ইচিনাকোসাইড HBX/TREM2-মিডিয়াটেড NF-κB সিগন্যালিং পাথওয়ে ব্লক করে মানুষের রেনাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষের বিস্তারকে প্রচার করে

যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com

YuFan ZHang, QinFanG Wu, LiMin ZHong, DonGWei GonG

বিমূর্ত.

হেপাটাইটিস বি ভাইরাস এক্স (এইচবিএক্স) প্রোটিন এইচবিভির প্রতিলিপির জন্য প্রয়োজন এবং মানুষের মধ্যে হেপাটাইটিসের অগ্রগতিতে ভূমিকা পালন করে। যাইহোক, HBV-প্ররোচিত দীর্ঘস্থায়ী গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস (HBV-Gn) এর সময় HBX-এর অন্তর্নিহিত কাজটি অজানা। (cistanche থেকে echinacoside)(ecH) হল সিস্টানচে জেনাসের একটি ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড, যা শক্তিশালী অ্যান্টিঅ্যাপোপ্টোসিস এবং নিউরোপ্রোটেক্টিভ কার্যকলাপের অধিকারী। বর্তমান গবেষণায়, মানব রেনাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষে (rTecs; HK-2 সেল লাইন) HBX-এর কাজ এবং HBX এবং ecH-এর মধ্যে সম্পর্ক অন্বেষণ করা হয়েছে। বিপরীত প্রতিলিপি-পরিমাণগত Pcr এবং ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণগুলি যথাক্রমে HK-2 কোষে HBX-এর mRNA এবং প্রোটিন এক্সপ্রেশন মাত্রা পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। সেল কাউন্টিং কিট-8 অ্যাস কোষের বিস্তার বিশ্লেষণ করার জন্য সঞ্চালিত হয়েছিল। অ্যাপোপটোসিসের হার নির্ধারণ করতে ফ্লো সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণ ব্যবহার করা হয়েছিল। এইচবিএক্স এইচকে-2 কোষে অ্যান্টিপ্রোলিফেরেটিভ এবং প্রোপোপটোটিক প্রভাব দেখিয়েছে এবং ইতিবাচকভাবে মাইলয়েড সেল 2 (TreM2) এক্সপ্রেশনে প্রকাশিত ট্রিগারিং রিসেপ্টরের সাথে যুক্ত ছিল। উপরন্তু, ECH HK-2 কোষে HBX-এর কার্যকারিতা ব্যাহত করে, HBX দমনকারী হিসেবে কাজ করে। অধিকন্তু, একটি নির্দিষ্ট NF-κB ইনহিবিটার, PdTc, HBX এবং nF-κB-এর মধ্যে সম্পর্ক আরও পরীক্ষা করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে nF-κB HBX/TreM2 সিগন্যালিং পাথওয়েতে জড়িত ছিল এবং RTECS-এ নেতিবাচকভাবে নিয়ন্ত্রিত TreM2 অভিব্যক্তি। বর্তমান অধ্যয়নটি HBX-এর কার্যকারিতা সম্পর্কে অভিনব অন্তর্দৃষ্টি প্রদান করেছে এবং HBV-Gn-এর জন্য একটি থেরাপিউটিক এজেন্ট হিসাবে ECH-এর সম্ভাব্য মান নির্দেশ করেছে।

ভূমিকা

হেপাটাইটিস বি ভাইরাস (HBV) একটি Hepadnaviridae ভাইরাস, যা মানুষের মধ্যে তীব্র এবং দীর্ঘস্থায়ী হেপাটাইটিসের দিকে পরিচালিত করে (1)। এইচবিভি, শুধুমাত্র লিভারে ক্রমাগত বা ক্ষণস্থায়ী সংক্রমণ ঘটায় না বরং অগ্ন্যাশয়, পিত্ত নালী, লিম্ফয়েড সিস্টেম এবং কিডনি (2) সহ এক্সট্রাহেপ্যাটিক টিস্যুকেও সংক্রমিত করে। অধিকন্তু, এইচবিভি সংক্রমণ দীর্ঘস্থায়ী গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস (এইচবিভি-জিএন) এর সাথে ঘনিষ্ঠভাবে জড়িত; তবে, HBV-Gn-এর সময় HBV-এর আণবিক প্রক্রিয়া সম্পূর্ণরূপে বোঝা যায় না (3,4)।

HBV রেগুলেটরি হেপাটাইটিস বি ভাইরাস এক্স (HBX) প্রোটিন HBV প্রতিলিপির জন্য প্রয়োজন (5,6)। বেশ কয়েকটি গবেষণা রিপোর্ট করেছে যে HBX HBV সংক্রমণ-সম্পর্কিত হেপাটোকার্সিনোমা (7-9) চলাকালীন কোষের বিস্তারকে উৎসাহিত করে। হিউম্যান রেনাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষ (rTecs) রেনাল টিউবুলার ইন্টারস্টিশিয়ামের একটি প্রধান অংশ এবং রেনাল প্রদাহে সক্রিয় ভূমিকা পালন করে (10)। rTec অ্যাপোপটোসিস টিউবুলার ইন্টারস্টিশিয়ামের কর্মহীনতার সাথে ঘনিষ্ঠভাবে জড়িত, যা পরবর্তীকালে এইচবিভি-জিএন (10) এর অগ্রগতির দিকে পরিচালিত করে। HBX প্রাথমিকভাবে rTec কোষে প্রকাশ করা হয় এবং HBV-Gn (11,12) রোগীদের মধ্যে rTec অ্যাপোপটোসিস এবং রেনাল টিউব ক্ষত সৃষ্টি করে। অধিকন্তু, HBX ইঁদুর rTecs (13) এর বিস্তারকে দমন করার জন্য রিপোর্ট করা হয়েছে, এবং HBX ওভার এক্সপ্রেশন প্রাথমিক rTecs-এ G1 থেকে S পর্যায়ে কোষ চক্রের অগ্রগতিকে ত্বরান্বিত করে, যার ফলে S পর্বে (14) কোষ চক্র আটক হয়। অতএব, একটি এইচবিএক্স ইনহিবিটার সনাক্ত করা HBV-Gn-এর জন্য একটি অভিনব থেরাপিউটিক প্রদান করতে পারে। যাইহোক, মানব rTecs-এ HBX-এর সুনির্দিষ্ট আণবিক নেটওয়ার্ক সম্পূর্ণরূপে বোঝা যায় না।(cistanche থেকে echinacoside)(ecH) একটি প্রাকৃতিক যৌগ যা থেকে বের করা হয়সিস্তানচেগাছপালা, যা অ্যান্টিঅ্যাপোপ্টোটিক এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি প্রভাব দেখায় (15,16)। পূর্ববর্তী একটি সমীক্ষা জানিয়েছে যে ecH বিস্তারকে প্ররোচিত করে এবং অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষগুলির অ্যাপোপটোসিস প্রতিরোধ করে (17)। অধিকন্তু, ecH অস্টিওব্লাস্ট কোষের বিস্তার বৃদ্ধি করে হাড়ের পুনর্জন্মকে ত্বরান্বিত করে বলে জানা গেছে (18)। ecH এছাড়াও HBV প্রতিলিপি, অ্যান্টিজেন এক্সপ্রেশন এবং ইঁদুরের অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষে প্রদাহ হ্রাস করতে পারে (16,19)। যাইহোক, rTecs-এ ecH এর জৈবিক প্রভাব সম্পূর্ণরূপে ব্যাখ্যা করা হয়নি।

TreM2 ওভারএক্সপ্রেশন গ্লিওমা কোষের বিস্তারকে উন্নীত করেছে (22)। বিপরীতে, TreM2 নকডাউন ডিজেনারেটিভ হিউম্যান নিউক্লিয়াস পালপোসাস কোষে (23) নিউক্লিয়াসে nF-κB-এর স্থানান্তর হ্রাস করে। তদ্ব্যতীত, TreM2 মানুষের ইন্টারভারটেব্রাল ডিস্ক অবক্ষয়ের জন্য একটি অভিনব থেরাপিউটিক লক্ষ্য হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে (23)। যাইহোক, মানব rTecs-এ TreM2 এর জৈবিক ফাংশন রিপোর্ট করা হয়নি। বর্তমান গবেষণায়, HBX ওভার এক্সপ্রেশন (oeHBX) মানুষের rTecs (HK-2 সেল লাইন) এবং পরবর্তীকালে, ecH(cistanche থেকে echinacoside) স্থানান্তরিত oeHBX কোষগুলিতে তদন্ত করা হয়েছিল। বর্তমান অধ্যয়নের লক্ষ্য ছিল HBX-এর কার্যকারিতা এবং HBV-Gn-এর জন্য কার্যকর থেরাপিউটিক এজেন্ট হিসাবে ECH এর সম্ভাব্য মান তদন্ত করা।

উপকরণ এবং পদ্ধতি

সেল সংস্কৃতিহিউম্যান rTec সেল লাইন HK-2 সাংহাই ইয়াজি বায়োটেকনোলজি কো. লিমিটেড থেকে কেনা হয়েছে। HK-2 কোষগুলিকে DME/F12 মিডিয়াতে (cat. no. SH30023.01B; Hyclone; cytiva) 10 শতাংশ ভ্রূণের বোভাইন সিরাম (বিড়াল নং 16000‑044; Gibco; থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ) দিয়ে পরিপূরক করা হয়েছিল .), 2 মিমি এল-গ্লুটামিন এবং 1 শতাংশ পেনিসিলিন/স্ট্রেপ্টোমাইসিন (বিড়াল নং পি1400-100; বেইজিং সোলারবিও সায়েন্স অ্যান্ড টেকনোলজি কো. লিমিটেড) 5 শতাংশ CO2 সহ 37˚C তাপমাত্রায়।

আরএনএ আলাদা করা এবং বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন-পরিমাণগত পিসিআর (RT-qPCR)।প্রস্তুতকারকের প্রোটোকল অনুসারে, Trizol® (cat. no. 1596 -026; Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, inc.) ব্যবহার করে HK-2 কোষ থেকে মোট আরএনএ বের করা হয়েছিল। প্রস্তুতকারকের প্রোটোকল (বিড়াল নং K1622; থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ইনক।) অনুসারে ফার্স্ট-স্ট্র্যান্ড সিডিএনএ সিন্থেসিস কিট ব্যবহার করে মোট আরএনএকে সিডিএনএ-তে বিপরীতভাবে প্রতিলিপি করা হয়েছিল। qPCR নির্মাতার প্রোটোকল (বিড়াল নং K0223; থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ইনক.) অনুযায়ী একটি ABI-7300 রিয়েল-টাইম ডিটেক্টর (অ্যাপ্লাইড বায়োসিস্টেম; থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ইনক.) অনুযায়ী SYBr-গ্রিন প্রিমিক্স ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল। পিসিআর-এর শর্তগুলি ছিল: 10 মিনিটের জন্য 95˚C তারপর 15 সেকেন্ডের জন্য 95˚C এর 40টি চক্র, 45 সেকেন্ডের জন্য 60˚C। প্রতিটি প্রতিক্রিয়ার জন্য তিনটি পুনরাবৃত্তি প্রয়োজন ছিল। qPCR-এর জন্য নিম্নলিখিত প্রাইমার জোড়া ব্যবহার করা হয়েছিল: HBX ফরোয়ার্ড, 5'-GGcTGcTaGGTTGTacTG-3' এবং বিপরীত, 5'-caGaGGTGaaGcGaaGTG -3'; TreM2 ফরোয়ার্ড, 5'-TGGcacTcTcaccaTTacG-3' এবং বিপরীত, 5'-ccTccc aTcaTcTTccTTcac-3'; এবং GaPdH ফরোয়ার্ড, 5'-AAT cccaTcaccaTcTTc-3' এবং বিপরীত, 5'-aGGcTGTTG TcaTacTTc-3'। mRNA স্তরগুলি 2‑ΔΔCq পদ্ধতি ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল এবং অভ্যন্তরীণ রেফারেন্স জিনে স্বাভাবিক করা হয়েছিলGAPDH (24).

ওভার এক্সপ্রেশন এবং নকডাউনHBX এবং TreM2 এর অত্যধিক এক্সপ্রেশন প্ররোচিত করার জন্য, পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের HBX বা TreM2 cDNA সিকোয়েন্সগুলি plVX-পুরো ভেক্টর (ক্লিনটেক ল্যাবরেটরিজ, inc.) মধ্যে ডবল হজমের মাধ্যমে প্রবেশ করানো হয়েছিল (হিন্দiii এবংইকোআরআই) পরবর্তীকালে, পুনরায় সংযুক্ত প্লাজমিড (1.5 µg) HK-2 কোষে (2x105) স্থানান্তরিত হয়। মক প্লাজমিড (একটি খালি ভেক্টর, 1 µg) ক্ষণস্থায়ীভাবে HK-2 কোষে (2x105) একটি নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ (oenc) হিসাবে lipofectamine® 2000 (cat. no. 11668-027, Invitrogen, Thermo) ব্যবহার করে স্থানান্তরিত হয়েছিল ফিশার সায়েন্টিফিক, ইনক।) ecH(cistanche থেকে echinacoside)(cat. no. 82854-37-3; Biopurify Phytochemicals, ltd.) DMSO (cat. no. d2650; Sigma-Aldrich; Merck KGaa) 1, 2.5, 5, 10, 20 এবং ঘনত্বে দ্রবীভূত হয়েছিল

যথাক্রমে 50 mg/l; এবং স্থানান্তরিত oeHBX বা oeTreM2 কোষের সংস্কৃতিতে যোগ করা হয়েছে। পরবর্তী পরীক্ষা 48 ঘন্টা পরে শুরু হয়েছিল।

TreM2 এক্সপ্রেশনকে নক ডাউন করার জন্য, তিনটি ছোট হস্তক্ষেপ (si)RNAs (siTreM2-1, siTreM2-2 এবং siTreM2-3; 20 µM) টার্গেটিং TreM2 সংশ্লেষিত হয়েছিল (সাংহাই মেজরবিও বায়ো-ফার্ম টেকনোলজি কো. লিমিটেড) এবং পরবর্তীতে প্রস্তুতকারকের প্রোটোকল (ইনভিট্রোজেন; থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ইনক।) অনুসারে lipofectamine® 2000 ব্যবহার করে HK-2 কোষে (2x105) স্থানান্তরিত হয়। একটি অ-নির্দিষ্ট স্ক্র্যাম্বলড siRNA ক্রম (5'uucucGaacGuGucacGu3, 25 nM) si-নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ (nc) নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। TreM2 সিরনাগুলির লক্ষ্যযুক্ত অবস্থান এবং ক্রমগুলি সারণি সি-তে দেওয়া হয়েছে। পরবর্তী পরীক্ষা 48 ঘন্টা পরে সঞ্চালিত হয়েছিল।

পাশ্চাত্য blottingHK-2 কোষ থেকে মোট প্রোটিন বের করা হয়েছিল

RIPA lysis বাফার ব্যবহার করে (cat. no. BYl40825; Jrdun Biotech Co., Ltd.)। প্রস্তুতকারকের প্রোটোকল অনুসারে Bicinchoninic অ্যাসিড অ্যাস কিট (বিড়াল নং PICPI23223; থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, inc.) ব্যবহার করে মোট প্রোটিনের পরিমাণ নির্ধারণ করা হয়েছিল এবং 15 শতাংশ জেলে SDS-PaGe এর মাধ্যমে 20 μg প্রোটিন/লেন আলাদা করা হয়েছিল। নমুনার ঘনত্ব একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার (dnM-9602, Pulangxin) ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল। পরবর্তীকালে, পৃথক প্রোটিনগুলি একটি পিভিডিএফ ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত হয়েছিল। ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য 5 শতাংশ নন-ফ্যাট শুষ্ক দুধের সাথে ব্লক করার পরে, ঝিল্লিটি রাতারাতি 4˚C তাপমাত্রায় প্রাথমিক অ্যান্টিবডি (টেবিল SII) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল এবং সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি অ্যান্টি-মাউস IGG (1:1, 000, বিড়াল নং a0216, বেয়োটাইম ইনস্টিটিউট অফ বায়োটেকনোলজি) 37˚C তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য। ইমিউনোরেক্টিভ প্রোটিন ব্যান্ডগুলি একটি ইসিএল সিস্টেম (সাইটিভা) ব্যবহার করে কল্পনা করা হয়েছিল। ব্লট ট্রিপ্লিকেট সঞ্চালিত হয়.GAPDHএবং H3 যথাক্রমে সাইটোপ্লাজমিক এবং পারমাণবিক প্রোটিনের জন্য লোডিং নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।

ফলাফল

ECH (cistanche থেকে echinacoside)দমন করে কাজ এর এইচবিএক্স ভিতরে HK-2 কোষমূল্যায়ন

HBX এর ফাংশন, HBX ওভার এক্সপ্রেশন HK-2 কোষে প্ররোচিত হয়েছিল। HBX এর আপেক্ষিক mrna এবং প্রোটিন স্তরগুলি oenc কোষের তুলনায় oeHBX কোষগুলিতে উল্লেখযোগ্যভাবে আপগ্রেগুলেট করা হয়েছিল (চিত্র 1a এবং B)। পরবর্তীকালে, oeHBX কোষগুলিকে ecH এর বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে সংষ্কৃত করা হয়েছিল (যথাক্রমে 1, 2.5, 5, 10, 20 এবং 50 mg/l; e1, e2.5, e5, e10, e20 এবং e50)। HBX অত্যধিক এক্সপ্রেশন HK-2 কোষের বিস্তারকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে, এবং এই হ্রাস 24 এবং 48 ঘন্টা (চিত্র 1c) এ ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে ECH দ্বারা বিপরীত হয়েছিল।

অধিকন্তু, oeHBX কোষের বিস্তারের হার E1-চিকিত্সা করা কোষের (চিত্র 1c) তুলনায় কোন উল্লেখযোগ্য পার্থক্য প্রদর্শন করেনি। বিপরীতে, E10 চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে E20 এবং E50 চিকিত্সার তুলনায় oeHBX কোষের বিস্তারের হার বৃদ্ধি করেছে যা কোন উল্লেখযোগ্য পার্থক্য প্রদর্শন করেনি (চিত্র 1c)। অতএব, e2.5, e5 এবং e10-চিকিত্সা করা কোষগুলিতে অ্যাপোপটোসিসের উপর ECH-এর প্রভাব পরীক্ষা করা হয়েছিল। HBX ওভার-এক্সপ্রেশন উল্লেখযোগ্যভাবে HK-2 কোষের অ্যাপোপটোসিস বাড়িয়েছে এবং ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে ECH চিকিত্সার মাধ্যমে oeHBX কোষের অ্যাপোপটোসিস হার হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 1d)। সামগ্রিকভাবে, ফলাফলগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে ecH ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে HK-2 কোষে HBX-এর কাজকে বাধা দেয়।

TREM2 অভিব্যক্তি হয় বাধা দ্বারা ECH(cistanche থেকে echinacoside) ভিতরে স্থানান্তরিত oeHBX

কোষrT-qPcr এবং ওয়েস্টার্ন ব্লটিং যথাক্রমে oeHBX কোষে TreM2 এর আপেক্ষিক mrna এবং প্রোটিন এক্সপ্রেশন স্তরগুলি পরীক্ষা করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। TreM2 mrna এবং প্রোটিন এক্সপ্রেশনের মাত্রাগুলি oeHBX কোষগুলিতে oenc কোষের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে আপ-রেগুলেটেড ছিল (চিত্র 2a এবং B)। যাইহোক, ecH ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে স্থানান্তরিত oeHBX কোষে TreM2 এর অভিব্যক্তির মাত্রা হ্রাস করেছে (চিত্র 2a এবং B)। অতএব, ফলাফলগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে HBX অভিব্যক্তিটি TreM2 অভিব্যক্তির সাথে ইতিবাচকভাবে যুক্ত ছিল, এবং আরও নির্দেশ করে যে HK-2 কোষে HBX-এ ecH-এর দমনমূলক প্রভাব৷

নকডাউন এবং অত্যধিক প্রকাশ এর TREM2 ভিতরে HK-2 কোষTreM2 এর কার্যকারিতা আরও মূল্যায়ন করার জন্য, যথাক্রমে rna হস্তক্ষেপ এবং একটি লেন্টিভাইরাল ভেক্টর ব্যবহার করে HK-2 কোষে TreM2 নকডাউন এবং ওভার এক্সপ্রেশন প্ররোচিত হয়েছিল। নক-ডাউন পরীক্ষার জন্য, তিনটি siRNA মানব জিনকে লক্ষ্য করেTREM2(siTreM2-1, siTreM2-2 এবং siTreM2-3) HK-2 কোষে স্থানান্তরিত হয়েছিল, এবং একটি অ-নির্দিষ্ট siRNA নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ (sinc) হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল৷ তিনটি TreM2 সিরনাই সফলভাবে HK-2 কোষে TreM2 এর অন্তঃসত্ত্বা প্রকাশকে ছিটকে দিয়েছে (চিত্র 3a এবং B)। যাইহোক, সর্বনিম্ন আপেক্ষিক TreM2 mrna এবং প্রোটিনের অভিব্যক্তির মাত্রা siTreM2-1 এবং siTreM2-2-স্থানান্তরিত কোষে (চিত্র 3a এবং B), তাই, siTreM2-1 এবং siTreM{{13} }} স্থানান্তরিত কোষগুলি পরবর্তী পরীক্ষার জন্য বেছে নেওয়া হয়েছিল। অত্যধিক এক্সপ্রেশন পরীক্ষার জন্য, পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের মানব TreM2cdna ক্রম ধারণকারী একটি প্লাজমিড তৈরি করা হয়েছিল এবং পরবর্তীতে HK-2 কোষে (oeTreM2) স্থানান্তরিত হয়েছিল। ক

মক প্লাজমিড একটি নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ (oenc) হিসাবে কাজ করে। TREM2 এক্সপ্রেশনের মাত্রা oeTREM2 কোষে oenc কোষের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র 3c এবং d)। অতএব, oeTreM2 কোষগুলি পরবর্তী পরীক্ষার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।

TREM2 নীরবতা হ্রাস পায় দ্য apoptosis এর oeHBX কোষsiTREM2 বা sinc দিয়ে স্থানান্তরিত oeHBX কোষগুলির অ্যাপোপটোসিস প্রোফাইল মূল্যায়ন করা হয়েছিল। oeHBX প্লাস সিন কোষের অ্যাপোপটোসিস হার খোলা কোষের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল। যাইহোক, oeHBX প্লাস siTreM2-1 বা siTreM2-2 কোষে oeHBX প্লাস সিঙ্ক কোষের তুলনায় অ্যাপোপটোসিস হার উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 4a)। ফলাফলগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে TreM2 নকডাউন HK-2 সেল অ্যাপোপটোসিসের সময় HBX এর কার্যকারিতাকে বাধা দেয়।

সারভাইভিন একটি অ্যাপোপটোসিস প্রোটিন পরিবারের ইনহিবিটারের অন্তর্গত, যা অ্যাপোপটোটিক কার্যকলাপকে বাধা দেয় এবং কোষের মৃত্যুকে দমন করে (25)। রেনাল সেল কার্সিনোমা (26) এর চিকিত্সার জন্য সারভাইভিনকে টার্গেট করা একটি অভিনব পদ্ধতি হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে। nF-κB এছাড়াও একটি অ্যাপোপটোসিস ইনহিবিটার যা অ্যান্টিঅ্যাপোপ্টোটিক টিউমার প্রক্রিয়াগুলিতে ভূমিকা পালন করে (27)। তদ্ব্যতীত, ক্যাসপেস 3 অ্যাক্টিভেশন অ্যাপোপটোসিসের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে জড়িত (28)। বর্তমান গবেষণায়, HK-2 কোষে TreM2, Survivin এবং cleaved caspase3-এর প্রোটিনের পরিমাণ পরিমাপ করা হয়েছিল। oeHBX প্লাস সিঙ্ক কোষের তুলনায় oeHBX প্লাস siTreM2-1/2 কোষে TREM2 এক্সপ্রেশনের মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 4B)। oeHBX কোষের তুলনায় oeHBX প্লাস siTreM2-1/2 কোষে Survivin এক্সপ্রেশনের মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। উপরন্তু, oeHBX প্লাস siTreM2-1/2 কোষে oeHBX প্লাস সিন কোষের তুলনায় ক্লিভড ক্যাসপেস3 এক্সপ্রেশনের মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 4B)। অধিকন্তু, oeHBX উল্লেখযোগ্যভাবে NF‑κB-এর নিউক্লিয়াসে স্থানান্তর হ্রাস করেছে, এবং siTREM2‑1/2 স্থানান্তর উল্লেখযোগ্যভাবে nF-κB পারমাণবিক ট্রান্সলোকেশন বৃদ্ধি করেছে (চিত্র 4B)। একসাথে নেওয়া, ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে TreM2 HK-2 কোষে HBX-এর একটি ডাউনস্ট্রিম ফ্যাক্টর, তাই, HBX মানুষের rTecs-এ TreM2 এক্সপ্রেশন নিয়ন্ত্রণ করে অ্যাপোপটোসিসকে উন্নীত করতে পারে।

TREM2 অত্যধিক প্রকাশ দমন করে দ্য স্থানান্তর এরNF-κB প্রতি দ্য নিউক্লিয়াস ভিতরে HK-2 কোষECH এর প্রভাব(cistanche থেকে echinacoside)oeTreM2--এ স্থানান্তরিত কোষগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল৷ TreM2 ওভার এক্সপ্রেশন HK-2 কোষের অ্যাপোপটোসিসকে উন্নীত করেছে (চিত্র 5a)। ECH চিকিত্সা (E10; চিত্র 5A) দ্বারা oeTREM2 কোষের অ্যাপোপটোসিস উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। তদ্ব্যতীত, ECH উল্লেখযোগ্যভাবে oeTreM2 কোষে TreM2 এর অভিব্যক্তি হ্রাস করেছে। TREM2 অত্যধিক এক্সপ্রেশন Survivin এর অভিব্যক্তি মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে, তবে, অভিব্যক্তিতে এই হ্রাস ECH দ্বারা বিপরীত হয়েছিল। উপরন্তু, oeTreM2 কোষে oenc কোষের তুলনায় ক্লিভড ক্যাসপেস3-এর প্রোটিন এক্সপ্রেশনের মাত্রা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে; একটি প্রভাব যা ইসিএইচ চিকিত্সা দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। অধিকন্তু, ecH oeTreM2 কোষের নিউক্লিয়াসে nF-κB-এর স্থানান্তরকে উন্নীত করেছে (চিত্র 5B)। একসাথে নেওয়া, ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে ecH মানব rTec কোষগুলিতে TreM2 এর কার্যকারিতাকেও দমন করে।

এইচবিএক্স ফাংশন হয় চাপা দ্বারা দ্য NF-κB নিরোধক পিডিটিসিভিতরে মানব RTECs।আরও মধ্যে সম্পর্ক মূল্যায়ন

HBX এবং nF-κB, HK-2 কোষগুলিকে একটি নির্দিষ্ট nF-κB ইনহিবিটর, PdTc (10 μmol/l; P10) দিয়ে সংস্কৃতি করা হয়েছিল। oeHBX কোষের সেল অ্যাপোপটোসিস হার oenc কোষের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র 6a)। যাইহোক, oeHBX প্লাস PdTc কোষগুলি oeHBX কোষের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বর্ধিত অ্যাপোপটোসিস হার প্রদর্শন করেছে। অধিকন্তু, oeHBX কোষের (চিত্র 6B) তুলনায় oeHBX প্লাস PdTc কোষে TreM2 এর আপেক্ষিক mRNA এবং প্রোটিন প্রকাশের মাত্রা হ্রাস পেয়েছে। অতএব, ফলাফল

পরামর্শ দিয়েছে যে oeHBX- স্থানান্তরিত কোষগুলিতে nF-κB নেতিবাচকভাবে TreM2 অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রিত।

NF-κB নিরোধক পিডিটিসি দমন করে TREM2 প্রচারক কার্যকলাপ ভিতরে oeHBX কোষTreM2 (pGl3-enhancer-luc2-pTreM2) এর ওয়াইল্ড-টাইপ প্রোমোটার সিকোয়েন্স সহ একটি লুসিফেরেস রিপোর্টার (pGl3-enhancer-luc2) তৈরি করা হয়েছিল এবং পরবর্তীতে oenc, oeHBX এবং তে স্থানান্তরিত হয়েছিল oeHBX প্লাস P10 কালচারড সেল।

ওয়াইল্ড-টাইপ TREM2 প্রোমোটার ধারণকারী রিপোর্টার ভেক্টরের লুসিফেরেজ কার্যকলাপ oenc কোষের তুলনায় oeHBX কোষে উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। যাইহোক, PdTc উল্লেখযোগ্যভাবে oeHBX কোষে রিপোর্টারের লুসিফেরেজ কার্যকলাপকে দমন করেছে (চিত্র 7)। সামগ্রিকভাবে, ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে PdTc oeHBX কোষে TreM2-এর প্রবর্তক কার্যকলাপকে দমন করে TreM2 এর প্রতিলিপিকে বাধা দেয়।

আলোচনা

HBX প্রাথমিকভাবে HBV-Gn রোগীদের rTecs-এ প্রকাশ করা হয় এবং ভাইরাল প্যাথোজেনেসিস (11,29) নির্ধারক হিসাবে কাজ করে। অতএব, এইচবিএক্স অণু নেটওয়ার্কের কার্যকারিতা সম্পর্কে জ্ঞান বৃদ্ধি করা এইচবিভি-জিএন-এর চিকিত্সার জন্য একটি অভিনব পদ্ধতির বিকাশের একটি গুরুত্বপূর্ণ পদক্ষেপ। বর্তমান অধ্যয়নের লক্ষ্য ছিল HBX এর কার্যকারিতা আরও পরীক্ষা করা এবং মানব rTecs-এ এর সম্ভাব্য আণবিক নেটওয়ার্ক অন্বেষণ করা।

HBX rTecs (11) এর বিস্তারকে বাধা দেয়। বর্তমান সমীক্ষায়, মানব RTECs-এ HBX-এর অ্যান্টি-প্রলিফারেশন এবং প্রো-অ্যাপোপ্টোসিস ফাংশনগুলি চিহ্নিত করা হয়েছিল, যে পরামর্শ দেয় যে HBX মানুষের rTecs-এর বিকাশকে দমন করে। পূর্ববর্তী গবেষণায় ইঙ্গিত দেওয়া হয়েছিল যে ECH(cistanche থেকে echinacoside)এইচবিভি প্রতিলিপি এবং অ্যান্টিজেন প্রকাশকে বাধা দেয় (19)। বর্তমান গবেষণায়, ecH(cistanche থেকে echinacoside)চিকিত্সা HK-2 কোষে HBX-এর কার্যকারিতা ব্যাহত করে, তাই, HK-2 কোষে ECH দ্বারা HBX প্রভাবিত হতে পারে।

মলিকুলার মেডিসিন রিপোর্ট 22: 1137-1144, 2020 1143

তদ্ব্যতীত, ফলাফলগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে ECH(cistanche থেকে echinacoside)HBV-Gn এর জন্য একটি সম্ভাব্য থেরাপিউটিক এজেন্ট হিসাবে কাজ করতে পারে।

TreM2 হল একটি সহজাত ইমিউন রিসেপ্টর যা প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াতে ভূমিকা পালন করে (30)। বর্তমান গবেষণায়, এইচবিএক্স এক্সপ্রেশনটি ইতিবাচকভাবে মানব আরটিইসিএসে TreM2 এক্সপ্রেশনের সাথে যুক্ত ছিল। অধিকন্তু, TREM2 নকডাউন উল্লেখযোগ্যভাবে oeHBX কোষের অ্যাপোপটোসিস হারকে হ্রাস করেছে এবং ECH(cistanche থেকে echinacoside)চিকিত্সা সেল অ্যাপোপটোসিসে oeTreM2 এর প্রভাবকে হ্রাস করেছে। একসাথে নেওয়া, এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে TreM2 HK-2 কোষে HBX দ্বারা লক্ষ্যবস্তু ছিল৷ অতএব, ecH(cistanche থেকে echinacoside)HBX/TreM2 সিগন্যালিং পাথওয়ের কার্যকলাপকে অবরুদ্ধ করে মানব rTecs-এর অ্যাপোপটোসিসকে বাধা দিতে পারে।

পূর্ববর্তী একটি প্রতিবেদনে প্রমাণিত হয়েছে যে nF-κB, শুধুমাত্র কোষের অ্যাপোপটোসিসে ভূমিকা পালন করে না তবে এটি ইমিউন প্রতিক্রিয়া এবং প্রদাহ নিয়ন্ত্রণের সাথে জড়িত (31)। অধিকন্তু, TreM2 আলঝেইমার রোগ এবং ম্যাকুলার অবক্ষয়ের সময় nF-κB-সংবেদনশীল মাইক্রোআরএনএ-34এর মাধ্যমে মধ্যস্থতা করে (32,33)। বর্তমান গবেষণায়, PdTc-এর উপস্থিতিতে oeHBX কোষগুলির অ্যাপোপটোটিক হার উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। আমাদের সর্বোত্তম জ্ঞানের জন্য, বর্তমান গবেষণায় প্রথমবারের মতো পরামর্শ দেওয়া হয়েছে যে, NF-κB ইনহিবিটার PdTc TreM2-এর প্রবর্তক কার্যকলাপকে দমন করেছে। অধিকন্তু, ফলাফলগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে TreM2 নেতিবাচকভাবে HK-2 কোষের নিউক্লিয়াসে nF-κB-এর স্থানান্তরকে নিয়ন্ত্রিত করেছে, কিন্তু ক্লিভড ক্যাসপেস3 এক্সপ্রেশন স্তরের সাথে ইতিবাচকভাবে যুক্ত ছিল। TreM2 HK-2 কোষে মানুষের অবক্ষয়কারী নিউক্লিয়াস পালপোসাস এবং গ্লিওমা কোষে (22,23) এর ভূমিকার বিপরীত ভূমিকা পালন করেছে। অতএব, বর্তমান গবেষণায় পরামর্শ দেওয়া হয়েছে যে TreM2 এর বিভিন্ন ধরণের মানব কোষে বিভিন্ন ফাংশন থাকতে পারে।

একসাথে নেওয়া, বর্তমান অধ্যয়নটি শুধুমাত্র ইঙ্গিত করে না যে nF-κB HBX/TreM2 সিগন্যালিং পথের একটি অভিনব উপাদান ছিল তবে এটিও পরামর্শ দিয়েছে যে nF-κB মানুষের rTecs-এ TreM2 অভিব্যক্তিকে নেতিবাচকভাবে নিয়ন্ত্রণ করে। যাইহোক, বর্তমান গবেষণার প্রধান সীমাবদ্ধতা ছিল অভাবভিতরে vivoপরীক্ষা এবং ক্লিনিকাল ডেটা। অতএব, আরোভিতরে vivoএবং বর্তমান গবেষণার ফলাফল নিশ্চিত করার জন্য ক্লিনিকাল স্টাডিজ প্রয়োজন।

বর্তমান গবেষণায়, ecH এর কাজ(cistanche থেকে echinacoside)তদন্ত করা হয়েছিল এবং ফলাফলগুলি ECH এর সম্ভাব্য প্রভাবগুলির পরামর্শ দিয়েছে(cistanche থেকে echinacoside)মানুষের rTecs-এ সিগন্যালিং পাথওয়েতে। অধিকন্তু, বর্তমান অধ্যয়নটি মানব rTec কোষে ECH এর জৈবিক ফাংশন সম্পর্কে বিদ্যমান জ্ঞানকে উন্নত করেছে এবং HBV-Gn-এর জন্য একটি অভিনব থেরাপিউটিক এজেন্ট হিসাবে এর সম্ভাবনার পরামর্শ দিয়েছে।

তথ্যসূত্র

1. Karayiannis P: হেপাটাইটিস বি ভাইরাস: ভাইরোলজি, মলিকুলার বায়োলজি, জীবনচক্র, এবং ইন্ট্রাহেপ্যাটিক স্প্রেড। হেপাটোলজি আন্তর্জাতিক 11: 1-9, 2017।

2. সিগার সি এবং মেসন ডব্লিউএস: হেপাটাইটিস বি ভাইরাস জীববিজ্ঞান। Microbiol Mol Biol rev 64: 51-68, 2000।

3. উসামা ই, এনা মারিয়া এস, ডব্লিউ রে কে এবং ফারভেনজা এফসি: হেপাটাইটিস বি ভাইরাস-সম্পর্কিত নেফ্রোপ্যাথির চিকিত্সা। নেফ্রন ক্লিন প্র্যাক্ট 119: c41-c49, 2011।

4. ঝাং ওয়াই, লি জে, পেং ডব্লিউ, ইউ জি, ওয়াং এল, চেন জে এবং ঝেং এফ: এইচবিভি-সম্পর্কিত পোস্ট-ইনফেকশাস অ্যাকিউট গ্লোমেরুলোনফ্রাইটিস: 10 টি ক্ষেত্রে একটি রিপোর্ট। PloS one 11: e0160626, 2016।

5. Slagle Bl এবং Bouchard MJ: হেপাটাইটিস বি ভাইরাস এক্স এবং ভাইরাল জিনের প্রকাশের নিয়ন্ত্রণ। কোল্ড স্প্রিং হার্ব পার্সপেক্ট মেড 6: a021402, 2016।

6. গুয়েরেরি এফ, বেলোনি এল, ডি'আন্দ্রিয়া ডি, পেডিকোনি এন, লে পেরা এল, টেস্টোনি বি, সিসিয়ানি সি, ফ্লোরিওট ও, জুলিম এফ, ট্রামন্টানো এ,ইত্যাদি আল: সরাসরি HBx জিনোমিক লক্ষ্যগুলির জিনোম-ব্যাপী সনাক্তকরণ। BMc জিনোমিক্স 18: 184, 2017।

7. শি টি, হুয়া কিউ, মা জেড এবং এলভি কিউ: হেপাটাইটিস বি ভাইরাস X (HBx) প্রোটিন দ্বারা প্ররোচিত মির-200এ-3পি-এর নিম্ননিয়ন্ত্রণ এইচবিভি-সংক্রমণ-সম্পর্কিত কোষের বিস্তার এবং আক্রমণকে উৎসাহিত করে হেপাটো- কার্সিনোমা। পথল রেস প্র্যাক্ট 213: 1464-1469, 2017।

8. Tian Y, Xiao X, Gong X, Peng F, Xu Y, Jiang Y এবং Gong G: HBx মির-181এ এবং পিটেনের মধ্যে ক্রস-টককে বিরক্ত করে কোষের বিস্তারকে উৎসাহিত করে৷ বিজ্ঞান প্রতিনিধি 7: 40089, 2017।

9. Idris Me, Hachem H, Koering c, Merle P, Thénoz M, Montreux F, এবং Wattel e: HBx সেলুলার ফেনোটাইপের উপর নির্ভর করে সেলুলার সেন্সেন্স বা কোষের বিস্তারকে ট্রিগার করে। জে ভাইরাল হেপাট 23: 130-138, 2016।

10. ওয়াং এক্স, ওয়াং এল, ঝু এন, ঝু ওয়াই, গু এলজে এবং ইউয়ান ডব্লিউজে: হেপাটাইটিস বি ভাইরাস এক্স প্রোটিন রেনাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষ-প্ররোচিত টি-সেল এবং ম্যাক্রোফেজ প্রতিক্রিয়াগুলিকে সংশোধন করে। ইমিউনল সেল Biol 94: 266-273, 2016।

11. He P, Zhang d, li H, Yang X, li d, Zhai Y, Ma l এবং Feng G: হেপাটাইটিস বি ভাইরাস এক্স প্রোটিন JaK2/STaT3 সংকেত পথকে সক্রিয় করে মানুষের রেনাল প্রক্সিমাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষে অ্যাপোপটোসিস মডিউল করে। int J Mol Med 31: 1017-1029, 2013।

12. ইয়াং ওয়াই, ওয়াং এক্স, ঝাং ওয়াই এবং ইউয়ান ডব্লিউ: হেপাটাইটিস বি ভাইরাস এক্স প্রোটিন এবং প্রোইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনগুলি dr4 এর আপগ্র্যুলেশনের মাধ্যমে রেনাল টিউবুলার কোষের ট্রেল-প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিস বাড়াতে সমন্বয় করে। int J বায়োকেম সেল Biol 97: 62-72, 2018।

13. He P, Zhou G, Qu d, Zhang B, Wang Y এবং li d: HBx বিস্তারকে বাধা দেয় এবং ইঁদুরের রেনাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষে Fas/Fasl আপগ্রুলেশনের মাধ্যমে অ্যাপোপটোসিসকে প্ররোচিত করে। জে নেফ্রোল 26: 1033, 2013।

14. হান ডব্লিউ, লুও এম, হে এম, ঝু ওয়াই, ঝং ওয়াই, ডিং এইচ, হু জি, লিউ এল, চেন কিউ এবং লু ওয়াই: এইচবিএক্স জিন স্থানান্তর সাইক্লিন এক্সপ্রেশন নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে প্রাথমিক রেনাল টিউবুলার এপিথেলিয়াল কোষের চক্রকে প্রভাবিত করে। Mol Med rep 18: 1947-1954, 2018।