3-টিউমার-অনুপ্রবেশকারী লিম্ফোসাইটের অ্যাড্রেনার্জিক রিসেপ্টর IFN- -নির্ভর PD-L1 প্রকাশকে টিকিয়ে রাখে এবং নিউরোব্লাস্টোমায় টিউমার-বিরোধী প্রতিরোধ ক্ষমতাকে দুর্বল করে

নিউরোব্লাস্টোমা (NB) হল একটি ভিন্নধর্মী বহিরাগত টিউমার যা শৈশবে ঘটে। এনবি টিউমারগুলির একটি স্বতন্ত্র বৈশিষ্ট্য হল তাদের নিউরোএন্ডোক্রাইন ক্যাটেকোলামাইন নিঃসরণ করার ক্ষমতা, যা পরিবর্তিতভাবে -অ্যাড্রেনারজিক রিসেপ্টর লাইগেশনের মাধ্যমে, টিউমার মাইক্রোএনভায়রনমেন্ট (টিএমই) এর বিভিন্ন সংকেত পথকে প্রভাবিত করতে পারে। এটি পূর্বে প্রদর্শিত হয়েছিল যে এনবি টিউমার কোষে 3-অ্যাড্রেনার্জিক রিসেপ্টর (3- এআর) এর নির্দিষ্ট বৈরিতা টিউমার বৃদ্ধি এবং অগ্রগতিকে প্রভাবিত করে। এখানে, NB-এর একটি মুরিন সিনজেনিক মডেলে, আমরা 3-এআর মড্যুলেশন টিউমারের বিরুদ্ধে হোস্ট ইমিউন সিস্টেমের প্রতিক্রিয়াকে প্রভাবিত করেছে কিনা তা তদন্ত করার লক্ষ্য রেখেছিলাম। ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে 3-এআর বিরোধিতা একটি ইমিউন প্রতিক্রিয়া পুনরায় সক্রিয়করণের দিকে পরিচালিত করে, আংশিকভাবে PD-1/PD-L1 সিগন্যালিং অক্ষ জড়িত থাকার উপর নির্ভর করে। প্রকৃতপক্ষে, 3- টিউমার-অনুপ্রবেশকারী লিম্ফোসাইটের (TILs) উপর AR অবরোধ তাদের IFN- নিঃসরণ করার ক্ষমতাকে কমিয়ে দেয়, যার ফলে NB টিউমার কোষে TILs অনুপ্রবেশের কারণে PD-L1 অভিব্যক্তি হ্রাস পায়। আরও তদন্ত, NB রোগীদের উপর একটি জিনোমিক বিশ্লেষণের মাধ্যমে, দেখিয়েছে যে উচ্চ ADRB3 জিনের অভিব্যক্তি নিম্ন অভিব্যক্তি গোষ্ঠীর তুলনায় খারাপ ক্লিনিকাল ফলাফলের সাথে সম্পর্কযুক্ত এবং যে ADRB3 জিনের অভিব্যক্তি বিভিন্ন রোগ প্রতিরোধক-সম্পর্কিত পথকে প্রভাবিত করে। সামগ্রিকভাবে, ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে 3-NB TME-তে AR টিউমার এবং হোস্ট ইমিউন সিস্টেমের মধ্যে মিথস্ক্রিয়া সংশোধন করতে সক্ষম এবং এর বিরোধিতা একাধিক প্রো-টিউমারাল সংকেত পথকে আঘাত করে।

গ্রাফিকাল বিমূর্ত

ভূমিকা

নিউরোব্লাস্টোমা (NB) একটি জটিল এবং ভিন্নধর্মী রোগ, এবং জীবনের প্রথম বছরে ধরা পড়া সবচেয়ে সাধারণ ধরনের ক্যান্সার। এনবি একটি নিউরোএন্ডোক্রাইন টিউমার যা সহানুভূতিশীল স্নায়ুতন্ত্রের (এসএনএস) বিকাশের সময় নিউরাল ক্রেস্টের প্রতিশ্রুতিবদ্ধ পূর্ববর্তী কোষ থেকে উদ্ভূত হয়। এই স্বাতন্ত্র্যসূচক উত্স টিউমার স্থানীয়করণ নির্ধারণ করে, যা সাধারণত অ্যাড্রিনাল গ্রন্থি এবং/অথবা সহানুভূতিশীল গ্যাংলিয়াতে ঘটে [1]। এনবি-এর ক্লিনিকাল আচরণ অত্যন্ত পরিবর্তনশীল, টিউমার থেকে শুরু করে যা স্বতঃস্ফূর্তভাবে প্রত্যাবর্তন করে, অন্যদের মধ্যে যা নিবিড় কেমোথেরাপি, সার্জারি, রেডিওথেরাপি, অটোলোগাস স্টেম সেল ট্রান্সপ্লান্টেশন এবং রেটিনয়েডের প্রশাসন (13-cis-retinoic) সহ সমস্ত উপলব্ধ থেরাপিতে অবাধ্য হয়ে ওঠে। অ্যাসিড) [2]। এই প্রতিক্রিয়াশীল টিউমারগুলির জন্য বিকল্প থেরাপিউটিক লক্ষ্যগুলি তাই প্রয়োজন। ইমিউন চেকপয়েন্ট ইনহিবিটরস (ICIs) এর উপর ভিত্তি করে ইমিউনোথেরাপি বেশ কয়েকটি কঠিন টিউমারের জন্য সবচেয়ে প্রতিশ্রুতিশীল কৌশল উপস্থাপন করে [3]। অন্যদের মধ্যে, প্রোগ্রামড ডেথ লিগ্যান্ড-1/প্রোগ্রামড ডেথ-1 (PD-L1/PD-1) সিগন্যালিং অক্ষ ইফেক্টর টি কোষের রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতাকে দুর্বল করে এবং টিউমার কোষগুলির প্রতিরোধ সহনশীলতা বাড়ায়, একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে মাউস এবং মানব উভয় ক্যান্সারে অ্যান্টি-টিউমার প্রতিক্রিয়া হ্রাসে ভূমিকা [4, 5]। যাইহোক, যদিও অনেক গবেষণা ইতিমধ্যেই প্রাপ্তবয়স্কদের ক্যান্সারে PD-1/PD-L1 সংকেতের অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াগুলি তদন্ত করেছে, শিশুর টিউমারের ক্ষেত্রে খুব কমই জানা যায়। এসএনএস এবং ইমিউন সিস্টেমের মধ্যে একটি জটিল ক্রস-টক, ক্যাটেকোলামাইন রিলিজ এবং অ্যাড্রেনারজিক রিসেপ্টর সিগন্যালিং সক্রিয় করার মাধ্যমে, অনেক টিউমারে টিউমারের অগ্রগতির ভাগ্য নির্ধারণ করতে সক্ষম হয় [6]। এটি বিশেষত এনবি রোগীদের ক্ষেত্রে সত্য হতে পারে যেখানে, প্রকৃতপক্ষে, ক্যাটেকোলামাইনের উচ্চ মাত্রা ম্যালিগন্যান্সির তীব্রতা প্রতিফলিত করে [7]। 3-অ্যাড্রেনার্জিক রিসেপ্টর ( 3-AR) উপপ্রকারকে সম্প্রতি ক্যান্সারের একটি গুরুত্বপূর্ণ নিয়ামক হিসেবে চিহ্নিত করা হয়েছে [8-10]। বিশেষ করে, টিউমার মাইক্রোএনভায়রনমেন্ট (টিএমই) এর টিউমার এবং স্ট্রোমাল কোষ উভয় ক্ষেত্রেই এর প্রকাশ এবং সক্রিয়করণ, বিভিন্ন প্রাক-ক্লিনিকাল মডেলগুলিতে টিউমারের অগ্রগতির জন্য দায়ী প্রো-টিউমারাল সিগন্যালিং পথগুলিকে প্রকাশ করেছে [11-14]। এখানে, NB-এর একটি সিনজেনিক মুরিন মডেলে, আমরা দেখিয়েছি যে 3-টিউমার-অনুপ্রবেশকারী লিম্ফোসাইটের (TILs) উপর AR টিউমার কোষগুলিতে একটি IFN- - নির্ভরশীল PD-L1 আপগ্র্যুলেশন বজায় রাখে, যার ফলে একটি টিউমার পালানোর জন্য দায়ী ইমিউন-দমনকারী TME। উপরন্তু, 3-এআর বিরোধিতা ইমিউন-রিঅ্যাকটিভ সিডি8+, প্রাকৃতিক ঘাতক (এনকে), এবং ডেনড্রাইটিক কোষ (ডিসি) এর সংখ্যা বাড়াতে এবং ইমিউন-দমনকারী নিয়ন্ত্রকের সংখ্যা হ্রাস করতে সক্ষম হয়েছিল TME তে T কোষ (Treg) এবং Myeloid-derived suppressor cell (MDSC)। অধিকন্তু, একটি কাপলান-মেইয়ার বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে উচ্চ ADRB3 জিনের অভিব্যক্তি এনবি রোগীদের দুর্বল বেঁচে থাকার সাথে যুক্ত ছিল, এবং এনবি এক্সপ্রেশনের বিভিন্ন উপলব্ধ পাবলিক ডেটাসেটের বিশ্লেষণে ADRB3 জিন এক্সপ্রেশন স্তর এবং সম্পর্কিত সংকেত পথের সাথে জড়িত জিনের মধ্যে একটি উল্লেখযোগ্য সম্পর্ক প্রকাশ করেছে। ইমিউন সিস্টেম/টিউমার মিথস্ক্রিয়া।

সিস্টানচে টিউবুলোসা-অ্যান্টিটিউমারের উপকারিতা

পদ্ধতি

সেল সংস্কৃতি

নিউরো-2একটি মুরিন এনবি ক্যান্সার কোষ ATCC (CCL-131) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল এবং 10% FBS, 2 মিমি এল-গ্লুটামিন, 100 U·ml−1 পেনিসিলিন এবং 100 এর সাথে সম্পূরক DMEM-তে জন্মানো হয়েছিল ug·ml−1 স্ট্রেপ্টোমাইসিন জল-স্যাচুরেটেড, 5% CO2 বায়ুমণ্ডলে 37 ডিগ্রিতে। নিউরো{13}}একটি কোষ নিয়মিতভাবে মাইকোপ্লাজমা দূষণের জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল।

টিউমার সিনজেনিক মুরিন মডেল

4 সপ্তাহ বয়সী মহিলা NCI A/JCr ইঁদুর চার্লস রিভার ল্যাবরেটরিজ (ফ্রেডরিক) থেকে কেনা হয়েছিল। নিউরো-2একটি কোষ (N2A) ডান দিকের PBS-এর 100 ul-এ 1 × 106 কোষ ইনজেকশনের মাধ্যমে A/J প্রাপক ইঁদুরের মধ্যে সাবকুটেনিয়াসভাবে রোপন করা হয়েছিল। যখন N2A কোষগুলি একটি স্পষ্ট টিউমার তৈরি করে (প্রায় 8 দিন), চিকিত্সা শুরু হয়। SR59230A (টোক্রিস বায়োসায়েন্স) এবং গাড়ির (শারীরবৃত্তীয় সমাধান) দিনে দুবার এবং PD-L1 অ্যান্টিবডি (InVivoMAb অ্যান্টি-মাউস PD-L1 (B7-xhH1) #BE0101 এর জন্য 8 ও 12 দিনে দিনে দুবার চিকিত্সা করা হয়েছিল। , Bio X সেল) এবং আইসোটাইপ নিয়ন্ত্রণ (InVivoMAb rat IgG2b আইসোটাইপ নিয়ন্ত্রণ # BE0090, বায়ো এক্স সেল)। IgG2b আইসোটাইপ কন্ট্রোল অ্যাডমিনিস্ট্রেশন যানবাহনের একই ফলাফল তৈরি করেছে তাই শুধুমাত্র গাড়ির অবস্থা পরিসংখ্যানে দেখানো হয়েছে। SR59230A intraperitoneal (ip) এর মাধ্যমে শারীরবৃত্তীয় দ্রবণে 10 mg/kg এ বিতরণ করা হয়েছিল; InVivoPure™ pH 6.5 ডিলিউশন বাফার (#IP0065); 250 µg IgG2b আইসোটাইপ কন্ট্রোল মাউস 100 µl InVivoPure™ pH 7.0 ডাইলিউশন বাফার (#IP0070) এ ip বিতরণ করা হয়েছে। FTY720 (#6176, Tocris Biotechne) এর সাথে চিকিত্সা 6 তম দিন থেকে 2 মিগ্রা/কেজি প্রতি os (po) এ পরিচালিত হয়েছিল। টিউমারের বৃদ্ধির হার একটি ক্যালিবার দিয়ে টিউমার ভর পরিমাপ করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল, এবং টিউমার ভরের পরিমাণকে ভলিউম হিসাবে গণনা করা হয়েছিল {{ 41}} [(দৈর্ঘ্য × প্রস্থ) 2 /2]। 8 দিন চিকিত্সার পরে ইঁদুর বলি দেওয়া হয়েছিল।

ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ

প্রোটেজ ইনহিবিটর ককটেল ধারণকারী RIPA বাফারে কোষগুলি সংগ্রহ এবং লাইজ করা হয়েছিল। পরিমাপ করার পরে, মোট প্রোটিনের 20 ইউজি একটি SDS-PAGE এবং WB বিশ্লেষণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। PVDF ঝিল্লি রাতারাতি প্রাথমিক অ্যান্টিবডি অ্যান্টি-PD-L1 (ab238697, Abcam), phospho-CREB (ab32096, Abcam), CREB (ab32515, Abcam), p-PKA / / (sc- 32968, সান্তা) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল ক্রুজ বায়োটেকনোলজি), -অ্যাক্টিন (sc-1615, সান্তা ক্রুজ বায়োটেকনোলজি), 3-AR (ab94506, Abcam) 4 ডিগ্রিতে এবং তারপর ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য নির্দিষ্ট সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি সহ। ক্ল্যারিটি ওয়েস্টার্ন ইসিএল সাবস্ট্রেট (বায়ো-র্যাড) ব্যবহার করে নির্দিষ্ট প্রোটিনের সাথে অ্যান্টিবডিগুলির বাঁধন সনাক্ত করা হয়েছে এবং ছবিগুলি কেমিডোক ইমেজিং সিস্টেম (বায়রাড®) এর মাধ্যমে অর্জিত হয়েছে। ইমেজজে সফ্টওয়্যারটি পরিমাণগত বিশ্লেষণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল এবং ব্যান্ডগুলির সংকেতের তীব্রতা নিয়ন্ত্রণ মানগুলির তুলনায় একটি গুণ বৃদ্ধি হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল।

PD-L1 সাইটোফ্লোরিমেট্রিক অ্যাসের জন্য সহ-সংস্কৃতি

টিউমার কোষগুলি MW24 (45,000 কোষ/কূপ) এ বীজ করা হয়েছিল এবং 24 ঘন্টা পরে লিম্ফোসাইটের সাথে সহ-সংস্কৃতি করা হয়েছিল, যা যানবাহন বা SR59230A (T2) দিয়ে 2 দিনের জন্য পূর্ব-চিকিত্সা করা ইঁদুরের TDLN থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। বীজের অনুপাত 1:10 (টিউমার/লিম্ফোসাইট)। মোট ইনকিউবেশন পিরিয়ডের শেষে (48 ঘন্টা), লিম্ফোসাইটগুলি সহ-সংস্কৃতির মাধ্যমটির সাথে মৃদু পাইপটিং দ্বারা প্রত্যাহার করা হয়েছিল, এবং তারপরে টিউমার কোষগুলিকে ট্রিপসিনাইজেশন দ্বারা বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল এবং অ্যান্টি-PD-L1 অ্যান্টিবডি (CD274 অ্যান্টিবডি) দিয়ে চিহ্নিত করা হয়েছিল। {17}}, eBioscience™) সাইটোফ্লোরিমেট্রিক পরিমাপের জন্য। দাগযুক্ত কোষগুলি একটি MACSQuant বিশ্লেষক 10 ফ্লো সাইটোমিটার (মিল্টেনি বায়োটেক, গ্ল্যাডবাচ, জার্মানি) এ অর্জিত হয়েছিল এবং ফ্লোলোজিক সফ্টওয়্যার (মিল্টেনি বায়োটেক, গ্ল্যাডবাচ, জার্মানি) ব্যবহার করে ডেটা প্রক্রিয়া করা হয়েছিল।

PD-L1 ইমিউনোফ্লোরোসেন্স এবং IFN- পরিমাণ নির্ধারণের জন্য সহ-সংস্কৃতি

Nunc ল্যাব-টেক চেম্বার স্লাইড 4-এ মাইক্রোস্কোপ স্লাইডগুলিতে (20,000 কোষ/ওয়েল) টিউমার কোষগুলি বীজ করা হয়েছিল এবং 24 ঘন্টা পরে লিম্ফোসাইটের সাথে সহ-সংস্কৃতি করা হয়েছিল, যা যানবাহনের সাথে 2 দিনের জন্য চিকিত্সা করা ইঁদুরের টিডিএলএন থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল বা SR59230A (T2), 1:10 এর বীজ অনুপাতে (টিউমার/লিম্ফোসাইট)। 48 ঘন্টা পরে, সংস্কৃতি মাধ্যমের লিম্ফোসাইটগুলি মৃদু পাইপেটিং দ্বারা সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং তারপর সেন্ট্রিফিউগেশনের মাধ্যমে বাতিল করা হয়েছিল; প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে লুমিনেক্স xMAP প্রযুক্তির মাধ্যমে IFN-এর পরিমাণ নির্ণয় করতে সুপারনাট্যান্ট ব্যবহার করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, সহ-সংস্কৃতি মাধ্যমের IFN- পরিমাপ বায়ো-প্লেক্স প্রো মাউস সাইটোকাইন IFN- সেট (#171G5017M, বায়ো-র্যাড) ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল এবং MAGPIX সিস্টেমে (লুমিনেক্স, টেক্সাস, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) ডেটা অর্জিত হয়েছিল। Bio-Plex Manager™ সফটওয়্যার (BIO-RAD, California, USA) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। মাইক্রোস্কোপ স্লাইডগুলিতে টিউমার কোষগুলি এর পরিবর্তে নিম্নরূপ PDL1 ইমিউনোফ্লোরেসেন্স অ্যাস সম্পাদন করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। ইমিউনোফ্লোরেসেন্স বিশ্লেষণের জন্য কোষগুলি 20 মিনিটের জন্য পিবিএস-এ 3% প্যারাফর্মালডিহাইডে স্থির করা হয়েছিল। ঘরের তাপমাত্রায় 30 মিনিটের জন্য পিবিএস-এ টুইন-20 0.5% সমন্বিত একটি সমাধান যোগ করে পারমিবিলাইজেশন প্রাপ্ত করা হয়েছিল। তারপরে কোষগুলিকে 1 ঘন্টার জন্য 3% BSA-তে ব্লক করা হয়েছিল এবং 2 ঘন্টার জন্য প্রাথমিক অ্যান্টিবডি অ্যান্টি-PD-L1 (ab238697, Abcam) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। পরবর্তীকালে, পিবিএস-এ ধোয়ার পরে, স্লাইডগুলিকে আলেক্সা-ফ্লোর 488 সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি দিয়ে 1 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ (DMi8 - Leica microsystems) ব্যবহার করে ছবিগুলি প্রাপ্ত করা হয়েছিল৷

চীনা ভেষজ cistanche উদ্ভিদ - অ্যান্টিটিউমার

1- 2- এবং 3-এআর সাইলেন্সিংয়ের জন্য লিম্ফোসাইটের siRNA ইলেক্ট্রোপোরেশন

TDLNs থেকে প্রাপ্ত লিম্ফোসাইটগুলি সিলেক্টিভ 1- (SASI_Mm01_00090154, ক্রম: GUGAUCGUGGCCAUCGCCA, Merck), 2- (SASI_Mm{) এর জন্য siRNA এর সাথে স্থানান্তরিত হয়েছিল {5}}, ক্রম: CCAAGUCGAGCGACUACA, Merck) এবং 3-AR (SASI_Mm01_00145466, ক্রম: CAGUGGACGUGCUCUGUGU, Merck) সাইলেন্সিং৷ সংক্ষেপে, 4D-Nucleofector X ইউনিট (Lonza) এবং P3 প্রাইমারি সেল 4D-NucleofectorTM X কিট (V4XP-3024, Lonza) ব্যবহার করে লিম্ফোসাইটগুলি siRNAs (100 nM) দিয়ে ইলেক্ট্রোপোরেট করা হয়েছিল। ডিএন{17}} প্রোগ্রাম, মুরিন টি সেল ইলেক্ট্রোপোরেশনের জন্য নির্দিষ্ট, সম্পাদিত হয়েছিল। ইলেক্ট্রোপোরেশনের পর, লিম্ফোসাইটগুলিকে টেক্সম্যাসিএস মিডিয়াম (130-097-196, মিলটেনি বায়োটেক) 24 ঘন্টার জন্য সংষ্কৃত করা হয়েছিল এবং তারপর 48 ঘন্টার জন্য N2A টিউমার কোষের সাথে সহ-সংস্কৃতি করা হয়েছিল, যেমনটি পূর্বে বর্ণিত হয়েছে, PD-L1 পরিমাপের জন্য। লিম্ফোসাইটগুলিতে ARs সাইলেন্সিং দক্ষতা ডিজিটাল ড্রপলেট পিসিআর এর মাধ্যমে নিম্নরূপ মূল্যায়ন করা হয়েছিল।

-ARs mRNA পরিমাপের জন্য ডিজিটাল ড্রপলেট পিসিআর

আরএনএ আইস্ক্রিপ্ট অ্যাডভান্সড সিডিএনএ সিন্থেসিস কিট (বায়ো-র্যাড) ব্যবহার করে বিপরীত প্রতিলিপি করা হয়েছিল। ডিডিপিসিআর একটি QX200 সিস্টেম (বায়ো-র্যাড) এবং একটি C1000 টাচ থার্মাল সাইক্লার (বায়ো-র্যাড) এ প্রস্তুতকারক নির্দেশাবলী অনুসারে প্রোবের জন্য ddPCR সুপারমিক্স (কোনও dUTP) (বায়ো-র্যাড) ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়েছিল। ব্যবহৃত অ্যাসেগুলি হল: Adrb3-FAM (dMmuCPE5088688), Adrb2-FAM (dMmuCPE5089938), Adrb1-FAM (dMmuCPE5100184), Rps18-HEX (dMmuCPE417)। ddPCR ডেটা QuantaSoft™ সফ্টওয়্যার (সংস্করণ 1.7.4, Bio-Rad) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

আরএনএ-সিকোয়েন্সিং

এক্সাইজড টিউমারগুলিকে বাফার RLT (কিয়াজেন) এ স্থাপন করা হয়েছিল এবং gentleMACS M টিউব (Miltenyi Biotec, Gladbach, Germany) ব্যবহার করে gentleMACS Octo Dissociator (Miltenyi Biotec, Glad bach, Germany) দিয়ে যান্ত্রিকভাবে একত্রিত করা হয়েছিল। প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসরণ করে, আরএনইজি প্লাস মিনি কিট (কিয়াজেন) দিয়ে মোট আরএনএ নিষ্কাশন করা হয়েছিল। ন্যানোড্রপ 2000/2000c স্পেকট্রোফোটোমিটার (থার্মোফিশার) এবং কিউবিট আরএনএ উচ্চ সংবেদনশীলতা (এইচএস) (থার্মোফিশার) উভয় ব্যবহার করে RNA পরিমাণ নির্ধারণ করা হয়েছিল। একটি Agilent বায়োঅ্যানালাইজারে Agilent RNA 6000 Pico Kit ব্যবহার করে RNA অখণ্ডতা মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং 6.00 এর কম RNA ইন্টিগ্রিটি নম্বর (RIN) সহ সমস্ত নমুনা বাদ দেওয়া হয়েছিল। লাইব্রেরির প্রস্তুতি ট্রুসেক স্ট্র্যান্ডেড টোটাল আরএনএ লাইব্রেরি প্রিপ গোল্ড কিট (ইলুমিনা) ব্যবহার করে প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে সম্পাদিত হয়েছিল, যার প্রাথমিক ইনপুট মোট আরএনএর 500 এনজি ছিল। একটি Agilent বায়োঅ্যানালাইজারে একটি Agilent DNA 7500 কিট ব্যবহার করে লাইব্রেরির গুণমান মূল্যায়ন করা হয়েছিল, তারপর 1X dsDNA উচ্চ সংবেদনশীলতা (HS) (থার্মোফিশার) ব্যবহার করে লাইব্রেরির পরিমাণ নির্ধারণ করা হয়েছিল। নেক্সটসেক 500/550 v2.5 (150 চক্র) উচ্চ আউটপুট রিএজেন্ট কিট (ইলুমিনা) ব্যবহার করে একটি NextSeq 550 সিকোয়েন্সিং সিস্টেমে (ইলুমিনা) লাইব্রেরিগুলি সিকোয়েন্স করা হয়েছিল। রানগুলি 2 × 76 bp কনফিগারেশনের সাথে সঞ্চালিত হয়েছিল।

mRNA পরিমাণ নির্ধারণ এবং ট্রান্সক্রিপ্টমিক্স বিশ্লেষণ

স্যালমন (v. 1.5.1) ম্যাপিং-ভিত্তিক মোডে ট্রান্সক্রিপ্টের পরিমাপ করার জন্য এবং mus musculus' রেফারেন্স ট্রান্সক্রিপ্টম GRCm38.98 ব্যবহার করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ qf ফাইলগুলি পরিসংখ্যানগত ভাষা R দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। tximport প্যাকেজটি R-এ ডেটা আমদানি করতে ব্যবহৃত হয়েছিল, এবং ট্রান্সক্রিপ্টগুলি AnnotationDbi প্যাকেজ এবং org.Mm.eg.db ডাটাবেস দ্বারা জিনের উপর ভেঙে দেওয়া হয়েছিল। অবশেষে, আমরা DESeq2 এর সাথে পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ করেছি। পরিবর্তিত সেলুলার পথ সনাক্ত করতে পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ সহ GO: BP ডাটাবেসকে জিজ্ঞাসা করার জন্য ClusterProfiler প্যাকেজ ব্যবহার করে আমরা একটি Over Enrichment Analysis (ORA) করেছি। সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণের জন্য জিন নির্বাচন করার জন্য আমরা log2FC থ্রেশহোল্ডকে 0.5 (| log2FC|⋝ 0.5) এবং সামঞ্জস্য করা p-মানটিকে 0 এ সেট করি৷ {17}}৫. 0.05 এর p-মান দ্বারা ফলাফলগুলি ফিল্টার করার পরে আমরা GO: BP ডাটাবেসের বিরুদ্ধে পরীক্ষা করা 15158 এর মধ্যে 45টি পরিসংখ্যানগতভাবে নিয়ন্ত্রণমুক্ত প্রক্রিয়া পুনরুদ্ধার করেছি।

লুমিনেক্স সাইটোকাইনস পরিমাপ

cistanche tubulosa - ইমিউন সিস্টেম উন্নত

Cistanche Enhance Immunity পণ্য দেখতে এখানে ক্লিক করুন

【আরো জন্য জিজ্ঞাসা করুন】 ইমেল:cindy.xue@wecistanche.com / Whats অ্যাপ: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

যানবাহন, SR59230A, PD-L1, এবং SR59230A + PD-L1 দিয়ে 2 দিনের চিকিত্সার (T2) পরে ইঁদুর বলি দেওয়া হয়েছিল এবং টিউমারের ভর কাঁচি দিয়ে কেটে ফেলা হয়েছিল এবং বায়ো-প্লেক্স সেল লাইসিস কিট (BIO-RAD, ক্যালিফোর্নিয়া) ব্যবহার করে একজাতকরণ করা হয়েছিল। , USA) এবং gentleMACS Octo Dissociator (Miltenyi Biotec, Germany)। টিউমারাল লাইসেটগুলি তখন লুমিনেক্স xMAP প্রযুক্তির উপর ভিত্তি করে Bio-Plex Pro™ অ্যাসেস (BIO-RAD, ক্যালিফোর্নিয়া, USA) দ্বারা তাদের সাইটোকাইনের ঘনত্বের জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল। IFN- , TNF- , IL-2, IL-6, IL-10, GM-CSF, IL-1 , এবং IL-1 স্তরগুলি (pg/ml ) প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে পরিমাপ করা হয়েছিল। MAGPIX সিস্টেমে (Luminex, Texas, USA) ডেটা অর্জিত হয়েছিল এবং Bio-Plex Manager™ সফ্টওয়্যার (BIO-RAD, California, USA) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

ফ্লো সাইটোমেট্রিক বিশ্লেষণ

ফ্লো সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণ টিউমার কোষ এবং টিউমার মাইক্রোএনভায়রনমেন্টের ইমিউন সেল উপ-জনসংখ্যার উপর সঞ্চালিত হয়েছিল। সংক্ষেপে, টিউমারগুলিকে টিউমার ডিসোসিয়েশন কিট মাউস (#130-096-730, মিলটেনি বায়োটেক) দিয়ে একজাত করা হয়েছিল এবং টিউমার-অনুপ্রবেশকারী লিম্ফোসাইটগুলিকে CD45 (TIL) মাইক্রোবিডস মাউস (#130-110- 618) ব্যবহার করে মোট কোষ সাসপেনশন থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল। Miltenyi Biotec) বা CD8 (TIL) MicroBeads মাউস (#130-116-478, Miltenyi Biotec) অটোমেটিক প্রো সেপারেটর (Miltenyi Biotec) এর মাধ্যমে প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুযায়ী। তারপরে কোষগুলিকে বিভিন্ন ফ্লুরোক্রোম-কনজুগেটেড অ্যান্টিবডিগুলির বিভিন্ন যথাযথভাবে মিশ্রিত সংমিশ্রণে ইনকিউব করা হয়েছিল এবং দাগ দেওয়া হয়েছিল (পরিপূরক সারণী 1)। দাগযুক্ত কোষগুলি একটি MACSQuant বিশ্লেষক 10 ফ্লো সাইটোমিটার (Miltenyi Biotec®) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং Flowlogic সফ্টওয়্যার (Miltenyi Biotec®) ব্যবহার করে ডেটা প্রক্রিয়া করা হয়েছিল।

কোষ এবং টিস্যুর ইমিউনোফ্লোরেসেন্স

মিউরিন টিউমার ভরের ইমিউনোফ্লোরেসেন্স বিশ্লেষণ নিম্নরূপ সঞ্চালিত হয়েছিল। নমুনাগুলি দ্রুত বের করা হয়েছিল, 24 ঘন্টার জন্য বাফারযুক্ত 4% ফর্মালডিহাইডে স্থির করা হয়েছিল এবং প্যারাফিন-এম্বেড করা হয়েছিল। হিস্টোলজিক্যাল সেকশন, 5 μm পুরু, নমুনা থেকে কাটা হয়েছিল, অ্যান্টিজেন পুনরুদ্ধারের জন্য সোডিয়াম সাইট্রেট বাফারে (10 mM, pH 6.0; Bio-Optica) 10 মিনিটের জন্য ডিপ্যারাফিনাইজ করা হয়েছিল এবং সিদ্ধ করা হয়েছিল এবং প্রাথমিকভাবে 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি ইমিউনোস্টেইন করা হয়েছিল। অ্যান্টিবডি (anti-PD-L1, ab238697, Abcam; anti- 3-AR, ab94506, Abcam; anti-CD4, 14-9766-82, eBioscience; anti-CD8, 14-0808-82, eBioscience; DBH, ab209487, Abcam)। সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি অ্যালেক্সা ফ্লুর 488- কনজুগেটেড আইজিজি বা অ্যালেক্সা ফ্লুর 594-কঞ্জুগেটেড আইজিজি (1:350; জ্যাকসন ল্যাবরেটরি) সহ সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলির সাথে ইমিউন প্রতিক্রিয়া প্রকাশ করা হয়েছিল। 4,6-ডিয়ামিডিনো-2-ফেনিলিন্ডোল (ডিএপিআই) দিয়ে কাউন্টারস্টেইন করার পরে, সেলসেন্স ডাইমেনশন ইমেজিং সফ্টওয়্যার সংস্করণ 1.6 (অলিম্পাস) এর সাথে মিলিত একটি অলিম্পাস BX63 মাইক্রোস্কোপ দ্বারা প্রতিনিধিত্বমূলক চিত্রগুলি অর্জন করা হয়েছিল। ইমিউনোফ্লুরোসেন্স স্টেনিং ইমেজজে সফ্টওয়্যার (এনআইএইচ, ইউএসএ) এর মাধ্যমে মূল্যায়ন করা হয়েছিল কারণ আগ্রহের প্রোটিনের ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা ডিএপিআই মানগুলিতে স্বাভাবিক করা হয়েছিল।

সিস্টানচে টিউবুলোসা-অ্যান্টিটিউমারের উপকারিতা

এনবি রোগীদের মধ্যে কাপলান-মেয়ার এবং জিন পারস্পরিক সম্পর্ক বিশ্লেষণ

CD80, CTLA4, CD276, CD226, CD40LG, 4-1BBL-এর ইমিউন চেকপয়েন্ট জিনের সাথে ADRB3 জিনের সম্পর্ক এবং NB এবং ARDB3 এর স্তরের রোগীদের সামগ্রিক (OS) এবং ঘটনা-মুক্ত বেঁচে থাকার (EFS) সম্ভাবনার মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক এমআরএনএ এক্সপ্রেশনটি 44 কে অলিগোনিউক্লিওটাইড মাইক্রোয়ারে ব্যবহার করে উত্পন্ন 649 এনবি নমুনার জিন এক্সপ্রেশন প্রোফাইল ব্যবহার করে করা হয়েছিল। প্রোফাইল এবং ক্লিনিকাল ডেটা R2 থেকে পুনরুদ্ধার করা হয়েছে: জিনোমিক বিশ্লেষণ এবং ভিজ্যুয়ালাইজেশন প্ল্যাটফর্ম (http://r2.amc.nl), (Kocak, কাস্টম ag44kcwolf, n=649 ক্ষেত্রে)। বিতরণের শেষ চতুর্থাংশটি কাপলান-মেয়ার বিশ্লেষণে উচ্চ বনাম নিম্ন ADRB3 জিনের অভিব্যক্তির জন্য এক্সপ্রেশন কাট-অফ মান হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।

পরিসংখ্যান

পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ গ্রাফপ্যাড প্রিজম (গ্রাফপ্যাড, সান দিয়েগো, CA, USA) ব্যবহার করে একমুখী বা দ্বিমুখী বৈচিত্র্যের বিশ্লেষণ (ANOVA) দ্বারা সম্পাদিত হয়েছিল, তারপরে বনফেরোনি পোস্ট-হক পরীক্ষা বা আনপেয়ারড স্টুডেন্ট টি-টেস্ট। ভিভো পরীক্ষাগুলির জন্য, একই প্রাণীর মডেলের পূর্ববর্তী গবেষণা অনুসারে [১২], 80% শক্তির গ্যারান্টি দেওয়ার জন্য প্রতি গ্রুপে কমপক্ষে 6 টি ইঁদুরের প্রয়োজন ছিল। মানগুলি গড় ± SEM হিসাবে উপস্থাপিত হয়। P যখন তাৎপর্য বিবেচনা করা হয়েছিল<0.05 and described in each figure legend. Allocation concealment was performed using a randomization procedure (http:// www.randomizer.org/).

ফলাফল

3-এআর বিরোধিতা এনবি-বহনকারী A/J ইঁদুরের টিউমার কোষে PD-L1 অভিব্যক্তি হ্রাস করে

সাম্প্রতিক গবেষণায় দেখা গেছে যে NB-তে PD-1/PD-L1 সংকেত প্রতিরোধ ক্ষমতা সীমিত করার জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ প্রক্রিয়া উপস্থাপন করে এবং PD-L1 অভিব্যক্তি উচ্চ স্তরের টিউমার মার্কারগুলির সাথে সম্পর্কযুক্ত [15, 16]। মেলানোমা-বহনকারী ইঁদুরগুলিতে একটি ইমিউন-দক্ষ TME বের করতে 3-এআর অবরোধের ক্ষমতা দেখায় এইগুলি এবং আমাদের পূর্ববর্তী ডেটাগুলিকে বিবেচনায় নিয়ে [১৩], আমরা ভেবেছিলাম যে, এনবি টিউমারে, 3-এআর বিরোধিতা PD-L1 সিগন্যালিং জড়িত থাকার উপর নির্ভর করে ইমিউন প্রতিক্রিয়া সক্রিয়করণের দিকে পরিচালিত করতে পারে। এনবি-এর একটি মুরিন সিনজেনিক মডেলে 3-এআর প্রতিপক্ষ, SR59230A-এর প্রশাসন, একটি অ্যান্টি-PD-L1 অ্যান্টিবডি mAb (PD-L1) চিকিত্সার তুলনায় টিউমারের বৃদ্ধিকে অনেক বেশি পরিমাণে কমিয়েছে, কিন্তু কোনো সিনারজিস্টিক প্রভাব পরিলক্ষিত হয়নি যখন ইঁদুর উভয় ওষুধ দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল (চিত্র 1A, B)। SR59230A প্রশাসন দ্বারা আনা অ্যান্টি-টিউমারাল প্রভাব PD-L1 এক্সপ্রেশন মড্যুলেশনের উপর আংশিকভাবে নির্ভর করে কিনা তা তদন্ত করার জন্য, আমরা NB-বহনকারী ইঁদুরের TME-তে PD-L1 এক্সপ্রেশন লেভেল পরীক্ষা করেছি। মজার বিষয় হল, মুরিন টিউমার ভরের উপর ইমিউনোফ্লোরেসেন্স (চিত্র 1C) এবং ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ (চিত্র 1D) দেখায় যে গাড়ির অবস্থার তুলনায় 3-এআর প্রতিপক্ষের সাথে চিকিত্সা করা ইঁদুরের টিএমইতে PD-L1 এক্সপ্রেশন হ্রাস পেয়েছে। যেহেতু বিস্তৃত সাহিত্যের তথ্য দেখায় যে TME-তে, ক্যান্সার কোষ ছাড়াও, স্ট্রোমাল কোষ যেমন অ্যান্টিজেন-উপস্থাপক কোষ (APCs) MDSC, DCs এবং ম্যাক্রোফেজগুলি হল PD-L1 [17-20] এর প্রধান উত্স, আমরা আরও তদন্ত করা হয়েছে যেখানে TME-তে PD-L1 এক্সপ্রেশন স্তর {{41}AR অবরোধের পরে প্রভাবিত হয়েছিল৷ সাইটোফ্লুরোমেট্রিক অ্যাসে প্রকাশ করেছে যে 3-এআর বিরোধিতা টিউমার কোষে PD-L1 অভিব্যক্তি হ্রাস করেছে (চিত্র 1E) যখন DC এবং ম্যাক্রোফেজে (চিত্র 1F, G) এর প্রকাশের মাত্রা বৃদ্ধি করেছে। MDSC জনসংখ্যার কোন পরিবর্তন পরিলক্ষিত হয়নি (চিত্র 1H)। এই প্রথম ফলাফলগুলি দেখায় যে 3-এআর অবরোধ এনবি-বহনকারী ইঁদুরের একটি সিঞ্জেনিক মডেলে একটি উল্লেখযোগ্য অ্যান্টি-টিউমারাল ক্রিয়াকলাপ প্রয়োগ করেছে এবং PDL1 অ্যান্টিবডির সহসায় প্রশাসন একটি অ্যান্টি-টিউমারাল সিনারজিস্টিক প্রভাবকে প্ররোচিত করেনি। মজার ব্যাপার হল, 3-এআর ফার্মাকোলজিক্যাল অ্যান্টিগনিজম TME-তে PDL1 এক্সপ্রেশন লেভেলকে মডিউল করেছে, যেটি 3-AR ব্লকেডের দ্বারা আনা অ্যান্টি-টিউমারাল অ্যাকশনে PD-L1 সিগন্যালিং-এর জড়িত থাকার পরামর্শ দেয়।

চিত্র 1 টিউমার বৃদ্ধির উপর SR59230A এবং PD-L1 চিকিত্সার প্রভাব এবং NB টিউমার বহনকারী ইঁদুরগুলিতে PD-L1 অভিব্যক্তি

3-এআর বিরোধিতা এবং PD-L1-এর প্রশাসন NB-তে একটি ইমিউন-প্রতিক্রিয়াশীল TME উদ্দীপিত করে

3-এআর বিরোধিতা অনুসরণ করে NB টিউমার কোষে পরিলক্ষিত PD-L1 এক্সপ্রেশন টিএমইতে একটি ইমিউন পুনঃসক্রিয়তার দিকে পরিচালিত করে কিনা তা তদন্ত করার জন্য, আমরা প্রথমে PD-1+CD দ্বারা পারফরিনের সংখ্যা মূল্যায়ন করেছি। গাড়ির তুলনায় SR59230A-, PD-L1- বা SR59203A + PD-L1-চিকিত্সা করা ইঁদুরের টিউমার ভরের কোষগুলি (চিত্র 4A, B)। অধিকন্তু, একটি Ki67 স্টেনিং অ্যাস একটি প্রবণতা দেখায় যা ইঁদুরের এনবি টিউমারগুলিতে CD8+ টি কোষের বৃদ্ধির প্রবণতাকে নির্দেশ করে যা 3-এআর প্রতিপক্ষ বা PD-L1 অ্যান্টিবডি দিয়ে চিকিত্সা করা হয়, এমনকি যদি এটি উল্লেখযোগ্যভাবে পৌঁছাতে ব্যর্থ হয় পার্থক্য (চিত্র 4C)। অবশেষে, সাইটোকাইন পরিমাপে দেখা গেছে, পিডিএল1-চিকিত্সা করা ইঁদুরের টিউমার ভরে, সাইটোকাইনের একটি বর্ধিত মাত্রা যা টিএনএফ-, IFN- এবং IL-6-এর মতো অ্যান্টি-টিউমারাল অ্যাকশন প্রয়োগ করতে পরিচিত, এবং একটি সহযোগী ইমিউন-দমনকারী সাইটোকাইন IL-10 এর হ্রাস। আশ্চর্যজনকভাবে, 3-এআর প্রতিপক্ষের সাথে চিকিত্সা করা NB-বহনকারী ইঁদুরগুলিতে, আমরা টিএনএফ- এবং IL-6 এর বৃদ্ধি এবং IL-10 মাত্রার হ্রাস লক্ষ্য করেছি, ইমিউন- T কোষ বৈশিষ্ট্য দ্বারা প্রস্তাবিত প্রতিক্রিয়াশীল অবস্থা, কিন্তু IFN- (চিত্র 4D) এর একটি হ্রাস স্তর। পরীক্ষা করা অন্যান্য সাইটোকাইনে কোন উল্লেখযোগ্য পার্থক্য পাওয়া যায়নি (GMCSF, IL-2, IL-1, এবং IL-1)। এই তথ্যগুলি একসাথে দেখায় যে 3-এআর বিরোধিতা এনবি-বহনকারী ইঁদুরের টিএমইতে হোস্ট ইমিউন প্রতিক্রিয়াকে ট্রিগার করে, PD-L1 অ্যান্টিবডি প্রশাসনের পরে পর্যবেক্ষণ করা একই প্রভাবগুলি পুনরুদ্ধার করে। বিশেষ করে, সিডি8+ সাইটোটক্সিক ফাংশনগুলি SR59230A এবং PD-L1 উভয় দ্বারা শক্তিশালী হয়েছিল। যখন 3-এআর প্রতিপক্ষকে PD-L1 অ্যান্টিবডির সাথে সমন্বিতভাবে পরিচালনা করা হয়েছিল, তখন কোনো সিনারজিস্টিক প্রভাব পরিলক্ষিত হয়নি, যেটি নিশ্চিত করে যে 3-এআর অবরোধের দ্বারা আনা ইমিউন পুনরায় সক্রিয়করণ PD-L1 সংকেতের উপর অন্তত আংশিকভাবে নির্ভর করে। পথ সম্পৃক্ততা।

চিত্র 2 SR59230A এবং PD-L1 এনবিতে একটি ইমিউন-প্রতিক্রিয়াশীল TME উদ্দীপিত করে

চিত্র 3 টিএমই এবং টিডিএলএন-এ লিম্ফোসাইটগুলিতে ইমিউন চেকপয়েন্টের প্রকাশ 3-এআর বিরোধিতা এবং পিডি-এল1 এর প্রশাসন

চিত্র। 4 3-এআর অবরোধ CD8 ফাংশনকে ট্রিগার করে এবং TME-তে ইমিউন সাইটোকাইন নিঃসরণ নিয়ন্ত্রণ করে।

3-টিউমার-অনুপ্রবেশকারী লিম্ফোসাইটের উপর AR IFN- নিঃসরণকে সংশোধন করে এবং NB টিউমার কোষগুলিতে PD-L1 অভিব্যক্তিকে প্রভাবিত করে

টিউমার কোষে PD-L1 এর অভিব্যক্তি বিভিন্ন কারণের দ্বারা প্রকাশ করা যেতে পারে, তবে অন্যদের মধ্যে, TNF- এবং IFN- বিভিন্ন টিউমারে PD-L1 মাত্রা বৃদ্ধি করতে সক্ষম প্রধান সাইটোকাইনগুলির প্রতিনিধিত্ব করে [23]। আমাদের NB-এর টিউমার মডেলে 3-AR/PD-L1 ক্রস টকের অন্তর্নিহিত সংকেতকে আরও ব্যাখ্যা করার জন্য, আমরা প্রথমে TNF- এবং IFN- চিকিত্সার পরে N2A টিউমার কোষগুলিতে PD-L1-এর অভিব্যক্তিটি ভিট্রোতে পরীক্ষা করেছিলাম। ফলাফলগুলি দেখায় যে PD-L1 এক্সপ্রেশনটি 48 ঘন্টার জন্য IFN-এর সাথে চিকিত্সা করা NB কোষগুলিতে আপ-নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল কিন্তু TNF- এর সাথে নয়। অধিকন্তু, 3-এআর প্রতিপক্ষ SR59230A এর সাথে N2A টিউমার কোষের প্রাক-চিকিত্সা IFN- চিকিত্সা (চিত্র 5A) দ্বারা আনা বর্ধিত PDL1 অভিব্যক্তি বাতিল করতে সক্ষম হয়নি। বিবেচনা করে যে সাহিত্যের ডেটা টিআইএল-কে IFN-এর প্রধান সেলুলার উত্স হিসাবে স্বীকৃতি দিয়েছে- অভিযোজিত প্রতিরোধমূলক প্রতিক্রিয়ার সময় [24] এবং আমাদের ফলাফল প্রকাশ করেছে যে 3-N2A টিউমার কোষে AR মড্যুলেশন IFN- -নির্ভর পিডিকে প্রভাবিত করেনি -L1 এক্সপ্রেশন, আমরা ভেবেছিলাম যে টিআইএল-এ একটি 3-এআর মড্যুলেশন পরিবর্তিত IFN- ক্ষরণের জন্য দায়ী, যা টিউমার কোষগুলিতে PD-L1 অভিব্যক্তিকে প্রভাবিত করে। আমাদের অনুমান প্রমাণ করার জন্য, যানবাহন বা SR59230A দিয়ে চিকিত্সা করা NB- বহনকারী ইঁদুরের TDLN থেকে প্রাপ্ত লিম্ফোসাইটগুলি টিউমার কোষগুলির সাথে ভিট্রোতে বিচ্ছিন্ন এবং সহ-সংস্কৃতি করা হয়েছিল। ইমিউনোফ্লোরেসেন্স এবং ফ্লো সাইটোমেট্রি বিশ্লেষণ নিশ্চিত করেছে যে 3- এআর প্রতিপক্ষের সাথে চিকিত্সা করা NB-বহনকারী ইঁদুর থেকে সংগৃহীত লিম্ফোসাইটগুলি চিকিত্সা না করা লিম্ফোসাইটের তুলনায় N2A কোষে PD-L1 এক্সপ্রেশন ট্রিগার করার ক্ষমতা হ্রাস করেছে (চিত্র 5B, D)। অধিকন্তু, সহ-সংস্কৃতি মিডিয়াতে IFN- স্তরের পরিমাপ নিশ্চিত করেছে যে SR50230A-চিকিত্সা করা ইঁদুর থেকে সংগৃহীত লিম্ফোসাইট, NB টিউমার কোষের সাথে সহ-সংস্কৃতির সময় IFN- নিঃসরণ করার ক্ষমতা আংশিকভাবে হারিয়েছে (চিত্র 5C)। এটি ইতিমধ্যেই দেখানো হয়েছে যে 3-এআর বিভিন্ন টিস্যুতে Gs প্রোটিনের সাথে মিলিত হতে পারে এবং এর সক্রিয়করণের ফলে CAMP/PKA সিগন্যালিং পাথওয়ে সক্রিয় হয় [25]। একই সময়ে, গবেষণাগুলি টি কোষে IFN-এর একটি ইতিবাচক প্রতিলিপি নিয়ন্ত্রক হিসাবে চক্রীয় AMP প্রতিক্রিয়াশীল উপাদান বাঁধাই (CREB) এর গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা প্রমাণ করেছে [25-27]। এই পর্যবেক্ষণগুলি থেকে শুরু করে আমরা পরীক্ষা করেছিলাম যে CAMP/PKA/CREB সিগন্যালিং পথ টিআইএল-এ 3-এআর নির্ভর IFN- নিঃসরণে জড়িত ছিল কিনা। ফলাফলগুলি দেখায় যে 3-CD-এর AR বিরোধীতা8+ TILs PKA /PKA সাবইউনিট এবং CREB-এর ফসফোরিলেশন হ্রাস করেছে, যার ফলে CD8+ TIL-তে IFN- অভিব্যক্তি হ্রাস পেয়েছে (পরিপূরক চিত্র 1A , খ)। এই ফলাফলগুলি নিশ্চিত করেছে যে 3-AR CAMP/PKA/CREB সিগন্যালিং পাথওয়েকে ট্রিগার করে NB-এর TILs-এ IFN- ট্রান্সক্রিপশন বজায় রাখতে সক্ষম। অন্যদিকে, গাড়ির তুলনায় SR59230A দিয়ে চিকিত্সা করা ইঁদুরের Treg-এ ইমিউনোসপ্রেসিভ সাইটোকাইন IL-10 হ্রাস পেয়েছে (পরিপূরক চিত্র 1C), যা {{71}AR বিরোধী চিকিত্সার পরে NB TME-এর ইমিউন প্রতিক্রিয়া নিশ্চিত করে৷ NB-বহনকারী ইঁদুরের। 3-AR সাবটাইপের উপর SR59230A বিরোধীতার নির্বাচনী প্রভাব নিশ্চিত করার জন্য, আমরা 1-, 2- এবং 3-এআর-এর জন্য siRNAs সহ নীরব লিম্ফোসাইট সহ একটি সহ-সংস্কৃতি পরীক্ষা করেছি উপপ্রকার ফলাফলগুলি দেখায় যে লিম্ফোসাইটগুলি 3-AR-এর জন্য নীরব, -AR সাবটাইপগুলির মধ্যে, নিয়ন্ত্রণ অবস্থার তুলনায় N2A টিউমার কোষগুলিতে PD-L1 প্রকাশ করার ক্ষমতা আংশিকভাবে হারিয়েছে (চিত্র 5E এবং পরিপূরক চিত্র 1D)৷ অধিকন্তু, এনবি-বহনকারী ইঁদুরের মুরিন লিম্ফোসাইটগুলিতে 3-এআর-এর প্রোটিন অভিব্যক্তি টিডিএলএন (পরিপূরক চিত্র 2A) থেকে প্রাপ্ত লিম্ফোসাইটগুলির পশ্চিমা ব্লট বিশ্লেষণ এবং CD4+ এবং CD{{{{{ 90}} টি কোষ টিউমার ভর বিভাগে 3-এর জন্য দাগযুক্ত (পরিপূরক চিত্র 2B)। আমরা পূর্বে দেখিয়েছি যে SR59230A দ্বারা N2A টিউমার কোষে 3- AR-এর নির্দিষ্ট বৈরিতা, টিউমার কোষের স্টেমনেস থেকে পার্থক্য বৈশিষ্ট্যে স্যুইচ করে, NB বৃদ্ধি এবং টিউমারের অগ্রগতিকে বাধা দেয় [12]। এখানে, আমাদের ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে 3-AR বিরোধী প্রশাসনের অ্যান্টি-টিউমারাল প্রভাব টিআইএলগুলিতে 3-এআর সিগন্যালিং মড্যুলেশনের উপরও নির্ভর করে, যার ফলে টিউমারগুলির বিরুদ্ধে প্রতিরোধ ক্ষমতা পুনরুজ্জীবিত হয়। অতএব, ভিভোতে আমাদের থিসিসকে সমর্থন করার জন্য, আমরা টিডিএলএন-এ টি কোষগুলিকে নিয়ন্ত্রণ করতে এবং টিউমার ভরে তাদের অনুপ্রবেশ কমাতে FTY720 পরিচালনা করেছি। FTY720 হল স্ফিংগোসিন 1-ফসফেট (S1P) এর একটি এনালগ, এবং এর প্রশাসন S1P রিসেপ্টরের অভ্যন্তরীণকরণ এবং অবক্ষয়কে প্ররোচিত করে, এইভাবে লিম্ফ নোডগুলি থেকে লিম্ফোসাইটগুলিকে বের হতে বাধা দেয় [২৮]। অনুমান করা হয়েছে, FTY720 প্রাক-চিকিৎসা {{109}AR বিরোধী প্রশাসন (চিত্র 5F–H) দ্বারা আনা অ্যান্টি-টিউমারাল প্রভাবকে বাদ দিয়েছে। TDLN-এ T কোষগুলিকে নিয়ন্ত্রণে রাখতে FTY720-এর কার্যকারিতা যাচাই করার জন্য, আমরা চিকিৎসার আট দিন (T8) পরে TDLN-এ T সেল নম্বর পরিমাপ করেছি। ফলাফলগুলি দেখায় যে CD4+ এবং CD8+ কোষগুলি FTY720 এর সাথে পূর্ব-চিকিত্সা করা ইঁদুরের TDLNগুলিতে অপরিশোধিত ইঁদুরের (যানবাহন) তুলনায় (পরিপূরক চিত্র 2C) বৃদ্ধি পেয়েছে৷ আমাদের এবং অন্যান্য পূর্ববর্তী ফলাফল অনুসারে যে S1P সংকেত এনবি টিউমার কোষগুলির বেঁচে থাকার জন্য অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ [12, 29], শুধুমাত্র FTY720 এর সাথে চিকিত্সাও টিউমার বৃদ্ধিকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করতে সক্ষম হয়েছিল (চিত্র 5F-H)। যানবাহন থেকে বিচ্ছিন্ন এনবি টিউমার ভরের উপর আরএনএ সিকোয়েন্সিং বিশ্লেষণ এবং SR59230A-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলি 5607 টি জিন সনাক্ত করেছে যার মধ্যে 267টি আলাদাভাবে প্রকাশ করা জিন (DEGs), 127টি আপ-নিয়ন্ত্রিত এবং 140টি SR59230A-চিকিত্সা করা টিউমার (AF6) তে নিয়ন্ত্রণ করা হয়েছে। বিশেষ করে, GO: BP ডাটাবেস (চিত্র 6B) অনুসারে পরিসংখ্যানগতভাবে ভিন্নভাবে প্রকাশ করা বেশ কয়েকটি জিন ইমিউন-সম্পর্কিত পথের অন্তর্গত। অধিকন্তু, গাড়ির অবস্থার তুলনায় SR59230A-চিকিত্সা করা টিউমারে PD-L1 mRNA (CD274 জিন) এর নিম্ননিয়ন্ত্রণ এবং ইমিউন-সম্পর্কিত প্রক্রিয়ায় জড়িত বিভিন্ন অন্যান্য জিনের আপগ্র্যুলেশন (চিত্র 6C) 3-এআর এবং এর মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ককে সমর্থন করে। ইমিউন-চেকপয়েন্ট PD-L1 প্রোটিন স্তরে পরিলক্ষিত হয়। অবশেষে, একটি পাবলিক ডেটাসেটে ডিফারেনশিয়াল জিন এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ (GEO আর্কাইভ থেকে GSE14880) NBs দ্বারা প্রভাবিত 34 জন রোগীর সমন্বয়ে, নিশ্চিত করেছে যে ADRB3 এর কম অভিব্যক্তি সহ NB টিউমার ভরগুলি ইমিউন প্রতিক্রিয়া, টি কোষ সক্রিয়করণ, এবং ইমিউন প্রভাবকের একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ দেখিয়েছে। ADRB3 (চিত্র 6D) এর উচ্চ মাত্রা সহ টিউমার ভরের তুলনায় পথ। উল্লেখ্য, বিভিন্ন ক্যান্সারে, ক্যাটেকোলামাইনগুলি ক্যান্সার-সম্পর্কিত নিউরনের মাধ্যমে নির্গত হয় বা কেবল রক্ত ​​সঞ্চালনের মাধ্যমে টিউমারে পৌঁছায়, এনবি-তে ক্যাটেকোলামাইনের অত্যধিক মাত্রা এবং তাদের বিপাক (HVA, VMA, ডোপামিন), এই ক্ষতিকারকতার একটি অনন্য বৈশিষ্ট্য, উদ্ভূত হয়। একটি ভিন্ন উৎস থেকে। প্রকৃতপক্ষে, এনবি কোষের অদ্ভুত উৎপত্তির কারণে (নিউরোনাল ক্রেস্টের ত্রুটিপূর্ণ সহানুভূতিশীল নিউরোনাল ডিফারেন্সিয়েশন কোষ থেকে), এই টিউমারগুলি সাধারণত নিজেরাই ক্যাটেকোলামাইন নিঃসরণ করতে সক্ষম হয়। প্রকৃতপক্ষে, আমাদের এনবি মুরিন মডেলে, টিউমার ভরের উপর ইমিউনোফ্লোরোসেন্স দেখায় যে এনবি টিউমার কোষগুলি ডোপামিন-হাইড্রোক্সিলেস (ডিবিএইচ) (পরিপূরক চিত্র 3A) এর জন্য ইতিবাচক ছিল, যা নোরপাইনফ্রাইন সংশ্লেষণের জন্য দায়ী একটি এনজাইম, নির্বিশেষে 3- টিউমার বা এর বৈরিতার উপর AR অভিব্যক্তি। একসাথে নেওয়া, এই তথ্যগুলি হোস্ট ইমিউন সিস্টেম এবং এনবি টিউমারগুলিতে টিউমার মাইক্রোএনভায়রনমেন্টের মধ্যে মিথস্ক্রিয়ায় জড়িত বিভিন্ন জৈবিক প্রক্রিয়াগুলিকে নিয়ন্ত্রণে -অ্যাড্রেনারজিক সংকেত দ্বারা পরিচালিত গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকাকে তুলে ধরে। আমাদের মুরিন সিঞ্জেনিক মডেলে 3-এআর প্রতিপক্ষ প্রশাসনের পরে টিউমার বিরোধী প্রভাবগুলি লক্ষ্য করা যায়, অন্তত আংশিকভাবে, টিউমার ভরে অনুপ্রবেশকারী লিম্ফোসাইটগুলিতে প্রকাশিত 3-এআর-এর মডুলেশনের উপর নির্ভর করে। বিশেষ করে, আমরা দেখিয়েছি যে টিআইএল-এ 3-এআর-এর নির্বাচনী অবরোধ IFN- নিঃসরণ কমিয়েছে, যার ফলে এনবি টিউমার কোষে PD-L1 অভিব্যক্তি হ্রাস পেয়েছে যা একটি ইমিউন-প্রতিক্রিয়াশীল TME প্রচার করে।

চিত্র। 5 3-টিআইএল-এ AR IFN- -NB টিউমার কোষে নির্ভরশীল PD-L1 অভিব্যক্তি বজায় রাখে। ক

ADRB3 জিনের অভিব্যক্তি NB রোগীদের দুর্বল পূর্বাভাসের সাথে সম্পর্কযুক্ত

কিছু গবেষণায় পরামর্শ দেওয়া হয়েছে যে {{0}}এআর এমআরএনএ এবং/অথবা প্রোটিন অত্যধিক এক্সপ্রেসড এবং কিছু ক্ষেত্রে বিভিন্ন মানব ক্যান্সারে নিওপ্লাস্টিক বিস্তার এবং রূপান্তরের সাথে সম্পর্কযুক্ত [10, 30-32]। তদনুসারে, NB-এর একটি সিনজেনিক মুরিন মডেলে প্রাপ্ত আমাদের প্রাক-ক্লিনিকাল ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে 3-এআর সিগন্যালিং টিউমার বৃদ্ধির পক্ষে বিভিন্ন প্রো-টিউমারাল প্রক্রিয়াগুলিকে টিকিয়ে রাখতে পারে। তাই, ADRB3 জিনের অভিব্যক্তি এনবি রোগীদের বেঁচে থাকার সাথে সম্পর্কযুক্ত কিনা তা পরীক্ষা করার জন্য, আমরা কোকাক ডাটাবেস ব্যবহার করে R2: জিনোমিক্স অ্যানালাইসিস অ্যান্ড ভিজ্যুয়ালাইজেশন প্ল্যাটফর্ম (http://r2.amc.nl) এর মাধ্যমে একটি কাপলান-মেইয়ার বিশ্লেষণ করেছি। 649 NB রোগীর ক্লিনিকাল ডেটা সম্পর্কে সম্পূর্ণ তথ্য। ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে ADRB3 জিনের অভিব্যক্তি এনবি রোগীদের খারাপ ফলাফলের সাথে যুক্ত ছিল। ADRB3 জিনের উচ্চ অভিব্যক্তি প্রকৃতপক্ষে হ্রাসকৃত ঘটনা-মুক্ত (p=3.2e−05) (চিত্র 7A) এবং সামগ্রিকভাবে বেঁচে থাকার সাথে উল্লেখযোগ্যভাবে যুক্ত ছিল (p=8.4e−0.5) ( Fig. 7B) NB রোগীদের। তদ্ব্যতীত, কিছু সমগোত্রে একটি জিন পারস্পরিক সম্পর্ক বিশ্লেষণ ADRB3 এবং CD80, CTLA4, এবং CD276-এর মতো প্রতিরোধক ইমিউন চেকপয়েন্টগুলির জন্য জিনের মধ্যে একটি ইতিবাচক সম্পর্ক এবং ইমিউন চেকপয়েন্টগুলির জন্য জিনের সাথে একটি নেতিবাচক সম্পর্ক যেমন CD26 সক্রিয় করে। CD40 ligand (CD40LG) এবং 4-1BB ligand (4-1BBL) (চিত্র 7C)। সামগ্রিকভাবে, প্রাপ্ত ডেটা এনবি রোগীদের ফলাফলের সাথে ADRB3 জিনের অভিব্যক্তির নেতিবাচক সম্পর্ককে হাইলাইট করে এবং একাধিক ইমিউন চেকপয়েন্টকে প্রভাবিত করে টিউমার-বিরোধী প্রতিরোধ ক্ষমতা কমিয়ে দিতে সক্ষম একটি আণবিক খেলোয়াড় হিসাবে 3-AR-এর ভূমিকাকে সমর্থন করে এবং শক্তিশালী করে। সংকেত পথ

আলোচনা

যেহেতু এটির অদ্ভুত নিউরোজেনিক উৎপত্তি, উচ্চ মাত্রার ক্যাটেকোলামাইন বিপাক এনবি টিউমার অবস্থার বৈশিষ্ট্য [7, 33]। পূর্ববর্তী কাজে, আমরা অনুমান করেছি যে টিএমই-তে ক্যাটেকোলামাইন রিলিজ -এআর সক্রিয়করণের মাধ্যমে ক্যান্সার কোষকে লক্ষ্যবস্তু করতে পারে, যা এনবি ক্যান্সারে বৃদ্ধি এবং ম্যালিগন্যান্সির একটি ফিডফরোয়ার্ড লুপকে ট্রিগার করে। প্রকৃতপক্ষে, পরীক্ষামূলক ডেটা দেখায় যে 3-এআর বিভিন্ন এনবি টিউমার সেল লাইন এবং রোগীদের বায়োপসিতে প্রকাশ করা হয় এবং এর মডুলেশন এনবি [১২] এর একটি সিঞ্জেনিক মুরিন মডেলে টিউমার বৃদ্ধিকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত করে। টিউমার কোষে -ARs এক্সপ্রেশন ছাড়াও, এটি ব্যাপকভাবে জানা যায় যে -ARs টিএমই-এর বেশিরভাগ কোষের পৃষ্ঠে অবস্থিত, যার মধ্যে রয়েছে ইমিউন কোষ, এবং এটি, ইমিউন কোষে -ARs-এর সাথে ক্যাটেকোলামাইন লিগেশন সহজাত এবং অভিযোজিত প্রতিরোধ ক্ষমতা নিয়ন্ত্রণ করে। [৩৪]। উল্লেখ্য, শারীরবৃত্তীয় অবস্থার অধীনে, -অ্যাড্রেনার্জিক সিগন্যালিং দ্বারা ইমিউন সিস্টেমের মডুলেশন স্বাভাবিক ইমিউন প্রতিক্রিয়াকে উৎসাহিত করে, পরিবর্তিত প্রক্রিয়ায়, SNS/catecholamines/ -ARs-দীর্ঘায়িত উদ্দীপনা লিম্ফোসাইট সহ বিভিন্ন ইমিউন কোষের উপর ক্ষতিকর প্রভাব ফেলতে পারে [35, 36] ]। এই পরিবর্তিত পরিস্থিতিতে, অ্যাড্রেনার্জিক সিগন্যালিং এর একটি টেকসই উদ্দীপনা প্যাথলজিকাল প্রক্রিয়াগুলিকে উৎসাহিত করে, এবং অন্যদের মধ্যে, ক্যান্সারের অগ্রগতি [37]। উপরে উল্লিখিত পর্যবেক্ষণগুলি থেকে শুরু করে, আমাদের অধ্যয়নের উদ্দেশ্য হল NB টিউমারে 3-এআর বিরোধিতা দ্বারা আনা অ্যান্টি-টিউমারাল প্রভাবগুলি আংশিকভাবে অ্যান্টি-টিউমার প্রতিরোধ ক্ষমতা পুনরুজ্জীবিত করার উপর নির্ভর করতে পারে এবং এটি জড়িত হতে পারে কিনা ইমিউন চেকপয়েন্ট সিগন্যালিং পাথওয়ের মড্যুলেশন। প্রিক্লিনিকাল স্টাডিজ পরামর্শ দেয় যে মেটাস্ট্যাটিক এনবি-তে PD-L1 এক্সপ্রেশন ইমিউন নজরদারি সীমিত করার জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ প্রক্রিয়া উপস্থাপন করে [15], এবং এটি অ্যান্টি-PD-L1/ PD-1 এবং অ্যান্টি-CD4 অ্যান্টিবডিগুলির সাথে মিলিত ইমিউনোথেরাপি সিনজেনিক ছড়িয়ে পড়া এনবি নিরাময় করে। 38]। সম্প্রতি, PD-L1 এক্সপ্রেশনটি বেশ কয়েকটি পেডিয়াট্রিক টিউমারে মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং সর্বোপরি, PD-L1 স্টেনিং NB [16, 39] রোগীদের মধ্যে নিকৃষ্ট বেঁচে থাকার সাথে যুক্ত ছিল। অধিকন্তু, এটি দেখানো হয়েছিল যে PD-L1-পজিটিভ টিউমারগুলি PD-L1-নেতিবাচক টিউমারগুলির চেয়ে বেশি ঘন ঘন অ্যাড্রিনাল গ্রন্থিতে অবস্থিত ছিল এবং ক্যাটেকোলামাইন বিপাক (NSE, VMA, এবং HVA) হওয়ার প্রবণতা ছিল। PD-L1-পজিটিভ গ্রুপে PD-L1-নেতিবাচক গ্রুপের তুলনায় বেশি [16]।

cistanche tubulosa - ইমিউন সিস্টেম উন্নত

এই প্রমাণগুলি প্রাথমিক এবং মেটাস্ট্যাটিক এনবিতে টিউমার প্রতিরোধ ক্ষমতা নিয়ন্ত্রণ করতে PD-1/PD-L1 সংকেত অক্ষের ক্ষমতার পরামর্শ দিয়েছে, তবে, তারা PD-1/PD-এর অন্তর্নিহিত সুনির্দিষ্ট প্রক্রিয়াগুলি পরীক্ষা করেনি L1 সংকেত নিয়ন্ত্রণ। 3-এআর মড্যুলেশন NB-তে PD-L1 অভিব্যক্তিকে প্রভাবিত করতে পারে কিনা এবং TME-তে এর ফলে ইমিউন রিঅ্যাকটিভিটি প্রভাবিত করতে পারে কিনা তা তদন্ত করার জন্য, আমরা সিনজেনিক N2A NB কোষের সাথে ইনোকুলেশন করা A/J ইঁদুরকে 3- দিয়ে চিকিত্সা করেছি। AR বিরোধী SR59230A, একটি PD-L1 মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি ( PD-L1), বা তাদের সংমিশ্রণ। প্রথমত, আমরা লক্ষ্য করেছি যে 3-এআর বিরোধিতা NB টিউমার বৃদ্ধি কমাতে সক্ষম হয়েছিল এবং NB-বহনকারী ইঁদুরের TME-এ PD-L1 এক্সপ্রেশন কমাতে সক্ষম হয়েছিল। ফ্লো সাইটোমেট্রি প্রকাশ করেছে যে SR59230A-চিকিত্সা করা ইঁদুরের টিউমার ভরে পরিলক্ষিত PD-L1 এর হ্রাসকৃত পরিমাণ বেশিরভাগ টিউমার কোষের হ্রাস প্রকাশকে প্রতিফলিত করে। সম্পূর্ণ বিপরীতে, ডিসি এবং ম্যাক্রোফেজে পিডি-এল 1 এক্সপ্রেশনটি আপ-নিয়ন্ত্রিত করা হয়েছিল। টিউমার কোষ এবং এপিসি উভয়ের উপর অবস্থিত PD-L1 এর জন্য নির্ধারিত বেশ কয়েকটি বৈজ্ঞানিক প্রমাণ টি কোষ সক্রিয়করণকে স্যাঁতসেঁতে করার ক্ষমতা, আংশিকভাবে টিউমারের বিরুদ্ধে একটি কার্যকর ইমিউন প্রতিক্রিয়াকে বাধা দেয় [40]। যাইহোক, সাম্প্রতিক গবেষণায় দেখা গেছে যে অ্যান্টিজেন গ্রহণ এবং টি কোষে টিউমার অ্যান্টিজেন ক্রস-প্রেজেন্টেশনের সময়, অভিযোজিত অনাক্রম্যতার একটি গুরুত্বপূর্ণ পদক্ষেপ, DC এবং ম্যাক্রোফেজগুলি PD-L1 আপগ্রেগুলেট করে এইভাবে T কোষগুলির একটি অতিরিক্ত সক্রিয়তা সীমিত করে এবং সাইটোটক্সিক কার্যকলাপ থেকে তাদের রক্ষা করে। টি কোষ [41, 42]। অতএব, আমরা অনুমান করেছি যে টিউমার কোষগুলিতে PD-L1 এর হ্রাস হওয়া অভিব্যক্তি এবং SR59230A-চিকিত্সা করা টিউমার ভরের APCগুলিতে এর সহযোগে বৃদ্ধি সম্ভবত TME-তে একটি ইমিউন সিস্টেম পুনরুজ্জীবিত প্রতিফলিত করে। ফলাফলগুলি নিশ্চিত করেছে যে টিউমার-অনুপ্রবেশকারী ইমিউন-প্রতিক্রিয়াশীল কোষের সংখ্যা বৃদ্ধি পেয়েছে (NK, DCs, এবং CD8+), এবং টিউমার-অনুপ্রবেশকারী ইমিউন-দমনকারী কোষের (Treg এবং MDSC) হ্রাস। টিআইএল-এ ইমিউন চেকপয়েন্ট PD-1-এর এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণে TDLN-এ PD-1+CD4+ এবং PD- 1+CD8+ টি কোষের উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে SR59230A, PD-L1 এর 8 দিন (T8) পরে টিউমারে টিউমার বিকাশের প্রাথমিক পর্যায়ে (T2), এবং PD-1+CD8+ বা নিয়ন্ত্রণের তুলনায় তাদের সংমিশ্রণ চিকিত্সা। SR59230A, PD-L1 চিকিত্সার টিউমার এবং তাদের সংমিশ্রণে TIM3 বা LAG3 এর জন্য দাগযুক্ত CD4+ টি কোষের সংখ্যার মধ্যেও একটি ক্রমবর্ধমান প্রবণতা লক্ষ্য করা গেছে, কিন্তু তারা পরিসংখ্যানগত তাত্পর্য পৌঁছতে ব্যর্থ হয়েছে। TIM3 বা LAG3-এর জন্য দাগযুক্ত CD8+ টি কোষগুলির জন্য, আমরা পরিবর্তে একটি বড় পরিবর্তনশীলতা লক্ষ্য করেছি৷ যদিও কিছু সাহিত্যের তথ্য পরামর্শ দিয়েছে যে PD-1, LAG-3, এবং TIM-3 প্রকাশকারী T কোষগুলি ক্লান্ত এবং অকার্যকর [43–45], অন্যরা প্রমাণ করেছে যে এই প্রতিরোধ ক্ষমতা চেকপয়েন্টগুলি, বিশেষত PD -1, অ্যাক্টিভেশন এবং ইফেক্টর টি কোষের পার্থক্য [46-48] এর পরেও আপ-নিয়ন্ত্রিত হয়, এবং সেইজন্য এক্সপ্রেশন প্রতি সে একটি ক্লান্তিকর অবস্থা প্রতিফলিত করে না, বরং এই চিহ্নিতকারীগুলি বিভিন্ন টিউমারের অনুপ্রবেশকারী অটোলোগাস টিউমার-প্রতিক্রিয়াশীল ভাণ্ডার সনাক্ত করে [46– 49]। চুক্তিতে, আমাদের টিউমার মডেলের গভীর তদন্ত নিশ্চিত করেছে যে 3-এআর বিরোধিতা, অ্যান্টি-পিডি-এল1 এমএবি-এর সাথে চিকিত্সা হিসাবে, সিডি-এর সাইটোটক্সিক ফাংশনগুলিকে ট্রিগার করেছে8+, যেমন PD-এর বর্ধিত সংখ্যা দ্বারা দেখানো হয়েছে 1+সিডি8+ কোষগুলি পারফরিন বা গ্র্যানজাইম বি-এর জন্য দাগযুক্ত, এটি প্রমাণ করে যে টিউমার ভরে পাওয়া PD1+ টিআইএলগুলি কার্যকরীভাবে সক্রিয়। টিউমারে সিডি8+ সাইটোটক্সিক টি কোষের উচ্চ অনুপ্রবেশ মেলানোমা, মাথা এবং ঘাড়, স্তন, কোলোরেক্টাল, ডিম্বাশয়, প্রোস্ট্যাটিক এবং অন্যান্য ক্যান্সার সহ বেশ কয়েকটি ক্ষতিকারক রোগীদের মধ্যে ইতিবাচক পূর্বাভাসের সাথে সম্পর্কযুক্ত হতে দেখা গেছে [50]। এনবি-তে, একটি সাম্প্রতিক গবেষণায় দেখা গেছে যে টিউমার-অনুপ্রবেশকারী টি কোষগুলিতে সমৃদ্ধ টিউমারগুলির একটি ভাল ক্লিনিকাল ফলাফল ছিল, টিউমার স্টেজিংয়ের জন্য গৃহীত অন্যান্য বর্তমান সূচকগুলির থেকে স্বাধীন [51]। অধিকন্তু, সাম্প্রতিক অনুসন্ধানগুলি প্রমাণ করেছে যে টিউমার ভরে ডিসি এবং এনকে কোষের উপস্থিতি টি কোষের অনুপ্রবেশ এবং এনবি রোগীদের ইতিবাচক ক্লিনিকাল ফলাফল উভয়ের সাথে ইতিবাচকভাবে সম্পর্কযুক্ত [52]। এই সমস্ত ক্লিনিকাল প্রমাণগুলি আমাদের প্রাক-ক্লিনিকাল ফলাফলের সাথে একমত, যেখানে এনকে, ডিসি, এবং সিডি8+ টি কোষ সমৃদ্ধ একটি টিএমই, যা 3- এআর বিরোধিতা বা পিডি-এল1 প্রশাসনের পরে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল, কার্যকরীভাবে সক্ষম ছিল এনবি টিউমার বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রণ। টিউমারের বিরুদ্ধে হোস্ট ইমিউন সিস্টেমের চ্যালেঞ্জের একটি মৌলিক দিক হল টিএমই-তে বিভিন্ন সাইটোকাইন নিঃসরণ, যা টিউমার-বিরোধী কার্যকলাপকে টিকিয়ে রাখতে বা বিবর্ণ করতে পারে। টিউমারে সাইটোকাইনগুলির পরিমাপ নিশ্চিত করা হয়েছে, SR59230A- এবং PD-L1-চিকিত্সা করা ইঁদুরে, একটি অবস্থা একটি ইমিউন-প্রতিক্রিয়াশীল TME-এর দিকে স্থানান্তরিত হয়েছে৷ যাইহোক, অ্যান্টি-টিউমারাল সাইটোকাইনগুলির মধ্যে, TNF- এবং IL{101}} মাত্রা উভয়ই বেড়েছে, IFN- স্তর {{103}AR বিরোধী-চিকিত্সা করা ইঁদুরের টিউমার ভরে কমে গেছে৷ এই পর্যবেক্ষণ থেকে শুরু করে, আমরা অনুমান করেছিলাম যে টিউমার-অনুপ্রবেশকারী T কোষে, বিশেষ করে CD{107}} এবং CD8+-এর উপর 3-AR সংকেতের মড্যুলেশন, একটি পরিবর্তিত IFN-এর জন্য দায়ী হতে পারে। নিঃসরণ, যা টিউমার কোষে PD-L1 অভিব্যক্তিকে প্রভাবিত করে। ফলাফল আমাদের অনুমান নিশ্চিত করেছে। টিআইএল-এর উপর নির্বাচনী 3-এআর বিরোধিতা, প্রকৃতপক্ষে, এই কোষগুলি IFN--এর পরিবর্তিত নিঃসরণের কারণে NB টিউমার কোষগুলিতে PD-L1 অভিব্যক্তি প্ররোচিত করতে অদক্ষ, এবং একটি অভিযোজিত ইমিউন প্রতিরোধের প্রতিষ্ঠাকে প্রকৃতপক্ষে প্রতিরোধ করে। TME-তে, IFN- টিউমার কোষে আঘাত করার জন্য গ্রানজাইম বি এবং পারফরিনের সাথে একত্রে সাইটোটক্সিক সাইটোকাইন হিসাবে কাজ করে প্রো-টিউমারজেনিক এবং অ্যান্টিটিউমার ইমিউন প্রতিক্রিয়া উভয়ই অর্কেস্ট্রেট করে, কিন্তু প্রতিরোধমূলক ইমিউন চেকপয়েন্টগুলির সংশ্লেষণকেও ট্রিগার করে এইভাবে ইমিউন-সাপ্রেসিভ প্রক্রিয়াকে উদ্দীপিত করে [5]। বিপরীত প্রভাব সৃষ্টিতে IFN-এর এই বিমোডাল ভূমিকা জটিল প্রক্রিয়াগুলির উপর নির্ভরশীল যা এখনও সম্পূর্ণরূপে বোঝা যায় নি, তবে, IFN- গোপনের পরিমাণ এই সাইটোকাইন দ্বারা আনা ক্রিয়াগুলিকে সংজ্ঞায়িত করার ক্ষেত্রে সিদ্ধান্তমূলক বলে মনে হচ্ছে [54]। তদনুসারে, আমরা অনুমান করি যে আমাদের মডেলে IFN-এর হ্রাসকৃত পরিমাণ টিআইএল-এ 3- AR বিরোধিতা দ্বারা আনা হয়েছে নিয়ন্ত্রণের অবস্থার তুলনায় প্রতিরোধ ক্ষমতার প্রতিক্রিয়া, যেখানে IFN-এর দীর্ঘস্থায়ী এক্সপোজার আরও ইমিউনোসপ্রেসিভ মেকানিজমকে জোর করে। -AR সাবটাইপগুলির মধ্যে, 2-এআর বিভিন্ন ধরনের ইমিউন কোষের পৃষ্ঠে সবচেয়ে বেশি প্রকাশ করা হয়েছে বলে মনে হয়। যাইহোক, এটি লক্ষ করা উচিত যে 3-AR, -ARs-এর সর্বশেষ চিহ্নিত সদস্য, সবচেয়ে কম অধ্যয়ন করা হয়েছে। তাই, নিশ্চিত করার জন্য যে SR59230A প্রশাসন তার প্রভাবগুলি এনেছে যা মূলত 3-AR সাবটাইপকে ব্লক করে, আমরা প্রথমে TDLN-এর লিম্ফোসাইট এবং টিউমার-অনুপ্রবেশকারী T কোষগুলিতে 3-AR প্রোটিনের অভিব্যক্তি তদন্ত ও নিশ্চিত করেছি৷ আমরা টিউমার-অনুপ্রবেশকারী CD4+ এবং CD8+-এ 3-এআর প্রোটিনের অভিব্যক্তি প্রদর্শন করেছি এবং তারপরে নির্বাচনী 1-, 2- এবং {{এর মাধ্যমে 140}}এআর নীরব, আমরা এনবি টিউমার কোষে IFN- -নির্ভর PD-L1 এক্সপ্রেশন নিয়ন্ত্রণে লিম্ফোসাইটের উপর অবস্থিত, 3-AR সাবটাইপের বিশিষ্ট ভূমিকাকে সমর্থন করি৷ উল্লেখ্য, বিভিন্ন টিস্যু এবং কোষের মডেলের বিস্তৃত তথ্যে দেখা গেছে যে যখন 1- এবং 2-এআর উভয়ই অন্তঃসত্ত্বা ক্যাটেকোলামাইনের দীর্ঘায়িত এক্সপোজারের পরে হোমোলোগাস ডিসেনসিটাইজেশনের প্রবণতা বেশি, {{147} }এআর সাবটাইপ দেখানো হয়নি, এবং তা সত্ত্বেও, যখন কিছু কক্ষে, 3-এআর ডিসেনসিটাইজেশন ঘটেছে, এটি 1- এবং 2-এআরগুলির তুলনায় কম উচ্চারিত হয়েছিল [ 55]। আমরা তখন অনুমান করি যে এনবি টিউমারে, ক্যাটেকোলামাইনের দীর্ঘস্থায়ী এক্সপোজার দ্বারা চিহ্নিত একটি অবস্থা, টিআইএল-এর 2-এআর সাবটাইপ, যা শারীরবৃত্তীয়ভাবে সবচেয়ে বেশি প্রকাশ করে, সংবেদনশীলতার পরে নিম্ন নিয়ন্ত্রণের মধ্য দিয়ে যেতে পারে এবং বিপরীতভাবে 3-এআর আয় করে ক্যাটেকোলামাইন-প্ররোচিত প্রো-টিউমারাল প্রভাবগুলির মধ্যস্থতায় গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা। মানুষের মধ্যে 3- এআর এক্সপ্রেশনের প্রো-টিউমারাল প্রবণতা তদন্ত করার জন্য, আমরা অবশেষে ওপেন অ্যাক্সেস R2: জিনোমিক্স অ্যানালাইসিস এবং ভিজ্যুয়ালাইজেশন প্ল্যাটফর্ম ব্যবহার করে 649 NB রোগীর উপর একটি জেনেটিক বিশ্লেষণ করেছি। উচ্চ ADRB3 জিনের অভিব্যক্তি নিম্ন অভিব্যক্তির তুলনায় NB রোগীদের সবচেয়ে খারাপ ক্লিনিকাল ফলাফলের (সামগ্রিক এবং ঘটনা-মুক্ত বেঁচে থাকা) সাথে সম্পর্কযুক্ত; উপরন্তু, CD80, CTLA4, এবং B7-H3 (CD276) এর মতো বিভিন্ন ইমিউন দমনকারী চেকপয়েন্টের সাথে ইতিবাচক ADRB3 জিনের সম্পর্ক এবং CD266, CD40LG এবং {{171} এর মতো ইমিউন-অ্যাক্টিভেটিং চেকপয়েন্টগুলির সাথে নেতিবাচক সম্পর্ক BBL NB-তে ইমিউন রিঅ্যাকটিভিটির জটিল নিয়ন্ত্রণে 3-AR-এর দ্বারা পরিচালিত নেতিবাচক ভূমিকা নিশ্চিত করেছে। বিশেষ করে, ইমিউন-দমনকারী চেকপয়েন্টগুলির সাথে ADRB3 জিনের অভিব্যক্তির ইতিবাচক সম্পর্ক, যেমন CD276, একটি এনবি-সম্পর্কিত অণু যা প্রতিক্রিয়াহীন এনবি রূপগুলিতে পাওয়া যায়, যা একটি এনকে সেল-মধ্যস্থ লাইসিস [56, 57] থেকে একটি প্রতিরক্ষামূলক ভূমিকা পালন করে, অথবা CTLA4 এর সাথে, যার বাধা এনবি [58]-এ টিউমার টি সেল হত্যা বৃদ্ধিতে অপ্রয়োজনীয় বলে দেখানো হয়েছে, টিউমার ইমিউন পালানোর পক্ষে বিভিন্ন প্রক্রিয়া বজায় রাখার জন্য 3-এআর সিগন্যালিংয়ের ক্ষমতা হাইলাইট করেছে। আমরা অনুমান করতে পারি যে উচ্চ ADRB3 জিনের অভিব্যক্তি এবং বিভিন্ন ইমিউন চেকপয়েন্টের বর্ধিত অভিব্যক্তির মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্ক নির্ভর করতে পারে 3- সেই সমস্ত প্রক্রিয়াগুলিকে টিকিয়ে রাখার জন্য যেগুলির অত্যধিক সক্রিয়তা টিউমার প্রতিরোধের সূচনাকে উৎসাহিত করে, যেমন দীর্ঘস্থায়ী এক্সপোজার কিছু প্রো-এর কাছে - প্রদাহজনক সাইটোকাইনস। NB-তে চেকপয়েন্ট নিষেধের প্রাথমিক গবেষণা সবসময় সফল হয়নি। বিশেষ করে, প্রাক-ক্লিনিকাল স্টাডি মডেল এবং মানুষের উভয় ক্ষেত্রেই, একাধিক আইসিআই গ্রহণ করে থেরাপিউটিক কৌশলগুলিতে প্রাপ্ত আরও ভাল প্রতিক্রিয়া পরামর্শ দেয় যে বিভিন্ন ইমিউন চেকপয়েন্টগুলিকে লক্ষ্য করে এনবি [58, 59] তে একটি অ-অপ্রয়োজনীয় কার্যকর অ্যান্টি-টিউমারাল পদ্ধতির প্রতিনিধিত্ব করে। তারপরে, বিভিন্ন ইমিউনোসপ্রেসিভ পথগুলিকে লক্ষ্য করে একক-লক্ষ্যযুক্ত থেরাপির টিউমার প্রতিরোধের এড়াতে সেরা থেরাপিউটিক বিকল্পের প্রতিনিধিত্ব করতে পারে। যাইহোক, ভারী পার্শ্বপ্রতিক্রিয়া এবং বিষাক্ততার কারণে একাধিক ওষুধের প্রশাসন সবসময় সমস্যাযুক্ত হয় এবং সর্বদা কাঙ্ক্ষিত ফলাফলের দিকে পরিচালিত করে না। তাই, নতুন ইমিউন-অনকোলজি পদ্ধতির বিকাশের জন্য TME এর ইমিউন প্রতিপক্ষের জটিল নেটওয়ার্কের নিয়ন্ত্রণের সাথে জড়িত আণবিক প্রক্রিয়াগুলির একটি গভীর জ্ঞান প্রয়োজন। এই প্রসঙ্গে, উপস্থাপিত ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে NB TME তে 3-AR টার্গেট করা একাধিক অ-অপ্রয়োজনীয় প্রো-টিউমারাল সিগন্যালিং পাথওয়েতে আঘাত করার সম্ভাব্য পদ্ধতির প্রতিনিধিত্ব করতে পারে। বিশেষ করে, উভয় হোস্ট ইমিউন সিস্টেমকে প্রভাবিত করে, ইমিউন চেকপয়েন্ট সহযোগিতার দ্বারা প্ররোচিত বাধা অপসারণের মাধ্যমে এবং টিউমার সেল প্রো-সারভাইভাল পাথওয়ের মাধ্যমে, 3-এআর বিরোধিতা একটি প্রতিশ্রুতিশীল কৌশল উপস্থাপন করতে পারে, আশা করি, থেরাপিউটিক এনবি ম্যালিগন্যান্সিতে আক্রান্ত রোগীদের জন্য সম্ভাব্য। হোস্ট ইমিউন সিস্টেম এবং এনবিতে টিউমার প্রতিপক্ষের মধ্যে জটিল মিথস্ক্রিয়া অন্তর্নিহিত আরও প্রক্রিয়াগুলিকে আরও গভীর করার জন্য আরও অধ্যয়ন এখনও প্রয়োজন। তবুও, আমরা যা পর্যবেক্ষণ করেছি তার আলোকে, এনবি টিউমারের টিএমই-তে অ্যাড্রেনার্জিক সিগন্যালিংয়ের অধ্যয়নটি বিবেচনায় নেওয়া উচিত।

চিত্র 6 এনবি টিউমার ভরের ট্রান্সক্রিপ্টোমিক বিশ্লেষণগুলি ইমিউন-সম্পর্কিত প্রক্রিয়াগুলিকে প্রভাবিত করার ক্ষেত্রে 3-এআর-এর বিশিষ্ট ভূমিকাকে সমর্থন করে

চিত্র 7 কাপলান-মেইয়ার বেঁচে থাকার বিশ্লেষণ এবং এনবি রোগীদের মধ্যে ADRB3 জিনের প্রকাশের সাথে ইমিউন চেকপয়েন্টের সম্পর্ক।

তথ্যসূত্র

1. চেউং এনকে, ডায়ার এমএ। নিউরোব্লাস্টোমা: উন্নয়নমূলক জীববিজ্ঞান, ক্যান্সার জিনোমিক্স এবং ইমিউনোথেরাপি। ন্যাট রেভ ক্যান্সার। 2013;13:397-411।

2. ম্যাথায় কেকে, মারিস জেএম, গুডরুন এস, নাকাগাওয়ারা এ, ম্যাকল সিএল, ডিলার এল, এট আল। নিউরোব্লাস্টোমা। ন্যাট রেভ ডিস প্রিম। 2016;2:16078।

3. ডারভিন পি, টুর এসএম, নায়ার এসএন, এলকর্ড ই। ইমিউন চেকপয়েন্ট ইনহিবিটরস: সাম্প্রতিক অগ্রগতি এবং সম্ভাব্য বায়োমার্কার। Exp Mol Med. 2018;50:1-11।

4. প্যারডল ডিএম। ক্যান্সার ইমিউনোথেরাপিতে ইমিউন চেকপয়েন্টের অবরোধ। ন্যাট রেভ ক্যান্সার। 2012;12:252-64।

5. Zou W, Wolchok JD, Chen L. PD-L1 (B7-H1) এবং PD-1 ক্যান্সার থেরাপির জন্য পথ অবরোধ: প্রক্রিয়া, প্রতিক্রিয়া বায়োমার্কার, এবং সংমিশ্রণ। Sci Transl Med. 2016;8:328rv4.

6. কোল SW, Sood AK. আণবিক পথ: ক্যান্সারে বিটা-অ্যাড্রেনার্জিক সংকেত। ক্লিন ক্যান্সার রেস. 2012;18:1201-6.

7. Strenger V, Kerlb R, Dornbusch HJ, Ladenstein R, Ambros PF, Ambros IM, et al. নিউরোব্লাস্টোমা রোগীদের মূত্রনালীর ক্যাটেকোলামাইনের ডায়গনিস্টিক এবং প্রগনোস্টিক প্রভাব। শিশুর রক্তের ক্যান্সার। 2007;48:504-9.

8. Huang XE, Hamajima N, Saito T, Matsuo K, Mizutani M, Iwata H, et al. স্তন ক্যান্সারের সংবেদনশীলতার সাথে বিটা2- এবং বিটা3-অ্যাড্রেনার্জিক রিসেপ্টর জিন পলিমারফিজমের সম্ভাব্য সংযোগ। স্তন ক্যান্সার Res. 2001;3:264-9।

9. বাবোল কে, প্রজিবিলোস্কা কে, লুকাসজেক এম, পেরটিনস্কি টি, ব্লাসিয়াক জে। বিটা3-অ্যাড্রেনার্জিক রিসেপ্টর জিন এবং এন্ডোমেট্রিয়াল ক্যান্সার এবং স্থূলতার মধ্যে Trp64Arg পলিমারফিজমের মধ্যে একটি অ্যাসোসিয়েশন। J Exp Clin Cancer Res. 2004; 23:669-74।

10. Perrone MG, Notarnicola M, Caruso MG, Tutino V, Scilimati A. মানুষের কোলন ক্যান্সারে বিটা3-অ্যাড্রেনার্জিক রিসেপ্টর mRNA-এর আপগ্র্যুলেশন: একটি প্রাথমিক গবেষণা। অনকোলজি। 2008;75:224-9।

11. Magnon C, Hall SJ, Lin J, Xue X, Gerber L, Freedland SJ, et al. স্বায়ত্তশাসিত স্নায়ুর বিকাশ প্রোস্টেট ক্যান্সারের অগ্রগতিতে অবদান রাখে। বিজ্ঞান. 2013;341:1236361।

12. ব্রুনো জি, সেন্সেটি এফ, পিনি এ, টন্ডো এ, কুজুবো ডি, ফন্টানা এফ, এট আল। বিটা3- অ্যাড্রেনোরেসেপ্টর ব্লকেড টিউমারের বৃদ্ধি হ্রাস করে এবং SK2/S1P2 মডুলেশনের মাধ্যমে নিউরোব্লাস্টোমাতে নিউরোনাল ডিফারেন্সিয়েশন বাড়ায়। অনকোজিন। 2020;39:368–84।

13. Calvani M, Bruno G, Dal Monte M, Nassini R, Fontana F, Casini A, et al. বিটা3 -মেলানোমার সম্ভাব্য ইমিউনো-দমনকারী এজেন্ট হিসাবে অ্যাড্রেনোসেপ্টর। বিআর জে ফার্ম। 2019;176:2509–24।

14. ডাল মন্টে এম, ক্যাসিনি জি, ফিলিপি এল, নিচিয়া এমজি, স্বেল্টো এম, ব্যাগনোলি পি। মেলানোমা বৃদ্ধি এবং ভাস্কুলারাইজেশনে বিটা3-অ্যাড্রেনার্জিক রিসেপ্টরগুলির কার্যকরী জড়িত। জে মল মেড. 2013;91:1407-19।

15. ডন্ডেরো এ, পাস্তোরিনো এফ, ডেলা চিসা এম, করিয়াস এমভি, মোরান্ডি এফ, পিস্টোইয়া ভি, এট আল। ইমিউন নজরদারি সীমিত করার জন্য একটি অতিরিক্ত প্রক্রিয়া হিসাবে মেটাস্ট্যাটিক নিউরোব্লাস্টোমাতে PDL1 এক্সপ্রেশন। অনকোইমিউনোলজি। 2016;5:e1064578।

16. Zuo S, Sho M, Sawai T, Kanehiro H, Maeda K, Yoshida M, et al. নিউরোব্লাস্টোমাতে PD-L1 এক্সপ্রেশন এবং টিউমার-অনুপ্রবেশকারী লিম্ফোসাইটের সম্ভাব্য ভূমিকা। পেডিয়াট্রি সার্গ ইন্টি. 2020;36:137–43.

17. Keir ME, Butte MJ, Feeman GJ, Sharpe AH. PD-1 এবং এর লিগ্যান্ড সহনশীলতা এবং অনাক্রম্যতা। আন্নু রেভ ইমিউনল। 2008;26:677-704।

18. কুরিয়েল টিজে, ওয়েই এস, ডং এইচ, আলভারেজ এক্স, চেং পি, মটরাম পি, এট আল। B7-H1 এর অবরোধ মায়েলয়েড ডেনড্রাইটিক কোষ-মধ্যস্থতা প্রতিরোধী টিউমার প্রতিরোধ ক্ষমতা উন্নত করে। ন্যাট মেড। 2003; 9:562-7।

19. Wu K, Kryczek I, Cheng L, Zou W, Welling TH. মানুষের হেপাটোসেলুলার কার্সিনোমাতে সিডি8+ টি কোষের কুফফার কোষ দমন B7-H1/প্রোগ্রামড ডেথ-1 মিথস্ক্রিয়া দ্বারা মধ্যস্থতা করা হয়। ক্যান্সার রেস. 2009;69:8067-75।

20. Kuang DM, Zhao Q, Peng C, Xu J, Zhang JP, Wu C, et al. হেপাটোসেলুলার কার্সিনোমার পেরিটুমোরাল স্ট্রোমায় সক্রিয় মনোসাইটগুলি PD-L1 এর মাধ্যমে প্রতিরোধ ক্ষমতা এবং রোগের অগ্রগতি বৃদ্ধি করে। J Exp Med. 2009;206:1327-37।

21. রটে এ, জিন জেওয়াই, লেমায়ার ভি। ক্যান্সার ইমিউনোথেরাপিতে তাদের সংমিশ্রণের যুক্তিসঙ্গত নকশাকে সমর্থন করার জন্য ইমিউন চেকপয়েন্টগুলির যান্ত্রিক ওভারভিউ। অ্যান অনকল। 2018;29:71–83।

22. ড্যামেইজার এফ, ভ্যান গুলিজক এম, মুল্ডার ইই, লুকেস এম, ক্লাস এল, ভ্যান ডেন বোশ টি, এট আল। PD-1/PD-L1 চেকপয়েন্ট টি-সেল অনাক্রম্যতাকে টিউমার-ড্রেনিং লিম্ফ নোডগুলিতে নিয়ন্ত্রণ করে। ক্যান্সার কোষ। 2020;38:685–700। e8.

23. Cha JH, Chan LC, Li CW, Hsu JL, Hung MC. ক্যান্সারে PD-L1 এক্সপ্রেশন নিয়ন্ত্রণ করার প্রক্রিয়া। মোল সেল। 2019;76:359–70।

24. বার্ক জেডি, ইয়াং এইচএ। IFN-: সঠিক সময়ে একটি সাইটোকাইন, সঠিক জায়গায় আছে। সেমিন ইমিউনল। 2019;43:101280।

25. শেনা জি, ক্যাপ্লান এমজে। আপনি সবসময় 3-AR* সম্পর্কে জানতে চেয়েছিলেন (* কিন্তু জিজ্ঞাসা করতে ভয় পান)। কোষ। 2019; 8:357।

26. Liu Y, Guo YL, Zhou SJ, Liu F, Du FJ, Zheng XJ, et al. সিআরইবি হল সুপ্ত কিন্তু সক্রিয় যক্ষ্মা সংক্রমণের ক্ষেত্রে গামা ইন্টারফেরনের একটি ইতিবাচক প্রতিলিপি নিয়ন্ত্রক। ক্লিন অ্যাড ভ্যাকসিন ইমিউনল। 2010;17:1377-80।

27. Samten B, Townsend JC, Weis SE, Bhoumik A, Klucar P, Shams H, et al. CREB, ATF, এবং AP-1 ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টরগুলি মাইকোব্যাকটেরিয়াল অ্যান্টিজেনের প্রতিক্রিয়া হিসাবে মানুষের টি কোষ দ্বারা IFN-গামা নিঃসরণ নিয়ন্ত্রণ করে। জে ইমিউনল। 2008;181:2056-64।

28. Matloubian M, Lo CG, Cinamon G, Lesneski MJ, Xu Y, Brinkmann V, et al. থাইমাস এবং পেরিফেরাল লিম্ফয়েড অঙ্গ থেকে লিম্ফোসাইট নির্গমন S1P রিসেপ্টর 1 এর উপর নির্ভরশীল। প্রকৃতি। 2004;427:355-60।

29. Li MH, Hla T, Ferrer F. FTY720 টিউমার বৃদ্ধিতে বাধা দেয় এবং স্ফিংগোলিপিড সিগন্যালিং পাথওয়েতে হস্তক্ষেপ করে নিউরোব্লাস্টোমাতে টপোটেকানের টিউমার দমনকারী প্রভাবকে বাড়িয়ে তোলে। শিশুর রক্তের ক্যান্সার। 2013;60:1418-23।

30. Chisholm KM, Chang KW, Truong MT, Kwok S, West RB, Heerema-McKenney AE। ভাস্কুলার টিউমারে বিটা-অ্যাড্রেনার্জিক রিসেপ্টর এক্সপ্রেশন। মোড পথোল। 2012;25:1446–51।

31. Montoya A, Amaya CN, Belmont A, Diab N, Trevino R, Villanueva G, et al. নন-সিলেক্টিভ বিটা-ব্লকারের ব্যবহার প্রাথমিক পর্যায়ের স্তন ক্যান্সারে টিউমার প্রলিফারেটিভ সূচক হ্রাসের সাথে যুক্ত। অনকোটার্গেট। 2017;8:6446–60।

32. রেইনস SL, Amaya CN, Bryan BA. বিটা-অ্যাড্রেনার্জিক রিসেপ্টর বিভিন্ন ক্যান্সার জুড়ে প্রকাশ করা হয়। অনকোসায়েন্স। 2017; 4:95-105।

33. Verly IR, van Kuilenburg ABP, Abeling NGGM, Goorden SMI, Fiocco M, Vaz FM, et al. নির্ণয়ের সময় ক্যাটেকোলামাইনস প্রোফাইল: নিউরোব্লাস্টোমা রোগীদের মধ্যে বর্ধিত ডায়গনিস্টিক সংবেদনশীলতা এবং জৈবিক এবং ক্লিনিকাল বৈশিষ্ট্যগুলির সাথে সম্পর্ক। ইউর জে ক্যান্সার। 2017;72:235–43।

34. Eng JWL, Kokolus KM, Reed CB, Hylander BL, MA WW, Repasky, et al. একটি স্নায়বিক টিউমার মাইক্রোএনভায়রনমেন্ট: ক্যান্সার কোষ, ইমিউনোসপ্রেশন এবং ইমিউনোথেরাপিউটিক প্রতিক্রিয়ার উপর অ্যাড্রেনার্জিক স্ট্রেসের প্রভাব। ক্যান্সার ইমিউনল ইমিউনোথার। 2014;63:1115-28।

35. ধভার এফএস, ম্যাকউয়েন বিএস। তীব্র চাপ বৃদ্ধি করে যখন দীর্ঘস্থায়ী চাপ ভিভোতে কোষ-মধ্যস্থতা প্রতিরোধ ক্ষমতাকে দমন করে: লিউকোসাইট পাচারের জন্য একটি সম্ভাব্য ভূমিকা। ব্রেন বিহ্যাভ ইমুন। 1997;11:286-306।

36. ধভর এফএস। ইমিউন ফাংশনের স্ট্রেস-প্ররোচিত বৃদ্ধি — স্ট্রেস হরমোন, লিউকোসাইট পাচার এবং সাইটোকাইনের ভূমিকা। ব্রেন বিহ্যাভ ইমুন। 2002;16:785-98।

37. Qiao G, Chen M, Bucsek MJ, Repasky EA, Hylander BL। অ্যাড্রেনার্জিক সিগন্যালিং: একটি লক্ষ্যযোগ্য চেকপয়েন্ট যা অ্যান্টিটিউমার ইমিউন প্রতিক্রিয়ার বিকাশকে সীমাবদ্ধ করে। সামনের ইমিউনল। 2018;9:164।

38. Rigo V, Emionite L, Daga A, Astigiano S, Corrias MV, Quintarelli C, et al. অ্যান্টি-PDL-1/PD-1 এবং অ্যান্টি-CD4 অ্যান্টিবডিগুলির সাথে সম্মিলিত ইমিউনোথেরাপি সিনজেনিক ডিসেমিনেটেড নিউরোব্লাস্টোমা নিরাময় করে। বিজ্ঞান প্রতিনিধি 2017;7:14049।

39. মাজনার আরজি, সাইমন জেএস, গ্রোসো জেএফ, মার্টিনেজ ডি, পাওয়েল বিআর, সান্তি এম, এট আল। প্রোগ্রামড ডেথ-লিগ্যান্ড 1 এক্সপ্রেশন এবং পেডিয়াট্রিক ক্যান্সার টিস্যুতে টিউমার-সম্পর্কিত ইমিউন কোষের মূল্যায়ন। ক্যান্সার। 2017;123:3807-15।

40. গিবন্স জনসন আরএম, ডং এইচ. ইমিউন কোষ এবং টিউমার কোষ দ্বারা প্রোগ্রামড ডেথ লিগ্যান্ড 1 (B7-H1) এর কার্যকরী অভিব্যক্তি। সামনের ইমিউনল। 2017; 8:961।

41. Peng Q, Qiu X, Zhang Z, Zhang S, Zhang Y, Liang Y, et al. ডেনড্রাইটিক কোষে PD-L1 টি কোষ সক্রিয়করণকে কমিয়ে দেয় এবং ইমিউন চেকপয়েন্ট অবরোধের প্রতিক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে। ন্যাট কমুন। 2020; 11:4835।

42. সিংগাল এস, স্ট্যাডানলিক জে, আনুনজিয়াটা এমজে, রাও এএস, ভোজনগরওয়ালা পিএস, ও'ব্রায়েন এস, এবং অন্যান্য। মানুষের টিউমার-সম্পর্কিত মনোসাইট/ম্যাক্রোফেজ এবং প্রাথমিক পর্যায়ে ফুসফুসের ক্যান্সারে টি কোষের প্রতিক্রিয়াগুলির নিয়ন্ত্রণ। Sci Transl Med. 2019;11:eaat1500।

43. Blackburn SD, Shin H, Haining WN, Zou T, Workman CJ, Polley A, et al. দীর্ঘস্থায়ী ভাইরাল সংক্রমণের সময় একাধিক ইনহিবিটরি রিসেপ্টর দ্বারা সিডি8+ টি কোষের নিঃসরণ নিয়ন্ত্রণ। ন্যাট ইমিউনল। 2009;10:29-37।

44. Jin HT, Anderson AC, Tan WG, West EE, Ha SJ, Araki K, et al. দীর্ঘস্থায়ী ভাইরাল সংক্রমণের সময় CD8 টি-কোষ ক্লান্তিতে টিম-3 এবং PD-1 এর সহযোগিতা। Proc Natl Acad Sci USA. 2010;107:14733-8.

45. সাকুইশি কে, অ্যাপটোহ এল, সুলিভান জেএম, ব্লাজার বিআর, কুচরু ভিকে, অ্যান্ডারসন এসি। টি কোষের নিঃশেষ হওয়া এবং টিউমার-বিরোধী প্রতিরোধ ক্ষমতা পুনরুদ্ধার করার জন্য টিম-3 এবং পিডি-1 পথগুলিকে লক্ষ্য করা। J Exp Med. 2010;207:2187-94।

46. ​​Agata Y, Kawasaki A, Nishimura H, Ishida Y, Tsubata T, Yagita H, et al. উদ্দীপিত মাউস টি এবং বি লিম্ফোসাইটের পৃষ্ঠে PD-1 অ্যান্টিজেনের প্রকাশ। ইন্টি ইমিউনল। 1996; 8:765-72।

47. বিভাকর R, Juan G, Traganos F, Darzynkiewicz Z, Finger LR. টি-লিম্ফোসাইটে মানব প্রোগ্রামড ডেথ-1 জিনের সক্রিয়করণ-প্ররোচিত অভিব্যক্তি। এক্সপ্রেস সেল রেস 1997; 232:25-8।

48. Freeman GJ, Long AJ, Iwai Y, Bourque K, Chernova T, Nishimura H, et al. একটি উপন্যাস B7 পরিবারের সদস্য দ্বারা PD-1 ইমিউনোইনহিবিটরি রিসেপ্টরের নিযুক্তি লিম্ফোসাইট সক্রিয়করণের নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণের দিকে নিয়ে যায়। J Exp Med. 2000;192:1027-34।

49. Gros A, Robbins PF, Yao X, Li YF, Turcotte S, Tran E, et al. PD-1 রোগী-নির্দিষ্ট CD8(+) টিউমার-প্রতিক্রিয়াশীল ভাণ্ডারের অনুপ্রবেশকারী মানুষের টিউমার সনাক্ত করে। জে ক্লিন ইনভেস্ট। 2014;124:2246–59।

50. গ্যালন জে, কস্টেস এ, সানচেজ-কাবো এফ, কিরিলোভস্কি এ, ম্লেকনিক বি, ল্যাগোরস-পাগেস সি, এট আল। মানব কোলোরেক্টাল টিউমারের মধ্যে ইমিউন কোষের ধরন, ঘনত্ব এবং অবস্থান ক্লিনিকাল ফলাফলের পূর্বাভাস দেয়। বিজ্ঞান. 2006;313:1960-4.

51. মিনা এম, বোল্ডরিনি আর, সিটি এ, রোমানিয়া পি, ডি'আলিকান্ড্রো ভি, ডি ইওরিস এম, এট আল। টিউমার-অনুপ্রবেশকারী টি লিম্ফোসাইট থেরাপি-প্রতিরোধী নিউরোব্লাস্টোমার ক্লিনিকাল ফলাফল উন্নত করে। অনকোইমিউনোলজি। 2015;4:e1019981।

52. মেলাইউ ও, চিয়েরিসি এম, লুকারিনি ভি, জুরম্যান জি, কন্টি এলএ, ডি ভিটো আর, এট আল। টিউমার-অনুপ্রবেশকারী ডেনড্রাইটিক কোষ এবং প্রাকৃতিক হত্যাকারী কোষগুলির সেলুলার এবং জিনের স্বাক্ষর নিউরোব্লাস্টোমা রোগের পূর্বাভাস দেয়। ন্যাট কমুন। 2020; 11:5992।

53. জর্গোভানোভিক ডি, সং এম, ওয়াং এল, ঝাং ওয়াই। টিউমারের অগ্রগতি এবং রিগ্রেশনে IFN-গামার ভূমিকা: একটি পর্যালোচনা। বায়োমার্ক রেস. 2020; 8:49।

54. ঝাং জে. ইয়িন এবং ইয়াং প্রদাহ এবং অটোইমিউন রোগে IFN-গামার ইন্টারপ্লে। জে ক্লিন ইনভেস্ট। 2007;117:871-3.

55. ওকেকে কে, অ্যাঞ্জার্স এস, বোভিয়ার এম, মিশেল এমসি। অ্যাগোনিস্ট-প্ররোচিত বিটা3 -অ্যাড্রেনোসেপ্টরগুলির সংবেদনশীলতা: কোথায়, কখন, এবং কীভাবে? বিআর জে ফার্ম। 2019;176:2539–58।

56. ক্যাস্ট্রিকনি আর, ডনডেরো এ, অগুগ্লিয়ারো আর, ক্যান্টোনি সি, কার্নেমোল্লা বি, সেমেন্টা এআর, এট আল। 4Ig-B7-H3 একটি নিউরোব্লাস্টোমা-সম্পর্কিত অণু হিসাবে সনাক্তকরণ যা একটি NK কোষ-মধ্যস্থ লাইসিস থেকে একটি প্রতিরক্ষামূলক ভূমিকা পালন করে। Proc Natl Acad Sci USA. 2004;101:12640-5।