উপযুক্ত ব্যায়াম স্তর ইঁদুরের অস্ত্রোপচারের পরে অন্ত্রের ডিসবায়োসিস এবং ভ্যালেরিক অ্যাসিড বৃদ্ধি করে নিউরোপ্লাস্টিসিটি এবং জ্ঞানীয় কার্যকারিতা উন্নত করে পার্ট 4

অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা প্রোফাইলিং

অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা প্রোফাইলিংয়ের জন্য ইঁদুর থেকে তাজা মল সংগ্রহ করা হয়েছিল। অবাধে মলত্যাগের অনুমতি দেওয়া মল সংগ্রহের জন্য ইঁদুরগুলিকে একটি স্বয়ংক্রিয়ভাবে খাঁচায় রাখা হয়েছিল। শুকনো বরফের উপর জীবাণুমুক্ত ইপেনডর্ফ টিউবে অবিলম্বে মল সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং পরবর্তী প্রক্রিয়া না হওয়া পর্যন্ত −80 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল। ব্যাকটেরিয়া ডিএনএ আমাদের পূর্ববর্তী প্রোটোকল [১১] অনুসারে পাওয়ার লাইজার পাওয়ার মাটির ডিএনএ আইসোলেশন কিট দিয়ে বের করা হয়েছিল।

সাম্প্রতিক গবেষণা দেখায় যে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োম আমাদের স্মৃতিতে খুব গুরুত্বপূর্ণ প্রভাব ফেলে। সুনির্দিষ্টভাবে, অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার ব্যাকটেরিয়া মানুষের মস্তিষ্কের স্নায়ুতন্ত্রকে প্রভাবিত করতে পারে, যার ফলে এর মেমরি ফাংশন পরিবর্তন হয়। এটি একটি আশ্চর্যজনক আবিষ্কার কারণ এর অর্থ হল আমরা আমাদের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োম পরিবর্তন করে আমাদের স্মৃতিশক্তি বাড়াতে পারি।

সুতরাং, এমন কেউ যিনি তাদের স্মৃতিশক্তি উন্নত করার চেষ্টা করছেন, আপনি আপনার অন্ত্রের মাইক্রোবায়োম উন্নত করতে কী করতে পারেন? উত্তরটি সহজ: একটি সুষম খাদ্যে ফোকাস করুন। একটি সুষম খাদ্য শুধুমাত্র আপনার অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার ভারসাম্য নিয়ন্ত্রণে সাহায্য করে না বরং শরীরের কার্যকারিতার সমস্ত দিককেও উন্নত করে।

প্রথমত, আমাদের ডায়েটারি ফাইবার সমৃদ্ধ একটি বৈচিত্র্যময় খাদ্যের উপর ফোকাস করতে হবে। একটি উচ্চ ফাইবার খাদ্য আপনার অন্ত্রের মাইক্রোবায়োমের বৈচিত্র্য বজায় রাখতে সাহায্য করতে পারে, যা সুস্বাস্থ্যের প্রচারের একটি মূল কারণ। একই সময়ে, আমাদের এটাও নিশ্চিত করতে হবে যে আমরা আমাদের খাবারে যথেষ্ট উচ্চ-মানের প্রোটিন এবং স্বাস্থ্যকর চর্বি গ্রহণ করি। এই পুষ্টি মেমরি ফাংশন এবং স্নায়ু পরিবাহী প্রচার করতে পারে.

এছাড়াও, নিয়মিত ব্যায়াম এবং স্ট্রেস হ্রাস অন্ত্রের মাইক্রোবায়োমে ভারসাম্য এবং বৈচিত্র্যকে উন্নীত করতে পারে। এটি গভীর শ্বাস, ধ্যান, বা যোগ অনুশীলন হোক না কেন, এগুলি চাপ কমানোর কার্যকর উপায়। ব্যায়াম অন্ত্রের সংকোচনের উন্নতি করতে পারে, অন্ত্রের জীবনীশক্তি বাড়াতে পারে এবং চক্রীয় ডিটক্সিফিকেশনকে উন্নীত করতে পারে, যার ফলে অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার ভারসাম্য এবং বৈচিত্র্যকে উন্নীত করতে সাহায্য করে।

সর্বোপরি, আমাদের কেবল আমাদের খাদ্য এবং শারীরিক স্বাস্থ্যের দিকেই নয়, আমাদের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার দিকেও মনোযোগ দেওয়া উচিত। আমাদের খাদ্যাভ্যাস পরিবর্তন করা এবং চাপ কমানো আমাদের অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটার ভারসাম্য এবং বৈচিত্র্যকে উন্নীত করতে পারে, যা আমাদের স্মৃতিশক্তি এবং স্নায়ুতন্ত্রের কার্যকারিতা উন্নত করতে সাহায্য করতে পারে। সুতরাং, আসুন একসাথে আমাদের অন্ত্রের স্বাস্থ্যের দিকে মনোযোগ দিন এবং আমাদের স্মৃতিশক্তি এবং শারীরিক সুস্থতা উন্নত করি!

এটা দেখা যায় যে আমাদের স্মৃতিশক্তি উন্নত করতে হবে, এবং Cistanche deserticola উল্লেখযোগ্যভাবে স্মৃতিশক্তি উন্নত করতে পারে কারণ Cistanche deserticola হল একটি ঐতিহ্যবাহী চীনা ঔষধি উপাদান যার অনেকগুলি অনন্য প্রভাব রয়েছে, যার মধ্যে একটি হল স্মৃতিশক্তি উন্নত করা। Cistanche deserticola এর কার্যকারিতা ট্যানিক অ্যাসিড, পলিস্যাকারাইডস, ফ্ল্যাভোনয়েড গ্লাইকোসাইড ইত্যাদি সহ এটিতে থাকা অনেক সক্রিয় উপাদান থেকে আসে। এই উপাদানগুলি বিভিন্ন উপায়ে মস্তিষ্কের স্বাস্থ্যের উন্নতি করতে পারে।

মস্তিষ্কের কার্যকারিতা উন্নত করার উপায়গুলি জানুন ক্লিক করুন

হাইপারভেরিয়েবল V3–V4 অঞ্চলের সিকোয়েন্সিং লাইব্রেরিগুলি ইলুমিনা MiSeq সিস্টেম নির্দেশাবলী অনুসারে প্রস্তুত করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, 12.5 এনজি ডিএনএ প্রথম 16 এস আরআরএনএ পিসিআর-এর জন্য একটি ডিএনএ টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। ব্যবহৃত প্রাইমারগুলি নিম্নরূপ: F: 5′-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGCCTACGGGNGGCWGCAG-3′ এবং R: 5′-GTCTCGTGGCTCGGAGATGTGTAAGACAGGACTACHTACHVGG1}-3′
এরপর অ্যামপ্লিকনগুলিকে এএমপিউর এক্সপি ম্যাগনেটিক পুঁতি দিয়ে পরিষ্কার করা হয় এবং তারপর নেক্সটেরা এক্সটিআইন্ডেক্স কিট ব্যবহার করে ইনডেক্স পিসিআর-এর জন্য ব্যবহার করা হয়। Qubit dsDNA HS অ্যাস কিট এবং TapeStation উচ্চ সংবেদনশীলতা D1000ScreenTape (Agilent, Blacksburg, VA, USA) PCR পণ্যগুলির ঘনত্ব পরিমাপ করতে এবং লাইব্রেরি প্রস্তুতির জন্য পরিমাণ স্বাভাবিক করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।

সিকোয়েন্সিংটি MiSeq রিএজেন্ট কিট v2 (500 চক্র) দ্বারা একটি ইলুমিনা MiSeq যন্ত্রে পরিচালিত হয়েছিল। MiSeqReporter সফ্টওয়্যার মেটাজেনোমিক্স ওয়ার্কফ্লো v2.5.1.3 (ইলুমিনা, সান ডিয়েগো, CA, USA) দিয়ে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ডাবল-টার্মিনাল সিকোয়েন্সিং দ্বারা প্রাপ্ত জোড়া রিডগুলি Pandaseq সফ্টওয়্যারের মাধ্যমে একটি অনুক্রমের মধ্যে বিভক্ত করা হয়েছিল। উচ্চ পরিবর্তনশীল অঞ্চলগুলির সাথে দীর্ঘ পঠিত প্রাপ্ত হয়েছিল।

উইন্ডোতে যে রিডগুলির গড় ফ্রেড স্কোর (আকারে 5 bp, 1 bp ধাপের দৈর্ঘ্য) 20 এর কম ছিল সেগুলি ছাঁটাই করা হয়েছিল৷ অস্পষ্ট "N" বা <220 bp দৈর্ঘ্য সহ রিডগুলি বাতিল করা হয়েছিল৷ মূল ডেটার মান নিয়ন্ত্রণের পরে, কাইমেরা ছাড়া উচ্চ-মানের ক্রমগুলিকে বড় থেকে ছোট থেকে প্রাচুর্য অনুযায়ী সাজানো হয়েছিল এবং তারপরে অপারেশনাল ট্যাক্সোনমিক ইউনিট (OTU) এর সাথে 97% মিলের সাথে ক্লাস্টার করা হয়েছিল। প্রতিটি OTU একটি প্রজাতির প্রতিনিধিত্বকারী হিসাবে বিবেচিত হয়েছিল। নমুনা সিকোয়েন্সিং ডেটার বিভিন্ন আকারের দ্বারা সৃষ্ট বিশ্লেষণের বিচ্যুতি এড়াতে, OTU-তে পাঠের সংখ্যাটি OTU-এর সাথে মিলে যাওয়া ন্যূনতম অনুক্রম সংখ্যা অনুসারে প্রবেশ করানো হয়েছিল যখন সিকোয়েন্সিং গভীরতা যথেষ্ট ছিল। আলফা বৈচিত্র্য এলোমেলো সমতলকরণ দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

ARead প্রতিটি OTU থেকে একটি প্রতিনিধি ক্রম হিসাবে বের করা হয়েছিল। রিবোসোমাল ডাটাবেস প্রজেক্টডেটাবেসের সাথে প্রতিনিধিত্বমূলক ক্রম তুলনা করা হয়েছিল। প্রতিটি ওটিইউ-এর জন্য প্রজাতিগুলিকে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছিল এবং পরবর্তী বিশ্লেষণের জন্য প্রজাতির প্রাচুর্য সারণী প্রাপ্ত হয়েছিল। সফ্টওয়্যার প্ল্যাটফর্ম QIIME v1.9.1-এ Uclust ব্যবহার করে OTU বাছাই করা হয়েছিল।

Chao1 সূচক এবং পণ্য কভারেজ সূচক সহ আলফা বৈচিত্র্য একটি নমুনায় প্রজাতির বৈচিত্র্যের বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। বিটা বৈচিত্র্য বিশ্লেষণটি নমুনার মধ্যে প্রজাতির বৈচিত্র্যের পার্থক্যের তুলনা করতে ব্যবহৃত হয়েছিল এবং ব্রে-কার্টিস দূরত্বের উপর ভিত্তি করে প্রধান সমন্বয় বিশ্লেষণ (পিসিওএ) দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল। গোষ্ঠীগুলির মধ্যে পার্থক্যগুলি সাদৃশ্য বিশ্লেষণের মাধ্যমে পরীক্ষা করা হয়েছিল (ANOSIM)।

প্লাজমা SCFA প্রোফাইলিং

প্লাজমা SCFA ঘনত্ব একটি 7890–5977 গ্যাস্ক্রোমাটোগ্রাফি-ম্যাস স্পেকট্রোমেট্রি (GC-MS, Agilent, Blacksburg, VA, USA) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল। প্লাজমা নমুনাগুলি উপরে বর্ণিত সময়ে ইঁদুর থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল, −8 এ সংরক্ষণ করা হয়েছিল। দ্রুত {20}} ডিগ্রী, এবং তারপর প্রক্রিয়াকরণের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় গলানো। সংক্ষেপে, একটি 100 উল প্লাজমা নমুনা 900 ইউলেথানলের সাথে ঘূর্ণি মিশ্রিত ছিল (0.5% HCl, V/V সমন্বিত)। অতিস্বনক চিকিত্সা 40 মিনিটের জন্য প্রয়োগ করা হয়েছিল এবং তারপরে নমুনাগুলিকে 14,000 RPM-তে 10 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল৷ নমুনার সুপারন্যাট্যান্ট GC-MS বিশ্লেষণ দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল anAgilent 7890–5977 GC-MS এর সাথে ইলেক্ট্রন প্রভাব আয়নকরণ এবং একটি DB-FFAPক্যাপিলারি কলাম (30 m × 0.25 mm × 0.25 μm)।

কর্টিকাল ভ্যালেরিক অ্যাসিড পরিমাপ

ভ্যালেরিক অ্যাসিডের শেষ ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশনের 24 ঘন্টা পরে সেরিব্রাল কর্টেক্সে ভ্যালেরিক অ্যাসিডের পরিমাণ সংগ্রহ করা হয়েছিল [51, 52] এর আগে রিপোর্ট করা অনুরূপ পদ্ধতি দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। সংক্ষেপে, 0.1 গ্রাম সেরিব্রাল কর্টেক্স ওয়াশোমোজেনাইজড 500 μl জলীয় অ্যাসিটোনিট্রিলে। সুপারনাট্যান্ট 8 মিলি এক্সট্রাকশন বাফার (হেক্সেন: ডাইথাইল ইথার=1:1) দিয়ে বের করা হয়েছিল এবং 5 মিনিটের জন্য 1800 গ্রাম সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। 7.5 মিলি সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল, মিথানলে 93 μl 20 mMKOH এর সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং নাইট্রোজেন গ্যাসের নীচে 40 ডিগ্রিতে শুকানো হয়েছিল। শুকনো অবশিষ্টাংশ 50 µl 2.5% 18-মুকুট-6 অ্যাসিটোনিট্রিলে পুনর্গঠিত হয়েছিল এবং টেট্রামেথিল্যামোনিয়াম হাইড্রোক্সাইড যোগ করে অ্যাসিটোনিট্রিলে 9-ক্লোরোমিথাইল অ্যানথ্রাসিন দিয়ে আরও উৎপাদিত হয়েছিল।

অবশেষে, 30 µl ডেরিভেটাইজেশন সলিউশন অ্যাক্লেম C18 কলামে (3 µm, 4.6 × 100 মিমি, থার্মো সায়েন্টিফিক) লোড করা হয়েছে এবং UV- ডিটেক্টর দিয়ে সজ্জিত আলটিমেট 3000 হাই-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (HPLC, Thermo Scientific) এ আলাদা করা হয়েছে। 254 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে ডেরাইভেটাইজড ভ্যালেরিক অ্যাসিডের সর্বোচ্চটি সনাক্ত করা হয়েছিল৷{10}}ইথাইলবিউটারিক অ্যাসিড (2-EA) একটি অভ্যন্তরীণ রেফারেন্স নিয়ন্ত্রণ হিসাবে যোগ করা হয়েছিল৷ ভ্যালেরিক অ্যাসিডের সর্বোচ্চ এলাকাটি mAU*মিনিট হিসাবে পরিমাপ করা হয়েছিল এবং প্রতিটি নমুনার সর্বোচ্চ ক্ষেত্রফল নমুনায় 2-EA এর সাথে স্বাভাবিক করা হয়েছিল। চূড়ান্ত ফলাফলগুলি এনএস গ্রুপের ভ্যালেরিক অ্যাসিড গ্রুপের অনুপাত হিসাবে উপস্থাপিত হয়েছিল।

মস্তিষ্কের টিস্যু সংগ্রহ

অস্ত্রোপচারের 6 ঘন্টা, 24 ঘন্টা, 48 ঘন্টা, 72 ঘন্টা, 96 ঘন্টা এবং 7 দিন পর ইঁদুরের ওজন করা হয়েছিল এবং আইসোফ্লুরেন দিয়ে চেতনানাশক করা হয়েছিল এবং মস্তিষ্কের টিস্যু হারভেস্টিংয়ের জন্য 4 ডিগ্রি এনএস দিয়ে পারফিউজ করা হয়েছিল। এই হিপ্পোক্যাম্পিগুলি ELISA বিশ্লেষণ বা আরএনএ অ্যাসয়ের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। ব্রেগমা −3 থেকে −6 মিমি এর পুরো মস্তিষ্কটি ইমিউনোফ্লুরোসেন্টস্টেইনিংয়ের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। সমস্ত ব্যবচ্ছেদ পদ্ধতি বরফে সঞ্চালিত হয়েছিল।

এমআরএনএ লাইব্রেরি প্রস্তুতি এবং ইলুমিনা হিসেক সিকোয়েন্সিং

The hippocampi harvested at 24 h after surgery from the control group, surgery group, and Exe+Sur group in the first experiment were placed in liquid nitrogen for 1 h and then stored in a −80 °C freezer quickly for no >1 সপ্তাহ. আরএনএ পরিশোধন, বিপরীত প্রতিলিপি, লাইব্রেরি নির্মাণ, এবং সিকোয়েন্সিং সাংহাইয়ের WuXi NextCODE-তে প্রস্তুতকারকের নির্দেশাবলী (ইলুমিনা) অনুযায়ী সম্পাদিত হয়েছিল।

মোট RNA থেকে mRNA-কেন্দ্রিক সিকোয়েন্সিং লাইব্রেরিগুলি Illumina TruSeq® RNA স্যাম্পলপ্রিপারেশন কিট ব্যবহার করে প্রস্তুত করা হয়েছিল। পলিএ এমআরএনএ অলিগো-ডিটাচড ম্যাগনেটিক বিডস ব্যবহার করে মোট আরএনএ থেকে বিশুদ্ধ করা হয়েছিল এবং তারপর ফ্র্যাগমেন্টেশন বাফারের মাধ্যমে খণ্ডিত করা হয়েছিল৷ এই ছোট টুকরোগুলিকে টেমপ্লেট হিসাবে গ্রহণ করে, প্রথম-স্ট্র্যান্ড সিডিএনএ রিভার্স ট্রান্সক্রিপ্টেজ এবং র্যান্ডম প্রাইমার ব্যবহার করে সংশ্লেষিত হয়েছিল, তার পরে দ্বিতীয়-স্ট্র্যান্ডসিডিএনএ সিন্থেসিস করা হয়েছিল৷ তারপর সংশ্লেষিত সিডিএনএ ইলুমিনার লাইব্রেরি কনস্ট্রাকশন প্রোটোকল অনুসারে শেষ মেরামত, ফসফোরিলেশন এবং 'এ' বেস সংযোজন করা হয়েছিল।

ইলুমিনা সিকোয়েন্সিং অ্যাডাপ্টারগুলি সিডিএনএ টুকরোগুলিতে যুক্ত করা হয়েছিল। DNA সমৃদ্ধকরণের জন্য PCR পরিবর্ধনের পর, AMPure XPBeads (Beckman) 200–300 bp এর টার্গেট টুকরো পরিষ্কার করতে ব্যবহার করা হয়েছিল। লাইব্রেরি নির্মাণের পরে, Qubit 3.0 ফ্লুরোমিটার dsDNA HS Assay (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) ছিল সিকোয়েন্সিং লাইব্রেরিগুলির ঘনত্বের পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়, যখন সাইজ ডিস্ট্রিবিউশন Agilent BioAnalyzer 2100 (Agilent) বিশ্লেষণ করছিল। সিকোয়েন্সিং করা হয়েছিল একটি ইলুমিনা সিস্টেম ব্যবহার করে ইলুমিনা-প্রদত্ত প্রোটোকল অনুসরণ করে 2 × 150 পেয়ারড-এ চায়না-এন্ড-এন্ড-সিউডিই-এ।

পরিমাণগত পলিমারেসচেইন বিক্রিয়া (Q-PCR) দ্বারা হিপ্পোক্যাম্পাল mRNA প্রকাশ

কন্ট্রোল গ্রুপ, এক্সারসাইজ গ্রুপ, সার্জারি গ্রুপ, Exe+Sur গ্রুপ, ট্রান্স-কন্ট্রোল+Sur গ্রুপ, Trans-Exe+Sur গ্রুপ, Exe+Sur+NS গ্রুপ এবং Exe+Sur+ থেকে অস্ত্রোপচারের পর হিপ্পোক্যাম্পাস 24 ঘণ্টায় কাটা হয়। ভ্যাল গ্রুপটিকে 1 ঘন্টার জন্য তরল নাইট্রোজেনে রাখা হয়েছিল, এবং তারপর −80 ডিগ্রি ফ্রিজারে 3 দিনের বেশি সময় ধরে সংরক্ষণ করা হয়েছিল। আরএনএ নিষ্কাশন, আরএনএ-টু-সিডিএনএ রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন, এবংকিউ-পিসিআর সঞ্চালিত হয়েছিল যেমন আমরা পূর্বে বর্ণনা করেছি [৪৯, ৫৩]। সংক্ষেপে, RNeasy মাইক্রো কিট দ্বারা RNA বের করা হয়েছিল। 5X অল-ইন-ওয়ান মাস্টারমিক্স ব্যবহার করে রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন শেষ হয়েছে। পরিশেষে, একটি CFX সংযোগ রিয়েল-টাইম সিস্টেম (বায়ো-র্যাড) পরিমাণগত পরিমাণ নির্ধারণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। qPCR-এর জন্য প্রাইমারগুলি ছিল: C3ar1-F:TGGGCTGGTGCTGTGGGTAG এবং C3ar1-R: GATGGCGAAGGCGGTTCTCAC৷ C3ar1 এর জন্য আপেক্ষিক জিনের অভিব্যক্তিটি তুলনামূলক থ্রেশহোল্ড চক্র ব্যবহার করে গণনা করা হয়েছিল - Δজেনের স্বাভাবিককরণের জন্য এক্সপ্রেস-জেন Δইএক্টিক্সেশন চক্রের তুলনামূলক থ্রেশহোল্ড ব্যবহার করে। লক্ষ্য জিনের জন্য mRNA স্তরগুলি যথাক্রমে প্রাসঙ্গিক গোষ্ঠীর তুলনায় ভাঁজ বৃদ্ধি হিসাবে প্রকাশ করা হয়।

হিপ্পোক্যাম্পাসে সাইটোকাইনস এবং জিডিএনএফ নির্ধারণ

হিপ্পোক্যাম্পাসে IL{{0}} , IL-6, C3, এবং GDNF ELISAkits ব্যবহার করে সনাক্ত করা হয়েছিল৷ IL-1, IL,-6, এবং GDNF পরীক্ষার জন্য, RIPA বাফারে 25 মিমি ট্রিস-এইচসিএল পিএইচ 7.6, 150 mMNaCl, 1% সোডিয়াম ডিঅক্সিকোলেট, 0.1% সমন্বিত বরফের মধ্যে মস্তিষ্কের টিস্যুগুলি সমজাতীয় করা হয়েছিল। এসডিএস এবং একটি প্রোটেজ ইনহিবিটর ককটেল যাতে রয়েছে 10 মিলিগ্রাম/মিলি অ্যাপ্রোটিনিন, 5 মিলিগ্রাম/মিলি পেপস্ট্যাটিন, 5 মিলিগ্রাম/মিলি লিউপেপটিন এবং 1 মিলিমিটার ফিনাইলমিথেন সালফোনাইল ফ্লোরাইড।

C3 পরীক্ষার জন্য, PTR বাফারে (কিটে সরবরাহ করা) বরফের উপর মস্তিষ্কের টিস্যুগুলি একত্রিত করা হয়েছিল। 4 ডিগ্রিতে 20 মিনিটের জন্য হোমোজেনেটকে 13,000 g সেন্ট্রিফিউজ করার পরে ELISA সনাক্তকরণের জন্য সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং BCA প্রোটিন অ্যাস (বায়ো-র্যাড, হেমেল হেম্পস্টেড, হার্টস, ইউকে) দ্বারা প্রোটিনের ঘনত্ব নির্ধারণ করা হয়েছিল। IL-1, IL6, C3, এবং GDNF মস্তিষ্কের সুপারনাট্যান্টে ELISA-এর জন্য প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে সনাক্ত করা হয়েছিল, এবং মস্তিষ্কের প্রতিটি নমুনায় তাদের পরিমাণ মোট প্রোটিন সামগ্রী দ্বারা স্বাভাবিক করা হয়েছিল এবং pg/ হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। মিলিগ্রাম প্রোটিন।

পশ্চিমা শোষক

পূর্বে বর্ণিত হিসাবে ওয়েস্টার্ন ব্লটিং সঞ্চালিত হয়েছিল [49]। সংক্ষেপে, বিসিএ প্রোটিন অ্যাস ব্যবহার করে নমুনার প্রোটিনের ঘনত্ব নির্ধারণ করা হয়েছিল। প্রতিটি নমুনার বিশ মাইক্রোগ্রাম নিম্নলিখিত প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলি ব্যবহার করে ওয়েস্টার্নব্লটিং বিশ্লেষণের শিকার হয়েছিল: খরগোশ পলিক্লোনাল্যান্টি-পোস্টসিন্যাপটিক ডেনসিটি প্রোটিন 95 (PSD95) 1:1000 ডিলিউশনে, র্যাবিটপলিক্লোনাল অ্যান্টি-সিনাপসিন 1 1:1000 ডিলিউশনে এবং খরগোশ{1}} টিউবুলিন্যান্টিবডি 1:1000 পাতলা। ছবিগুলি একটি ইমেজ মাস্টার II স্ক্যানার (GE Healthcare, Milwaukee, WI, USA) দ্বারা স্ক্যান করা হয়েছে এবং ImageQuant TL সফ্টওয়্যার v2003.03 (GE Healthcare) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছে৷ আগ্রহী প্রোটিনগুলির ব্যান্ড সংকেতগুলি সংশ্লিষ্ট টিউবুলিনগুলির সাথে স্বাভাবিক করা হয়েছিল এবং একই জেলগুলি থেকে নিয়ন্ত্রণ নমুনার ভগ্নাংশ হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল।

ইমিউনোফ্লুরোসেন্ট স্টেনিং

স্টেনিংয়ের ইমিউনোফ্লোরসেন্ট লেবেলিং এবং পরিমাণ নির্ধারণ করা হয়েছিল যেমন আমরা আগে বর্ণনা করেছি [6, 54]। সংক্ষেপে, মস্তিস্ককে 4 ডিগ্রীতে 4% প্যারাফর্মালডিহাইডে 24 ঘন্টার জন্য স্থির করা হয়েছিল এবং তারপর সর্বোত্তম কাটিং তাপমাত্রার যৌগে হিমায়িত হওয়ার আগে 4 ডিগ্রীতে 30% সুক্রোজে রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল৷ ব্রেগমা থেকে ক্রমানুসারে করোনাল 20-µm পুরু অংশগুলি কাটা হয়েছিল। একটি cryostat ব্যবহার করে −3 থেকে −6mm এবং মাইক্রোস্কোপ স্লাইডগুলিতে মাউন্ট করা হয়েছে।

ট্রিস-বাফারড স্যালাইনে (টিবিএস) ধোয়ার পর, টিবিএস-এ 10% গাধা সিরাম প্লাস 1% বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন (বিএসএ) অংশগুলিকে ব্লক করা হয়েছিল যাতে ঘরের তাপমাত্রায় 2 ঘন্টার জন্য 0.3% ট্রাইটন-X100 থাকে এবং তারপরে ইনকিউব করা হয়। নিম্নলিখিত প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলির সাথে রাতারাতি 4 ডিগ্রি: খরগোশের মনোক্লোনাল অ্যান্টি-সি3 অ্যান্টিবডি (1:50), ছাগলের মনোক্লোনাল অ্যান্টি-জিএফএপি অ্যান্টিবডি (1:200), ইঁদুরের মনোক্লোনাল অ্যান্টি-সি3আর অ্যান্টিবডি (1:50) এবং খরগোশের মনোক্লোনাল অ্যান্টি-আইবা{{ 21}} অ্যান্টিবডি (1:200)।

বিভাগগুলি টিবিএসে 0.1% ট্রাইটন-এক্স 100 দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। গাধা অ্যান্টি-র্যাবিট আইজিজি অ্যান্টিবডি অ্যালেক্সা ফ্লুর 594 (1:200) এর সাথে সংযুক্ত, গাধা অ্যান্টি-গোট আইজিজি অ্যান্টিবডি অ্যালেক্সা ফ্লুর 488 (1:200) এর সাথে সংযুক্ত। , গাধা অ্যান্টি-ইঁদুর IgG অ্যান্টিবডি অ্যালেক্সাফ্লুর 594 (1:200) বা গাধা অ্যান্টি-র্যাবিট আইজিজি অ্যান্টিবডি অ্যালেক্সাফ্লুর 647 (1:200) এর সাথে সংযুক্ত করা হয়েছে অন্ধকারে ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য বিভাগগুলির সাথে ইনকিউবেট করা হয়েছিল।

বিভাগগুলি টিবিএস-এ ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল, পারমাণবিক দাগের জন্য Hoechst 33342(1:1000) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল, ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং Vectashield মাউন্টিং মিডিয়াম (H-1000; Vector Labs, Burlingame, CA) দিয়ে মাউন্ট করা হয়েছিল৷ একটি LSM710 মাইক্রোস্কোপি সিস্টেম (ZEISS) সহ z-স্ট্যাক দ্বারা ইমিউনোস্টেইনিংয়ের চিত্রগুলি অর্জিত হয়েছিল এবং প্রাথমিক অ্যান্টিবডির সাথে ইনকিউবেশন বাদ দেওয়া অ্যানিগেটিভ নিয়ন্ত্রণ সমস্ত পরীক্ষায় অন্তর্ভুক্ত ছিল।

পূর্বে বর্ণিত হিসাবে পরিমাণ নির্ধারণ করা হয়েছিল [6, 54]। সংক্ষেপে, একটি মাউসের ছয়টি অনুক্রমিক হিপ্পোক্যাম্পাস বিভাগের প্রতিটি থেকে 2-3টি নন-ওভারল্যাপিং ক্ষেত্র দ্বারা আচ্ছাদিত পুরো ডেন্টেট গাইরাস (ডিজি) অঞ্চলটি চিত্রিত করা হয়েছিল। পূর্বনির্ধারিত থ্রেশহোল্ড স্তরের উপরে তীব্রতা সহ পিক্সেলের সংখ্যাকে আগ্রহী চিহ্নিতকারীর জন্য ইতিবাচকভাবে দাগযুক্ত এলাকা হিসাবে বিবেচনা করা হয়েছিল এবং চিত্র-প্রো প্লাস 6 ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল৷{7}} (মিডিয়া সাইবারনেটিক্স, ইনক., রকভিল, MD, USA) এবং মোট এলাকায় ধনাত্মক এলাকার শতাংশ হিসাবে উপস্থাপন করা হয়। ইতিবাচক দাগের মাত্রা প্রতিফলিত করার জন্য মাউস প্রতি ছয়টি পরিমাপ তখন গড় করা হয়েছিল। সমস্ত পরিমাণগত বিশ্লেষণগুলি অন্ধভাবে সম্পাদিত হয়েছিল।

BrdU প্রশাসন এবং ইমিউনোফ্লুরোসেন্ট স্টেনিং

অস্ত্রোপচারের সাত দিন পর, ইঁদুরকে 80 mg/kg 5′-bromo-2- deoxyuridine (BrdU) এর পরপর 7 টি ইন্ট্রাপেরিটোন অ্যালিনজেকশন দেওয়া হয়েছিল যেমন পূর্বে বর্ণিত হয়েছে [14]। হিপোক্যাম্পাস কাটার জন্য 5 দিন পরে ইঁদুর বলি দেওয়া হয়েছিল। হিপ্পোক্যাম্পাসটি 4% প্যারাফর্মালডিহাইডিন 0.1 এম ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইনে 24 ঘন্টার জন্য 4 ডিগ্রীতে স্থির করা হয়েছিল এবং ইনপ্যারাফিন এম্বেড করা হয়েছিল। ব্রেগমা −2 থেকে −4 মিমি পর্যন্ত ক্রমানুসারে পাঁচ-মাইক্রোন পুরু করোনাল মস্তিষ্কের অংশগুলি কাটা হয়েছিল। 20 মিনিটের জন্য 95-100 ডিগ্রীতে 10 মিমি সোডিয়ামসাইট্রেট, 0.05% টুইন 20 (pH 6.0) ধারণকারী সোডিয়াম সাইট্রেট বাফারের সাথে বিভাগগুলি ইনকিউবেটিং করে অ্যান্টিজেন পুনরুদ্ধার করা হয়েছিল।

বরফের উপর 3 মিনিটের জন্য 1 N HC, 3 মিনিটের জন্য রুম তাপমাত্রায় 2 N HCL এবং 6 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রিতে ইনকিউবেশনের মাধ্যমে ডিএনএ বিকৃতকরণ করা হয়েছিল। ঘরের তাপমাত্রায় 2 ঘন্টার জন্য 0.5% triton-X 100 ধারণকারী ফসফেট-বাফার স্যালাইনে (PBS) 5% গাধার সিরাম দিয়ে বিভাগগুলি ব্লক করা হয়েছিল। তারপরে বিভাগগুলিকে নিম্নলিখিত প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলির সাথে 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি সেবন করা হয়েছিল: র্যাটমোনোক্লোনাল অ্যান্টি-বিআরডিইউ অ্যান্টিবডি (1:100), এবং ছাগলের মনোক্লোনাল অ্যান্টি-জিএফএপ্যান্টিবডি (1:200)। একটি অন্ধকার ঘরে ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য আলেক্সা ফ্লুর 594 (1:200) এর সাথে গাধা-বিরোধী IgGantiবডি বা আলেক্সা ফ্লুর 488 (1:200) এর সাথে সংযোজিত গাধা-বিরোধী IgGantibody দ্বারা সঞ্চিত করা হয়েছিল। পিবিএস-এ ধোয়ার পর, বিভাগগুলিকে Hoechst 33342 (1:1000) দিয়ে কাউন্টারস্টেইন করা হয়, ধুয়ে ফেলা হয় এবং ভেকটাশিল্ড মাউন্টিং মিডিয়াম (ভেক্টর ল্যাবস) দিয়ে মাউন্ট করা হয়।

একটি চার্জ-কাপল্ড ডিভাইস ক্যামেরা (হাই ম্যাগঅলিম্পাস BX51) এবং একটি LSM710 কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি সিস্টেম (ZEISS) সহ অ্যাফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ দিয়ে ছবিগুলি অর্জিত হয়েছিল। প্রাথমিক অ্যান্টিবডির সাথে ইনকিউবেশন বাদ দেওয়া অ্যানিগেটিভ নিয়ন্ত্রণ সমস্ত পরীক্ষায় অন্তর্ভুক্ত ছিল। প্রতিটি মাউস মস্তিষ্কের জন্য, সেল গণনার জন্য ছয়টি অনুক্রমিক হিপ্পোক্যাম্পাল বিভাগ ব্যবহার করা হয়েছিল। একটি আগ্রহী চিহ্নিতকারীর জন্য ইতিবাচকভাবে দাগযুক্ত সমস্ত কোষের সংখ্যা বা প্রতিটি বিভাগের ডিজি-র সাব-গ্র্যানুলার জোনে দুই-মার্কারের সংমিশ্রণ গণনা করা হয়েছিল৷ পরিমাণগত বিশ্লেষণগুলি অন্ধভাবে সম্পাদিত হয়েছিল৷

গোলগির দাগ

এফডি র‌্যাপিড গলগিস্টেইনটিএম কিট ব্যবহার করে গোলগি স্টেনিং করা হয়েছিল। অস্ত্রোপচারের উনিশ দিন পরে, প্রতিটি গ্রুপের 6টি ইঁদুরের মস্তিষ্ককে 2 সপ্তাহের জন্য গর্ভধারণের দ্রবণে (সলিউশন A এবং B: 1:1) ডুবিয়ে রাখা হয়েছিল এবং তারপর 3 দিনের জন্য সমাধান C-তে স্থানান্তরিত করা হয়েছিল। 100 μm পুরুত্বে এবং ব্রেগমা থেকে প্রায় −2.7 মিমি কোরোনাল মস্তিষ্কের অংশগুলি একটি ভাইব্রেটোমে কাটা হয়েছিল (Microslicer® 10110, Ted Pella, Inc. California, USA)।

পূর্বে বর্ণিত হিসাবে [55, 56], হিপ্পোক্যাম্পাসের ডিজি অঞ্চলে 10 টিরও বেশি ভাল স্বতন্ত্র নিউরন প্রতিটি মাউস থেকে এলোমেলোভাবে নির্বাচন করা হয়েছিল, এবং অনুক্রমিক অপটিক্যাল মাল্টিপল-লেয়ার স্ক্যানিং চিত্রগুলি z অক্ষের 2.0 μম্যালে ব্যবধানে নেওয়া হয়েছিল (3DHISTECH, Pannoramic MIDI, Hungary) 20 × উদ্দেশ্য সহ। একাধিক-স্তর স্ক্যানিং ফাইলগুলিকে একটি পরিষ্কার স্ক্যানিং ফাইলে পরিণত করা হয়েছিল যা একটি কম্পিউটারে কেসভিউয়ার (3DHISTECH, হাঙ্গেরি) দিয়ে দেখা যেতে পারে। মোট শাখা সংখ্যা এবং ডেনড্রাইটিক দৈর্ঘ্য ফিজি সফ্টওয়্যার (ফিজি-উইন64, এনআইএইচ, ইউএসএ) দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল। শোল বিশ্লেষণ ব্যবহার করে মোট ডেনড্রাইটিক গাছের জটিলতা (ছেদ) অনুমান করা হয়েছিল। ফরস্পাইন ঘনত্ব পরিমাপ, প্রতিটি প্রাণী থেকে 5 টি নিউরন নির্বাচন করা হয়েছিল।

এপিকাল বা বেসাল ডেনড্রাইটে এলোমেলোভাবে নির্বাচিত পাঁচটি মাইক্রোস্কোপিক ক্ষেত্র স্ক্যানিং ফাইলগুলি থেকে ছবি তোলা হয়েছিল। 40 μms অংশে মেরুদণ্ডের সংখ্যাগুলি একজন পর্যবেক্ষক দ্বারা গণনা করা হয়েছিল যিনি গ্রুপ অ্যাসাইনমেন্টে অন্ধ ছিলেন। ফলাফলগুলি মেরুদণ্ডের সংখ্যা / 10 μms অংশ হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। ডেনড্রাইটিক শাখার সংখ্যা, দৈর্ঘ্য এবং ছেদগুলির পাশাপাশি একটি মাউস থেকে মেরুদণ্ডের ঘনত্বের ডেটা মাউসের স্তর প্রতিফলিত করার জন্য গড় করা হয়েছিল।

পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

প্রতিটি পরীক্ষার জন্য নমুনা আকার গণনা সঞ্চালিত হয় নি। নমুনার আকার নির্ধারণ বেশিরভাগই আমাদের অভিজ্ঞতার উপর ভিত্তি করে: জৈব রাসায়নিক অধ্যয়নের তুলনায় শেখার এবং মেমরি পরীক্ষা করার জন্য বড় নমুনা আকার ব্যবহার করা হয়েছিল। সংগৃহীত সমস্ত তথ্য বিশ্লেষণে অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল। অনুপস্থিত তথ্যের মধ্যে সেই প্রাণীগুলি অন্তর্ভুক্ত ছিল যেগুলি অনুশীলন প্রশিক্ষণের জন্য পূর্বনির্ধারিত বর্জনের মানদণ্ড পূরণ করে এবং উদ্দেশ্য পর্যবেক্ষণের সময়ের আগে মারা যাওয়া প্রাণীগুলি। প্রতিটি পরীক্ষামূলক অবস্থার জন্য বিশ্লেষণের জন্য ডেটা অবদানকারী প্রাণীর সংখ্যা ইনফিগার কিংবদন্তি বলা হয়েছে।

ফলাফল ± SD (স্বাভাবিক বন্টন ডেটা) বা মাঝারি ± ইন্টারকোয়ার্টাইল রেঞ্জ (স্বাভাবিক বিতরণ ডেটা নয়) বার গ্রাফে পৃথক প্রাণীর ডেটা উপস্থাপনের সাথে এবং লাইন প্লটে ± SD হিসাবে উপস্থাপন করা হয়। বার্নেসমেজের প্রশিক্ষণ সেশনের ডেটা টুকির পরীক্ষা দ্বারা অনুসৃত ভিন্নতা (ANOVA) এর দ্বিমুখী পুনরাবৃত্তি বিশ্লেষণের মাধ্যমে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

অন্ত্রের মাইক্রোবায়োটা ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল গুট মাইক্রোবায়োটা প্রোফাইলিং বিভাগে বর্ণিত হিসাবে। অন্যান্য ডেটা একমুখী ANOVA দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয় এবং তারপরে Tukey পরীক্ষা করা হয় যদি ডেটা স্বাভাবিকভাবে বিতরণ করা হয়, একমুখী ANOVA দ্বারা র্যাঙ্কের উপর এবং Tukey পরীক্ষক স্টুডেন্ট-নিউম্যান-কেউলস পদ্ধতি দ্বারা অনুসরণ করা হয় যদি ডেটা সাধারণত বিতরণ না করা হয়, দ্বিমুখী ANOVA দ্বারা , টি-টেস্ট বা র‌্যাঙ্ক যোগ পরীক্ষার মাধ্যমে। একটি উল্লেখযোগ্য পার্থক্য P < 0.05 হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছিল টু-টেইল্ড হাইপোথিসিস্টিং এর উপর ভিত্তি করে।

একাধিক তুলনার জন্য সামঞ্জস্য করা হয়নি। সমস্ত পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণগুলি সিগমাস্ট্যাট (সিস্ট্যাট সফ্টওয়্যার, ইনক, পয়েন্ট রিচমন্ড, সিএ, ইউএসএ) দিয়ে সম্পাদিত হয়েছিল।

তথ্যসূত্র

1. Moller JT, Cluitmans P, Rasmussen LS, Houx P, Rasmussen H, Canet J, et al. বয়স্ক ISPOCD1 গবেষণায় দীর্ঘমেয়াদী পোস্টঅপারেটিভ জ্ঞানীয় কর্মহীনতা। ISPOCD তদন্তকারীরা। পোস্ট-অপারেটিভ জ্ঞানীয় কর্মহীনতার আন্তর্জাতিক অধ্যয়ন। ল্যানসেট.1998;351:857-61।

2. মনক টিজি, ওয়েল্ডন বিসি, গারভান সিডব্লিউ, ডেডে ডিই, ভ্যান ডের এএ এমটি, হেইলম্যান কেএম, এট আল। বড় ননকার্ডিয়াক সার্জারির পরে জ্ঞানীয় কর্মহীনতার পূর্বাভাসকারী। এনেস্থেসিওলজি। 2008;108:18-30।

3. নিউম্যান MF, Kirchner JL, Phillips-Bute B, Gaver V, Grocott H, Jones RH, et al. করোনারি-ধমনী বাইপাসসারজারির পরে নিউরোকগনিটিভ ফাংশনের অনুদৈর্ঘ্য মূল্যায়ন। এন. ইংলিশ জে মেড 2001;344:395-402।

4. হল এম, শোয়ার্টজম্যান এ, ঝাং জে, লিউ এক্স। হাসপাতাল এবং অ্যাম্বুলেটরি সার্জারি সেন্টার থেকে অ্যাম্বুল্যারি সার্জারি ডেটা: 2010। জাতীয় স্বাস্থ্য পরিসংখ্যান রিপোর্ট 2017।

5. Li Y, Chen D, Wang H, Wang Z, Song F, Li H, et al. ল্যাপারোস্কোপিক পেটের অস্ত্রোপচারের মধ্য দিয়ে বয়স্ক রোগীদের পোস্টোপারেটিভ জ্ঞানের উপর শিরা বনাম উদ্বায়ী অ্যানেসথেটিক প্রভাব। এনেস্থেসিওলজি। 2021;134:381-94।

For more information:1950477648nn@gmail.com