স্পাইক প্রোটিন এবং SARS-CoV-এর অন্যান্য স্ট্রাকচারাল প্রোটিন এনকোডিং ডিএনএ ভ্যাকসিনের মাধ্যমে সহ-ইমিউনাইজেশনের মাধ্যমে ইঁদুরের মধ্যে সিনারজিস্টিক ইমিউনিটি এবং সুরক্ষা-2

বিমূর্ত:গুরুতর তীব্র শ্বাসযন্ত্রের সিন্ড্রোম করোনভাইরাস 2 (SARS CoV-2) এর নতুন রূপের আবির্ভাব বিশ্বব্যাপী পুনরাবৃত্ত সংক্রমণের প্রাদুর্ভাব সৃষ্টি করেছে। এই অত্যন্ত পরিবর্তিত রূপগুলি বর্তমান করোনাভাইরাস ডিজিজ 2019 (COVID-19) ভ্যাকসিনগুলির কার্যকারিতা হ্রাস করে, যেগুলি শুধুমাত্র মূল ভাইরাসের স্পাইক (S) প্রোটিনকে লক্ষ্য করার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে৷ SARS-CoV-2 এর S ব্যতীত, ভ্যাকসিন টার্গেট অ্যান্টিজেন হিসাবে অন্যান্য স্ট্রাকচারাল প্রোটিনের (নিউক্লিওক্যাপসিড, এন; এনভেলপ, ই; মেমব্রেন, এম) ইমিউনোপ্রোটেকটিভ সম্ভাবনা এখনও অস্পষ্ট এবং তদন্তের যোগ্য। এই গবেষণায়, চারটি SARS-CoV-2 স্ট্রাকচারাল প্রোটিন (pS, pN, pE এবং pM) এনকোড করা সিন্থেটিক ডিএনএ ভ্যাকসিন তৈরি করা হয়েছিল, এবং ইঁদুরকে ইনট্রামাসকুলার ইনজেকশন এবং ইলেক্ট্রোপোরেশনের মাধ্যমে তিনটি ডোজ দিয়ে টিকা দেওয়া হয়েছিল। উল্লেখযোগ্যভাবে, দুটি ডিএনএ ভ্যাকসিনের সাথে সহ-ইমিউনাইজেশন যা এস এবং এন প্রোটিন প্রকাশ করে উচ্চতর নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডিগুলিকে প্ররোচিত করে এবং শুধুমাত্র ইঁদুরের এস প্রোটিনের তুলনায় SARS-CoV{10}} ভাইরাল লোড কমাতে আরও কার্যকর। উপরন্তু, pN বা pE + pM সহ pS সহ-ইমিউনাইজেশন তিনটি টিকাদানের পরে একটি উচ্চ S প্রোটিন-নির্দিষ্ট সেলুলার অনাক্রম্যতা প্ররোচিত করে এবং একা pS-পরবর্তী চ্যালেঞ্জের তুলনায় হালকা হিস্টোপ্যাথলজিকাল পরিবর্তন ঘটায়। SARS-CoV-2-এর সংরক্ষিত কাঠামোগত প্রোটিনের ভূমিকা, N/E/M প্রোটিন সহ, তাদের টিকা ডিজাইনে প্রয়োগের জন্য আরও তদন্ত করা উচিত, যেমন mRNA ভ্যাকসিন৷

cistanche tubulosa- ইমিউন সিস্টেম উন্নত

কীওয়ার্ড: COVID-19; SARS-CoV-2}}; সহ-ইমিউনাইজেশন; ডিএনএ ভ্যাকসিন; স্পাইক প্রোটিন; কাঠামোগত প্রোটিন

1। পরিচিতি

গুরুতর তীব্র শ্বাসযন্ত্রের সিনড্রোম করোনভাইরাস 2 (SARS-CoV-2) হল করোনভাইরাস ডিজিজ 2019 (COVID-19), যা বিশ্বব্যাপী লক্ষ লক্ষ সংক্রমণ এবং মৃত্যুর কারণ এবং মানব স্বাস্থ্য এবং বিশ্ব অর্থনীতিকে হুমকির মুখে ফেলেছে . যদিও কার্যকর থেরাপিউটিক পন্থা এখনও অনুপলব্ধ, তারা দ্রুত অগ্রসর হয়েছে, যার মধ্যে রয়েছে CAR-T সেল থেরাপি এবং ন্যানো প্রযুক্তির প্রয়োগ [1,2]। ভ্যাকসিনেশন মহামারী নিয়ন্ত্রণের একটি কার্যকর উপায় এবং বিভিন্ন নিয়ন্ত্রক স্বাস্থ্য সংস্থা [3,4] দ্বারা ব্যবহারের জন্য বেশ কয়েকটি ভ্যাকসিন অনুমোদিত হয়েছে। করোনভাইরাস জিনোম চারটি প্রধান কাঠামোগত প্রোটিনকে এনকোড করে, যথা, স্পাইক (এস), নিউক্লিওক্যাপসিড (এন), মেমব্রেন (এম), এবং এনভেলপ (ই) প্রোটিন, যা ভাইরিওন সমাবেশ এবং হোস্ট ইমিউন প্রতিক্রিয়া দমনের জন্য দায়ী [৫] ]। এস প্রোটিন 1273টি অ্যামিনো অ্যাসিডের অবশিষ্টাংশ দিয়ে গঠিত যাতে দুটি সাবুনিট থাকে, যথা, S1 এবং S2। এটি ভাইরাল প্রবেশের মধ্যস্থতা করে এবং করোনাভাইরাস ভ্যাকসিনগুলি [6-11] বিকাশের জন্য একটি প্রধান লক্ষ্য। যাইহোক, SARS-CoV-2 S প্রোটিনের একটি উচ্চ মিউটেশন ফ্রিকোয়েন্সি রয়েছে। আশ্চর্যের কিছু নেই, SARS-CoV-2, একটি RNA ভাইরাসে, মিউটেশনটি ক্রমাগত এবং অনিবার্য। বি.1.1.7 (ইউকে, আলফা), বি.1.351 (দক্ষিণ আফ্রিকা, বিটা), পি.1 সহ, 2020 সালের সেপ্টেম্বর থেকে উদ্বেগের পাঁচটি SARS-CoV-2 রূপ (VOC) আবির্ভূত হয়েছে (ব্রাজিল, গামা), B.1.617.2 (ভারত, ডেল্টা), এবং B.1.1.529 (দক্ষিণ আফ্রিকা, ওমিক্রন) (Andreano এবং Rappuoli, 2021; Gupta, 2021)। তাদের সকলের স্পাইক প্রোটিনে বেশ কয়েকটি মিউটেশন রয়েছে [12]। এই রূপগুলি বর্তমান COVID-19 ভ্যাকসিনগুলির কার্যকারিতাকে হুমকি দেয়, যেগুলি শুধুমাত্র স্পাইক প্রোটিনকে লক্ষ্য করার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে৷

SARS-CoV-2-এর N প্রোটিন ভাইরাল RNA-এর সাথে একটি 140-অ্যামিনো-অ্যাসিড-লং RNA-বাইন্ডিং ডোমেনের মাধ্যমে "স্ট্রিং-এর উপর গুটিকা" পদ্ধতিতে আবদ্ধ হয়। এটি করোনভাইরাসগুলির মধ্যে অত্যন্ত সংরক্ষিত, SARS-CoV-এর সাথে একটি ~90% সিকোয়েন্স আইডেন্টিটি ভাগ করে এবং এটি ভিরিওনের ভিতরে একমাত্র কাঠামোগত প্রোটিনও [13]। উপরন্তু, এটি ভাইরাল আরএনএকে রিবোনিউক্লিও ক্যাপসিড কমপ্লেক্সে প্যাকেজিংয়ে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে এবং ভাইরাল আরএনএ প্রতিলিপি, ভাইরিয়ন সমাবেশ এবং হোস্ট কোষ থেকে মুক্তির জন্য প্রয়োজনীয় [১৪]। করোনভাইরাসগুলিতে এন প্রোটিনের উচ্চ অনুক্রমের সাদৃশ্যের ভিত্তিতে, এটি একটি ক্রস-প্রটেকশন ভ্যাকসিন লক্ষ্য হিসাবে প্রস্তাবিত হতে পারে। আমরা আগে দেখেছি যে E এবং M প্রোটিন প্রকাশকারী দুটি DNA ভ্যাকসিনের সহ-ইমিউনাইজেশন SARS-CoV-2 এর বিরুদ্ধে আংশিক সুরক্ষা প্রদান করে এবং এই পদ্ধতিটি ভ্যাকসিন তৈরির সময় বিবেচনা করা উচিত [15]। WHO-এর ল্যান্ডস্কেপ ডকুমেন্টের উপর নির্ভর করে, সাধারণত SARS-CoV-2 ভ্যাকসিন প্রার্থীদের জন্য সাতটি কৌশল রয়েছে, যেগুলিকে আরও তিনটি বিভাগে ভাগ করা যায়: প্রথমত, প্রোটিন-ভিত্তিক ভ্যাকসিন, নিষ্ক্রিয় ভাইরাস ভ্যাকসিন সহ, ভাইরাসের মতো কণা, এবং প্রোটিন সাবুনিট ভ্যাকসিন; দ্বিতীয়ত, জিন-ভিত্তিক ভ্যাকসিন, ভাইরাস-ভেক্টর ভ্যাকসিন, ডিএনএ ভ্যাকসিন এবং এমআরএনএ ভ্যাকসিন সহ; তৃতীয়ত, প্রোটিন-ভিত্তিক এবং জিন-ভিত্তিক উভয় পদ্ধতির সংমিশ্রণ, যেমন লাইভ-এটেন্যুয়েটেড ভাইরাস ভ্যাকসিন। ডিএনএ প্রযুক্তি, অভিনব জিন-ভিত্তিক ভ্যাকসিন কৌশল হিসাবে, প্রিক্লিনিকাল পরীক্ষার সময় একাধিক ভ্যাকসিন প্রার্থী এবং কৌশলগুলির সাথে দ্রুত তুলনা করতে পারে [16,17]। তাত্ত্বিকভাবে, প্রায় সব ভাইরাল প্রোটিন সম্ভাব্য ইমিউনোজেন এবং ভ্যাকসিন লক্ষ্য। যাইহোক, আমাদের সর্বোত্তম জ্ঞান অনুসারে, SARS-CoV-2 S প্রোটিন এবং অন্যান্য কাঠামোগত প্রোটিনগুলিকে এনকোড করার ক্ষেত্রে সিন্থেটিক ডিএনএ ভ্যাকসিনগুলির ইমিউনোজেনিসিটি এবং প্রতিরক্ষামূলক সম্ভাবনা এখনও পদ্ধতিগতভাবে রিপোর্ট করা হয়নি। SARS-CoV-2 S, N, E, এবং Ml প্রোটিন প্রকাশ করে এমন চারটি ডিএনএ ভ্যাকসিনকে অন্যান্য স্ট্রাকচারাল প্রোটিনের সাথে সংমিশ্রণে S-এর ইমিউনোলজিকাল প্রভাবগুলি অন্বেষণ করার জন্য ইঁদুরের ইমিউনোজেনিসিটি এবং প্রতিরক্ষামূলক কার্যকারিতার জন্য মূল্যায়ন করা হয়েছিল।

2। সামগ্রী ও পদ্ধতি

2.1। কোষ

Huh7.5 কোষ এবং মানব ভ্রূণের কিডনি 293T কোষগুলি সম্পূর্ণ অধ্যয়ন জুড়ে 5% CO2 তে আর্দ্র বায়ুমণ্ডলে 37 ◦C তাপমাত্রায় সংষ্কৃত হয়েছিল। কোষগুলিকে DMEM মাধ্যমের (HyClone, Logan, UT, USA) সংস্কৃত করা হয়েছিল, 10% FBS (GEMINI Co., Shanghai, China) এবং 1% পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিন (Gibco, New York, NY, USA) দিয়ে পরিপূরক। সমস্ত সেল লাইন মাইকোপ্লাজমা দূষণের জন্য নেতিবাচক নিশ্চিত করা হয়েছিল।

2.2। ডিএনএ ভ্যাকসিন কোডিং SARS-CoV-2 S/N/E/M নির্মাণ

SARS-CoV-2 S/N প্রোটিন-এনকোডিং জিন, যার মধ্যে একটি N-টার্মিনাল কোজাক সিকোয়েন্স (GCCACC) এর পরে একটি ইনিশিয়েশন কোডন (ATG), একটি স্তন্যপায়ী-অপ্টিমাইজড কোডন (জেনস্ক্রিপ্ট কোং, নানজিং) ব্যবহার করে সংশ্লেষিত হয়েছিল , চীন)। এটি তখন ইকোআরআই এবং XbaI হজমের মাধ্যমে এক্সপ্রেশন ভেক্টর pcDNA3.1 (+) এ ক্লোন করা হয়েছিল এবং pS/pN (DNA ভ্যাকসিন) (চিত্র 1A) নামকরণ করা হয়েছিল। পিই/পিএম প্রোটিন তৈরি করা হয়েছিল এবং পূর্বে বর্ণিত হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল [15]। এন্ডোটক্সিন-মুক্ত ম্যাক্সিপ্রেপ কিটস (কিয়াজেন, বেইজিং, চীন) ব্যবহার করে ভ্যাকসিনগুলি প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং সেঞ্জার ডিএনএ সিকোয়েন্সিং ব্যবহার করে সিকোয়েন্সগুলি নিশ্চিত করা হয়েছিল। ওয়েস্টার্ন ব্লটিং এবং অ্যান্টি-এস (সিনো বায়োলজিক্যাল, বেইজিং, চায়না)/অ্যান্টি-এন অ্যান্টিবডি 1:1000 এ মিশ্রিত ব্যবহার করে এস/এন প্রোটিনের অভিব্যক্তি নিশ্চিত করা হয়েছে। এই পরীক্ষাগুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে পরিচালিত হয়েছিল [15,18]।

চিত্র 1. রিকম্বিন্যান্ট ডিএনএ-ভিত্তিক SARS-CoV-2 S/N প্রোটিন ভ্যাকসিনের নকশা এবং প্রকাশ। (A) SARS-CoV-2 স্পাইক (PS), নিউক্লিওক্যাপসিড (pN), খাম (pE), এবং/অথবা মেমব্রেন (PM) প্রোটিনের এনকোডিং রিকম্বিন্যান্ট ডিএনএ-ভিত্তিক ভ্যাকসিনগুলির পরিকল্পিত চিত্র। (বি) ডিএনএ ভ্যাকসিনগুলিতে লক্ষ্য প্রোটিনের অভিব্যক্তিটি pS/pN/pE/pM প্লাজমিডগুলির সাথে স্থানান্তরিত 293T কোষগুলির পশ্চিম ব্লট বিশ্লেষণের মাধ্যমে বৈধ করা হয়েছিল।

2.3। টিকাদান এবং চ্যালেঞ্জ

মহিলা BALB/c ইঁদুর (চার্লস রিভার ল্যাবরেটরিজ, ফ্রান্স) 6 সপ্তাহ বয়সে ন্যাশনাল ইনস্টিটিউট অফ অকুপেশনাল হেলথ অ্যান্ড পয়জন কন্ট্রোলে 21 ◦C এবং আর্দ্রতা-নিয়ন্ত্রিত পরিবেশে 12 ঘন্টা আলো/অন্ধকার চক্রে রাখা হয়েছিল। ইতিমধ্যে, খাদ্য ও জলের বিজ্ঞাপন দেওয়া হয়েছিল, এবং সমস্ত প্রাণীর পরীক্ষাগুলি চাইনিজ সেন্টার ফর ডিজিজ কন্ট্রোল অ্যান্ড প্রিভেনশন (চায়না সিডিসি) এর পশু পরীক্ষার নীতিশাস্ত্রের কমিটি দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল। গবেষণা প্রাসঙ্গিক নৈতিক নিয়ম মেনে চলে.

ইঁদুরগুলিকে এলোমেলোভাবে পাঁচটি দলে বিভক্ত করা হয়েছিল এবং একা pS/pN দিয়ে টিকা দেওয়া হয়েছিল বা pS + pN বা pS + pE + PM দিয়ে 0, 21, এবং 42 দিনে ইন্ট্রামাসকুলার ইনজেকশন প্লাস ইলেক্ট্রোপোরেশনের মাধ্যমে টিকা দেওয়া হয়েছিল (35 mg/50) mL) (চিত্র 2) [19,20]। সংক্ষেপে, ডিএনএ ভ্যাকসিনগুলি টিবিয়ালিস অ্যান্টিরিয়র (TA) পেশীতে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল এবং অবিলম্বে সূঁচ সহ 5 মিমি-ব্যবধানে দুই-সুই অ্যারে ইলেক্ট্রোড (ECM830; BTX) ব্যবহার করে বিদ্যুৎ দিয়ে স্পন্দিত হয়েছিল। ইঁদুর থেকে সেরাকে হিউমারাল ইমিউন রেসপন্স বিশ্লেষণের জন্য সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং সেলুলার ইমিউন রেসপন্স পরিমাপ করার জন্য মাউস প্লীনা প্রক্রিয়া করা হয়েছিল (চিত্র 2)।

চিত্র 2. টিকাদান এবং SARS-CoV-2 চ্যালেঞ্জের পরিকল্পিত। টিকা দেওয়ার সময় কোর্স, চ্যালেঞ্জিং, এবং রক্ত/টিস্যু স্যাম্পলিং। বিএএলবি/সি ইঁদুরগুলি এলোমেলোভাবে দলে বিভক্ত ছিল।

SARS-CoV-2 চ্যালেঞ্জ পরীক্ষাগুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে পরিচালিত হয়েছিল [15,21]। সংক্ষেপে, ইঁদুরগুলিকে চেতনানাশক করা হয়েছিল এবং তারপরে 2.5 × 108 PFU এর Ad5-hACE2 মোট 45 μL ভলিউম দিয়ে ইন্ট্রানাসলি ট্রান্সডিউস করা হয়েছিল। ট্রান্সডাকশন-পরবর্তী পাঁচ দিন, ইঁদুরগুলিকে চেতনানাশক করা হয়েছিল এবং তারপরে SARS-CoV-2 (উহান/IVDC HB-02/2019) এর 1 × 105 TCID50 দিয়ে মোট 50 μL স্যালাইন দিয়ে ইনট্রানাসালি চ্যালেঞ্জ করা হয়েছিল বাফার মাউস মডেলে লাইভ SARS-CoV-2 এর সমস্ত কাজ অ্যানিমেল বায়োসেফটি লেভেল 3 (ABSL-3) পরীক্ষাগারে সম্পাদিত হয়েছিল৷

2.4। এনজাইম সংযুক্ত immunosorbent পরীক্ষা

এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসরবেন্ট অ্যাসেস (ELISA) পূর্বে বর্ণিত হিসাবে পরিচালিত হয়েছিল [15]। সংক্ষেপে, কার্বনেট বাফারে (0.1 M, pH 9.6) মিশ্রিত S (Sino Biological থেকে কেনা)/N প্রোটিন (গানের একটি উপহার) 96- ভাল EIA/RIA প্লেটে (থার্মো) প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) রাতারাতি 4 ◦C তাপমাত্রায়। প্লেটগুলি পিবিএস-এ 200 μL 10% ছাগলের সিরাম দিয়ে 37 ◦C তাপমাত্রায় 2 ঘন্টার জন্য ব্লক করা হয়েছিল, তারপরে PBST দিয়ে পাঁচবার ধোয়া হয়েছিল৷ তারপরে, পিবিএস-এ 2% ছাগলের সিরামে সিরিয়ালভাবে মিশ্রিত সিরামের নমুনাগুলি যোগ করা হয়েছিল এবং 37 ◦C তাপমাত্রায় 2 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল, তারপরে পিবিএসটি দিয়ে পাঁচটি ওয়াশ করা হয়েছিল। 1 ঘন্টার জন্য 37 ◦C তাপমাত্রায় HRP-সংযুক্ত ছাগল-বিরোধী মাউস IgG Ab (1:5000) যোগ করা হয়েছিল। প্রতিটি কূপে মোট 100 μL TMB সাবস্ট্রেট যোগ করা হয়েছিল এবং 2M H2SO4 এর 50 μL দিয়ে নিভিয়ে দেওয়া হয়েছিল। SPECTR Ostar Nano (BIO-GENE, Hong Kong, China) ব্যবহার করে শোষণটি 450 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে পড়া হয়েছিল।

cistanche উদ্ভিদ-বর্ধমান প্রতিরোধ ব্যবস্থা

Cistanche Enhance Immunity পণ্য দেখতে এখানে ক্লিক করুন

【আরো জন্য জিজ্ঞাসা করুন】 ইমেল:cindy.xue@wecistanche.com / Whats অ্যাপ: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.5। সিউডোভাইরাস সংক্রমণ এবং নিরপেক্ষকরণ পরীক্ষা

সিউডোভাইরাস নিরপেক্ষকরণ অ্যাস পূর্বে বর্ণিত হিসাবে সম্পাদিত হয়েছিল [21,22]। পূর্বপুরুষ ভাইরাস এস প্রোটিন প্রকাশকারী একটি প্লাজমিড পূর্বে নির্মিত হয়েছিল [22]। Omicron ভেরিয়েন্ট SARS-CoV-2 স্পাইক প্রোটিন জিন (GISAID: EPI_ISL_6590782.2) সংশ্লেষিত হয়েছিল (Vazyme Biotech Co., Ltd., Nanjing, China থেকে একটি উপহার) একটি স্তন্যপায়ী-অপ্টিমাইজ করা কোডন ব্যবহার করে এবং pcDNA3.1 ভেক্টরে ক্লোন করা হয়েছে, যেমনটি পূর্বে বর্ণিত হয়েছে [22]। সংক্ষেপে, লুসিফেরেজ রিপোর্টার প্রকাশকারী প্লাজমিড এবং এস প্রোটিন প্রকাশকারী প্লাজমিডগুলি এক্স-ট্রিম জিন এইচপি ডিএনএ ট্রান্সফেকশন রিএজেন্ট ব্যবহার করে HEK 293T কোষে সহ-স্থানান্তরিত হয়েছিল। ট্রান্সফেকশনের 6 ঘন্টা পরে কোষের সংস্কৃতি রিফ্রেশ করা হয়েছিল, এবং সিউডোভাইরাসযুক্ত সুপারনাট্যান্ট 48 ঘন্টা পরে কাটা হয়েছিল এবং −70 ◦C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়েছিল। সিউডোভাইরাস নিউট্রালাইজেশন অ্যাসে, একটি সমান সিরাম-ভাইরাস মিশ্রণটি তখন সিউডোভাইরাস-ধারণকারী সুপারনাট্যান্টের 37 ভলিউমে ইনকিউবেট করা হয়েছিল এবং তারপরে মিশ্রিত সিরামে যোগ করা হয়েছিল। 1 ঘন্টার জন্য ◦C. Huh7.5 সেল কালচার মিডিয়াকে তখন 100 μL সিরাম-ভাইরাস মিশ্রণ দিয়ে প্রতিস্থাপিত করা হয়েছিল এবং 12 ঘন্টার জন্য 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল। শুধুমাত্র SARS-CoV-2 সিউডোভাইরাস দিয়ে সংষ্কৃত কোষগুলি সমান্তরালভাবে চালানো হয়েছিল। তখন মিডিয়াকে DMEM (2% FBS) দিয়ে প্রতিস্থাপিত করা হয় এবং 48 ঘন্টার জন্য 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউবেশন করা হয়। তারপরে, ব্রাইট-গ্লো ফায়ারফ্লাই লুসিফেরেজ কিট (প্রোমেগা) ব্যবহার করে লুসিফেরেজ সংকেত পরিমাপ করা হয়েছিল।

2.6। SARS-CoV-2 নিরপেক্ষকরণ অ্যাস

এই পরীক্ষায় SARS-CoV-2 (উহান/IVDC-HB-02/2019) ব্যবহার করা হয়েছিল৷ সংক্ষেপে, সেরাকে 1:10 এর প্রারম্ভিক পাতলা থেকে দ্বিগুণ পাতলা করা হয়েছিল, সমান আয়তনের (10-15 pfu/ওয়েল) লাইভ SARS-CoV{10}} এর সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল, এবং 37 ◦C তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল, এর পরে তারা বীজযুক্ত ভেরো কোষে যুক্ত হয়েছিল। 48 ঘন্টার জন্য 37 ◦C তাপমাত্রায় ইনকিউবেশনের পরে, একটি সাইটোপ্যাথিক প্রভাব (CPE) পরিলক্ষিত হয়েছিল, এবং 100 μL কালচার সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন এবং রিয়েল-টাইম ফ্লুরোসেন্স রিভার্স ট্রান্সক্রিপশন PCR (RT-PCR) এর জন্য। মিডিয়ান নিউট্রালাইজেশন ডোজ (ND50) রিড-মাঞ্চ পদ্ধতি ব্যবহার করে গণনা করা হয়েছিল [15]।

2.7। IFN- ELISpot অ্যাস

সমগ্র S/N/E/M প্রোটিন জুড়ে থাকা পেপটাইড পুলগুলি 10টি অ্যামিনো অ্যাসিড দ্বারা পরপর 15-মার্স ওভার ল্যাপিং করে Scilight Biotechnology, LLC দ্বারা সংশ্লেষিত হয়েছিল৷ পেপটাইড পুলে প্রতিটি পরিশোধিত পেপটাইডের প্রায় 2.5 মিলিগ্রাম প্রতি শিশিতে উপস্থিত ছিল। পরীক্ষাটি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে পরিচালিত হয়েছিল [18]। সংক্ষেপে, 96-ওয়েল প্লেটগুলি (BD ELISPOT Set, USA) অ্যান্টি-IFN- ক্যাপচার অ্যাব দিয়ে প্রলিপ্ত ছিল এবং 4 ◦C তাপমাত্রায় রাতারাতি ইনকিউব করা হয়েছিল৷ প্লেটগুলি তিনবার ধোয়ার পরে সম্পূর্ণ সংস্কৃতির মাধ্যম দিয়ে ব্লক করা হয়েছিল। 35 দিনে ইঁদুরের euthanized পরে স্প্লেনোসাইট সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং প্রতিটি গ্রুপ থেকে 120টি তাজা একক-কোষ সাসপেনশন প্রতি কূপে 5 × 106 এ প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল এবং পেপটাইড যুক্ত করা হয়েছিল। তারপরে প্লেটগুলিকে 37 ◦C তাপমাত্রায় 5% CO2 তে 22 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল এবং একটি ELISpot প্লেট রিডার (Biosys, So. Pasadena, CA, USA) ব্যবহার করে সনাক্ত করা হয়েছিল। একটি স্পট-ফর্মিং ইউনিট (SFU) একটি টি কোষ-নিঃসরণকারী IFN-কে প্রতিনিধিত্ব করে।

2.8। ইঁদুর পোস্ট-SARS-CoV-2 চ্যালেঞ্জে সুরক্ষার মূল্যায়ন

পরীক্ষাগুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে পরিচালিত হয়েছিল [15,21]। সংক্ষেপে, ইঁদুরের euthanized পরে ফুসফুস কাটা হয়েছিল। অর্ধেক টিস্যু নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন, রিয়েল-টাইম ফ্লুরোসেন্স RT-PCR, এবং TCID50 এর জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। বাকি অর্ধেক প্যাথলজিকাল মূল্যায়নের জন্য চীন কৃষি বিশ্ববিদ্যালয়ের ভেটেরিনারি মেডিসিন কলেজে পাঠানো হয়েছিল।

2.9। পরিসংখ্যান সংক্রান্ত বিশ্লেষণ

গ্রাফপ্যাড প্রিজম 7৷{3}} (গ্রাফপ্যাড সফ্টওয়্যার এলএলসি) ব্যবহার করে জোড়াবিহীন টি-টেস্ট, দ্বি-মুখী আনোভা পরীক্ষা এবং ডনেটের একাধিক তুলনা পরীক্ষা করা হয়েছিল৷ p-মান < 0৷{7}}5 পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল (* p < 0৷{11}}5; ** p < 0.01; * ** p < 0.001; **** p < 0.0001)।

3। ফলাফল

3.1। ডিএনএ ভ্যাকসিনের বৈশিষ্ট্য

ওয়েস্টার্ন ব্লটিং ব্যবহার করে ই এবং এম প্রোটিনের মাত্রা সনাক্ত করা হয়েছিল। আমরা HEK-293তে SARS-CoV-এর এনকোড করা S/N/E/M প্রোটিনগুলির অভিব্যক্তি পরিমাপ করেছি-293 ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণের মাধ্যমে pS/pN/pE/pM প্লাজমিড দিয়ে স্থানান্তরিত, অ্যান্টি ব্যবহার করে -এস/এন্টি-এন অ্যান্টিবডি এবং একটি অ্যান্টি-6 x তার অ্যান্টিবডি, কোষের লাইসেটে। ব্যান্ডগুলি S (140-142 kDa), N (45 kDa), E (10 kDa), এবং M (22-25 kDa) প্রোটিনের (চিত্র 1B) পূর্বাভাসিত আণবিক ওজনের আনুমানিক অনুমান করেছে।

3.2। শক্তিশালী এবং টেকসই অ্যান্টি-এস এবং/অথবা অ্যান্টি-এন আইজিজি উত্পাদন পিএস এবং/অথবা পিএন ডিএনএ দ্বারা প্ররোচিত

35, 56, 96 এবং 120 দিনে BALB/c ইঁদুর থেকে ভ্যাকসিন সিরাম সংগ্রহ করা হয়েছিল (চিত্র 2)। অ্যান্টি-এস/এন-এন-আইজিজি স্তরগুলি ELISA ব্যবহার করে সনাক্ত করা হয়েছিল। পিএস বা পিএন দ্বারা প্ররোচিত এস- বা এন-নির্দিষ্ট আইজিজি প্রতিক্রিয়ার মাত্রা প্রথম এবং দ্বিতীয় বুস্টের পরে সিরামে বাড়ানো হয়েছিল। অ্যান্টি-এস এবং অ্যান্টি-এন আইজিজি টাইটারগুলি পিএস + পিএন গ্রুপে অন্যান্য গ্রুপের তুলনায় বেশি ছিল; যাইহোক, পার্থক্য পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ ছিল না (চিত্র 3A, B)। কোনও শক্তিশালী ই/এম প্রোটিন-নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডি প্রতিক্রিয়া সনাক্ত করা যায়নি, যা পূর্ববর্তী গবেষণার ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ (ডেটা দেখানো হয়নি) [15]।

চিত্র 3. BALB/c ইঁদুরে SARS-CoV-2-এর বি-সেল প্রতিক্রিয়া। (A) SARS-CoV-2 S (A) এবং N প্রোটিন (B) এর জন্য সিরাম IgG বাইন্ডিং এন্ডপয়েন্ট টাইটার। (C) নিরপেক্ষকরণ টাইটারগুলি একটি SARS-CoV-2 সিউডোটাইপড-ভাইরাস সিস্টেমের উপর ভিত্তি করে নির্ধারিত হয়েছিল। (D) অ্যান্টি-SARS-CoV-2 নিরপেক্ষকরণ টাইটারগুলি একটি SARS-CoV-2 ভাইরাস ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল। (E) একটি SARS-CoV-2 ওমিক্রন সিউডোটাইপড ভাইরাস সিস্টেমের উপর ভিত্তি করে নিরপেক্ষকরণ পরীক্ষা। মক (নীল), pS (লাল), pS + pN (সবুজ), pS + pE + pM (গোলাপী), এবং pN (কমলা) গ্রুপ থেকে সেরার জন্য বাধা অনুপাত দেখানো হয়েছে। ত্রুটি বারগুলি SEM-এর প্রতিনিধিত্ব করে, এবং p-মানগুলি একটি দ্বিমুখী ANOVA এবং Sidak-এর পোস্ট-হক বিশ্লেষণ ব্যবহার করে গণনা করা হয়েছিল, যেখানে * p < 0.05

3.3। পিএস এবং পিএন ভ্যাকসিনের সাথে সহ-ইমিউনাইজেশন দ্বারা প্ররোচিত অ্যান্টিবডি নিরপেক্ষ করার উচ্চ স্তর

সিউডোটাইপড SARS-CoV-2 ভাইরাস ব্যবহার করে সিরিয়ালি মিশ্রিত সিরাম নমুনার নিরপেক্ষ টাইটারগুলি নির্ধারণ করা হয়েছিল। পারস্পরিক EC50 জ্যামিতিক গড় টাইটারগুলি 2988 (35 তম দিনে) এবং 3578 (56 তম দিনে) (চিত্র 3C) পৌঁছেছে, পিএস + পিএন গ্রুপে নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডিগুলির (nAbs) সর্বোচ্চ স্তরগুলি পরিলক্ষিত হয়েছে। লাইভ ভাইরাস মাইক্রোনিউট্রালাইজেশন (MN) অ্যাস ব্যবহার করে অনুরূপ ফলাফল পরিলক্ষিত হয়েছে, যেখানে pS + pN গ্রুপে nAbs-এর মাত্রা S গ্রুপের তুলনায় 56 এবং 96 দিনে বেশি ছিল (p < 0.05; চিত্র 3D)। অধিকন্তু, 56 তম দিনে pS + pN গোষ্ঠীতে nAbs-এর মাত্রা 35 দিনের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল (p <0.05; চিত্র 3D)।

SARS-CoV-2 Omicron ভেরিয়েন্টের বিরুদ্ধে প্রতিটি ভ্যাকসিন পদ্ধতির নিরপেক্ষ কার্যকলাপ আরও সিউডোটাইপড প্ল্যাটফর্ম এবং সিরাম নমুনা ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল। 35 এবং 56 দিনে ওমিক্রন ভাইরাসের বিরুদ্ধে নিরপেক্ষকরণ প্রোফাইলটি পূর্বপুরুষ ভাইরাসের (চিত্র 3E) এর মতোই ছিল, যা পরামর্শ দেয় যে PS + pN চিকিত্সার ক্রস নিরপেক্ষ ক্ষমতা ছিল।

cistanche tubulosa- ইমিউন সিস্টেম উন্নত

3.4। টি-সেল প্রতিক্রিয়া ডিএনএ টিকা দ্বারা প্ররোচিত

পূর্বে বর্ণিত হিসাবে, SARS-CoV-2 S/N/E/M অ্যান্টিজেনগুলির বিরুদ্ধে টি-সেল প্রতিক্রিয়াগুলি IFN- ELISpot ব্যবহার করে অনুমান করা হয়েছিল, যেমনটি পূর্বে বর্ণিত হয়েছে [15]। প্রত্যাশিত হিসাবে, PS + pN এবং pS + pE + pM উভয় পদ্ধতিই 35 তম দিনের তুলনায় 120 দিনে S প্রোটিনের জন্য নির্দিষ্ট IFN + T কোষগুলির উল্লেখযোগ্যভাবে উচ্চ স্তরের প্ররোচিত করেছে (p < 0। 05; চিত্র 4A)। অধিকন্তু, 120 দিনে (সেকেন্ড বুস্ট) এন প্রোটিনের জন্য নির্দিষ্ট IFN + T কোষের সংখ্যা pS + pN গ্রুপে (p <0.05; চিত্র 4B) 35 দিনের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল। অবশেষে, 120 দিনে (সেকেন্ড বুস্ট) এম প্রোটিনের জন্য নির্দিষ্ট IFN + T কোষের সংখ্যা উভয় গ্রুপে 35 দিনের তুলনায় উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল (p <0.05; চিত্র 4D)।

চিত্র 4. BALB/c ইঁদুরে SARS-CoV-2 পৃথক কাঠামোগত প্রোটিনের প্রতি T কোষের প্রতিক্রিয়া। (A) SARS-CoV-2 S, (B) N, (C) ই এবং (D) M প্রোটিন। বারগুলি গড় ± SD প্রতিনিধিত্ব করে। পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণগুলি একটি দ্বিমুখী ANOVA এবং Sidak-এর পোস্ট-হক পরীক্ষা ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল, যেখানে * p < 0৷{13}}5, ** p < 0.01, *** p < 0.01, এবং **** p < 0.0001।

3.5। pS/pN বা pS/pE/pM সহ সহ-ইমিউনাইজেশন দ্বারা প্ররোচিত সিনারজিস্টিক সুরক্ষা

আমরা তখন পূর্বপুরুষের SARS-CoV-2 ভাইরাসের সাথে hACE2 ইঁদুর ইমিউনাইজড পোস্ট-চ্যালেঞ্জ ব্যবহার করে ডিএনএ ভ্যাকসিনের প্রতিরক্ষামূলক কার্যকারিতা মূল্যায়ন করেছি। চ্যালেঞ্জ অনুসরণ করে, মক গ্রুপের ইঁদুরগুলি ধীরে ধীরে ওজন হ্রাস প্রদর্শন করেছিল। বিপরীতে, পিএস বা পিএস+ দ্বারা টিকা দেওয়া ইঁদুরগুলি সংক্রমণের পরপরই হালকা ওজন হ্রাস দেখায়, তারপরে পুনরুদ্ধার হয় (চিত্র 5A)। পিএস, পিএস + পিএন, বা পিএস + পিই + পিএম দিয়ে টিকা দেওয়া ইঁদুরগুলিতে কোনও লাইভ ভাইরাস সনাক্ত করা যায়নি। অধিকন্তু, pS + pN টিকা শুধুমাত্র pS টিকা দিয়ে প্রাপ্তদের তুলনায় ভাইরাল RNA কপি সংখ্যা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে (p=0.0228; চিত্র 5B)। তদুপরি, ফুসফুসের হিস্টোপ্যাথলজি প্রমাণ করেছে যে মক এবং পিএন উভয় গ্রুপের ইঁদুরগুলি প্রদাহ, প্লুরাল ইনভাজিনেশন, অ্যালভিওলার পতন, প্রদাহজনক কোষের অনুপ্রবেশের উচ্চ মাত্রা এবং রক্তক্ষরণের ক্ষেত্রে ফোকাল প্যাচ দেখিয়েছে। তুলনামূলকভাবে, pS + pN বা pS + pE + pM দিয়ে চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলি অন্য গোষ্ঠীর তুলনায় হালকা হিস্টোপ্যাথলজিকাল পরিবর্তন এবং কম INHAND স্কোর পোস্ট-চ্যালেঞ্জ দেখায় (চিত্র 5C)।

চিত্র 5. লাইভ SARS-CoV-2 ভাইরাসের সাথে চ্যালেঞ্জের পরে ইমিউনাইজেশনের প্রতিরক্ষামূলক কার্যকারিতা। (A) ইঁদুরের ওজন করা হয়েছিল প্রতিদিন (মানে ± স্ট্যান্ডার্ড এরর অফ দ্য গড় (SEM), n=4) তিন দিনের চ্যালেঞ্জের পরে। (খ) TCID5{{10}} অ্যাস এবং আরএনএ কপি নম্বরের মাধ্যমে নির্ধারিত তৃতীয় দিনে ফুসফুসে সংক্রামক SARS-CoV-2 টাইটার-চ্যালেঞ্জ-পরবর্তী দিনে একত্রিত হয়। গোষ্ঠীগুলির মধ্যে পরিসংখ্যানগতভাবে উল্লেখযোগ্য পার্থক্যগুলি একমুখী ANOVA ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল যার পরে Dunnett এর একাধিক তুলনা সংশোধন (* p < 0৷{16}}5, ** p < 0.01, *** p < 0.001, এবং **** p < 0.0001)। (সি) H&E স্টেনিং ব্যবহার করে ফুসফুসের হিস্টোপ্যাথোলজিকাল বিশ্লেষণ।

4। আলোচনা

এই গবেষণায়, এস এবং এন প্রোটিন প্রকাশকারী দুটি ডিএনএ ভ্যাকসিনের সাথে সহ-ইমিউনাইজেশন উচ্চ মাত্রার nAbs প্ররোচিত করে এবং ইঁদুরের মধ্যে SARS-CoV-2 ভাইরাল লোড কমাতে অত্যন্ত কার্যকর ছিল। এস প্রোটিন প্ররোচিত ডিএনএ ভ্যাকসিনগুলি তিনটি টিকা দেওয়ার পরে এস প্রোটিন-নির্দিষ্ট সেলুলার অনাক্রম্যতার মাত্রা বৃদ্ধি করে যখন ইঁদুরকে N/E এবং M প্রোটিনের সাথে সহ-ইমিউনাইজ করা হয়েছিল এবং চ্যালেঞ্জের পরে হিস্টোপ্যাথলজিকাল পরিবর্তনগুলি হ্রাস করেছিল। আমাদের সর্বোত্তম জ্ঞান অনুসারে, এটিই প্রথম রিপোর্ট যা ইঁদুরের প্রতিরোধ ক্ষমতা এবং সুরক্ষার সমন্বয়মূলক বর্ধিতকরণ প্রকাশ করে যা এস প্রোটিনকে এনকোডিং একটি ডিএনএ ভ্যাকসিন ব্যবহার করে যখন তারা SARS-CoV-এর অন্যান্য কাঠামোগত প্রোটিন এনকোডিং DNA ভ্যাকসিনের সাথে সহ-ইমিউনাইজড হয়{{8 }}

cistanche tubulosa- ইমিউন সিস্টেম উন্নত

এন অ্যান্টিজেন অঞ্চলে ইমিউনোডোমিন্যান্ট বি-সেল এপিটোপগুলি বেশ কয়েকটি গবেষণায় দেখা গেছে। N-ভিত্তিক ভ্যাকসিন সাধারণত nAbs প্ররোচিত করতে পারে না, সম্ভবত কারণ N প্রোটিন ভাইরাল পৃষ্ঠে প্রদর্শিত হয় না। উল্লেখযোগ্যভাবে, এস এবং এন প্রোটিনের সহ-ইমিউনাইজেশন অন্যান্য গোষ্ঠীর তুলনায় পূর্বপুরুষ এবং ওমিক্রন SARS-CoV-2 ভাইরাসের বিরুদ্ধে উচ্চ স্তরের nAbs প্ররোচিত করে। বর্ধিত nAb প্রতিক্রিয়া ভাল ভাইরাল ক্লিয়ারেন্স এবং প্রতিরক্ষামূলক কার্যকারিতার সাথে যুক্ত। আমাদের ফলাফলগুলি প্রমাণ করেছে যে SARS-CoV-2 ভাইরাল লোড পোস্ট-চ্যালেঞ্জ কমাতে pS + pN চিকিত্সা একা pS চিকিত্সার চেয়ে বেশি কার্যকর। পূর্ববর্তী একটি সমীক্ষায় জানা গেছে যে হ্যামস্টাররা এম এবং এন প্রোটিন সহ-প্রকাশিত একটি ভ্যাকসিনের মাধ্যমে টিকা দেওয়া হয়েছে তারা গুরুতর ওজন হ্রাস এবং ফুসফুসের প্যাথলজি থেকে সুরক্ষিত ছিল এবং SARS-CoV{12}} চ্যালেঞ্জের পরে অরোফ্যারিনক্স এবং ফুসফুসে ভাইরাল টাইটারগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে, যা আমাদের ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ [২৩]। দুর্ভাগ্যবশত, ভাইরাস টাইটারের হ্রাস বিশেষভাবে M বা N প্রোটিনের জন্য দায়ী করা যায় না, এবং nAb স্তরগুলি এই গবেষণায় মূল্যায়ন করা হয়নি। একটি SARS-CoV-2 mRNA ভ্যাকসিন সমীক্ষা জানিয়েছে যে S + N সহ-ইমিউনাইজেশন একটি বর্ধিত এস-নির্দিষ্ট সিডি8+ টি-সেল প্রতিক্রিয়া এবং অ্যান্টিবডি কার্যকলাপকে নিরপেক্ষ করে, ডেল্টার বিরুদ্ধে ফুসফুসে আরও ভাল সুরক্ষা প্রদান করে বৈকল্পিক শুধুমাত্র এস এর সাথে তুলনা করে, যা এই গবেষণার ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ [24]। অন্য একটি সমীক্ষায় জানা গেছে যে সংক্রমণযোগ্য গ্যাস্ট্রোএন্টেরাইটিস করোনাভাইরাসের এন প্রোটিন অ্যান্টিবডি নিরপেক্ষ করার সংশ্লেষণকে উন্নীত করে যখন পোরসিন টিজিইভি-ইমিউন কোষগুলিকে ভিট্রোতে এস এবং এন প্রোটিনের সংমিশ্রণে উদ্দীপিত করা হয়েছিল, এবং এই প্রভাবটি সাহায্যকারী টি-লিম্ফোসাইট প্রতিক্রিয়া দ্বারা ব্যাখ্যা করা যেতে পারে। এন প্রোটিন [25]।

এন-অ্যান্টিজেন অঞ্চলে ইমিউনোডোমিন্যান্ট সিডি4+/সিডি8+ টি-সেল এপিটোপগুলি আগে শনাক্ত করা হয়েছে। বেশ কিছু গবেষণায় জানা গেছে যে SARS-CoV-2 N প্রোটিনের উপর ভিত্তি করে ভ্যাকসিনগুলি কার্যকরভাবে সেলুলার ইমিউন প্রতিক্রিয়া প্ররোচিত করে। এস + এন গ্রুপ তিনটি টিকা দেওয়ার পরে এস প্রোটিন-নির্দিষ্ট সেলুলার অনাক্রম্যতার মাত্রা বৃদ্ধি করেছে। একটি SARS-CoV-2 mRNA ভ্যাকসিন সমীক্ষা রিপোর্ট করেছে যে কম্বিনেটরিয়াল S + N শুধুমাত্র S-এর তুলনায় একটি বর্ধিত S-নির্দিষ্ট সিডি8+ টি-সেল প্রতিক্রিয়া তৈরি করেছে, যা আমাদের ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ [২৪]। অন্য একটি গবেষণায় বলা হয়েছে যে ডুয়াল-এন্টিজেন hAd5 S + N প্রাইম ভ্যাকসিনেশনের পরে S এবং N অ্যান্টিজেনের প্রতি T-কোষের প্রতিক্রিয়া পূর্বে SARS-CoV-2- সংক্রামিত রোগীদের সমতুল্য ছিল, এবং টি-সেলের সিলিকো পূর্বাভাস মডেলগুলিতে এপিটোপ এইচএলএ বাইন্ডিং পরামর্শ দিয়েছে যে hAd5 S + N ভ্যাকসিনের টি-সেল প্রতিক্রিয়াগুলি B.1.351 ভ্যাকসিনের বিরুদ্ধে তাদের কার্যকারিতা বজায় রাখবে। অধিকন্তু, পূর্বে SARS-CoV-2-সংক্রমিত রোগীদের প্লাজমা শুধুমাত্র hAd5 S-Fusion-এর তুলনায় দ্বৈত অ্যান্টিজেন S-Fusion + N-ETSD গঠন প্রকাশকারী কোষগুলির সাথে একটি উচ্চ আবদ্ধতা দেখায়, যা আরও পরামর্শ দেয় যে এর ইমিউনোজেনিসিটি S + N ডাবল-অ্যান্টিজেন ভ্যাকসিন S একক-অ্যান্টিজেন ভ্যাকসিনের চেয়ে ভাল [26]।

ফুসফুসে লাইভ ভাইরাস সনাক্ত করা যায়নি, এবং pS, pS + pN এবং pS + pE + pM গ্রুপে চ্যালেঞ্জের পরে ওজন কমানো কমানো হয়েছিল, যখন pN চিকিত্সা কার্যকরভাবে ভাইরাস টাইটার কমাতে পারেনি। এই ফলাফলগুলি একটি ভ্যাকসিন লক্ষ্য হিসাবে এস প্রোটিনের অপরিহার্যতা এবং কার্যকারিতার উপর জোর দেয়। উল্লেখযোগ্যভাবে, ভাইরাল ক্লিয়ারেন্সে pS বা pN এর চেয়ে pS এবং pN এর সহ-ইমিউনাইজেশন ভাল প্রভাব ফেলেছিল। পিএস + পিই + পিএম গ্রুপ ফুসফুসে কম হিস্টোপ্যাথোলজিকাল পরিবর্তনগুলি নির্দেশ করে, যা আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ [15]। S+N গ্রুপের ফুসফুসে কম ভাইরাল RNA কপি ছিল, ওজন কমানো হয়েছে, এবং SARS-CoV{11}} চ্যালেঞ্জের পরে দ্রুত পুনরুদ্ধারের সময় শুধুমাত্র S/N দিয়ে টিকা দেওয়া গ্রুপের তুলনায়, যা সঙ্গতিপূর্ণ ছিল এই গবেষণার ফলাফল। যাইহোক, গোষ্ঠীগুলির মধ্যে কেউই নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডি টাইটারগুলি সনাক্ত করেনি, যা ভ্যাকসিনের বৈচিত্র্য এবং পরীক্ষামূলক প্রাণী [26] এর পার্থক্য দ্বারা ব্যাখ্যা করা যেতে পারে। একটি SARS-CoV-2 অ্যাডেনোভাইরাস ভেক্টর ভ্যাকসিন সমীক্ষা রিপোর্ট করেছে যে এস ভ্যাকসিন শুধুমাত্র তীব্র মস্তিষ্কের সুরক্ষা প্রদান করে যখন একটি N টিকার সাথে সহ-ইমিউনাইজ করা হয় [27]। আরেকটি গবেষণায় ট্রাই: ChAd, Bi: ChAd, এবং Mono: ChAd ভ্যাকসিনগুলি যথাক্রমে S1/N/RdRp, N/RdRp, এবং S1 প্রোটিন প্রকাশ করে এবং সেগুলিকে B.1.351 পশু মডেলে পরীক্ষা করে। মনো: ChAdlungs-এ বিস্তৃত স্থূল প্যাথলজি পরিলক্ষিত হয়েছিল, যেখানে Bi: ChAd এবং Tri: ChAd ফুসফুস এই রোগবিদ্যা থেকে প্রায় মুক্ত ছিল [28]।

অধিকন্তু, টিকাবিহীন প্রাণীদের ফুসফুসে ভাইরাল লোড বেশি ছিল, যেখানে Tri: ChAd চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে ভাইরাল লোড 3.5 লগ কমিয়েছে। তুলনায়, উভয় Bi: ChAd এবং Mono: ChAd ভ্যাকসিন শুধুমাত্র ভাইরাল লোডকে মাঝারিভাবে কমিয়েছে। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে রূপগুলির বিরুদ্ধে S/N ডাবল-অ্যান্টিজেন ভ্যাকসিনের প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব S একক-অ্যান্টিজেন ভ্যাকসিনের তুলনায় ভাল হতে পারে, যা আমাদের ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। কয়েকটি গবেষণায় জানা গেছে যে এন প্রোটিন-ইমিউনাইজড ইঁদুর SARS-CoV সংক্রমণের পরে গুরুতর ফুসফুসের প্রদাহ তৈরি করে [২৯-৩১]। পূর্ববর্তী গবেষণাগুলিও রিপোর্ট করেছে যে মাউস হেপাটাইটিস ভাইরাস এন প্রোটিন প্রকাশ করে একটি অ্যাডেনোভাইরাস ভেক্টর ভ্যাকসিনের সাথে ইমিউনাইজেশন ইঁদুরকে প্রাণঘাতী সংক্রমণের বিরুদ্ধে রক্ষা করে, যা দেখায় যে এন প্রোটিন একটি প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব তৈরি করতে পারে [৩২]। অধিকন্তু, CRT/N ডিএনএ ভ্যাকসিনের মাধ্যমে টিকা দেওয়া গ্রুপের ভাইরাল টাইটার পোস্ট-চ্যালেঞ্জ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে, একটি ভ্যাকসিনিয়া ভাইরাস SARS-CoV N প্রোটিন প্রকাশ করে [33]।

cistanche tubulosa- ইমিউন সিস্টেম উন্নত

এস প্রোটিনের উপর একটি গবেষণায় দেখা গেছে যে সম্মিলিত ডিএনএ/প্রোটিন ভ্যাকসিন শুধুমাত্র ডিএনএ/প্রোটিন ভ্যাকসিনের চেয়ে হিউমারাল এবং সেলুলার ইমিউনিটি উভয়ই ভালো করে। শুধুমাত্র এস প্রোটিনকে লক্ষ্য করে ভ্যাকসিনগুলি উদীয়মান রূপগুলির কারণে সৃষ্ট হালকা থেকে মাঝারি COVID-19 থেকে রক্ষা করার ক্ষেত্রে কার্যকারিতা হ্রাস করেছে। N/E/M প্রোটিন সহ সংরক্ষিত SARS-CoV-2 স্ট্রাকচারাল প্রোটিনগুলির ভূমিকা ভ্যাকসিন ডিজাইন এবং অ্যাপ্লিকেশনগুলিতে মনোযোগের যোগ্য, কারণ সংরক্ষিত এপিটোপের বিরুদ্ধে ভ্যাকসিন-প্ররোচিত টি-সেল প্রতিক্রিয়াগুলি সাধারণত মিউটেশন দ্বারা প্রভাবিত হয় না . একটি সমীক্ষায় জানা গেছে যে SARS-পুনরুদ্ধার হওয়া রোগীদের (n=23) 2003 এর প্রাদুর্ভাবের 17 বছর পরেও SARS-CoV N প্রোটিনের প্রতি প্রতিক্রিয়াশীল দীর্ঘস্থায়ী মেমরি টি কোষ রয়েছে, যা SARS CoV-এর প্রতি শক্তিশালী ক্রস-রিঅ্যাক্টিভিটি প্রদর্শন করে {15}} এন প্রোটিন, ক্রস-প্রোটেক্টিভ ভ্যাকসিন লক্ষ্য হিসাবে N প্রোটিনের ব্যবহারকে আরও বৈধ করে [34]। এই গবেষণায় প্রমাণিত হয়েছে যে pS/pN সহ-ইমিউনাইজেশন উচ্চতর nAb প্রতিক্রিয়া, ভাল ভাইরাল ক্লিয়ারেন্স এবং উন্নত সেলুলার ইমিউন প্রতিক্রিয়ার সাথে যুক্ত ছিল এবং শুধুমাত্র pS-এর তুলনায় SARS-CoV-2 চ্যালেঞ্জের পরে আরও ভাল সুরক্ষা প্রদান করতে পারে। উপরন্তু, SARS-CoV-2 ভেরিয়েন্টগুলি অনেক প্রাণী প্রজাতিকে সংক্রামিত করতে দেখা গেছে, এবং কিছু বন্য প্রাণী এবং পোষা প্রাণীর মধ্যে মানুষ থেকে প্রাণীর সংক্রমণ লক্ষ্য করা গেছে [7]। তাই, ভেটেরিনারি SARS-CoV-2 ভ্যাকসিনের প্রতি আরও মনোযোগ দেওয়া দরকার। উপরন্তু, ন্যানোটেকনোলজি ভ্যাকসিন অপ্টিমাইজ করার একটি শক্তিশালী হাতিয়ার হতে পারে এবং এটি আরও মনোযোগের যোগ্য [2]।

এই গবেষণায় বিভিন্ন সীমাবদ্ধতা উপস্থিত রয়েছে। প্রথমত, আমরা শুধুমাত্র BALB/c ইঁদুরের ডিএনএ ভ্যাকসিন কৌশলটি পর্যবেক্ষণ করেছি এবং ভবিষ্যতের গবেষণায় অন্যান্য প্রাণীর মডেলগুলিতে এই ভ্যাকসিন পদ্ধতিগুলির ইমিউনোজেনিক প্রভাবগুলি মূল্যায়ন করা উচিত। দ্বিতীয়ত, S এবং N প্রোটিন ব্যবহার করে সহ-ইমিউনাইজেশন দ্বারা প্ররোচিত বর্ধিত nAb- এবং S-নির্দিষ্ট CD8 T-সেল প্রতিক্রিয়াগুলির অন্তর্নিহিত আণবিক প্রক্রিয়াগুলি সম্পূর্ণরূপে বোঝার জন্য এবং COVID-কে অপ্টিমাইজ করার জন্য এই জ্ঞানকে কাজে লাগানোর জন্য অতিরিক্ত গবেষণার প্রয়োজন হয়-19 ভ্যাকসিন ডিজাইন। অবশেষে, এন প্রোটিন-নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডিগুলির কার্যকারিতা আরও অধ্যয়নের দাবি রাখে।

cistanche tubulosa- ইমিউন সিস্টেম উন্নত

উপসংহারে, এই সমীক্ষাটি SARS-CoV-2 S, N, E, এবং M প্রোটিনের সাথে সহ-ইমিউনাইজেশনের ইমিউন-প্রতিরক্ষামূলক সম্ভাবনার মূল্যায়ন করেছে। শুধুমাত্র এস প্রোটিনকে লক্ষ্য করে বেশ কয়েকটি ভ্যাকসিনের উদীয়মান বৈকল্পিক স্ট্রেনের উপর একটি কম প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব রয়েছে। আমাদের ফলাফল বর্তমান এবং উদীয়মান SARS-CoV-2 রূপগুলিকে নিয়ন্ত্রণ করতে এবং সম্ভাব্য -করোনাভাইরাস মহামারী প্রতিরোধের জন্য একটি ক্রস-রিঅ্যাকটিভ COVID-19 ভ্যাকসিন তৈরির ভিত্তি তৈরি করবে।

তথ্যসূত্র

1. Zmievskaya, E.; ভ্যালিউলিনা, এ.; গণিভা, আই.; পেটুকভ, এ.; রিজভানভ, এ.; বুলাটভ, ই. অ্যানকোলজির বাইরে CAR-T সেল থেরাপির প্রয়োগ: অটোইমিউন ডিজিজ এবং ভাইরাল ইনফেকশন। বায়োমেডিসিন 2021, 9, 59। [CrossRef] [PubMed]

2. রশিদজাদেহ, এইচ.; ডানাফার, এইচ.; রহিমি, এইচ.; মোজাফরি, এফ.; সালেহিয়াবার, এম.; রহমতি, এম.এ; রাহামুজ-হাগিঘি, এস.; মুসাজাদেহ, এন.; মোহাম্মদী, এ.; এরটাস, ওয়াইএন; ইত্যাদি নভেল করোনাভাইরাস (সিভিয়ার অ্যাকিউট রেসপিরেটরি সিন্ড্রোম করোনাভাইরাস 2) এর বিরুদ্ধে ন্যানোটেকনোলজি: রোগ নির্ণয়, চিকিৎসা, থেরাপি এবং ভবিষ্যত দৃষ্টিভঙ্গি। ন্যানোমেডিসিন 2021, 16, 497-516। [ক্রসরেফ]

3. ফন্টানেট, এ.; কচেমেজ, এস. কোভিড-19 পশুর অনাক্রম্যতা: আমরা কোথায়? নাট. রেভ. ইমিউনল। 2020, 20, 583–584। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

4. জয়নাথন, এম.; আফখামি, এস.; Smaill, F.; মিলার, এমএস; লিচটি, বিডি; জিং, জেড. COVID-19 ভ্যাকসিন কৌশলগুলির জন্য ইমিউনোলজিক্যাল বিবেচনা। নাট. রেভ. ইমিউনল। 2020, 20, 615-632। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

5. ভ্যানডেলি, এ.; মন্টি, এম.; মিলানেত্তি, ই.; আরমাওস, এ.; রুপার্ট, জে.; জ্যাকো, ই.; বেচারা, ই.; ডেলি পন্টি, আর.; Tartaglia, GG SARS-CoV-2 জিনোমের কাঠামোগত বিশ্লেষণ এবং মানুষের ইন্টারঅ্যাক্টোমের পূর্বাভাস। নিউক্লিক অ্যাসিড রেস. 2020, 48, 11270–11283। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

6. জ্যাকসন, সিবি; ফারজান, এম.; চেন, বি.; Choe, H. SARS-CoV-2 কোষে প্রবেশের প্রক্রিয়া। নাট. রেভ. মো. সেল বায়োল। 2022, 23, 3-20। [ক্রসরেফ]

7. কনফোর্টি, এ.; সানচেজ, ই.; সালভাতোরি, ই.; সিংহ, এল.; কমপ্যাগনন, এম.; পিন্টো, ই.; পালোম্বো, এফ.; ডি'আকুন্টো, ই.; মুজি, এ.; রোসিলি, জি.; ইত্যাদি SARS-CoV-2 রিসেপ্টর বাইন্ডিং ডোমেনের এনকোডিং একটি লিনিয়ার ডিএনএ ভ্যাকসিন প্রার্থী গৃহপালিত বিড়ালদের মধ্যে শক্তিশালী ইমিউন প্রতিক্রিয়া এবং নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডি তৈরি করে। মোল। সেখানে। পদ্ধতি ক্লিন। দেব। 2023। [ক্রসরেফ]

8. বোর্গোয়াকোভা, এমবি; কার্পেনকো, এলআই; Merkulyeva, IA; Shcherbakov, DN; রুডোমেটভ, এপি; স্টারোস্টিনা, ইভি; শানশিন, ডিভি; Isaeva, AA; Nesmeyanova, VS; ভলকোভা, এনভি; ইত্যাদি COVID-19 এর বিরুদ্ধে DNA/প্রোটিন সম্মিলিত ভ্যাকসিনের ইমিউনোজেনিসিটি। ষাঁড়. মেয়াদ। বায়োল মেড. 2023, 1-4। [ক্রসরেফ]

9. কু, এল.; Yi, Z.; শেন, ওয়াই।; লিন, এল.; চেন, এফ.; Xu, Y.; উ, জেড.; ট্যাং, এইচ.; ঝাং, এক্স।; তিয়ান, এফ.; ইত্যাদি SARS-CoV-2 এবং উদীয়মান রূপের বিরুদ্ধে সার্কুলার RNA ভ্যাকসিন। সেল 2022, 185, 1728–1744.e16. [ক্রসরেফ]

10. করবেট, কেএস; এডওয়ার্ডস, ডিকে; লিস্ট, এসআর; আবিওনা, ওএম; বয়োগলু-বারনুম, এস.; গিলেস্পি, আরএ; হিমানসু, এস.; Schäfer, A.; জিওয়াও, সিটি; DiPiazza, AT; ইত্যাদি SARS-CoV-2 mRNA ভ্যাকসিন ডিজাইন প্রোটোটাইপ প্যাথোজেন প্রস্তুতি দ্বারা সক্ষম। প্রকৃতি 2020, 586, 567–571। [ক্রসরেফ]

11. তিয়ান, জেএইচ; প্যাটেল, এন.; Haupt, R.; Zhou, H.; ওয়েস্টন, এস.; হ্যামন্ড, এইচ.; লগ, জে.; পোর্টনফ, এ.; নর্টন, জে.; গুয়েব্রে-জাবিয়ের, এম.; ইত্যাদি SARS-CoV-2 স্পাইক গ্লাইকোপ্রোটিন ভ্যাকসিন প্রার্থী NVX-CoV2373 বেবুনের ইমিউনোজেনিসিটি এবং ইঁদুরের সুরক্ষা। নাট. কমুন 2021, 12, 372। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

12. Andreano, E.; প্যাসিলো, আই.; পিকিনি, জি.; মাঙ্গানারো, এন.; পিলেরি, পি.; হাইসেনি, আই.; লিওনার্দি, এম.; প্যান্টানো, ই.; Abbiento, V.; বেনিনকাসা, এল.; ইত্যাদি হাইব্রিড অনাক্রম্যতা SARS-CoV-2 রূপের বিরুদ্ধে বি কোষ এবং অ্যান্টিবডি উন্নত করে। প্রকৃতি 2021, 600, 530-535। [ক্রসরেফ]

13. নকভি, AAT; ফাতিমা, কে.; মোহাম্মদ, টি.; ফাতিমা, ইউ.; সিং, আইকে; সিং, এ.; আতিফ, এসএম; হরিপ্রসাদ, জি.; হাসান, জিএম; হাসান, MI ইনসাইটস ইন SARS-CoV-2 জিনোম, গঠন, বিবর্তন, প্যাথোজেনেসিস এবং থেরাপি: স্ট্রাকচারাল জিনোমিক্স অ্যাপ্রোচ। বায়োচিম। বায়োফিস। Acta Mol. ভিত্তি। ডিস. 2020, 1866, 165878। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

14. আব্বাসি, জে. ভারতের নতুন COVID-19 কিশোর এবং প্রাপ্তবয়স্কদের জন্য ডিএনএ ভ্যাকসিন প্রথম। JAMA 2021, 326, 1365। [CrossRef] [PubMed]

15. চেন, জে.; ডেং, ওয়াই.; হুয়াং, বি.; হাত.; ওয়াং, ডব্লিউ; হুয়াং, এম.; ঘাই, সি.; ঝাও, জেড.; ইয়াং, আর.; ঝাও, ওয়াই.; ইত্যাদি ডিএনএ ভ্যাকসিনগুলি খাম এবং ঝিল্লি প্রোটিন প্রকাশ করে ইঁদুরে SARS-CoV-2 এর বিরুদ্ধে আংশিক সুরক্ষা প্রদান করে। সামনে। ইমিউনল। 2022, 13, 827605। [ক্রসরেফ]

16. তেবাস, পি.; ক্রায়নিয়াক, কেএ; প্যাটেল, এ.; মাসলো, জেএন; কাল, এমপি; সিলভেস্টার, এজে; নব্লক, ডি.; গিলেস্পি, ই.; আমন্তে, ডি.; রেসিন, টি.; ইত্যাদি Intradermal SynCon®Ebola GP DNA ভ্যাকসিন হল তাপমাত্রা স্থিতিশীল এবং নিরাপদে স্বাস্থ্যকর স্বেচ্ছাসেবকদের মধ্যে সেলুলার এবং হিউমোরাল ইমিউনোজেনিসিটি সুবিধাগুলি প্রদর্শন করে৷ J. ইনফেকশন। ডিস. 2019, 220, 400-410। [ক্রসরেফ]

17. স্মিথ, টিআরএফ; প্যাটেল, এ.; রামোস, এস.; এলউড, ডি.; ঝু, এক্স।; ইয়ান, জে.; গ্যারি, EN; ওয়াকার, এসএন; শুলথিস, কে.; পুরওয়ার, এম.; ইত্যাদি COVID-19 এর জন্য একটি ডিএনএ ভ্যাকসিন প্রার্থীর ইমিউনোজেনিসিটি। নাট. কমুন 2020, 11, 2601। [ক্রসরেফ]

18. ঝাও, জেড.; ডেং, ওয়াই.; নিউ, পি.; গান, জে.; ওয়াং, ডব্লিউ; Du, Y.; হুয়াং, বি.; ওয়াং, ডব্লিউ; ঝাং, এল.; ঝাও, পি.; ইত্যাদি সিএইচআইকেভি ভিএলপি এবং ডিএনএ ভ্যাকসিনের সাথে সহ-টিকাকরণ ইঁদুরের মধ্যে একটি প্রতিশ্রুতিশীল হাস্যকর প্রতিক্রিয়া প্ররোচিত করে। সামনের ইমিউনল। 2021, 12, 655743। [ক্রসরেফ]

19. গুয়ান, জে.; ডেং, ওয়াই.; চেন, এইচ.; ইয়িন, এক্স।; ইয়াং, ওয়াই।; ট্যান, ডব্লিউ. হেপাটাইটিস সি ভাইরাস এনএস3 প্রোটিনকে লক্ষ্য করে দুটি ডিএনএ ভ্যাকসিনের সাহায্যে ডেনড্রাইটিক কোষকে লক্ষ্য করে ইঁদুরের মধ্যে উচ্চতর হেটেরোলজাস প্রতিরক্ষামূলক সম্ভাবনা প্রকাশ করে। খিলান। ভাইরল। 2015, 160, 2517–2524। [ক্রসরেফ]

20. চেন, এইচ.; ওয়েন, বি.; ডেং, ওয়াই.; ওয়াং, ডব্লিউ; ইয়িন, এক্স।; গুয়ান, জে.; রুয়ান, এল.; Tan, W. হেপাটাইটিস বি ভাইরাস কোর-প্রিএস১ এবং এস-প্রিএস১ প্লাজমিডের সংমিশ্রণে ভিভো ইলেক্ট্রোপোরেশনে ডিএনএ ইমিউনাইজেশন প্লাস-এর বর্ধিত প্রভাব। ক্লিন। ভ্যাকসিন ইমিউনল। 2011, 18, 1789-1795। [ক্রসরেফ]

21. ইয়াং, আর.; ডেং, ওয়াই.; হুয়াং, বি.; হুয়াং, এল.; লিন, এ.; লি, ওয়াই.; ওয়াং, ডব্লিউ; লিউ, জে.; লু, এস.; Zhan, Z.; ইত্যাদি অনুকূল বায়োডিস্ট্রিবিউশন প্যাটার্ন এবং প্রতিশ্রুতিশীল অনাক্রম্যতা সহ একটি কোর-শেল স্ট্রাকচার্ড COVID-19 mRNA ভ্যাকসিন। সিগন্যাল ট্রান্সডাক্ট। সেখানে টার্গেট. 2021, 6, 213। [CrossRef] [PubMed]

22. ইয়াং, আর.; হুয়াং, বি.; এ, আর.; লি, ডব্লিউ; ওয়াং, ডব্লিউ; ডেং, ওয়াই.; ট্যান, ডব্লিউ. সিউডোটাইপড SARS-CoV-2 সিস্টেমের বিকাশ এবং কার্যকারিতা যেমন ভিট্রোতে দক্ষতা এবং প্রবেশ নিষেধাজ্ঞা পরীক্ষা নিরপেক্ষ করে নির্ধারিত হয়। বায়োসাফ। স্বাস্থ্য 2020, 2, 226–231। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

23. জিয়া, প্র.; Bielefeldt-Ohmann, H.; মেসন, আরএম; মাসলেসা-গালিক, এস.; কুপার, এসকে; বোয়েন, আরএ; Horwitz, MRA SARS-CoV-2 মেমব্রেন এবং নিউক্লিওক্যাপসিড প্রোটিন প্রকাশকারী ব্যাকটেরিয়ামভেক্টরযুক্ত ভ্যাকসিন হ্যামস্টারে গুরুতর COVID-19-এর মতো রোগ থেকে রক্ষা করে। NPJ ভ্যাকসিন 2021, 6, 47। [CrossRef] [PubMed]

24. হাজনিক, আরএল; Plante, JA; লিয়াং, ওয়াই.; আলমেহ, এম.-জি.; ট্যাং, জে.; ঝং, সি.; আদম, এ.; Scharton, D.; রাফায়েল, জিএইচ; লিউ, ওয়াই.; ইত্যাদি কম্বিনেটরিয়াল mRNA টিকা SARS-CoV-2 ডেল্টা ভেরিয়েন্টের বিরুদ্ধে সুরক্ষা বাড়ায়। bioRxiv 2021। [CrossRef]

25. অ্যান্টন, আইএম; গঞ্জালেজ, এস.; বুলিডো, এমজে; করসিন, এম.; রিসকো, সি.; ল্যাঞ্জভেল্ড, জেপি; Enjuanes, L. ভাইরাস-নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডির ইন ভিট্রো ইনডাকশনে ট্রান্সমিসিবল গ্যাস্ট্রোএন্টেরাইটিস করোনাভাইরাস (TGEV) কাঠামোগত প্রোটিনের মধ্যে সহযোগিতা। ভাইরাস রেস. 1996, 46, 111-124। [ক্রসরেফ]

26. দেশচামবল্ট, ওয়াই.; লিঞ্চ, জে.; ওয়ার্নার, বি.; Tierney, K.; Huynh, D.; ভেন্দ্রমেলি, আর.; দর্জি, এন.; ফ্রস্ট, কে.; বুথ, এস.; সাজেশ, বি.; ইত্যাদি রিকম্বিন্যান্ট ACAM2000 ভ্যাক্সিনিয়া ভাইরাস সহ একক টিকাদান স্পাইক প্রকাশ করে এবং নিউক্লিওক্যাপসিড প্রোটিন হ্যামস্টারকে SARS-CoV-2-জনিত ক্লিনিকাল রোগ থেকে রক্ষা করে। bioRxiv 2021। [CrossRef]

27. পেনালোজা-ম্যাকমাস্টার, পি.; ক্লাস, জে.; ধূর.; রিচনার, JM A SARS CoV-2 নিউক্লিওক্যাপসিড ভ্যাকসিন দূরবর্তী ভাইরাল বিস্তার থেকে রক্ষা করে। bioRxiv 2021।

28. আফখামি, এস.; ডি'আগোস্টিনো, এমআর; ঝাং, এ.; স্টেসি, এইচডি; মারজোক, এ.; কাং, এ.; সিং, আর.; Bavananthasivam, J.; ইয়ে, জি.; লুও, এক্স।; ইত্যাদি পরবর্তী প্রজন্মের কোভিড-19 ভ্যাকসিনের শ্বাসযন্ত্রের মিউকোসাল ডেলিভারি SARS-CoV-2-এর পূর্বপুরুষ এবং ভিন্ন ভিন্ন স্ট্রেইনের বিরুদ্ধে শক্তিশালী সুরক্ষা প্রদান করে। সেল 2022, 185, 896–915.e19। [ক্রসরেফ]

29. ঝেং, এন.; জিয়া, আর.; ইয়াং, সি.; ইয়িন, বি.; লি, ওয়াই.; ডুয়ান, সি.; লিয়াং, এল.; গুও, এইচ.; Xie, Q. তামাকের মধ্যে SARS-CoV নিউক্লিওক্যাপসিড প্রোটিনের প্রকাশ এবং ইঁদুরের মধ্যে এর ইমিউনোজেনিসিটি। ভ্যাকসিন 2009, 27, 5001-5007। [ক্রসরেফ]

30. ইয়াসুই, এফ.; কাই, সি.; কিতাবটাকে, এম.; Inoue, S.; ইয়োনেদা, এম.; ইয়োকোচি, এস.; কেস, আর.; সেকিগুচি, এস.; মরিতা, কে.; হিশিমা, টি.; ইত্যাদি গুরুতর তীব্র শ্বাসযন্ত্রের সিনড্রোম (SARS)-সংশ্লিষ্ট করোনাভাইরাস (SARS-CoV) নিউক্লিওক্যাপসিড প্রোটিনের সাথে পূর্বে টিকাদান SARS-CoV দ্বারা সংক্রামিত ইঁদুরগুলিতে গুরুতর নিউমোনিয়া সৃষ্টি করে। জে. ইমিউনল। 2008, 181, 6337-6348। [ক্রসরেফ]

31. ডেমিং, ডি.; শেহান, টি.; হেইস, এম.; ইয়ুন্ট, বি.; ডেভিস, এন.; সিমস, এ.; সুথার, এম.; হারকেমা, জে.; হুইটমোর, এ.; আচার, আর.; ইত্যাদি সেনসেন্ট ইঁদুরে ভ্যাকসিনের কার্যকারিতা রিকম্বিন্যান্ট SARS-CoV বহনকারী মহামারী এবং জুনোটিক স্পাইক ভেরিয়েন্টের সাথে চ্যালেঞ্জ করা হয়েছে। পিএলওএস মেড। 2006, 3, e525। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

32. ওয়েসেলিং, জেজি; গোডেকে, জিজে; Schijns, VE; Prevec, L.; গ্রাহাম, এফ.; হরজিনেক, এমসি; রোটিয়ার, পিজে মাউস হেপাটাইটিস ভাইরাস স্পাইক এবং অ্যাডেনোভাইরাস ভেক্টর দ্বারা প্রকাশিত নিউক্লিওক্যাপসিড প্রোটিন একটি প্রাণঘাতী সংক্রমণ থেকে ইঁদুরকে রক্ষা করে। জে. জেনারেল ভাইরল। 1993, 74, 2061-2069। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

33. কিম, TW; লি, জেএইচ; Hung, CF; পেং, এস.; রোডেন, আর.; ওয়াং, এমসি; ভিসিডি, আর.; Tsai, YC; তিনি, এল.; চেন, পিজে; ইত্যাদি গুরুতর তীব্র শ্বাসযন্ত্রের সিন্ড্রোম করোনাভাইরাসের নিউক্লিওক্যাপসিড প্রোটিনকে লক্ষ্য করে ডিএনএ ভ্যাকসিন তৈরি এবং বৈশিষ্ট্য। জে. ভিরোল। 2004, 78, 4638-4645। [ক্রসরেফ] [পাবমেড]

34. লে বার্ট, এন.; ট্যান, এটি; কুনাসেগারন, কে.; Tham, CYL; হাফেজী, এম.; চিয়া, এ.; Chng, MHY; লিন, এম.; ট্যান, এন.; লিনস্টার, এম.; ইত্যাদি SARS-CoV-2-COVID-19 এবং SARS-এর ক্ষেত্রে নির্দিষ্ট T কোষের অনাক্রম্যতা এবং অসংক্রমিত নিয়ন্ত্রণ। প্রকৃতি 2020, 584, 457–462। [ক্রসরেফ]