রেনাল ফাইব্রোসিস ডেভেলপমেন্টে ট্রান্সফর্মিং গ্রোথ ফ্যাক্টর- (TGF-) কেন্দ্রীয় ভূমিকা

যোগাযোগ: অড্রে হু হোয়াটসঅ্যাপ/এইচপি: 0086 13880143964 ইমেল:audrey.hu@wecistanche.com

অংশ Ⅰ: টিজিএফ- 1-মধ্যস্থ ফাইব্রোসিস-নকল ডিভাইসে মানুষের প্রাথমিক রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টের ভূমিকা

Seong-Hye Hwang, Yun-Mi Lee এবং et al.

1। পরিচিতি

রেনাল ফাইব্রোসিস, অসংখ্য প্রগতিশীল কিডনি রোগের চূড়ান্ত সাধারণ পথ, এক্সট্রা সেলুলার ম্যাট্রিক্স (ECM) প্রোটিন উৎপাদন বৃদ্ধি, ম্যাট্রিক্সের অবক্ষয়, কোষ-ম্যাট্রিক্স মিথস্ক্রিয়া কর্মহীনতা, আবাসিক কোষের রূপান্তর এবং প্রদাহজনক কোষের অনুপ্রবেশ দ্বারা চিহ্নিত করা হয়।রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-(TGF-) হল একটি বহুমুখী ডাইমেরিক পেপটাইড যা কোষের বিস্তার, পার্থক্য, এবং ইমিউনোলজিকাল প্রতিক্রিয়াগুলির মতো জৈবিক প্রক্রিয়াগুলি নিয়ন্ত্রণ করে [1]। অসংখ্য ফাইব্রোজেনিক কারণের মধ্যে, TGF- (রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-) একটি কেন্দ্রীয় ভূমিকা পালন করে এবং একটি প্রদাহ-বিরোধী প্রভাব রয়েছে। TGF- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)- অভাব ইঁদুর ব্যাপক প্রদাহ মারা. ট্রান্সজেনিক ইঁদুর ওভার এক্সপ্রেসিং TGF- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)রেনাল ফাইব্রোটিক প্যাথলজির বিকাশ থেকে কার্যত সুরক্ষিত, প্রধানত এর প্রদাহ-বিরোধী কার্যকলাপের মাধ্যমে [2]। টিজিএফ-এর প্রোফাইব্রোটিক এবং অ্যান্টি-ইনফ্লেমেটরি বৈশিষ্ট্য(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)টিজিএফ-এর থেরাপিউটিক প্রয়োগ সম্পর্কিত দ্বি-ধারী তরোয়াল-(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)বাধা TGF-কে বাধা দেওয়ার জন্য উল্লেখযোগ্য প্রচেষ্টা করা হয়েছে-(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)এর অগ্রগতি বাধাগ্রস্ত করার জন্য পদক্ষেপরেনালফাইব্রোসিস[৩]। যদিও যুদ্ধের জন্য অনেক পন্থা ব্যবহার করা হয়েছেরেনালফাইব্রোসিস, বর্তমানে উপলব্ধ ওষুধের মূল্যায়ন করার জন্য একটি পরীক্ষামূলক মডেল আদর্শ নয়।

cistanche ঔষধি প্রতিরোধকিডনি রোগ

সাধারণভাবে, ফার্মাকোকিনেটিক্স এবং ওষুধের কার্যকারিতা ভবিষ্যদ্বাণীতে প্রাক-ক্লিনিকাল পরীক্ষায় পশু অধ্যয়ন একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে। যাইহোক, প্রাণী এবং মানুষের মধ্যে বিভিন্ন পার্থক্য বিদ্যমান, যা আমাদের পশু-ভিত্তিক ওষুধের কার্যকারিতা এবং নিরাপত্তা পরীক্ষার নির্ভুলতা নিয়ে প্রশ্ন তোলে। প্রাণীদের কিডনির কার্যকারিতা মানুষের কিডনির দ্বিগুণেরও বেশি। তাই, মানুষের তুলনায় পশুদের মধ্যে ওষুধগুলি আরও দ্রুত বিপাকিত হয়, যা পশুর অধ্যয়ন ব্যবহার করে ওষুধের বিষাক্ততা পরীক্ষার ফলাফলগুলিকে ব্যাখ্যা করা কঠিন করে তোলে। উপরন্তু, পশু পরীক্ষার ফলাফল মানুষের মধ্যে ড্রাগ প্রতিক্রিয়া ভবিষ্যদ্বাণী করতে ব্যবহার করা যাবে না, কারণ প্রাণীদের বিভিন্ন শারীরবৃত্তীয় কাজ আছে। পশু-ভিত্তিকরেনাল ফাইব্রোসিসমডেল মানুষের প্রজনন অসুবিধা আছেরেনাল ফাইব্রোসিস; অতএব, বর্তমান বাধাগুলি অতিক্রম করতে এবং ড্রাগ-আবিষ্কার প্ল্যাটফর্মগুলিকে অপ্টিমাইজ করার জন্য গবেষণা চলছে [5]।

অর্গান-অন-এ-চিপ (ওওসি) প্রযুক্তি এই সমস্যাগুলি সমাধানের জন্য একটি অভিনব ধারণা হিসাবে আবির্ভূত হয়েছে। এই প্ল্যাটফর্মটি বর্তমান ত্রুটিগুলি বিবেচনা করে ডিজাইন করা হয়েছিল, এবং এটি নেফ্রোলজির ক্ষেত্রে দুর্দান্ত প্রতিশ্রুতি দেখিয়েছে [6]। এছাড়াও, OoC মডেলগুলি পরীক্ষামূলক প্রাণী মডেলগুলির প্রতিস্থাপন হিসাবে দুর্দান্ত সম্ভাবনা ধারণ করে, আন্তঃ-প্রজাতির পার্থক্যগুলির জন্য একটি সমাধান সরবরাহ করে এবং প্রাণী নিষ্ঠুরতা এবং নৈতিক বিতর্কের অবসানে সহায়তা করতে পারে [7]। কয়েকটি ইন ভিট্রো মডেল রয়েছে যা একই সাথে এন্ডোথেলিয়াল এবং এপিথেলিয়াল কোষের সাথে প্রাথমিক রেনাল ফাইব্রোব্লাস্ট ব্যবহার করে, যা গুরুত্বপূর্ণ কোষকিডনিফাইব্রোসিস. প্রতিটি কোষের ভূমিকাফাইব্রোসিসআলাদাভাবে অধ্যয়ন করা হচ্ছে; তবে, কোষের মিথস্ক্রিয়া সম্পর্কে সীমিত জ্ঞান রয়েছে।

বর্তমান গবেষণায়, আমরা উন্নতফাইব্রোসিস- মানুষের প্রাথমিক ফাইব্রোব্লাস্ট ব্যবহার করে নকল করা ডিভাইস। আমরা নিশ্চিত করেছি যে TGF- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)চিকিত্সার উপর বিভিন্ন প্রভাব রয়েছেরেনাল ফাইব্রোসিসমডেল. উল্লেখযোগ্যভাবে, ফাইব্রোব্লাস্টগুলি প্রভাবক কোষ হিসাবে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে, একটি প্রো-ফাইব্রোটিক মাইক্রোএনভায়রনমেন্ট গঠনের প্রচার করে এবং বৃদ্ধির কারণ এবং সাইটোকাইনগুলি নিঃসরণ করে। অতএব, এই নতুন পদ্ধতির উপর ভিত্তি করে, ফাইব্রোব্লাস্টগুলি রেনাল রোগ অধ্যয়নের জন্য একটি আদর্শ সেল মডেল সিস্টেম সরবরাহ করতে পারে। আমরা মূল্যায়ন করেছি যে ফাইব্রোটিক রেনাল ডিজিজ থেকে প্রাপ্ত ফাইব্রোব্লাস্টগুলি তিনটি মাত্রায় (3D) সংস্কৃত কোষগুলির অখণ্ডতাকে প্রভাবিত করে কিনা। অবশেষে, আমরা একটি প্রুফ-অফ-প্রিন্সিপল অধ্যয়ন উপস্থাপন করি যা মানুষের সম্ভাব্যতা প্রদর্শন করেরেনাল ফাইব্রোসিস- মানুষের প্রতিক্রিয়া ভবিষ্যদ্বাণী করার জন্য একটি মডেল হিসাবে ডিভাইসগুলি অনুকরণ করারেনাল ফাইব্রোসিস.

cistanche এর প্রভাব: কিডনি সংক্রমণের চিকিৎসা

2. ফলাফল

2.1.TGF- 1 দ্বারা আলফা মসৃণ পেশী অ্যাক্টিন (a-SMA) এবং কেরাটিন-8(KRT-8) সনাক্তকরণ(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)HK-2 কোষে

প্রাথমিক পর্যায়ে, আমরা এর পরিচিত চিহ্নিতকারী পরীক্ষা করেছিফাইব্রোসিসএবং দ্বি-মাত্রিক (2D) সংস্কৃতিতে সাইটোস্কেলটন। ফাইব্রোসিসের -এসএমএ এক্সপ্রেশন এবং মেসেনকাইমাল ট্রানজিশন (ইএমটি) মার্কার থেকে টিউবুলার এপিথেলিয়াল এবং সাইটোস্কেলটন চিহ্নিতকারী হিসাবে কেআরটি 8 স্তর অনুমান করার জন্য ইমিউনোফ্লুরোসেন্ট স্টেনিং অ্যাসেস করা হয়েছিল। ইমিউনোফ্লোরেসেন্স স্টেনিং দেখায় যে -SMA-এর অভিব্যক্তিটি মূলত দুর্বল ছিল এবং মনোলেয়ার HK-2 এপিথেলিয়াল কোষে KRT8 মাত্রা বেশি ছিল। TGF- 1 দ্বারা ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতায় কোনো উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন হয়নি(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)(5 ng/mL) অথবা 24 ঘন্টার জন্য HK-2 এপিথেলিয়াল কোষের নির্দিষ্ট প্রতিরোধক চিকিত্সা (চিত্র 1)।

চিত্র 1. ইমিউনোফ্লোরোসেন্স দেখায় যে আলফা-এসএমএ এবং কেরাটিনের অভিব্যক্তি-8(KRT8) টিজিএফ- 1 চিকিত্সার মাধ্যমে বজায় রাখা হয়েছিল(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)বা HK-2 কোষে ইনহিবিটার।(A) আলফা-SMA এবং (B)CCK-8 এর অভিব্যক্তি TGF দ্বারা HK-2কোষের উপর কোন প্রভাব ফেলেনি- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)(5ng/mL) বা ইনহিবিটার। কোষগুলি মূলত 1×10 ডিগ্রী প্রতি কূপ (ac) অপরিশোধিত নিয়ন্ত্রণে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল এবং (df）5ng/mL TGF দিয়ে উদ্দীপিত হয়েছিল- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-) অথবা (gi）10 μM ইনহিবিটর（SB431542）) 24 ঘন্টার জন্য এবং 4 শতাংশ প্যারাফর্মালডিহাইড দিয়ে স্থির। তারপর কোষগুলিকে 20 মিনিটের জন্য অ্যান্টি- -এসএমএ এবং অ্যান্টি-সাইটোকেরাটিন-8 দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল। কোষের নিউক্লিয়াস সনাক্ত করতে Hoechst dye H33342 এর সাথে সহ-দাগ দেওয়া হয়েছিল। মাইক্রোগ্রাফে স্কেল বার 200 um নির্দেশ করে।

cistanche পাউডার কিডনির কার্যকারিতা উন্নত করে

2.2। KRT8 এক্সপ্রেশন TGF দ্বারা হ্রাস পেয়েছে- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)একটি চিপে

এর পরে, আমরা 3D-সংস্কৃতি HK-2-এ -SMA এবং KRT8-এর অভিব্যক্তি স্তর এবং TGF- 1 দিয়ে চিকিত্সা করা GFP-মানুষের নাভি-শিরার এন্ডোথেলিয়াল কোষের (HUVECs) মোট দৈর্ঘ্য মূল্যায়ন করেছি।(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)এবং একটি নির্দিষ্ট ইনহিবিটার। এটি সম্পন্ন করার জন্য, আমরা প্রথমে দুটি কোষের ধরন, HK-2 এপিথেলিয়াল কোষ এবং GFP-HUVECs সমন্বিত একটি টিস্যু চিপ প্যাটার্ন স্থাপন করেছি। নির্মাণের নিশ্চিতকরণের পরে, আমরা টিজিএফ দিয়ে টিস্যু চিপ প্রকাশ করেছি- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)(5 ng/mL) বা একটি নির্দিষ্ট ইনহিবিটর (10 um SB431542) 24 ঘন্টার জন্য।

চিত্র 2A-C-তে দেখানো হয়েছে, TGF- 1 দ্বারা -SMA-এর অভিব্যক্তি বিশেষভাবে পরিবর্তিত হয়নি(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)বা নির্দিষ্ট ইনহিবিটার চিকিত্সা। যাইহোক, দুই-কোষের সহ-সংস্কৃতি চিপে KRT8 এর অভিব্যক্তি হ্রাস করা হয়েছিল। তদুপরি, একটি TGF-ß1 ইনহিবিটর যুক্ত করা KRT8 এর অভিব্যক্তি বাড়িয়েছে।

আমরা TGF- 1 দ্বারা একটি 3D টিউবুলার কৈশিক-সদৃশ নেটওয়ার্ক গঠন পরীক্ষা করেছি(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)এইচইউভিইসি-তে চিকিত্সা, কারণ এন্ডোথেলিয়াল কোষগুলি স্বতঃস্ফূর্তভাবে একটি 3D টিউবুলার কৈশিকের মতো নেটওয়ার্ক তৈরি করতে পারে। আমাদের সাংস্কৃতিক অবস্থা অনুসারে, পুরু রেখার গঠন উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। যাইহোক, টিজিএফ- 1তে কৈশিকের মতো পাতলা লাইনগুলি বৃদ্ধি করা হয়েছিল(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)চিকিত্সা করা GFP-HUVECs। TGF এর ক্ষেত্রে- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)3D-সংস্কৃতি চিপে ইনহিবিটর ট্রিটমেন্ট, মোটা এবং পুরু লাইনের মোট দৈর্ঘ্য TGF এর বিপরীত প্রবণতা দেখায়- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)চিকিত্সা চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় পুরু লাইনের দৈর্ঘ্য বৃদ্ধি লক্ষ্য করা গেছে। TGF- 1-এর পরে GFP-HUVEC-তে পুরু রেখার ব্যাসে অনুরূপ প্যাটার্ন পরিলক্ষিত হয়েছিল(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)চিকিত্সা এবং প্রতিরোধক চিকিত্সা। GFP-HUVEC এর ব্যাস TGF দ্বারা চাপা ছিল- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)চিকিত্সা কিন্তু নিয়ন্ত্রণ এবং TGF উভয়ের তুলনায় ইনহিবিটর দ্বারা লাইনের পুরুত্ব নির্বিশেষে বৃদ্ধি পেয়েছে- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-). মোটা লাইনের মোট দৈর্ঘ্য এবং ব্যাস টিজিএফ- 1 ইনহিবিটর চিকিত্সার দ্বারা অচিকিৎসাহীন নিয়ন্ত্রণ এবং টিজিএফ- 1 চিকিত্সার তুলনায় নাটকীয়ভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। উল্লেখযোগ্যভাবে, প্রাপ্ত ফলাফলগুলি TGF-তে ক্ষুদ্র জাহাজের বর্ধিত ঘনত্ব নির্দেশ করে।(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)-চিকিত্সা করা গোষ্ঠী তাদের চিকিত্সা না করা সমকক্ষদের তুলনায়। বিপরীতে, টিজিএফে পুরু জাহাজের ঘনত্ব- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)চিকিত্সা গোষ্ঠী চিকিত্সাবিহীন নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় কম ছিল (চিত্র 2D, E)।

চিত্র 2. HK-2-এ KRT8 এক্সপ্রেশন এবং HUVEC-এর মোট দৈর্ঘ্য এবং ব্যাস।(A)ইমিউনোফ্লোরোসেন্স দেখায় যে -SMA-এর অভিব্যক্তি বজায় ছিল এবং TGF-এর চিকিত্সার মাধ্যমে KRT8 অভিব্যক্তি নাটকীয়ভাবে হ্রাস পেয়েছে- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)HK-2-এ। কোষগুলিকে ধাতুপট্টাবৃত করা হয়েছিল এবং 5ng/mL TGF দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)বা 10 μm ইনহিবিটর （SB 431542） 24 ঘন্টার জন্য এবং 4 শতাংশ প্যারাফর্মালডিহাইড দিয়ে স্থির। কোষগুলিকে 20 মিনিটের জন্য অ্যান্টি- -এসএমএ এবং অ্যান্টি-সাইটোকেরাটিন-8 দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল৷ কোষের নিউক্লিয়াস সনাক্ত করতে Hoechst dye H33342 এর সাথে সহ-দাগ দেওয়া হয়েছিল। -SMA(ac)-এর অভিব্যক্তিতে কোনো পরিবর্তন হয়নি তবে HK-2 কোষে KRT8(df) এবং HUVEC (gi) অভিব্যক্তিতে GFP উল্লেখযোগ্যভাবে TGF দ্বারা পরিবর্তিত হয়েছে- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)(5 ng/mL) এবং ইনহিবিটর (B, C)। HUVEC এর মোট দৈর্ঘ্যে, পাতলা পাত্রটি বাড়ানো হয়েছিল কিন্তু পুরু পাত্রটি TGF দ্বারা হ্রাস পেয়েছে- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-). পাতলা এবং পুরু উভয় পাত্রে ব্যাস বাড়ানো হয়েছিল। এই ফলাফলগুলি ইনহিবিটর SB431542 (D, E) দ্বারা বিপরীত করা হয়েছিল। মাইক্রোগ্রাফে স্কেল বারগুলি 100 μm.*p নির্দেশ করে<><><0.001 versus="" the="" control=""><><0.001 versus="" the="" tgf-β1="" group.="" each="" value="" represents="" three="" technical="" replicates="" of="" each="" of="" the="" three="" biological="" replicates.="" statistical="" significance="" of="" the="" length="" compared="" to="" the="" non-treated="" cells="" is="" represented="" in="" the="" graph.="" thin="" vessels="" mean="" a="" length="" shorter="" than="" 50="" um="" and="" thick="" vessels="" represent="" a="" length="" longer="" than="" 50="">

সিস্টানচে কিসের জন্য ব্যবহার করা হয়: দীর্ঘস্থায়ী কিডনি রোগের চিকিৎসা

2.3। TGF- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)মাল্টি-কম্পার্টমেন্ট স্ট্রাকচার সহ চিপের তিনটি কোষের ধরনকে প্রভাবিত করে

TGF অধ্যয়ন করতে- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)প্রস্তাবিত 3D চিপের প্রতিক্রিয়া, আমরা প্রতিটি বগিতে আলাদাভাবে ইমিউনোস্টেইনিং করেছি (চিত্র 3)। এই বিশ্লেষণে প্রাথমিক মানব রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টগুলি ব্যবহার করা হয়েছিল। নমুনাগুলি FACS ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং ফাইব্রোব্লাস্ট মার্কার অ্যান্টিবডির জন্য ইতিবাচক বলে নিশ্চিত করা হয়েছিল। TGF- 1 দিয়ে তিনটি কোষের প্রকারের ইনকিউবেশন অনুসরণ করে(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)24 ঘন্টার জন্য, -SMA এবং KRT8 এর অভিব্যক্তি মূল্যায়ন করতে ইমিউনোস্টেইনিং করা হয়েছিল। A-SMA-এর অভিব্যক্তিটি TGF-1 চিকিত্সার দ্বারা আপ-নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল, এবং TGF- 1 এর সাথে বিপরীত ফলাফল পরিলক্ষিত হয়েছিল(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)ইনহিবিটার চিকিত্সা। বিপরীতভাবে, KRT8 এর অভিব্যক্তিটি TGF দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)এবং TGF-এর বিপরীত প্রতিক্রিয়া দেখিয়েছে-(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)ইনহিবিটার (চিত্র 4A-C)।

চিত্র 3. নমুনা চিত্র ডিভাইসের পরিকল্পনামূলক প্রদর্শনের সাথে ফ্যাব্রিকেশন এবং পরীক্ষামূলক সময়সূচী।(A) উপরের দুটি ছবি লেআউট দেখায়। বাম চিত্রটি ডিভাইসের একটি সামগ্রিক টপ-ডাউন ফটো দেখায়। নীচের ছবিগুলি ক্রস-সেকশন দেখায়। তরল গাইডের মাত্রা বিস্তারিত পরিকল্পিত দৃশ্য। (B) এই চিত্রটি পরীক্ষামূলক সময়সূচী বর্ণনা করেফাইব্রোসিস- নকল ডিভাইস। প্রতিটি কূপের জন্য চার-পদক্ষেপ লোডিং প্রক্রিয়া। প্রতিটি হাইড্রোজেল প্যাটার্নিং এলাকার অবস্থান, পাশাপাশি শীর্ষ-নিচে এবং আইসোমেট্রিক ক্রস-সেকশনে মিডিয়া স্থাপন। (1) হাইড্রোজেল 1 এর মোট 1.5 uL স্বতঃস্ফূর্তভাবে কেন্দ্রীয় চ্যানেলে পরিচালিত হয়। (2) কেন্দ্রীয় চ্যানেল হাইড্রোজেলের 5uL দিয়ে পূর্ণ। (3) জলাধারের মেঝেতে মোট 10uL হাইড্রোজেল 3 প্যাটার্ন করা হয়েছে। （4） মোট 200μL মিডিয়া বিতরণ করা হয়। লাল স্কেল বার=9 মিমি।

চিত্র 4D-G-তে যেমন দেখানো হয়েছে, কৈশিক-সদৃশ পাতলা রেখার দৈর্ঘ্য TGF দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)জিএফপি-এইচইউভিইসি-তে চিকিত্সা। যাইহোক, TGF- 1 এ পুরু লাইনের পুরুত্ব হ্রাস পেয়েছে(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)চিকিত্সা HUVECs. এইচইউভিইসি-তে পাতলা এবং পুরু জাহাজের জন্য ব্যাস গড়ে হ্রাস করা হয়েছিল। TGF এর ক্ষেত্রে- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)3D-সংস্কৃতি চিপে ইনহিবিটর চিকিত্সা, মোটা এবং পুরু লাইনের মোট দৈর্ঘ্য TGF- 1 চিকিত্সার বিপরীত প্রবণতা দেখায়। আরও, চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় পুরু লাইনের দৈর্ঘ্য বাড়ানো হয়েছিল।

চিত্র 4. প্রাথমিক রেনাল ফাইব্রোব্লাস্ট সহ 3D-সংস্কৃতি HK-2 এবং HUVEC-এর পরিবর্তন।মোট কোষগুলি প্রতি 3D চিপ প্রতি 5×10 ডিগ্রি ঘনত্বে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল এবং 5 ng/mL TGF দিয়ে উদ্দীপিত হয়েছিল- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)বা 10 μm ইনহিবিটর （SB 431542） 24 ঘন্টার জন্য এবং 4 শতাংশ প্যারাফর্মালডিহাইড দিয়ে স্থির। (A) 3D চিপের কোষগুলি অ্যান্টি-ও-এসএমএ এবং অ্যান্টি-সাইটোকেরাটিন দিয়ে দাগযুক্ত ছিল-8। -SMA (ac) এর অভিব্যক্তি বৃদ্ধি করা হয়েছে এবং KRT8(df) অভিব্যক্তি TGF- 1(5 ng/mL) দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। HUVEC এর মোট দৈর্ঘ্য; পাতলা পাত্রগুলি নাটকীয়ভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে এবং মোটা জাহাজগুলি TGF-ß1 দ্বারা হ্রাস পেয়েছে(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)(ডি, ই)। পাতলা এবং পুরু জাহাজের (এফ, জি) জন্য ব্যাস হ্রাস করা হয়েছিল। এই ফলাফলগুলি ইনহিবিটর SB431542 দ্বারা বিপরীত হয়েছিল। মাইক্রোগ্রাফে স্কেল বারগুলি 100 μm.*p নির্দেশ করে<><0.01,and **=""><0.001 versus="" the="" control=""><><><0.001 versus="" the="" tgf-β1="" group.="" each="" value="" represents="" three="" technical="" replicates="" of="" each="" of="" the="" three="" biological="" replicates.="" thin="" vessels="" mean="" a="" length="" shorter="" than="" 50="" um="" and="" thick="" vessels="" represent="" a="" length="" longer="" than="" 50="">

2.4.TGF-81 প্রদাহজনক মধ্যস্থতাকারী এবং বৃদ্ধির কারণগুলিকে সংশোধন করে

এরপরে, আমরা সুপারনাট্যান্টে প্রদাহজনক সাইটোকাইন এবং বৃদ্ধির কারণগুলি তদন্ত করেছি; IL-1 , FGF-2, TGF- 2(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-), এবং TGF- 3(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)প্রোটিন নিঃসরণ 3D-সংস্কৃতি চিপগুলিতে 2D ফাইব্রোব্লাস্টের তুলনায় নাটকীয়ভাবে বেশি ছিল, যদিও তাদের মোট কোষের সংখ্যা একই ছিল। যাইহোক, TGF- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-) স্তরগুলি একই রকম ছিল, কারণ 2D- বা 3D-সংস্কৃতি মডেলগুলিকে TGF এর অনুরূপ ঘনত্বের সাথে চিকিত্সা করা হয়েছিল- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)(চিত্র 5A-E)। বিশেষত, মানুষের প্রাইমারি রেনাল ফাইব্রোব্লাস্ট থেকে FGF-2 নিঃসৃত হয়েছিল 20.9 ± 0.4 pg/day/5×10 ডিগ্রী কোষ 2D মনো-স্তরযুক্ত সংস্কৃতি এবং 3094.8± 0.2 pg/day/5×10 ডিগ্রী সেল সহ HUVECs এবং HK-2 3D-সংস্কৃতি চিপের চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণে। TGF- 1 দ্বারা FGF-2 এর নিঃসরণ(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)স্টিমুলেশন ছিল 31। -সংস্কৃত চিপ। 2D মনোলেয়ার কালচারে এফজিএফ-2 প্রোটিন উৎপাদনের এই বৃদ্ধি টিজিএফ দ্বারা 3ডি-কালচারড চিপ মডেলের বৃদ্ধির সাথে সমান্তরাল ছিল- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)চিকিত্সা (চিত্র 5 বি)।

চিত্র 5. রেনাল ফাইব্রোসিস-নকল প্ল্যাটফর্ম হিসাবে 2D-এবং 3D-সংস্কৃতি মডেলের তুলনা।কোষগুলিকে 2D ওয়েল বা 3D চিপ প্রতি 5×10 ডিগ্রী ঘনত্বে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল এবং 5ng/mL TGF দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)অথবা 10 um ইনহিবিটর (SB 431542) 24 ঘন্টার জন্য। প্রাথমিক মানব রেনাল ফাইব্রোব্লাস্টগুলি 2D-সংস্কৃতি এবং 3D-সংস্কৃতি মডেলে ব্যবহৃত হয়েছিল। ফাইব্রোব্লাস্টগুলি HUVEC এবং HK-2 এর সাথে 8×10* সংষ্কৃত ঘনত্বে ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রাথমিক মানব রেনাল ফাইব্রোব্লাস্ট থেকে HUVEC অনুপাত, বা F: H অনুপাত, মূল্যায়নের জন্য ছিল 1:5ফাইব্রোসিস.HK-2 কোষগুলি 2×104 এর ঘনত্বে ব্যবহৃত হয়েছিল। (A)IL-1 ,(B)বেসিক ফাইব্রোব্লাস্ট গ্রোথ ফ্যাক্টর (FGF-2), এবং (CE) TGF-বিটা 1, 2, এবং 3 সুপারনাট্যান্টের মাল্টিপ্লেক্স বিশ্লেষণের মাধ্যমে সনাক্ত করা হয়েছিল সাইটোকাইনস এবং মাল্টিপ্লেক্স গুটিকা ইমিউনোসাই। প্রতিটি বার গড় ± SE.*p প্রতিনিধিত্ব করে<0.05,***><0.001 versus=""><0.01,##><0.001 versus="">(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-).

cistanche tubolosa উপকারিতা: কিডনি রোগের চিকিৎসা

উপরন্তু, আমরা IL-1, IL-6, IL-8, এবং TNF- এর মতো প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইনের mRNA এক্সপ্রেশন অনুমান করেছি। ফলাফলগুলি রিকম্বিন্যান্ট হিউম্যান টিজিএফ দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)TGF-এর একটি প্রদাহ-বিরোধী সম্পত্তি হিসাবে 3D-সংস্কৃতি চিপে চিকিত্সা-(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-). আমরা দেখেছি যে mRNA এক্সপ্রেশন টিজিএফ দ্বারা আপ-নিয়ন্ত্রিত হয়েছে- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)ইনহিবিটার (SB431542)। অধিকন্তু, IL-6, IL-8, এবং TNF--এর ইনহিবিটর-মিডিয়াটেড এক্সপ্রেশন বিশেষভাবে চিকিত্সা না করা নিয়ন্ত্রণের তুলনায় নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল (চিত্র 6A-D)। VEGF এর mRNA স্তর, একটি ফাইব্রোটিক ফ্যাক্টর, TGF দ্বারা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)চিকিত্সা TGF- 1 ইনহিবিটর (চিত্র 6E) দ্বারা VEGF-এর mRNA স্তর হ্রাস পেয়েছে, যেখানে IL-10-এর mRNA এক্সপ্রেশন টিজিএফ দ্বারা প্ররোচিত ফাইব্রোটিক পরিস্থিতিতে হ্রাস পেয়েছে। . বিপরীতে, TGF- 1ইনহিবিটর ট্রিটমেন্ট (চিত্র 6F) দ্বারা I-10mRNA এক্সপ্রেশন বৃদ্ধি করা হয়েছিল।

চিত্র 6. রিয়েল-টাইম পিসিআর 3D চিপের সামগ্রিক mRNA এক্সপ্রেশন দেখায়।কোষগুলিকে 3D চিপ প্রতি 5×10 ডিগ্রির ঘনত্বে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল এবং 5ng/mL TGF দিয়ে উদ্দীপিত করা হয়েছিল- 1(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)অথবা 10 um ইনহিবিটর (SB431542) 24 ঘন্টার জন্য। 3D-সংস্কৃতি চিপ থেকে মোট RNA বের করা হয়েছে। (A)IL-1 ,(B)TNF- ,(C)IL-6, এবং (D)IL-8-এর mRNA অভিব্যক্তি TGF-এর প্রদাহ-বিরোধী প্রভাবকে প্রতিনিধিত্ব করে{ {10}}(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-)চিকিত্সা (E) এনজিওজেনিক ফ্যাক্টর হিসাবে ভিইজিএফ এক্সপ্রেশন বাড়ানো হয়েছিল। (F) IL-10 এক্সপ্রেশন একটি অ্যান্টি-ফাইব্রোটিক ফ্যাক্টর হিসাবে উল্লেখযোগ্যভাবে TGF- 1 দ্বারা হ্রাস পেয়েছে।*p<><><0.001 versus=""><><><0.001 versus="">(রূপান্তরকারী বৃদ্ধি ফ্যাক্টর-).

পার্ট Ⅰ Ⅱ করতে এখানে ক্লিক করুন