ডিজেল নিষ্কাশন এক্সপোজার জেব্রাফিশ মস্তিষ্কে নিউরোডিজেনারেশনে জড়িত নেটওয়ার্কগুলির অভিব্যক্তিকে পরিবর্তন করে পার্ট 1

বিমূর্ত

নিউরোডিজেনারেটিভ রোগগুলি বিশ্বে অক্ষমতার একটি প্রধান কারণ, তবে তাদের ইটিওলজিগুলি মূলত অধরা থেকে যায়। জেনেটিক কারণগুলি এই রোগগুলির বেশিরভাগের জন্য শুধুমাত্র একটি সংখ্যালঘু ঝুঁকির জন্য অ্যাকাউন্ট করতে পারে, যা এই রোগগুলির বিকাশে পরিবেশগত কারণগুলি একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে।

নিউরোডিজেনারেটিভ রোগগুলি এমন এক ধরণের রোগকে বোঝায় যা বিভিন্ন কারণে মস্তিষ্কের কোষগুলির অবক্ষয় ঘটায়। সাধারণ রোগগুলির মধ্যে রয়েছে আল্জ্হেইমের রোগ, পারকিনসন্স ডিজিজ, হান্টিংটন ডিজিজ ইত্যাদি। এই রোগগুলি মস্তিষ্কের নিউরনগুলিকে প্রভাবিত করে, ফলে মস্তিষ্কের কার্যকারিতা ব্যাহত হয় এবং স্মৃতিশক্তি, চিন্তাভাবনা এবং আচরণগত পরিবর্তনের মতো লক্ষণগুলি দেখা দেয়।

যাইহোক, এই অসুস্থতার কারণে আমাদের ইতিবাচক মনোভাব হারাতে হবে না। রোগীদের স্মৃতিশক্তি উন্নত করতে এবং উপসর্গগুলি উপশম করতে সাহায্য করার অনেক উপায় রয়েছে। চলুন দেখে নেওয়া যাক এই পদ্ধতিগুলির কয়েকটি:

প্রথমে কিছু শারীরিক ব্যায়াম করুন। গবেষণা দেখায় যে শারীরিক কার্যকলাপ মস্তিষ্কে রক্ত ​​​​সঞ্চালন উন্নত করে এবং ডোপামিন এবং এন্ডোরফিনের মতো রাসায়নিকের নিঃসরণ বাড়ায়, যা নিউরনের কার্যকারিতা রক্ষা এবং উন্নত করতে সহায়তা করে। একই সময়ে, ব্যায়াম উদ্বেগ, বিষণ্নতা এবং অনিদ্রার মতো সমস্যাগুলি কমাতেও সাহায্য করতে পারে, যা রোগীদের জীবনের মুখোমুখি হতে আরও আনন্দদায়ক করে তোলে।

দ্বিতীয়ত, সামাজিক সম্পর্ক বজায় রাখুন। এটাও খুবই গুরুত্বপূর্ণ যে আমাদের সামাজিক নেটওয়ার্কগুলি মস্তিষ্কের সংশ্লিষ্ট এলাকার সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সংযুক্ত, এবং সামাজিক মিথস্ক্রিয়া শুধুমাত্র মানসিক চাপ কমাতে পারে না, বরং সুখ বৃদ্ধি, হতাশার বিরুদ্ধে লড়াই এবং আরও অনেক কিছু করে মস্তিষ্কের স্বাস্থ্যের উন্নতি করতে পারে।

সবশেষে, ভালো করে খান এবং পর্যাপ্ত ঘুম পান। এই উভয় দিকই মস্তিষ্কের স্বাস্থ্যের উপর গুরুত্বপূর্ণ প্রভাব ফেলতে পারে। একটি ভাল ডায়েটে শুধুমাত্র পর্যাপ্ত পুষ্টি উপাদান অন্তর্ভুক্ত করা দরকার নয়, তবে এটি বারবার অতিরিক্ত চিনি, স্যাচুরেটেড ফ্যাট এবং কোলেস্টেরল গ্রহণ করা এড়াতে হবে। এছাড়াও, পর্যাপ্ত ঘুম পাওয়া বিভিন্ন পর্যায়ে স্মৃতিশক্তির সমস্যাগুলির বিরুদ্ধে লড়াই করতে সাহায্য করতে পারে, বিশেষ করে অ্যালঝাইমার রোগের মতো রোগ।

সংক্ষেপে, নিউরোডিজেনারেটিভ রোগ মানে জীবনের প্রত্যাশা ছেড়ে দেওয়া নয়। ইতিবাচক মনোভাব বজায় রাখার সাথে সাথে জীবনযাত্রার মান উন্নয়নের জন্য বৈজ্ঞানিক ও কার্যকর পদ্ধতি অবলম্বন করাও প্রয়োজন। আরো হাসি এবং আরো রোদ আপনাকে সুস্থ থাকতে সাহায্য করবে। এটা দেখা যায় যে আমাদের স্মৃতিশক্তি উন্নত করতে হবে, এবং Cistanche deserticola উল্লেখযোগ্যভাবে স্মৃতিশক্তি উন্নত করতে পারে কারণ Cistanche deserticola হল একটি ঐতিহ্যবাহী চীনা ঔষধি উপাদান যার অনেকগুলি অনন্য প্রভাব রয়েছে, যার মধ্যে একটি হল স্মৃতিশক্তি উন্নত করা। Cistanche deserticola এর কার্যকারিতা ট্যানিক অ্যাসিড, পলিস্যাকারাইডস, ফ্ল্যাভোনয়েড গ্লাইকোসাইড ইত্যাদি সহ একাধিক সক্রিয় উপাদান থেকে আসে। এই উপাদানগুলি বিভিন্ন পথের মাধ্যমে মস্তিষ্কের স্বাস্থ্যকে উন্নীত করতে পারে।

মেমরি বাড়ানোর ১০টি উপায় জেনে নিন ক্লিক করুন

বায়ু দূষণের দীর্ঘায়িত এক্সপোজার সম্প্রতি আলঝেইমার এবং পারকিনসন্স রোগের ঝুঁকি বাড়াতে চিহ্নিত করা হয়েছে, কিন্তু আণবিক প্রক্রিয়া যার দ্বারা এটি কাজ করে তা ভালভাবে বোঝা যায় না।

ডিজেল নিষ্কাশন কণা নির্যাস (DEPe) এর সংস্পর্শে আসা জেব্রাফিশেমব্রায়গুলি অকার্যকর অটোফ্যাজি এবং নিউরোনাল ক্ষতির দিকে পরিচালিত করে। এখানে, আমরা জেব্রাফিশ ভ্রূণগুলিকে DEPe-তে উন্মুক্ত করেছি এবং বায়ু দূষণ দ্বারা প্ররোচিত প্যাথোজেনিক পথগুলি সনাক্ত করতে তাদের মস্তিষ্ক থেকে উচ্চ থ্রুপুট প্রোটিওমিক এবং ট্রান্সক্রিপ্টমিক এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ করেছি। ডিইপিই চিকিত্সার ফলে জেনোবায়োটিক বিপাক, ফাগোসোম পরিপক্কতা এবং অ্যামাইলয়েড প্রক্রিয়াকরণ সহ নিউরোডিজেনারেটিভ প্রক্রিয়াগুলির সাথে প্রাসঙ্গিক বেশ কয়েকটি জৈবিক প্রক্রিয়া এবং সংকেত পথ পরিবর্তন করা হয়েছে। জিন এক্সপ্রেশন ইনব্রেইনের সবচেয়ে বড় আনয়ন ছিল Cyp1A (30-গুণের বেশি)।

এই অভিব্যক্তি পরিবর্তনের প্রাসঙ্গিকতা CRISPR/Cas9 ব্যবহার করে আবেশন ব্লক করে নিশ্চিত করা হয়েছিল, যার ফলে DEPe বিষাক্ততার প্রতি সংবেদনশীলতা নাটকীয়ভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে, নিশ্চিত করা হয়েছে যে Cyp1A আনয়ন একটি ক্ষতিপূরণমূলক প্রতিরক্ষামূলক ব্যবস্থা ছিল।

এই গবেষণায় ব্যাহত আণবিক পথ চিহ্নিত করা হয়েছে যা নিউরোডিজেনারেটিভ ডিসঅর্ডারের প্যাথোজেনেসিসে অবদান রাখতে পারে। পরিশেষে, হাওয়ায় দূষণের আণবিক ভিত্তি নির্ধারণ করা রোগ-সংশোধনকারী থেরাপির বিকাশে সাহায্য করবে নিউরোডিজেনারেশনের ঝুঁকি বাড়ায়।

কীওয়ার্ড

বায়ু দূষণ · ডিমেনশিয়া · পারকিনসন্স ডিজিজ · আলঝেইমার রোগ · ট্রান্সক্রিপ্টমিক্স · প্রোটিওমিক্স।

ভূমিকা

বায়ু দূষণ মৃত্যুর একটি প্রধান অবদানকারী এবং শ্বাসযন্ত্রের রোগ, হৃদরোগ, স্ট্রোক, ফুসফুসের ক্যান্সার এবং ডায়াবেটিসের সাথে যুক্ত। উদীয়মান মহামারী সংক্রান্ত প্রমাণগুলি বায়ু দূষণের এক্সপোজার এবং আলঝাইমারস এবং পার্কিনসন রোগ (AD এবংPD) (Fu et al. 2019) সহ নিউরোডিজেনারেটিভ রোগের বিকাশের মধ্যে একটি লিঙ্ককে সমর্থন করে। বায়ু দূষণ AD এবং PD-এর ঝুঁকি বাড়াতে পারে এমন পদ্ধতিগুলি নিয়ে গবেষণার ঘাটতি রয়েছে, তবে যে কয়েকটি আছে তা কার্যকারণ সম্পর্ককে সমর্থন করে (Fu et al. 2019)৷

মস্তিস্কে প্রোটিন অন্তর্ভুক্তিগুলি নিউরোডিজেনারেটিভ ডিসঅর্ডারের একটি সর্বজনীন বৈশিষ্ট্য এবং সম্ভবত এটি একটি সাধারণ পথ যা নিউরোনাল কর্মহীনতা এবং মৃত্যুর দিকে পরিচালিত করে। উদাহরণস্বরূপ, অ্যামাইলয়েড-বিটা (এ-বিটা) এবং টাউ কাঠামোর গঠন হল AD এবং -synuclein ( -syn) সমষ্টি বা Lewy Bodies inPD (Ross and Poirier 2004; Wulfe 2008) এর রোগগত বৈশিষ্ট্য।

প্রোটিওস্টেসিসের পরিবর্তনগুলি অন্তত আংশিকভাবে এই সমষ্টিগুলির গঠনের উপর নির্ভর করে বলে মনে হয়, তবে সঠিক প্রক্রিয়াগুলি এখনও অজানা এবং জেনেটিক এবং পরিবেশগত ঝুঁকির কারণগুলির উপর নির্ভর করে ব্যক্তিদের মধ্যে পরিবর্তিত হতে পারে। আমরা জানি যে A-betaor -syn-এর এক্সপ্রেশন বৃদ্ধি বা হ্রাস AD এবং PD হতে পারে (Bostancıklıoğlu2019; Johnson et al. 2019)।

নিউরোডিজেনারেটিভ ডিসঅর্ডারের অন্যান্য সাধারণ বৈশিষ্ট্য হল প্রদাহ এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস। সক্রিয় মাইক্রোগ্লিয়া, সিএনএস-এর প্রদাহজনক কোষ, AD এবং PD মস্তিষ্কের ময়নাতদন্তে সহজেই উপলব্ধি করা যেতে পারে এবং সম্ভবত নিউরোডিজেনারেশনের প্যাথোজেনেসিসে অবদান রাখতে পারে (Kannarkat et al. 2013)। এই প্রদাহ এবং সম্ভবত মাইটোকন্ড্রিয়াল কর্মহীনতা অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের দিকে পরিচালিত করে বলে মনে করা হয় যা ময়নাতদন্ত করা মস্তিষ্কের জন্যও প্রশংসিত হয় (Pica et al. 2020)।

আজ পর্যন্ত বায়ু দূষণ এবং নিউরোডিজেনারেশনের বেশিরভাগ যান্ত্রিক গবেষণায় প্রদাহের উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করা হয়েছে (জয়রাজ এট আল। 2017)। বায়ু দূষণ প্রাণী এবং মানুষের মস্তিষ্কে সিএনএস প্রদাহ এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস উভয়ই বাড়িয়ে দেয় বলে মনে হয় (ক্যাল্ডেরন-গারসিডুয়েনাস এট আল। 2004, 2007, 2008a,b এবং c; Levesque et al. 2011a, b, 2013; Moultonand Yang 201w; 2017; Yokota et al.2013a, b)।

বিশেষ আগ্রহের বিষয় হল যে বায়ু দূষণ ঘ্রাণযুক্ত বাল্বের (OB) অফিসে কিছু প্রদাহজনক জিনের অভিব্যক্তি বাড়ায়, একটি মস্তিষ্কের অঞ্চল যেখানে PD প্যাথলজি রোগের প্রথম দিকে দেখা যায় (Levesque et al. 2011a, b; Yokota et al. 2013a) . গ্রামীণ অঞ্চলে বসবাসকারীদের তুলনায় শহুরে অঞ্চলে বসবাসকারী কুকুরদেরও প্রদাহ দেখা গেছে এবং লেখকরা অনুমান করেছেন যে এই পরিবর্তনগুলি উচ্চ মাত্রার বায়ু দূষণের কারণে হয়েছে (ক্যাল্ডেরন-গারসিডুয়েনাস এট আল। 2003)।

একই লেখকরা আরও পরামর্শ দিয়েছেন যে বায়ু দূষণের কারণে শহরগুলিতে বসবাসকারী মানুষের মস্তিষ্কে -সিন জমা হয় (ক্যাল্ডেরন-গার্সিডুয়েনাস এট আল। 2004, 2008a,b)। একটি জেব্রাফিশ মডেলের সাম্প্রতিক গবেষণায়, এক্সপোজারটো ডিইপিই নিউরোটক্সিসিটি এবং অটোফ্যাজি (বার্নহিল এট আল। 2020) ব্যাহত করে নিউরন সংখ্যার উল্লেখযোগ্য হ্রাস ঘটায় বলে জানা গেছে।

DEPe-এ বায়ু দূষণের অনেক বিষাক্ত উপাদান রয়েছে এবং সাধারণত সেল কালচার সিস্টেমে এক্সপোজার মডেল করতে ব্যবহৃত হয় (কোস্টা এট আল। 2014; হেস্টারবার্গ এট আল। 2010; লেভেস্ক এট আল। 2011বি)। অটোফ্যাজি হল মিসফোল্ড প্রোটিন এবং ক্ষতিগ্রস্থ অর্গানেলগুলি অপসারণ এবং নির্মূল করার জন্য একটি অপরিহার্য আন্তঃকোষীয় প্রক্রিয়া।

প্রকৃতপক্ষে, সেলুলার হোমিওস্টেসিসের জন্য সুনির্দিষ্ট অটোফ্যাজিক কার্যকলাপ প্রয়োজন, এবং নিউরনে কর্মহীন অটোফ্যাজি পরিবর্তিত বেঁচে থাকা এবং নিউরোডিজেনারেশনের দিকে পরিচালিত করে। এবং পিডি। যে প্রক্রিয়াগুলির দ্বারা দূষণ এই ঝুঁকি বাড়ায় সেগুলি সম্পর্কে আমাদের উপলব্ধি সীমিত, তবে অতি সূক্ষ্ম কণা এবং বায়ু দূষণের বিভিন্ন উপাদান সরাসরি ঘ্রাণযুক্ত বাল্বরের মাধ্যমে ফুসফুসের মাধ্যমে রক্তের মাধ্যমে মস্তিষ্কে প্রবেশ করতে পারে (কিলিয়ান এবং কিটাজাওয়া 2018)।

এই কণাগুলি অ্যাকার্বন কোর এবং শোষিত যৌগগুলি যেমন পলিসাইক্লিক অ্যারোমেটিক হাইড্রোকার্বন, ধাতু, নাইট্রেট, সালফেট এবং অন্যান্য উপাদানগুলির সমন্বয়ে গঠিত এবং বায়ু দূষণকারীগুলির একটি উল্লেখযোগ্য অনুপাত গঠন করে, বিশেষ করে শহরাঞ্চলে৷ এই যৌগগুলির মধ্যে অনেকগুলি ইনোক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং সেলুলারের সাথে জড়িত৷ বিষাক্ততা বায়ু দূষণ এবং নিউরোডিজেনারেশনের একটি কার্যকারক সমিতিতে যুক্তিযুক্ততা যোগ করে।

সেলুলার এবং পশুর মডেল সহ বিশদ বহুবিভাগীয় তদন্ত রোগের কারণ এবং সরাসরি ভবিষ্যতের থেরাপিউটিক পদ্ধতির অন্তর্দৃষ্টি দিতে পারে (Cannon and Greenamyre 2011)। ভিভো অধ্যয়নের জন্য ব্যবহৃত মডেল জীবের মধ্যে, ড্যানিও রেরিও (জেব্রাফিশ) বিষবিদ্যা, আণবিক জেনেটিক্স, টক্সিকোজেনোমিক্স এবং ড্রাগ আবিষ্কারের জন্য একটি শক্তিশালী মডেল।

বেশিরভাগ জৈবিক পথগুলি মেরুদণ্ডী প্রাণীদের মধ্যে অত্যন্ত সংরক্ষিত, এবং বেশিরভাগ কার্যকরী মানব জিনের জেব্রাফিশে হোমোলগ রয়েছে (Vaz et al.2018)। উপরন্তু, জেব্রাফিশের ভ্রূণ দ্রুত এবং স্বাধীনভাবে বিকশিত হয়, যে কোনো পছন্দসই উন্নয়নমূলক পর্যায়ে বিশ্লেষণের অনুমতি দেয়। এই বৈশিষ্ট্যগুলি, দ্রুত প্রজনন এবং চাষের কম খরচের সাথে, জেব্রাফিশকে পরিবেশগত এক্সপোজারের বিষাক্ত প্রভাবগুলি অধ্যয়নের জন্য একটি অনুকূল মডেল তৈরি করে।

রোগের প্যাথোজেনেসিসের পিছনে আণবিক প্রক্রিয়াগুলিকে আরও ভালভাবে বোঝার জন্য, একটি বিস্তৃত উচ্চ-থ্রুপুট জিন এক্সপ্রেশন প্রোফাইলিং পদ্ধতির বিকাশ করা হয়েছে। ভর স্পেকট্রোমেট্রি-ভিত্তিক প্রোটিওমিক্স এবং উচ্চ-থ্রুপুট আরএনএ সিকোয়েন্সিং আগ্রহের জৈবিক পথ চিহ্নিত করার ক্ষেত্রে বিশেষ প্রতিশ্রুতি রাখে। পরিবেশগত উদ্দীপনার প্রতি সেলুলার এবং প্রাণী মডেলের প্রতিক্রিয়া বোঝার জন্য এই কৌশলগুলি ব্যাপকভাবে ব্যবহার করা হয়েছে (ডুয়ান এট আল। 2017; গারসিয়া-এস্ট্রাডা এট আল। 2013; জামিয়েট আল। 2014a, বি, 2015; কোসালকোভা এট আল। 2012)।

এই গবেষণায়, আমরা জেব্রাফিশেমব্রায়োসের মাথার মধ্যে প্রোটিওম এবং ট্রান্সক্রিপ্টোম প্রোফাইল উভয়ের উপর ডিইপিই চিকিত্সার প্রভাবগুলির এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ চালিয়েছি। মাথা থেকে নমুনাগুলিকে বিচ্ছিন্ন করা যা প্রধানত মস্তিষ্কের টিস্যু দিয়ে গঠিত, এটি আরও টিস্যু-নির্দিষ্ট প্রোফাইল এবং অন্যান্য টিস্যু থেকে উদ্ভূত প্রভাব কম করার অনুমতি দেয়। আমরা এখানে ডিইপি-উন্মুক্ত জেব্রাফিশের মাথায় নিউরোডিজেনারেশনে জড়িত বেশ কয়েকটি পথের পরিবর্তিত জিনের অভিব্যক্তি এবং প্রোটিন প্রোফাইলগুলি বর্ণনা করি। এই ফলাফলগুলি সম্ভাব্য প্রক্রিয়াগুলির মধ্যে নতুন অন্তর্দৃষ্টি প্রদান করে যার দ্বারা বায়ু দূষণ AD এবং PD এর ঝুঁকি বাড়ায়।

উপাদান এবং পদ্ধতি

মাছের চিকিত্সা এবং CRISPR/Cas9-মধ্যস্থিত জিনেকডাউন

সমস্ত গবেষণা UCLA প্রাণী অধিকার কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল। জেব্রাফিশ (এবি) কে 1 ঘন্টার জন্য আলোক উদ্দীপনা দ্বারা প্রজনন করা হয়েছিল এবং 28 ডিগ্রিতে 24 ঘন্টার জন্য মোট 200টি ডিম ফুটানো হয়েছিল। ফলস্বরূপ ভ্রূণগুলিকে প্রোনেজে (2 মিলিগ্রাম/মিলি) ডিকোরিওনেট করা হয়েছিল এবং 5 দিন-পরবর্তী নিষিক্তকরণ (DPF) পর্যন্ত 20 ug/ml বা গাড়ির চূড়ান্ত ঘনত্বে DEPe (স্ট্যান্ডার্ড রেফারেন্স ম্যাটেরিয়ালস, NIST, Gaithersburg, MD) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল।

এই ঘনত্বটি নির্বাচন করা হয়েছিল যেহেতু এর ফলে নিউরনের ক্ষতি হয়েছে যা পূর্বে রিপোর্ট করা হয়েছিল কিন্তু উল্লেখযোগ্য মৃত্যুহার ছাড়াই (বার্নহিলেট আল। 2020)।Cyp1A নকডাউন মাছ নিম্নরূপ প্রস্তুত করা হয়েছিল। http://crispr.mit.edu, theCRISPR RNA (Cyp1A-crRNA) এ উপলব্ধ টুল ব্যবহার করে ) Cyp1A জিনের প্রথম এক্সোনে উপযুক্ত PAM সাইটগুলির অবস্থানের উপর ভিত্তি করে ডিজাইন করা হয়েছিল।

সেরা ডিজাইনটি আইডিটি ডিএনএ (www.idtdna.com) থেকে স্ট্যান্ডার্ড CRISPR-Cas9 tracrRNA সহ কেনা হয়েছিল। Cyp1Agene এবং tracrRNA-এর জন্য crRNA আলাদাভাবে 10 মিমি ট্রিস-ইডিটিএ-তে পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল যাতে 100 μM চূড়ান্ত ঘনত্ব পাওয়া যায়। তারপরে, tracrRNA কে crRNAin 1×duplex বাফার (100 mM পটাসিয়াম অ্যাসিটেট; 30 mM HEPES, pH 7.5; IDT DNA) এর সাথে 10 μM এর চূড়ান্ত ঘনত্বের জন্য একত্রিত করা হয়েছিল। মিশ্রণটিকে ফুটন্ত পানির স্নানে 5 মিনিটের জন্য 95 ডিগ্রীতে গরম করা হয়েছিল এবং ধীরে ধীরে ঘরের তাপমাত্রায় ঠান্ডা করা হয়েছিল যাতে incrRNA এবং tracrRNA এর পরিপূরক নিউক্লিওটাইড সিকোয়েন্সের অ্যানিলিং এবং ফাংশনালগাইড RNA (gRNA) গঠনের অনুমতি দেওয়া হয়।

3 μL annealedgRNA এর ভলিউমকে তখন মিউট্যান্ট Cyp1A-এর টেমপ্লেট সিকোয়েন্স হিসাবে ডোনার সিঙ্গেল-স্ট্র্যান্ড ডিএনএ (ssDNA; 200 μM) এর একই ভলিউমের সাথে একত্রিত করা হয়েছিল। চূড়ান্ত CRISPR/Cas9ribonucleoprotein (Cyp1A-RNP) কমপ্লেক্স গঠনের জন্য 1×ইঞ্জেকশন বাফারে (5 mM KCl; 0.1 M সোডিয়াম ফসফেট, pH 6.8) Cas9 Nuclease (IDT) এর পরিমাণ 3 ug মিশ্রণে যোগ করা হয়েছিল।

Scramble RNP (SC-RNP) এর প্রস্তুতির জন্য, নির্দিষ্ট Cyp1A-crRNA একটি বাণিজ্যিক Scramble-crRNA দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয়েছিল, জিনোমের উপর কোন লক্ষ্য ছিল না। এই কাজে ব্যবহৃত সমস্ত অলিগোনিউক্লিওটাইডের এই ক্রম সম্পূরক সারণী 1-এ তালিকাভুক্ত করা হয়েছে। ডিমগুলিকে প্রায় 3 nL RNP ইনজেকশন মিশ্রণের সাথে স্টেরিওমাইক্রোস্কোপের অধীনে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল।

পাঁচটি জৈবিক প্রতিলিপি ইনজেকশন (প্রত্যেকটি প্রতিলিপিতে 400-600টি ডিম সাইপ1এ-আরএনপ্যান্ড এবং 100-200টি SC-আরএনপি দিয়ে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছে) সঞ্চালিত হয়েছিল এবং সমস্ত মাইক্রোইনজেকশন 60 মিনিটের মধ্যে সম্পন্ন হয়েছিল। ডিমগুলিকে 100 মিমি প্লাস্টিকের পেট্রি ডিশের মধ্যে স্থাপন করা হয়েছিল এবং ডিমের জলে 28 ডিগ্রীতে সেঁকানো হয়েছিল। ভ্রূণের বেঁচে থাকার হার 7 দিন পর্যন্ত পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।

স্কোরিং বিকৃতির জন্য বেঁচে থাকা মাছের ছবি পর্যালোচনা করা হয়েছিল। মাথার বিকৃতি, লেজের বিকৃতি, কার্ডিয়াক এডিমা, এবং কুসুম শোথ সহ 4টি বিকাশগত ত্রুটির উপস্থিতির জন্য প্রতিটি লার্ভাকে একটি অন্ধভাবে স্কোর করা হয়েছিল৷ সমস্ত 4টি ত্রুটিযুক্ত লার্ভা 4 স্কোর করবে, যেখানে স্বাভাবিক বিকাশকারী লার্ভা স্কোর করবে 0৷ পরিসংখ্যানগত টি-পরীক্ষাটি উল্লেখযোগ্য পার্থক্যগুলি মূল্যায়ন করতে ব্যবহৃত হয়েছিল।

For more information:1950477648nn@gmail.com