Cistanche Tubulosa প্রাথমিক এবং মেটাস্ট্যাটিক মানব কোলন ক্যান্সার কোষের প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির মধ্যস্থতাকারী অ্যাপোপটোসিসকে প্ররোচিত করে

বিমূর্ত

কোলন ক্যান্সার বিশ্বব্যাপী তৃতীয় সর্বাধিক সাধারণ ক্যান্সার। প্রচলিত থেরাপিগুলি গুরুতর প্রতিকূল প্রভাবগুলির সাথে মাঝারি কার্যকারিতা দেখিয়েছে, তাই নিরাপদ বিকল্পগুলির জন্য জরুরি প্রয়োজন রয়েছে। এই গবেষণায়, Cistanche tubulosa, স্থানীয় নাম Thanoon, একটি সম্ভাব্য ফাইটোথেরাপিউটিক কৌশল হিসাবে বিবেচিত হয়েছিল কারণ ঐতিহ্যগত ওষুধে এর পরিচিত উচ্চ থেরাপিউটিক সম্ভাবনা এবং মধ্যপ্রাচ্য অঞ্চলে ব্যাপক প্রাচুর্যের কারণে। বায়োঅ্যাকটিভ যৌগগুলি গুঁড়া সিস্তানচে টিউবুলোসা থেকে বের করা হয়েছিল এবং চারটি কোলন ক্যান্সার সেল লাইনের বিরুদ্ধে তাদের ক্যান্সার প্রতিরোধক বৈশিষ্ট্যগুলির জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল যার মধ্যে দুটি প্রাথমিক টিউমার (CaCo2 এবং HCT116) থেকে প্রাপ্ত এবং দুটি মেটাস্ট্যাটিক সাইট (LoVo এবং SW620) থেকে প্রাপ্ত।

অ্যাপোপটোসিস এবং সেলুলার রেডক্স হোমিওস্ট্যাসিসের আনয়নে সিস্তানচে টিউবুলোসার প্রভাবও তদন্ত করা হয়েছিল। Cistanche tubulosa 1 mg/mL অপরিশোধিত নির্যাস দিয়ে 72 ঘন্টার চিকিৎসায় 60 শতাংশের বেশি সমস্ত পরীক্ষিত ক্যান্সার কোষের বিস্তারের ঘনত্ব এবং সময়-নির্ভর বাধা প্রদর্শন করেছে। প্রসারণের বাধাটি অ্যাপোপটোসিস, অন্তঃকোষীয় প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির উত্পাদন এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল সুপারঅক্সাইডের দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল। এই তথ্যটি পরামর্শ দেয় যে সিস্তানচে টিউবুলোসা অ্যাডিটিভ অ্যান্টি-কোলন ক্যান্সার থেরাপির জন্য একটি প্রতিশ্রুতিশীল প্রার্থী। এটি কোলন ক্যান্সার কোষের বিরুদ্ধে সিস্তানচে টিউবুলোসার অ্যান্টিক্যান্সার বায়োঅ্যাক্টিভিটি দেখানো প্রথম গবেষণা।

cistanche উদ্ভিদ নির্যাস পণ্যের ঔষধি থেরাপি ক্লিক করুন

শব্দ সংক্ষেপ:

7-AAD, 7-Amino-Actinomycin D; CTE, Cistanche tubulosa নির্যাস; EMEM, ঈগলের ন্যূনতম অপরিহার্য মাধ্যম; FBS, ভ্রূণ বোভাইন সিরাম; DCF, 2,7-ডিক্লোরোফ্লুরেসসিন; DCFH-DA, 2,7- ডাইক্লোরোডিহাইড্রোফ্লুরেসসিন ডায়াসেটেট; DMEM, Dulbecco's Modified Eagles's Medium; DMSO, ডাইমেথাইলসালফক্সাইড; MTT, 3-[4,5-ডাইমেথাইলথিয়াজল-2-yl]-2,5-ডিফেনিল্টেট্রাজোলিয়াম; PE, Phycoerythrin; RFU, আপেক্ষিক ফ্লুরোসেন্স ইউনিট; ROS, প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি

ভূমিকা

কোলোরেক্টাল ক্যান্সার বিশ্বব্যাপী সবচেয়ে সাধারণ ক্যান্সারগুলির মধ্যে একটি (Brenner et al., 2014), এবং 2035 সালে আনুমানিক 2.4 মিলিয়ন ক্ষেত্রে এর প্রকোপ ক্রমাগত বৃদ্ধি পাচ্ছে, আধুনিক খাদ্যাভ্যাস এবং জীবনযাত্রার সাথে সাথে শারীরিক কার্যকলাপ হ্রাসের কারণে। বর্তমান প্রচেষ্টা কোলোরেক্টাল ক্যান্সারের বর্তমান মহামারী মোকাবেলায় পর্যাপ্ত নয় এবং তাই কার্যকর প্রতিরোধ এবং চিকিত্সার জন্য অভিনব পদ্ধতির প্রয়োজন যার মধ্যে ফাইটোথেরাপিউটিকস (ওয়েডনার এট আল।, 2015) এর মতো নিরাপদ বিকল্প হস্তক্ষেপের সংমিশ্রণে জীবনযাত্রার পরিবর্তন সহ। ফাইটোথেরাপি, রোগের চিকিৎসার জন্য ঔষধি গাছের ব্যবহার, প্রাচীন মানব ইতিহাসের একটি অনিবার্য অংশ। ঔষধি গাছগুলি দীর্ঘকাল ধরে ক্যান্সারের বিকল্প চিকিত্সার উত্স হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছে, যা প্রচলিত ওষুধে ব্যবহৃত ষাট শতাংশের বেশি অ্যান্টিক্যান্সার এজেন্টের প্রতিনিধিত্ব করে (বালুনাস এবং কিংহর্ন, 2005; সাইবু এট আল।, 2015)। কিছু সুপরিচিত উদাহরণের মধ্যে রয়েছে ক্যাথারান্থাস রোজাস জি ডনের নির্যাস। (Apocynaceae), Taxus baccata L. (Taxaceae), এবং Camptotheca acuminate Decne (Nyssaceae) (Cragg and Newman, 2005; da Rocha et al., 2001)। বেশ কিছু ভেষজ নির্যাস এবং ফাইটোকেমিক্যালসকে কোলোরেক্টাল ক্যান্সারে অ্যান্টিটিউমার প্রভাব প্রয়োগ করতে দেখানো হয়েছে যা প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির (ROS) উত্পাদন এবং ক্যান্সার কোষের অ্যাপোপ্টোসিসের সাথে যুক্ত মেলিসা অফিসিনালিস (ওয়েইডনার এট আল।, 2015) থেকে নির্যাসের ক্ষেত্রে দায়ী।

ফাইটোথেরাপিউটিক প্রার্থীদের মধ্যে, Cistanche tubulosa, একটি Orobanchaceae পরজীবী মরুভূমির উদ্ভিদ (Jiang et al., 2009) যা আফ্রিকা, এশিয়া এবং ভূমধ্যসাগরীয় অঞ্চলের শুষ্ক এবং আধা-শুষ্ক অঞ্চলে ব্যাপকভাবে বিতরণ করা হয়, এর মূল্যবান ঔষধি গুণ রয়েছে বলে প্রমাণিত হয়েছে। Cistanche tubulosa ব্যাপকভাবে ঐতিহ্যগত ঔষধে ব্যবহৃত হয়েছে এবং কিডনির ঘাটতি, রোগাক্রান্ত লিউকোরিয়া, মেট্রোরিয়াজিয়া, মহিলা বন্ধ্যাত্ব এবং বার্ধক্যজনিত কোষ্ঠকাঠিন্য (জিয়াং এট আল।, 2009) এর নিরাময়মূলক প্রভাবের জন্য পরামর্শ দেওয়া হয়। Cistanche Tubulosa-এর বৈশিষ্ট্যগুলি গত দশকে নিবিড়ভাবে অধ্যয়ন করা হয়েছে যার মধ্যে ভাসোরেলাক্স্যান্ট (Yoshikawa et al., 2006), hepatoprotective (Morikawa et al, 2010), anti-hyperglycemic এবং hypolipidemic প্রভাব (Xiong et al., 2013)। সিস্তানচে টিউবুলোসাকে ইমিউন সিস্টেমের শক্তিশালী বর্ধক, হাড় গঠনের প্রবর্তক এবং একটি অ্যান্টি-এজিং এবং অ্যান্টি-ক্লান্তি এজেন্ট হিসাবেও পরামর্শ দেওয়া হয়েছিল (জু এট আল।, 2014)। উপরন্তু, Cistanche tubulosa নির্যাস আল্জ্হেইমের রোগ মডেল (Wu et al., 2015) এ অ্যামাইলয়েড জমাকে ব্লক করতে দেখানো হয়েছে। এর বিভিন্ন থেরাপিউটিক ব্যবহার সত্ত্বেও, সম্ভাব্য ক্যানসার এজেন্ট হিসাবে Cistanche Tubulosa এর প্রভাব এখনও অধ্যয়ন করা হয়নি।

বর্তমান কাজে, আমরা দুটি প্রাথমিক এবং দুটি মেটাস্ট্যাটিক কোলন ক্যান্সার সেল লাইনে সিস্তানচে টিউবুলোসার অ্যান্টিক্যান্সার প্রভাব এবং এই প্রভাবের অন্তর্নিহিত সম্ভাব্য প্রক্রিয়াগুলি তদন্ত করেছি।

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

উদ্ভিদের নির্যাস সংগ্রহ ও প্রস্তুত করা, সিস্তানচে টিউবুলোসার নমুনাগুলি কাতারের একটি মরুভূমি থেকে 2014 সালে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং উদ্ভিদের সত্যতা একজন ভেষজ বিশেষজ্ঞ দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল৷ ভাউচারের নমুনাগুলি ADLQ-এর টক্সিকোলজি এবং বহুমুখী বিভাগে সংরক্ষণাগারভুক্ত করা হয়েছে৷ শুকনো উদ্ভিদের নমুনাগুলিকে Retsch Knife Mill Grindomix GM300 দিয়ে সূক্ষ্ম পাউডার তৈরি করা হয়েছিল। 200 rpm-এ রোটারি শেকারে 37 ডিগ্রিতে রাতারাতি 200 মিলি অতি বিশুদ্ধ জল দিয়ে কুড়ি গ্রাম পাউডার বের করা হয়েছিল। অপরিশোধিত Cistanche tubulosa extracts (CTE) 8000 rpm-এ 30 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল অদ্রবণীয় যৌগগুলিকে, সুপারনেট্যান্ট সংগ্রহ করা, এবং Labconco Freezone 6 প্লাস ফ্রিজ ড্রায়ার ব্যবহার করে ফ্রিজ-শুকানো। শুকনো নির্যাসটি Dulbecco's Modified Eagles Medium (DMEM, SIGMA, Germany) এ 20 mg/mL এর ঘনত্বে পুনর্গঠন করা হয়েছিল এবং 0{12}}মাইক্রোন মেমব্রেন ফিল্টারের মাধ্যমে জীবাণুমুক্ত করা হয়েছিল৷

সেল লাইন এবং সেল রক্ষণাবেক্ষণ

হিউম্যান কোলন কার্সিনোমা সেল লাইন CaCo2, SW620, এবং LoVo সেল লাইনস সার্ভিস (CLS, Eppelheim, Germany) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল যখন HCT 116 সেল লাইন ছিল কাতার ইউনিভার্সিটির বায়োলজিক্যাল অ্যান্ড এনভায়রনমেন্টাল সায়েন্সেস ডিপার্টমেন্ট থেকে এক ধরনের উপহার। CaCo2 এবং HCT11 কোলন কার্সিনোমার প্রাথমিক সাইট থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল যখন SW620 এবং LoVo মেটাস্ট্যাটিক সাইট থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। SW620, HCT116, এবং LoVo কোষগুলি DME মিডিয়ামে সংষ্কৃত এবং রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল যখন CaCo2 কোষগুলি ঈগলের ন্যূনতম প্রয়োজনীয় মাধ্যম (EMEM, SIGMA, জার্মানি) এ রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল। 5 শতাংশ কার্বন ডাই অক্সাইডযুক্ত আর্দ্র বায়ুমণ্ডলে 10 শতাংশ ভ্রূণের বোভাইন সিরাম (FBS, SIGMA, জার্মানি) এবং 1 শতাংশ পেনিসিলিন/স্ট্রেপ্টোমাইসিন (SIGMA, জার্মানি) সহ সংশ্লিষ্ট মাঝারি 37 ডিগ্রিতে মনোলেয়ার কালচারড হিসাবে কোষগুলি জন্মানো হয়েছিল।

কোষের কার্যক্ষমতা পরীক্ষা

{{0} [৪,5-ডাইমেথাইলথিয়াজল-2-ইএল]-2,5-ডিফেনিল্টেট্রাজোলিয়াম (এমটিটি) অ্যাস ব্যবহার করা হয়েছিল সাইটোটক্সিক কার্যকলাপের মূল্যায়নের জন্য CTE একইভাবে যেমন পূর্বে বর্ণিত হয়েছে (জাগানজ্যাক এট আল।, 2010)। CaCo2, HCT116, SW620, এবং 96-কূপ প্লেটে সংষ্কৃত LoVo কোষের বীজের ঘনত্ব ছিল প্রতি কূপে 104 কোষ। কোষগুলি চিকিত্সার 24 ঘন্টা আগে 10 শতাংশ এফবিএসের সাথে সম্পূরক সংশ্লিষ্ট মাধ্যমে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল। 24 ঘন্টা পরে, মাধ্যমটি সরানো হয়েছিল এবং 5 শতাংশ CO2 ধারণকারী আর্দ্র বায়ুমণ্ডলে 24, 48 এবং 72 ঘন্টার জন্য 0, 0.25, 0.5, 1, এবং 2 mg/mL CTE দিয়ে কোষগুলিকে 37 ডিগ্রিতে চিকিত্সা করা হয়েছিল। CTE চিকিত্সার পরে, মাধ্যমটি সরানো হয়েছিল এবং প্রতিটি কূপে 40 μL MTT সমাধান (0.5 mg/mL) যোগ করা হয়েছিল।

ইনকিউবেশনের 3 ঘন্টা পরে, এমটিটি দ্রবণটি সরানো হয়েছিল, ফরমাজান পণ্যটি ডাইমিথাইলসালফক্সাইডে দ্রবীভূত হয়েছিল (DMSO, SIGMA, জার্মানি), এবং শোষণকে একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার (Infinite 200 PRO NanoQuant, Tecan Trading AG, সুইজারল্যান্ড) দিয়ে 590 nm এ পরিমাপ করা হয়েছিল। .

অ্যাপোপটোসিস পরীক্ষা

CaCo2, HCT116, SW620, এবং LoVo কোষে অ্যাপোপটোসিস সনাক্ত করা হয়েছিল PE Annexin V Apoptosis Detection Kit I ব্যবহার করে 7-Amino-Actinomycin D (7-AAD) একটি অত্যাবশ্যক রঞ্জক হিসাবে (Becton) ডিকিনসন ইন্টারন্যাশনাল, বেলজিয়াম) প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে। সংক্ষেপে, CTE (0, 0.5) সংযোজনের আগে 24 ঘন্টার জন্য 10 শতাংশ FBS এর সাথে সম্পূরক একটি সংশ্লিষ্ট মিডিয়াতে 24-ওয়েল প্লেটে 5×1 ঘনত্বে04টি কোষ/কূপ তৈরি করা হয়েছিল। , বা 1 mg/mL)। 24 CTE ইনকিউবেশনের পরে, কোষগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল, ঠান্ডা ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইন দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং অন্ধকারে ঘরের তাপমাত্রায় 15 মিনিটের জন্য Phycoerythrin (PE) Annexin V এবং 7-AAD দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল৷ FACS ব্যবহার করে ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা দাগযুক্ত কোষগুলি 1 ঘন্টার মধ্যে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। Aria III ফ্লো সাইটোমিটার এবং FACSDiva সফ্টওয়্যার (Becton Dickinson) ন্যূনতম 104 টি সেল সহ একটি কম প্রবাহ হারে। 6 µM ক্যাম্পটোথেসিন (SIGMA) দিয়ে 4 ঘন্টার জন্য কোষের চিকিত্সা পরীক্ষার জন্য একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।

অন্তঃকোষীয় ROS উত্পাদন

আন্তঃকোষীয় ROS উৎপাদন 2,7- ডাইক্লোরোডিহাইড্রোফ্লুরেসসিন ডায়াসেটেট (ডিসিএফএইচ-ডিএ, সিগমা, জার্মানি) ব্যবহার করে পরীক্ষা করা হয়েছিল। DCFH-DA হল একটি ননফ্লুরোসেন্ট প্রোব, যা ফ্লুরোসেন্ট যৌগ 2,7- ডিক্লোরোফ্লুরেসসিন (DCF) (Poljak-Blazi et al., 2011) এ আন্তঃকোষীয় ROS দিয়ে অক্সিডাইজ করা হয়। ডিসিএফএইচডিএ অ্যাস একইভাবে সম্পাদিত হয়েছিল যেমন আমরা আগে বর্ণনা করেছি (সিনড্রিক এট আল, 2013; পোলজাক-ব্লাজি এট আল।, 2011)। সংক্ষেপে, CaCo2, HCT116, SW620, এবং 96-কূপ কালো প্লেটে সংষ্কৃত LoVo কোষের বীজের ঘনত্ব ছিল প্রতি কূপে 104 কোষ। 24 ঘন্টার জন্য 10 শতাংশ FBS এর সাথে সম্পূরক সংশ্লিষ্ট মিডিয়ামে সেলগুলি প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল।

চিকিত্সার আগে কোষগুলিকে 10 µM DCFH-DA দিয়ে 37 ডিগ্রিতে 30 মিনিটের জন্য 5 শতাংশ CO2 / 95 শতাংশ বাতাসে জ্বালিয়ে দেওয়া হয়েছিল। কোষ তারপর ধুয়ে এবংফিনল রেডের মাধ্যমে {{0}}, 0.5, এবং 1 mg/mL CTE দিয়ে চিকিত্সা করা হয়। শীর্ষ ফ্লুরোসেন্স এবং গ্যাস কন্ট্রোল মডিউল (ইনফিনিট 200 PRO, টেকান ট্রেডিং এজি, সুইজারল্যান্ড) সহ একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার ব্যবহার করে 37 ডিগ্রি এবং 5 শতাংশ CO2 এ 25 ঘন্টা ধরে অন্তঃকোষীয় ROS গঠনটি অবিচ্ছিন্নভাবে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা 500 এনএম এর উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য এবং 529 এনএম এ নির্গমন সনাক্তকরণের সাথে পরিমাপ করা হয়েছিল। নির্বিচারে ইউনিট, আপেক্ষিক প্রতিপ্রভ ইউনিট (RFU), সরাসরি প্রতিপ্রভ তীব্রতার উপর ভিত্তি করে ছিল

মাইটোকন্ড্রিয়াল সুপারঅক্সাইড প্রজন্ম

মাইটোকন্ড্রিয়া দ্বারা সুপারঅক্সাইড তৈরি করতে CTE-এর ক্ষমতা অনুমান করা হয়েছিল একটি সেল-ভেদ্য, মাইটোকন্ড্রিয়া-লক্ষ্যযুক্ত MitoSOX রেড প্রোব (লাইফ টেকনোলজিস) এবং নিউক্লিয়ার স্টেনিং (লাইফ টেকনোলজিস) এর জন্য Hoechst 33342 ব্যবহার করে। CaCo2, HCT116, SW620, এবং LoVo কোষগুলিকে 24 ঘন্টার জন্য 10 শতাংশ FBS এর সাথে সম্পূরক একটি সংশ্লিষ্ট মাধ্যমের প্রতি কূপের ঘনত্বে 104টি কূপযুক্ত কূপ প্লেটে বীজ করা হয়েছিল . এরপর কোষগুলিকে 4 µM MitoSOX এবং 2 µM Hoechst 33342 দিয়ে 20 মিনিটের জন্য লোড করা হয়, অতিরিক্ত রঞ্জক ধুয়ে ফেলা হয় এবং কূপগুলিকে 0, 0.5, এবং 1 mg/mL CTE দিয়ে 24 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রি এবং 5 শতাংশ CO2 দিয়ে চিকিত্সা করা হয়। MitoSOX এর জন্য 510 nm এর উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য এবং 580 nm এ নির্গমন সনাক্তকরণ এবং Hoechst 33342 এর জন্য 350 nm এর উত্তেজনা তরঙ্গদৈর্ঘ্য এবং 461 nm এ নির্গমন সনাক্তকরণের মাধ্যমে ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা পরিমাপ করা হয়েছিল একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার ব্যবহার করে, 2000 এনএম এর সাথে একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার। এজি, সুইজারল্যান্ড)

পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

বর্ণনামূলক পরিসংখ্যান গড় প্লাস /- SD হিসাবে দেখানো হয়েছিল। স্টুডেন্ট টি-টেস্ট এবং চি-স্কয়ার টেস্ট ব্যবহার করে গ্রুপের মধ্যে পার্থক্যের তাত্পর্য মূল্যায়ন করা হয়েছিল। যখন দুইটির বেশি গোষ্ঠীর তুলনা করা হয়, আমরা যথাযথ পোস্ট-হক পরীক্ষার সাথে একতরফা ANOVA ব্যবহার করি। SPSS 11৷{5}} Mircosoft Windows এর জন্য 1 ব্যবহার করা হয়েছিল৷ P এর সাথে 0.05 এর কম পার্থক্য পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল।

ফলাফল

মানুষের কোলন ক্যান্সার সেল লাইনের বিস্তারের উপর CTE-এর প্রভাব চিত্র 1-এ দেখানো হয়েছে। পরীক্ষিত সমস্ত CTE ঘনত্ব ঘনত্ব এবং সময়-নির্ভর পদ্ধতিতে CaCo2 সেল লাইনের উপর একটি শক্তিশালী প্রতিরোধমূলক প্রভাব দেখিয়েছে (চিত্র 1A)। বাহাত্তর ঘন্টার CTE চিকিত্সা নিয়ন্ত্রণের তুলনায় CaCo2 কোষের বৃদ্ধি 60 শতাংশের বেশি বাধা দেয় (p < 0.05 সমস্ত ঘনত্বের জন্য)। HCT116 কোষের বৃদ্ধিতে CTE চিকিত্সার উল্লেখযোগ্য প্রভাব দুটি সর্বোচ্চ ঘনত্বে (1 mg/mL এবং 2 mg/mL) সর্বকালের পয়েন্টগুলিতেও সনাক্ত করা হয়েছিল, যা পরবর্তী ঘনত্বে 70 শতাংশের বেশি হ্রাসে পৌঁছেছে (চিত্র 1B, p) <0.05)।

যদিও দুটি কম CTE ঘনত্ব ({{0}}.25 এবং 0.5 mg/mL) 24 ঘন্টা পরে কোষের HCT116 বৃদ্ধি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে (p<0.05), 72="" they="" had="" no="" significant="" effect="" following="" hours="" of="" treatment="" compared="" to="" the="" control="" p="">{{0}}৷{10}}৫)। CTE-এর সাথে প্রসারণের সময় এবং ঘনত্ব-নির্ভর নিষেধ LoVo কোষগুলিতে সর্বোচ্চ ঘনত্বে 60 শতাংশের বেশি নিশ্চিত করা হয়েছিল (p < 0৷{19}}5) (চিত্র 1C) , এবং পরীক্ষিত চারটি CTE ঘনত্ব 48 ঘন্টা পরে SW620 কোষের বৃদ্ধি হ্রাস করেছে (চিত্র 1D, p < 0.05 সবার জন্য)। চিকিত্সার 72 ঘন্টা পরে, একই প্রভাব শুধুমাত্র দুটি সর্বোচ্চ ঘনত্বের (p <0.05) জন্য পরিলক্ষিত হয়েছিল যখন 0.25 এবং 0.5 mg/mL ঘনত্ব নিয়ন্ত্রণের তুলনায় কোন উল্লেখযোগ্য প্রভাব দেখায়নি (p > 0.05)। অ্যাপোপটোসিস আনয়নে 0.5 এবং 1 mg/mL CTE চিকিত্সার প্রভাব চারটি কোষ লাইনে আরও পরীক্ষা করা হয়েছিল (চিত্র 2)। 0.5 mg/mL (p) দিয়ে 24 ঘন্টা চিকিত্সার পর HCT116 এবং LoVo-তে প্রাথমিক অ্যাপোপটোসিসে কোষের বর্ধিত সংখ্যা সনাক্ত করা হয়েছিল<0.05, Figure 2B and 2C) and in all cell lines at 1 mg/mL (p<0.05). A significant increase in necrotic or late apoptotic cell number was further observed in CaCo2 and SW620 cell lines (p<0.05, Figure 2A and 2D).

আন্তঃকোষীয় ROS উত্পাদন প্ররোচিত করার জন্য CTE-এর ক্ষমতা চিত্র 3-তে প্রদর্শিত হয়েছে। CTE চিকিত্সার তিন ঘন্টা পরে সমস্ত সেল লাইনে আন্তঃকোষীয় ROS উৎপাদনে একটি শক্তিশালী বৃদ্ধি ঘটেছে (p<0.05). The intracellular ROS production increased progressively throughout the 25 hours of treatment in a time and concentration-dependent manner. Furthermore, the staining of cells with a mitochondria-targeted probe revealed a strong impact of CTE on mitochondrial superoxide production in a concentration-dependent manner (Figure 4). The highest increase in superoxide production by mitochondria was observed in HCT116 (69%, Figure 4B) and LoVo cells (82%, Figure 4C) following 24 hours of treatment with 1 mg/mL of CTE.

আকার 1:

কোলন ক্যান্সার কোষ লাইনের কার্যকারিতার উপর Cistanche tubulosa এর প্রভাব। (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo, এবং (D) SW620 কোষগুলির MTT অ্যাস দ্বারা পরিমাপ করা কোষের কার্যকারিতা নিয়ন্ত্রণ করা হয় না চিকিত্সা না করা কোলন ক্যান্সার সেল লাইনের শতাংশ হিসাবে উপস্থাপন করা হয়। প্রতিনিধি পরীক্ষার 5টি প্রতিলিপির জন্য গড় মান (±SD) দেওয়া হয়েছে: (*) তাত্পর্য p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

চিত্র 2:

Cistanche tubulosa জলের নির্যাস মানুষের কোলন ক্যান্সার কোষে apoptosis প্ররোচিত করে। Annexin-V-FITC ফ্লো সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণগুলি (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo, এবং (D) SW620 কোষগুলিকে নিয়ন্ত্রণহীন কোলন ক্যান্সার সেল লাইনের শতাংশ হিসাবে উপস্থাপন করা হয়েছে। প্রতিনিধি পরীক্ষার 3টি প্রতিলিপির জন্য গড় মান (±SD) দেওয়া হয়েছে: (*) তাত্পর্য p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

চিত্র 3:

Cistanche tubulosa জলের নির্যাস একটি সময়- এবং ডোজ-নির্ভর মধ্যে অন্তঃকোষীয় ROS উত্পাদন প্ররোচিত করে। (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo, এবং (D) SW620 কোষে DCFH-DA অ্যাস দ্বারা পরিমাপ করা ROS উত্পাদন সংশ্লিষ্ট 5- প্রতিলিপিগুলির জন্য গড় RFU মান (±SD) হিসাবে উপস্থাপিত হয় একটি প্রতিনিধি পরীক্ষা। (*) তাৎপর্য পৃ<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

চিত্র 4:

Cistanche tubulosa জলের নির্যাস মানুষের কোলন ক্যান্সার কোষে মাইটোকন্ড্রিয়াল সুপারঅক্সাইড উত্পাদন প্ররোচিত করে। A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo এবং (D) SW620 কোষে মাইটোকন্ড্রিয়া-লক্ষ্যযুক্ত MitoSOX রেড প্রোবের ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা নিয়ন্ত্রণহীন কোলন ক্যান্সার সেল লাইনের শতাংশ হিসাবে উপস্থাপন করা হয়েছে। প্রতিনিধি পরীক্ষার 5টি প্রতিলিপির জন্য গড় মান (±SD) দেওয়া হয়েছে: (*) তাত্পর্য p<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

আলোচনা

যদিও পূর্ববর্তী গবেষণায় Cistanche tubulosa-এর অসংখ্য ঔষধি গুণের কথা বলা হয়েছে, এটিই ম্যালিগন্যান্ট কোষে এর অ্যান্টি-প্রলিফারেটিভ প্রভাবের প্রথম রিপোর্ট। সিস্টানচে টিউবুলোসা বায়োঅ্যাকটিভ যৌগগুলি জল দিয়ে নিষ্কাশিত হয়, একটি অত্যন্ত মেরু দ্রাবক, শক্তিশালী অ্যান্টিক্যান্সার বায়োঅ্যাকটিভিটি দেখায়। আমরা পূর্বে মিথানল এবং ইথাইল অ্যাসিটেটের মতো অন্যান্য দ্রাবকগুলির সাথে পানিতে দ্রবণীয় সিস্টানচে টিউবুলোসার কার্যকারিতা তুলনা করেছি, তবে জলের নির্যাসগুলি সবচেয়ে প্রতিশ্রুতিবদ্ধ ক্যান্সার প্রতিরোধী কার্যকলাপ প্রদর্শন করেছে (ডেটা দেখানো হয়নি)।

আমরা 1 mg/mL এবং 2 mg/mL-এ CTE-এর ক্ষমতা প্রদর্শন করেছি যা প্রাথমিক এবং মেটাস্ট্যাটিক কোলন ক্যান্সার কোষ লাইনের 60 শতাংশ বৃদ্ধিকে বাধা দেয়, যা কোলন ক্যান্সারের চিকিত্সা হিসাবে Cistanche tubulosa-এর সম্ভাব্য গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা প্রকাশ করে। সাধারণ কোষের তুলনায়, ক্যান্সার কোষগুলি সাধারণত রেডক্স হোমিওস্টেসিসে একটি ব্যাঘাত দ্বারা চিহ্নিত করা হয় এবং বর্তমান অ্যান্টিক্যান্সার থেরাপির একটি সাধারণ কৌশল হল সেলুলার অক্সিডেটিভ স্ট্রেস বৃদ্ধি করা (ইয়াং এট আল, 2013)। যদিও শারীরবৃত্তীয়ভাবে নিম্ন স্তরের ROS এর একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা রয়েছে সংকেত অণু হিসাবে, অত্যধিক ROS উত্পাদন ক্যান্সারের অস্থিরতা এবং ম্যালিগন্যান্সিতে অবদান রাখতে পারে (Liou and Storz, 2010)। অস্বাভাবিকভাবে, সেলুলার রেডক্স হোমিওস্টেসিসে এই ভারসাম্যহীনতা ক্যান্সার কোষগুলিকে ROS প্ররোচিত কোষের মৃত্যুর জন্য আরও ঝুঁকিপূর্ণ করে তোলে (জাগানজ্যাক এট আল।, 2008; নোগুইরা এবং হে, 2013)। এই গবেষণায় রিপোর্ট করা CTE-এর antiproliferative প্রভাবটি নির্যাসের মধ্যে পরিচিত এবং অজানা যৌগের বিভিন্ন অতিরিক্ত- এবং অন্তঃকোষীয় প্রক্রিয়া দ্বারা মধ্যস্থতা করা যেতে পারে, একাধিক পথকে লক্ষ্য করে যা অ্যাপোপটোসিসে অপরিহার্য ভূমিকা পালন করে। কোষের মৃত্যুর বিভিন্ন মোডের মধ্যে পার্থক্য করার জন্য, আমরা পর্যবেক্ষণ করা CTE-প্ররোচিত সাইটোটক্সিসিটির জন্য দায়ী সম্ভাব্য প্রক্রিয়াটি তদন্ত করেছি

আমাদের ডেটা নির্দেশ করে যে CTE অন্তঃকোষীয় ROS উত্পাদন বৃদ্ধি করে এবং ফলস্বরূপ ROS-প্ররোচিত কোষের মৃত্যু। কোষের রেডক্স অবস্থাও অ্যাপোপটোসিস নিয়ন্ত্রণে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল ইলেক্ট্রন ট্রান্সপোর্ট চেইন হল সেলুলার ROS জেনারেশনের অন্যতম প্রধান সাইট (ট্র্যাচুথাম এট আল।, 2008)। তদ্ব্যতীত, অন্তঃকোষীয় ROS মাইটোকন্ড্রিয়া-নির্ভর এবং স্বাধীন পথ উভয়ের মাধ্যমে সেলুলার অ্যাপোপটোসিস সৃষ্টি করতে পারে (সিনহা এট আল।, 2013)। প্রকৃতপক্ষে, আমাদের ডেটাও ইঙ্গিত করে যে CTE-প্ররোচিত ফসফ্যাটিডিলসারিন বাহ্যিককরণ, প্রাথমিক এবং মেটাস্ট্যাটিক ক্যান্সার সেল লাইন উভয় ক্ষেত্রেই অ্যাপোপটোসিসের একটি সাধারণ প্রভাব, যা পরামর্শ দেয় যে CTE-প্ররোচিত মৃত্যুর প্রক্রিয়াটি নেক্রোসিসের পরিবর্তে অ্যাপোপটোসিস দ্বারা মধ্যস্থতা করা হয়। ক্যান্সার কোষে অ্যাপোপটোসিস সক্রিয়করণ একটি সংশোধনমূলক কৌশল এবং অনেক অ্যান্টিক্যান্সার ওষুধ ক্যান্সার কোষে অ্যাপোপটোটিক প্রভাব ফেলতে পারে।

ক্যান্সার কোষে প্রো-অ্যাপোপ্টোটিক ক্রিয়াকলাপের সাথে যৌগ বা নির্যাস তাই ক্যান্সার বিরোধী ওষুধ গবেষণায় সম্ভাব্য কার্যকর (Wong, 2011)। CTE-প্ররোচিত প্রো-অ্যাপোপটোটিক প্রভাবটি মাইটোকন্ড্রিয়া-প্ররোচিত ROS প্রক্রিয়া দ্বারা মধ্যস্থতা করা হয়েছে কিনা তা নির্ধারণ করতে, আমরা CTE-চিকিত্সা করা কোষগুলিতে একটি মাইটোকন্ড্রিয়া-লক্ষ্যযুক্ত ফ্লুরোসেন্ট প্রোব ব্যবহার করে সুপারঅক্সাইড উত্পাদন পরিমাপ করেছি। আমাদের ডেটা স্পষ্টভাবে দেখায় যে CTE মাইটোকন্ড্রিয়াল সুপারঅক্সাইড উত্পাদনকে উদ্দীপিত করে যা পরামর্শ দেয় যে সিস্তানচে টিউবুলোসা অ্যান্টিক্যান্সার কার্যকলাপ অন্ততপক্ষে মাইটোকন্ড্রিয়া-প্ররোচিত ROS প্রক্রিয়ার মাধ্যমে মধ্যস্থতা করে।

উপসংহার

উপসংহারে, আমাদের ডেটা পরামর্শ দেয় যে মরুভূমির উদ্ভিদ সিস্তানচে টিউবুলোসার জলের নির্যাস কোলন ক্যান্সার প্রতিরোধ ও চিকিত্সার জন্য অন্যান্য প্রচলিত থেরাপির সাথে একত্রে একটি ক্যান্সার প্রতিরোধী পদ্ধতির জন্য একটি প্রতিশ্রুতিশীল প্রার্থীকে প্রতিনিধিত্ব করতে পারে। আমরা আরও দেখাই যে ক্যান্সার কোষের বিরুদ্ধে উদ্ভিদের নির্যাসের বিষাক্ততা বর্ধিত অন্তঃকোষীয় ROS উৎপাদন এবং অন্তত আংশিকভাবে মাইটোকন্ড্রিয়াল-নির্ভর অ্যাপোপটোসিস দ্বারা মধ্যস্থতা করে। ক্যান্সার প্রতিরোধী কার্যকলাপের জন্য দায়ী পৃথক জৈবিকভাবে সক্রিয় উপাদানগুলিকে বিচ্ছিন্ন এবং চিহ্নিত করার জন্য আরও গবেষণা চলছে।

একটি কার্যকর কেমোপ্রিভেন্টিভ এজেন্ট হিসাবে এই নির্যাসটির সম্ভাব্য ব্যবহার মূল্যায়ন করতে এবং আণবিক স্তরে কোলন ক্যান্সার কোষগুলির উপর ক্রিয়া করার প্রক্রিয়া বোঝার জন্য আরও গবেষণা প্রয়োজন। ক্যান্সার প্রতিরোধের জন্য Cistanche tubulosa-এর পরিলক্ষিত উপকারী স্বাস্থ্য প্রভাবগুলি নিশ্চিত করার জন্য আরও প্রাক-ক্লিনিক্যাল এবং ক্লিনিকাল অধ্যয়ন প্রয়োজন।

স্বীকৃতি

আর্থিক সহায়তা এবং স্পনসরশিপ: এই গবেষণাটি এন্টি-ডোপিং ল্যাব কাতার দ্বারা সমর্থিত ছিল।

স্বার্থের দ্বন্দ্ব: লেখক কোন স্বার্থের দ্বন্দ্ব ঘোষণা করেন না।

তথ্যসূত্র

Balunas MJ, Kinghorn, AD. ঔষধি গাছ থেকে ওষুধ আবিষ্কার। জীবন বিজ্ঞান. 2005;78:431-41।

ব্রেনার এইচ, ক্লোর এম, পক্স সিপি। কোলোরেক্টাল ক্যান্সার। ল্যানসেট 2014;383,1490-502।

Cindric M, Cipak A, Zapletal E, Jaganjac M, Milkovic L, Waeg G, Stolc S, Zarkovic N, Suzana Borovic S. Stobadine 4- হাইড্রোক্সিনোনেনাল দ্বারা সৃষ্ট একটি অন্ত্রের বাধা মডেলের দুর্বলতা হ্রাস করে। টক্সিকোল ইন ভিট্রো। 2013;27:426-32।

ক্র্যাগ জিএম, নিউম্যান ডিজে। ক্যান্সার প্রতিরোধক এজেন্টের উত্স হিসাবে উদ্ভিদ। জেথনোফার্মাকল। 2005;100:72-9।

da Rocha AB, Lopes RM, Schwartsmann G. ক্যানসার থেরাপিতে প্রাকৃতিক পণ্য। কারওপিনফার্মাকল। 2001;1:364-9। Jaganjac M, Matijevic T, Cindric M, Cipak A, Mrakovcic L, Gubisch W, Zarkovic N. মানব ভ্রূণের কিডনি কোষে নামমাত্র 4-হাইড্রক্সি-2- দ্বারা CMV-1 প্রোমোটারের আনয়ন। Acta Biochim Pol. 2010;57:179-83।

জাগানজ্যাক এম, পোলজ্যাক-ব্লাজি এম, জারকোভিক কে, শাউর আরজে, জারকোভিক এন। ওয়াকার 256 কার্সিনোমার স্বতঃস্ফূর্ত রিগ্রেশনে গ্রানুলোসাইটের সম্পৃক্ততা। ক্যান্সার লেট। 2008;260:180-6

জিয়াং ওয়াই, তু পিএফ। Cistanche প্রজাতির রাসায়নিক উপাদান বিশ্লেষণ. জে ক্রোমাটোগ্র এ. 2009;1216:1970-9।

লিউ জিওয়াই, স্টর্জ পি। ক্যান্সারে প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি। ফ্রি রেডিক রেস. 2010;44:479-96।

মরিকাওয়া টি, প্যান ওয়াই, নিনোমিয়া কে, ইমুরা কে, মাতসুদা এইচ, ইয়োশিকাওয়া এম, ইউয়ান ডি, মুরাওকা ও। মরুভূমির উদ্ভিদ সিস্তানচে টিউবুলোসা থেকে হেপাটোপ্রোটেকটিভ কার্যকলাপ সহ অ্যাসিলেটেড ফিনিলেথানয়েড অ্যামিনোগ্লাইকোসাইড। Bioorg Med Chem. 2010;18:1882-90।

নোগুইরা ভি, হে এন. আণবিক পথ: ক্যান্সার কোষে প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি হোমিওস্ট্যাসিস এবং ক্যান্সার থেরাপির প্রভাব। ক্লিন ক্যান্সার রেস. 2013;19:4309-14।

Poljak-Blazi M, Jaganjac M, Sabol I, Mihaljevic B, Matovina M, Grce M. প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির গঠন, সার্ভিকাল ক্যান্সার কোষ লাইন বৃদ্ধি এবং E6/E7 অনকোজিন প্রকাশের উপর ফেরিক আয়নের প্রভাব। টক্সিকল ভিট্রো। 2011;25:160-6।

Saibu GM, Katerere DR, Rees DJG, Meyer M. ইন ভিট্রো সাইটোটক্সিক এবং তুলবাগিয়া ভায়োলেসিয়া পাতা এবং বাল্বের জলের নির্যাসের প্রো-অ্যাপোপ্টোটিক প্রভাব। জে ইথনোফার্মাকল। 2015;164:203-9।

সিনহা কে, দাস জে, পাল পিবি, সিল পিসি। অক্সিডেটিভ স্ট্রেস: অ্যাপোপটোসিসের মাইটোকন্ড্রিয়া-নির্ভর এবং মাইটোকন্ড্রিয়া-স্বাধীন পথ। আর্চ টক্সিকোল.2013; ৮৭:1157-80। ট্রাচুথাম ডি, লু ডব্লিউ, ওগাসাওয়ারা এমএ, নিলসা আরডি, হুয়াং পি. রেডক্স কোষ বেঁচে থাকার নিয়ন্ত্রণ। অ্যান্টিঅক্সিড রেডক্স সংকেত। 2008;10:1343- 74।

Weidner C, Rousseau M, Plauth A, Wowro SJ, Fischer C, Abdel-Aziz H, Sauer S. Melissa officinalis নির্যাস অ্যাপোপটোসিসকে প্ররোচিত করে এবং প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির গঠনের মাধ্যমে কোলন ক্যান্সার কোষের বিস্তারকে বাধা দেয়। ফাইটোমেডিসিন। 2015;22:262-70।

Wong RS. ক্যান্সারে অ্যাপোপটোসিস: প্যাথোজেনেসিস থেকে চিকিত্সা পর্যন্ত। জে এক্সক্লিন ক্যান্সার রেস. 2011; 30:87।

Wu SH, Chou FP, Chyau CC, Chen JH, Tu SF, Lin HH. হেপ3বি লিভার ক্যান্সার কোষে ওয়াসাবিয়া জাপোনিকা নির্যাসের অ্যান্টি-ক্যানসারাস প্রভাব ROS সঞ্চয়, ডিএনএ ক্ষতি, এবং p73-মধ্যস্থ অ্যাপোপটোসিসের মাধ্যমে। জে ফাংশন ফুডস। 2015;14:445-55।

Xiong WT, Gu L, Wang C, Sun HX, Liu X. টাইপ 2 ডায়াবেটিক ডিবি/ডিবি ইঁদুরে সিস্তানচে টিউবুলসার অ্যান্টিহাইপারগ্লাইসেমিক এবং হাইপোলিপিডেমিক প্রভাব। জে ইথনোফার্মাকল। 2013;150:935-45।

Xu R, Sun S, Zhu W, Xu C, Liu Y, Shen L, Shi Y, Chen J. HPLC ফিঙ্গারপ্রিন্টের সাথে মিলিত চীনের বিভিন্ন সিস্টানচে প্রজাতির ইথানল নির্যাসের মাল্টি-স্টেপ ইনফ্রারেড ম্যাক্রো-ফিঙ্গারপ্রিন্ট বৈশিষ্ট্য। জে মোল স্ট্রাকট। 2014;1069:236-244।

ইয়াং ওয়াই, কারাখানোভা এস, ওয়ার্নার জে, বাজিন এভি। ক্যান্সার জীববিজ্ঞান এবং অ্যান্টিক্যান্সার থেরাপিতে প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি। কার মেড কেম। 2013;20:3677-92।

Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S, Muraoka O. Phenylethanoid aminoglycosides এবং cistanche tubulosa থেকে vasorelaxant কার্যকলাপ সহ অ্যাসিলেটেড অলিগো শর্করা। Bioorg Med Chem. 2006;14:7468-75।

For more information:1950477648nn@gmail.com