টেট্রাহাইমেনা থার্মোফিলা পরীক্ষামূলক উপাদান হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল

অনুগ্রহ করে যোগাযোগ করুনoscar.xiao@wecistanche.comআরও তথ্যের জন্য

এই পরীক্ষায়, টেট্রাহাইমেনা থার্মোফিলা পরীক্ষামূলক উপাদান হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। T. থার্মোফিলা হল একটি মুক্ত-জীবিত সিলিয়েট যা বিশ্বব্যাপী জলজ বাস্তুতন্ত্রে ব্যাপকভাবে বিদ্যমান এবং গঠন ও কার্যকরী জটিলতায় মেটাজোয়ান কোষের অনুরূপ। টেট্রাহাইমেনায় রাইবোজিনেল 6 এবং টেলোমেরাসেল 7 এর আবিষ্কার অ্যান্টি-এজিং মেকানিজম গবেষণায় একটি বড় উত্সাহ দিয়েছে, যা দুটি নোবেল পুরস্কার 8 পেয়েছে। এর সংক্ষিপ্ত বৃদ্ধি চক্র, সহজ সংস্কৃতি এবং পরিষ্কার জেনেটিক পটভূমির কারণে, টি. থার্মোফাইল একটি পরীক্ষামূলক ডিজাইনে ভিভো এবং ভিট্রোতে দ্বৈত গবেষণা প্রদান করতে পারে। T. থার্মোফিলা ড্রাগ স্ক্রীনিং এবং ফার্মাকোলজিক্যাল মেকানিজম 20 সফলভাবে ব্যবহার করা হয়েছে। আরও গুরুত্বপূর্ণ, টি. থার্মোফিলা গ্লুটাথিয়ন পারক্সিডেস পরিবারের আণবিক বিবর্তনের তথ্য উন্মোচিত হয়েছে9-2। টি-এর তথ্য প্রোফাইল।চেঙ্গিস খানথার্মোফিলা জিপিএক্স জিনগুলি টেট্রাহাইমেনা ফাংশনাল জিনোমিক্স ডেটাবেস(টেট্রাএফজিডি)(http://tfgd.ihb.ac.cn/)এবং TGD(http://ww. ciliate.org) 22 থেকে পাওয়া যেতে পারে। টেট্রাহাইমেনা জিনোম তুলনামূলক ডাটাবেসে ফসফোলিপিড হাইড্রোপেরক্সাইড গ্লুটাথিয়ন পারক্সিডেস (PHGPx) হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে। PHP, একটি সেলেনিয়াম-নির্ভর GPX, বিশেষভাবে ফসফোলিপিড হাইড্রোপেরক্সাইড কমাতে পারে লেসিথিন লাইপোসোম এবং বায়োফিল্মগুলিকে অক্সিডেটিভ ক্ষতি থেকে রক্ষা করতে। PHGPxin T। থার্মোফিলার গড় আণবিক ভর প্রায় 21.7 kDa22, যা আণবিক ভরের অনুরূপ (20-22 স্তন্যপায়ী 24-এ বর্ণিত PHGPx মনোমার প্রোটিনের kDa)। অধিকন্তু, প্রচুর সংখ্যক প্রতিবেদনে দেখা গেছে যে থার্মোফিলার জিপিএক্স এক্সপ্রেশন পরিমাণগতভাবে ভিন্ন এবং স্ট্রেস উত্সের (অক্সিডেন্ট, অ্যাপোপটোসিস ইনডিউসার বা ধাতু) 2122 এবং এক্সপোজার সময়ের উপর নির্ভরশীল ছিল20-24

আরো জানতে এখানে ক্লিক করুন

বৃদ্ধির বক্ররেখা এবং T. থার্মোফিলার সর্বাধিক ঘনত্বের উপর G.lucidum-এর জলীয় নির্যাস এবং প্রধান monomers-এর প্রভাব তুলনা করে, এই গবেষণাটি সেরা অ্যান্টি-এজিং G. লুসিডাম নির্যাস পেয়েছে। G. lucidum-এর অ্যান্টি-এজিং মেকানিজম, বিশেষ করে GPX ফ্যামিলির অ্যাকশনের ধরণ নির্ধারণ, আণবিক, সেলুলার এবং ব্যক্তিগত স্তরে তদন্ত করা হয়েছিল। এই গবেষণার ফলাফল G. lucidum পণ্যের ক্লিনিকাল প্রয়োগে অবদান রাখবে বলে আশা করা হচ্ছে।

উপকরণ এবং পদ্ধতিসমূহ

গ্যানোডার্মা লুসিডাম জলীয় নির্যাস এবং মনোমার। কুওং 25,20 গ্রাম শুকনো জি লুসিডাম (চাংবাই মাউন্টেন সেনবাও স্পেশালিটি স্টোর, জিলিন) এর রিপোর্টের উল্লেখ করে 1000 মিলি ডিডিএইচওতে মাটিতে বের করা হয়েছিল। জলীয় নির্যাস সেন্ট্রিফিউগেশনের মাধ্যমে সংগ্রহ করা হয়েছিল, ভ্যাকুয়াম শুকানোর মাধ্যমে 100 মিলিগ্রামে ঘনীভূত করা হয়েছিল, এবং ব্যবহার না হওয়া পর্যন্ত -20 ডিগ্রিতে সংরক্ষণ করা হয়েছিল।

G. lucidum polysaccharide, Ganoderic Acid A, Ganoderal A, এবং G. lucidum ergosterol কেনা হয়েছে Chengdu Must Biotechnology Co., Ltd. থেকে। এই তিনটি স্ট্যান্ডার্ড ইউনিফর্ম ডিজাইন অনুসারে মিথানলে দ্রবীভূত হয়েছিল এবং এসপিপি মিডিয়ামে যোগ করা হয়েছিল। কোষ সংস্কৃতি এবং ড্রাগ চিকিত্সা। Tetrahymenathermophila (SB210) ইনস্টিটিউট অফ হাইড্রোবায়োলজি, চাইনিজ একাডেমি অফ সায়েন্সেস, উহান, আইপিআর চায়না দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছে। T. থার্মোফিলা একটি 28 ডিগ্রী ইনকু-ব্যাটারে সংষ্কৃত হয়েছিল। এসপিপি মিডিয়ামে 2 শতাংশ (w/v) প্রোটিজ পেপটোন, 0.1 শতাংশ ইস্ট এক্সট্র্যাক্ট (অক্সয়েড),0.2 শতাংশ গ্লুকোজ এবং 0.003 শতাংশ সিকোস্ট্রিন রয়েছে। ইউনিফর্ম ডিজাইন অনুযায়ী (পরিপূরক টেবিল S1 এবং S2), G. লুসিডাম জলীয় নির্যাস, G. লুসিডাম পলিস্যাকারাইড, গ্যানোডেরিক অ্যাসিড এ, গ্যানোডেরাল এ এবং জি লুসিডাম এরগোস্টেরল সংস্কৃতির মাধ্যমে যোগ করা হয়েছিল। কন্ট্রোল গ্রুপটি প্রতি গোষ্ঠীতে 3টি সমান্তরাল-লেল নমুনা সহ ডবল পাতিত জলের একই পরিমাণ দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয়েছিল। লগারিদমিক পর্বে প্রবেশ করার পরে, পতনের পর্যায় পর্যন্ত প্রতি 2 ঘন্টা নমুনা নেওয়া হয়েছিল। T. থার্মোফিলার ঘনত্ব রক্তের কোষ গণনা বোর্ড দ্বারা গণনা করা হয়েছিল, এবং T. থার্মোফিলার ঘনত্ব এবং সময়ের মধ্যে সম্পর্ক টানা হয়েছিল।

ট্রান্সক্রিপশনাল বিশ্লেষণ। পরীক্ষাটি একটি 24-কূপ প্লেট দিয়ে করা হয়েছিল, এবং প্রতিটি কূপ 900 μL SPP দিয়ে তৈরি হয়েছিল৷ পরীক্ষামূলক গ্রুপে, 100 μL 200 mg/mL G. লুসিডাম জলীয় নির্যাস যোগ করা হয়েছিল। নিয়ন্ত্রণ গ্রুপটিকে পরিবর্তে 100 μL ddH O দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। প্রতিটি গ্রুপে তিনটি সমান্তরাল নমুনা সেট করা হয়েছিল।cistanche লাইফ এক্সটেনশনকন্ট্রোল গ্রুপ এবং পরীক্ষামূলক গোষ্ঠী উভয়ই লগারিদমিক পর্যায়ে ছিল (20 h), এবং হ্রাস পর্ব (27h) ট্রান্সক্রিপ্টমিক বিশ্লেষণের জন্য সংগ্রহ করা হয়েছিল। প্রতিটি গ্রুপ জৈবিকভাবে সদৃশ ছিল, এবং সমস্ত নমুনা একটি সম্পূর্ণ-ট্রান্সক্রিপ্ট মাইক্রোয়ারে অ্যাস (বায়োমার্কার টেকনোলজিস, বেইজিং, চীন) এর অধীন ছিল। জিন এক্সপ্রেশন প্রোফাইলটি একটি Affymetrix 3'IVT এক্সপ্রেশন অ্যারে দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল মান জিনের অভিব্যক্তির প্রভাব কমাতে, 5 এর চেয়ে বড় বা সমান RPKM এবং FC(ভাঁজ পরিবর্তন) 2 এর চেয়ে বড় বা সমান স্ক্রীনের মানদণ্ড হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল ভিন্নভাবে প্রকাশিত জিন (DEGs) KOBAS জিনঅন্টোলজি (GO) এবং কিয়োটো এনসাইক্লোপিডিয়া অফ জিনস অ্যান্ড জিনোম (KEGG) এর পাথ বিশ্লেষণ উপলব্ধি করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। সমৃদ্ধকরণের পথটি 0.05 এর চেয়ে কম বা সমান সংশোধন করা P-adj মান দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল। ট্রান্সক্রিপ্টোমের ফলাফলগুলি পরিমাণগত বিপরীত প্রতিলিপি PCR(RT-qPCR)(পদ্ধতি পরিপূরক ফাইল দেখুন) ব্যবহার করে যাচাই করা হয়েছিল। তারপরে, প্রোটিন-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া (PPI) নেটওয়ার্কটি STRING ডাটাবেসের উপর ভিত্তি করে প্রতিষ্ঠিত হয়েছিল, এবং সাইটোস্কেপ সফ্টওয়্যারে কেন্দ্রীয় নোড সনাক্ত করতে CytoHubla ব্যবহার করে কেন্দ্রীয় জিন স্ক্রীন করা হয়েছিল।

সিলভার স্টেনিং এবং ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি (TEM) পর্যবেক্ষণ। সিল-ভার স্টেনিংয়ের পদ্ধতিটি ফোইসনারের পদ্ধতি 26 অনুসারে ছিল। থার্মোফিলা একটি তেল মাইক্রোস্কোপের নীচে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। T. থার্মোফিলার আল্ট্রাস্ট্রাকচার TEM দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছে। G.lucidum জলীয় নির্যাস এবং কন্ট্রোল গ্রুপের সাথে চিকিত্সা করা কোষগুলিকে 2 মিনিটের জন্য 600×g সেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা সংগ্রহ করা হয়েছিল। কোষগুলি 2.5 শতাংশ গ্লুটারালডিহাইডে উপসর্গযুক্ত ছিল এবং 8 ঘন্টার জন্য 4 ডিগ্রিতে বজায় রাখা হয়েছিল। নমুনাগুলি পিবিএস (pH7.5) দিয়ে তিনবার ধোয়া হয়েছিল, 5 মিনিটের জন্য 3000xg সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল এবং তারপরে 1 শতাংশ ওসমিয়াম টেট্রাঅক্সাইড (4 ঘন্টা) দিয়ে স্থির করা হয়েছিল। তারপরে, 15 শতাংশ থেকে 100 শতাংশ গ্রেডিয়েন্ট অ্যাসিটোন ব্যবহার করে ডিহাইড্রেশন করা হয়েছিল। তারপরে, কোষগুলি এম্বেড 812 (TAAB) কম সান্দ্রতা রজনে এম্বেড করা হয়েছিল। আফটেল কিউরিং, আল্ট্রাথিন অংশগুলি (60-80 এনএম) একটি আল্ট্রাথিন স্লাইসার দ্বারা কাটা হয়েছিল। আল্ট্রাস্ট্রাকচারটি ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপ (JEOL JEM-1010, জাপান) দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।

কোষের ক্ষতি নির্ধারণ। অন্তঃকোষীয় lROS সংবেদনশীল ফ্লুরোসেন্ট প্রোব 2',7'-ডিক্লোরোডিহাইড্রোফ্লুরেসসিন ডায়াসেটেট (DCFH-DA) 27 দ্বারা সনাক্ত করা হয়েছিল৷ ম্যালন্ডিয়ালডিহাইড (এমডিএ) এর কার্যকলাপ নানজিং জিয়ানচেং বায়োইঞ্জিনিয়ারিং ইনস্টিটিউট, জিয়াং, চীনের দেওয়া বাণিজ্যিক কিট দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল৷ হাইড্রক্সিল র‌্যাডিকেল (·OH) নির্মূল করার ক্ষমতা নির্ধারণের পদ্ধতিটি টেকমুরা28 দ্বারা বর্ণিত ছিল। OH ফ্রি র‌্যাডিকাল নির্মূল করার জন্য G. lucidum জলীয় নির্যাসের ক্ষমতাকে পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীর অপটিক্যাল ঘনত্বকে নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর অপটিক্যাল ঘনত্ব বিয়োগ হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল।

Cistanche বিরোধী বার্ধক্য করতে পারেন

PHGPx কার্যকলাপ। নিকোটিনামাইড এডেনাইন ডাইনিউক্লিওটাইড ফসফেট (NADPH)/NADP* অনুপাত এবং glutathione/glutathione disulfide (GSH/GSSG) অনুপাত NADP*/NADPH কোয়ান্টিফিকেশন কিট (S0179, Beyotime), GSH/GSSG Assay Kit(3SYAlle,3SYAlle) ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল। অ্যাসেসগুলি প্রস্তুতকারকের প্রোটোকল অনুসারে সঞ্চালিত হয়েছিল।

ফলাফল

T. থার-মোচিলা বৃদ্ধির উপর G.lucidum জলীয় নির্যাস এবং G.lucidum monomers এর প্রভাব। পূর্ববর্তী গবেষণা 7 হিসাবে, জি। স্পেকট্রোফোটোমিটার সনাক্তকরণ (পরিপূরক চিত্র S1) অনুসারে এই পরীক্ষায় লুসিডাম পলিস্যাকারাইড ছিল জি লুসিডাম জলীয় নির্যাসের প্রধান উপাদান। G. lucidum জলীয় নির্যাস সক্রিয় পদার্থ এছাড়াও GC-MS দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছে. G. lucidum জলীয় নির্যাসের মোট আয়ন চিত্র দেখায় যে ll উপাদানগুলি জলীয় নির্যাসের মধ্যে বিদ্যমান ছিল (পরিপূরক চিত্র S2)। G.lucidum জলীয় নির্যাসের যৌগগুলির মধ্যে (পরিপূরক টেবিল S3 এবং S4), G. lucidum acid A, Ganoderal A, এবং G. lucidum ergosterol তাদের ধরে রাখার সময় এবং ম্যাচিং ডিগ্রী অনুযায়ী নির্বাচন করা হয়েছিল।

টি. থার্মোফিলার বৃদ্ধিতে জি. লুসিডাম জলীয় নির্যাস এবং এই প্রধান মনোমারগুলির প্রভাব তুলনা করার জন্য, জি. লুসিডাম জলীয় নির্যাস এবং জি. লুসিডাম মনোমার দ্রবণ টি. থার্মোফিলার সংস্কৃতি মাধ্যমে যুক্ত করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি চিত্র.1-এ দেখানো হয়েছে। কন্ট্রোল গ্রুপের সর্বোচ্চ ঘনত্ব ছিল 6×104 কোষ/mL 24 ঘন্টায়। 12 থেকে 20 ঘন্টা পর্যন্ত জি. লুসিডাম জলীয় নির্যাস গ্রুপের কোষের ঘনত্ব প্রায় নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের মতোই ছিল, কিন্তু 20 থেকে 25 ঘন্টা পর্যন্ত এটি নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের কোষের ঘনত্বের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল।cistanche nzএকই সাথে, লগারিদমিক পর্যায়টি 1 ঘন্টা দ্বারা দীর্ঘায়িত হয়েছিল, সর্বাধিক ঘনত্ব ছিল 1.15 × 105 কোষ / এমএল। যদিও জি লুসিডাম পলিস্যাকারাইড গ্রুপের সর্বোচ্চ ঘনত্ব নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় 9.7×104 কোষ/mL বেশি ছিল, তবে এটি G.lucidum জলীয় নির্যাস গ্রুপের চেয়ে কম ছিল। G. lucidum acid A, Ganoderal A এবং G. lucidum ergosterol-এর সর্বাধিক ঘনত্ব নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর চেয়ে বেশি ছিল না, যা দেখায় যে এই মনোমারগুলির অ্যালকোহল দ্রবণগুলি T. থার্মোফিলার বৃদ্ধির জন্য সহায়ক নয়। এটা উপসংহারে আসা যেতে পারে যে G.lucidum জলীয় নির্যাস বিভিন্ন সক্রিয় পদার্থ ধারণকারী T. থার্মোফিলা এর monomers এর চেয়ে বেশি বৃদ্ধি করতে পারে।

জি লুসিডাম জলীয় নির্যাসের অ্যান্টি-বার্ধক্য প্রভাব। সংস্কৃতির সময় বৃদ্ধির সাথে সাথে, পতন পর্বে (চিত্র 2b) ROS-এর আলোর তীব্রতা লগারিদমিক পর্বের তুলনায় (চিত্র 2a) বেশি ছিল। G. lucidum জলীয় নির্যাস যোগ করার পরে, যদিও পতন পর্বের (চিত্র 2d) ফ্লুরোসেন্স তীব্রতা লগারিদমিক ফেজ (চিত্র 2c) এর তুলনায় এখনও উন্নত ছিল, এটি নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে কম ছিল। লগারিদমিক ফেজ (Fig.2e) এর তুলনায় কন্ট্রোল গ্রুপে MDA বিষয়বস্তু পতনের পর্যায়েও বেশি ছিল। এদিকে পতন পর্বে OH এর স্ক্যাভেঞ্জিং ক্ষমতা লগারিদমিক পর্যায়ের তুলনায় কম ছিল (চিত্র 2e)। অক্সিডেশন এবং হ্রাসের মধ্যে ভারসাম্য হারিয়েছিল এবং শরীরের বয়স হয়েছিল। G. lucidum জলীয় নির্যাস যোগ করার পর, MDA বিষয়বস্তু কন্ট্রোল গ্রুপের তুলনায় কম ছিল (চিত্র 2e-এর বাম কলাম), এবং লগারিদমিক ফেজ এবং ডিক্লাইন ফেজে কোষ দ্বারা স্ক্যাভেঞ্জ করা OH-এর পরিমাণ বেশি ছিল। কন্ট্রোল গ্রুপ (চিত্র 2e এর ডান কলাম)। T[ থার্মোফিলার বৃদ্ধিকে এর কোষীয় ক্ষতির মাধ্যমে বহুকোষী জীবের বার্ধক্য প্রক্রিয়ার সাথে তুলনা করা যেতে পারে। ROS এবং MDA জমা হওয়ার সাথে সাথে বৃদ্ধি বাধাগ্রস্ত হয়েছিল এবং T. থার্মোফিলার ঘনত্ব হ্রাস পেয়েছে। জি. লুসিডাম জলীয় নির্যাসের সংযোজন টি. থার্মোফিলায় রেডক্স ভারসাম্য বজায় রাখতে পারে এবং অ্যান্টি-এজিং প্রভাব অর্জন করতে পারে।

ভিন্নভাবে প্রকাশিত জিনের বিশ্লেষণ এবং RT-qPCR দ্বারা যাচাইকরণ। কন্ট্রোল গ্রুপের সাথে তুলনা করে, T. থার্মোফিলার লগারিদমিক পর্যায়ে 11,519 জিনের অভিব্যক্তি SPP-তে G. lucidum জলীয় নির্যাস যোগ করার পর উল্লেখযোগ্যভাবে পরিবর্তিত হয়েছে। তাদের মধ্যে, 6201 জিন আপ-নিয়ন্ত্রিত এবং 5318 জিন ডাউন-নিয়ন্ত্রিত ছিল।cistanche লিঙ্গ আকারপতনের পর্যায়ে 8772 জিনের অভিব্যক্তি উল্লেখযোগ্যভাবে পরিবর্তিত হয়েছে, যার মধ্যে 4721 জিন আপ-নিয়ন্ত্রিত এবং 4051 জিন নিম্ন-নিয়ন্ত্রিত ছিল। আমাদের পরীক্ষাগারে পূর্ববর্তী গবেষণায়,

স্টাইলোনিচিয়ার উপর G.lucidum-এর অ্যান্টি-এজিং প্রভাব অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সূচকে প্রতিফলিত হয়েছিল, তাই অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সম্পর্কিত 10টি জিন (পরিপূরক টেবিল S5) এলোমেলোভাবে ডিইজিগুলির মধ্যে থেকে নির্বাচন করা হয়েছিল, এবং RNA-seq ডেটার যথার্থতা RT- দ্বারা যাচাই করা হয়েছিল। qPCR। লগারিদমিক ফেজ এবং ডিক্লাইন ফেজে এই 10টি জিনের এক্সপ্রেশন প্যাটার্নগুলি RNA-seq ডেটার প্রবণতার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল (পরিপূরক চিত্র S3)। ফলাফলটি নির্দেশ করে যে RNA-seq ডেটা নির্ভরযোগ্য ছিল এবং পরবর্তী বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে।

GO সমৃদ্ধকরণ এবং KEGG পাথওয়ে বিশ্লেষণ। লগারিদমিক পর্যায়ের ডিইজিগুলি 14টি জৈবিক প্রক্রিয়ায় (বিপি) 6 ধরণের আণবিক ফাংশন (এমএফ) সহ জড়িত ছিল এবং সেগুলি সমস্ত কোষের উপাদানগুলিতে (সিসি) (চিত্র 3a) বিদ্যমান ছিল। পতন পর্বের ডিইজি 12 BP-তে 4 ধরণের MF-এর সাথে জড়িত ছিল এবং তারা 12 CC-তে বিদ্যমান ছিল দুটি পর্যায়ে সবচেয়ে জড়িত BP ছিল বিপাকীয় প্রক্রিয়া, MF বাঁধাই ছিল এবং CC ছিল ঝিল্লি। বিপাকীয় প্রক্রিয়া, বাঁধাই এবং ঝিল্লির মধ্যে, আপ-নিয়ন্ত্রিত জিনগুলি লগারিদমিক পর্যায়ে (চিত্র 3b) 70 শতাংশ এবং পতন পর্বে (চিত্র 3c) 75 শতাংশের জন্য দায়ী। এই ফলাফলগুলি দেখায় যে জি. লুসিডাম জলীয় নির্যাস উভয় পর্যায়ে কোষের ঝিল্লির অখণ্ডতার রক্ষণাবেক্ষণকে উন্নীত করতে পারে।

দুটি পর্যায়ের মধ্যে ডিইজিগুলিকে আরও বিশ্লেষণ করার জন্য কেইজিজি পাথওয়ে সমৃদ্ধকরণ বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। লগারিদমিক পর্যায়ে, 94টি পথ কেন্দ্রীভূত ছিল, যার মধ্যে মোট জিনের 68 শতাংশ বিপাকের সাথে জড়িত ছিল। পতনের পর্যায়ে, 91টি পথ সমৃদ্ধ করা হয়েছিল, যার মধ্যে বিপাক এখনও সবচেয়ে বড় পথ ছিল, যা 68 শতাংশের জন্য দায়ী। লগারিদমিক ফেজ (চিত্র 3d) এবং পতন পর্বের (চিত্র 3e) শীর্ষ 20 পথগুলি একটি বুদবুদ চার্ট আঁকার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল এবং দেখিয়েছিল যে তাত্পর্য বা জড়িত জিনের সংখ্যা নির্বিশেষে, G-এর প্রভাব।cistanche পাউডারlucidum জলীয় নির্যাস প্রাথমিকভাবে glutathione বিপাক পথ উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করে. লগারিদমিক পর্যায়ে, 38টি ভিন্নভাবে প্রকাশিত জিন এই পথটিতে সমৃদ্ধ হয়েছিল, যার 45 শতাংশ। পতনের পর্যায়ে, 43টি ভিন্নভাবে প্রকাশিত জিন এই পথটিতে সমৃদ্ধ হয়েছিল, যা 50 শতাংশের জন্য দায়ী।

ডিইজিগুলির প্রোটিন-প্রোটিন মিথস্ক্রিয়া (পিপিআই) নেটওয়ার্ক। গ্লুটাথিয়ন মেটাবলিজম পাথওয়েতে ডিইজিগুলির ব্যাখ্যা এবং অন্যান্য প্রোটিনের সাথে তাদের মিথস্ক্রিয়া সম্পর্কে অন্তর্দৃষ্টি জি লুসিডাম জলীয় নির্যাসের সম্ভাব্য নিয়ন্ত্রক প্রক্রিয়াটি আরও অন্বেষণ করতে সহায়তা করবে। লগারিদমিক ফেজ (Fig.4a) এবং পতনের পর্যায় (Fig.4b) উভয়েরই GPX1, GPX2, GPX7 এবং GPX11-এ সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ প্রভাব ছিল। TetraFGD ডাটাবেসের প্রশ্নের মাধ্যমে, এই GPX এনজাইমগুলি PHGPx (পরিপূরক টেবিল S6) এর অন্তর্গত। অতএব, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইমগুলি, বিশেষ করে PHGPx, জি. লুসিডাম জলীয় নির্যাস প্রবর্তনের মাধ্যমে টি. থার্মোফিলার বৃদ্ধির প্রচারে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে।

GPS কার্যকলাপ এবং ফাংশন যাচাইকরণ. PHGPx-এর কার্যকলাপ NADPH শোষণ হ্রাসের হারকে বোঝায়2৷ নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর পতন পর্বে NADPH/NADP* মান লগারিদমিক পর্বের তুলনায় কম ছিল (চিত্র 5a)৷ ফলাফলটি পরামর্শ দিয়েছে যে PHGPx এর কার্যকলাপ কালচারের সময় বৃদ্ধির সাথে সাথে হ্রাস পেয়েছে। জি. লুসিডাম জলীয় নির্যাস যোগ করার পর, পতন পর্বে NADPH/NADP প্লাস মান লগারিদমিক পর্যায়ের তুলনায় এখনও কম ছিল, কিন্তু নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের উভয় পর্যায়ের চেয়ে বেশি। এই ফলাফলটি নির্দেশ করে যে G.lucidum জলীয় নির্যাস PHGPx এর কার্যকলাপ প্রচার করতে পারে।

পিএইচপি বিশেষভাবে ফসফোলিপিড হাইড্রোপেরক্সাইড হ্রাস গ্লুটাথিয়ন (GSH) দ্বারা অনুঘটক করতে পারে, যাতে বিষাক্ত লিপিড পারক্সাইড (PL-PUFA-OOH) কে অ-বিষাক্ত পলিআনস্যাচুরেটেড ফ্যাটি অ্যাসিডে (PL-PUFA-OH) দক্ষতার সাথে রূপান্তর করা যায়। GSH/GSSH অনুপাতের পরিবর্তন PL-PUFA-OOH এবং PL-PUFA-OH-এর পরিবর্তনকে প্রতিফলিত করতে পারে PHGPx কার্যকলাপ (চিত্র 5a) হ্রাসের কারণে, নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীতে GSH/GSSH-এর অনুপাতও হ্রাস পেয়েছে। সংস্কৃতির সময় বৃদ্ধি (চিত্র 5বি)। যাইহোক, G.lucidum জলীয় নির্যাস যোগ করার পরে, লগারিদমিক ফেজ এবং পতন পর্বে GSH/GSSH এর অনুপাত বৃদ্ধি করা হয়েছিল। পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীর অন্তঃকোষীয় বিষাক্ত PL-PUFA-OOH অ-বিষাক্ত PL-PUFA-OH-এ রূপান্তরিত হয়েছিল, যা নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর চেয়ে বেশি ছিল। আণুবীক্ষণিক রূপবিদ্যা এবং আল্ট্রাস্ট্রাকচারের পর্যবেক্ষণ। ঝিল্লিতে জি লুসি-ডাম জলীয় নির্যাসের প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব অ্যামোনিয়া সিলভার স্টেনিং এবং টিইএম দ্বারা কল্পনা করা হয়েছিল। কন্ট্রোল গ্রুপের লগারিদমিক ফেজ (Fig. 6a) এবং কন্ট্রোল গ্রুপের পতন পর্ব (Fig. 6c) তুলনা করে দেখা গেছে যে T. থার্মোফিলার কোষের রূপবিদ্যা কালচারের সময় বৃদ্ধির সাথে মারাত্মকভাবে বিকৃত হয়েছে এবং নিউক্লিয়াসটি অস্পষ্ট ছিল, যা ইঙ্গিত করে যে কোষগুলি একটি বার্ধক্য অবস্থায় রয়েছে। যাইহোক, G.lucidum জলীয় নির্যাস গ্রুপে, কোষের অঙ্গসংস্থান এবং অখণ্ডতা লগারিদমিক ফেজ (চিত্র 6e) এবং পতনের পর্যায়ে (চিত্র 6g) ভালভাবে সুরক্ষিত ছিল। কোষে আল্ট্রাস্ট্রাকচারাল পরিবর্তনগুলি টিইএম দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। কন্ট্রোল গ্রুপে লগারিদমিক ফেজ (Fig.6b) এর তুলনায় হ্রাস পর্বে (চিত্র 6d) মাইটোকন্ড্রিয়ালের রিজ এবং কনট্যুর অস্পষ্ট ছিল। সংস্কৃতির সময় বৃদ্ধির সাথে সাথে মাইটোকন্ড্রিয়া ক্ষয় বৃদ্ধি পায়। G. লুসিডাম জলীয় নির্যাস যোগ করার ফলে লগারিদমিক ফেজ (চিত্র 6f) এবং পতনের পর্যায়ে (চিত্র 6h) মাইটোকন্ড্রিয়ার অঙ্গসংস্থানের উন্নতি ঘটে। G. লুসিডাম জলীয় নির্যাস মাইটোকন্ড্রিয়ার কার্যকারিতা নিশ্চিত করে, যা ঝিল্লির অখণ্ডতার সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত। এটা লক্ষ করা উচিত যে লগারিদমিক পর্যায়ে, পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীর মাইটোকন্ড্রিয়া আকারগত পরিবর্তন দেখায় (চিত্র 6f, h), কিন্তু ঝিল্লির অখণ্ডতা প্রভাবিত হয়নি।

আলোচনা

ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধ এবং পূর্ব এশিয়া উভয় ক্ষেত্রেই G.lucidum নির্যাসের প্রয়োগের একটি দীর্ঘ ইতিহাস রয়েছে। প্রচুর সংখ্যক গবেষণা তাদের কার্যকারিতা দেখিয়েছে। পূর্ববর্তী প্রতিবেদনে পাওয়া গেছে যে G.lucidum জলীয় নির্যাসে শুধুমাত্র G. lucidum polysaccharidesই নয় বরং Glucidum triterpenoidsও রয়েছে। পূর্ববর্তী রিপোর্ট অনুসারে, গ্যানোডার্মা অ্যাসিড, গ্যানোডার্মা অ্যালডিহাইড এবং গ্যানোডার্মা এরগোস্টেরল হল G. lucidum triterpene 3-এর প্রধান উপাদান। তারা কোষের বিভিন্ন মেরামতের কাজ করে (সারণী 1)। গ্যানোডার্মা লুসিডাম জলীয় নির্যাসে বিভিন্ন ধরণের সক্রিয় পদার্থ রয়েছে, যা অন্য চারটি সক্রিয় পদার্থের কাজকে একীভূত করে, যা কেবল অক্সিডেশন প্রতিরোধ করতে পারে না বরং ঝিল্লির অখণ্ডতাও বজায় রাখতে পারে। এই গবেষণায়,

T. থার্মোফিলায় জি. লুসিডাম জলীয় নির্যাসের বৃদ্ধি-প্রচার এই অন্তর্ভুক্তি সম্পর্ককে যাচাই করেছে। মোট-আয়ন প্রবাহ ক্রোমাটোগ্রাফি (পরিপূরক চিত্র S2) দ্বারা G. লুসিডাম জলীয় নির্যাস বিশ্লেষণের মাধ্যমে এটি পাওয়া যায় যে বিভিন্ন সক্রিয় পদার্থের দ্রবীভূত হওয়ার সময় ভিন্ন ছিল। তাই G. lucidum জলীয় নির্যাস ফুটন্ত সময় বৃদ্ধির সাথে একটি জটিল জৈব দ্রাবক হয়ে ওঠে। আমরা মনে করি যে G.lucidum জলীয় নির্যাসের সক্রিয় পদার্থগুলি বিভিন্ন সময়ে কাজ করতে পারে, যার ফলে একটি সমন্বয় ঘটে। এটি ভবিষ্যতে আরও অধ্যয়ন হওয়া উচিত।

টি. থার্মোফিলা ট্রান্সক্রিপ্টোমের বিশ্লেষণে বৃদ্ধির সময় জিনের প্রকাশের উপর জি লুসিডাম জলীয় নির্যাসের প্রভাব অন্বেষণ করা হয়েছে। G. lucidum জলীয় নির্যাস দিয়ে চিকিত্সার পরে, PHGPx কোষের ঘনত্ব এবং প্রজন্মের সময় একটি মূল প্রভাব দেখায়। এই ফলাফল নিশ্চিত করেছে যে G.lucidum জলীয় নির্যাস জিপিএক্স পরিবারের সেলেনিয়াম-নির্ভর ধরনের উপর কাজ করেছে। পিএইচপি হল একটি বহুমুখী সেলেনো-প্রোটিন যা শরীরে ব্যাপকভাবে বিতরণ করা হয় যা শুধুমাত্র অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট বিক্রিয়ায় অংশগ্রহণ করতে পারে না বরং ঝিল্লি সিস্টেমের অখণ্ডতা রক্ষা করতে সরাসরি ঝিল্লির লিপিড কমাতে পারে। অন্যান্য GPX-এর সাথে তুলনা করে, PHGPx-এর আয়তন কম এবং হাইড্রোফোবিসিটি বেশি। অনেক রিপোর্টে প্রমাণিত হয়েছে যে কোষে PHGPx অত্যধিক এক্সপ্রেশন এন্ডোজেনাস (যেমন, বার্ধক্য) fl এবং বহিরাগত (যেমন, পরিবেশগত) পারঅক্সিডেশন ক্ষতির প্রতি সেল প্রতিক্রিয়া প্রতিরোধ করতে পারে 2-45। পিএইচপি হল একমাত্র এনজাইম যা সরাসরি PL-PUFA-কে কমাতে পারে। সংশ্লিষ্ট হাইড্রক্সিল যৌগের মধ্যে ঝিল্লির OOH, যার ফলে পারক্সিডেশনের সমাপ্তি এবং জৈবিক ঝিল্লিকে পারঅক্সিডেশন ক্ষতি থেকে রক্ষা করে। PL-PUFA-OOH-এর বিষয়বস্তুর বৃদ্ধি পতনের পর্যায়ে কন্ট্রোল গ্রুপের কোষের ঝিল্লির ক্ষতির কারণ ছিল, যা একটি দুষ্টচক্রে পরিণত হয়েছিল এবং কোষের সেন্সেসেন্সকে ত্বরান্বিত করেছিল। এই গবেষণায়, ROS এবং MDA-এর বিষয়বস্তু (Fig.2) নিয়ন্ত্রণ গ্রুপে T.thermophila এর সংস্কৃতির সময় বৃদ্ধির সাথে বৃদ্ধি পেয়েছে। অঙ্গসংস্থানগত পর্যবেক্ষণের মাধ্যমে পতনের পর্যায়ে ঝিল্লিটি গুরুতর বিকৃতি দেখা দেয়। যাইহোক, যখন G. lucidun জলীয় নির্যাস যোগ করা হয়েছিল, তখন PHGPx এর অভিব্যক্তি আপ-নিয়ন্ত্রিত হয়েছিল। এইভাবে, ঝিল্লির PL-PUFA-OOH ননটক্সিক PL-PUFA-OH-এ রূপান্তরিত হয়েছিল এবং ঝিল্লির কাঠামোর স্থায়িত্ব লগারিদমিক ফেজ এবং ডিক্লাইন ফেজ উভয় ক্ষেত্রেই উন্নত হয়। অ্যামোনিয়া সিলভার স্টেনিং এবং TEM দ্বারা ঝিল্লির পর্যবেক্ষণ অনুসারে, এটি উপসংহারে পৌঁছানো যেতে পারে যে G.lucidum জলীয় নির্যাস বৃদ্ধি প্রক্রিয়ার সময় কোষের ঝিল্লিতে প্রবেশ করেছিল। কোষের ঝিল্লির উপর এই মেরামতের প্রভাব G. লুসিডাম জলীয় নির্যাসের সক্রিয় পদার্থগুলিকে সাইটোপ্লাজমে প্রবেশ করতে এবং টি. থার্মোফিলার বিপাককে উন্নীত করার জন্য নিউক্লিয়াস এবং মাইটোকন্ড্রিয়ার ঝিল্লির গঠনকে রক্ষা করতে এবং অ্যান্টি-এজিং প্রভাব অর্জন করতে প্ররোচিত করতে পারে। এলকেইজিজি সমৃদ্ধকরণের ফলাফলগুলি দেখায়, প্রচুর সংখ্যক ডিফারেনশিয়াল জিন বিপাকীয় পথগুলিতে কেন্দ্রীভূত হয়। এই ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে G. lucidum জলীয় নির্যাস গ্লুটাথিয়নের বিপাক এবং কোষের বার্ধক্য দ্বারা উত্পাদিত বিষাক্ত পারক্সাইড নির্মূল করার জন্য উপকারী।

সাধারণভাবে, জি লুসিডাম জলীয় নির্যাস জিপিএক্স পরিবারে সেলেনিয়াম-নির্ভর এনজাইম PHGPx-এর অভিব্যক্তিকে প্রচার করে। PHGPx কার্যকলাপের বৃদ্ধি শুধুমাত্র ভিভোতে অক্সিডেটিভ স্ট্রেস প্রতিক্রিয়া কমাতে পারে না বরং জৈবিক ঝিল্লির লিপিড জমাকে বিশেষভাবে এবং কার্যকরভাবে কমাতে পারে এবং ঝিল্লির অখণ্ডতা বজায় রাখতে পারে (চিত্র 7)। ফলস্বরূপ, জি. লুসিডাম জলীয় নির্যাসের সক্রিয় পদার্থগুলি অক্ষত ঝিল্লির মাধ্যমে কোষে প্রবেশ করে এবং তাদের বিপাককে উন্নীত করে। এটি অ্যান্টি-বার্ধক্যের প্রভাব অর্জনের জন্য একটি পুণ্য চক্র তৈরি করেছে।

এই নিবন্ধটি Scientifc Reports থেকে নেওয়া হয়েছে|(2022) 12:3139|https://doi.org/10.1038/s41598-022-06985-z