করা হয়েছিল এবং 24 ঘন্টার জন্য 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। 24 ঘন্টা পরে, 20,70 -ডিক্লোরোফ্লুরেসসিন-ডায়াসেটেট (ডিসিএফএইচ-ডিএ) যোগ করা হয়েছিল এবং 30 মিনিটের জন্য 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে (400 × g, 5 মিনিট), সুপারনাট্যান্ট সরানো হয়েছিল এবং কোষগুলিকে ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইন (পিবিএস) দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। এর পরে, কোষগুলিকে 1 এমএল পিবিএস-এ স্থগিত করা হয়েছিল এবং একটি ফ্লো সাইটোমিটার (ফ্লো সাইটোমিটার, বেক্টন ডিকিনসন, সিএ, ইউএসএ) ব্যবহার করে ROS-এর স্তরগুলি নির্ধারণ করা হয়েছিল।

প্রোটিন সনাক্তকরণ এবং পরিমাণগত বিশ্লেষণ: প্রোটিন নিষ্কাশন বিকারক (T-PER) ব্যবহার করে প্রোটিন নিষ্কাশন করা হয়েছিল। একটি 12-ওয়েল প্লেটে কোষের ঘনত্ব 2 × 105 কোষ/mL এ সামঞ্জস্য করা হয়েছিল এবং ECH, RES এর 50 μL/mL এবং উন্নত গ্লাইকেশন এন্ডপ্রোডাক্ট (RAGE) প্রতিপক্ষের জন্য একটি রিসেপ্টর এবং AGEs যোগ করা হয়েছিল এবং ইনকিউব করা হয়েছিল 24 ঘন্টার জন্য 5% CO2 ইনকিউবেটরে 37 ◦C তাপমাত্রায়। এর পরে, 400 μL T-PER যোগ করা হয়েছিল, কোষগুলিকে স্ক্র্যাপ করা হয়েছিল এবং 20 মিনিটের জন্য 125,000× g এ সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল (4 ◦C)। আরও বিশ্লেষণের জন্য সুপারনাট্যান্টটি −80 ◦C (−80 ◦C ফ্রিজার, Nuaire, Plymouth, MN, USA) এ সংগ্রহ ও সংরক্ষণ করা হয়েছিল। প্রোটিনের পরিমাণ নির্ণয়ের জন্য একটি বিসিনকোনিনিক অ্যাসিড (BCA) কিট ব্যবহার করা হয়েছিল। তারপর, 10 μL স্ট্যান্ডার্ড সেল সলিউশন এবং 200 μL BCA বিকারককে 8-ওয়েল প্লেটে যোগ করা হয়েছিল এবং 30 মিনিটের জন্য একটি 5% CO2 ইনকিউবেটরে 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল৷ শোষণ 562 এনএম এ পরিমাপ করা হয়েছিল। প্রোটিন সনাক্তকরণ বিশ্লেষণ সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট (SDS)-পলিয়াক্রাইলামাইড জেল (SDS-PAGE) ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা সঞ্চালিত হয়েছিল। প্রোটিন লোডিং বাফারে প্রোটিন লাইসেট যোগ করে নমুনাগুলি প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং নির্দিষ্ট প্রোটিনগুলি সনাক্ত করতে ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

2.2.2। ভিভো বিশ্লেষণে

পশুর মডেল ডিজাইন: ষাটটি {{0}} সপ্তাহ বয়সী পুরুষ স্প্রাগ-ডাউলি (SD) ইঁদুর জাতীয় পরীক্ষাগার প্রাণী কেন্দ্র (তাইপেই, তাইওয়ান) থেকে কেনা হয়েছিল। প্রতিটি ইঁদুরকে পৃথকভাবে জীবাণুনাশক স্টেইনলেস স্টিলের খাঁচায় 12 ঘন্টা আলো/12 ঘন্টা অন্ধকার চক্রের সাথে নিয়ন্ত্রিত তাপমাত্রা (23 ± 1 ◦C) এবং আর্দ্রতা (40-60%) অধীনে রাখা হয়েছিল। খাদ্য ও পানি মর্জিমাফিক উপলব্ধ করা হয়। প্রতিটি ইঁদুরকে প্রথম সপ্তাহে গৃহপালিত করা হয়েছিল এবং প্রধান খাদ্য হিসাবে পরীক্ষাগারে ইঁদুরের খাদ্য 5001 দেওয়া হয়েছিল। সমস্ত পদ্ধতি ন্যাশনাল তাইওয়ান ওশান ইউনিভার্সিটি, তাইওয়ানের ইনস্টিটিউশনাল অ্যানিমাল কেয়ার অ্যান্ড ইউজ কমিটির (IACUC অনুমোদন নং 101026) মান অনুসরণ করে। গৃহপালিত হওয়ার পরে, ইঁদুরগুলিকে দুটি গ্রুপে ভাগ করা হয়েছিল: নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ (কন) যাকে ল্যাব ডায়েট 5001 খাওয়ানো হয়েছিল এবং ডায়াবেটিক গ্রুপ যাকে পুরো পরীক্ষার জন্য একটি উচ্চ-চর্বিযুক্ত খাদ্য (HFD, 40%) খাওয়ানো হয়েছিল। 4 সপ্তাহ ধরে এইচএফডি খাওয়ানোর পর, ডায়াবেটিক গ্রুপের ইঁদুরকে ডায়াবেটিস মেলিটাস (ডিএম) প্ররোচিত করার জন্য স্ট্রেপ্টোজোটোসিন (65 মিলিগ্রাম/কেজি) (এসটিজেড) ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। STZ ইনজেকশন দেওয়ার 15 মিনিটের মধ্যে, নিকোটিনামাইড (230 মিলিগ্রাম/কেজি শরীরের ওজন) ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। ইনজেকশনের এক সপ্তাহ পরে, ডায়াবেটিক মেলিটাস (ডিএম) এর সফল আনয়ন নির্ধারণের জন্য একটি ওরাল গ্লুকোজ সহনশীলতা পরীক্ষা (ওজিটিটি) পরিচালিত হয়েছিল। এর পরে, প্রাণীগুলিকে ছয়টি দলে ভাগ করা হয়েছিল: নিয়ন্ত্রণ (ল্যাব ডায়েট 5001 দিয়ে খাওয়ানো); DM গ্রুপ (DM + 45% HFD); DMR গ্রুপ (DM + rosiglitazone: 0.571 mg/kg BW) + 45% HFD; DME1 গ্রুপ (DM + CTE: 80 mg/kg BW) + 45% HFD; DME2 গ্রুপ (DM + CTE: 160 mg/kg BW) + 45% HFD; এবং DME4 গ্রুপ (DM + CTE: 320 mg/kg BW) + 45% HFD। রোজিগ্লিটাজোন (আরএসজি) ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে নেওয়া হয়েছিল। তাইওয়ান ফুড অ্যান্ড ড্রাগ অ্যাডমিনিস্ট্রেশন (TFDA) স্বাস্থ্য খাদ্য কার্যকরী মূল্যায়ন নির্দেশিকাগুলির সুপারিশ অনুসারে CTE (80, 160, এবং 320 mg/kg) এর তিনটি ডোজ ব্যবহার করা হয়েছিল। পরীক্ষা শেষ না হওয়া পর্যন্ত চিকিৎসা দেওয়া হয়। সমস্ত পরীক্ষামূলক ইঁদুর 6 সপ্তাহ পরে বলি দেওয়া হয়েছিল। ইঁদুর থেকে সংগৃহীত রক্ত ​​3000 rpm-এ 15 মিনিটের জন্য 4 ◦C তাপমাত্রায় সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। নিম্নলিখিত বিশ্লেষণের জন্য সুপারনাট্যান্ট পরীক্ষা করা হয়েছিল:

মোট গ্লুকোজ, ট্রাইগ্লিসারাইড এবং কোলেস্টেরল নির্ণয়: গ্লুকোজ এনজাইমেটিক কিট দ্বারা গ্লুকোজ নির্ধারণ করা হয়েছিল। তারপরে, 20 μL রক্তের প্লাজমা নমুনা রিএজেন্টগুলিতে যুক্ত করা হয়েছিল এবং 5 মিনিটের জন্য 37 ◦C এ রাখা হয়েছিল। ট্রাইগ্লিসারাইড এবং কোলেস্টেরল এনজাইমেটিক কিট ব্যবহার করে মোট ট্রাইগ্লিসারাইড এবং মোট কোলেস্টেরলের ঘনত্ব নির্ধারণ করা হয়েছিল। তারপরে, 10 μL রক্তের প্লাজমা রিএজেন্টগুলিতে যুক্ত করা হয়েছিল এবং পরীক্ষাটি প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে পরিচালিত হয়েছিল। শোষণ 510 এনএম এ পরিমাপ করা হয়েছিল।

প্লাজমা মোট গ্লুকোজ/ট্রাইগ্লিসারাইড/কোলেস্টেরল (mg/dL)=(Asample − ABlank)/(Astandard − ABlank) × 200।

উদাহরণ: রক্তের নমুনার শোষণ, শূন্য: নমুনা ছাড়া কিটের শোষণের মান, আদর্শ: স্ট্যান্ডার্ড রিএজেন্টের শোষণের মান, 200: 200 মিগ্রা/ডিএল ঘনত্বে স্ট্যান্ডার্ড রিএজেন্ট।

ইনসুলিন, লেপটিন এবং হোমিওস্ট্যাটিক মডেল অ্যাসেসমেন্ট-ইনসুলিন রেজিস্ট্যান্স (HOMA-IR) নির্ধারণ:ইনসুলিনের মাত্রা ইনসুলিন ELISA কিট দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। এখানে, 25µরক্তের প্লাজমা এল যোগ করা হয়েছিলবিকারক, এবং শোষণ 450 এনএম এ পরিমাপ করা হয়েছিল। একটি ব্যবহার করে মোট লেপটিন সামগ্রী নির্ধারণ করা হয়েছিললেপটিন এনজাইম ইমিউনোমেট্রিক অ্যাসে কিট।তারপর, 100µপ্লাজমার এল বিশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং শোষণ করা হয়েছিলএকটি ELISA রিডার ব্যবহার করে 450 এনএম পরিমাপ করা হয়েছিল। পুরো পরীক্ষা অনুযায়ী পরিচালিত হয়প্রস্তুতকারকের নির্দেশাবলী। HOMA-IR মান হোমিওস্টেসিস মডেল থেকে নির্ধারিত হয়েছিলমূল্যায়ন সমীকরণ=ফাস্টিং প্লাজমা ইনসুলিন ঘনত্ব (mg/mL)× রোযা রক্তরস গ্লুকোজঘনত্ব (mmol/L)/22.5।

প্লাজমা লিপিড পারক্সিডেশন: এখানে, {{0}}.5 মিলি রক্তের প্লাজমা 1 মিলি বিকারক (15%, w/v ট্রাইক্লোরোএসেটিক অ্যাসিড 0.25 N হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড (HCl) এর সাথে মেশানো হয়েছিল ) এবং 0.375%, w/v থিওবারবিটুরিক অ্যাসিড 0.25 N HCl) এবং একটি জল স্নানে (ওয়াটার বাথ, BUCHI 461, জুরিখ, সুইজারল্যান্ড) 100 ◦C তাপমাত্রায় 15 মিনিটের জন্য রাখা হয়। ঠান্ডা হওয়ার পরে, 1 মিলি এন-বুটানল যোগ করা হয়েছিল, জোরে ঝাঁকুনি দেওয়া হয়েছিল, এবং 10 মিনিটের জন্য 1500 × গ্রাম সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং শোষণটি 532 এনএম [12] এ পরিমাপ করা হয়েছিল।

ম্যালোন্ডিয়ালডিহাইড (MDA) ঘনত্ব (nM/mL)=[(532 nm − Ablank at 532 nm)/ (532 nm এ একটি মান − 532 nm এ অ্যাব্রাঙ্ক)] × 5।

মান 532 nm − Ablank at 532 nm)] × 5. প্লাজমা টেস্টোস্টেরন এবং লুটেইনাইজিং হরমোন (LH) মাত্রা নির্ধারণ: রক্তের প্লাজমাতে টেস্টোস্টেরনের মাত্রা পরিমাপ করতে টেস্টোস্টেরন ELISA কিট ব্যবহার করা হয়েছিল। LH ঘনত্ব নির্ধারণ করতে RIA কিট ব্যবহার করা হয়েছিল। তারপর, 50 μL প্লাজমা যোগ করা হয়েছিল এবং গণনাগুলি এলএইচ-আরপি-3 (মান) হরমোনের ঘনত্বের উপর ভিত্তি করে করা হয়েছিল। পরবর্তী পদক্ষেপগুলি প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে পরিচালিত হয়েছিল।

টিউমার নেক্রোসিস ফ্যাক্টর (TNF)- এবং ইন্টারলিউকিন-6 (IL-6) ঘনত্বের নির্ণয়: ক্যাপচার করা অ্যান্টিবডিটি আবরণ বাফারে 250 বার পাতলা করা হয়েছিল, একটি 96- যোগ করা হয়েছিল ওয়েল প্লেট (100 μL/ওয়েল), এবং 4 ◦C তাপমাত্রায় রাতারাতি রাখা। সুপারনাট্যান্টকে অ্যাসপিরেটেড করা হয়েছিল এবং ওয়াশিং বাফার দিয়ে পাঁচবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল (1 বার পিবিএস, 0.05% টুইন 20)। 200 µg অ্যাস ডাইলুয়েন্ট দিয়ে ইনকিউবেশনের (1 ঘন্টা) পরে, কোষগুলি ওয়াশিং বাফার দিয়ে 5 বার ধোয়া হয়েছিল এবং প্রতিটি কূপে 100 μL টিএনএফ- স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণ বা পরীক্ষার নমুনা যোগ করা হয়েছিল এবং 2 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। ধোয়ার পর, 100 µL IL-6-শনাক্ত করা অ্যান্টিবডি যোগ করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘণ্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। সুপারনেট্যান্টটি অ্যাসপিরেটেড ছিল এবং 5 বার ধুয়েছিল। তারপরে, 480 μL এনজাইম অ্যাভিডিন-হরসাররাডিশ পারক্সিডেস (এইচআরপি) যোগ করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। সুপারন্যাট্যান্টটি অ্যাসপিরেটেড ছিল এবং একটি ওয়াশিং বাফার দিয়ে পাঁচবার ধুয়েছিল। তারপরে, 100 μL সাবস্ট্রেট দ্রবণ যোগ করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় 15 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। পরে, প্রতিটি কূপে 50 μL স্টপ দ্রবণ (1M ফসফরিক অ্যাসিড) যোগ করা হয়েছিল এবং শোষণ 450 nm পরিমাপ করা হয়েছিল।

PHGS75% ECH 30% ACT 12%

শুক্রাণু এবং টেস্টিস পরামিতি বিশ্লেষণ

শুক্রাণু নমুনা সংগ্রহ: শুক্রাণু নমুনা সংগ্রহ পূর্বে [13] এ রিপোর্ট করা পদ্ধতি অনুযায়ী সঞ্চালিত হয়েছিল। শুক্রাণু সুপারনাট্যান্ট থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং আরও বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।

শুক্রাণুর সংখ্যা, শুক্রাণুর গতিশীলতা এবং অস্বাভাবিক শুক্রাণু: হিমোসাইটোমিটার এবং ট্রাইপ্যান ব্লু দ্রবণ ব্যবহার করে শুক্রাণুর সংখ্যা গণনা করা হয়েছিল। তারপরে, 100 μL শুক্রাণু তরল ট্রিপ্যান নীল দ্রবণের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং হিমোসাইটোমিটার এবং মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে শুক্রাণু, গতিশীলতা এবং অস্বাভাবিক শুক্রাণুর সংখ্যা গণনা করা হয়েছিল [14]।

নাইট্রো ব্লু টেট্রাজোলিয়াম এনবিটি হ্রাস এবং শুক্রাণু এবং টেস্টিসের লিপিড পারক্সিডেশন: লিপিড পারক্সিডেশন এবং এনবিটি হ্রাস প্লাজমা বিশ্লেষণের একই পদ্ধতি অনুসারে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

সুপারঅক্সাইড ডিসম্যুটেজ (এসওডি) এবং ক্যাটালেস কার্যকলাপ নির্ধারণ: সুপারঅক্সাইড ডিসম্যুটেজ (এসওডি) কার্যকলাপ RANSEL কিট ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। এখানে, {{0}}।{6}}প্রতিক্রিয়া দ্রবণের 1.7 মিলিলিটার (0.05 mM xanthine, 0.025 mM 2-({6}}) টেস্টিকুলার হোমোজেনেটের 5 মিলিলিটার যোগ করা হয়েছিল {9}}আইডোফেনাইল)- 3-(4-নাইট্রোফেনল)-5-ফেনাইলটেট্রাজোলিয়াম ক্লোরাইড (আইএনটি))। মেশানোর পরে, 0.25 মিলি জ্যান্থাইন অক্সিডেস (80 ইউ/এল) যোগ করা হয়েছিল এবং 30 সেকেন্ডের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় প্রতিক্রিয়া করা হয়েছিল। শোষণ 505 এনএম এ পরিমাপ করা হয়েছিল। টেস্টিকুলার হোমোজেনেটের প্রোটিন ঘনত্ব বায়ো-র্যাড ডিসি প্রোটিন অ্যাস কিট দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল এবং এর নির্দিষ্ট কার্যকলাপ (U/mg প্রোটিন) গণনা করা হয়েছিল। ক্যাটালেস (ক্যাট) কার্যকলাপ পূর্বে উল্লিখিত পদ্ধতি অনুসারে নির্ধারিত হয়েছিল [15]।

H&E (হেমাটক্সিলিন এবং ইওসিন) স্টেনিং

টেস্টিসকে 10% ফরমালিন 24 ঘন্টার জন্য ভিজিয়ে রাখা হয়েছিল এবং 4 ◦C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়েছিল। টিস্যুগুলি মাইক্রো আকারে ছিল এবং স্লাইডের সাথে সংযুক্ত ছিল। স্থিরকরণের পর (95% মিথানল + 5% অ্যাসিটিক অ্যাসিড), স্লাইডগুলিকে 3 মিনিটের জন্য হেমাটক্সিলিনের মধ্যে ডুবিয়ে রাখা হয়েছিল, 5 মিনিটের জন্য প্রবাহিত জলে ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল এবং তারপরে 50%, 70% এবং 90% অ্যালকোহল দিয়ে ভিজিয়ে রাখা হয়েছিল। এক মিনিট. এর পরে, স্লাইডগুলিকে 10 সেকেন্ডের জন্য ইওসিন দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল এবং এটি ম্লান না হওয়া পর্যন্ত এক মিনিটের জন্য 100% অ্যালকোহলে ভিজিয়ে রাখা হয়েছিল। অবশেষে, স্লাইডটি এক মিনিটের জন্য জাইলিনে ভিজিয়ে রাখা হয়েছিল। পরে, স্লাইডটি বাতাসে শুকানো এবং সিল করা হয়েছিল। দাগযুক্ত টিউবটিকে একটি ইনভার্টেড ফেজ কন্ট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপে (ইনভার্টেড ফেজ ডিফারেন্স মাইক্রোস্কোপ, অলিম্পাস সিকে-2, টোকিও, জাপান) রাখা হয়েছিল রূপবিদ্যা পর্যবেক্ষণ করার জন্য।

হাইপোথ্যালামাসের বিশ্লেষণ

মাউস KISS1, G-প্রোটিন কাপলড রিসেপ্টর (GPR) 54, সাইটোকাইন সিগন্যালিং 3 (SOCS-3) এর দমনকারী, এবং sirtuin 1 (SIRT1) জিন সিকোয়েন্সগুলি NCBI (ন্যাশনাল সেন্টার ফর বায়োটেকনোলজি ইনফরমেশন) জিন ডেটাবেস থেকে সনাক্ত করা হয়েছিল এবং প্রাইমার 5 ব্যবহার করে একটি নির্দিষ্ট প্রাইমার ডিজাইন করা হয়েছিল৷{8}} প্রিমিয়ার বায়োসফ্ট, পালো অল্টো, CA, USA৷) পরীক্ষায় ব্যবহৃত প্রাইমারগুলি সারণি 1 এ তালিকাভুক্ত করা হয়েছে।

হাইপোথ্যালামাস থেকে রিবোনিউক্লিক অ্যাসিড (আরএনএ) নিষ্কাশন। RNeasy লিপিড টিস্যু মিনি কিট ব্যবহার করে মস্তিষ্কের হাইপোথ্যালামাস থেকে আরএনএ নিষ্কাশন করা হয়েছিল। প্রাপ্ত এমআরএনএগুলি রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন (আরটি) এবং পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া (পিসিআর) দ্বারা পরিমাণগতভাবে পরিমাপ করা হয়েছিল। আরটি বিশ্লেষণ থেকে প্রাপ্ত প্রশংসা ডিএনএ পরবর্তী ব্যবহারের জন্য −20 ◦C এ সংরক্ষণ করা হয়েছিল। নিষ্কাশিত ডিএনএ টাক পলিমারেজ ব্যবহার করে পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া (পিসিআর) বিশ্লেষণের শিকার হয়েছিল। তারপরে, পিসিআর পণ্যের 5 ~ 10 μL নেওয়া হয়েছিল এবং 1.5% আগর কলয়েডের ইলেক্ট্রোফোরসিস দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ছবিটি একটি UVP BioDoc-It ইমেজিং সিস্টেমে তোলা হয়েছে। বিপরীত-লিপিকৃত পরিপূরক ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিক অ্যাসিড (সিডিএনএ) নেওয়া হয়েছিল এবং আইকিউ এসওয়াইবিআর গ্রিন সুপারমিক্স কিট ব্যবহার করে পিসিআর করা হয়েছিল। পরে, এটি আইকিউটিএম 5 অপটিক্যাল সিস্টেম সফ্টওয়্যার দিয়ে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। প্রোটিন নিষ্কাশন বিকারক (T-PER) ব্যবহার করে প্রোটিন নিষ্কাশন করা হয়েছিল। তারপর, 400 μL T-PER এর সাথে 20 মিলিগ্রাম টেস্টিকুলার হোমোজেনেট যোগ করা হয়েছিল এবং 4 ◦C (125,000×g) সেন্ট্রিফিউজড (হাই-স্পিড সেন্ট্রিফিউজ, হেটিচ সিআর-12, টুটলিংজেন, জার্মানি) ) 20 মিনিটের জন্য। নিম্নলিখিত পদ্ধতিটি ভিট্রো বিশ্লেষণে "প্রোটিনের সনাক্তকরণ এবং পরিমাণ নির্ণয়ের বিশ্লেষণ" এর মতো ছিল।

2.3। পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

পরীক্ষামূলক ফলাফলগুলিকে গড় ± মান বিচ্যুতি (মান ± SD) হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল এবং পরিসংখ্যানগত পণ্য ও পরিষেবা সমাধান (SPSS) 11৷{1}} সফ্টওয়্যার, IBM, Armonk, New York, NY, USA ব্যবহার করে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল৷ গোষ্ঠীগুলির মধ্যে পার্থক্যগুলি বৈচিত্র্যের একমুখী বিশ্লেষণ (ANOVA) দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ডানকানের পরীক্ষা দ্বারা p < 0.05 মূল্যের উল্লেখযোগ্য স্তর হিসাবে বিভিন্ন গ্রুপের একাধিক তুলনা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

3। ফলাফল

3.1। ভিট্রো বিশ্লেষণে

3.1.1। ECH, CTE, এবং RES এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপের তুলনা

দীর্ঘমেয়াদী জউচ্চ অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং দীর্ঘস্থায়ী প্রদাহ ডায়াবেটিসের প্রধান কারণজটিলতা [16]। CTE গুলি বিভিন্ন ধারণ করেphenylethanoid glycosides যেমন echinacoside(ECH) এবং অ্যাক্টিওসাইডঅ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপের সম্ভাবনা সহ [17]। DPPH র্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জিংECH এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্রিয়াকলাপ মূল্যায়ন করার জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল। ট্রলক্স এবং রেসভেরাট্রল(3,5,4'-ট্রাইহাইড্রোক্সিস্টিলবেন, আরইএস) যথাক্রমে স্ট্যান্ডার্ড এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে নেওয়া হয়েছিল। হিসাবে দেখানো হয়েছেচিত্রে1, ECH ভাল র্যাডিকাল স্ক্যাভেঞ্জিং কার্যকলাপ দেখিয়েছে এবং কার্যকলাপ উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিলইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ (RES) এর চেয়ে।

3.1.2। LC-540 এবং TM3 Leydig কোষে ECH এর কোষের কার্যকারিতা

ECH এর বিভিন্ন ঘনত্বের কোষের কার্যকারিতা মূল্যায়নের জন্য MTT অ্যাস করা হয়েছিল। LC-540 Leydig কোষ এবং TM3 Leydig কোষগুলি ECH (চিত্র 2) দিয়ে চিকিত্সা করার পরে 80% এর বেশি কার্যকারিতা দেখায়। অন্যান্য ঘনত্বের তুলনায়, ECH এর একটি 100-µM ঘনত্ব (2% FBS-এ 100 µM এর পাতলা) TM3 লেডিগ কোষে আরও ভাল কোষের কার্যকারিতা দেখায়। ফলাফলটি নির্দেশ করে যে ECH এর বর্ধিত ঘনত্ব কোষগুলিতে কোনও উল্লেখযোগ্য বিষাক্ততা অবদান রাখে না।

3.1.3। LC-540 এবং TM3 Leydig কোষে NBT অ্যাস দ্বারা AGE-প্ররোচিত সুপারঅক্সাইড উৎপাদনে ECH-এর প্রভাব

গ্লুকোজের অক্সিডেশন এবং O2-, হাইড্রক্সিল র‌্যাডিক্যাল এবং কার্বনাইল গ্রুপের মতো ফ্রি র‌্যাডিক্যাল তৈরির কারণে AGEs শরীরে অক্সিডেটিভ ক্ষতির কারণ হয় [১৮]। 50 ug/mL AGEs দিয়ে উদ্দীপিত হওয়ার পরে, LC-540 (চিত্র 3a) এবং TM3 (চিত্র 3b) কোষগুলিকে ECH এবং RES (5 μM এবং 10 μM প্রতিটি) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি দেখায় যে কন্ট্রোল গ্রুপে (উদ্দীপিত AGEs) সুপারঅক্সাইড অ্যানিয়নের উত্পাদন বৃদ্ধি পেয়েছিল, তবে নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের (উত্তেজক AGEs) পরে সুপারঅক্সাইড অ্যানিয়নের উত্পাদন হ্রাস পেয়েছে, তবে সুপারঅক্সাইড অ্যানিয়নের উত্পাদন সুপারঅক্সাইড উত্পাদনের পরে হ্রাস পেয়েছে এবং সুরক্ষিত। অক্সিডেটিভ ক্ষতি থেকে কোষ. LC-540 কোষের ক্ষেত্রে, 10 µM ECH স্বাভাবিক গোষ্ঠীর সাথে প্রায় একই ধরনের কার্যকলাপ দেখায়। উভয় কোষে সুপারঅক্সাইড উৎপাদন ECH এবং RES উভয়ের ঘনত্ব বৃদ্ধির সাথে হ্রাস পেয়েছে।

PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.1.4। AGE-উদ্দীপিত LC-540 Leydig কোষে H2O2 উৎপাদনে ECH-এর প্রভাব

অক্সিডেটিভ প্রজাতির উপস্থিতি সনাক্ত করতে ডিসিএফএইচ-ডিএ অ্যাস চালানো হয়েছিল। কোষে প্রবেশ করার পর, ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জক DCFH-DA অন্তঃকোষীয় H2O2 দ্বারা জারিত হয় এবং ডাইক্লোরোফ্লুরেসসিন (DCF) গঠন করে। চিত্র 4-এ দেখানো হয়েছে, AGE-উদ্দীপিত গ্রুপে (নিয়ন্ত্রণ) অন্তঃকোষীয় H2O2 উৎপাদনে উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি ঘটেছে যেখানে 10 µM ECH এবং RES যোগ করার ফলে কোষে H2O2 উৎপাদন উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। 10 µM ECH প্রশাসনের ফলে H2O2 উৎপাদনের মাত্র 47.1% হয়েছে, যা নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে কম।

3.1.5। AGE-উদ্দীপিত LC-540 লেডিগ কোষে RAGE এবং NF-κB প্রোটিন এক্সপ্রেশন লেভেলে ECH-এর প্রভাব

LC-540 Leydig কোষে RAGE এর উপস্থিতি নিশ্চিত করতে ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। AGEs-উদ্দীপিত লেডিগ কোষে RAGE (চিত্র 5a) এবং NF-κB (চিত্র 5b) প্রোটিন এক্সপ্রেশন স্তরের উপর ECH-এর প্রভাব চিত্র 5-এ দেখানো হয়েছে। ফলাফলে দেখা গেছে যে AGE-এর 50 µg/mL ঘনত্ব উচ্চতর RAGE এবং NF-কে প্ররোচিত করেছে। LC-540 লেডিগ কোষে κB এক্সপ্রেশন এবং ECH এবং RES-এর 10 µM ঘনত্ব RAGE এবং NF-κB-এর অভিব্যক্তিকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে। RAGE বিরোধীদের তুলনায় RES এবং ECH-তে NF-κB-এর অভিব্যক্তি উল্লেখযোগ্যভাবে কম ছিল। সুতরাং, ফলাফলগুলি নিশ্চিত করেছে যে ECH RAGE এবং NF-κB এর স্তর হ্রাস করে প্রদাহের মাত্রা হ্রাস করেছে।

3.1.6। AGE-Stimulated LC-540 Leydig কোষে টেস্টোস্টেরন সংশ্লেষণ পথের উপর ECH-এর প্রভাব।

স্পার্মাটোজেনেসিস এবং পুরুষ বন্ধ্যাত্বের প্রক্রিয়া টেস্টোস্টেরনের উপস্থিতির উপর নির্ভর করে। চিত্র 6-এ দেখানো হয়েছে, STAR (চিত্র 6a), CYP11A1 (চিত্র 6b), CYP17A1 (চিত্র 6c), এবং HSD17 3 (চিত্র 6d) প্রোটিনের অভিব্যক্তিগুলি AGE-উদ্দীপিত LC-তে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে{11 }} লেডিগ কোষ (নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ)। স্টার, CYP11A1, CYP17A1, এবং HSD17 3 প্রোটিনের অভিব্যক্তি উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে যখন RAGE বিরোধী, RES, এবং ECH যোগ করা হয়েছিল। স্টার এবং CYP11A1 প্রোটিনের বর্ধিত অভিব্যক্তি ECH- এবং RES-চিকিত্সা করা উভয় গ্রুপেই দেখা গেছে। CYP17A1 এর অভিব্যক্তি স্তর RES এবং ECH গ্রুপগুলিতে প্রায় একই রকম ছিল। ECH-চিকিত্সা করা Leydig কোষে HSD17 3 প্রোটিনের অভিব্যক্তি RES এবং RAGE বিরোধী-চিকিত্সা করা কোষগুলির তুলনায় অনেক বেশি। স্টার, CYP11A1, CYP17A1, এবং HSD17 3 প্রোটিনের বর্ধিত প্রকাশ টেস্টোস্টেরনের স্বাভাবিক উৎপাদন নির্দেশ করে।