Cistanche Deserticola-এর মোট গ্লাইকোসাইডগুলি MCAO/R ইঁদুরগুলিতে Nrf- 2/Keap-1 পাথওয়ের মাধ্যমে নিউরোভাসকুলার পুনর্জন্মকে প্ররোচিত করে স্নায়বিক ফাংশন পুনরুদ্ধারের প্রচার করে

যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com

ফুজিয়াং ওয়াং, রুইয়ান লি, পেংফেই তু, জিয়ানপিং চেন, কেউ জেং এবং ইয়ং জিয়াং

পটভূমি:ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধ Cistanche deserticola কার্ডিওভাসকুলার এবং সেরিব্রোভাসকুলার রোগের জন্য বৈধ বলে জানা গেছে। তবে, ইস্কেমিক স্ট্রোকের সুরক্ষার জন্য এর সক্রিয় উপাদানগুলি স্পষ্ট নয়। আমরা এর সক্রিয় উপাদানগুলি অন্বেষণ করার লক্ষ্য রেখেছিগ. মরুভূমিইস্কেমিক স্ট্রোকের পাশাপাশি এর সম্ভাব্য প্রক্রিয়ার বিরুদ্ধে।পদ্ধতি:আমরা থেকে নির্যাস মস্তিষ্ক-প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব তদন্তগ. মরুভূমি, মিডল সেরিব্রাল আর্টারি অক্লুশন-রিপারফিউশন (MCAO/R) এর ইঁদুরের মডেলে মোট গ্লাইকোসাইডস (TGs), পলিস্যাকারাইডস (PSs), এবং oligosaccharides (OSs)। 2, 3, 5- ট্রাইফেনাইল টেট্রাজোলিয়াম ক্লোরাইড (টিটিসি) স্টেনিং সেরিব্রাল ইনফার্কশন ভলিউম মূল্যায়ন করতে ব্যবহৃত হয়েছিল, এবং ইভান্স ব্লু অ্যাস রক্ত-মস্তিষ্কের বাধা (বিবিবি) ব্যাপ্তিযোগ্যতা মূল্যায়নের জন্য গৃহীত হয়েছিল। তারপর, এক্সপ্রেশন CD31, a-SMA, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, ZO-1, claudin-5, occludin, Keap-1, এবং Nrf{{ 12}} ওয়েস্টার্ন ব্লটিং বা ইমিউনোফ্লোরোসেন্স ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল, এবং কিট ব্যবহার করে MDA, SOD, CAT, এবং GSH-Px কার্যকলাপগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।ফলাফল:TGs চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে স্নায়বিক ঘাটতি স্কোর এবং ইনফার্কশন ভলিউম হ্রাস করেছে, এনজিওজেনেসিস এবং নিউরাল রিমডেলিংকে উন্নীত করেছে এবং মডেল গ্রুপের তুলনায় কার্যকরভাবে রক্ত-মস্তিষ্ক-বাধা অখণ্ডতা বজায় রেখেছে। উপরন্তু, TGs উল্লেখযোগ্যভাবে MDA মাত্রা হ্রাস করেছে এবং মস্তিষ্কে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ (SOD, CAT, এবং GSH-Px) বৃদ্ধি করেছে। ইতিমধ্যে, TGs উল্লেখযোগ্যভাবে Keap-1 অভিব্যক্তিকে নিয়ন্ত্রণ করেছে এবং Nrf-2 পারমাণবিক ট্রান্সলোকেশনকে সহজ করেছে। বিপরীতে, PSs এবং OSs গোষ্ঠীগুলির জন্য কোনও প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব পরিলক্ষিত হয়নি।উপসংহার:TGs প্রধান সক্রিয় উপাদানগ. মরুভূমিMCAO/R-প্ররোচিত সেরিব্রাল ইনজুরির বিরুদ্ধে, এবং সুরক্ষা প্রধানত Nrf-2/Keap-1 পথের মাধ্যমে।

মূলশব্দ: Cistanche deserticola, সেরিব্রাল ইনজুরি, মোট গ্লাইকোসাইড, পলিস্যাকারাইড, অলিগোস্যাকারাইড, Nrf-2/Keap- 1 পথ

ভূমিকা

স্ট্রোক বিশ্বে মৃত্যু এবং অক্ষমতার একটি প্রধান কারণ হিসাবে বিবেচিত হয় (Donnan et al., 2008)। সমস্ত স্ট্রোকের ক্ষেত্রে প্রায় 87 শতাংশ ইস্কেমিক স্ট্রোক দ্বারা ট্রিগার হয় (Ovbiagele এবং Nguyen-Huynh, 2011)। বর্তমানে, ইস্কেমিক স্ট্রোক চিকিত্সার জন্য ব্যবহৃত সবচেয়ে কার্যকরী এজেন্ট এবং একমাত্র FDA-অনুমোদিত ওষুধ হল রিকম্বিন্যান্ট টিস্যু প্লাজমিনোজেন অ্যাক্টিভেটর। যাইহোক, প্রচুর সংখ্যক স্ট্রোক রোগী এই ওষুধের প্রতি সাড়া দিতে ব্যর্থ হয়, কারণ এর সংকীর্ণ থেরাপিউটিক টাইম উইন্ডো এবং রক্তক্ষরণজনিত জটিলতার গুরুতর ঝুঁকির কারণে (লি এট আল।, 2012; শেলিংগার এবং কোহরম্যান, 2014)। থ্রম্বোলাইটিক চিকিত্সার একটি বড় চ্যালেঞ্জ হল ইসকেমিয়া/রিপারফিউশন (আই/আর) আঘাত, যা মস্তিষ্কের আঘাত এবং ফাংশন ধ্বংসের প্রধান কারণ হিসাবে বিবেচিত হয়। সেরিব্রাল ইসকেমিয়ার পরে রিপারফিউশন মস্তিষ্কে রক্তক্ষরণের ঝুঁকি বাড়ায় যখন নিউরোভাসকুলার আঘাতের দিকে পরিচালিত করে এবং অত্যধিক প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) তৈরি করে যা রক্ত-মস্তিষ্কের বাধাকে ক্ষতিগ্রস্ত করে (Alluri et al., 2015)। বেশ কিছু গবেষণায় নিশ্চিত করা হয়েছে যে BBB এর ব্যাঘাত ইস্কেমিক স্ট্রোকের প্যাথোজেনেসিসের একটি প্রধান কারণ (Cao et al., 2016b)।

বিবিবি প্রধানত এন্ডোথেলিয়াল কোষ, পেরিসাইটস, অ্যাস্ট্রোসাইটস, নিউরন এবং বেসমেন্ট মেমব্রেন নিয়ে গঠিত। BBB-এর মূল উপাদানগুলি হল সেরিব্রাল মাইক্রোভাসকুলার এন্ডোথেলিয়াল কোষ যা শক্ত সংযোগ দ্বারা যুক্ত থাকে, এইভাবে মস্তিষ্কে বহিরাগত অণুগুলিকে সীমাবদ্ধ করে। টাইট জংশনের প্যাথলজিকাল পরিবর্তন—বিশেষত অক্লুডিন, ক্লাউডিন-5, এবং জোনুলা অক্লুডেন-1 (ZO-1)- একটি ইস্কেমিক স্ট্রোকের সময় বিবিবি ফাংশনকে উল্লেখযোগ্যভাবে প্রভাবিত করে, বিশেষ করে বাধা ব্যাপ্তিযোগ্যতা (লিউ এট al., 2014; Hu et al., 2018; Liu et al., 2019)। I/R পিরিয়ডের সময়, অত্যধিক ROS মস্তিষ্কের নিউরনের সরাসরি ক্ষতির দিকে পরিচালিত প্রধান কারণগুলির মধ্যে একটি (Ding et al., 2014)। ROS অতিরিক্ত উৎপাদন কিছু জংশনের অবক্ষয় এবং BBB ব্যাঘাতের দিকে পরিচালিত করে, যার ফলে BBB-এর মাধ্যমে বহিরাগত অণুগুলি মস্তিষ্কে প্রবেশ করে, যার ফলে মস্তিষ্কের ক্ষতি বৃদ্ধি পায় (Cheon et al., 2016; Zhang QY et al., 2017)। তাই, অ্যান্টি-অক্সিডেন্ট দ্বারা BBB সুরক্ষাকে রিপারফিউশন আঘাত প্রতিরোধের একটি সম্ভাব্য উপায় হিসাবে বিবেচনা করা হয়েছে।

BBB এর ভাঙ্গন ছাড়াও, I/R এর ফলে নিউরোভাসকুলার ইনজুরি এবং নিউরোনাল মৃত্যু হতে পারে (Jung et al., 2010)। স্ট্রোকের সময়, অক্সিডেটিভ স্ট্রেস (চি এট আল।, 2018) থেকে বর্ধিত নিউরোনাল কোষের মৃত্যু হতে পারে এবং অসংখ্য গবেষণায় দেখা গেছে যে ROS স্ট্রোকের তীব্রতা এবং স্নায়বিক ক্ষতিকে বাড়িয়ে তোলে (কন্ডো এট আল।, 1997; ক্র্যাক এট আল।, 2001; ক্র্যাক এট আল।, 2006)। যদিও ক্লিনিকাল ট্রায়ালগুলি সন্তোষজনক ফলাফল পায়নি, নিউরোপ্রোটেকশন এখনও তীব্র ইস্কেমিক স্ট্রোকের চিকিত্সার জন্য একটি প্রতিশ্রুতিশীল কৌশল (মোরেটি এট আল।, 2015)। এইভাবে, স্ট্রোকের চিকিত্সার জন্য কার্যকর নিউরোপ্রোটেকশন ড্রাগগুলি খুঁজে পাওয়া স্ট্রোক রোগীদের জন্য একটি সুবিধা।

ঐতিহ্যগত চীনা ওষুধ (TCM) শরীরের অভ্যন্তরীণ ভারসাম্যহীনতার বিরুদ্ধে হস্তক্ষেপ করার ব্যবস্থা নেয় (Gaire, 2018)। ইস্কেমিক স্ট্রোকের জটিল প্যাথোজেনেসিসের কারণে, টিসিএম-এর মাল্টিফ্যাক্টোরিয়াল প্রভাব এবং এর সক্রিয় উপাদানগুলি স্ট্রোকের চিকিত্সায় একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। Cistanche deserticola YC Ma, মঙ্গোলিয়া এবং উত্তর-পশ্চিম চীন জুড়ে শুষ্ক বা আধা-শুষ্ক এলাকায় বিস্তৃত, চীনে 1,000 বছরেরও বেশি সময় ধরে ভুলে যাওয়া এবং বিষণ্নতার মতো বিভিন্ন রোগের চিকিত্সার জন্য একটি বহুল ব্যবহৃত TCM ভেষজ। . আধুনিকফার্মাকোলজিকাল স্টাডিজ ইঙ্গিত করে যে অশোধিত নির্যাস থেকেগ. মরুভূমিএকাধিক ফার্মাকোলজিকাল ক্রিয়াকলাপ দেখিয়েছে, যেমন শেখার এবং মেমরি ফাংশন বাড়ানো, নিউরোপ্রোটেকশন, অনাক্রম্যতা বাড়ানো, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট, অ্যান্টি-এজিং, এবং অ্যান্টিফ্যাটিগ প্রভাব (Ko and Leung, 2007; Wang et al., 2012; Li et al., 2015)। C. deserticola এর রাসায়নিক বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে এর প্রধান গঠনের মধ্যে রয়েছে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড, ইরিডয়েড গ্লাইকোসাইড, পলিস্যাকারাইড এবং অলিগোস্যাকারাইড (জিয়াং এবং টু, 2009)। যাইহোক, মস্তিষ্ক সুরক্ষার জন্য C. deserticola এর সক্রিয় উপাদানগুলি খুব স্পষ্ট নয়।C. deserticola-এর নিউরোপ্রোটেক্টিভ সম্পত্তি স্ট্রোক এবং বিষণ্নতার মতো জ্ঞানীয়-সম্পর্কিত অসুস্থতার পাশাপাশি আল্জ্হেইমের রোগ (ওয়াং এট আল।, 2017) এর থেরাপিউটিক সম্ভাবনাকে বোঝায়। তবে এর প্রভাব নিয়ে গবেষণাগ. মরুভূমিস্ট্রোকের উপর, এর সক্রিয় উপাদান এবং কর্ম প্রক্রিয়া সহ, খুব সীমিত। বর্তমান কাজে, আমরা C. deserticola থেকে তিনটি নির্যাস, মোট গ্লাইকোসাইডস (TGs, phenylethanoid glycosides, and other glycosides), polysaccharides (PSs), এবং oligosaccharides (OSs) সেরিব্রাল I/R আঘাতের প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব অন্বেষণ করেছি। আমাদের অনুসন্ধানগুলি সঠিক ক্লিনিকাল প্রয়োগে অবদান রাখতে পারেগ. মরুভূমিএবং ইস্কেমিক স্ট্রোক থেরাপির জন্য একজন প্রার্থী এজেন্ট প্রদান করুন।

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

রাসায়নিক এবং বিকারক

Cistanche deserticola এর ডালপালা আলাশান, অভ্যন্তরীণ মঙ্গোলিয়া থেকে কেনা হয়েছিল এবং একজন লেখক (P.-F. Tu) দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছিল। টিজি, পিএস এবং ওএসগুলি আমাদের পূর্বে রিপোর্ট করা পদ্ধতি অনুসারে প্রস্তুত করা হয়েছিল (গাও এট আল।, 2015)। TG-এর পরিমাণগত বিশ্লেষণ পূর্বে বর্ণিত হিসাবে উচ্চ-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (HPLC) দ্বারা সম্পাদিত হয়েছিল (Li et al, 2019), এবং এর ক্রোমাটোগ্রাম চিত্র 1-এ দেখানো হয়েছে। TG-এর প্রধান উপাদানগুলি হল echinacoside, tubuloside A, acteoside, iso- অ্যাক্টিওসাইড, এবং 2'-অ্যাসিটিল্যাক্টোসাইড; তাদের বিষয়বস্তু যথাক্রমে 163.05 mg/g, 4.125 mg/g, 41.66 mg/g, 22.655 mg/g, এবং 12.045 mg/g। PSs এবং OS-এর বিষয়বস্তু যথাক্রমে 69.42 শতাংশ এবং 65.24 শতাংশ, যথাক্রমে, HPLC এবং ফেনল-সালফিউরিক অ্যাসিড বিশ্লেষণ দ্বারা নির্ধারিত (ঝাং এ. এট আল।, 2018; শি এট আল, 2019)।

ইচিনাকোসাইড (A0282), টিউবুলসাইড A (A0942), অ্যাকটিওসাইড (A0280), আইসো-অ্যাক্টিওসাইড (A0281), এবং 2'- অ্যাসিটিল্যাকটিওসাইড (A0943) এর প্রমিত রেফারেন্স চেংডু মাস্ট বায়োটেকনোলজি (সিচুয়ান, চীন) থেকে কেনা হয়েছিল। সমস্ত মানগুলির বিশুদ্ধতা 98 শতাংশের বেশি। Nissl stain H&E কিটগুলি বোস্টার (উহান, চীন) থেকে কেনা হয়েছিল। এদারাভোন (T0407-1) টার্গেট মোল (সাংহাই, চীন) থেকে কেনা হয়েছিল। খরগোশ বিরোধী এমএপি-2 (ab32454), Nrf-2 (ab31163), PDGFRb (ab32570), Keap-1 (ab66620), এবং মাউস অ্যান্টি-ইঁদুর CD31 (ab24590) কেনা হয়েছিল Abcam Inc (Cambridge, MA, USA) থেকে। খরগোশ বিরোধী ইঁদুর Claudin5 (BS1069), ZO-1 (BS9802M), এবং Occludin (BS72035) বায়োওয়ার্ল্ড প্রযুক্তি (নানজিং, চীন) থেকে কেনা হয়েছিল। সেল সিগন্যালিং টেকনোলজি ইনক। (বোস্টন, এমএ, ইউএসএ) ছিল খরগোশ বিরোধী ইঁদুর সিনাপসিন-1 (SYN,5297T), PSD95 (3450T), a-মসৃণ পেশী অ্যাক্টিন (a-SMA,19245T) এর উত্স। GAPDH (HRP-60004) Proteintech Group, Inc. (শিকাগো, USA) থেকে কেনা হয়েছিল। সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি জোংশান গোল্ডেন ব্রিজ বায়োটেকনোলজি (বেইজিং, চীন) দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল। Hoechst 33258 Beyotime (জিয়াংসু, চীন) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল।

প্রাণী

স্প্রাগ-ডাওলি ইঁদুর (পুরুষ, 250-300 গ্রাম ওজনের) ভাইটাল রিভার ল্যাবরেটরি অ্যানিমাল টেকনোলজি (বেইজিং, চীন) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল এবং 12 ঘন্টা আলো/অন্ধকার চক্রে রাখা শীতাতপ নিয়ন্ত্রিত ঘরে রাখা হয়েছিল। সমস্ত প্রাণী পরীক্ষা পশু গবেষণা ARRIVE নির্দেশিকা দ্বারা সঞ্চালিত হয়েছিল (কিলকেনি এট আল।, 2010; ম্যাকগ্রা এট আল।, 2010), এবং পেকিং ইউনিভার্সিটি হেলথ সায়েন্স সেন্টার (LA2019123) এর প্রাতিষ্ঠানিক প্রাণী যত্ন ও ব্যবহার কমিটি দ্বারা অনুমোদিত।

পশু পরীক্ষামূলক প্রোটোকল

ইঁদুরগুলি MCAO/R-এর অধীন ছিল, যেমন পূর্বে বর্ণিত হয়েছে (ওয়াং এট আল।, 2018)। সংক্ষেপে, বাম সাধারণ ক্যারোটিড ধমনী (সিসিএ), বাহ্যিক ক্যারোটিড ধমনী (ইসিএ), এবং অভ্যন্তরীণ ক্যারোটিড ধমনী (আইসিএ) উন্মুক্ত করা হয়েছিল, এবং মাঝখানে পৌঁছানো পর্যন্ত ইসিএ থেকে একটি 3-0 নাইলন মনোফিলামেন্ট সিউচার ঢোকানো হয়েছিল। সেরিব্রাল আর্টারি (MCA)। এমসিএ আবদ্ধতার 1.5 ঘন্টা পরে, ফিলামেন্টটি সরিয়ে রিপারফিউশন সিমুলেট করা হয়েছিল। অস্ত্রোপচারের সময়, সমস্ত ইঁদুরের শরীরের তাপমাত্রা 37.0 ডিগ্রি বজায় রাখা হয়েছিল।

ওষুধ প্রশাসন

SPSS সফ্টওয়্যার সংস্করণ 22 ব্যবহার করে ইঁদুরগুলিকে এলোমেলোভাবে ছয়টি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল। মডেল গ্রুপ (MOD); edaravone গ্রুপ (পজিটিভ ড্রাগ, 6 mL/kg, EDI); TGs গ্রুপ (280 mg/kg, TGs); PSs গ্রুপ (280 mg/kg, PSs), এবং OSs গ্রুপ (280 mg/kg, OSs)। TGs, PSs, এবং OSs 14 দিনের জন্য MCAO/R-এর পরে দিনে একবার পরিচালিত হয়েছিল। NOR এবং MOD গ্রুপগুলিকে সাধারণ স্যালাইন দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। প্রাণীর সংখ্যা সারণী 1 এ দেখানো হয়েছে।

ওজন পরিমাপ এবং পরিবর্তিত স্নায়বিক ঘাটতি স্কোর (mNSS)

একটি ADVENTURE™ ডিজিটাল স্কেল (OHAUS, New Jersey, USA) ব্যবহার করে 14 তম দিনে শরীরের ওজন নিরীক্ষণ করা হয়েছিল। এফজে ওয়াং (ওয়াং এট আল।, 2018) দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে mNSS মূল্যায়ন করা হয়েছিল, ছোটখাটো সংশোধন সহ।

2, 3, 5-ট্রাইফেনাইলটেট্রাজোলিয়াম ক্লোরাইড (টিটিসি) স্টেনিং

পূর্বে বর্ণিত হিসাবে ইনফার্কের পরিমাণ পরিমাপ করা হয়েছিল (ওয়াং এট আল।, 2015)। সংক্ষেপে, মস্তিষ্ককে সাতটি সমান ব্যবধানযুক্ত করোনাল ব্লকে (2 মিমি) ভাগ করা হয়েছিল। এই বিভাগগুলি 15 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রিতে 2 শতাংশ TTC (কুলবার, বেইজিং, চীন) দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল। ইনফার্কট আয়তন ( শতাংশ )=(ipsilateral ischemic hemisphere volume −contralateral ischemic hemisphere volume)/contralateral ischemic hemisphere volume × 100।

Nissl এবং H&E স্টেনিং

ইঁদুরগুলিকে গভীরভাবে চেতনানাশক করা হয়েছিল, এবং পুরো মস্তিষ্কটি দ্রুত মাথার খুলি থেকে সরানো হয়েছিল এবং 4 শতাংশ প্যারাফর্মালডিহাইড ব্যবহার করে ঠিক করা হয়েছিল এবং প্যারাফিন মোমের মধ্যে এম্বেড করা হয়েছিল এবং 7 µm পুরুত্বের স্লাইসগুলিতে ভাগ করা হয়েছিল। বিভাগগুলি Nissl এবং H&E দিয়ে দাগযুক্ত ছিল। এই গবেষণায়, প্রতিটি টিস্যুর নমুনায় হালকা মাইক্রোস্কোপ দিয়ে ছয়টি এলোমেলো 200 × 200 µm ক্ষেত্র ক্যাপচার করা হয়েছিল। আইপিপি সফ্টওয়্যার সংস্করণ 6.0 (মিডিয়া সাইবারনেটিক্স, বেথেসডা, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) দিয়ে নিসলের মৃতদেহের সংখ্যা গণনা করা হয়েছিল।

ইভান্স ব্লু অ্যাস

MCAO/R এর পরে ইঁদুরকে 2 শতাংশ EB (Coolaber Science & Technology Co., LTD) দিয়ে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল। দুই ঘন্টা পরে, ইঁদুরগুলিকে অ্যানেস্থেশিয়া করা হয়েছিল এবং তারপরে পুরো মস্তিষ্ক দ্রুত সরিয়ে দেওয়া হয়েছিল এবং অ্যাসিটোনে একজাতকরণ করা হয়েছিল। সুপারন্যাট্যান্টগুলি 800 টিএস শোষণকারী পাঠক (বায়োটেক, ইউএসএ) দ্বারা 620 এনএম-এ বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

ক্যাটালেস (CAT), সুপারঅক্সাইড ডিসম্যুটেজ (SOD), ম্যালোন্ডিয়ালডিহাইড (MDA), এবং Glutathione Peroxidase (GSH-Px) এর কার্যকলাপের পরিমাপ

সমস্ত সিরাম নমুনা 4,000 × rpm-এ 15 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রিতে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল এবং তারপর প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসরণ করে MDA, CAT, SOD, এবং GSH-Px-এর কার্যকলাপ সনাক্ত করতে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল (জিয়াংসু মেমিয়ান ইন্ডাস্ট্রিয়াল কো., লিমিটেড, চীন)।

ওয়েস্টার্ন ব্লটিং বিশ্লেষণ

প্রতিটি ইঁদুর থেকে সংগৃহীত মস্তিষ্কের টিস্যুগুলি (100 মিলিগ্রাম) একত্রিত করা হয়েছিল এবং RIPA লাইসিস বাফারে লাইজ করা হয়েছিল, এবং তারপর বিসিএ কিট (বেইজিং ট্রান্সজেন বায়োটেক কোং, লিমিটেড) ব্যবহার করে প্রোটিনের ঘনত্ব সনাক্ত করতে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। টিস্যু মোট প্রোটিনগুলি 10 শতাংশ SDS-PAGE জেলগুলিতে লোড করা হয়েছিল এবং একটি নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত হয়েছিল। ঝিল্লিটি 5 শতাংশ স্কিম মিল্ক ব্যবহার করে ব্লক করা হয়েছিল, তারপর 4 ডিগ্রিতে প্রাথমিক অ্যান্টিবডি দিয়ে রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল। ঝিল্লি তারপর একটি সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি সঙ্গে incubated ছিল. কোডাক ডিজিটাল ইমেজিং সিস্টেম (5200 মাল্টি, ট্যানন, চীন) ব্যবহার করে ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

ইমিউনোফ্লুরোসেন্ট বিশ্লেষণ

CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, occludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, Nrf-2, এবং Keap-1 এর জন্য ইমিউনোফ্লোরোসেন্স স্টেনিং করা হয়েছিল৷ Nrf-2, CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, occludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, এবং Keap-1-এর বিরুদ্ধে প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলিকে পাতলা করা হয়েছিল যথাক্রমে 1:200 এবং 1:100। আলেক্সা ফ্লুর 488 মাউস অ্যান্টি-র্যাবিট আইজিজি এবং রোডামাইন (টিআরআইটিসি) ছাগল অ্যান্টি-র্যাবিট আইজিজি-এর সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি দুটিই 1:200 এ পাতলা করা হয়েছিল। নিউক্লিয়াসটি Hoechst 33258 দ্বারা দাগযুক্ত ছিল। ছবিগুলি Vectra® Polaris™ অটোমেটেড কোয়ান্টিটেটিভ প্যাথলজি ইমেজিং সিস্টেম (PerkinElmer, USA) ব্যবহার করে ক্যাপচার করা হয়েছিল। প্রোটিন এক্সপ্রেশনটি IPP সফ্টওয়্যার সংস্করণ 6.0 ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।

পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

সমস্ত ডেটা গড় ± SD হিসাবে বর্ণনা করা হয়েছিল। SPSS সফ্টওয়্যার সংস্করণ 22৷{1}} পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণের জন্য সম্পাদিত হয়েছিল৷ বিভিন্ন গোষ্ঠীর তুলনা করার সময় একমুখী আনোভা ব্যবহার করা হয়েছিল। P < 0.05="" পরিসংখ্যানগত="" পার্থক্য="" হিসাবে="" বিবেচিত="">

ফলাফল

TGs শরীরের ওজন বাড়ায় এবং MCAO/R ইঁদুরের মস্তিষ্কের ক্ষতি কমায়

TGs, PSs, Oss এবং EDI দিয়ে নিরাময়ের 14 দিন পর, শরীরের ওজন, স্নায়বিক ঘাটতি এবং I/R ইঁদুরের ইনফার্কের পরিমাণ মূল্যায়ন করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি দেখায় যে এমওডি গ্রুপে শরীরের ওজন ব্যাপকভাবে হ্রাস পেয়েছে, যখন টিজি, পিএস এবং ইডিআই গ্রুপের ওজন হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 2এ)। ইডিআই এবং টিজি (চিত্র 2বি) দ্বারা স্নায়বিক ঘাটতির স্কোর যথেষ্ট পরিমাণে হ্রাস পেয়েছে। এনওআর গ্রুপের ইঁদুরের মস্তিষ্কের স্লাইসগুলি গভীর লাল ছিল এবং কোনও ইনফার্কশন ছিল না, যখন এমওডি গ্রুপের ইঁদুরগুলি একটি বড় ipsilateral সেরিব্রাল ইনফার্কশন দেখিয়েছিল। TGs চিকিত্সার পরে, ইনফার্কের পরিমাণ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (চিত্র 2C, D)। PSs এবং OSs চিকিত্সা উপরের সূচকগুলিতে কোনও সুস্পষ্ট প্রভাব দেখায়নি। উপরের তথ্যগুলি দেখায় যে TGs লক্ষণীয়ভাবে I/R-প্ররোচিত সেরিব্রাল আঘাতকে উপশম করতে পারে, কিন্তু PSs এবং OSs পারেনি।

এমসিএও/আর ইঁদুরগুলিতে টিজিগুলি হিস্টোপ্যাথোলজিকাল ক্ষতি কমিয়ে দেয়

হিস্টোপ্যাথোলজিকাল ক্ষতির উপর TGs, PSs এবং OSs চিকিত্সার কিছু প্রভাব নির্ধারণ করতে, প্যাথলজিকাল ক্ষতি প্রকাশ করার জন্য H&E স্টেনিং করা হয়েছিল। এনওআর গ্রুপের মস্তিষ্কের হিস্টোমরফোলজিকাল কাঠামো নিয়মিতভাবে সাজানো হয়েছিল। TGs গোষ্ঠীর আকারবিদ্যা পরিবর্তনগুলি MOD গ্রুপের তুলনায় সামান্য ছিল। যাইহোক, PSs এবং OSs চিকিত্সা গোষ্ঠীগুলি অঙ্গসংস্থানের পরিবর্তনগুলির কোনও উল্লেখযোগ্য উন্নতি দেখায়নি (চিত্র 3)।

আই/আর-প্ররোচিত ইঁদুরের পরে টিজিগুলি নিউরোনাল ইনজুরি কমিয়ে দেয়

নিসল স্টেনিং ইস্কেমিক এলাকার পেনাম্ব্রাতে নিউরনের হিস্টোপ্যাথোলজিকাল পরিবর্তন দেখিয়েছে। চিত্র 4 এ দেখানো হয়েছে, স্বাভাবিক নিউরনগুলির একটি পরিষ্কার নিউক্লিওলাস এবং অক্ষত গঠন ছিল। এমওডি গ্রুপে, নিউরনগুলি আন্তঃকোষীয় স্থানগুলিকে বর্ধিত করেছিল। নিস্‌ল মৃতদেহগুলি অদৃশ্য, সঙ্কুচিত এবং গভীর দাগযুক্ত। যাইহোক, এই পরিবর্তনগুলি খুব কমই ইডিআই, টিজি এবং পিএস গ্রুপগুলিতে পরিলক্ষিত হয়েছিল। এই ফলাফলগুলি চিত্রিত করে যে TGs এবং PSs উল্লেখযোগ্যভাবে ইসকেমিয়া/রিপারফিউশন-প্ররোচিত নিউরোনাল আঘাতকে হ্রাস করতে পারে।

I/R-চিকিত্সা করা ইঁদুরের পরে TGs BBB ব্যাঘাত কমায়

ইভান্স ব্লু অ্যাস হল BBB ব্যাপ্তিযোগ্যতার পরিবর্তন নিয়ে গবেষণা করার জন্য একটি শাস্ত্রীয় পদ্ধতি। পরীক্ষার ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে এমওডি গ্রুপে ইভান্স ব্লু বর্ধিত হয়েছে, যখন টিজি এবং ইডিআই-চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে ইভান্স ব্লু উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। অধিকন্তু, PSs এবং OSs থেরাপি গ্রুপগুলির মধ্যে কোন উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না (চিত্র 5)। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দিয়েছে যে TGs উল্লেখযোগ্যভাবে BBB ব্যাঘাত হ্রাস করতে পারে।

TGs I/R আহত ইঁদুরের মধ্যে এনজিওজেনেসিস প্রচার করে

আরও সাম্প্রতিক গবেষণা দেখায় যে অ্যাঞ্জিওজেনেসিস তীব্র ইস্কেমিক স্ট্রোকের পরে স্নায়বিক কার্যকরী পুনরুদ্ধার এবং প্রগনোস্টিক ফলাফলে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে (ইউয়েন এট আল।, 2015)। এনজিওজেনেসিসে টিজি, পিএস এবং ওএস-এর প্রভাবগুলি মূল্যায়ন করতে, সিডি 31 এবং এ-এসএমএ কৈশিক সংখ্যাগুলি পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। ইমিউনোফ্লোরেসেন্স স্টেনিং দেখায় যে MOD গ্রুপটি সাধারণ ইঁদুরের তুলনায় I/R ইঁদুরের ইস্কেমিক অঞ্চলের পেনাম্ব্রাতে CD31 (চিত্র 6A, B) এবং a-SMA (চিত্র 6C, D) এর অভিব্যক্তিতে একটি উল্লেখযোগ্য হ্রাস ঘটায়। . এই ফলাফলটি চিত্রিত করে যে I/R ইস্কেমিক গোলার্ধের কর্টেক্স পেনাম্ব্রাতে ভাস্কুলার ক্ষতির কারণ হতে পারে। যাইহোক, TGs এবং EDI চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে কৈশিক ঘনত্ব, এনজিওজেনেসিস এবং আর্টেরিওজেনেসিস বৃদ্ধি করেছে যা CD31 এবং a-SMA এর বর্ধিত অভিব্যক্তি দ্বারা নির্দেশিত। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে টিজিগুলি I/R ইঁদুরের ইস্কেমিক পেনাম্ব্রাতে অ্যাঞ্জিওজেনেসিসকে উন্নীত করতে পারে, কিন্তু পিএস এবং ওএসগুলি পারেনি।

TGs I/R আহত ইঁদুরে টাইট জংশন প্রোটিনের প্রকাশ বাড়ায়

BBB ব্যাঘাত মস্তিষ্কের জলের পরিমাণ বাড়িয়ে তুলতে পারে এবং টিস্যু ফুলে যেতে পারে, যা মস্তিষ্কের আঘাতের দিকে পরিচালিত করে। টাইট জংশন প্রোটিনগুলি BBB এর গুরুত্বপূর্ণ কাঠামোগত উপাদান (টেনরিরো এট আল।, 2016; জিয়াং এট আল।, 2018)। স্ট্রোকের পরে TGs, PSs, এবং OSs চিকিত্সা BBB অখণ্ডতাকে প্রভাবিত করতে পারে কিনা তা পরীক্ষা করার জন্য, ZO-1, claudin-5, এবং occludin-এর অভিব্যক্তিগুলি ইমিউনোফ্লোরোসেন্স বিশ্লেষণ দ্বারা সঞ্চালিত হয়েছিল। ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে ক্লাউডিন-5, অক্লুডিন এবং ZO-1 এর অভিব্যক্তিগুলি MOD গ্রুপে দৃশ্যত হ্রাস পেয়েছে৷ যাইহোক, TGs প্রশাসনের 14 দিন পরে তারা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। PSs এবং OSs গোষ্ঠীগুলি এই প্রোটিন এক্সপ্রেশনগুলিতে কোনও উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন দেখায়নি (চিত্র 7)। এই তথ্যগুলি নির্দেশ করে যে TGs টাইট জংশন প্রোটিন এক্সপ্রেশন নিয়ন্ত্রণ করতে পারে এবং সম্ভবত I/R আঘাতের পরে BBB অখণ্ডতা বজায় রাখতে পারে। TGs I/R আহত ইঁদুরের কৈশিকগুলির উপর পেরিসাইট কভারেজ বাড়ায় কৈশিকগুলির পেরিসাইট কভারেজ BBB অখণ্ডতা বজায় রাখতে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে (আর্মুলিক এট আল।, 2010; ডেনম্যান এট আল।, 2010)। এইভাবে, আমরা পরীক্ষা করেছি যে টিজি, পিএস এবং ওএস চিকিত্সা দ্বারা পেরিসাইট কভারেজ বাড়ানো যায় কিনা। ইমিউনোফ্লোরেসেন্স তীব্রতা বিশ্লেষণের ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে PDGFRb এবং CD31 উভয় অভিব্যক্তিই MOD গ্রুপে নাটকীয়ভাবে হ্রাস পেয়েছে। I/R ইঁদুরগুলিতে TG-এর প্রশাসন উল্লেখযোগ্যভাবে পুনরুদ্ধার করেছে বা PDGFRb এবং CD31 এর অভিব্যক্তির তীব্রতা বাড়িয়েছে, কিন্তু PSs এবং OSs চিকিত্সা গোষ্ঠীগুলিতে কোনও পার্থক্য পরিলক্ষিত হয়নি (চিত্র 8)। এইভাবে, টিজিগুলির চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে পেরিসাইট কভারেজ বৃদ্ধি করতে পারে। এই ফলাফলগুলি আরও নিশ্চিত করেছে যে TGs I/R এর পরে BBB এর অখণ্ডতা বজায় রাখতে পারে।

TGs I/R আহত ইঁদুরে নিউরাল রিমডেলিং প্রচার করে

অসংখ্য গবেষণা অনুসারে, স্ট্রোকের পরে নিউরোজেনেসিস কার্যকরী পুনরুদ্ধারের উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নতি করতে পারে (Grefkes and Ward, 2014; Zhang et al., 2019)। সিনাপটোফিসিন (SYN), পোস্টসিনাপটিক ঘনত্ব 95 (PSD-95) প্রোটিন, এবং মাইক্রোটিউবুল-সম্পর্কিত প্রোটিন 2 (MAP-2) কর্টেক্সের ইস্কেমিক পেনাম্ব্রাতে নিউরোনাল প্লাস্টিকতা পরীক্ষা করার জন্য চিহ্নিতকারী হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। I/R আহত ইঁদুরের নিউরোজেনেসিসের উপর TGs, PSs এবং OSs চিকিত্সার প্রভাব মূল্যায়ন করতে, SYN, PSD95, এবং MAP-2 এক্সপ্রেশনের জন্য ইমিউনোফ্লোরোসেন্স এবং ওয়েস্টার্ন ব্লট সঞ্চালিত হয়েছিল। চিত্র 9 এবং 10 এ দেখানো হয়েছে, SYN, PSD95, এবং MAP-2 প্রকাশের মাত্রা 14 দিনের রিপারফিউশনের পরে I/R ইঁদুরগুলিতে NOR ইঁদুরের তুলনায় কমেছে, যখন TGs এবং PSs নিরাময় উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেতে পারে- তাদের অভিব্যক্তি মাত্রা নিয়ন্ত্রণ. MOD গ্রুপের তুলনায় OSs গ্রুপের কোন উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন হয়নি। তথ্য নির্দেশ করে যে TGs এবং PSs নিরাময় I/R আঘাতের পরে নাটকীয়ভাবে স্নায়ু পুনর্নির্মাণের প্রচার করতে সক্ষম হয়েছিল।

I/R আহত ইঁদুরে TGs Alter Nrf-2 এবং Keap-1 এক্সপ্রেশন

অক্সিডেটিভ স্ট্রেস হল I/R আঘাতের একটি প্রধান প্যাথোজেনিক প্রক্রিয়া (Ya et al., 2018; Yu et al., 2018)। গবেষণাগুলি যাচাই করেছে যে Nrf-2 হল অ্যান্টিঅক্সিডেটিভ প্রতিক্রিয়াগুলির একটি প্রধান নিয়ন্ত্রক (Thompson et al., 2015)৷ I/R আঘাতের পরে Nrf-2 এবং Keap-1 মধ্যস্থিত অক্সিডেটিভ প্রতিক্রিয়াগুলি তদন্ত করতে, আমরা সাইটোপ্লাজমিক এক্সপ্রেশনের পাশাপাশি Keap-1-এর পারমাণবিক ট্রান্সলোকেশন মূল্যায়ন করেছি। ইতিমধ্যে, I/R আহত ইঁদুরের মস্তিষ্কের টিস্যুতে Nrf-2 এর অভিব্যক্তিও পরীক্ষা করা হয়েছিল (চিত্র 10 এবং 11)। ইমিউনোফ্লোরোসেন্স বিশ্লেষণ অনুসারে, এনআরএফ{10}} প্রধানত NOR গ্রুপের সাইটোপ্লাজমে অবস্থিত বলে পাওয়া গেছে। TGs গ্রুপে, সাইটোপ্লাজমিক লোকালাইজেশনে Nrf-2-এর অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রিত ছিল, কিন্তু নিউক্লিয়াসে আপ-নিয়ন্ত্রিত, এবং কমে যাওয়া Keap-1 অভিব্যক্তিও পরিলক্ষিত হয়েছে। ডেটা দেখায় যে TG-এর মস্তিষ্ক সুরক্ষা Nrf-2 এবং Keap-1 এর মডুলেশনের সাথে যুক্ত হতে পারে

I/R আহত ইঁদুরে TGs মস্তিষ্কের টিস্যু অক্সিডেটিভ স্ট্রেসকে কমিয়ে দেয়

TG-এর অ্যান্টিঅক্সিডেটিভ প্রভাব নিশ্চিত করার জন্য, SOD, CAT, GSH-Px, এবং MDA-এর কার্যকলাপগুলি I/R আহত ইঁদুরগুলিতে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। চিত্র 12-এ, MOD গ্রুপে MDA-এর বিষয়বস্তু উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে এবং একই সময়ে, SOD, CAT, এবং GSH-Px-এর কার্যক্রম স্বাভাবিক ইঁদুরের তুলনায় কমে গেছে। বিপরীতভাবে, TGs চিকিত্সা MDA এর বিষয়বস্তু একটি উল্লেখযোগ্য হ্রাস এবং SOD, CAT, এবং GSH-Px এর কার্যকলাপ বৃদ্ধির দিকে পরিচালিত করে। এই ফলাফলগুলি টিজিগুলির অ্যান্টিঅক্সিডেশন কার্যকলাপকে আরও নিশ্চিত করেছে।

আলোচনা

অনেক গবেষণা পরামর্শ দেয় যে TCMগ. মরুভূমিএর ব্যাপক জৈবিক কার্যক্রম রয়েছে, যেমন শেখার ক্ষমতা, স্মৃতিশক্তি এবং রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা বৃদ্ধি করা (ডং এট আল।, 2007; জিয়াং এবং তু, 2009; ওয়াং এট আল।, 2017; জিয়া এট আল।, 2018)। যাইহোক, নিউরোপ্রোটেকশনের জন্য C. deserticola এর সক্রিয় উপাদানগুলি অস্পষ্ট থাকে। বর্তমান কাজের লক্ষ্য থেকে সক্রিয় উপাদান স্ক্রীন করাগ. মরুভূমিMCAO/R মডেলে ইস্কেমিক স্ট্রোকের বিরুদ্ধে। C. deserticola (TGs, PSs, এবং OSs) থেকে তিনটি নির্যাস এমসিএও/আর ইঁদুরের পাশাপাশি সম্ভাব্য প্রক্রিয়াগুলির উপর তাদের প্রভাব মূল্যায়ন করতে ব্যবহার করা হয়েছিল।

স্ট্রোক একটি সাধারণ তীব্র সেরিব্রোভাসকুলার রোগ। এপিডেমিওলজিকাল স্টাডিজ দেখায় যে স্ট্রোক মহিলাদের তুলনায় পুরুষদের মধ্যে বেশি দেখা যায় (সিলি-জেফারসন এট আল।, 2012; গুজিক এবং বুশনেল, 2017)। এইভাবে, আমাদের পরীক্ষায়, পরীক্ষার জন্য পুরুষ ইঁদুর গৃহীত হয়েছিল। আমাদের ফলাফলগুলি প্রমাণ করেছে যে I/R ইন্ডাকশন অক্সিডেটিভ স্ট্রেস এবং ইনফার্কের পরিমাণকে ত্বরান্বিত করে, BBB ভেঙে দেয় এবং স্নায়ু এবং সেরিব্রোভাসকুলার আঘাতের দিকে পরিচালিত করে। স্ক্রিনিংয়ের পরে, টিজিগুলি ইনফার্কের পরিমাণ হ্রাস করতে এবং নিউরাল রিমডেলিং এবং অ্যাঞ্জিওজেনেসিসকে প্রচার করতে দেখা গেছে। তদুপরি, I/R আঘাতের পরে BBB অখণ্ডতা বজায় রাখার জন্য TGs পরিলক্ষিত হয়েছিল। বিপরীতে, PSs এবং OS I/R আঘাতে কোন উল্লেখযোগ্য উপশম আনে না। এইভাবে, TGs এর প্রধান সক্রিয় ভগ্নাংশ হিসাবে বিবেচিত হয়গ. মরুভূমিনিউরোপ্রোটেকশনের জন্য, সম্ভাব্যভাবে Nrf- 2/Keap-1 পাথওয়ে সক্রিয় করার মাধ্যমে নিউরাল রিমডেলিং, এনজিওজেনেসিস এবং BBB অখণ্ডতা প্রচারের মাধ্যমে।

মাউন্টিং প্রমাণ ইঙ্গিত করে যে ইনফার্কশন এবং ইস্কেমিক পেনাম্ব্রা গঠন এড়ানোর জন্য কার্যকর সমান্তরাল সঞ্চালন প্রতিষ্ঠা উল্লেখযোগ্যভাবে গুরুত্বপূর্ণ, এবং ইস্কেমিক স্ট্রোকের প্রাথমিক পর্যায়ে এটি একটি গুরুত্বপূর্ণ চিকিত্সা (ElAli, 2016; Iwasawa et al., 2016)। ইসকেমিক ইনফার্কশনের পরে ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়াল কোষ এবং মসৃণ পেশী কোষগুলির বিস্তার সমান্তরাল সঞ্চালনের প্রতিষ্ঠা নির্ধারণ করে। যাইহোক, ইসকেমিয়া মডেলগুলির একটি সাধারণ ঘটনা রয়েছে - অর্থাৎ, অক্সিডেটিভ স্ট্রেস মস্তিষ্কের মাইক্রোভাস্কুলচারে ব্যাপকভাবে বিদ্যমান। অধ্যয়নের তথ্য প্রদর্শন করেছে যে প্রচুর পরিমাণে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট BBB এর কার্যকারিতা এবং অ্যাঞ্জিওজেনেসিসের বৈশিষ্ট্যগুলিকে বিরক্ত করতে পারে (মেন্টর এবং ফিশার, 2017)। CD31 এবং a-SMA যথাক্রমে ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়াল কোষের পাশাপাশি মসৃণ পেশী কোষের চিহ্নিতকারী (সবুর এট আল।, 2016)। থেকে নির্যাস উপরোক্ত উল্লিখিত কোষ বিস্তারের উপর প্রভাব তদন্ত করতেগ. মরুভূমি, আমরা সেরিব্রাল ইস্কেমিক পেনাম্ব্রা হোমোজেনেটে CD31 এবং a-SMA এর অভিব্যক্তিগুলি পরীক্ষা করেছি। আমাদের ডেটা দেখিয়েছে যে TGs CD31 এবং a-SMA এর অভিব্যক্তিগুলিকে আকর্ষণীয়ভাবে উন্নত করেছে। যাইহোক, PSs এবং OSs গ্রুপগুলির জন্য কোন উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না। অতএব, আমরা অনুমান করেছি যে TGs CD31 এবং a-SMA-এর অভিব্যক্তি বাড়ানোর মাধ্যমে অ্যাঞ্জিওজেনেসিস প্রচার করে মস্তিষ্কের ক্ষতি কমাতে পারে, যেখানে PSs এবং OSs মস্তিষ্কের ক্ষতি থেকে এ জাতীয় কোনও সুরক্ষা প্রদান করেনি। এই ফলাফলগুলি আরও নিশ্চিত করেছে যে শুধুমাত্র TGs সেরিব্রাল I/R আঘাত প্রতিরোধ করতে পারে।

ইস্কেমিক স্ট্রোককে সেরিব্রাল ইসকেমিয়ার ফলাফল হিসাবে ভাবা যেতে পারে যা নিউরোনাল প্লাস্টিসিটি বা মস্তিষ্কের অঞ্চলগুলির পুনর্নির্মাণের কারণে সৃষ্ট। স্ট্রোক রোগীদের বেশিরভাগই স্নায়বিক ঘাটতিতে ভোগেন। নিউরোজেনেসিস সক্রিয় করা স্ট্রোক রোগীদের জন্য তাদের স্নায়বিক ফাংশন উন্নত করার জন্য একটি প্রতিশ্রুতিশীল কৌশল (ক্রেমার এবং চপ, 2000)। নিউরোজেনেসিস মস্তিষ্কের I/R আঘাতের পরে স্নায়বিক ফাংশন পুনরুদ্ধারে সরাসরি অংশগ্রহণ করে (ঝাং এট আল।, 2019)। পূর্ববর্তী গবেষণা দেখায় যে TGs হিপোক্যাম্পাল পিরামিডাল কোষগুলির বেঁচে থাকার হারকে উন্নত করতে পারে এবং নিউরোজেনেসিসকে প্ররোচিত করতে পারে (লিয়ান এট আল।, 2017)। অক্সিডেটিভ স্ট্রেস অনেক রোগের সময় নিউরনের ক্ষয় ঘটায়, যেমন পারকিনসন্স, স্ট্রোক ইত্যাদি (ডুয়ান এবং সি, 2019; সিং এট আল।, 2019)। Nrf-2 তাদের প্রবর্তক অঞ্চলে নিউরোপ্রোটেকশন সম্পর্কিত প্রচুর জিন প্রতিলিপি করে, যার মধ্যে প্রধানত SOD, MDA, CAT, এবং g glutamyl cysteine ​​ligases, ইত্যাদি রয়েছে (Satoh et al., 2006)। SYN, PSD-95, এবং MAP-2 প্রোটিন, যা সিনাপটিক গঠন এবং নিউরোট্রান্সমিশনের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে জড়িত, ইস্কেমিক পেনাম্ব্রা অঞ্চলে গবেষণা নিউরোনাল প্লাস্টিকতার চিহ্নিতকারী হিসাবে বিবেচিত হতে পারে। অধ্যয়ন করার পরে, আমরা দেখেছি যে TG-এর সাহায্যে নিরাময় PSD95, SYN, এবং MAP{10}}-এর অভিব্যক্তিকে উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি করতে পারে, এটি নির্দেশ করে যে TG-এর সেরিব্রাল সুরক্ষা I/R-এর সময় উন্নত নিউরোনাল প্লাস্টিকতার সাথে সম্পর্কযুক্ত ছিল। যাইহোক, এটি একটি দুঃখের বিষয় যে PSs এবং OSs গোষ্ঠীগুলির জন্য কোনও স্পষ্ট পার্থক্য নেই৷ এই ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে TG গুলি সেরিব্রাল I/R আঘাতের পরে নিউরোপ্লাস্টিসিটি বাড়াতে পারে।স্ট্রোক রোগীদের মধ্যে ইমেজিং গবেষণা দেখিয়েছে যে বিবিবি কর্মহীনতাকে পেরি ইস্কেমিক মস্তিষ্কের একটি আকর্ষণীয় বৈশিষ্ট্য হিসাবে বিবেচনা করা যেতে পারে (ব্যাং এট আল।, 2007)। টিজে, যা সাইটোপ্লাজমিক প্রোটিন, ট্রান্সমেমব্রেন প্রোটিন এবং কৈশিক এন্ডোথেলিয়াল কোষগুলির মধ্যে সংযোগ আনুগত্য অণু দ্বারা গঠিত, বিবিবি অখণ্ডতা বজায় রাখার জন্য অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ (ইয়ে এট আল।, 2019)। তাদের মধ্যে, ZO-1, claudin-5, এবং occludin হল TJ-তে সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ প্রোটিন। মাউন্টিং প্রমাণ ইঙ্গিত করে যে ইসকেমিয়া দ্বারা প্ররোচিত BBB এর বর্ধিত ব্যাপ্তিযোগ্যতা সাধারণত ZO-1, claudin-5, এবং occludin (Cao et al., 2016a; Page et al., 2016; Yu) এর পরিবর্তনের সাথে সম্পর্কযুক্ত। এট আল।, 2017; লিউ এট আল।, 2018)। এই কাজে, ফলাফলগুলি দেখায় যে যদিও TGs উল্লেখযোগ্যভাবে ZO-1, ক্লাউডিন-5, এবং MCAO-প্ররোচিত মস্তিষ্কের টিস্যুতে occludin প্রোটিনের অভিব্যক্তি বাড়াতে পারে, PSs বা OSs তা করেনি। BBB সেরিব্রাল এন্ডোথেলিয়াল কোষ নিয়ে গঠিত এবং পেরিসাইটের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে যুক্ত (Nyul-Toth et al., 2016)। বিবিবি অখণ্ডতার জন্য পেরিসাইট অত্যাবশ্যক (বেল এট আল।, 2010)। ইস্কেমিক স্ট্রোক তীব্র পর্যায়ে মস্তিষ্কের এন্ডোথেলিয়াল কোষ থেকে পেরিসাইটের মৃত্যু এবং বিচ্ছিন্নতাকে ট্রিগার করে, এইভাবে মাইক্রোভাসকুলেচারকে অস্থিতিশীল করে এবং BBB বৈশিষ্ট্যগুলিকে পরিবর্তন করে (জেকারিয়া এট আল।, 2013)। আমাদের ডেটা দেখায় যে TG গুলি কৈশিকের উপর পেরিসাইট কভারেজ বাড়াতে পারে এবং ZO-1, claudin-5, এবং occludin-এর এক্সপ্রেশন মাত্রা বাড়াতে পারে। এই ঘটনাগুলি প্রমাণ করেছে যে TGs সেরিব্রাল I/R আঘাতের পরে কার্যকরভাবে BBB অখণ্ডতা রক্ষা করতে পারে। সংক্ষেপে, টিজিগুলি সেরিব্রালের আঘাতকে একাধিক উপায়ে কমিয়ে দিতে পারে, যেমন এনজিওজেনেসিস প্রচার করা, নিউরোনাল প্লাস্টিসিটি উন্নত করা এবং BBB এর অখণ্ডতা বজায় রাখা।

তারপরে আমরা TGs মস্তিষ্ক সুরক্ষার অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াটি অন্বেষণ করার জন্য সিগন্যালিং পথটি তদন্ত করেছি। I/R আঘাতের প্রক্রিয়াটি বহুমুখী, এবং এইভাবে অসংখ্য প্রক্রিয়া প্যাথোজেনেসিসের সাথে জড়িত। অক্সিডেটিভ স্ট্রেস হল একটি মৌলিক ঝুঁকির কারণ যা I/R-প্ররোচিত মস্তিষ্কের আঘাতে অবদান রাখে (Suda et al., 2013), যেমন BBB কাঠামোর ক্ষতি, ভাস্কুলার এন্ডোথেলিয়াল কর্মহীনতা, এবং ইস্কেমিক নিউরোনাল আঘাতের বৃদ্ধি (Xiong et al., 2015; Caglayan); et al., 2019; Priestley et al., 2019)। এইভাবে, অক্সিডেটিভ স্ট্রেস I/R-প্ররোচিত মস্তিষ্কের আঘাতে একটি আকর্ষণীয় থেরাপিউটিক লক্ষ্য হয়ে উঠেছে। ফেজ 2 এনজাইম, যা পারমাণবিক ফ্যাক্টর E2-সম্পর্কিত ফ্যাক্টর-2 (Nrf-2) দ্বারা মধ্যস্থতা করে, একটি গুরুত্বপূর্ণ উপায় হিসাবে বিবেচিত হয়েছে যার মাধ্যমে নিউরনগুলি অক্সিডেটিভ স্ট্রেস থেকে নিজেদের রক্ষা করে (সুজুকি এবং ইয়ামামোটো, 2015; ইয়া এট আল।, 2018)। মাউন্টিং প্রমাণ ইঙ্গিত করে যে I/R চলাকালীন Nrf-2 সক্রিয় করা হল নিউরোপ্রোটেকশনের জন্য একটি সম্ভাব্য থেরাপিউটিক লক্ষ্য (Ding et al., 2015; Zhang R. et al., 2017)। এনআরএফ-2, অন্তঃসত্ত্বা অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট প্রতিরক্ষার একটি গুরুত্বপূর্ণ নিয়ন্ত্রক হিসাবে, হিম অক্সিজেনেস 1 (HO-1) এবং অন্যান্য অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইমের স্তরের মধ্যস্থতা করে, যেমন NAD(P)H কুইনোন অক্সিডোরেডাক্টেস 1 (NQO1), SOD, CAT, GSH, এবং MDA (Siow et al., 2007; Ding et al., 2014)। তাছাড়া, এনআরএফ-2 অ্যাঞ্জিওজেনেসিসে একটি গুরুত্বপূর্ণ নিয়ামক ভূমিকা পালন করে। বর্তমান সমীক্ষা দেখায় যে Nrf-2 ভাস্কুলার বিকাশের প্রক্রিয়ায় উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত এবং সক্রিয় করা যেতে পারে (ওয়েই এট আল।, 2013)।

পূর্বে বর্ণিত হিসাবে (জিয়াং এবং তু, 2009), টিজিতে প্রচুর বায়োঅ্যাকটিভ যৌগ থাকে, উদাহরণস্বরূপ, ইচিনাকোসাইড, টিউবুলসাইড এ, অ্যাক্টিওসাইড, আইসো-অ্যাকটিওসাইড এবং 2'-অ্যাসিটিল্যাক্টোসাইড, এবং তাদের মধ্যে কিছু সেরিব্রাল I/R পরে নিউরোপ্রোটেক্টিভ ফাংশন দেখায় আঘাত (পেং এট আল।, 2016)। ইচিনাকোসাইডের প্রচুর ফার্মাকোলজিক্যাল প্রভাব রয়েছে, যেমন অ্যান্টিঅক্সিডেশন, অ্যান্টি-সেনসিসেন্স, নিউরোপ্রোটেকশন, অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেশন, সিকাট্রাইজেশনের প্রচার, হেপাটোপ্রোটেকশন, হাড় গঠনের প্রচার এবং টিউমার বিরোধী কার্যকলাপ (ইউ এট আল।, 2016; লি এট আল।, 2018; Zhang Y. et al., 2018; Ji et al., 2019; Xu et al., 2019)। সম্প্রতি, ইচিনাকোসাইডকে কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্রের একটি শক্তিশালী অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে (Lu et al., 2016)। ইচিনাকোসাইড এমডিএ বিষয়বস্তুকে কমিয়ে দিতে পারে এবং ইস্কেমিয়া ব্রেইন ইনজুরিতে এসওডি এবং জিএসএইচ পিএক্সের কার্যক্রম উন্নত করতে পারে এবং আণবিক ডকিং বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে ইচিনাকোসাইড কিপ-1 এর সাথে আবদ্ধ হতে পারে, যা Nrf-2 পারমাণবিক ট্রান্সলোকেশনের দিকে পরিচালিত করে। এট আল।, 2018)। জিয়ার গবেষণায় দেখা গেছে যে অ্যাক্টিওসাইড অক্সিডেটিভ স্ট্রেস প্রশমিত করার মাধ্যমে এমসিএও/আর ইঁদুরের স্নায়বিক ঘাটতি উন্নত করতে ইনফার্কের পরিমাণ এবং মস্তিষ্কের জলের পরিমাণ হ্রাস করতে পারে (জিয়া এট আল।, 2018)। অন্যান্য গবেষণায় প্রমাণিত হয়েছে যে আইসো-অ্যাক্টিওসাইড H2O2-চিকিত্সা করা V79-4 কোষে সেলুলার অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইম, SOD এবং CAT-এর কার্যকলাপকে বাড়িয়ে তুলতে পারে (Chae et al., 2005)। টিজিতে থাকা সক্রিয় যৌগগুলির উপরোক্ত প্রতিবেদনের ভিত্তিতে, এটি অনুমান করা সম্ভব যে টিজিগুলি অ্যান্টিঅক্সিডেশন পথের মাধ্যমে ইস্কেমিক স্ট্রোকের বিরুদ্ধে রক্ষা করতে পারে।

Li Nrf2/ARE পাথওয়ে (Li et al., 2018) এর মাধ্যমে PC12 কোষে H2O2-প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিসে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের (PhGs) নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাবের বিষয়ে রিপোর্ট করেছেন। Nrf2 পারমাণবিক ট্রান্সলোকেশন ট্রিগার করে এবং HO-1, NQO1, গ্লুটামেট-সিস্টাইন লিগেজ ক্যাটালিটিক সাবুনিট (GCLC), এবং গ্লুটামেট-সিস্টাইন লিগেস মডিফায়ার সাবুনিট (GCLM) (Li et al. ; গং এট আল।, 2019)। অতএব, এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে Nrf-2/ARE পাথওয়ে নিউরোনাল কোষগুলিতে PhG-মধ্যস্থিত প্রতিরক্ষামূলক প্রভাবগুলিতে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। একইভাবে, এই গবেষণায়, আমরা দেখেছি যে TGs MDA-এর মাত্রা কমাতে পারে এবং I/R ইঁদুরগুলিতে SOD, CAT, এবং GSH-Px-এর মাত্রা বাড়াতে পারে। এদিকে, TGs নিউক্লিয়াসে Nrf2 এক্সপ্রেশনকে আপগ্রীগুলেট করতে পারে, সাইটোপ্লাজমে সংশ্লিষ্ট এক্সপ্রেশনকে কমিয়ে আনতে পারে এবং Keap-1 এক্সপ্রেশনকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করতে পারে। তাই, Nrf-2/Keap-1 পথটি TGs মধ্যস্থতাকারী নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাবের সাথে জড়িত হতে পারে। এই পথের আরও বৈধতা ভবিষ্যতে অক্সিজেন-গ্লুকোজ বঞ্চনা/রিঅক্সিজেনেশন ইনজুরি মডেল সহ ভিট্রো সেল সংস্কৃতিতে সঞ্চালিত হবে। তাছাড়া,গ. মরুভূমিআমাদের গবেষণায় 14 দিন একটানা নির্যাস দেওয়া হয়েছিল। যেহেতু প্রাপ্তবয়স্ক নিউরোজেনেসিস রিপারফিউশনের 14 দিনের সময় নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাবের ব্যাখ্যাকে প্রভাবিত করবে, তাই সিটিগুলির নিউরোপ্রোটেক্টিভ প্রভাব অন্বেষণে আমাদের বর্তমান পরীক্ষার নকশায় নিউরোজেনেসিসকে বাদ দেওয়া যায় না। এটি আমাদের গবেষণার সীমাবদ্ধতা।

উপসংহারে, এটি থেকে TGsগ. মরুভূমিযা এনজিওজেনেসিস এবং নিউরোজেনেসিসকে উন্নত করতে পারে সেইসাথে I/R ইনজুরি ইঁদুরগুলিতে BBB-এর অখণ্ডতা বজায় রাখতে পারে, কিন্তু PSs এবং OS তে নয়। প্রভাবগুলি Nrf-2/Keap-1 পথের সক্রিয়করণের মাধ্যমে মধ্যস্থতা করা যেতে পারে।