বয়স্ক কোষ্ঠকাঠিন্য ইঁদুরের মডেলে মলত্যাগের উপর সিস্তানচে ডেসার্টিকোলার থেরাপিউটিক প্রভাব
Mar 27, 2022
যোগাযোগ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
জিয়া ঝাং, ফা-জুয়ান ঝেং, ঝেন ঝাং
বিমূর্ত
ব্যাকগ্রাউন্ড
কোষ্ঠকাঠিন্য দীর্ঘস্থায়ী গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল কার্যকরী রোগগুলির মধ্যে একটি। এটি জীবনের মানকে গুরুতরভাবে প্রভাবিত করে। Cistanche deserticola (C. deserticola) স্পষ্টতই কোষ্ঠকাঠিন্যের চিকিৎসা করতে পারে, কিন্তু এর প্রক্রিয়াটি স্পষ্ট করা হয়নি। আমরা অনুমান করেছি যে এটির প্রক্রিয়াটি ইন্টারস্টিশিয়াল ক্যাজালসেল (আইসিসি) উদ্দীপিত করে অন্ত্রের গতিশীলতার উন্নতি করেছে। আইসিসির পৃষ্ঠে সি-কিট রিসেপ্টর সক্রিয়করণ আইসিসি ফাংশনের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত, এবং স্টেম সেল ফ্যাক্টর (এসসিএফ)/সি-কিট সিগন্যালিং পাথওয়ে এটিতে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। C. deserticola কিভাবে কোষ্ঠকাঠিন্যের চিকিৎসা করে তার প্রক্রিয়াটি তদন্ত করতে, এই গবেষণার লক্ষ্য ছিল ইঁদুরের মধ্যে একটি কোষ্ঠকাঠিন্য মডেল স্থাপন করা এবং চিকিৎসায় SCF/C-কিট সিগন্যালিং পাথওয়ের ভূমিকা অন্বেষণ করা।
AIM
একটি কোষ্ঠকাঠিন্য ইঁদুর মডেলের দ্বারা কোষ্ঠকাঠিন্যের সি. ডেসার্টিকোলা চিকিত্সার ভূমিকায় SCF/C-কিট সংকেত পথগুলি অন্বেষণ করতে।
পদ্ধতি
আটচল্লিশ 8-মৌ বয়সী স্প্রাগ-ডাউলি ইঁদুরকে এলোমেলোভাবে 4টি গ্রুপে ভাগ করা হয়েছিল: সাধারণ গ্রুপ (n=12), মডেল গ্রুপ (n=12), সি. ডেসার্টিকোলা গ্রুপ (n=12) এবং ব্লকার গ্রুপ (n=12)। সাধারণ গোষ্ঠী গ্যাভেজ দ্বারা স্বাভাবিক স্যালাইন পেয়েছে; মডেল গ্রুপ গ্যাভেজ দ্বারা loperamide গ্রহণ; ব্লকার গ্রুপ গ্যাভেজ দ্বারা লোপেরামাইড এবং সি. ডেজার্টিকোলা গ্রহণ করেছিল এবং STI571 ইনট্রাপেরিটোনলি ইনজেকশন হয়েছিল। চিকিত্সার সময়, প্রতি 10 দিনে ওজন, মল দানা এবং মলের গুণমান রেকর্ড করা হয়েছিল। মডেল আনয়নের 20 তম দিনে, প্রতিটি গ্রুপের কোলন টিস্যুগুলি সরানো হয়েছিল। হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন স্টেনিং প্যাথলজিকাল পরিবর্তনগুলি পর্যবেক্ষণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি, ওয়েস্টার্ন ব্লটিং এবং রিয়েল-টাইম পরিমাণগত পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া দ্বারা এসসিএফ, সি-কিট এবং অ্যাকোয়াপোরিন জিনের প্রকাশের মাত্রা সনাক্ত করা হয়েছিল। ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি দ্বারা কোলনিক এপিথেলিয়াল মাইটোকন্ড্রিয়া এবং গবলেট কোষগুলি পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।
ফলাফল
সাধারণ গোষ্ঠীর সাথে তুলনা করে, চিকিত্সার অগ্রগতির সাথে সাথে, মডেল এবং ব্লকার গ্রুপগুলিতে ইঁদুরের ওজন উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, মলের ওজন হ্রাস পেয়েছে এবং মলের গুণমান শুষ্ক ছিল (P < {{0}}৷{6}="" }5)।="" c.="" deserticola="" শরীরের="" ওজন="" এবং="" মলের="" ওজন="" হ্রাস="" এবং="" মলের="" মান="" উন্নত="" করেছে।="" হিস্টোপ্যাথোলজিকাল="" বিশ্লেষণ="" ইঙ্গিত="" দেয়="" যে="" মডেল="" গ্রুপের="" কোলনিক="" মিউকোসাল="" এপিথেলিয়াম="" অসম্পূর্ণ="" ছিল="" এবং="" গ্রন্থিগুলির="" বিন্যাস="" অনিয়মিত="" বা="" ক্ষতিগ্রস্থ="" ছিল।="" c.="" deserticola-এর="" সাথে="" চিকিত্সা="" উপপিথেলিয়াল="" কোষগুলির="" অখণ্ডতা="" এবং="" ধারাবাহিকতা="" এবং="" গ্রন্থিগুলির="" নিয়মিত="" বিন্যাসকে="" উন্নত="" করে।="" ব্লকিং="" এজেন্টগুলি="" c.="" deserticola="" ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি="" এবং="" বাস্তব="" সময়ের="" পরিমাণগত="" পলিমারেজ="" চেইন="" প্রতিক্রিয়া="" দেখায়="" যে="" মডেল="" গ্রুপের="" কোলনিক="" টিস্যুতে="" scf="" এবং="" c-কিটপ্রোটিন="" বা="" জিনের="" প্রকাশ="" হ্রাস="" পেয়েছে="" (p=""><0.05), যখন="" c-এর="" সাথে="" চিকিত্সা="" করা="" হয়েছিল।="" deserticola="" প্রোটিন="" বা="" জিনের="" অভিব্যক্তি="" বৃদ্ধি="" করেছে="" (p=""><0.05)। ওয়েস্টার্ন="" ব্লটিং="" দেখায়="" যে="" অ্যাকোয়াপোরিন="" apq3-এর="" অভিব্যক্তি="" বৃদ্ধি="" পেয়েছে,="" যখন="" মডেল="" গ্রুপে="" cx43-এর="" অভিব্যক্তি="" হ্রাস="" পেয়েছে।="" c.="" মরুভূমির="" সাথে="" চিকিত্সা="" apq3="" এর="" প্রকাশকে="" বাধা="" দেয়="" এবং="" cx43="" এর="" প্রচারিত="" অভিব্যক্তি।="" ট্রান্সমিশন="" ইলেক্ট্রন="" মাইক্রোস্কোপি="" দেখিয়েছে="" যে="" মডেল="" গ্রুপের="" কলোনিক="" এপিথেলিয়ামের="" মাইটোকন্ড্রিয়া="" ফুলে="" গেছে="" এবং="" বিশৃঙ্খলাপূর্ণভাবে="" সাজানো="" হয়েছে="" এবং="" মাইক্রোভিলি="" স্পর্স="" ছিল।="" c.="" deserticola="" গ্রুপে="" অবস্থা="" ভালো="" ছিল।="" sti571="" ব্লকারের="" সাহায্যে="" চিকিত্সা="" করা="" ইঁদুর="" নিশ্চিত="" করেছে="" যে="" scf/c-কিট="" পথ="" ব্লক="" করা="" c.="" deserticola="" দ্বারা="" কোষ্ঠকাঠিন্যের="" উন্নতিতে="" বাধা="">
উপসংহার
C. deserticola কোষ্ঠকাঠিন্য সহ ইঁদুরের মলত্যাগের উন্নতি করেছে এবং SCF/C-কিটসিগন্যালিং পাথওয়ে, যা ICC ফাংশনের একটি মূল লিঙ্ক, চিকিৎসায় গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করেছে।
মূল শব্দ:Cistanche deserticola; বয়স্ক কোষ্ঠকাঠিন্য; স্টেম সেল ফ্যাক্টর; সি-কিট
তাজা cistanche কাঁচামাল
ভূমিকা
বার্ধক্যজনিত কোষ্ঠকাঠিন্য (SC) হল জেরিয়াট্রিক রোগীদের মধ্যে একটি সাধারণ দীর্ঘস্থায়ী গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল ফাংশনাল রোগ, যা সেরিব্রোভাসকুলার ঘটনা এবং অন্যান্য রোগকে প্ররোচিত করে বা বাড়িয়ে দেয় এবং বয়স্ক জনগোষ্ঠীর জীবনযাত্রার মানকে গুরুতরভাবে প্রভাবিত করে[1,2]। ঐতিহ্যগত চীনা ওষুধের মতে, প্রধান স্কয়ার গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল তাপের ইটিওলজি এবং প্যাথোজেনেসিস, ইয়িন এবং জিনের ঘাটতি, এবং অন্ত্রের ডি-ওয়েটিং[3,4], অন্যদিকে সিস্তানচে ডেসার্টিকোলা (সি. ডেসার্টিকোলা) কিডনিকে উষ্ণ করতে পারে এবং অন্ত্রকে শিথিল করতে পারে। গবেষকরা রিপোর্ট করেছেন যে অন্ত্রের প্রভাব গতিশীলতা উন্নতি এবং SC এর চিকিত্সা স্পষ্ট, তবে এর প্রক্রিয়াটি স্পষ্ট করা হয়নি[5,6]। ইন্টারস্টিশিয়াল ক্যাজালসেল (ICCs) হল গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল ট্র্যাক্টের একটি বিশেষ ধরনের মেসেনকাইমাল কোষ। ICC-এর পৃষ্ঠে সি-কিট রিসেপ্টর সক্রিয়করণ কোষের বিস্তার, পার্থক্য এবং কার্যকারিতার সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত। ICCs অনেক গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল মোটর কর্মহীনতার প্যাথোজেনেসিসে অংশগ্রহণ করে[7,8]। সি-কিট সক্রিয়করণ নির্ভর করে এর লিগ্যান্ড স্টেম সেল ফ্যাক্টর (SCF)[9] এর বাঁধনের উপর। C-এর কার্যের প্রভাব এবং প্রক্রিয়া তদন্ত করা। SC-তে deserticola, এই অধ্যয়নের লক্ষ্য ছিল ইঁদুরের মধ্যে একটি SC মডেল স্থাপন করা যা লোপেরিডল দ্বারা প্ররোচিত হয় যাতে C. deserticola দ্বারা কোষ্ঠকাঠিন্যের চিকিৎসায় SCF/C-কিট সিগন্যালিং পাথওয়ের ভূমিকা অন্বেষণ করা হয়।
উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ
পরীক্ষামূলক উপকরণ
পরীক্ষামূলক প্রাণী:পরীক্ষামূলক প্রাণী ছিল 48টি পুরুষ 8-মৌ বয়সী স্প্রাগ ডাওলি ইঁদুর যার ওজন 500-550 গ্রাম; সমস্ত চাংশা তিয়ানকিন বায়োটেকনোলজি কো থেকে কেনা। লিমিটেড. চংকিং ওয়েইসিটেং বায়োমেডিকাল টেকনোলজি কোং লিমিটেডের প্রাণী পরীক্ষাগারে ইঁদুরগুলিকে লালন-পালন করা হয়েছিল, সাধারণ দিন এবং রাতের আলো, খাবার এবং পানীয় দেওয়া হয়েছিল৷ চংকিং ট্র্যাডিশনাল চাইনিজ মেডিসিন হাসপাতালের নীতিশাস্ত্র কমিটির দ্বারা জারি করা ব্যবস্থাপনা নির্দেশিকাগুলির সাথে সমস্ত পদ্ধতি মেনে চলা হয়েছে৷
প্রাথমিক বিকারক:প্রাথমিক বিকারকগুলির মধ্যে লোপেরামাইড (সিগমা, সেন্ট লুইস, এমও, ইউনাইটেড স্টেটস), হুবেই জুরুই ট্র্যাডিশনাল চাইনিজ মেডিসিন ডেকোশনকো থেকে সি. ডেসার্টিকোলা অন্তর্ভুক্ত ছিল। লিমিটেড, চাইনিজ সেলেক কোং লিমিটেড থেকে STI571, এবং SCF, C-কিট, connexin 43 (Cx43), aquaporin 3 (AQP3) এবং -actin অ্যান্টিবডি (Abcam, Cambridge, MA, United States), PrimeScript II 1st Strand cDNA সিন্থেসিস কিট এবং প্রিমিক্স Taq™ (Ex Taq™ সংস্করণ 2।{9}})(Takara Co. Ltd., Japan)।
cistanche আজ সম্পূরক নির্যাস
পদ্ধতি
এসসি মডেল প্রস্তুতি এবং গ্রুপিং:পরীক্ষার ফলাফলে শরীরের ওজনের মতো বিভ্রান্তিকর কারণগুলির প্রভাব এড়াতে, ইঁদুরগুলিকে এলোমেলোভাবে ব্লক র্যান্ডম গ্রুপিং পদ্ধতি দ্বারা গোষ্ঠীভুক্ত করা হয়েছিল। আটচল্লিশটি ইঁদুরকে 1 সপ্তাহের জন্য অভিযোজিতভাবে খাওয়ানো হয়েছিল এবং ইঁদুরগুলিকে হালকা থেকে ভারী ওজনের ক্রম অনুসারে গণনা করা হয়েছিল। শরীরের ওজনের ক্রম অনুসারে, ইঁদুরগুলিকে 12টি জোনে বিভক্ত করা হয়েছিল (প্রতিটি জোনে ইঁদুরের ওজন একই রকম ছিল), প্রতিটি জোনে 4টি ইঁদুর রয়েছে। 12টি অঞ্চলকে 12টির 4টি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল (সাধারণ, মডেল, সি. ডেসার্টিকোলা এবং ব্লকার)। মডেল গ্রুপের ইঁদুরগুলিকে গ্যাভেজ দ্বারা লোপেরামাইড (0৷{14}}625/100 গ্রাম, 10 মিলি/কেজি) দেওয়া হয়েছিল। প্রথম গ্যাভেজ ডোজ দ্বিগুণ করা হয়েছিল, এবং ড্রাগটি প্রতিদিন 10:00 এ দেওয়া হয়েছিল, দিনে একবার টানা 20 দিনের জন্য। থানরমাল গ্রুপকে গ্যাভেজ দ্বারা একই পরিমাণ সাধারণ স্যালাইন দেওয়া হয়েছিল। উপরন্তু, থিমডেল গ্রুপকে সি. ডেজার্টিকোলা (0.156 গ্রাম/100 গ্রাম, 10 মিলি/কেজি) গ্যাভেজ দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। ব্লকার গ্রুপকে গ্যাভেজ দ্বারা C. deserticola (0.156 g/100 g, 10 mL/kg) এবং STI571 (25 mg/mL, 1 mL/kg) ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশন দ্বারা দেওয়া হয়েছিল। পরীক্ষার সময়, শরীরের ওজন, মলের ওজন এবং মলের অবস্থা প্রতি 10 দিনে রেকর্ড করা হয়েছিল। কোনো ইঁদুরের কোনো দুর্ঘটনায় মৃত্যু ঘটেনি। বিশ দিন পরে, ইঁদুরগুলিকে মেরে ফেলা হয়েছিল, এবং পরীক্ষা এবং তরল নাইট্রোজেন সংরক্ষণের জন্য কোলনিক টিস্যু অপসারণ করা হয়েছিল। অবশিষ্ট অংশগুলি স্থির এবং এম্বেড করা হয়েছিল।
হিস্টোপ্যাথলজিকাল বিশ্লেষণ:রাতারাতি উপোস করা ইঁদুরকে পরের দিন 7 শতাংশ ক্লোরাল হাইড্রেট (5 mL/kg) দিয়ে ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশনের মাধ্যমে চেতনানাশক করা হয়েছিল। কোলনিক টিস্যু আলাদা করার জন্য পেট খোলা হয়েছিল, এবং কোলনের 8-10 মিমি সরানো হয়েছিল। অন্ত্রের বিষয়বস্তুগুলিকে প্রিকুলড পলিবিউটিলিনসুসিনেটে আলতোভাবে ঝাঁকিয়ে 4 শতাংশ প্যারাফর্মালডিহাইড ফিক্সেটিভ দ্রবণে 24 ঘন্টার জন্য স্থির করা হয়েছিল। প্রচলিত প্যারাফিন এম্বেডিং সঞ্চালিত হয়েছিল। টিস্যু বিভাগগুলি (5 μm) হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন স্টেনিংয়ের জন্য সরানো হয়েছিল এবং হিস্টোপ্যাথোলজিকাল আকারবিদ্যা একটি মাইক্রোস্কোপের অধীনে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।
ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেনিং দ্বারা এসসিএফ এবং সি-কিটের অভিব্যক্তি সনাক্তকরণ:উপরের হিস্টোপ্যাথলজি দ্বারা পরীক্ষা করা প্যারাফিন টিস্যুগুলিকে বিভাগ করা হয়েছিল, বিভাগযুক্ত জাইলিন ডিওয়াক্সড গ্রেডিয়েন্ট ইথানল দিয়ে রিহাইড্রেট করা হয়েছিল, অ্যান্টিজেন তাপ দ্বারা প্রতিকার করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় ছাগলের সিরাম দিয়ে 1 ঘন্টার জন্য সিল করা হয়েছিল। SCF এবং C-কিট প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলি ড্রপওয়াইসে যোগ করা হয়েছিল, এবং টিস্যুগুলিকে 4 ডিগ্রিতে রাতারাতি রাখা হয়েছিল। পলিবিউটিলিনসুসিনেট দিয়ে ধুয়ে ফেলার পর, হর্সরাডিশ পেরোক্সিডেসকে সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি লেবেল করার জন্য ড্রপ করা হয়েছিল, পলিবিউটিলিন সাকসিনেট দিয়ে 5 মিনিটের জন্য ধুয়ে ফেলা হয়েছিল, ড্রপ 2,4-ডায়ামিনোবিউটারিক অ্যাসিড ক্রোমোজেনসলিউশন, হেমাটোক্সিলিন দিয়ে পুনরায় রঞ্জিত করা হয়েছিল, বিপরীত গ্রেডিয়েন্ট অ্যালকোহল ডিহাইড্রেশন এবং ট্রান্সপারাল অ্যালকোহল এক্সপ্লোর পরিচালনা করে। রজন সীল। আণুবীক্ষণিকভাবে, নিউক্লিয়াস ছিল বেগুনি-নীল, এবং ইতিবাচক ফলাফলের পণ্যগুলি ছিল বাদামী হলুদ বা হলুদ কণা।
রিয়েল-টাইম-কোয়ান্টিটেটিভ পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন (RT-qPCR) দ্বারা কোলনিক টিস্যুতে সি-কিট mRNA-এর অভিব্যক্তি সনাক্তকরণ:হিমায়িত ইঁদুরের কলোনিক টিস্যু একটি হোমোজেনাইজার দ্বারা মাটি করা হয়েছিল এবং 1 মিলি আরএনএআইসো প্লাস যোগ করা হয়েছিল। ক্লোরোফর্ম/আইসোপ্রোপ্যানল পদ্ধতিতে কলোনিক টিস্যুর মোট আরএনএ বের করা হয়েছিল এবং জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা আরএনএ গুণমান সনাক্ত করা হয়েছিল। বায়ো-র্যাড জেল ইমেজার দ্বারা শনাক্ত হওয়ার পর, 1 ug RNA কে টাকারা প্রাইমস্ক্রিপ্ট II 1st Strand cDNA সিন্থেসিস কিট দ্বারা cDNA-তে রিভার্সট্রান্সক্রাইব করা হয়েছিল। NCBI ডাটাবেস জিন আইডি: 64030 অনুসারে, C-কিট জিনের CDS অঞ্চলের সাথে মিলিত হয়েছিল এবং এনসিবিআই প্রাইমার-ব্লাস্ট ডিজাইন প্রাইমার সিকোয়েন্স, যা Sangon Biotech Co. Ltd, C-কিট প্রাইমার সিকোয়েন্স সেন্স স্ট্র্যান্ড 5'-AGGT GTACCGTTTCCTGTCCC-3', অ্যান্টিসেন্স স্ট্র্যান্ড 5'-GGCTGGATTTGCTTTGCTGCTGCTGCTGTCC-3'-{1}}'-এর দ্বারা সংশ্লেষিত হয়েছিল অ্যাক্টিন সেন্স স্ট্র্যান্ড 5'-CTTCCTTCCTGGGTATGGAATC-3', অ্যান্টিসেন্স স্ট্র্যান্ড 5'-CTGTGTTGGCATAGAGGTCTT-3'। পিসিআর পরিবর্ধন একটি বায়ো-র্যাডসিএফএক্স90 রিয়েল-টাইম পিসিআর যন্ত্রে সঞ্চালিত হয়েছিল। পিসিআর পরীক্ষার শর্তগুলি ছিল 5 মিনিটের জন্য 95 ডিগ্রিতে প্রাথমিক বর্ণনা, 30 সেকেন্ডের জন্য 95 ডিগ্রির 30টি চক্র, 30 সেকেন্ডের জন্য 60 ডিগ্রি এবং 1 মিনিটের জন্য 72 ডিগ্রি এবং তারপরে 10 মিনিটের জন্য 72 ডিগ্রিতে চূড়ান্ত এক্সটেনশন। আপেক্ষিক জিনের অভিব্যক্তি বিশ্লেষণ করতে 2-ΔΔCt (ΔCt=Ct মান - -actin Ctvalue) নেওয়া হয়েছিল।
ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দ্বারা কোলনিক টিস্যুতে Cx43 এবং AQP3 এর প্রোটিন এক্সপ্রেশন স্তর সনাক্তকরণ:প্রায় 1 সেন্টিমিটার হিমায়িত কোলনিক টিস্যু সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং RIPA শক্তিশালী পাইরোলাইসিস তরল (100 μL) দিয়ে লাইজ করা হয়েছিল। একটি গ্লাসহোমোজেনাইজার দিয়ে টিস্যুটি 20 বার একজাত করা হয়েছিল এবং 1.5 মিলি সেন্ট্রিফিউজ টিউবে স্থানান্তরিত হয়েছিল। 5 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রিতে 12000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে সুপারনাট্যান্ট বের করা হয়েছিল এবং সুপারনাট্যান্টে মোট প্রোটিনের ঘনত্ব BCA পদ্ধতি দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। আমরা সোডিয়াম ডোডেসিল সালফেট-পলিঅ্যাক্রাইলামাইড জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস সঞ্চালনের জন্য 25ug বিকৃত প্রোটিন অপসারণ করেছি এবং তারপরে জেলের প্রোটিনগুলিকে 200 mA এর ধ্রুবক কারেন্টে পলিভিনাইলাইডিন ফ্লোরাইডমেমব্রেনে স্থানান্তরিত করেছি তারপর ঘরের তাপমাত্রায় 2 ঘন্টার জন্য 5 শতাংশ স্কিম মিল্ক কনফিনিং লিকুইড দ্বারা সিল করা হয়েছে। অনুরূপ প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলি সিলিং তরল দিয়ে মিশ্রিত করা হয়েছিল, রাতারাতি 4 ডিগ্রিতে ইনকিউব করা হয়েছিল, তারপরে ঝিল্লির প্রতিরোধকে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং দ্বিতীয় অ্যান্টিবডিগুলি যোগ করা হয়েছিল। ECL তরল যোগ করার পরে, একটি অপটিক্যাল ঘনত্ব বিশ্লেষণ দ্বারা পরীক্ষার জন্য তাদের এক্সপোজার মিটারের নিচে রাখা হয়েছিল।
সংক্রমণ ইলেক্ট্রন অনুবীক্ষণ:আমরা প্রায় 1 সেন্টিমিটার প্রক্সিমাল কোলোনিক টিস্যু নিয়েছি, এটিকে 24 ঘন্টার জন্য 2.5 শতাংশ গ্লুটারালডিহাইডে স্থির করেছি, গ্রেডেড অ্যাসিটোন দিয়ে এটিকে ডিহাইড্রেট করেছি, Epon812 এ এমবেডেড করেছি এবং একটি আল্ট্রামাইক্রোটোমে 50 nm আল্ট্রাথিন বিভাগ কেটেছি। অংশগুলি 10 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় ইউরেনিয়াম ডাই অক্সাইড অ্যাসিটেট এবং সীসা সাইট্রেট ডাইং তরল দিয়ে দাগযুক্ত ছিল। আমরা ফিলিপস টেকনাই-10 ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপের অধীনে কোলনিক ভিলি, এপিথেলিয়াল সেল মাইটোকন্ড্রিয়া, এবং গবলেট কোষগুলি পর্যবেক্ষণ করেছি।
পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ
SPSS 19৷{1}} সফ্টওয়্যার ডেটা বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং গ্রাফপ্যাড Prism8.4 সফ্টওয়্যারটি ফলাফল প্লট করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল৷ শাপিরো-উইল্কের পরীক্ষাটি স্বাভাবিকতা পরীক্ষার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। স্বাভাবিক বিতরণ সহ ডেটা গড় ± SD দ্বারা প্রতিনিধিত্ব করা হয়েছিল। চিকিত্সার পরে হিমোগ্লোবিনের গড় ± SD প্রতিনিধিত্ব করতে ত্রুটি আইটেমগুলি ব্যবহার করা হয়েছিল। শিক্ষার্থীর টি-পরীক্ষা দুটি গ্রুপের মধ্যে তুলনা করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। ভিন্নতার বিশ্লেষণ একাধিক গোষ্ঠীর মধ্যে তুলনা করার জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। স্টুডেন্ট-নিউম্যান-কেউলস পদ্ধতিটি জোড়ায় একাধিক গোষ্ঠীর মধ্যে তুলনা করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং ডানেটের পরীক্ষাটি প্রতিটি পরীক্ষামূলক গোষ্ঠী এবং ক্রমানুসারে নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্য পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। সংশ্লিষ্ট ডেটা একাধিক সময় পয়েন্ট দ্বারা পরিমাপ করা হয়েছিল, এবং প্রকরণের বারবার পরিমাপ ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। পরিচালিত যদি গোলাকার পরীক্ষায় P > 0 দেখানো হয়। P <0.05 হলে,="" সাধারণীকৃত="" অনুমান="" সমীকরণ="" নেওয়া="" হয়েছিল।="" সাধারণ="" বিতরণের="" সাথে="" সঙ্গতিপূর্ণ="" নয়="" এমন="" ডেটা="" m="" (p25,="" p75)="" দ্বারা="" উপস্থাপিত="" হয়েছিল="" এবং="" ক্রুস্কাল-ওয়ালিস="" এইচ="" র্যাঙ্ক-সম="" পরীক্ষাটি="" গ্রুপগুলির="" মধ্যে="" তুলনা="" করার="" জন্য="" ব্যবহার="" করা="" হয়েছিল।="" χ2পরীক্ষাটি="" গোষ্ঠীর="" মধ্যে="" তুলনা="" করার="" জন্য="" ব্যবহার="" করা="" হয়েছিল="" যখন="" ডেটাটি="" ক্রমহীন="" ডেটা="" ছিল,="" এবং="" পিয়ারসনের="" χ2টেস্ট="" ব্যবহার="" করা="" হয়েছিল="" যদি="" তাত্ত্বিক="" ফ্রিকোয়েন্সি=""><5 সহ="" কোষের="" অনুপাত=""><20 শতাংশ="" হয়।="" যদি="" তাত্ত্বিক="" ফ্রিকোয়েন্সি=""><5 সহ="" কোষের="" অনুপাত="" 20="" শতাংশের="" চেয়ে="" বেশি="" বা="" সমান="" হয়,="" ফিশারের="" সঠিক="" পরীক্ষাটি="" ব্যবহার="" করা="" হয়েছিল।="" পার্থক্য="" পরিসংখ্যানগতভাবে="" তাৎপর্যপূর্ণ="" ছিল="" তা="" নির্ধারণ="" করতে="" p=""><0.05 ব্যবহার="" করা="">
চিত্র 1 কলোনিক হিস্টোপ্যাথলজিকাল পরিবর্তন।
ফলাফল
সাধারণ শর্ত
সাধারণ গ্রুপের তুলনায় লোপেরামাইডের গ্যাভেজ করার একদিন পরে, মডেল গ্রুপে শরীরের ওজন এবং মলের ওজন উল্লেখযোগ্যভাবে কমে গিয়েছিল (P < {{0}}.05),="" কিন্তু="" মলের="" মানের="" কোনও="" উল্লেখযোগ্য="" পার্থক্য="" ছিল="" না।="" স্কোর="" (p=""> 0.05)। সি. মডেল গ্রুপে মরুভূমির চিকিত্সা শরীরের ওজন এবং মলের ওজন হ্রাসকে ধীর করে দেয় (পি< 0.05),="" but="" the="" bodyweight="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" reduced.="" after="" 10="" d="" of="" treatment,="" compared="" with="" the="" normal="" group,="" the="" body="" weight="" and="" stool="" volume="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" were="" further="" significantly="" reduced,="" and="" the="" stools="" were="" dry="" and="" almost="" contained="" no="" water="" (p="" <="" 0.05).="" the="" body="" weight="" loss="" of="" rats="" was="" also="" significantly="" reduced="" by="" treatment="" with="" c.="" deserticola="" (p="" <="" 0.05).="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" different="" from="" that="" in="" the="" model="" group="" (p="" >="" 0.05).="" on="" day="" 20="" before="" sampling,="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" normal="" group,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" significantly="" increased="" (p="" <="" 0.05),="" while="" the="" weight="" loss="" caused="" by="" constipation="" was="" inhibited="" by="" c.="" deserticola="" treatment,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" decreased="" (p="" <="">
কোলনিক হিস্টোপ্যাথলজি
ইঁদুরের কোলনিক টিস্যুর হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিনের দাগ চিত্র 1-এ দেখানো হয়েছে। সাধারণ গ্রুপে, অন্ত্রের ভিলি অক্ষত ছিল, অন্ত্রের শ্লেষ্মা অক্ষত এবং অবিচ্ছিন্ন ছিল, কোষ এবং গ্রন্থিগুলি নিয়মিতভাবে সাজানো হয়েছিল। মিউকোসা এবং সাবমিউকোসা প্রদাহজনক কোষ দ্বারা অনুপ্রবেশ করা হয়নি, এবং টিস্যু গঠন স্বাভাবিক ছিল। মডেল গ্রুপে, অন্ত্রের ভিলি এবং শ্লেষ্মা অনেকাংশে ধ্বংস হয়ে গিয়েছিল, স্থানীয় ভিলিগুলিকে ফেলে দেওয়া হয়েছিল এবং ঢিলেঢালাভাবে সাজানো হয়েছিল, এবং গ্রন্থি কাঠামোর কিছু অংশ অদৃশ্য হয়ে গিয়েছিল। C. deserticola গ্রুপে, মডেল গ্রুপের তুলনায় হিস্টোপ্যাথলজিকাল দাগ কম ছিল, কিন্তু কিছুগোবলেট কোষে নেক্রোসিস ছিল। ব্লকার গ্রুপে ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশনের পরে, সি.ডেসারটিকোলা গ্রুপের সাথে তুলনা করে, তখনও অন্ত্রের ভিলির স্থানীয় ক্ষতি ছিল এবং অন্ত্রের শ্লেষ্মা ফাটল এবং ক্ষতি ছিল।
চিত্র 2 ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল সনাক্তকরণের মাধ্যমে কোলনিক টিস্যুতে স্টেম সেল ফ্যাক্টর এবং আপেক্ষিক অপটিক্যাল ঘনত্বের অনুপাতের প্রকাশ।
ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেনিং দ্বারা স্টেম সেল ফ্যাক্টর এবং সি-কিট প্রোটিনের অভিব্যক্তি সনাক্তকরণ
ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেনিং দেখায় যে এসসিএফ এবং সি-কিট কন্ট্রোল গ্রুপের কোলনে প্রকাশ করা হয়েছিল। কন্ট্রোল গ্রুপের সাথে তুলনা করে, মডেল গ্রুপে SCF এবং C-কিটের প্রকাশ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে (P < 0।{5}}5)।="" মডেলগ্রুপের="" সাথে="" তুলনা="" করে,="" c.="" deserticola="" গ্রুপে="" scf="" এবং="" c-কিটের="" প্রকাশ="" উল্লেখযোগ্যভাবে="" বৃদ্ধি="" পেয়েছে="" (p="">< 0.05)।="" ব্লকার="" এবং="" মডেল="" গ্রুপের="" মধ্যে="" scf="" এবং="" c-কিটের="" অভিব্যক্তিতে="" কোন="" পার্থক্য="" ছিল="" না="" (p=""><0.05, চিত্র="" 2="" এবং="">
RT-qPCR
RT-qPCR showed that expression of C-kit mRNA in the model group was significantly lower than in the normal group (Figure 4, P < 0.05). Compared with the model group, C-kit in the C. deserticola group was significantly increased (P < 0.05). There was no significant difference in C-kit mRNA level between the model and blocker groups (P >0.05)। এই ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে সি-কিট এক্সপ্রেশন সি. মরুভূমির দ্বারা সামঞ্জস্যপূর্ণ কোষ্ঠকাঠিন্যের উন্নতিতে অংশগ্রহণ করে এবং ব্লকারগুলি সি-এর কার্যকারিতাকে বাধা দেয়। মরুভূমি
cistanche সালসা সুবিধা
পশ্চিমা শোষক
ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দেখায় যে AQP3 প্রোটিন সাধারণ নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীতে একটি নিম্ন স্তরে প্রকাশ করা হয়েছিল, যখন এটি নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় মডেল গ্রুপে উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র 5) (P < 0৷{6}}5)="" .="" c.="" deserticola-এর="" সাথে="" চিকিত্সার="" পরে="" aqp3="" প্রোটিনের="" অভিব্যক্তি="" কমে="" গিয়েছিল,="" এবং="" aqp3-এর="" অভিব্যক্তিতে="" c.deserticola-এর="" নিরোধক="" প্রভাব="" ব্লকার="" ট্রিটমেন্ট="" (p=""><0.05) দ্বারা="" বাধাপ্রাপ্ত="" হয়েছিল।="" cx43-এর="" অভিব্যক্তি="" aqp3-এর="" বিপরীত="" ছিল।="" এই="" ফলাফলগুলি="" পরামর্শ="" দিয়েছে="" যে="" sc="" এর="" সাথে="" ইঁদুরের="" উপর="" c.="" deserticola-এর="" ফার্মাকোলজি="" প্রভাব="" cx43-এর="" অভিব্যক্তি="" প্রচার="" করে="" এবং="" aqp3="" (চিত্র="" 5-7)="" এর="" অভিব্যক্তিকে="" বাধা="" দিয়ে="" অর্জন="" করা="">
সংক্রমণ ইলেক্ট্রন অনুবীক্ষণ
লোপেরামাইড ইনডাকশনের পরে, মডেল গ্রুপের কিছু কলোনিক মিউকোসাল এপিথেলিয়াল কোষে মাইটোকন্ড্রিয়াল ফোলাভাব এবং অটোফ্যাজি ঘটেছে। অন্ত্রের মাইক্রোভিলির সংখ্যা এবং দৈর্ঘ্য হ্রাস পেয়েছে এবং গবলেট সেল পাইকনোসিস ঘটেছে (চিত্র 8)। C. deserticola-এর সাথে চিকিত্সার পরে, অন্ত্রের মাইক্রোভিলির সংখ্যা বৃদ্ধি পায়। Themicrovilli সুন্দরভাবে সাজানো ছিল, এবং গঠন সম্পূর্ণ ছিল. গবলেট কোষের দৈর্ঘ্য কম, মাইটোকন্ড্রিয়ার অনিয়মিত রূপবিদ্যা এবং গবলেটসেলের গুরুতর পাইকনোসিস।
চিত্র 3 ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল সনাক্তকরণ দ্বারা কোলনিক টিস্যুতে সি-কিট এবং আপেক্ষিক অপটিক্যাল ঘনত্বের অনুপাতের প্রকাশ।
আলোচনা
বয়স্ক জনসংখ্যার মধ্যে কোষ্ঠকাঠিন্য সাধারণ এবং এটি একটি সাধারণ লক্ষণ যা বয়স্ক ব্যক্তিদের স্বাস্থ্যের অবস্থা এবং জীবনযাত্রার মানকে প্রভাবিত করে[10,11]। ঐতিহ্যগত চীনা ওষুধের অন্তর্বর্তীকালীন, বাই এট আল[12] বিশ্বাস করতেন যে এসসি-এর মৌলিক প্যাথোজেনেসিস হল বৃহৎ অন্ত্রের সঞ্চালন ফাংশনের কর্মহীনতা, বার্ধক্যজনিত শরীরের ব্যর্থতা, লিভার এবং কিডনির কার্যকারিতা ধীরে ধীরে হ্রাস, কিউই এবং রক্তের অভাব, এবং শরীরের তরল হ্রাস। ,যা শুষ্ক মল সৃষ্টি করে, যার ফলে কোষ্ঠকাঠিন্য হয়[13]। SC রোগীদের এবং তাদের পরিবারের উপর অনেক দিক থেকে চাপ সৃষ্টি করে এবং এর প্যাথোজেনেসিস অন্বেষণ করা গুরুত্বপূর্ণ।
সি. ডেসার্টিকোলা কিডনি ইয়াংকে টোনিফাই করে, রক্তের উপকার করে এবং শরীরের রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা নিয়ন্ত্রণ করে[14]। C. deserticola এবং চাইনিজ ভেষজ ক্বাথযুক্ত C. কোষ্ঠকাঠিন্যের চিকিৎসায় deserticola ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়েছে, এবং ক্লিনিকাল প্রভাব উল্লেখযোগ্য। ডু এট আল[১৫] ইয়াং ঘাটতি এবং কোষ্ঠকাঠিন্যের একটি ইঁদুরের মডেলে পাওয়া গেছে যে সি. ডেসার্টিকোলা বিচ্ছিন্ন কোলনের সংকোচনের প্রশস্ততাকে উন্নত করেছে, অন্ত্রের ট্র্যাক্টের সংকোচনকে শক্তিশালী করেছে এবং গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল হরমোনের স্তরকে স্বাভাবিক অবস্থায় ফিরিয়ে এনেছে। এছাড়াও, C. deserticola-এর খাদ্যতালিকাগত ফাইবার, C. deserticola-এর একটি প্রক্রিয়াজাতকরণ উপজাত, মলের জল ধারণ ক্ষমতা উন্নত করে এবং কম মাত্রার সুবিধা রয়েছে এবং অন্ত্রের পুষ্টি ও মলত্যাগের উন্নতিতে ভাল প্রভাব রয়েছে[16]। আমাদের গবেষণায় দেখা গেছে যে সি. ডেসার্টিকোলা চিকিত্সা কোষ্ঠকাঠিন্য সহ ইঁদুরের মলময়েশ্চার এবং কোলনিক হিস্টোপ্যাথলজির উন্নতি করেছে।
আইসিসিগুলি অন্ত্রের ট্র্যাক্ট জুড়ে পাওয়া যায় এবং পেসমেকার এবং অন্ত্রের স্নায়ু সংক্রমণ হিসাবে অন্ত্রের গতিবিধির স্নায়ু নিয়ন্ত্রণে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। সি-কিট[18]। SCF/C-কিট সিস্টেমটি ICC-এর বিকাশে অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। SCF/C-কিট সিগন্যালিং পথটি আকুপাংচারের মাধ্যমে ইঁদুরের ধীরগতির স্থানান্তর কোষ্ঠকাঠিন্যের চিকিত্সার সময় বিশ্লেষণ করা হয়েছে[19]। তিয়ানশু পয়েন্টে ইলেক্ট্রোঅ্যাকুপাংচার ACK2-চিকিত্সা করা ইঁদুরে কোলন ICC-এর সংখ্যা বাড়িয়েছে, SCF এবং C-কিট প্রোটিনের আপ-রেগুলেটেড এক্সপ্রেশন, এবং ICC-এর ফিনোটাইপকে উল্টে দিয়েছে। কিউই এবং প্লীহাকে প্রাণবন্ত করার জন্য প্রেসক্রিপশন কোলনিক টিস্যুতে আইসিসির অভিব্যক্তি বাড়াতে পারে এবং সি-কিট এবং এসসিএফ এমআরএনএ-এর প্রকাশ কমাতে পারে, এইভাবে কোষ্ঠকাঠিন্যের লক্ষণগুলিকে উন্নত করতে পারে[20]। আমাদের গবেষণায়, ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি দেখিয়েছে যে সি. ডেসার্টিকোলা SC-এর একটি ইঁদুর মডেলে SCF এবং C-কিট প্রোটিনের অভিব্যক্তি উল্লেখযোগ্যভাবে আপনিয়ন্ত্রিত করেছে, এবং RT-qPCR দেখিয়েছে যে C. deserticola উল্লেখযোগ্যভাবে C-kitmRNA-এর অভিব্যক্তিকে নিয়ন্ত্রণ করেছে। সি-কিট ব্লকার সি. ডেসার্টিকোলা দ্বারা প্ররোচিত এসসিএফ এবং সি-কিট এক্সপ্রেশনের আপগ্র্যুলেশনকে বাধা দেয়।
মল জলের উপাদান এবং কোলনিক জল পরিবহন ঘনিষ্ঠভাবে AQP-এর সাথে সম্পর্কিত, যা অন্ত্রের জল বিপাকের একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে[21]। ধীরগতির পরিবহণ কোষ্ঠকাঠিন্য সহ ইঁদুরের একটি গবেষণায়, মলত্যাগের ক্বাথ AQP3 এবং AQP4 হ্রাস করার মাধ্যমে অন্ত্রের জল শোষণ নিয়ন্ত্রণ করে কোষ্ঠকাঠিন্যের লক্ষণগুলিকে উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত করে। কার্যকরী কোষ্ঠকাঠিন্যের ইঁদুরের মডেলে, কার্যকরী কোষ্ঠকাঠিন্যের জন্য ওরাল জিয়াওফু টংজি ফ্লুইডের চিকিত্সা পদ্ধতিটি কোলনে ভাসোঅ্যাকটিভ অন্ত্রের পলিপেপটাইড এবং AQP3 এর প্রকাশকে নিয়ন্ত্রণ করে উপলব্ধি করা যেতে পারে[23]। মসৃণ পেশী কোষের সমলয় সংকোচনের মধ্যস্থতায় গ্যাপজাংশন একটি অপরিহার্য ভূমিকা পালন করে। সেই প্রক্রিয়ার সময় Cx43 হল সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ প্রোটিন[24]। Cx43 এক্সপ্রেশনের ক্ষতি মসৃণ পেশী মোটর কর্মহীনতার জন্য আংশিকভাবে দায়ী হতে পারে[25]। ধীর ট্রানজিট কোষ্ঠকাঠিন্য সহ ইঁদুরের অন্ত্রের স্নায়ুতন্ত্রের নেটওয়ার্ক কাঠামোর মেরামত Cx43 ইত্যাদির প্রকাশ এবং কোষ্ঠকাঠিন্যের লক্ষণগুলিকে উন্নত করতে পারে। AQP3 এর অভিব্যক্তি মলস্থ জলের পরিমাণ হ্রাস করে, যা কোষ্ঠকাঠিন্যের দিকে পরিচালিত করে, যা কোষ্ঠকাঠিন্যের একটি গুরুত্বপূর্ণ প্রক্রিয়া হতে পারে। Cx43 এর অভিব্যক্তি অন্ত্রের মসৃণ পেশীর সংকোচনের সাথে সম্পর্কিত হতে পারে এবং কোষ্ঠকাঠিন্যের ঘটনা কমাতে পারে। আমাদের গবেষণায়, ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দেখিয়েছে যে Cx43 এক্সপ্রেশন বৃদ্ধি পেয়েছে এবং AQP3 এক্সপ্রেশন C.deserticola চিকিত্সার দ্বারা বাধাগ্রস্ত হয়েছে, যার ফলে মসৃণ পেশী সংকোচন বৃদ্ধি পেয়েছে এবং জল শোষণ হ্রাস পেয়েছে এবং ব্লকার চিকিত্সা এই প্রভাবগুলিকে বিপরীত করেছে।
আরো তথ্যের জন্য, এখানে ক্লিক করুন।
উপসংহার
উপসংহারে, C. deserticola AQP3-এর অভিব্যক্তিকে বাধা দিতে পারে এবং SCF/C-কিট পথের মাধ্যমে Cx43-এর অভিব্যক্তিকে উন্নীত করতে পারে, যার ফলে লোপেরামাইন দ্বারা প্ররোচিত কোষ্ঠকাঠিন্যের উন্নতি হয় এবং বয়স্ক ইঁদুরের কোলনিক টিস্যুর ক্ষতি হ্রাস পায়। এই গবেষণাটি C. deserticola-এর ক্লিনিকাল ব্যবহারের জন্য ভাল তাত্ত্বিক ভিত্তি প্রদান করেছে।
