সিস্টানচে সিস্টেমিক লুপাস এরিথেমাটোসাসের কারণে কিডনি সংক্রমণের উন্নতি করে

যোগাযোগ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

অংশ 1 জন্য, এখানে ক্লিক করুন.

আলোচনা

পারমাণবিক অ্যান্টিজেনের বিরুদ্ধে সহনশীলতার বিরতি হল এর বৈশিষ্ট্যপদ্ধতিগত লুপাসerythematosus, এবং বি কোষ ছাড়াও, অটোরিঅ্যাকটিভ টি কোষগুলি এর প্যাথোজেনেসিসে কেন্দ্রীয় ভূমিকা পালন করে বলে মনে করা হয়। যাইহোক, সনাক্তকরণ হিসাবে (স্বয়ংক্রিয়) অ্যান্টিজেন-নির্দিষ্টCD4^{প্লাস} টি কোষ এখনও অটোইমিউনিটি গবেষণায় একটি বড় চ্যালেঞ্জ তৈরি করে, আজ অবধি, নিউক্লিয়ার অ্যান্টিজেন-প্রতিক্রিয়াশীল CD4 সম্পর্কে খুব কমই জানা যায়^{প্লাস}টি কোষেপদ্ধতিগতলুপাসerythematosus.

সম্প্রতি, অ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট CD4 সনাক্তকরণ এবং গণনার জন্য অভিনব পদ্ধতি^{প্লাস}টি কোষ তৈরি করা হয়েছে। বিরল অ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট টি-সেল ক্লোন সনাক্ত করতে টি-সেল লাইব্রেরি পদ্ধতি টি কোষের পূর্ববর্তী পলিক্লোনাল সম্প্রসারণকে কাজে লাগায়। এই কৌশলটি উচ্চ সংবেদনশীলতা প্রদান করে এবং সীমিত পরিমাণে কোষের সাথে কাজ করার অনুমতি দেয়। এই কৌশলটি ব্যবহার করে, আমরা সক্রিয় রোগীদের মধ্যে 5টি ক্যানোনিকাল নিউক্লিয়ার অ্যান্টিজেনের বিরুদ্ধে প্রতিক্রিয়াশীল টি কোষগুলি প্রদর্শন করতে সক্ষম হয়েছি।পদ্ধতিগতলুপাসerythematosus. লাইব্রেরি-ভিত্তিক সনাক্তকরণের অসুবিধাগুলি হল, শ্রম-নিবিড় হওয়ার পাশাপাশি, প্রসারণের সময় নির্দিষ্ট ক্লোনগুলির বৃদ্ধি বা ক্ষতি, ফেজ বাদ দেওয়া যায় না এবং কোষগুলির ফেনোটাইপিক বিশ্লেষণের জন্য সীমিত বিকল্পগুলি।

স্ট্যান্ডার্ড সহকর্মী সাইটোমেট্রি সনাক্তযোগ্য ইভেন্টের সংখ্যা দ্বারা সীমাবদ্ধ, যা সাধারণত 0.01 শতাংশের বেশি ফ্রিকোয়েন্সি সহ জনসংখ্যার নমুনার বিশ্লেষণকে সীমাবদ্ধ করে। টি-সেল লাইব্রেরি ব্যবহার করে আমাদের পর্যবেক্ষণ প্রকাশ করেছে যে অটোরিঅ্যাকটিভ সিডি 4 সঞ্চালনের ফ্রিকোয়েন্সি^{প্লাস}একটি রোগের বিস্তারে আক্রান্ত রোগীদের একটি নির্দিষ্ট অটোঅ্যান্টিজেনের জন্য টি কোষগুলি মিলিয়ন কোষে w20 কোষ ছিল, যা 0.002 শতাংশের ফ্রিকোয়েন্সি প্রতিনিধিত্ব করে; অতএব, অটোঅ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট CD4 সনাক্তকরণ^{প্লাস}স্ট্যান্ডার্ড, নন-ম্যানিপুলেটেড ফেলো সাইটোমেট্রি ব্যবহার করে টি কোষ প্রায় অসম্ভব। বাকের এট আল। CD4 এর প্রাক-সমৃদ্ধকরণ চালু করা হয়েছে^{প্লাস}টি কোষ যেগুলি সহযোগী সাইটোমেট্রিতে অধিগ্রহণের আগে নির্দিষ্ট অ্যান্টিজেনের প্রতি প্রতিক্রিয়াশীল, যা ARTE পদ্ধতি নামে পরিচিত। পারমাণবিক অ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট CD4 সনাক্তকরণের জন্য এই পদ্ধতি অবলম্বন করা^{প্লাস}টি কোষ, আমরা আমাদের অনুসন্ধানগুলি নিশ্চিত করতে এবং পারমাণবিক অ্যান্টিজেন-প্রতিক্রিয়াশীল CD4-এর বিস্তার প্রদর্শন করতে সক্ষম হয়েছি।^{প্লাস}টি কোষ সক্রিয়পদ্ধতিগতলুপাসerythematosus. উল্লেখযোগ্যভাবে, ট্রান্সথাইরেটিন এবং সি অ্যালবিক্যানের সাথে প্রতিক্রিয়াশীল টি কোষের ফ্রিকোয়েন্সি স্বাস্থ্যকর নিয়ন্ত্রণ এবং রোগীদের মধ্যে উদাসীন ছিলপদ্ধতিগতলুপাসerythematosusবিভিন্ন রোগের কার্যকলাপ সহ। অতএব, পরিলক্ষিত সম্প্রসারণস্বয়ংক্রিয় প্রতিক্রিয়াশীলT কোষএটি সম্ভবত সাধারণ হাইপাররিঅ্যাক্টিভিটি নিষ্ক্রিয়তার ফলাফল নয়পদ্ধতিগতলুপাসerythematosusকিন্তু অ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট টি কোষের সম্প্রসারণ।

দ্যসিস্টেমিক লুপাস erythematosusসংক্রমিত করেকিডনি, তাই cistanche সুরক্ষার জন্য ব্যবহৃত হয়কিডনি.

পূর্বের রিপোর্ট ইতিমধ্যে অস্তিত্ব প্রদর্শন করেছেস্বয়ংক্রিয় প্রতিক্রিয়াশীলটি কোষভিতরেপদ্ধতিগতলুপাসerythematosus, প্রাথমিকভাবে প্রসারণ, সাইটোকাইন উৎপাদন, বা সক্রিয়করণ মার্কার আপ-প্রিগুলেশন ব্যবহার করে, যদিও এই কোষগুলির একটি স্পষ্ট জনসংখ্যার পরিমাণ নির্ধারণ করতে সক্ষম না হয়েও। পারমাণবিক অ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট টি কোষের ফ্রিকোয়েন্সি সম্পর্কে সর্বোত্তম প্রমাণ U1 ছোট রাইবোনিউক্লিওপ্রোটিনের বিরুদ্ধে প্রতিক্রিয়াশীলতার জন্য বিদ্যমান, যা মিশ্র সংযোগকারী টিস্যু রোগের একটি বৈশিষ্ট্যযুক্ত অটোঅ্যান্টিজেন লক্ষ্য এবং শুধুমাত্র রোগীদের একটি ভগ্নাংশের মধ্যে পাওয়া যায়।পদ্ধতিগতলুপাসerythematosus. U1 ছোট নিউক্লিয়ার রিবোনিউক্লিওপ্রোটিন- প্রতিক্রিয়াশীল CD4^{প্লাস}সীমিত তরলীকরণ এবং এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনো স্পট অ্যাস (ELISPOT) ব্যবহার করে টি কোষগুলি নির্ধারণ করা হয়েছিল এবং যথাক্রমে (40 থেকে 250) 106 টি কোষ এবং (20 থেকে 60) 106 পিবিএমসি-র ফ্রিকোয়েন্সিতে ঘটে বলে রিপোর্ট করা হয়েছিল, যা একই রকম। আমাদের গবেষণায় স্বয়ংক্রিয় কোষের ফ্রিকোয়েন্সি হিসাবে মাত্রা। আমাদের কাজে, আমরা বেশ কিছু বৈশিষ্ট্যের বিরুদ্ধে প্রতিক্রিয়ার তদন্ত করেছিপদ্ধতিগতলুপাসerythematosus- যুক্ত নিউক্লিয়ার অ্যান্টিজেন। মজার বিষয় হল, যদিও সক্রিয় এলএন সহ সমস্ত রোগী অ্যান্টি-নিউক্লিয়ার অ্যান্টিজেন-প্রতিক্রিয়াশীল CD4-এর বর্ধিত ফ্রিকোয়েন্সি দেখিয়েছেন^{প্লাস}টি কোষ, রোগীদের তাদের লক্ষ্য পোর্টফোলিওতে ভিন্নতা ছিল এবং নিষ্ক্রিয় রোগীদের তুলনায় অ্যান্টিজেনের বিস্তৃত সেটের বিরুদ্ধে প্রতিক্রিয়া লক্ষ্য করা হয়েছিল।পদ্ধতিগতলুপাসerythematosus. এর জৈবিক তাৎপর্য বর্তমানে অজানা। ভিন্ন CD4^{প্লাস}টি কোষের প্রতিক্রিয়াগুলি বিভিন্ন প্রতিক্রিয়ার নির্দিষ্ট ক্লিনিকাল প্রকাশের সাথে যুক্ত হতে পারে যা রোগের প্যাথোজেনেসিসের জন্য অপ্রয়োজনীয় হতে পারে।

অন্যান্য অটোইমিউন রোগের মতো, আমরা অটোরিঅ্যাকটিভ সিডি 4 এর অস্তিত্ব প্রদর্শন করতে সক্ষম হয়েছি।^{প্লাস}সুস্থ ব্যক্তিদের মধ্যে টি কোষ, সক্রিয় সিস্টেমিক লুপাস এরিথেমাটোসাস রোগীদের তুলনায় অনেক কম ফ্রিকোয়েন্সি হলেও। এমনকি টি-সেল লাইব্রেরি বা ARTE পদ্ধতির মতো অত্যন্ত সংবেদনশীল কৌশলগুলির সাথেও অ্যান্টিজেন উদ্দীপনার সাথে বা ছাড়া সক্রিয় কোষের সংখ্যার তুলনা করে এই কোষগুলি সনাক্ত করা যায় না। যাইহোক, একক-কোষ ক্লোনিং দ্বারা, আমরা দেখাতে সক্ষম হয়েছিলাম যে "পটভূমি" সংকেতটিতে প্রকৃতপক্ষে অটোঅ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট CD4 রয়েছে।^{প্লাস}টি কোষ। কোন নির্দিষ্ট ঘটনা সহনশীলতা বিরতি এবং ক্রমবর্ধমান ফ্রিকোয়েন্সি বাড়েস্বয়ংক্রিয় প্রতিক্রিয়াশীলT কোষঅনুমানমূলক থাকে; তা সত্ত্বেও, আমাদের ডেটা প্রমাণ করে যে অটোরিঅ্যাকটিভ ক্লোনের প্রসারণ সিস্টেমিক লুপাস এরিথেমাটোসাসের প্যাথোজেনেসিসে একটি ভূমিকা পালন করে।

পারমাণবিক অ্যান্টিজেন-প্রতিক্রিয়াশীল CD4 সঞ্চালন^{প্লাস}টি কোষগুলি প্রধানত IFN-g তৈরি করে এবং অল্প পরিমাণে, IL-17 এবং IL-10। এই সাইটোকাইন প্রোফাইলটি একসাথে অটোঅ্যান্টিবডি উত্পাদনের সাথে দুর্বল/কোন সম্পর্ক নেই বলে পরামর্শ দেয় যে পারমাণবিক অ্যান্টিজেন-প্রতিক্রিয়াশীল CD4 এর ভূমিকা^{প্লাস}T কোষ B কোষ সাহায্যের একচেটিয়া প্রদানকারী নাও হতে পারে। IFN-g কে LN এর প্যাথোজেনেসিসে অপরিহার্য বলে দেখানো হয়েছে। Th1 কোষে নিয়োগ দেখানো হয়েছেসংক্রামিত কিডনিটিস্যু মধ্যেপদ্ধতিগত লুপাসerythematosus, পারমাণবিক অ্যান্টিজেন-প্রতিক্রিয়াশীল টি কোষকে আক্রমণ করার প্রধান প্রার্থী তৈরি করেকিডনি, যেখানে তারা তাদের সর্বব্যাপী জ্ঞানীয় অটোঅ্যান্টিজেনের মুখোমুখি হবে। মূত্রনালীর টি কোষগুলি রোগের কার্যকলাপকে প্রতিফলিত করার জন্য এবং LN20,33-এ ইন্ট্রারেনাল কোষগুলির ফিনোটাইপকে প্রতিফলিত করার জন্য পূর্বে বর্ণনা করা হয়েছে; এইভাবে, আমরা প্রক্সি হিসাবে মূত্রনালীর টি কোষ ব্যবহার করেছিকিডনিটি কোষ। প্রস্রাবের টি কোষগুলি একটি সীমাবদ্ধ TCR পরিবর্তনশীলতা প্রকাশ করেছে, যা পর্যবেক্ষণের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণকিডনিবায়োপসি, নির্দিষ্ট টি-সেল ক্লোনের সমৃদ্ধি নির্দেশ করেসংক্রামিতকিডনিটিস্যু প্রস্রাবের টি কোষগুলির মধ্যে, আমরা পারমাণবিক অ্যান্টিজেন-প্রতিক্রিয়াশীল টি কোষগুলি সনাক্ত করতে সক্ষম হয়েছিলাম এবং তাদের ফ্রিকোয়েন্সিটি সঞ্চালন টি কোষের তুলনায় সমৃদ্ধ হয়েছিল। ফলস্বরূপ, এটি সম্ভবত নিউক্লিয়ার অ্যান্টিজেন-প্রতিক্রিয়াশীল কোষগুলি স্থানীয় অঙ্গের ক্ষতির প্রচারে সরাসরি অংশগ্রহণ করে বলে মনে হয়।

সংক্ষেপে, আমরা এখানে প্রদর্শন করি যে পারমাণবিক অ্যান্টিজেন-প্রতিক্রিয়াশীল CD4^{প্লাস}টি কোষগুলি নিষ্ক্রিয়ভাবে প্রসারিত হয়পদ্ধতিগতলুপাসerythematosus; তারা ফেনোটাইপিকভাবে প্রধানত IFN-g–উৎপাদন করে Th1 T কোষ এবং আক্রমণ করেসংক্রামিতলক্ষ্য অঙ্গ যেমনকিডনি.

সিস্টাঞ্চে সংক্রমণ এড়াতে পারেকিডনিকারণেপদ্ধতিগতলুপাসerythematosus.

পদ্ধতি

বিস্তারিত পদ্ধতি সম্পূরক উপাদান দেওয়া হয়.

বিষয় এবং রক্ত ​​ও প্রস্রাবের নমুনা

রক্তের নমুনা 17 জন সুস্থ ব্যক্তির কাছ থেকে পাওয়া গেছে, 12 জন নিষ্ক্রিয় রোগীপদ্ধতিগতলুপাস erythematosus(পদ্ধতিগতলুপাসerythematosusDAI স্কোর<10), and="" 20="" patients="" with="" active="">পদ্ধতিগতলুপাসerythematosus(পদ্ধতিগতলুপাসerythematosusDAI score >10)। এছাড়াও, 12 জন সক্রিয় রোগীর কাছ থেকে প্রস্রাবের নমুনা নেওয়া হয়েছিলপদ্ধতিগতলুপাসerythematosusএবং এলএন। Charité - Universitätsmedizin Berlin (EA 1/342/12, EA 1/098/07, এবং EA 1/036/16) এর প্রাতিষ্ঠানিক পর্যালোচনা বোর্ড এবং নীতিশাস্ত্র কর্তৃপক্ষের প্রাপ্ত নৈতিক অনুমোদনের ভিত্তিতে সমস্ত বিষয় তাদের অবহিত সম্মতি দিয়েছে ) PBMC এবং মূত্র কোষগুলি একটি FicollHypaque ঘনত্ব গ্রেডিয়েন্ট ব্যবহার করে প্রস্তুত করা হয়েছিল।

অ্যান্টিবডি এবং সাইটোমেট্রি অনুসরণ করুন

পরীক্ষাগুলির উপর নির্ভর করে, নিম্নলিখিত মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডিগুলির বিভিন্ন সংমিশ্রণে অ্যান্টিজেন-উদ্দীপিত কোষগুলিতে বেশ কয়েকটি পৃষ্ঠের অণু দাগ দেওয়া হয়েছিল: অ্যান্টি-CD3, -CD4, -CD8, -CD14, -CD20, -CD69, এবং -CD154; জীবিত এবং মৃত কোষে বৈষম্যের জন্য, লাইভ/ডেড অ্যাকোয়া কিট (লাইফ টেকনোলজিস লিমিটেড,প্যাসিস্টেমিকলুপাসerythematosus, UK) ব্যবহার করা হয়েছিল।

অন্তঃকোষীয় কোষের বগিতে দাগ দেওয়ার জন্য, ঘরের তাপমাত্রায় 15 মিনিটের জন্য কোষগুলিকে 2 শতাংশ (v/v) প্যারাফর্মালডিহাইড দিয়ে স্থির করা হয়েছিল এবং BD FACS পারমিবিলাইজিং সলিউশন 2 (BD Biosciences, San Jose, CA); নিম্নলিখিত অ্যান্টিজেনগুলিকে একটি আদর্শ প্রোটোকল ব্যবহার করে অন্তঃকোষীয়ভাবে দাগ দেওয়া হয়েছিল: CD154, IFN-g, IL-2, IL-4, IL-10, এবং IL-17৷

BD FACSCanto II এবং BD LSRFortessa (BD Biosciences) BD FACSDiva সফ্টওয়্যার (BD Biosciences) ব্যবহার করে ফ্লো সাইটোমেট্রি কোর ফ্যাসিলিটি ডয়েচেস রিউমা-ফর্সচুংজেনট্রাম বার্লিন-এ সাইটোমিটার অনুসরণ করে নমুনাগুলি অর্জন করা হয়েছিল। ফ্লো সাইটোমেট্রি ডেটা ফ্লোজো সফ্টওয়্যার (ফ্লোজো ভি 10, থ্রি স্টার, অ্যাশল্যান্ড, ভিএ) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

অ্যান্টিজেন এবং অ্যান্টিজেন পুল প্রস্তুতি

আমরা CD4 উদ্দীপিত করার জন্য নিম্নলিখিত অ্যান্টিজেন ব্যবহার করেছি^{প্লাস}টি সেল লাইব্রেরি পরীক্ষায় টি কোষ: {{0}}.5 মিলিগ্রাম/মিলি মানব SNRPD1 (SmD1) রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিন (Biorbyt Ltd., Cambridge, UK), 50 ng/ml মানুষের SNRP70 (RNP70) রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিন (Abcam Plc., Cambridge, UK), 0.5 mg/ml প্রাকৃতিক হিস্টোন প্রোটিন (Abcam Plc.), 0.5 mg/ml মানব SS -A/Ro রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিন (দয়া করে ইউরোইমুন এজি, লুবেক, জার্মানি দ্বারা সরবরাহ করা হয়), 0.5 মিলিগ্রাম/মিলি মানুষের SS-B/La রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিন (দয়া করে Orgentec Diagnostika GmbH, Mainz, জার্মানি দ্বারা সরবরাহ করা হয়), 1 mg/ml SEB (Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Steinheim, Germany), 1 mg/ml of PepTivator Candida albicans MP65 (Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach, Germany), এবং 0.5 mg/ml হিউম্যান ট্রান্সথাইরেটিন রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিন (ATGen, South Korea) )

পেরিফেরাল এবং ইউরিনারি টি-সেল লাইব্রেরি অ্যামপ্লিফাইড পেরিফেরাল এবং ইউরিনারি টি-সেল লাইব্রেরি তৈরির প্রোটোকল গৃহীত হয়েছিল এবং পূর্বে বর্ণিত হিসাবে অভিযোজিত হয়েছিল৷ 14 সংক্ষিপ্তভাবে, 200,000 পেরিফেরাল CD4^{প্লাস}টি কোষ বা 500 থেকে 2000 প্রস্রাবের CD4^{প্লাস}টি কোষগুলি অ্যান্টি-হিউম্যান সিডি 4 ব্যবহার করে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল^{প্লাস}MicroBeads (Miltenyi Biotec GmbH) প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুযায়ী। CD4 এর বিশুদ্ধতা^{প্লাস}টি-সেল ভগ্নাংশ নিয়মিতভাবে CD3 এর ভিত্তিতে ফলো সাইটোমেট্রি ব্যবহার করে পরীক্ষা করা হয়েছিল^{প্লাস}CD4^{প্লাস} expression, where the purity always reached >পেরিফেরাল রক্ত ​​এবং প্রস্রাবের নমুনার জন্য যথাক্রমে 99 শতাংশ এবং 70 শতাংশ থেকে 75 শতাংশ। সমান্তরালভাবে, অ্যান্টিজেন-উপস্থাপক কোষগুলি মানব-বিরোধী CD3 মাইক্রোবিডস (মিল্টেনি বায়োটেক জিএমবিএইচ) এবং ক্রায়োপ্রিজারডের সাথে হ্রাসের পরে PBMCs থেকে CD3 কোষ সংগ্রহ করে প্রস্তুত করা হয়েছিল। সংস্কৃতির 1 থেকে 2 সপ্তাহ পর, পরিবর্ধিত CD4 এর ভগ্নাংশ^{প্লাস}টি কোষগুলিকে 96- ভাল প্লেটে বিতরণ করা হয়েছিল, বিশ্লেষণ করা অ্যান্টিজেনের সংখ্যার উপর নির্ভর করে। অ্যান্টিজেনগুলির সাথে উদ্দীপনার আগে, কোষগুলিকে কমপক্ষে 4 দিনের জন্য বিশ্রাম দেওয়া হয়েছিল। উদ্দীপনার দিন, অ্যান্টিজেন-উপস্থাপক কোষগুলিকে গলিয়ে টি-সেল কালচারে বিতরণ করা হয়েছিল অন্তত 1টি অ্যান্টিজেন-উপস্থাপক কোষের অনুপাতে 100 CD4।^{প্লাস}টি কোষ। CD4^{প্লাস}নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণের জন্য টি-সেল লাইব্রেরি (উদ্দীপিত কোষ) এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ (এসইবি দিয়ে উদ্দীপিত কোষ) সর্বদা পরীক্ষায় অন্তর্ভুক্ত ছিল। CD4^{প্লাস} টি কোষগুলিকে 4 দিনের জন্য অ্যান্টিজেন দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল এবং একটি প্রমিত [3 H]-থাইমিডিন প্রোটোকল ব্যবহার করে বিস্তার নির্ধারণ করা হয়েছিল।

পরিবর্ধিত টি-সেল বিস্ফোরণগুলি অত্যন্ত ভিন্ন ভিন্ন সিন্টিলেশন সিপিএম দ্বারা প্রদর্শিত অ্যান্টিজেনের প্রতি ভিন্নভাবে প্রতিক্রিয়া জানায়; এইভাবে, দাতা-নির্দিষ্ট জেড স্কোর হিসাবে নির্ধারিত প্রসারণ থ্রেশহোল্ডের একটি স্বাভাবিককরণ প্রয়োজনীয় ছিল। z স্কোরটি 75তম এবং 25তম পার্সেন্টাইলের 5টি পার্থক্য হিসাবে গণনা করা হয়েছিল যা আনস্টিমুলেটেড মাইক্রোকালচারের মধ্যম CPM-এর উপরে। SEB এর সাহায্যে উদ্দীপিত মাইক্রোকালচারের কোষগুলি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে কাজ করে। উল্লেখ্য, একটি SEB উদ্দীপনা সূচক সঙ্গে microcultures<5 for="" peripheral="" blood="" samples,="" or="" 4="" for="" urinary="" samples,="" were="" excluded="" because="" it="" indicated="" poor="" cell="" viability.="" enumeration="" of="" the="" precursor="" frequency="" of="" antigen-specific="">^{প্লাস}টি কোষগুলি পয়সন বিতরণ অনুসারে নেতিবাচক মাইক্রোকালচারের সংখ্যা ব্যবহার করে গণনা করা হয়েছিল এবং পূর্বে বর্ণিত হিসাবে প্রতি 1 মিলিয়ন কোষে প্রকাশ করা হয়েছিল। পয়সন ডিস্ট্রিবিউশন ব্যবহার অন্তত 1CD4 সম্ভাব্যতার উপর ভিত্তি করে^{প্লাস}অ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট উদ্দীপনার পরে যখন তেজস্ক্রিয় সংকেত সনাক্ত করা হয়েছিল তখন টি-সেল লাইব্রেরির একক মাইক্রোকালচারে টি কোষ উপস্থিত থাকে।

পেরিফেরাল এবং ইউরিনারি ARTE পদ্ধতিগুলি আমরা প্রোটোকল অনুসরণ করেছি যা CD154 মাইক্রোবিড কিট (Miltenyi Biotec GmbH) ব্যবহার করে। সংক্ষেপে, কোষগুলিকে 7 ঘন্টার জন্য অ্যান্টিজেন দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল এবং তারপরে নির্মাতার নির্দেশ অনুসারে অ্যান্টি-হিউম্যান সিডি154-বায়োটিন অ্যান্টিবডি এবং অ্যান্টি-বায়োটিন মাইক্রোবিড দিয়ে লেবেল করা হয়েছিল। CD154- প্রকাশকারী কোষগুলিকে সমৃদ্ধ করার জন্য লেবেলযুক্ত কোষগুলিকে ক্যালিব্রেটেড MS কলামে (Miltenyi Biotec GmbH) লোড করা হয়েছিল৷ কার্বক্সিফ্লুরেসসিন ডায়াসেটেট এন-সুকিনিমিডিল এস্টার (সিগমা-অলড্রিচ চেমি জিএমবিএইচ) সহ কোষগুলির লেবেল একটি স্ট্যান্ডার্ড প্রোটোকল অনুসরণ করে করা হয়েছিল।

Cistanche উন্নতি করেকিডনিফাংশন

একক-কোষ ক্লোনের প্রজন্ম

একক-কোষ ক্লোনগুলি অ্যান্টিজেন-প্রতিক্রিয়াশীল কোষ থেকে তৈরি করা হয়েছিল, যা ARTE প্রোটোকল অনুসরণ করে CD154 এক্সপ্রেশন দ্বারা সমৃদ্ধ হয়েছিল। সিডি154-প্রকাশকারী কোষগুলিকে একটি 30-মিমি প্রস্তুতি ফিল্টার (মিল্টেনি বায়োটেক জিএমবিএইচ) দিয়ে ফিল্টার করা হয়েছিল এবং 20 শতাংশ (v/v) কোল্ড ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইন, 0.5 এর 1 মিলিতে পুনঃস্থাপন করা হয়েছিল শতাংশ বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন, এবং 2 মিমি ইথিলেনেডিয়ামাইনটেট্রাসেটিক অ্যাসিড। কোষগুলি CD154 এর জন্য সাজানো একক কোষ ছিল^{প্লাস}CD69^{প্লাস}ফিডার কোষের উপস্থিতিতে ফেনোটাইপ, এবং একক বাছাই করা কোষগুলিকে 96-ওয়েল প্লেটের একক কূপে সংষ্কৃত করা হয়েছিল। বেশ কয়েকটি ক্লোন দৃশ্যমান না হওয়া পর্যন্ত কোষ সংস্কৃতিগুলি 3 থেকে 4 দিনের জন্য বজায় রাখা হয়েছিল। পুনরুদ্ধারের একদিন আগে, অ্যান্টিজেন-উপস্থাপক কোষগুলিকে গলিয়ে টি-সেল সংস্কৃতিতে বিতরণ করা হয়েছিল

কমপক্ষে 1টি অ্যান্টিজেন-উপস্থাপক কোষ 100 CD4^{প্লাস}টি কোষ। কোষগুলিকে 1 মিলিগ্রাম/মিলি অ্যান্টিজেন দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল, এবং উদ্দীপিত ক্লোনগুলি নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে কাজ করেছিল।

পরবর্তী প্রজন্মের সিকোয়েন্সিং-ভিত্তিক TCR সংগ্রহস্থল বিশ্লেষণ

জিনোমিক ডিএনএ পেরিফেরাল সিডি 4 থেকে বিচ্ছিন্ন ছিল^{প্লাস}অলপ্রেপ ডিএনএ/আরএনএ মাইক্রো কিট (কিয়াজেন, ভেনলো, নেদারল্যান্ডস) ব্যবহার করে টি কোষ এবং মূত্রনালীর কোষ। পূর্বে বর্ণিত প্রোটোকল অনুসরণ করে পুনরায় সংযুক্ত টিসিআর-বি লোকাসকে প্রশস্ত করা হয়েছিল। রিডগুলি IMSEQ ব্যবহার করে প্রক্রিয়া করা হয়েছিল, এবং সমান ক্লোনোটাইপগুলি ক্লাস্টার করা হয়েছিল এবং আরও বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

পরিসংখ্যান

গ্রাফপ্যাড প্রিজম সফ্টওয়্যার (প্রিজম 8, গ্রাফপ্যাড সফ্টওয়্যার ইনক।, লা জোলা, সিএ) দিয়ে পরিসংখ্যানগত পরীক্ষা করা হয়েছিল। একাধিক তুলনার জন্য বনফেরোনি সমন্বয় প্রয়োগ করা হয়েছিল। মান-হুইটনি ইউ পরীক্ষা এবং উইলকক্সন স্বাক্ষরিত-র্যাঙ্ক পরীক্ষা যথাক্রমে স্বাধীন এবং নির্ভরশীল ডেটা সেট সহ পরীক্ষায় ব্যবহৃত হয়েছিল। একাধিক তুলনার জন্য Bonferroni সমন্বয়ের পরে, সমালোচনামূলক P মানগুলির গণনা সংশোধন করা হয়েছিল কারণ এটি পরিকল্পিত তুলনার সংখ্যার উপর ভিত্তি করে। পি মান<0.01 were="" considered="" statistically="" significant="" with="" the="" following="" indication:="" *p="" <="" 0.01,="" **p="" <="" 0.005,="" and="" ***p="" <="" 0.0005.="" correlation="" analyses="" were="" performed="" using="" spearman="" rank="" correlations="" by="" showing="" the="" absolute="">পদ্ধতিগতলুপাসerythematosusকোষের সংখ্যা এবং রোগের কার্যকলাপের মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ককে আরও ভালভাবে বোঝার জন্য র‌্যাঙ্ক করা মানের পরিবর্তে DAI মানগুলি। পারস্পরিক সম্পর্ক বিশ্লেষণের জন্য, P মান<0.5 were="" considered="" statistically="" significant="" with="" the="" following="" indication:="" *p="" <="" 0.05,="" **p="" <="" 0.01,="" and="" ***p="" <="" 0.001.="" when="" background="" frequencies="" were="" higher="" than="" the="" frequencies="" of="" nuclear="" antigen–reactive="">^{প্লাস}টি কোষ, পটভূমি ছাড়া ফ্রিকোয়েন্সি শূন্য হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছিল। একটি লগ(x þ 1) রূপান্তর ডেটা সেটে প্রয়োগ করা হয়েছিল যখন এটি শূন্য মান অন্তর্ভুক্ত করে। পরিপূরক রোগীর তথ্য এবং পরিসংখ্যানগত তথ্য পরিপূরক টেবিল S1 এবং S2 এ উপলব্ধ।

নিউক্লিয়ার অ্যান্টিজেন-প্রতিক্রিয়াশীল CD4^{প্লাস}কোষ সক্রিয়ভাবে প্রসারিত হয়পদ্ধতিগতলুপাসerythematosus, ইফেক্টর সাইটোকাইন তৈরি করে এবং সংক্রমিত করেকিডনি, cistanche রক্ষা করতে পারেনকিডনি.

প্রকাশ

সমস্ত লেখক কোন প্রতিযোগিতামূলক আগ্রহ ঘোষণা করেছেন।

স্বীকৃতি

ফ্লফ্লো সাইটোমেট্রি এবং কোষ সাজানোর ক্ষেত্রে সহায়তার জন্য আমরা টরাল্ফ কায়সার এবং জেনি কির্শ (ফ্লো সাইটোমেট্রি এবং সেল সর্টিং ফ্যাসিলিটি, ডয়েচেস রিউমা-ফর্সচুংজেনট্রাম বার্লিন) কে ধন্যবাদ জানাই। এই অধ্যয়নের জন্য সমর্থন প্রদান করা হয়েছে Deutsche Forschungsgemeinschaft থেকে Sonderforschungsbereich 650-এর মধ্যে GR-এর অনুদান এবং Deutsche Gesellschaft für Nephrologie এবং Charité-Universitätsmedizin বার্লিনের ক্লিনিক্যাল সায়েন্টিস্ট প্রোগ্রাম এবং বার্লিন ইনস্টিটিউটের স্বাস্থ্যের অনুদান দ্বারা।

সাপ্লিমেন্টারি ম্যাটেরিয়াল সাপ্লিমেন্টারি ফাইল (পিডিএফ)

চিত্র S1। স্বয়ংক্রিয় পারমাণবিক অ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট CD4^{প্লাস}টি কোষগুলি টি সেল লাইব্রেরি পদ্ধতি দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল। চিত্র S2। CD154^{প্লাস}CD69^{প্লাস}CD4^{প্লাস}সুস্থ ব্যক্তিদের থেকে পারমাণবিক অ্যান্টিজেন দিয়ে উদ্দীপনার পরে বিচ্ছিন্ন টি কোষগুলি বোনা-ফাইফ অ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট CD4^{প্লাস}টি কোষ।

চিত্র S3। সাইটোকাইন উৎপাদনকারী অটোরিঅ্যাকটিভ CD4 এর ফ্রিকোয়েন্সি^{প্লাস}টি কোষগুলিকে অ্যান্টিনিউক্লিয়ার অ্যান্টিবডি (অ্যান্টি-এএনএ) (এ) এর টাইটার এবং অ্যান্টি-ডাবল স্ট্র্যান্ড ডিএনএ অ্যান্টিবডি (অ্যান্টি-ডিএসডিএনএ) (বি) এর ঘনত্বের সাথে তুলনা করা হয়েছিল।

চিত্র S4। নিউক্লিয়ার অ্যান্টিজেন-প্রতিক্রিয়াশীল CD4^{প্লাস}সক্রিয়ের প্রস্রাবে টি কোষ সনাক্ত করা হয়েছিলপদ্ধতিগতলুপাসerythematosusএলএন রোগীদের।

টেবিল S1. ক্লিনিকাল ডেটা।

টেবিল S2। মধ্যম মানের সারাংশ।

পরিপূরক পদ্ধতি।

একদাকিডনিনিউক্লিয়ার অ্যান্টিজেন-প্রতিক্রিয়াশীল CD4 এর কারণে সংক্রমিত হয়^{প্লাস}কোষ সক্রিয়ভাবে প্রসারিত হচ্ছেপদ্ধতিগতলুপাসerythematosus, দ্যকিডনিফাংশন ধ্বংস হয়, cistanche উন্নত করতে ব্যবহার করা হয়কিডনিফাংশন

তথ্যসূত্র

1. ক্যাসিওলা-রোজেন এলএ, অ্যানহাল্ট জি, রোজেন এ। অটোঅ্যান্টিজেন লক্ষ্য করা হয়েছেপদ্ধতিগত লুপাসerythematosusঅ্যাপোপটোটিক কেরাটিনোসাইটের উপরিভাগের কাঠামোর দুটি জনসংখ্যার মধ্যে গুচ্ছবদ্ধ। J Exp Med. 1994;179: 1317-1330।

2. Arbuckle MR, McClain MT, Rubertone MV, et al. ক্লিনিকাল শুরু হওয়ার আগে অটোঅ্যান্টিবডিগুলির বিকাশপদ্ধতিগতলুপাসerythematosus. এন ইংলিশ জে মেড। 2003;349:1526-1533।

3. সুয়ারেজ-ফুয়েও এ, ব্র্যাডলি এসজে, সোকোস জিসি। টি কোষেপদ্ধতিগতলুপাসerythematosus. Curr Opin Immunol. 2016;43:32–38।

4. Crow MK, DelGiudice-Asch G, Zehetbauer JB, et al. রোগীদের মধ্যে রাইবোসোমাল P2 প্রোটিন দ্বারা প্ররোচিত অটোঅ্যান্টিজেন-নির্দিষ্ট টি কোষের বিস্তারপদ্ধতিগতলুপাসerythematosus. জে ক্লিন ইনভেস্ট। 1994;94:345-352।

5. Engler JB, Undeutsch R, Kloke L, et al. অটোরিঅ্যাকটিভ CD4 এর মুখোশ খুলে ফেলা^{প্লাস}CD25 নিয়ন্ত্রক টি কোষের অবক্ষয় দ্বারা টি কোষপদ্ধতিগতলুপাসerythematosus. Ann Rheum Dis. 2011;70:2176–2183।

এবং ইত্যাদি.