Cistanche Deserticola পলিস্যাকারাইড RANKL সংকেত এবং প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির উত্পাদনকে বাধা দেওয়ার মাধ্যমে অস্টিওক্লাস্টোজেনেসিস এবং হাড়ের রিসোর্পশনকে কমিয়ে দেয়

যোগাযোগ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

দেঝি গান এট আল

অস্টিওপোরোসিস একটি বিপাকীয় রোগ যা অস্টিওপেনিয়া এবং হাড়ের মাইক্রোস্ট্রাকচারাল ক্ষয় দ্বারা চিহ্নিত করা হয়। অস্টিওক্লাস্ট হল প্রাথমিক প্রভাবক কোষ যা হাড়ের ম্যাট্রিক্সকে ক্ষয় করে এবং তাদের অস্বাভাবিক কার্যকারিতা অস্টিওপোরোসিসের বিকাশের দিকে পরিচালিত করে। সেলুলার মেটাবলিজমের সময় প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) জমে অস্টিওক্লাস্টের বিস্তার এবং পার্থক্যকে উৎসাহিত করে, তাই অস্টিওপোরোসিসে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে।সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড(CDP) অ্যান্টিটিউমার, অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপের অধিকারী। যাইহোক, অস্টিওক্লাস্টের উপর সিডিপির প্রভাব অস্পষ্ট। এই গবেষণায়, টারট্রেট-প্রতিরোধী অ্যাসিড ফসফেটেস স্টেনিং, ইমিউনোফ্লোরেসেন্স, বিপরীত প্রতিলিপি-পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া এবং পশ্চিমী ব্লট বিশ্লেষণ দেখানোর জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল যে CDP(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস এবং হাইড্রোক্স্যাপাটাইট রিসোর্পশন বাধা দেয়। এছাড়া সি.ডি.পি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)এছাড়াও Ctsk, Mmp9 এবং Acp5 সহ অস্টিওক্লাস্ট মার্কার জিনের প্রকাশকে বাধা দেয় এবং নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টর κB (RANK) এক্সপ্রেশনের রিসেপ্টর অ্যাক্টিভেটরের উপর কোন প্রভাব ফেলেনি। যান্ত্রিক বিশ্লেষণে জানা গেছে যে সি.ডি.পি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)অস্টিওক্লাস্টে RANKL-মধ্যস্থিত ROS উৎপাদন কমাতে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইমের অভিব্যক্তি বাড়ায় এবং সক্রিয় T কোষের পারমাণবিক ফ্যাক্টর এবং মাইটোজেন-অ্যাক্টিভেটেড প্রোটিন কিনেস অ্যাক্টিভেশনকে বাধা দেয়। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে সিডিপি অতিরিক্ত অস্টিওক্লাস্ট কার্যকলাপের কারণে অস্টিওপোরোসিসের চিকিত্সার জন্য একটি প্রার্থীর ওষুধের প্রতিনিধিত্ব করতে পারে।

কীওয়ার্ডহাড়ের শোষণ,সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড, MAPK, অস্টিওক্লাস্ট, প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি

cistanche বডি বিল্ডিং

1|ভূমিকা

হাড় গঠনের মধ্যে ভারসাম্য, অস্টিওব্লাস্ট দ্বারা মধ্যস্থতা করা এবং অস্টিওক্লাস্ট দ্বারা মধ্যস্থতা করা হাড়ের রিসোর্পশন, হাড়ের বিপাকীয় হোমিওস্ট্যাসিস বজায় রাখতে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে (মানোলগাস, 2000; ঝু এট আল।, 2018)। যখন হাড়ের রিসোর্পশন হাড়ের গঠনকে ছাড়িয়ে যায়, তখন অস্টিওপরোসিস ঘটে, যা হাড়ের ভর হ্রাস এবং হাড়ের মাইক্রোস্ট্রাকচারাল ক্ষতি দ্বারা চিহ্নিত করা হয় (Ikeda, 2008)। অস্টিওপোরোসিস বয়স্ক ব্যক্তি এবং পোস্টমেনোপজাল মহিলাদের মধ্যে একটি সাধারণ রোগ এবং এর প্যাথোজেনেসিস সম্পূর্ণরূপে ব্যাখ্যা করা হয়নি (কুপার এবং মেল্টন, 1992)। ইস্ট্রোজেনের ঘাটতি অস্টিওপোরোসিসের একটি প্রাথমিক কারণ (মানোলগাস, ও'ব্রায়েন, এবং আলমেইডা, 2013)। উপরন্তু, প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) পারমাণবিক ফ্যাক্টর κB ligand (RANKL) এর রিসেপ্টর অ্যাক্টিভেটর দ্বারা প্ররোচিত হতে পারে এবং অস্টিওক্লাস্ট গঠনের সাথে যুক্ত (Yip et al., 2005), এবং এইভাবে অস্টিওপরোসিসের বিকাশে অবদান রাখতে পারে (মনোলাগাস, 2010)। কিছু গবেষণায় দেখা গেছে যে Nrf2-অ্যান্টিঅক্সিডেন্টের ঘাটতি ROS-এর মাত্রা বাড়ায় এবং RANKL-প্ররোচিত অস্টিওক্লাস্ট পার্থক্যকে (Hyeon, Lee, Yang, & Jeong, 2013) প্রচার করে। অতএব, অস্টিওক্লাস্ট পার্থক্যের সময় ROS উত্পাদন হ্রাস করাকে অস্টিওপরোসিসের চিকিত্সার জন্য একটি থেরাপিউটিক কৌশল হিসাবে মূল্যায়ন করা উচিত।

অস্টিওক্লাস্টগুলি মনোসাইট বা ম্যাক্রোফেজ হেমাটোপয়েটিক বংশ থেকে উদ্ভূত হয় এবং একমাত্র মাল্টিনিউক্লিয়েটেড কোষ যা হাড়ের রিসোর্পশন সম্পাদন করে (টিটেলবাম, 2000)। অতএব, অস্টিওক্লাস্ট গঠনের সাথে জড়িত গবেষণা হাড়ের বিপাক রোগের জন্য কার্যকর চিকিত্সা বিকাশের ক্ষেত্রে অত্যন্ত তাৎপর্যপূর্ণ (Lorenzo, 2017)। ম্যাক্রোফেজ কলোনি-উত্তেজক ফ্যাক্টর (M-CSF) এবং RANKL, অস্টিওব্লাস্ট এবং সক্রিয় টি কোষ দ্বারা উত্পাদিত, হল গুরুত্বপূর্ণ সাইটোকাইন যা অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস নিয়ন্ত্রণ করে (কিম এবং কিম, 2016; টিটেলবাম এবং রস, 2003)। RANKL সক্রিয় T কোষের (NFATc1) নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টরের অভিব্যক্তিকে প্ররোচিত করে, যা অস্টিওক্লাস্ট গঠনের সময় সক্রিয় একটি সমালোচনামূলক ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর (ইশিদা এট আল।, 2002)। সক্রিয় NFATc1 অস্টিওক্লাস্ট মার্কার জিনের অভিব্যক্তিকে প্রচার করে যেমন টার্টরেট-প্রতিরোধী অ্যাসিড ফসফেটেস (TRAcP) এবং ক্যাথেপসিন কে (CTSK) যা অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস এবং অস্টিওক্লাস্ট ফাংশন নিয়ন্ত্রণ করে (বলকান এট আল।, 2009; ক্রোটি এট আল।

সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড(CDP) এর মাংসল কান্ড থেকে বিচ্ছিন্নসিস্তানচেএবং ইমিউন রেগুলেশন, অ্যান্টিটিউমার, অ্যান্টিএজিং এবং অন্যান্য ফার্মাকোলজিকাল প্রভাব রয়েছে (গুও এট আল।, 2016; জিয়া, গুয়ান, গুও, এবং ডু, 2012)। সিডিপি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)মাউস মাইক্রোগ্লিয়াল কোষে (BV-2 কোষ; ন্যান এট আল।, 2013) লিপোপলিস্যাকারাইড-প্ররোচিত নাইট্রিক অক্সাইড (NO) উত্পাদনের উপর একটি প্রতিরোধমূলক প্রভাব ছিল। উপরন্তু, একটি phenylethanoid-সমৃদ্ধ নির্যাস (ECD) এরসিস্তানচেপেশীর ক্ষতি হ্রাস করে, ল্যাকটিক অ্যাসিড জমাতে বিলম্ব করে এবং শক্তি সঞ্চয়স্থান উন্নত করে ইঁদুরের সাঁতারের ক্ষমতা বৃদ্ধি করে (Cai et al., 2010)। যাইহোক, অস্টিওক্লাস্ট ফাংশন এবং কার্যকলাপের উপর CDP এর প্রভাব অজানা থেকে যায়।

এই গবেষণায়, আমরা দেখিয়েছি যে সিডিপি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)RANKL-প্ররোচিত অস্টিওক্লাস্ট পার্থক্য এবং হাড়ের রিসোর্পশনকে বাধা দেয়। অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়া ছিল যে CDP(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)ROS উৎপাদন কমাতে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইমগুলির অভিব্যক্তি বাড়ায় এবং তারপর RANKL-অ্যাক্টিভেটেড NFAT এবং মাইটোজেন-অ্যাক্টিভেটেড প্রোটিন কিনেস (MAPK)-সংকেত ক্যাসকেডগুলিকে দমন করে। এই ফলাফল প্রস্তাব করে যে সি.ডি.পি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)অতিরিক্ত অস্টিওক্লাস্টিক হাড় রিসোর্পশন দ্বারা সৃষ্ট অস্টিওপরোসিসের চিকিত্সার জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে।

maca ginseng cistanche

2|উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

2.1|উপকরণ

সিডিপি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)(বিশুদ্ধতা > 98 শতাংশ) সোলারবিও (বেইজিং, চীন) থেকে কেনা হয়েছিল এবং ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইনে (পিবিএস) 1 মিমি স্টক ঘনত্বে প্রস্তুত করা হয়েছিল। অ্যান্টিবডিগুলি c-Fos, CTSK, GSR, TRX1, NOS2, TRAF6, RANK, NFATc1, ERK, JNK, p38, phosphorylated (p)-ERK, p-p38, p-JNK, এবং সানটা অ্যাক্টিনের জন্য নির্দিষ্ট। ক্রুজ বায়োটেকনোলজি (সান জোসে, CA)। V-ATPase d2 এর অ্যান্টিবডিগুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে উত্পাদিত হয়েছিল (H. Feng et al., 2009)। 3-(4,5-ডাইমেথাইলথিয়াজল-2-yl)-5-(3-কারবোক্সিমেথোক্সিফেনাইল)-2-(4-সালফোফেনাইল)-2H-টেট্রাজোলিয়াম (MTS) এবং অস্ট্রেলিয়ার প্রোগাইমেডি সিস্টেম থেকে লুসিফেরেস অ্যাসেড সিস্টেম প্রাপ্ত করা হয়েছিল। . রিকম্বিন্যান্ট এম-সিএসএফ R&D সিস্টেম (মিনিয়াপোলিস, MN) থেকে কেনা হয়েছিল। রিকম্বিন্যান্ট GST-rRANKL প্রোটিন প্রকাশ করা হয়েছিল এবং পূর্বে বর্ণিত হিসাবে বিশুদ্ধ করা হয়েছিল (জু এট আল।, 2000)।

2.2|সেল সংস্কৃতি

RAW264.7 কোষগুলি (মাউস ম্যাক্রোফেজ কোষ) আমেরিকান টাইপ কালচার কালেকশন (ATCC, Manassas, VA) থেকে প্রাপ্ত করা হয়েছিল এবং 10 শতাংশ ভ্রূণ মাইনসিরাম সিরামের সাথে পরিপূরক - পরিবর্তিত ন্যূনতম অপরিহার্য মাধ্যমের (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, স্কোরসবি, অস্ট্রেলিয়া) সংস্কৃত করা হয়েছিল। এল-গ্লুটামিন, 100 ইউ/মিলি পেনিসিলিন এবং 100 ইউজি/মিলি স্ট্রেপ্টোমাইসিন (সম্পূর্ণ মাধ্যম)। অস্থি মজ্জা থেকে প্রাপ্ত মনোসাইট (বিএমএম) 6-সপ্তাহ-পুরোনো C57BL/6J ইঁদুর থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল, যা ওয়েস্টার্ন অস্ট্রেলিয়া বিশ্ববিদ্যালয়ের প্রাণী নীতিশাস্ত্র কমিটি (RA/3/100/1244) দ্বারা অনুমোদিত পদ্ধতি অনুসারে euthanized হয়েছিল। লম্বা হাড়গুলিকে নরম টিস্যু মুক্ত করে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং অস্থি মজ্জাটি ফিমার এবং টিবিয়া থেকে ফ্লাশ করা হয়েছিল, যা তখন M-CSF (50 ng/ml) এর উপস্থিতিতে একটি সম্পূর্ণ মাধ্যমে সংষ্কৃত করা হয়েছিল।

2.3|অস্টিওক্লাস্টোজেনেসিস পরীক্ষা

বিএমএমগুলিকে প্রতি কূপের ঘনত্বে 6 × 103 কোষের ঘনত্বে 96-ওয়েল কালচার প্লেটে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল এবং উপস্থিতিতে M-CSF (50 ng/ml) এবং GST-rRANKL (100 ng/ml) ধারণকারী সম্পূর্ণ মাধ্যম দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। CDP এর বিভিন্ন ঘনত্বের অনুপস্থিতি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড). The cell culture medium was changed every 2 days. After 5 days, cells were fixed with 4% paraformaldehyde for 10 min, washed three times with PBS, and then stained for TRAcP‐enzymatic activity using the leukocyte acid phosphatase staining kit (Sigma‐Aldrich, Sydney, Australia), following the manufacturer's procedures. TRAcP‐positive multinucleated cells (>তিনটি নিউক্লিয়াস) অস্টিওক্লাস্ট হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল।

2.4|সাইটোটক্সিসিটি অ্যাসেস

বিএমএমগুলিকে প্রতি কূপ 6 × 103 কোষে 96-ওয়েল প্লেটে বীজ দেওয়া হয়েছিল এবং রাতারাতি রেখে দেওয়া হয়েছিল। পরের দিন, কোষগুলি সিডিপির বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে ইনকিউবেট করা হয়েছিল(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড). আরও 48 ঘন্টা পরে, এমটিএস দ্রবণ (20 μl/ওয়েল) যোগ করা হয়েছিল এবং 2 ঘন্টার জন্য কোষের সাথে ইনকিউব করা হয়েছিল। 490 এনএম-এ শোষণ একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার (মাল্টিসকান স্পেকট্রাম; থার্মো ল্যাবসিস্টেম, চ্যান্টিলি, ভিএ) দিয়ে নির্ধারিত হয়েছিল।

2.5|ইমিউনোফ্লোরসেন্ট স্টেনিং

বিএমএমগুলি রাতারাতি M-CSF (50 ng/ml) এর উপস্থিতিতে প্রতি কূপের 6 × 103 কোষের ঘনত্বে বীজ করা হয়েছিল। পরিপক্ক অস্টিওক্লাস্ট তৈরি না হওয়া পর্যন্ত কোষগুলিকে তখন M-CSF এবং GST-rRANKL (100 ng/ml) দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল। অস্টিওক্লাস্টগুলিকে তখন সিডিপির বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে চিকিত্সা করা হয়েছিল(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)4 শতাংশ প্যারাফর্মালডিহাইড দিয়ে ঠিক করার আগে 48 ঘন্টার জন্য, 0.1 শতাংশ ট্রাইটন X-100–পিবিএস দিয়ে ব্যাপ্তিকরণ, এবং পিবিএস-এ 3 শতাংশ বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন দিয়ে ব্লক করা। এফ-অ্যাক্টিনের জন্য দাগ দেওয়ার জন্য প্রস্তুত কোষগুলিকে 45 মিনিটের জন্য অন্ধকারে রোডামাইন-কনজুগেটেড ফ্যালোইডিন দিয়ে ধূপিত করা হয়েছিল। তারপরে কোষগুলিকে পিবিএস দিয়ে ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল, নিউক্লিয়াসকে 4′,6-ডায়ামিডিনো-2-ফেনিলিন্ডোল (DAPI) দিয়ে পাল্টা স্টেইন করা হয়েছিল এবং কনফোকাল মাইক্রোস্কোপির জন্য কভারস্লিপ দিয়ে মাউন্ট করা হয়েছিল।

cistanche অভিজ্ঞতা

2.6|হাইড্রোক্স্যাপাটাইট রিসোর্পশন অ্যাস

অস্টিওক্লাস্ট অ্যাক্টিভিটি পরিমাপ করার জন্য বিএমএম (কূপ প্রতি 1 × 105 কোষ) ছয়-ওয়েল কোলাজেন-প্রলিপ্ত প্লেটে (বিডি বায়োকোট; থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) কে GST-rRANKL (100 ng/ml) এবং M-CSF (50 ng/ml) দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল। ml) পরিপক্ক অস্টিওক্লাস্ট তৈরি না হওয়া পর্যন্ত (Zhou et al., 2016)। তারপরে কোষগুলিকে সেল ডিসোসিয়েশন সলিউশন (সিগমা-অ্যালড্রিচ) ব্যবহার করে প্লেট থেকে আলতোভাবে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং হাইড্রোক্স্যাপাটাইট-প্রলিপ্ত 96-ওয়েল প্লেটে (কর্নিং অস্টিওসে, কর্নিং, এনওয়াই) পৃথক কূপের উপর সমান সংখ্যক পরিপক্ক অস্টিওক্লাস্টকে বীজ দেওয়া হয়েছিল। পরিপক্ক অস্টিওক্লাস্টগুলি সিডিপি সহ বা ছাড়াই জিএসটি-আরআরএএনকেএল এবং এম-সিএসএফ ধারণকারী একটি মাঝারিতে ইনকিউবেট করা হয়েছিল(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)নির্দেশিত ঘনত্বে। 48 ঘন্টা পরে, প্রতি কূপের মাল্টিনিউক্লিয়েটেড কোষের সংখ্যা মূল্যায়ন করার জন্য উপরে বর্ণিত হিসাবে, TRAcP কার্যকলাপের জন্য অর্ধেক কূপ ইমিউনোহিস্টোকেমিকভাবে দাগযুক্ত ছিল। অবশিষ্ট কূপগুলি 10 মিনিটের জন্য ব্লিচ করা হয়েছিল যাতে কোষগুলি অপসারণ করা যায় এবং পুনর্বাসিত অঞ্চলগুলির পরিমাপের অনুমতি দেওয়া হয়। পুনরুজ্জীবিত এলাকাগুলি স্ট্যান্ডার্ড লাইট মাইক্রোস্কোপির অধীনে ছবি তোলা হয়েছিল এবং ইমেজ জে সফ্টওয়্যার (ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট অফ হেলথ, বেথেসডা, এমডি) অস্টিওক্লাস্ট দ্বারা সংশোধিত হাইড্রোক্সিপাটাইট পৃষ্ঠের শতাংশের পরিমাণ নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল।

2.7|Luciferase রিপোর্টার assays

NFATc1 ট্রান্সক্রিপশনাল অ্যাক্টিভেশন তদন্ত করতে, RAW264.7 কোষগুলি একটি NFATc1-প্রতিক্রিয়াশীল লুসিফেরেজ রিপোর্টার কনস্ট্রাক্ট (চেং এট আল।, 2018; ভ্যান ডার ক্রান এট আল।, 2013) দিয়ে স্থিরভাবে স্থানান্তরিত হয়েছিল। স্থানান্তরিত কোষগুলি প্রতি কূপ 1.5 × 105 কোষের ঘনত্বে 48-কূপ প্লেটে সংষ্কৃত করা হয়েছিল এবং সিডিপির বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে প্রিট্রিট করা হয়েছিল।(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)1 ঘন্টার জন্য প্রিট্রিটমেন্টের পরে, কোষগুলিকে 24 ঘন্টার জন্য GST-rRANKL (100 ng/ml) দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল এবং প্রস্তুতকারকের প্রোটোকল (প্রোমেগা) অনুসারে লুসিফেরেজ রিপোর্টার অ্যাসে সিস্টেম ব্যবহার করে লুসিফেরেজ কার্যকলাপ পরিমাপ করা হয়েছিল।

2.8|পরিমাণগত বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন-পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া (RT-PCR) বিশ্লেষণ

প্রস্তুতকারকের প্রোটোকল (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) অনুসারে ট্রিজল বিকারক ব্যবহার করে কোষ থেকে মোট আরএনএ বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। পরিপূরক ডিএনএ 1 ইউজি আরএনএ টেমপ্লেট এবং অলিগো-ডিটি প্রাইমারের সাথে মোলোনি মুরিন লিউকেমিয়া ভাইরাস রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ ব্যবহার করে সংশ্লেষিত হয়েছিল। নিম্নলিখিত প্রোগ্রাম ব্যবহার করে নির্দিষ্ট ক্রমগুলির পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া পরিবর্ধন করা হয়েছিল: 5 মিনিটের জন্য 94 ডিগ্রি, তারপরে 40 সেকেন্ডের জন্য 94 ডিগ্রির 30টি চক্র, 40 সেকেন্ডের জন্য 60 ডিগ্রি এবং 40 সেকেন্ডের জন্য 72 ডিগ্রি এবং এর একটি চূড়ান্ত এক্সটেনশন ধাপ। ৭২ ডিগ্রিতে ৫ মিনিট। নির্দিষ্ট প্রাইমারের বিস্তারিত তথ্য সারণি 1 এ দেখানো হয়েছে। আপেক্ষিক মেসেঞ্জার আরএনএ স্তরগুলি হাউসকিপিং জিন Hmbs-এর অভিব্যক্তিকে স্বাভাবিককরণের মাধ্যমে গণনা করা হয়েছিল।

2.9|ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ

বিএমএমগুলিকে এম-সিএসএফ-এর মাধ্যমে সম্পূর্ণ মাঝারিভাবে ছয়-ওয়েল প্লেটে সংস্কৃত করা হয়েছিল এবং উল্লিখিত সময়ের জন্য GST-rRANKL (100 ng/ml) দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল। কোষগুলিকে রেডিওইমিউনোপ্রিসিপিটেশন লাইসিস বাফারে লাইজ করা হয়েছিল এবং প্রোটিনগুলিকে সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট-পলিয়াক্রাইলামাইড জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা সমাধান করা হয়েছিল এবং পলি (ভিনিলিডিন ফ্লোরাইড) মেমব্রেনে (জিই হেলথকেয়ার, সিলভারওয়াটার, অস্ট্রেলিয়া) স্থানান্তরিত হয়েছিল। ঝিল্লিগুলিকে 5 শতাংশ স্কিম মিল্কে 1 ঘন্টার জন্য ব্লক করা হয়েছিল এবং তারপরে 4 ডিগ্রিতে মৃদু কাঁপুনি দিয়ে বিভিন্ন নির্দিষ্ট প্রাথমিক অ্যান্টিবডি দিয়ে পরীক্ষা করা হয়েছিল। ঝিল্লি ধুয়ে ফেলা হয় এবং পরবর্তীতে হর্সরাডিশ পারক্সিডেস-কনজুগেটেড সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউব করা হয়। তারপরে অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়া বর্ধিত কেমিলুমিনেসেন্স রিএজেন্ট (আমেরশাম ফার্মাসিয়া বায়োটেক, পিসকাটাওয়ে, এনজে) দিয়ে সনাক্ত করা হয়েছিল এবং একটি ইমেজ-কোয়ান্ট এলএএস 4000 (জিই হেলথকেয়ার) দিয়ে কল্পনা করা হয়েছিল।

2.10|অন্তঃকোষীয় ROS সনাক্তকরণ

অন্তঃকোষীয় ROS স্তরগুলি একটি 2′,7′′′-ডিক্লোরোফ্লুরেসসিন ডায়াসেটেট সেলুলার ROS সনাক্তকরণ অ্যাসে কিট (অ্যাবক্যাম, মেলবোর্ন, অস্ট্রেলিয়া) ব্যবহার করে সনাক্ত করা হয়েছিল। BMMs (প্রতি কূপ 5 × 103 কোষ) 96-ওয়েল প্লেটে সংষ্কৃত করা হয়েছিল এবং RANKL (100 ng/ml), M-CSF (50 ng/ml), এবং CDP দিয়ে 72 ঘন্টার জন্য চিকিত্সা করা হয়েছিল। অন্তঃকোষীয় ROS স্তরগুলি 2′,7′′′′′-ডিক্লোরোফ্লুরেসসিন ডায়াসেটেট ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল, যা ROS-এর উপস্থিতিতে ফ্লুরোসেন্ট ডিসিএফ-এ জারিত হয়। কোষগুলি হ্যাঙ্কের বাফারে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং 10 µM DCFH-DA দিয়ে 30 মিনিটের জন্য অন্ধকারে সেদ্ধ করা হয়েছিল। কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করে চিত্রগুলি প্রাপ্ত হয়েছিল।

2.11|পরিসংখ্যানিক বিশ্লেষণ

অন্যথায় নির্দেশিত না হলে সমস্ত ডেটা ট্রিপ্লিকেটে সম্পাদিত কমপক্ষে তিনটি পরীক্ষার প্রতিনিধি। ডেটা গড় ± SD হিসাবে প্রকাশ করা হয়। ছাত্র-নিউম্যান-কিউলস পোস্ট হক পরীক্ষা দ্বারা অনুসৃত ভিন্নতার এক-তরফা বিশ্লেষণ ফলাফলের মধ্যে পার্থক্যের তাৎপর্য নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল, p < 0.05="" কে="" তাৎপর্যপূর্ণ="" হিসাবে="" বিবেচনা="" করা="">

3|ফলাফল

3.1|CDP RANKL-প্ররোচিত অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস এবং অস্টিওক্লাস্ট ফিউশনকে বাধা দেয়

সিডিপি কিনা তা নির্ধারণ করতে(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)RANKL-প্ররোচিত অস্টিওক্লাস্ট গঠনকে দমন করতে পারে, আমরা প্রথমে মাউস BMMs ব্যবহার করে একটি অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস পরীক্ষা করেছিলাম (লিউ এট আল।, 2013; গান এট আল।, 2016)। বিএমএমগুলি সিডিপির ক্রমবর্ধমান ঘনত্বের সাথে 5 দিনের জন্য RANKL এবং M-CSF দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। সিডিপির ঘনত্ব যখন সিডিপি TRAcP-পজিটিভ বহুমুখী কোষের সংখ্যা হ্রাস করে(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)5 µM বা উচ্চতর পৌঁছেছে (চিত্র 1a,b)। সিডিপি মূল্যায়ন করতে(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)বিষাক্ততা এবং নিশ্চিত করুন যে এই ফলাফলগুলি কোষের মৃত্যু বা সংখ্যার প্রতিফলন ছিল না, আমরা একটি এমটিএস পরীক্ষা করেছি। বিএমএমগুলিকে RANKL এবং M-CSF দিয়ে 48 ঘন্টার জন্য CDP এর বিভিন্ন ডোজ সহ চিকিত্সা করা হয়েছিল(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড). CDP 15 µM বা তার কম ঘনত্বে BMM বিস্তারের উপর কোন প্রভাব ফেলেনি (চিত্র 1c)।

সিডিপির প্রভাব পরীক্ষা করতে(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)অস্টিওক্লাস্ট ফিউশনে, অস্টিওক্লাস্টগুলি সিডিপির বিভিন্ন ডোজ সহ বা ছাড়াই RANKL এবং M-CSF চিকিত্সার সাথে প্ররোচিত হয়েছিল(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড). অস্টিওক্লাস্টগুলি প্রতি অস্টিওক্লাস্টের নিউক্লিয়াসের সংখ্যা মূল্যায়ন করতে রোডামাইন-ফ্যালোইডিন এবং ডিএপিআই দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল (চিত্র 2a)। সিডিপি অনুসরণ করে অস্টিওক্লাস্ট সংখ্যা এবং অস্টিওক্লাস্ট প্রতি নিউক্লিয়াসের গড় সংখ্যা উভয়ই হ্রাস পেয়েছে(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)চিকিত্সা (5–10 µM; চিত্র 2b,c)। অতএব, সি.ডি.পি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে RANKL-প্ররোচিত অস্টিওক্লাস্টোজেনেসিস এবং অস্টিওক্লাস্ট ফিউশনের উপর প্রতিরোধমূলক প্রভাব ছিল।

3.2|সিডিপি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)RANKL-প্ররোচিত অস্টিওক্লাস্টিক হাইড্রোক্সাপাটাইট রিসোর্পশন কার্যকলাপকে হ্রাস করে

সিডিপির প্রভাব সনাক্ত করার জন্য একটি হাইড্রোক্স্যাপাটাইট রিসোর্পশন অ্যাস সঞ্চালিত হয়েছিল(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)অস্টিওক্লাস্ট ফাংশনে (চিত্র 3a)। 24-ঘন্টা ইনকিউবেশনের পরে, কূপ প্রতি অস্টিওক্লাস্টের সংখ্যা পরিবর্তিত হয়নি যখন নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় (চিত্র 3b,c) 5 এবং 10 μM CDP দিয়ে চিকিত্সার মাধ্যমে হাইড্রোক্সাপাটাইট রিসোর্পশন এলাকা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। এই ফলাফল প্রমাণ করে যে CDP(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)কোন সাইটোটক্সিক প্রভাব ছাড়াই অস্টিওক্লাস্ট গঠন এবং অস্টিওক্লাস্ট রিসোর্পশন কার্যকলাপ উভয়ের উপরই শক্তিশালী প্রতিরোধমূলক প্রভাব রয়েছে।

3.3|সিডিপি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)অস্টিওক্লাস্ট মার্কার জিনের প্রকাশকে বাধা দেয়

সিডিপির প্রতিরোধমূলক প্রভাবগুলি আরও তদন্ত করতে(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস এবং অস্টিওক্লাস্টিক হাড়ের রিসোর্পশনের উপর, বিএমএমগুলিকে সিডিপির বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে 5 দিনের জন্য RANKL এবং M-CSF দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল।(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড). অস্টিওক্লাস্ট মার্কার জিনের অভিব্যক্তি সনাক্ত করতে RT-PCR তখন সঞ্চালিত হয়েছিল। Nfatc1 এর অভিব্যক্তি, অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিসের সময় একটি গুরুত্বপূর্ণ ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর, সিডিপি দ্বারা বাধা দেওয়া হয়েছিল(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে (চিত্র 4a)। এছাড়া সি.ডি.পি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)(5 এবং 10 µM) Mmp9, Ctsk, এবং Acp5 (চিত্র 4b–d) সহ হাড়ের রিসোর্পশন-সম্পর্কিত জিনের অভিব্যক্তিকে নিয়ন্ত্রিত করেছে।

3.4|CDP NFATc1 কার্যকলাপ এবং ডাউনস্ট্রিম প্রোটিন এক্সপ্রেশনকে দমন করে

সিডিপির প্রভাব পরীক্ষা করতে(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)RANKL-প্ররোচিত NFATc1 কার্যকলাপে, একটি লুসিফেরেজ রিপোর্টার অ্যাস সঞ্চালিত হয়েছিল। সিডিপি দিয়ে চিকিৎসা(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড), 5 µM এবং উচ্চতর ঘনত্বে, উল্লেখযোগ্যভাবে বাধা দেয় RANKL-প্ররোচিত NFATc1 কার্যকলাপ (চিত্র 5a)। উপরন্তু, ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে সি.ডি.পি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)3 এবং 5 দিনের জন্য RANKL এবং M-CSF এর সাথে চিকিত্সা করা BMM-এ NFATc1 এবং c-Fos-এর উল্লেখযোগ্যভাবে দমন করা প্রোটিন এক্সপ্রেশন (চিত্র 5b)। অধিকন্তু, অস্টিওক্লাস্ট ফাংশন-সম্পর্কিত প্রোটিনের অভিব্যক্তি, যেমন V-ATPase-d2 এবং CTSK, CDP-এর উপস্থিতিতে নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায়। যাইহোক, CDP RANK অভিব্যক্তিতে কোন প্রভাব ফেলেনি (চিত্র 5b)।

3.5|সিডিপি RANKL-প্ররোচিত অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস চলাকালীন ROS উৎপাদনকে অপসারণ করতে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইমের অভিব্যক্তিকে প্রচার করে

সিডিপি-নির্ভর অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস ইনহিবিশনের অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াটি অন্বেষণ করতে, বিএমএমগুলিকে পিবিএস বা সিডিপির সাথে RANKL (100 ng/ml) এবং M-CSF (50 ng/ml) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল।(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)72 ঘন্টার জন্য আমরা RANKL দ্বারা উদ্দীপিত অন্তঃকোষীয় ROS উত্পাদনের উপর CDP-এর প্রভাব পরীক্ষা করেছি। আন্তঃকোষীয় ROS স্তরগুলি RANKL চিকিত্সা দ্বারা বৃদ্ধি করা হয়েছিল, যা CDP (5 এবং 10 µM; চিত্র 6a) দ্বারা হ্রাস করা হয়েছিল। ROS- পজিটিভ কোষের সংখ্যা এবং ROS স্টেনিংয়ের তীব্রতা উভয়ই ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে CDP চিকিত্সার দ্বারা হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 6b,c)। ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে সি.ডি.পি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)BMMs-এ inducible নাইট্রিক অক্সাইড সিন্থেস (NOS2) এর অভিব্যক্তিকে দমন করার সময় থিওরেডক্সিন (TRX1) এবং গ্লুটাথিয়ন রিডাক্টেস (GSR) অভিব্যক্তি প্রচার করে যা 3 দিনের জন্য RANKL এবং M-CSF দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল (চিত্র 6d)।

আরও অন্বেষণ করতে যদি CDP(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)ROS উত্পাদন হ্রাস করে অস্টিওক্লাস্ট পার্থক্যকে দমন করে, আমরা তখন কোষে উচ্চ ROS অবস্থা অনুকরণ করতে পারক্সাইড (10 µM) দিয়ে বিএমএমগুলিকে চিকিত্সা করি। বিএমএমগুলি 3 দিনের জন্য RANKL এবং M-CSF দ্বারা প্ররোচিত হয়েছিল এবং ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ এবং RT-PCR এর ফলাফলগুলি দেখায় যে পারক্সাইড নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় NFATc1 এবং c-Fos এক্সপ্রেশনকে উন্নীত করেছে। চিত্র 5 এর ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, NFATc1 এবং c-Fos-এর অভিব্যক্তি CDP দ্বারা দমন করা হয়েছিল(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)যখন পারক্সাইড সিডিপি (চিত্র 6e,f) এর প্রতিরোধক প্রভাবকে উদ্ধার করে। এই তথ্যগুলি ইঙ্গিত করে যে CDP ROS উত্পাদনকে স্ক্যাভেঞ্জিং করে NFATc1 এবং c-Fos-এর অভিব্যক্তিকে দমন করেছে।

3.6|সিডিপি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)RANKL-প্ররোচিত অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস চলাকালীন MAPK পথগুলিকে দমন করে

এরপরে, আমরা সিডিপির প্রভাব তদন্ত করেছি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)RANKL-মিডিয়াটেড TRAF6 এক্সপ্রেশন এবং MAPK পাথওয়ে অ্যাক্টিভেশনের উপর চিকিত্সা। 2 ঘন্টার জন্য সিরাম-মুক্ত মাধ্যমের ইনকিউবেশনের পরে, BMMগুলিকে RANKL দিয়ে, CDP সহ বা ছাড়া, 60 মিনিটের জন্য উদ্দীপিত করা হয়েছিল। CDP (10 µM) এর সাথে উদ্দীপনা 10 এবং 20 মিনিটে TRAF6 এক্সপ্রেশন এবং JNK2 এবং ERK1/2 এর ক্ষয়প্রাপ্ত ফসফোরিলেশনের উপর কোন প্রভাব ফেলেনি (চিত্র 7)। উপরন্তু, p38 ফসফোরিলেশন উল্লেখযোগ্যভাবে CDP দ্বারা বাধা ছিল(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় 60 মিনিটের চিকিত্সা (চিত্র 7)। এই তথ্য প্রকাশ যে CDP(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)RANKL-প্ররোচিত MAPK সিগন্যালিং পথগুলিকে দমন করে, অস্টিওক্লাস্ট গঠন এবং কার্যকলাপের উপর এর প্রতিরোধমূলক প্রভাবের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ।

4|আলোচনা

সিস্তানচে, "মরুভূমির জিনসেং" নামে পরিচিত, সম্প্রতি অনাক্রম্যতা পরিবর্তন করার এবং বার্ধক্য এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের সময় সুরক্ষামূলকভাবে কাজ করার ক্ষমতার জন্য অনেক মনোযোগ আকর্ষণ করেছে (জিয়া এট আল।, 2012; স্নিটনিকোভা এট আল।, 2012)। ফেনিলপ্রোপ্যানয়েড-প্রতিস্থাপিত গ্লাইকোসাইডস, সিস্টানচে প্রধান সক্রিয় উপাদান, ম্যাক্রোফেজগুলিতে কোনও কার্যকলাপকে বাধা দেয় না বলে দেখানো হয়েছে (আহন, চে, চিন, এবং কিম, 2017)। উপরন্তু, কসিস্তানচেইসকেমিয়া পরবর্তী মায়োকার্ডিয়ামে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস হ্রাস করা এবং কার্ডিওপ্রোটেকশনের দিকে পরিচালিত অ্যাপোপটোটিক পথগুলিকে বাধা দেওয়ার ক্ষেত্রে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করেছে (ইউ, লি, এবং কাও, 2016)। Cistanche, CDP এর একটি গুরুত্বপূর্ণ উপাদান হিসেবে(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)বিভিন্ন ফার্মাকোলজিকাল ফাংশন আছে। আমাদের বর্তমান সমীক্ষায় দেখা গেছে যে CDP RANKL-অ্যাক্টিভেটেড অস্টিওক্লাস্ট পার্থক্য এবং সক্রিয়করণকে ROS উৎপাদনের পাশাপাশি NFAT এবং MAPK অ্যাক্টিভেশনকে দমন করে।

অ্যাসিড ফসফেটেস হিসাবে, TRAcP বিভিন্ন কোষে বিদ্যমান এবং অস্টিওক্লাস্ট এবং অ্যালভিওলার ম্যাক্রোফেজে প্রচুর পরিমাণে রয়েছে (Snipes, Lam, Dodd, Grey, & Cohen, 1986)। TRAcP হল অস্টিওক্লাস্টগুলির একটি বৈশিষ্ট্যযুক্ত এনজাইম এবং এর অভিব্যক্তিটি অস্টিওক্লাস্ট ফাংশনের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত, যা অস্টিওক্লাস্ট কার্যকলাপ এবং হাড়ের সংস্কারের সূচক হিসাবে বিবেচিত হয় (মিনকিন, 1982)। আমাদের গবেষণায়, CDP(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)TRAcP-পজিটিভ কোষের সংখ্যাকে বাধা দেয়, যা নির্দেশ করে যে RANKL-প্ররোচিত অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস সিডিপি দ্বারা অবরুদ্ধ ছিল(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড). অস্টিওক্লাস্ট দ্বারা হাড়ের ম্যাট্রিক্সের অবক্ষয় ক্যাথেপসিন কে (সিটিএসকে) এবং এমএমপি (গ্রুবার, 2015) এর উপর নির্ভর করে। এখানে, CDP উল্লেখযোগ্যভাবে Mmp9, Ctsk, এবং Acp5 এর মতো অস্টিওক্লাস্ট কার্যকরী জিনের অভিব্যক্তিকে হ্রাস করেছে।

অস্টিওক্লাস্ট পার্থক্য এবং কার্যকারিতা একাধিক সংকেত পথ দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয় (বয়েল, সিমোনেট, এবং লেসি, 2003)। RANK-এর সাথে আবদ্ধ হওয়ার পরে, RANKL অ্যাডাপ্টার প্রোটিন TRAF6 নিয়োগ করে NFATc1-এর অভিব্যক্তি সক্রিয় করতে, যা অস্টিওক্লাস্ট গঠনের জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর, যা TRAcP এবং CTSK সহ অস্টিওক্লাস্ট-নির্দিষ্ট জিনের অভিব্যক্তিকে প্রভাবিত করে (এক্স। ফেং, আলকায়ানা, 2005)। 2002)। এই গবেষণায়, আমরা যে CDP(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)অস্টিওক্লাস্টে RANK এবং TRAF6 এক্সপ্রেশনের উপর কোন প্রভাব পড়েনি। তবে সি.ডি.পি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)BMM-এর অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস চলাকালীন RANKL-প্ররোচিত NFATc1 সক্রিয়করণকে বাধা দেয়। এছাড়াও, এটি প্রদর্শিত হয়েছিল যে ROS, ইলেকট্রন সরবরাহের প্রক্রিয়াতে মাইটোকন্ড্রিয়া দ্বারা উত্পাদিত, অস্টিওক্লাস্টের বিস্তার এবং পার্থক্যকে প্রচার করে এবং হাড়ের ম্যাট্রিক্সের অবক্ষয় নিয়ন্ত্রিত করে (Ha et al., 2004)। একটি সাম্প্রতিক সমীক্ষায় দেখা গেছে যে RANKL Bach1 পারমাণবিক আমদানিকে প্ররোচিত করেছে এবং Nrf2-মধ্যস্থ অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইম উত্পাদনকে প্ররোচিত করেছে, যার ফলে ইঁদুরের অন্তঃকোষীয় ROS এক্সপ্রেশন এবং অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস বৃদ্ধি করেছে (কানজাকি এট আল।, 2017)। উপরন্তু, হোমোসিস্টাইন দ্বারা অন্তঃকোষীয় ROS প্রজন্মের বৃদ্ধি অস্টিওক্লাস্ট গঠন এবং কার্যকলাপ বৃদ্ধি করে (কোহ এট আল।, 2006)। আমাদের সমীক্ষায় দেখা গেছে যে সিডিপি এনওএস 2 এক্সপ্রেশনকে বাধা দিয়ে এবং টিআরএক্স 1 এবং গ্লুটাথিয়ন রিডাক্টেসের মতো অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইমের অভিব্যক্তিকে প্রচার করে অস্টিওক্লাস্টে আরওএস জমা কমিয়েছে। যখন আমরা আন্তঃকোষীয় ROS সঞ্চয় বাড়াতে পারক্সাইড দিয়ে বিএমএমগুলিকে চিকিত্সা করি যে ফলাফলগুলি ROS বৃদ্ধি করে NFATc1 অভিব্যক্তিকে উন্নত করতে পারে তা প্রকাশ করে যে ROS NFATc1 এর আপস্ট্রিম ছিল। আমরা আরও দেখতে পেয়েছি যে পারক্সাইড এনএফএটিসি 1 এক্সপ্রেশনে সিডিপির প্রতিরোধমূলক প্রভাবকে উদ্ধার করেছে। সুতরাং, আমাদের ডেটা পরামর্শ দেয় যে CDP NFATc1 এক্সপ্রেশনকে বাধা দিতে ROS সঞ্চয়নকে দমন করে, তারপর অস্টিওক্লাস্ট গঠন এবং ফাংশনকে দমন করে।

ERK, JNK, এবং p38 MAPK পরিবারের অন্তর্গত, যা অস্টিওক্লাস্ট পার্থক্য নিয়ন্ত্রণের সাথে জড়িত (Seger & Krebs, 1995)। ERK, JNK, এবং p38 (Mizukami et al., 2002) এর ফসফোরিলেশন বৃদ্ধি করে RANKL MAPK পথকে সক্রিয় করে। আমরা সেই সিডিপি দেখিয়েছি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)MAPK পথের মূল প্রোটিনগুলির RANKL-মধ্যস্থিত ফসফোরিলেশনকে দমন করে, যার ফলে অস্টিওক্লাস্ট মার্কার জিনের প্রকাশের উপর CDP-এর প্রতিরোধমূলক প্রভাবে অবদান রাখে। আমাদের জানার জন্য, এটিই প্রথম গবেষণা যা সিডিপি-এর প্রতিরোধক প্রভাব দেখায়(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)ROS উত্পাদন, NFAT, এবং MAPK অ্যাক্টিভেশনের উপর, ভিট্রোতে CDP-এর ক্রিয়াকলাপের অভিনব প্রক্রিয়া উপস্থাপন করে।

সংক্ষেপে, আমরা দেখিয়েছি যে CDP(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস এবং হাইড্রোক্সাপাটাইট রিসোর্পশন এবং Ctsk, Mmp9 এবং Acp5 সহ অস্টিওক্লাস্ট মার্কার জিনের প্রকাশকে হ্রাস করে। সিডিপি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)RANKL-মধ্যস্থিত ROS উত্পাদন, সেইসাথে NFAT এবং MAPK সক্রিয়করণ (চিত্র 8) দমন করতে সক্ষম হয়েছিল। সমষ্টিগতভাবে, আমাদের ফলাফল সুপারিশ করে যে CDP(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)ROS অত্যধিক উত্পাদন দ্বারা অনুষঙ্গী অস্টিওক্লাস্ট-সম্পর্কিত অবস্থার চিকিত্সার জন্য একটি প্রার্থীর ওষুধের প্রতিনিধিত্ব করতে পারে।

চিত্র 8 সিডিপির পরিকল্পিত চিত্র(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)অস্টিওক্লাস্ট পার্থক্য ফাংশন. সিডিপি(সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড)RANKL-প্ররোচিত ROS উত্পাদন, সেইসাথে NFATc1 এবং MAPK সক্রিয়করণকে দমন করে, তাই অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিসকে বাধা দেয়। সিডিপি,সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইড; MAPK, মাইটোজেন-সক্রিয় প্রোটিন কিনেস; NFATc1, সক্রিয় T কোষের নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টর; RANKL, নিউক্লিয়ার ফ্যাক্টর κB লিগ্যান্ডের রিসেপ্টর অ্যাক্টিভেটর; ROS, প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি [রঙের চিত্র wileyonlinelibrary.com এ দেখা যেতে পারে]

স্বীকৃতি

এই গবেষণাটি চীনের প্রকৃতি বিজ্ঞান ফাউন্ডেশন (81572164), চীনের ন্যাশনাল কী টেকনোলজি রিসার্চ অ্যান্ড ডেভেলপমেন্ট প্রোগ্রাম (2017YFC1103300), গুয়াংজি প্রদেশের ন্যাচারাল সায়েন্স ফাউন্ডেশন (2016GXNSFAA380295) এবং গুয়াংজির বিশ্ববিদ্যালয়ের বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি গবেষণা প্রকল্প দ্বারা সমর্থিত ছিল। প্রদেশ (KY2015YB054)। এটি গুয়াংজি বৈজ্ঞানিক গবেষণা এবং প্রযুক্তি উন্নয়ন পরিকল্পনা প্রকল্প (GKG13349003, 1598013-15), ওয়েস্টার্ন অস্ট্রেলিয়া মেডিকেল অ্যান্ড হেলথ রিসার্চ ইনফ্রাস্ট্রাকচার ফান্ড, আর্থ্রাইটিস অস্ট্রেলিয়া ফাউন্ডেশন, দ্য ইউনিভার্সিটি অফ ওয়েস্টার্ন অস্ট্রেলিয়া (UWA) রিসার্চ কোলাবরেশন অ্যাওয়ার্ডস এবং অস্ট্রেলিয়ান হেলথ অ্যান্ড মেডিকেল রিসার্চ কাউন্সিল (NHMRC, নং 1107828 এবং 1027932)।

স্বার্থের সংঘাত

লেখকরা ঘোষণা করেন যে স্বার্থের কোন দ্বন্দ্ব নেই

থেকে:'সিস্তানচেমরুভূমিপলিস্যাকারাইডদেঝি সং এট আল দ্বারা RANKL সিগন্যালিং এবং প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতির উত্পাদনকে বাধা দেওয়ার মাধ্যমে অস্টিওক্ল্যাস্টোজেনেসিস এবং হাড়ের রিসোর্পশনকে হ্রাস করে

---©2018 Wiley Periodicals, Inc. wileyonlinelibrary.com/journal/jcp জে সেল ফিজিওল। 2018;233:9674–9684