ভ্যাকসিনগুলি SARS-CoV-2 Omicron ভেরিয়েন্টের জন্য অত্যন্ত ক্রস-রিঅ্যাকটিভ সেলুলার ইমিউনিটি বের করে

যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com

জিনিয়ান লিউ1*, অভিষেক চন্দ্রশেখর1*, ড্যানিয়েল সেলারস1*, জুলিয়া ব্যারেট1, মিশেল লিফটন1, ক্যাথরিন ম্যাকমাহান1, মাইকেলা সিয়াক্কা1,

Haley VanWyk1, Cindy Wu1, Jingyou Yu1, Ai-ris Y. Collier1, Dan H. Barouch1,2*

1 বেথ ইজরায়েল ডেকোনেস মেডিকেল সেন্টার, বোস্টন, এমএ, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র;

2 Ragon Institute of MGH, MIT, এবং Harvard, Cambridge, MA, USA

অত্যন্ত পরিবর্তিত SARS-CoV-2 Omicron (B.1.1.529) ভেরিয়েন্টটি বর্তমান ভ্যাকসিন দ্বারা উদ্ভূত অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়া নিরপেক্ষ করার একটি উল্লেখযোগ্য ভগ্নাংশ এড়াতে দেখানো হয়েছে যা WA1/2020 স্পাইক ইমিউনোজেন1 এনকোড করে, যার ফলে ব্রেকথ্রু সংক্রমণ বৃদ্ধি পায় এবং ভ্যাকসিনের কার্যকারিতা হ্রাস পায়। সেলুলার ইমিউন রেসপন্স, বিশেষ করে CD8 প্লাস টি সেল রেসপন্স, গুরুতর SARS-CoV-2 রোগের2-6 বিরুদ্ধে সুরক্ষার জন্য সম্ভবত গুরুত্বপূর্ণ। এখানে আমরা দেখাই যে বর্তমান SARS-CoV-2 টিকা দ্বারা প্ররোচিত সেলুলার ইমিউনিটি SARS-CoV-2 Omicron ভেরিয়েন্টের বিরুদ্ধে অত্যন্ত ক্রস-প্রতিক্রিয়াশীল। যে ব্যক্তিরা Ad26.COV2.S বা BNT162b2 ভ্যাকসিন পেয়েছেন তারা টেকসই CD8 প্লাস এবং CD4 প্লাস T সেল প্রতিক্রিয়া প্রদর্শন করেছেন যা কেন্দ্রীয় এবং প্রভাবক মেমরি সেলুলার উপ-জনসংখ্যা সহ ডেল্টা এবং ওমিক্রন উভয় প্রকারের বিরুদ্ধে ব্যাপক ক্রস-রিঅ্যাক্টিভিটি দেখায়। মিডিয়ান ওমিক্রন-নির্দিষ্ট CD8 প্লাস T সেল প্রতিক্রিয়াগুলি WA1/{28}}নির্দিষ্ট CD8 প্লাস T সেল প্রতিক্রিয়াগুলির 82-84 শতাংশ ছিল৷ এই তথ্যগুলি পরামর্শ দেয় যে বর্তমান ভ্যাকসিনগুলি SARS-CoV-2 Omicron ভেরিয়েন্টের সাথে গুরুতর রোগের বিরুদ্ধে যথেষ্ট সুরক্ষা প্রদান করতে পারে যদিও অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়াগুলিকে নিরপেক্ষ করার যথেষ্ট পরিমাণে হ্রাস পায়৷

cistanche স্বাস্থ্য সুবিধা: অনাক্রম্যতা উন্নত

সাম্প্রতিক গবেষণায় দেখা গেছে যে ভ্যাকসিন-এলিসিটেড নিউট্রালাইজিং অ্যান্টিবডি (NAbs) অত্যন্ত পরিবর্তিত SARS-CoV-2 Omicron ভেরিয়েন্টে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, যার ফলে সম্পূর্ণ টিকাপ্রাপ্ত ব্যক্তিদের মধ্যে যুগান্তকারী সংক্রমণ সহ দ্রুত বিশ্বব্যাপী ছড়িয়ে পড়ে। SARS-CoV-2 Omicron ভেরিয়েন্টের বিরুদ্ধে ভ্যাকসিন-এলিটেড সেলুলার ইমিউন প্রতিক্রিয়াগুলির ক্রস-রিঅ্যাকটিভিটি মূল্যায়ন করার জন্য, আমরা 51 জন ব্যক্তির মধ্যে CD8 প্লাস এবং CD4 প্লাস টি সেল প্রতিক্রিয়া মূল্যায়ন করেছি যারা অ্যাডেনোভাইরাস ভেক্টর-ভিত্তিক অ্যাড26 দিয়ে টিকা দেওয়া হয়েছিল। COV2.S ভ্যাকসিন7 (জনসন অ্যান্ড জনসন; N=20) বা mRNA-ভিত্তিক BNT162b2 ভ্যাকসিন8 (ফাইজার; N=31)।

BNT162b2 টিকা দেওয়ার পরে, আমরা 1 মাসে উচ্চ WA1/2020-নির্দিষ্ট NAb প্রতিক্রিয়া লক্ষ্য করেছি, তারপরে 8 মাসে একটি তীব্র পতন হয়েছে, প্রত্যাশিত 9,10 (চিত্র 1a)৷ Ad26.COV2.S টিকা দেওয়ার পরে, প্রথম মাসে WA1/2020-নির্দিষ্ট NAb প্রতিক্রিয়াগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে কম ছিল, কিন্তু এই প্রতিক্রিয়াগুলি আরও টেকসই ছিল এবং 89,11 মাসে (চিত্র 1a) স্থায়ী ছিল৷ যাইহোক, ন্যূনতম ক্রস-রিঅ্যাকটিভ Omicron-নির্দিষ্ট NAbs পরিলক্ষিত হয়েছে উভয় ভ্যাকসিনের জন্য (চিত্র 1a), অতিরিক্ত বুস্টিং1 এর অনুপস্থিতিতে সাম্প্রতিক তথ্যের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। রিসেপ্টর বাইন্ডিং ডোমেন (RBD)-নির্দিষ্ট বাইন্ডিং অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়াগুলি ELISA দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং অনুরূপ প্রবণতা দেখায়, ন্যূনতম ক্রস-রিঅ্যাকটিভ ওমিক্রন-নির্দিষ্ট বাইন্ডিং অ্যান্টিবডিগুলির সাথে (চিত্র 1b)। অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়াগুলির বিপরীতে, স্পাইক-নির্দিষ্ট সেলুলার ইমিউন প্রতিক্রিয়া নির্ধারণ করে। পুলড পেপটাইড IFN-g ELISPOT assays ওমিক্রনের জন্য যথেষ্ট ক্রস-রিঅ্যাক্টিভিটি দেখিয়েছে (বর্ধিত ডেটা চিত্র 1)। আমরা পরবর্তীতে অন্তঃকোষীয় সাইটোকাইন স্টেনিং অ্যাসেস দ্বারা স্পাইক-নির্দিষ্ট সিডি 8 প্লাস এবং সিডি 4 প্লাস টি সেল প্রতিক্রিয়াগুলি মূল্যায়ন করেছি। Ad26.COV2.S প্ররোচিত মিডিয়ান স্পাইক-নির্দিষ্ট IFN-g CD8 প্লাস T সেল প্রতিক্রিয়া 0৷{41}}61 শতাংশ , 0৷{54}}62 শতাংশ , এবং {{ 72}}। BNT162b2 ইনডিউসড মিডিয়ান স্পাইক-নির্দিষ্ট IFN-g CD8 প্লাস T সেল প্রতিক্রিয়া যথাক্রমে WA1/2020 এবং Omicron এর বিপরীতে 0.028 শতাংশ এবং 0.023 শতাংশ, টিকা দেওয়ার পরের 8 মাসে (চিত্র 2a)। এই ডেটাগুলি পরামর্শ দেয় যে ওমিক্রন-নির্দিষ্ট CD8 প্লাস টি সেল প্রতিক্রিয়াগুলি WA1/2020-নির্দিষ্ট CD8 প্লাস টি সেল প্রতিক্রিয়াগুলির সাথে 82-84 শতাংশ ক্রস-প্রতিক্রিয়াশীল ছিল৷ Ad26.COV2.S দ্বারা প্রাপ্ত স্পাইক-নির্দিষ্ট IFN-g CD4 প্লাস T সেল প্রতিক্রিয়াগুলি যথাক্রমে WA1/2020, ডেল্টা এবং ওমিক্রনের বিপরীতে 0.026 শতাংশ, 0.030 শতাংশ, এবং 0.029 শতাংশের মধ্যম ছিল এবং BNT162-এর মিডিয়ান ছিল। WA1/2020 এবং Omicron এর বিপরীতে যথাক্রমে 0.033 শতাংশ এবং 0.027 শতাংশ, CD4 প্লাস T কোষের প্রতিক্রিয়াগুলিরও যথেষ্ট ক্রস-রিঅ্যাকটিভিটি নির্দেশ করে (চিত্র 2b)। স্পাইক-নির্দিষ্ট TNF-a এবং IL-2 CD8 প্লাস এবং CD4 প্লাস T সেল প্রতিক্রিয়া (বর্ধিত ডেটা চিত্র 2) নিঃসৃত করার জন্যও উল্লেখযোগ্য ওমিক্রন ক্রস-রিঅ্যাকটিভিটি পরিলক্ষিত হয়েছে।

রৈখিক রিগ্রেশন বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে ওমিক্রন-নির্দিষ্ট CD8 প্লাস টি সেল প্রতিক্রিয়াগুলি উভয় সময়পয়েন্টের জন্য Ad26.COV2.S ভ্যাকসিনের জন্য WA1/2020-নির্দিষ্ট CD8 প্লাস টি সেল প্রতিক্রিয়াগুলির সাথে সম্পর্কযুক্ত (R=0.78, P<0.0001, slope="" 0.75)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.56,"><0.0001, slope="" 0.81),="" although="" two="" individuals="" had="" undetectable="" omicron-specific="" cd8+="" t="" cell="" responses="" following="" bnt162b2="" vaccination="" (fig.="" 3a).="" similarly,="" omicron-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" correlated="" with="" wa1/2020-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" for="" both="" the="" ad26.cov2.s="" vaccine="" (r="0.79,"><0.0001, slope="" 0.83)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.90,"><0.0001, slope="" 0.88)="" (fig.3b).="" spike-specific="" ifn-g="" cd8+="" and="" cd4+="" t="" cell="" central="" memory="" and="" effector="" memory="" subpopulations="" elicited="" by="" ad26.cov2.s="" also="" showed="" extensive="" cross-reactivity="" to="" delta="" and="" omicron.="" at="" month="" 8,="" cd8+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.076%,="" 0.054%,="" and="" 0.075%,="" cd8+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.168%,="" 0.143%,="" and="" 0.146%,="" cd4+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.030%,="" 0.035%,="" and="" 0.038%,="" and="" cd4+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.102%,="" 0.094%,="" and="" 0.083%,="" against="" wa1/202,="" delta,="" and="" omicron,="" respectively="" (fig.="">

আমাদের ডেটা দেখায় যে Ad26.COV2.S এবং BNT162b2 ওমিক্রন সহ SARS-CoV-2 ভেরিয়েন্টের বিরুদ্ধে বিস্তৃতভাবে ক্রস-প্রতিক্রিয়াশীল সেলুলার অনাক্রম্যতা তৈরি করে। দুটি ভিন্ন ভ্যাকসিন প্ল্যাটফর্ম প্রযুক্তি (ভাইরাল ভেক্টর এবং mRNA) জুড়ে এই পর্যবেক্ষণগুলির সামঞ্জস্য এই ফলাফলগুলির সাধারণীকরণের পরামর্শ দেয়। ওমিক্রন-নির্দিষ্ট CD8 প্লাস এবং CD4 প্লাস T কোষ প্রতিক্রিয়াগুলির বিস্তৃত ক্রস-রিঅ্যাক্টিভিটি লক্ষণীয়ভাবে হ্রাসকৃত ওমিক্রন-নির্দিষ্ট নিরপেক্ষকরণ এবং বাঁধাই অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়াগুলির সাথে তীব্রভাবে বৈপরীত্য। SARS-CoV{15}} আলফা, বিটা, এবং গামা ভেরিয়েন্ট12-এর বিরুদ্ধে হিউমারাল ইমিউন প্রতিক্রিয়ার তুলনায় ভ্যাকসিন-উত্পাদিত সেলুলার ইমিউন প্রতিক্রিয়াগুলির বৃহত্তর ক্রস-রিঅ্যাক্টিভিটি দেখায় এই ডেটাগুলি পূর্ববর্তী গবেষণার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। Omicron-এ CD8 প্লাস T কোষের প্রতিক্রিয়াগুলির 82-84 শতাংশ ক্রস-রিঅ্যাকটিভিটি ওমিক্রন মিউটেশন6-এর উপর ভিত্তি করে তাত্ত্বিক ভবিষ্যদ্বাণীগুলির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ।

প্রিক্লিনিকাল গবেষণায় দেখা গেছে যে CD8 প্লাস T কোষ SARS-CoV-2 এর বিরুদ্ধে রিসাস ম্যাকাকের বিরুদ্ধে সুরক্ষায় অবদান রাখে, বিশেষ করে যখন অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়া সাবঅপ্টিমাল হয়। টেকসই CD8 প্লাস এবং CD4 প্লাস T কোষের প্রতিক্রিয়াগুলিও সংক্রমণ এবং টিকাদানের পরে রিপোর্ট করা হয়েছে{6}},6,9,11,13,14৷ ভাইরাল সংক্রমণের ক্লিয়ারেন্সে CD8 প্লাস টি কোষের ভূমিকার পরিপ্রেক্ষিতে, সম্ভবত সেলুলার অনাক্রম্যতা গুরুতর SARS-CoV-2 রোগের বিরুদ্ধে ভ্যাকসিন সুরক্ষায় যথেষ্ট অবদান রাখে। এটি ওমিক্রনের জন্য বিশেষভাবে প্রাসঙ্গিক হতে পারে, যা অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়াগুলির একটি উল্লেখযোগ্য অংশ এড়িয়ে যায়। আমাদের ডেটা থেকে জানা যায় যে বর্তমান ভ্যাকসিনগুলি SARS-CoV-2 ওমিক্রন ভ্যারিয়েন্টের কারণে গুরুতর রোগের বিরুদ্ধে যথেষ্ট সুরক্ষা প্রদান করতে পারে যদিও অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়া হ্রাস করা এবং যুগান্তকারী সংক্রমণ বৃদ্ধি করা সত্ত্বেও।

cistanche পাউডার

পদ্ধতি

অধ্যয়ন জনসংখ্যা

BNT162b2 ভ্যাকসিন প্রাপ্ত ব্যক্তিদের নমুনা বেথ ইজরায়েল ডেকোনেস মেডিকেল সেন্টার (BIDMC) নমুনা বায়োরিপোজিটরি থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল। যারা Ad26.COV2.S পেয়েছেন তাদের কাছ থেকে নমুনাগুলি COV1001 গবেষণা (NCT04436276) থেকে প্রাপ্ত হয়েছে। উভয় গবেষণা BIDMC প্রাতিষ্ঠানিক পর্যালোচনা বোর্ড দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল। সমস্ত অংশগ্রহণকারী অবহিত সম্মতি প্রদান করেছে। ব্যক্তিদের এই অধ্যয়ন থেকে বাদ দেওয়া হয়েছিল যদি তাদের SARS-CoV- 2 সংক্রমণের ইতিহাস থাকে, অন্যান্য COVID-19 টিকা গ্রহণ করে বা ইমিউনোসপ্রেসিভ ওষুধ গ্রহণ করে। সিউডোভাইরাস নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডি পরীক্ষা

SARS-CoV-2 সিউডোভাইরাসগুলি একটি লুসিফেরেজ রিপোর্টার জিন প্রকাশ করে সিউডোভাইরাস নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডি পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। সংক্ষেপে, প্যাকেজিং psPAX2 (এইডস রিসোর্স এবং রিএজেন্ট প্রোগ্রাম), লুসিফেরেজ রিপোর্টার প্লাজমিড pLentiCMV পুরো-লুক (অ্যাডজেন), এবং স্পাইক প্রোটিন-প্রকাশকারী pcDNA3 তৈরি করে।{6}SARS-CoV-2 SΔCT সহ- লিপোফেক্টামিন 2000 (থার্মোফিশার সায়েন্টিফিক) দিয়ে HEK293T কোষে (ATCC CRL_3216) স্থানান্তরিত হয়। SARS-CoV-2 ভেরিয়েন্টের সিউডোভাইরাসগুলি WA1/2020 স্ট্রেন (উহান/WIV04/2019, GISAID অ্যাক্সেস আইডি: EPI_ISL_402124), B.1.1.7 ভেরিয়েন্ট ব্যবহার করে তৈরি করা হয়েছিল (আলফা, GISAID অ্যাক্সেস আইডি: EPI_ISL_601443), B.1.351 ভেরিয়েন্ট (বিটা, GISAID অ্যাক্সেস আইডি: EPI_ISL_712096), B.1.617। 2 (ডেল্টা, GISAID অ্যাক্সেস আইডি: EPI_ISL_2020950), অথবা B.1.1.529 (Omicron, GISAID ID: EPI_ISL_7358094.2)। সিউডোটাইপ ভাইরাস ধারণকারী সুপারনাট্যান্টগুলি ট্রান্সফেকশনের 48 ঘন্টা পরে সংগ্রহ করা হয়েছিল; সিউডোটাইপ ভাইরাস একটি 0{43}μm ফিল্টার দিয়ে পরিস্রাবণ দ্বারা বিশুদ্ধ করা হয়েছিল। মানুষের সিরামের নিরপেক্ষকরণ কার্যকলাপ নির্ধারণ করতে, HEK293T-hACE2 কোষগুলিকে রাতারাতি কূপ প্রতি 1.75 × 104 কোষের ঘনত্বে 96-ওয়েল টিস্যু কালচার প্লেটে বীজ দেওয়া হয়েছিল। তাপ-নিষ্ক্রিয় সিরাম নমুনার তিন-গুণ সিরিয়াল তরল প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং 50 ul সিউডোভাইরাসের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল। HEK293T-hACE2 কোষে যোগ করার আগে মিশ্রণটি 1 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রিতে incubated ছিল। 48 ঘন্টা পরে, প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে স্টেডি-গ্লো লুসিফেরেজ অ্যাসে (প্রোমেগা) কোষগুলিকে লাইজ করা হয়েছিল। SARS-CoV-2 নিউট্রালাইজেশন টাইটারগুলিকে নমুনা তরলীকরণ হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছিল যেখানে ভাইরাস নিয়ন্ত্রণ কূপের গড় তুলনায় আপেক্ষিক আলো ইউনিটে 50 শতাংশ হ্রাস (NT50) পরিলক্ষিত হয়েছিল।

এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসরবেন্ট অ্যাস (ELISA)

SARS-CoV-2 স্পাইক রিসেপ্টর-বাইন্ডিং ডোমেন (RBD)-সিরামে নির্দিষ্ট বাইন্ডিং অ্যান্টিবডিগুলি ELISA দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল৷ 96-ওয়েল প্লেটগুলি SARS-CoV এর 2 ug/mL দিয়ে প্রলিপ্ত ছিল-2 WA1/2020, B.1.617.2 (ডেল্টা), B.1.351 (বিটা), বা B.1.1.529 (Omicron) RBD প্রোটিন 1× Dulbecco ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইনে (DPBS) এবং রাতারাতি 4 ডিগ্রীতে ইনকিউব করা হয়। ইনকিউবেশনের পরে, প্লেটগুলি একবার ওয়াশ বাফার দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয় (0.05 শতাংশ টুইন 20 ইন 1× DPBS) এবং কক্ষ তাপমাত্রায় 2 থেকে 3 ঘন্টার জন্য প্রতি কূপে 350 μL কেসিন ব্লক দ্রবণ দিয়ে ব্লক করা হয়। ইনকিউবেশনের পরে, ব্লক দ্রবণটি বাতিল করা হয়েছিল এবং প্লেটগুলি শুকিয়ে ফেলা হয়েছিল। কেসিন ব্লকে মিশ্রিত তাপ-নিষ্ক্রিয় সিরামের সিরিয়াল তরলগুলি কূপে যোগ করা হয়েছিল, এবং প্লেটগুলিকে ঘরের তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেট করা হয়েছিল, আরও 3টি ধোয়ার আগে এবং একটি 1-ঘন্টা ইনকিউবেশনের সাথে 1:4000 অ্যান্টি-এর পাতলা করা হয়েছিল। মানুষের আইজিজি হর্সরাডিশ পারক্সিডেস (এইচআরপি) (ইনভিট্রোজেন, থার্মোফিশার সায়েন্টিফিক) অন্ধকারে ঘরের তাপমাত্রায়। প্লেটগুলি 3 বার ধোয়া হয়েছিল, এবং প্রতিটি কূপে 100 μL সেরাকেয়ার কেপিএল টিএমবি শিওরব্লু স্টার্ট দ্রবণ যোগ করা হয়েছিল; প্রতি কূপে 100 μL SeraCare KPL TMB স্টপ সলিউশন যোগ করে প্লেট ডেভেলপমেন্ট বন্ধ করা হয়েছিল। 450 nm-এ শোষণ, 650 nm রেফারেন্স সহ, একটি VersaMax মাইক্রোপ্লেট রিডার (আণবিক ডিভাইস) দিয়ে রেকর্ড করা হয়েছিল। প্রতিটি নমুনার জন্য, ELISA এন্ডপয়েন্ট টাইটার একটি 4-প্যারামিটার লজিস্টিক কার্ভ ফিট ব্যবহার করে পারস্পরিক সিরাম ডিলিউশন গণনা করা হয়েছে যা 0.2 এর একটি সংশোধন করা শোষণ মান (450 nm-650 nm) প্রদান করে। ইন্টারপোলেটেড এন্ডপয়েন্ট টাইটার রিপোর্ট করা হয়েছে।

cistanche deserticola নির্যাস: অনাক্রম্যতা উন্নত

এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনো-স্পট (ELISPOT) অ্যাস।

ELISPOT প্লেটগুলিকে MabTech থেকে 1 µg/ওয়েল-এ মাউস অ্যান্টিহিউম্যান IFN-মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি দিয়ে প্রলিপ্ত করা হয়েছিল এবং 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল৷ প্লেটগুলিকে DPBS দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং R10 মিডিয়া দিয়ে ব্লক করা হয়েছিল (RPMI 10 শতাংশ তাপ-নিষ্ক্রিয় FBS সহ 100x পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিন, 1M HEPES, 100mM সোডিয়াম পাইরুভেট, 200mM L-glutamine, এবং 05m শতাংশ৷ 2-Mercaptoethanol) 37 ডিগ্রিতে 2-4 ঘণ্টার জন্য। SARS-CoV-2 SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (ডেল্টা), বা B.1.1.529 (Omicron) (21 শতকের জৈব রাসায়নিক) থেকে পুল করা S পেপটাইড প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং 2 µg/ওয়েল ঘনত্বে প্রলেপ দেওয়া হয়েছে এবং প্লেটে 100,000 কোষ/ওয়েল যোগ করা হয়েছে। পেপটাইড এবং কোষগুলি 37 ডিগ্রীতে 15-20 ঘণ্টার জন্য ইনকিউবেট করা হয়েছিল। এই ইনকিউবেশন অনুসরণের সমস্ত পদক্ষেপ ঘরের তাপমাত্রায় সম্পাদিত হয়েছিল। প্লেটগুলিকে ইলিস্পট ওয়াশ বাফার দিয়ে ধুয়ে 2-4 ঘণ্টার জন্য ম্যাবটেক (1 µg/mL) থেকে বায়োটিনিলেটেড মাউস অ্যান্টি-হিউম্যান IFN- মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। প্লেটগুলিকে দ্বিতীয়বার ধুয়ে 2-3 ঘণ্টার জন্য রকল্যান্ড, ইনকর্পোরেটেড (1.33 µg/mL) থেকে সংযোজিত গোট অ্যান্টি-বায়োটিন AP দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল। 7 মিনিটের জন্য নিটর-ব্লু টেট্রাজোলিয়াম ক্লোরাইড/5-ব্রোমো-4-ক্লোরো 3 'ইন্ডোলাইল ফসফেট পি-টলুইডিন সল্ট (NBT/BCIP ক্রোমাজেন) সাবস্ট্রেট দ্রবণ যুক্ত করার পরে চূড়ান্ত ধোয়া হয়েছিল। ক্রোমাজেনটি ফেলে দেওয়া হয়েছিল এবং প্লেটগুলি জল দিয়ে ধুয়ে 24 ঘন্টার জন্য একটি আবছা জায়গায় শুকানো হয়েছিল। প্লেটগুলি স্ক্যান করা হয়েছিল এবং একটি সেলুলার টেকনোলজিস লিমিটেড ইমিউনোস্পট অ্যানালাইজারে গণনা করা হয়েছিল।

ইন্ট্রাসেলুলার সাইটোকাইন স্টেনিং (ICS) অ্যাস

সিডি 4 প্লাস এবং সিডি 8 প্লাস টি সেল প্রতিক্রিয়াগুলি পুলড পেপটাইড-উদ্দীপিত ইন্ট্রাসেলুলার সাইটোকাইন স্টেনিং (আইসিএস) অ্যাসেস দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল। পেপটাইড পুলগুলিতে SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (ডেল্টা), বা B.1.1 বিস্তৃত 11টি অ্যামিনো অ্যাসিড দ্বারা ওভারল্যাপ করা 15টি অ্যামিনো অ্যাসিড পেপটাইড রয়েছে .529 (Omicron) স্পাইক প্রোটিন (21 শতকের জৈব রাসায়নিক)। 106 পেরিফেরাল ব্লাড মনোনিউক্লিয়ার সেলগুলিকে 100 µL R10 মিডিয়াতে CD49d মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি (1 µg/mL) এবং CD28 মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি (1 µg/mL) এর সাথে সম্পূরক পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল। প্রতিটি নমুনা মক (R10 এর 100 μL প্লাস 0.5 শতাংশ DMSO; ব্যাকগ্রাউন্ড কন্ট্রোল), পেপটাইডস (2 µg/mL), এবং/অথবা 10 pg/mL ফোরবোল মাইরিস্টেট অ্যাসিটেট (PMA) এবং 1 µg/ml ionomycin (সিগমা-) দিয়ে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। Aldrich) (100µL; পজিটিভ কন্ট্রোল) এবং 1 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রীতে ইনকিউব করা হয়। ইনকিউবেশনের পর, R10-এর 50 μL-এ 0.25 μL GolgiStop এবং 0.25 μL GolgiPlug প্রতিটি কূপে যোগ করা হয়েছিল এবং 8 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রীতে ইনকিউব করা হয়েছিল এবং তারপরে 4 ডিগ্রীতে রাতারাতি রাখা হয়েছিল। পরের দিন, কোষগুলিকে DPBS দিয়ে দুবার ধুয়ে 10 মিনিটের জন্য অ্যাকোয়া লাইভ/ডেড ডাই দিয়ে দাগ দেওয়া হয় এবং তারপর CD279 (ক্লোন EH12.1, BB700), CD4 (ক্লোন L200, BV711) এর বিরুদ্ধে মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডির পূর্বনির্ধারিত টাইটার দিয়ে দাগ দেওয়া হয়। CD27 (ক্লোন M-T271, BUV563), CD8 (clone SK1, BUV805), CD45RA (clone 5H9, APC H7) ৩০ মিনিটের জন্য। তারপরে কোষগুলিকে 2 শতাংশ FBS/DPBS বাফার দিয়ে দুবার ধুয়ে এবং 200 μL BD CytoFix/CytoPerm ফিক্সেশন/পারমিবিলাইজেশন সলিউশন দিয়ে 15 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়। কোষগুলিকে 1X পার্ম ওয়াশ বাফার দিয়ে দুবার ধোয়া হয়েছিল (সাইটোফিক্স/সাইটোপার্ম ফিক্সেশন/ পারমিবিলাইজেশন কিটে BD পারম/ওয়াশটিএম বাফার 10X মিলিকিউ জল দিয়ে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং 0.22µm ফিল্টারের মধ্য দিয়ে চলে গেছে) এবং আন্তঃকোষীয়ভাবে দাগ দেওয়া হয়েছিল (মোনোক্লোবো 7-এর বিরুদ্ধে অ্যান্টিসেলুলারলি)। BUV395), এবং CD3 (ক্লোন SP34.2, Alexa 700), 30 মিনিটের জন্য। 1X পারম ওয়াশ বাফার দিয়ে কোষগুলি দুবার ধুয়ে এবং 250µL সদ্য প্রস্তুত 1.5 শতাংশ ফর্মালডিহাইড দিয়ে স্থির করা হয়েছিল। স্থির কোষগুলিকে একটি 96-ভালো গোলাকার নীচের প্লেটে স্থানান্তরিত করা হয়েছিল এবং BD FACSymphony™ সিস্টেম দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল৷ FlowJo v9.9 ব্যবহার করে ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

cistanche সম্পূরক:অনাক্রম্যতা উন্নত করা

তথ্যসূত্র

1. সেল এস, জ্যাকসন এল, খান কে, এবং অন্যান্য। SARS-CoV-2 Omicron-এ Pfizer BNT162b2 এলিসিটেড নিউট্রালাইজেশনের বিস্তৃত কিন্তু অসম্পূর্ণ অব্যাহতি রয়েছে এবং সংক্রমণের জন্য ACE2 প্রয়োজন। medRxiv 2021।

2. ড্যান JM, Mateus J, Kato Y, et al. SARS-CoV-2-এর ইমিউনোলজিক্যাল মেমরি সংক্রমণের পর 8 মাস পর্যন্ত মূল্যায়ন করা হয়েছে। বিজ্ঞান 2021;371।

3. সেট A, Crotty S. SARS-CoV-2 এবং COVID-19-এর জন্য অভিযোজিত প্রতিরোধ ক্ষমতা। সেল 2021;184:861-80।

4. গোয়েল RR, পেইন্টার MM, Apostolidis SA, et al. mRNA ভ্যাকসিনগুলি SARS-CoV-2 এবং উদ্বেগের রূপগুলিতে টেকসই ইমিউন মেমরি প্ররোচিত করে। বিজ্ঞান 2021;374:abm0829।

5. McMahan K, Yu J, Mercado NB, et al. রিসাস ম্যাকাকের মধ্যে SARS-CoV-2 এর বিরুদ্ধে সুরক্ষার সম্পর্ক। প্রকৃতি 2021;590:630-4।

6. Grifoni A, Weiskopf D, Ramirez SI, et al. SARS-CoV-2 কোভিড-19 রোগের সাথে মানুষের মধ্যে করোনাভাইরাস এবং অপ্রকাশিত ব্যক্তিদের জন্য টি কোষের প্রতিক্রিয়ার লক্ষ্য। সেল 2020;181:1489-501 e15.

7. Sadoff J, Grey G, Vandebosch A, et al. Covid-19 এর বিরুদ্ধে একক-ডোজ Ad26.COV2.S ভ্যাকসিনের নিরাপত্তা এবং কার্যকারিতা। N Engl J Med 2021;384:2187-201.

8. Polack FP, Thomas SJ, Kitchin N, et al. BNT162b2 mRNA কোভিড-19 ভ্যাকসিনের নিরাপত্তা ও কার্যকারিতা। N Engl J Med 2020।

9. কোলিয়ার AY, Yu J, McMahan K, et al. কোভিড-19 ভ্যাকসিন দ্বারা উদ্ভূত ইমিউন রেসপন্সের ডিফারেনশিয়াল গতিবিদ্যা। N Engl J Med 2021;385:2010-2.

10. Falsey AR, Frenck RW, Jr., Walsh EE, et al. SARS-CoV-2 BNT162b2 ভ্যাকসিন ডোজ দিয়ে নিরপেক্ষকরণ 3. N Engl J Med 2021।

11. Barouch DH, Stephenson KE, Sadoff J, et al. Ad26.COV2.S টিকা দেওয়ার 8 মাস পর টেকসই হিউমোরাল এবং সেলুলার ইমিউন রেসপন্স। N Engl J Med 2021;385:951-3.

12. Alter G, Yu J, Liu J, et al. মানুষের মধ্যে SARS- CoV-2 রূপের বিরুদ্ধে Ad26.COV2.S ভ্যাকসিনের ইমিউনোজেনিসিটি। প্রকৃতি 2021;596:268-72।

13. পুন MML, Rybkina K, Kato Y, et al. SARS-CoV-2 সংক্রমণ মানুষের মধ্যে টিস্যু-স্থানীয় ইমিউনোলজিক্যাল মেমরি তৈরি করে। সায়েন্স ইমিউনোলজি 2021; 6: eabl9105।

14. ভিদাল এসজে, কোলিয়ার এওয়াই, ইউ জে, এট আল। প্রারম্ভিক মহামারী সেরা দ্বারা SARS-CoV-2 ভ্যারিয়েন্ট অফ কনসার্নের বিরুদ্ধে নিরপেক্ষকরণের পারস্পরিক সম্পর্ক। জে ভাইরল 2021;95:e0040421।

cistanche সম্পূরক সুবিধা:অনাক্রম্যতা উন্নত করা