বিমূর্ত

ত্বকের হাইপারপিগমেন্টেশন ডিজঅর্ডার, যেমন মেলাসমা, ফ্রেকলস এবং পোস্ট-ইনফ্ল্যামেটরি হাইপারপিগমেন্টেশন (PIH), ঘন ঘন আল্ট্রাভায়োলেট-বি (UVB) বিকিরণ, ত্বকে আঘাত এবং স্থানীয় ত্বকের প্রদাহ দ্বারা ট্রিগার হয়। অতিরিক্ত মেলানিন জমা ত্বকের চেহারা নষ্ট করে এবং রোগীর মানসিক সুস্থতাকে নেতিবাচকভাবে প্রভাবিত করে। প্রচলিত ডিপিগমেন্টিং এজেন্ট যেমন হাইড্রোকুইনোন প্রাথমিকভাবে একক-মোড ক্রিয়া সহ টাইরোসিনেজকে লক্ষ্য করে এবং ভালভাবে নথিভুক্ত নিরাপত্তা ঝুঁকি বহন করে। মাল্টি-টার্গেট প্রাকৃতিক বোটানিকাল মিশ্রণগুলি আধুনিক কার্যকরী প্রসাধনী গঠনের জন্য প্রতিশ্রুতিশীল বিকল্প হিসাবে আবির্ভূত হয়েছে।

ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড (PhGs) হল সিগনেচার বায়োঅ্যাকটিভ উপাদান যা থেকে বিচ্ছিন্নCistanche deserticola, শুষ্ক মরুভূমি অঞ্চলের একটি সুপরিচিত ঔষধি গাছ। গ্ল্যাব্রিডিন (গ্লা), একটি প্রিনিলেটেড আইসোফ্লাভান থেকে বের করা হয়Glycyrrhiza glabra, একটি উচ্চ-ক্ষমতার ত্বক-উজ্জ্বল প্রাকৃতিক যৌগ হিসাবে ব্যাপকভাবে স্বীকৃত। এই গবেষণাটি নিয়মিতভাবে গ্ল্যাব্রিডিনের সাথে মিলিত PhG-এর সিনার্জস্টিক অ্যান্টি-হাইপারপিগমেন্টেশন কার্যকারিতা তদন্ত করেছে। প্রাথমিক ভর-অনুপাত স্ক্রীনিং-এর জন্য টাইরোসিনেজ ইনহিবিশন, DPPH এবং ABTS⁺ ফ্রি-র্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং পরীক্ষা সহ ইন-ভিট্রো বায়োকেমিক্যাল অ্যাসেস প্রয়োগ করা হয়েছিল। তিনটি সেলুলার মডেল আরও তৈরি করা হয়েছিল: UVB-বিকিরণিত B16F10 মাউস মেলানোমা সেল পিগমেন্টেশন মডেল; lipopolysaccharide (LPS)-উদ্দীপিত HaCaT কেরাটিনোসাইট প্রদাহজনক মডেল; AAPH-প্ররোচিত HaCaT অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস মডেল। আন্তঃকোষীয় টাইরোসিনেজ কার্যকলাপ, মেলানিন সামগ্রী, প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন রিলিজ (IL-6, TNF-), সুপারঅক্সাইড ডিসম্যুটেজ (SOD) এবং ক্যাটালেস (CAT) এনজাইম কার্যকলাপের পরিমাপ করা হয়েছে। কম্বিনেশন-ইনডেক্স (CI) গণনাটি দুটি বোটানিক্যাল নির্যাসের মধ্যে সিনেরজিস্টিক মিথস্ক্রিয়া পরিমাণগতভাবে সনাক্ত করার জন্য প্রয়োগ করা হয়েছিল।

পরীক্ষিত অনুপাতের মধ্যে, ভর অনুপাত m(PhGs):m(Gla)=1:1, 5:1 এবং 10:1 বিশিষ্ট টাইরোসিনেজ-দমনকারী এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সমন্বয় প্রদর্শন করেছে। pH 6.8 ফসফেট-বাফারযুক্ত স্যালাইনে (PBS) 0.4 g/L মোট ঘনত্বে, টাইরোসিনেজ প্রতিরোধের হার 94.37% (1:1), 92.93% (5:1), এবং 88.06% (10:1) এ পৌঁছেছে। অনুরূপ DPPH র্যাডিকাল-স্ক্যাভেঞ্জিং শতাংশ ছিল 89.44%, 88.72%, 88.10%; ABTS⁺ cation র্যাডিকাল-স্ক্যাভেঞ্জিং ক্ষমতা 100.13 %, 100.01 %, 99.87 % অর্জন করেছে৷ কার্যক্ষম ঘনত্ব 25 ug/mL, তিনটি যৌগ সূত্র B16F10 এবং HaCaT সেল লাইনের দিকে কোন উল্লেখযোগ্য সাইটোটক্সিসিটি প্রদর্শন করেনি। 1:1 মিশ্রিত গোষ্ঠীটি উচ্চতর ব্যাপক কার্যকারিতা তৈরি করেছে: অবশিষ্ট অন্তঃকোষীয় টাইরোসিনেজ কার্যকলাপ 23.80% এ নেমে এসেছে, আপেক্ষিক মেলানিন সামগ্রী 30.90% এ কমেছে। অধিকন্তু, PhGs/Gla (1:1) IL-6 এবং TNF-ক্ষরণের উপর সবচেয়ে শক্তিশালী দমন করেছে এবং SOD এবং CAT অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইম কার্যকলাপ সর্বাধিক পুনরুদ্ধার করেছে। পরীক্ষামূলক ফলাফল নিশ্চিত করেছে যে গ্ল্যাব্রিডিনের সাথে যুক্ত PhGগুলি ট্রিপল পাথওয়ের মাধ্যমে সিনারজিস্টিক অ্যান্টি-হাইপারপিগমেন্টেশন ফলাফল অর্জন করে: মেলানিন জৈব সংশ্লেষণকে বাধা দেয়, ত্বকের প্রদাহ প্রশমিত করে এবং অক্সিডেটিভ স্ট্রেস প্রতিরোধ করে। 1:1 ভর অনুপাত সর্বোত্তম সমন্বিত জৈবিক কর্মক্ষমতা প্রদান করে। এই গবেষণার প্রয়োগের সমর্থনকারী পরীক্ষামূলক প্রমাণ সরবরাহ করেসিস্তানচেফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডস-গ্লাব্রিডিন পরিষ্কার-সৌন্দর্য, উদ্ভিদ-উত্পাদিত ঝকঝকে ত্বকের যত্নের কাঁচা-মালের বিকাশে যৌগিক উপকরণ।

কীওয়ার্ড: Cistanche deserticolaphenylethanoid glycosides; গ্ল্যাব্রিডিন; synergistic প্রভাব; অ্যান্টি-হাইপারপিগমেন্টেশন; অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট; বিরোধী প্রদাহ; প্রসাধনী বোটানিকাল কাঁচামাল

1. ভূমিকা

এপিডার্মাল স্তরগুলিতে অত্যধিক মেলানিন জমা হওয়ার ফলে মেলাসমা, এফিলাইডস এবং পোস্ট-ইনফ্ল্যামেটরি হাইপারপিগমেন্টেশন (PIH) Google এর সহ ভিন্ন ভিন্ন ত্বকের পিগমেন্টেশন ফেনোটাইপ হয়। UVB অতিবেগুনী বিকিরণ প্রাথমিক পরিবেশগত ট্রিগার প্রতিনিধিত্ব করে; ত্বকের ট্রমা এবং দীর্ঘস্থায়ী স্থানীয় প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া পিগমেন্টারি ডিসঅর্ডারকে আরও প্রসারিত করে। এটি সুপ্রতিষ্ঠিত যে এপিডার্মাল কেরাটিনোসাইট এবং মেলানোসাইটের মধ্যে ক্রস-টক রঙ্গক অগ্রগতির উপর আধিপত্য বিস্তার করে। বাহ্যিক উদ্দীপনার পরে, সক্রিয় কেরাটিনোসাইটগুলি প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি (ROS) এবং প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি মধ্যস্থতাকারীদের মুক্ত করে। এই সিগন্যালিং অণুগুলি ছড়িয়ে পড়ে এবং পার্শ্ববর্তী মেলানোসাইটগুলিতে কাজ করে, টাইরোসিনেজ অনুঘটক কার্যকলাপকে নিয়ন্ত্রণ করে, মেলানিন সংশ্লেষণকে ত্বরান্বিত করে এবং কেরাটিনোসাইটের দিকে মেলানোসোম পরিবহনের প্রচার করে, অবশেষে ত্বকের পৃষ্ঠে দৃশ্যমান পিগমেন্টেড ক্ষত তৈরি করে। তদনুসারে, হাইপারপিগমেন্টেশনের জন্য কার্যকর হস্তক্ষেপ কেবল টাইরোসিনেজ প্রতিরোধের উপর ফোকাস করতে পারে না। মাল্টি-মোডাল থেরাপিউটিক কৌশলগুলি একই সাথে মেলানোজেনেসিস ইনহিবিশন, অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি হস্তক্ষেপ এবং অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস নিরপেক্ষকরণকে কভার করতে হবে।

হাইড্রোকুইননের মতো ঐতিহ্যগত কৃত্রিম ত্বক-আলোককরণ সক্রিয় উপাদানগুলি প্রধানত সরাসরি টাইরোসিনেজ দমনের মাধ্যমে ডিপিগমেন্টিং কার্যকারিতা প্রদান করে। তা সত্ত্বেও, একক-টার্গেট মেকানিজম ব্যবহারিক কর্মক্ষমতা সীমিত করে, এবং দীর্ঘমেয়াদী টপিকাল হাইড্রোকুইনোন প্রয়োগ ত্বকের জ্বালা, যোগাযোগের ডার্মাটাইটিস এবং সম্ভাব্য নিরাপত্তার ঝুঁকি সৃষ্টি করতে পারে, প্রসাধনী-গ্রেড ব্যবহারের সুযোগকে সীমাবদ্ধ করে। প্রাকৃতিক উদ্ভিদ থেকে প্রাপ্ত জৈব উপাদানগুলি কসমেটিক ফর্মুলেটর এবং ভোক্তাদের তাদের হালকা প্রোফাইল এবং বহু-পাথ ফার্মাকোলজিক্যাল ক্রিয়াকলাপের জন্য ক্রমবর্ধমান আগ্রহ আকর্ষণ করে। বিভিন্ন বোটানিক্যাল নির্যাসের যৌগিক মিশ্রণগুলি কার্যকর ডোজ প্রয়োজনীয়তা কমিয়ে সামগ্রিক কার্যকারিতা বাড়ায়, সিনারজিস্টিক জৈবিক প্রভাব তৈরি করতে সক্ষম, যা অ্যান্টি-পিগমেন্টেশন কসমেটিক-কাঁচা-মাল গবেষণার জন্য নতুন প্রযুক্তিগত দিকনির্দেশ খোলে Google

Cistanche deserticola, সাধারণত "মরুভূমি জিনসেং" নামে পরিচিত, ঐতিহ্যবাহী চীনা ওষুধের একটি ক্লাসিক টনিক ভেষজ। আধুনিক ফাইটোকেমিক্যাল তদন্তগুলি প্রকাশ করে যে ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইড (পিএইচজি) এর প্রধান ফার্মাকোলজিক্যাল-সক্রিয় ভগ্নাংশ গঠন করে, ইচিনাকোসাইড এবং অ্যাক্টিওসাইড প্রতিনিধি যৌগ হিসাবে বৈশিষ্ট্যযুক্ত। প্রকাশিত ফার্মাকোলজিকাল গবেষণা দেখায় যে PhGs শক্তিশালী অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতা, প্রদাহ বিরোধী জৈব সক্রিয়তা এবং মাঝারি টাইরোসিনেজ-নিরোধক সম্ভাবনার অধিকারী, যা চর্মরোগ সংক্রান্ত ত্বকের যত্ন সামগ্রীতে সম্ভাব্য প্রয়োগের সম্ভাবনাকে বোঝায়। গ্ল্যাব্রিডিন একটি বৈশিষ্ট্যযুক্ত আইসোফ্ল্যাভোনয়েড যৌগ যা থেকে বিচ্ছিন্নGlycyrrhiza glabraরুট, প্রসাধনী শিল্পে "সাদা সোনা" হিসাবে সুপরিচিত। এটি শক্তিশালীভাবে মেলানোজেনেসিসকে দমন করে এবং একই সাথে ত্বকের প্রদাহজনক ক্যাসকেডগুলিকে সংশোধন করে। ঐতিহ্যগত-চিকিৎসা তাত্ত্বিক দৃষ্টিকোণ থেকে,সিস্তানচেকিডনির সারকে পুষ্ট করে এবং ইয়াংকে টোনিফাই করে, যখন লিকোরিস শিকড় প্লীহা এবং পরিষ্কার তাপ-টক্সিনকে টোনিফাই করে। সম্মিলিত ব্যবহার ভেষজ চর্মরোগ সংক্রান্ত থেরাপির যৌগিক সামঞ্জস্য নীতির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ।

মেকানিস্টিক হাইপোথিসিস ধারণ করে যে PhGs-গ্লাব্রিডিন সংমিশ্রণ মাল্টি-টার্গেট এবং মাল্টি-পাথ মোডের মাধ্যমে ত্বকের পিগমেন্টেশন নিয়ন্ত্রণ করতে পারে: মেলানিন জেনারেশনের উত্স বন্ধ করতে যৌথভাবে টাইরোসিনেজ অনুঘটক ফাংশনকে বাধা দেয়; প্রতিক্রিয়াশীল-অক্সিজেন-প্রজাতির বিল্ডআপ নিবারণ; প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি-ফ্যাক্টর ওভার-রিলিজকে রোধ করা, যাতে মেলানোসাইট অ্যাক্টিভেশনের জন্য ROS- এবং সাইটোকাইন-মধ্যস্থ সংকেত পরিবর্ধনকে বাধা দেয়। আজ অবধি, কয়েকটি গবেষণাপত্র এই বাইনারি মিশ্রণের জন্য সিনারজিস্টিক অ্যান্টি-হাইপারপিগমেন্টেশন মূল্যায়ন পদ্ধতিগতভাবে রিপোর্ট করেছে।

এই কাগজের মধ্যে সম্মিলিত জৈবিক প্রভাব অন্বেষণ করতে সেট আউটসিস্তানচেphenylethanoid glycosides এবং glabridin. জৈব রাসায়নিক ইন-ভিট্রো এনজাইম-নিরোধ এবং র্যাডিকাল-স্ক্যাভেঞ্জিং স্ক্রীনিং পরীক্ষাগুলি প্রথমে প্রয়োগ করা হয়েছিল। বহুমাত্রিক কার্যকারিতা মূল্যায়নের জন্য রঙ্গক জমা, ত্বকের প্রদাহ এবং অক্সিডেটিভ ক্ষতির অনুকরণকারী তিনটি প্রতিনিধি সেল মডেল তৈরি করা হয়েছিল। সমন্বয়-সূচক পদ্ধতি প্রয়োগ করা হয়েছিল সমন্বয় বা বৈরিতা মিথস্ক্রিয়া পরিমাপ করতে। আমাদের লক্ষ্য ছিল সর্বোত্তম যৌগিক ভরের অনুপাত নির্ধারণ করা, ট্রিপল-মোড কার্যকরী প্রক্রিয়া স্পষ্ট করা এবং প্রাকৃতিক সিনারজিস্টিক ত্বক-উজ্জ্বল কসমেটিক কাঁচামালের বিকাশের জন্য পরীক্ষামূলক ডেটা সহায়তা প্রদান করা।

2. উপকরণ এবং পদ্ধতি

2.1 রিএজেন্ট, সেল স্ট্রেন এবং ল্যাবরেটরি যন্ত্র

B16F10 মাউস মেলানোমা সেল লাইন (STCC20013G‑1) Saierbio Co., Ltd থেকে কেনা হয়েছিল। অমর মানব এপিডার্মাল কেরাটিনোসাইট HaCaT (iCell‑h066) iCell Bioscience Inc থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল।সিস্তানচেফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডস (PhGs) এবং গ্ল্যাব্রিডিন (Gla) বাণিজ্যিকভাবে Shaanxi Tianxingjian Biochemical Technology Co., Ltd. মাশরুম টাইরোসিনেজ, আরবুটিন, L‑tyrosine, L‑DOPA, DPPH, ABTS ডায়ামোনিয়াম লবণ, LbPHA, সিপিএইচ-এসিড, এলবিপিএইচ-মিন, এলবিপিএইচ, Triton X-100, DMSO এবং অন্যান্য বিশ্লেষণাত্মক-গ্রেড রাসায়নিক বিকারক মূলধারার জৈব রাসায়নিক বিকারক বিক্রেতাদের কাছ থেকে উৎসারিত হয়েছিল। কোষ-সংস্কৃতির ভোগ্য সামগ্রীর মধ্যে রয়েছে উচ্চ-গ্লুকোজ ডিএমইএম মাধ্যম, ভ্রূণের বোভাইন সিরাম, পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিন মিশ্রিত দ্রবণ। মানবিক IL-6, TNF-, CAT এবং মোট-SOD সনাক্তকরণ কিটগুলিকে লক্ষ্য করে ELISA অ্যাস কিটগুলি সংশ্লিষ্ট বায়োটেক নির্মাতাদের কাছ থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল৷

মূল পরীক্ষাগারের সরঞ্জামগুলিতে মাল্টিস্কান এফসি পূর্ণ-তরঙ্গদৈর্ঘ্য মাইক্রোপ্লেট রিডার, হেরাসেল 371 CO₂ ইনকিউবেটর (থার্মো ফিশার); KQ-200VDB অতিস্বনক ক্লিনার; ধ্রুবক-তাপমাত্রা জল স্নান; DHG-9246A ব্লাস্ট-ড্রাইং ওভেন; KN4006B UVB অতিবেগুনী বিকিরণ যন্ত্র যার আউটপুট বিকিরণ 8 mW/cm²।

2.2 নমুনা সমাধান প্রস্তুতি

পিএইচজি এবং গ্ল্যাব্রিডিনের স্টক সলিউশনগুলি পিএইচ 6.8 পিবিএস বাফার বা 50% (v/v) ইথানল-জল দ্রাবক তৈরি করা হয়েছিল, সিরিয়ালভাবে কার্যকরী ঘনত্বে মিশ্রিত করা হয়েছিল: 0.001 g/L, 0.005 g/L, 0.025 g/L, 0.1 g/L, 0.1 g/L, 0.1 g/L. 1.2 g/L, 1.6 g/L, 2.0 g/L নয়টি যৌগিক গোষ্ঠীকে 0.4 g/L এর নির্দিষ্ট মোট ভর ঘনত্বে কনফিগার করা হয়েছিল m(PhGs):m(Gla)=40:1, 20:1, 10:1, 5:1, 1:1, 1:5, 1:10, 1:20, 1:40, PhGs:1:40, 1:40/1 ডিজাইন PhGs/Gla থেকে (1:40)।

সেলুলার-পরীক্ষামূলক অ্যাসেসের জন্য, পাউডার নমুনাগুলি সিরাম-মুক্ত DMEM মাধ্যমে দ্রবীভূত করা হয়েছিল যাতে কাজের-ঘনত্ব সমাধানগুলির সিরিজ প্রস্তুত করা হয়।

2.3 বায়োকেমিক্যাল ইন-ভিট্রো অ্যাসেস

2.3.1 টাইরোসিনেজ ইনহিবিশন অ্যাস

50 μL নমুনা সমাধান, 50 μL pH 6.8 PBS এবং 50 μL 1 g/LL‑টাইরোসিন সাবস্ট্রেট দ্রবণ ক্রমানুসারে 96-ওয়েল মাইক্রোপ্লেটের প্রতিটি কূপে যোগ করা হয়েছিল। প্রি-ইনকিউবেশন 10 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রী ওয়াটার বাথের নিচে চলে। পরবর্তীকালে, 50 μL 0.4 g/L মাশরুম টাইরোসিনেজ দ্রবণ (200 U/mL) সম্পূরক করা হয়েছিল, এবং 10 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রিতে ইনকিউবেশন চলতে থাকে। আরবুটিন ইতিবাচক-নিয়ন্ত্রণ পদার্থ হিসাবে কাজ করে, ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ গৃহীত pH 6.8 PBS বাফার। শোষণের মান মাইক্রোপ্লেট রিডারে 490 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যের অধীনে পরিমাপ করা হয়েছিল। টাইরোসিনেজ-নিরোধ-হার গণনা সূত্র:

টাইরোসিনেজ প্রতিরোধের হার (%)={1 − [(A_reaction − A_reaction‑control) / (A_blank − A_blank‑control)]} × 100 %

কোথায়: A_reaction: নমুনা, সাবস্ট্রেট, পিবিএস এবং টাইরোসিনেজ সহ শোষণ; A_reaction-নিয়ন্ত্রণ: এনজাইম ছাড়া নমুনা, সাবস্ট্রেট এবং PBS শোষণ; A_blank: সাবস্ট্রেট, পিবিএস এবং টাইরোসিনেজের শোষণ; A_blank-নিয়ন্ত্রণ: শুধুমাত্র সাবস্ট্রেট এবং PBS বাফারের জন্য শোষণ।

2.3.2 DPPH ফ্রি-র্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং নির্ধারণ

DPPH পাউডার 0.2 mmol/L DPPH কার্যকারী তরল প্রস্তুত করতে নির্জল ইথানলে দ্রবীভূত করা হয়েছিল। পিএইচজি, গ্ল্যাব্রিডিন এবং ভিটামিন সি রেফারেন্স পদার্থ 50% ইথানল-জল দ্রাবক ঘনত্ব-গ্রেডিয়েন্ট স্টক সমাধান তৈরি করতে দ্রবীভূত হয়েছিল। নয়টি ভর অনুপাত সহ বাইনারি-মিশ্রণের নমুনাগুলি সমানভাবে মিশ্রিত করা হয়েছিল। প্রতিটি ভালভাবে প্রাপ্ত 100 μL নমুনা তরল প্লাস 100 μL DPPH কার্যকরী সমাধান। পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মেশানোর পরে, মাইক্রোপ্লেটকে 30 মিনিটের জন্য পরিবেষ্টিত তাপমাত্রায় আলো থেকে দূরে রাখা হয়েছিল। শোষণ রিডিং λ = 517 nm এ রেকর্ড করা হয়েছিল। ভিটামিন সি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে কাজ করে, প্রতিটি পরীক্ষামূলক গ্রুপ 3টি জৈবিক প্রতিলিপিগুলির জন্য পুনরাবৃত্তি করে। DPPH- স্ক্যাভেঞ্জিং-রেট সূত্র:

DPPH স্ক্যাভেঞ্জিং রেট (%)={1 − [(A₁ − A₃) / A₂]} × 100 %

A₁: নমুনার শোষণ + DPPH কার্যকারী তরল; A₂: 50% ইথানল + DPPH কার্যকারী তরল শোষণ; A₃: 50% ইথানল দ্রাবকের সাথে মিশ্রিত নমুনা দ্রবণের শোষণ।

2.3.3 ABTS⁺ Cation র্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং অ্যাসে

7.4 mmol/L ABTS স্টক দ্রবণ এবং 2.6 mmol/L পটাসিয়াম পারসালফেট দ্রবণ সমানভাবে মিশ্রিত করা হয়েছিল, স্থিতিশীল ABTS⁺ কার্যকারী বিকারক তৈরি করতে অন্ধকার পরিবেশে 12 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল। নমুনা সমাধানগুলি অনুচ্ছেদে বর্ণিত প্রোটোকলগুলি অনুসরণ করে কনফিগার করা হয়েছিল 2.3.2. 40 μL নমুনা সমাধান এবং 160 μL ABTS⁺ কার্যকারী তরল মাইক্রোপ্লেট কূপে পাইপেটেড করা হয়েছিল৷ ঘরের তাপমাত্রায় 6 মিনিটের জন্য হালকা-ঢালযুক্ত ইনকিউবেশনের পরে, শোষণ 734 এনএম পরিমাপ করা হয়েছিল। ABTS⁺ র‌্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং-রেট সূত্র:

ABTS⁺ স্ক্যাভেঞ্জিং রেট (%)={1 − [(A₁ − A₃) / A₂]} × 100 %

A₁: নমুনা সমাধানের শোষণ প্লাস ABTS⁺ কার্যকরী সমাধান; A₂: ABTS⁺ ওয়ার্কিং রিএজেন্টের সাথে মিশ্রিত ডিওনাইজড জলের শোষণ; A₃: বিশুদ্ধ ডিওনাইজড-জল দ্রাবকের সাথে মিশ্রিত নমুনা দ্রবণের জন্য শোষণের মান।

2.4 কোষ-সংস্কৃতি প্রক্রিয়া

B16F10 মেলানোমা কোষ এবং HaCaT কেরাটিনোসাইটগুলিকে 10% ভ্রূণ-বোভাইন সিরাম এবং 1% পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিনের সাথে সম্পূরক উচ্চ-গ্লুকোজ ডিএমইএম মিডিয়ামে সংস্কৃত করা হয়েছিল। ইনকিউবেটর পরামিতি: 37 ডিগ্রী, 5% ভগ্নাংশ CO₂, আপেক্ষিক আর্দ্রতা 70%। সেল পাসিং এবং মাঝারি রিফ্রেশমেন্ট উল্টানো অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপের অধীনে পর্যবেক্ষণ করা সেলুলার-বৃদ্ধি ঘনত্ব অনুসারে সঞ্চালিত হয়েছিল। লগারিদমিক-বৃদ্ধি পর্বের কোষগুলি পরবর্তী বীজ বপনের জন্য 96-ওয়েল কালচার প্লেটে সংগ্রহ করা হয়েছিল।

2.5 তিনটি সেলুলার কার্যকরী মডেল স্থাপন

2.5.1 UVB-প্ররোচিত B16F10 পিগমেন্টেশন মডেল

অনুরূপ নমুনা মাধ্যমের সাথে 1 ঘন্টা প্রাক-চিকিত্সা করার পরে, কোষ-স্তর পৃষ্ঠটি পিবিএস বাফার দিয়ে আচ্ছাদিত ছিল। UVB বিকিরণের তীব্রতা 8 mW/cm², বিকিরণের দূরত্ব 3 সেমি, বিকিরণের সময়কাল 110 সেকেন্ড হিসাবে সেট করা হয়েছিল। সাধারণ গোষ্ঠী UVB বিকিরণ হস্তক্ষেপ ছাড়া অভিন্ন মাধ্যম পেয়েছে। মডেল কন্ট্রোল গ্রুপ নমুনা পরিপূরক ছাড়াই সমান-ডোজ ইউভিবি এক্সপোজার দ্বারা অনুসরণ করে পিবিএস প্রিট্রিটমেন্ট পেয়েছে।

2.5.2 LPS-মধ্যস্থ HaCaT প্রদাহজনক-অ্যাক্টিভেশন মডেল

HaCaT কোষগুলি 24 ঘন্টার জন্য টেস্টিং-নমুনা DMEM মাধ্যমের সাথে প্রাক-ইনকিউবেটেড ছিল। এর পরে, 20 ug/mL এর চূড়ান্ত ঘনত্বে পৌঁছানোর জন্য লাইপোপলিস্যাকারাইড এলপিএস দ্রবণ সম্পূরক করা হয়েছিল এবং সহ-সংস্কৃতি আরও 24 ঘন্টা স্থায়ী হয়েছিল। নমুনা প্রাক-চিকিৎসা ছাড়াই মডেল-গ্রুপ সেলগুলিকে এলপিএস দ্বারা চ্যালেঞ্জ করা হয়েছিল। সাধারণ গোষ্ঠী সাধারণ সম্পূর্ণ-মাঝারি চাষ বজায় রাখে।

2.5.3 AAPH- ট্রিগার করা HaCaT অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস মডেল

কোষগুলি 24-ঘন্টা নমুনা প্রাক-ইনকিউবেশন পেয়েছে। AAPH রিএজেন্ট সংস্কৃতি মাধ্যমে যোগ করা হয়েছিল, চূড়ান্ত ঘনত্ব 25 mmol/L, অবিরত 24‑ঘন্টা ইনকিউবেশন। মডেল-কন্ট্রোল গ্রুপ নমুনা হস্তক্ষেপ ছাড়াই AAPH দ্বারা উদ্দীপিত হয়েছিল। সাধারণ-নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ নিয়মিত মাঝারি অবস্থার অধীনে বৃদ্ধি পেয়েছে।

সমস্ত সেলুলার-মডেল গ্রুপে তিনটি প্রযুক্তিগত প্রতিলিপি কূপ রয়েছে।

2.6 সাইটোটক্সিসিটি পরীক্ষা (CCK-8 পদ্ধতি)

সেল সাসপেনশন ঘনত্ব 1 × 10⁴ কোষ/mL এর সাথে সামঞ্জস্য করা হয়েছিল এবং 96‑ওয়েল মাইক্রোপ্লেটে টিকা দেওয়া হয়েছিল। কোষ আনুগত্যের পরে, গ্রেডিয়েন্ট-ঘনত্বের নমুনা মাধ্যমটি পরিচালিত হয়েছিল, এবং 24 ঘন্টা, 48 ঘন্টা, 72 ঘন্টা ধরে ইনকিউবেশন অব্যাহত ছিল। CCK-8 শনাক্তকারী বিকারক নতুন DMEM মাধ্যমের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছে (ভলিউম ভগ্নাংশ 10%) পুরানো মাধ্যম প্রতিস্থাপিত হয়েছে, ইনকিউবেশন 60 মিনিটের জন্য এগিয়ে গেছে। মাইক্রোপ্লেট রিডার 450 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে শোষণ পরিমাপ করে। আপেক্ষিক কোষ-ব্যবহারযোগ্যতা শতাংশের জন্য গণনা সূত্র:

কোষের কার্যক্ষমতা (%)=[(A_sample − A_blank) / (A_0 − A_blank)] × 100%

A_sample: ভাল ধারণকারী কোষ, CCK-8 বিকারক এবং নমুনা মাধ্যম শোষণ; A_blank: কালচার মিডিয়াম প্লাস CCK-8 বীজযুক্ত কোষ ছাড়া শোষণ; A_0: কোষের শোষণ এবং CCK-8 রিএজেন্ট ফাঁকা মাধ্যম (কোন পরীক্ষার নমুনা নেই)।

2.7 অন্তঃকোষীয় টাইরোসিনেজ-ক্রিয়াকলাপ পরিমাণ নির্ধারণ

48 ঘন্টা মডেল-প্রতিষ্ঠা প্রক্রিয়াকরণের পরে, সেল সুপারনাট্যান্ট বাতিল করা হয়েছিল। সেল মনোলেয়ারকে পিএইচ 7.4 পিবিএস. 50 μL 1 % ট্রাইটন এক্স-100 লাইসিস দ্রবণ প্রতি কূপ দিয়ে দুবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। মাইক্রোপ্লেট −80 ডিগ্রি রেফ্রিজারেটরে 30 মিনিটের জন্য হিমায়িত করা হয়েছিল, তারপর সম্পূর্ণ কোষ-ঝিল্লি ফেটে যাওয়ার জন্য কক্ষ-তাপমাত্রার অবস্থায় গলানো হয়েছিল। 37 ডিগ্রিতে প্রি-ওয়ার্মিং চিকিত্সা 5 মিনিট স্থায়ী হয়। L‑DOPA সাবস্ট্রেট (10 mmol/L, 10 μL) সম্পূরক ছিল। মাইক্রোপ্লেটটি CO₂ ইনকিউবেটরের ভিতরে 1 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেট করা হয়েছিল। আপেক্ষিক অন্তঃকোষীয় টাইরোসিনেজ-ক্রিয়াকলাপ গণনা করার জন্য 475 এনএম-এ শোষণ সনাক্ত করা হয়েছিল।

2.8 অন্তঃকোষীয় মেলানিন-সামগ্রী পরিমাপ

মেলানিন-সামগ্রী সনাক্তকরণের জন্য NaOH ক্লিভেজ পদ্ধতি গৃহীত হয়েছিল। 72-ঘন্টা মডেল-হস্তক্ষেপের পরে, কালচার সুপারনাট্যান্ট সরানো হয়েছিল, পিবিএস বাফার ব্যবহার করে কোষ দুবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল. 100 μL 1 mol/L NaOH জলীয় দ্রবণ যাতে 10% DMSO যুক্ত করা হয়েছিল৷ সম্পূর্ণ মেলানিন দ্রবীভূত করার জন্য মাইক্রোপ্লেটটি 60 মিনিটের জন্য 90 ডিগ্রী ওভেনের ভিতরে সিদ্ধ করা হয়েছিল। আপেক্ষিক মেলানিন-সামগ্রীর শতাংশ গণনা করার জন্য শোষণ 490 এনএম পড়া হয়েছিল।

2.9 ইনফ্ল্যামেটরি-ফ্যাক্টর এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-এনজাইম সূচক সনাক্তকরণ

48 ঘন্টা মডেল-প্রসেসিংয়ের পরে, HaCaT কোষগুলিকে স্ক্র্যাপ করা হয়েছিল এবং সংগ্রহ করা হয়েছিল, সেল সুপারনাট্যান্ট ফসল কাটার জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। বাণিজ্যিক ELISA কিটগুলি IL-6 এবং TNF-প্রদাহজনক-সাইটোকাইন ঘনত্বের পরিমাণগত নির্ধারণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-এনজাইম পরীক্ষার জন্য, কোষের খণ্ডন অর্জনের জন্য কোষের বৃক্ষগুলিকে বারবার ফ্রিজ-থাও চক্রের শিকার করা হয়েছিল। সেন্ট্রিফিউগেশন অবস্থা: 12 000 r/min, 4 ডিগ্রি , 10 মিনিট। কিট অপারেশনাল স্পেসিফিকেশন অনুযায়ী SOD প্রাণশক্তি এবং CAT এনজাইম বিষয়বস্তু পরীক্ষা করার জন্য সুপারনাট্যান্ট ভগ্নাংশ সংগ্রহ করা হয়েছিল।

2.10 কম্বিনেশন-ইনডেক্স (CI) বিশ্লেষণ

চৌ-তালালে কম্বিনেশন-ইনডেক্স (সিআই) অ্যালগরিদম টাইরোসিনেজ-নিরোধ এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট অ্যাসেসের মধ্যে পিএইচজি এবং গ্ল্যাব্রিডিনের মধ্যে সিনারজিস্টিক/অ্যাডিটিভ/বিরোধী মিথস্ক্রিয়া বিচার করার জন্য প্রয়োগ করা হয়েছিল:

CI=D₁/DX₁ + D₂/DX₂

D₁ and D₂: individual mass‑concentration of PhGs and glabridin inside compound solution, when reaching fixed biological‑effect level X. DX₁ and DX₂: required mass‑concentration for single PhGs or glabridin to produce identical X‑level biological effect. CompuSyn software completed CI‑value computation. Evaluation criteria: CI >1 বিরোধী মিথস্ক্রিয়া প্রতিনিধিত্ব করে; CI ≈ 1 মানে সংযোজন প্রভাব; সি.আই< 1 indicates significant synergistic‑enhancement effect.

2.11 পরিসংখ্যান বিশ্লেষণ

পরীক্ষামূলক পরিমাপের ফলাফলগুলি গড় মান ± মান বিচ্যুতি (মান ± SD) হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল। গ্রাফপ্যাড প্রিজম 9.5.0 সফ্টওয়্যার পরিসংখ্যানগত গণনা সম্পাদন করেছে। মাল্টি-গ্রুপ তুলনার জন্য ভ্যারিয়েন্সের একমুখী বিশ্লেষণ (ANOVA) ব্যবহার করা হয়েছিল। পি-মান< 0.05 was regarded as statistically significant difference; P < 0.01 marked significant difference; P < 0.001 stood for extremely significant statistical difference.
 

3. ফলাফল এবং আলোচনা

3.1 ইন-ভিট্রো টাইরোসিনেজ-পিএইচজি, গ্ল্যাব্রিডিন এবং বাইনারি-মিশ্রণের নমুনার ইনহিবিটরি পারফরম্যান্স

Half‑inhibitory concentration IC₅₀ values for single‑component PhGs PBS solution, glabridin PBS solution and positive‑control arbutin were (2.192 ± 0.038) g/L, (1.376 ± 0.025) g/L and (0.101 ± 0.003) μg/mL respectively. In‑vitro tyrosinase‑suppressing potency sequence: arbutin > glabridin >পিএইচজি

যৌগিক PBS দ্রবণের জন্য মোট 0.4 g/L ঘনত্বে, PhGs/Gla (10:1), PhGs/Gla (5:1), PhGs/Gla (1:1) 88.06%, 92.93%, 94.37% টাইরোসিনেজ-নিরোধের হার প্রদান করে। 5:1 এবং 1:1 অনুপাত উভয়ই একক-কম্পোনেন্ট PhGs (36.92 %) এবং একক-কম্পোনেন্ট গ্ল্যাব্রিডিন (92.71 %) মোট ভর-ঘনত্বের সাথে মিলে যাওয়া প্রতিরোধ দক্ষতাকে অতিক্রম করেছে। 1:1 গ্রুপটি ইতিবাচক-নিয়ন্ত্রণ আরবুটিনের সাথে তুলনীয় প্রতিরোধের মাত্রা অর্জন করেছে। CI-মান গণনার ফলাফল অনুসারে: m(PhGs):m(Gla) 40:1 থেকে 1:1 পর্যন্ত CI তৈরি করেছে< 1, confirming obvious synergistic enhancement on tyrosinase‑suppression. Conversely, proportion series from 1:5 up to 1:40 gave CI >1, বিরোধী মিথস্ক্রিয়া উদ্ভাসিত।

ফেনোলিক হাইড্রক্সিল গ্রুপগুলি টাইরোসিনেজ-নিরোধক ক্ষমতার জন্য মূল কার্যকরী অংশ গঠন করে। PhGs-এ অর্থো-ডাইহাইড্রোক্সিফেনাইল স্ট্রাকচারাল টুকরো থাকে যা টাইরোসিনেজ অনুঘটক-সক্রিয় পকেটের মধ্যে তামার আয়নগুলিকে চেলেট করতে সক্ষম, প্রতিযোগিতামূলকভাবে সাবস্ট্রেট-এনজাইম বাঁধাইকে বাধা দেয়। গ্ল্যাব্রিডিন আইসোফ্লাভান কঙ্কাল তার বি-রিং-এ 2‑OH এবং 4‑OH গ্রুপ বহন করে, L‑tyrosine / L‑DOPA অ্যারোমেটিক হাইড্রোক্সিল-প্রতিস্থাপিত রিংয়ের সাথে সাদৃশ্যপূর্ণ, যা এনজাইম-অ্যাক্টিভ ডোমেনের প্রতিযোগিতামূলক দখলকে সক্ষম করে। যৌগিক মিশ্রণের পরে, ক্রমবর্ধমান ফেনোলিক-হাইড্রক্সিলের পরিমাণ বেড়ে যায়; ইতিমধ্যে, দুটি অণু টাইরোসিনেজ প্রোটিনের স্বতন্ত্র বাঁধাই সাইটগুলির সাথে সংযুক্ত হতে পারে, যৌথভাবে প্রতিরোধক দক্ষতা বৃদ্ধি করে।

3.2 পরীক্ষার নমুনাগুলির র্যাডিকাল-স্ক্যাভেঞ্জিং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ

DPPH‑scavenging IC₅₀ data: PhGs (21.135 ± 1.164 μg/mL), glabridin (55.537 ± 5.230 μg/mL), Vitamin C positive reference (2.852 ± 0.252 μg/mL). DPPH radical‑quenching‑ability ranking: Vitamin C > PhGs >গ্ল্যাব্রিডিন পিএইচজিগুলি প্রচুর পরিমাণে ক্যাফেওয়েল-গ্রুপ এবং 3,4-ডাইহাইড্রোক্সিফেনিলেথানল মোয়েটি, সমন্বিত ডাবল-বন্ড সিস্টেমগুলি ফ্রি-র্যাডিকাল-নিরপেক্ষ কর্মক্ষমতাকে শক্তিশালী করে। গ্ল্যাব্রিডিন ফ্ল্যাভোনয়েড ফ্রেমওয়ার্ক হাইড্রোক্সিল-গ্রুপ এবং বর্ধিত কনজুগেটেড-রিং আর্কিটেকচার সরবরাহ করে প্রতিক্রিয়াশীল-অক্সিজেন-প্রজাতি থেকে জোড়াবিহীন ইলেকট্রনকে স্থিতিশীল করার জন্য।

তিনটি প্রতিশ্রুতিশীল যৌগিক গ্রুপ PhGs/Gla (1:1), (5:1), (10:1) চমৎকার DPPH‑ এবং ABTS⁺‑স্কেভেঞ্জিং পারফরম্যান্স উপস্থাপন করেছে। ABTS⁺‑স্ক্যাভেঞ্জিং রেট প্রায় 100% এ পৌঁছেছে, যা ক্যাটেশন ফ্রি-র্যাডিকেলগুলির প্রায় সম্পূর্ণ নির্মূলের ইঙ্গিত দেয়। বিভিন্ন ভর অনুপাত দুটি অণুর মধ্যে বিভিন্ন আণবিক-মিথস্ক্রিয়া অবস্থা তৈরি করে, যা হাইড্রোক্সিল-গ্রুপ এক্সপোজার স্থিতিতে বৈষম্যের দিকে পরিচালিত করে এবং এর ফলে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সিনারজিস্টিক মাত্রার বিচ্যুতি ঘটে।

3.3 PhGs, Glabridin এবং ব্লেন্ডেড প্রস্তুতির সাইটোটক্সিসিটি মূল্যায়ন

CCK-8 সাইটোটক্সিসিটি পরীক্ষায় দেখা গেছে যে ঘনত্বের স্কোপের মধ্যে PhGs 62.5 ~ 500 ug/mL এবং glabridin 6.25 ~ 25 ug/mL B16F10 এবং HaCaT সেল লাইনের জন্য সুস্পষ্ট কার্যক্ষমতা-হ্রাস ট্রিগার করেনি। 25 ug/mL মোট ভর-ঘনত্ব অবস্থার অধীনে, তিনটি যৌগ-অনুপাত গ্রুপ PhGs/Gla (1:1, 5:1, 10:1) উচ্চ কোষের কার্যক্ষমতা বজায় রাখে, উভয় কোষের স্ট্রেইনের বিরুদ্ধে কোন সনাক্তযোগ্য সাইটোটক্সিক প্রভাব দেখায় না। ফলস্বরূপ, পরবর্তী সেলুলার-ফাংশন মূল্যায়নের জন্য 25 ug/mL নিরাপদ কাজের ঘনত্ব হিসাবে নির্বাচিত হয়েছিল। একক-এজেন্ট গোষ্ঠীর জন্য, PhG-এর কম/মাঝারি/উচ্চ ডোজ 125 ug/mL, 250 ug/mL, 500 ug/mL হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছিল; গ্ল্যাব্রিডিন কম/মাঝারি/উচ্চ ডোজ: 6.25 ug/mL, 12.5 ug/mL, 25 ug/mL।

3.4 UVB-উদ্দীপিত B16F10 কোষে অন্তঃকোষীয় টাইরোসিনেজ-ক্রিয়াকলাপ এবং মেলানিন-সামগ্রীর উপর প্রভাব

UVB বিকিরণ চিকিত্সার পরে, B16F10 মডেল-গ্রুপ আন্তঃকোষীয় টাইরোসিনেজ-অ্যাক্টিভিটি এবং মেলানিন জমাতে পরিসংখ্যানগতভাবে উল্লেখযোগ্য উচ্চতা প্রদর্শন করেছে (P< 0.001), verifying successful construction of cellular pigmentation‑model. Both single‑agent PhGs and glabridin reduced tyrosinase‑activity and melanin level following concentration‑dependent tendency.

25 ug/mL এর একীভূত মোট ঘনত্বে, যৌগিক গোষ্ঠীগুলি একক-উপাদানের প্রতিরূপের তুলনায় উচ্চতর জৈবিক ফলাফল প্রদর্শন করে। তিনটি অনুপাতের মধ্যে, PhGs/Gla (1:1) সর্বোত্তম প্রভাব প্রদান করেছে: অবশিষ্ট আন্তঃকোষীয় টাইরোসিনেজ-ক্রিয়াকলাপ মাত্র 23.80%, আপেক্ষিক মেলানিন-সামগ্রী 30.90% এ নেমে এসেছে। পরিসংখ্যানগত তুলনা 5:1 এবং 10:1 যৌগিক গোষ্ঠীর তুলনায় উল্লেখযোগ্য পার্থক্য প্রকাশ করেছে। 1:1 অনুপাত মেলানোসাইট কোষের অভ্যন্তরে মেলানিন জৈব সংশ্লেষণকে রোধ করার জন্য বিশিষ্ট সিনারজিস্টিক-এম্প্লিফিকেশন প্রকাশ করে।

UVB-বিকিরণ মেলানোসাইট-অভ্যন্তরীণ মেলানোজেনিক সিগন্যালিং ক্যাসকেডকে উস্কে দেয়, MITF ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টর এক্সপ্রেশনকে নিয়ন্ত্রণ করে এবং টাইরোসিনেজ প্রোটিন ওভার-অভিব্যক্তিকে আরও প্ররোচিত করে। আমাদের সেলুলার-পরীক্ষার ফলাফলগুলি যাচাই করেছে যে গ্ল্যাব্রিডিনের সাথে মিলিত PhGগুলি কার্যকরভাবে UVB-প্ররোচিত টাইরোসিনেজ অ্যাক্টিভেশনকে বিপরীত করতে পারে এবং মেলানিন প্রজন্মকে হ্রাস করতে পারে।

3.5 LPS-চ্যালেঞ্জড HaCaT কেরাটিনোসাইটের প্রতি প্রদাহ-বিরোধী প্রভাব

এলপিএস উদ্দীপনা দৃঢ়ভাবে IL-6 এবং TNF- প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি-সাইটোকাইন নিঃসরণকে HaCaT মডেল-গ্রুপে উন্নত করেছে (P< 0.001), proving inflammatory‑model replication success. Individual PhGs and glabridin suppressed cytokine release in concentration‑dependent manner.

When comparing three compound ratios at 25 μg/mL, anti‑inflammatory potency sequence was PhGs/Gla (1:1) > PhGs/Gla (5:1) >PhGs/Gla (10:1)। 1:1 ফর্মুলেশন IL-6 এবং TNF- রিলিজের জন্য সর্বাধিক হ্রাস তৈরি করেছে, যা PhGs বা গ্ল্যাব্রিডিনের পৃথক প্রয়োগের দ্বারা প্রাপ্ত প্রতিরোধক প্রভাবকে ছাড়িয়ে গেছে।

মলিকুলার-মেকানিজম ব্যাখ্যা: PhGs ফেনোলিক-হাইড্রোক্সিল ময়েটি প্রদাহজনক-ট্রিগারিং ফ্রি-র্যাডিকেলস স্কেভেঞ্জ করে; অধিকন্তু PhGs প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি-জিন ট্রান্সক্রিপশনকে রোধ করতে NF-κB এবং MAPK আন্তঃকোষীয় সিগন্যালিং ক্যাসকেডগুলিতে হস্তক্ষেপ করতে পারে। গ্ল্যাব্রিডিন স্ট্রেস-অ্যাক্টিভেটেড কিনেস JNK এবং p38-এর ফসফোরিলেশনকে বাধা দেয়, স্রোত প্রদাহজনক-সংকেত ট্রান্সডাকশনকে ব্লক করে। একক পদার্থ শুধুমাত্র আংশিকভাবে প্রদাহজনক-সংকেত-পাথওয়ে সক্রিয়করণকে দমন করতে পারে। বাইনারি সংমিশ্রণ একই সাথে প্রদাহজনক-সংকেত-নেটওয়ার্কের মধ্যে একাধিক নোডকে হস্তক্ষেপ করে, সিনারজিস্টিক অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি-কর্মক্ষমতা অর্জন করে।

ত্বকের প্রদাহ PIH ঘটনার জন্য গুরুত্বপূর্ণ আপস্ট্রিম ড্রাইভার হিসাবে কাজ করে। কেরাটিনোসাইট দ্বারা নিঃসৃত প্রদাহজনক সাইটোকাইনগুলি প্যারাক্রাইন সংকেত বার্তাবাহক হিসাবে কাজ করে, মেলানিন উত্পাদন এবং মেলানোসোম স্থানান্তর ত্বরান্বিত করতে সংলগ্ন মেলানোসাইটকে উদ্দীপিত করে। হাইপারপিগমেন্টেশন ক্ষত প্রতিরোধ ও উন্নতির জন্য এপিডার্মাল প্রদাহের কার্যকর প্রশমন অপরিহার্য। অতএব, PhGs-গ্লাব্রিডিন যৌগের প্রদাহ-বিরোধী সুবিধা অ্যান্টি-পিগমেন্টেশন প্রসাধনী-উপাদান প্রয়োগের জন্য অতিরিক্ত মান প্রদান করে।

3.6 AAPH-প্ররোচিত অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস অবস্থার অধীনে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-এনজাইম-নিয়ন্ত্রক ক্ষমতা

AAPH অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস মডেল-গ্রুপ আন্তঃকোষীয় SOD এবং CAT অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-এনজাইম জীবনীশক্তির সুস্পষ্ট পতন দেখিয়েছে (P< 0.001). Treatment with PhGs or glabridin alone could partially restore SOD and CAT activity. Among compound‑ratio groups, PhGs/Gla (1:1) displayed most powerful capability to elevate SOD and CAT enzyme level inside HaCaT cells.

অতিবেগুনী বিকিরণের সংস্পর্শে থাকা ত্বক প্রচুর পরিমাণে প্রতিক্রিয়াশীল-অক্সিজেন-প্রজাতি তৈরি করে। অতিরিক্ত ROS শুধুমাত্র মেলানিন-সংশ্লেষণ-সম্পর্কিত জৈব অণুগুলিকে সরাসরি অক্সিডাইজ করে না, একাধিক মেলানোজেনিক সিগন্যালিং পথও সক্রিয় করে। এন্ডোজেনাস অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-এনজাইম সিস্টেম (SOD, CAT) আন্তঃকোষীয় ROS নির্মূল করতে প্রধান প্রতিরক্ষা বাধা গঠন করে। যখন অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস অভ্যন্তরীণ অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট ক্ষমতাকে চাপা দেয়, তখন ROS-সঞ্চয়ন পিগমেন্টেশনের অগ্রগতি ত্বরান্বিত করে। PhGs-গ্লাব্রিডিন যৌগ শুধুমাত্র ফেনোলিক-হাইড্রোক্সিল রাসায়নিক বিক্রিয়ার মাধ্যমে সরাসরি ফ্রি-র্যাডিকেলগুলিকে মেরামত করে না, তবে সেলুলার অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-এনজাইম-সিস্টেম ফাংশন মেরামত করে, দুটি মাত্রা থেকে অক্সিডেটিভ-স্ট্রেসের ক্ষতি থেকে মুক্তি দেয়। বিভিন্ন ভর অনুপাত দুটি প্রাকৃতিক অণুর মধ্যে আণবিক-মিথস্ক্রিয়া প্যাটার্ন পরিবর্তন করে, যার ফলে চূড়ান্ত অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-নিয়ন্ত্রক কার্যকারিতার মধ্যে পার্থক্য দেখা দেয়।

3.7 সিনারজিস্টিক অ্যান্টি-হাইপারপিগমেন্টেশনের জন্য ব্যাপক প্রক্রিয়া আলোচনা

ত্বকের হাইপারপিগমেন্টেশন প্যাথলজিকাল-প্রক্রিয়া একটি জটিল সংকেত নেটওয়ার্ক গঠন করে: UVB বিকিরণ মেলানোসাইট এবং পার্শ্ববর্তী কেরাটিনোসাইট উভয়ের উপর কাজ করে। কেরাটিনোসাইটগুলি ROS এবং প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি-সাইটোকাইনগুলি প্রকাশ করে। এই জৈব-সংকেতগুলি মেলানোসাইটগুলিকে আরও সক্রিয় করে, টাইরোসিনেজ কার্যকলাপকে নিয়ন্ত্রণ করে, মেলানিন জৈব সংশ্লেষণকে উত্সাহিত করে এবং এপিডার্মাল কেরাটিনোসাইটের দিকে মেলানোসোম পরিবহনকে সহজ করে, যা অবশেষে ত্বকের পৃষ্ঠে দৃশ্যমান রঙ্গক জমার দিকে পরিচালিত করে। তদনুসারে, একক-টার্গেট টাইরোসিনেজ-নিরোধক প্যাথলজিকাল পিগমেন্টেশনকে সম্পূর্ণরূপে বিপরীত করতে পারে না। মাল্টি-পাথ হস্তক্ষেপ কৌশল মেলানোজেনেসিস-নিরোধ, প্রদাহ বিরোধী এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট সুরক্ষাকে একীভূত করা উচিত।

আমাদের পরীক্ষামূলক ফলাফলগুলি প্রমাণ করেছে যে গ্ল্যাব্রিডিনের সাথে মিলিত PhGগুলি হাইপারপিগমেন্টেশনের বিরুদ্ধে মাল্টি-মোডাল হস্তক্ষেপ উপলব্ধি করে:

মেলানিন জৈব সংশ্লেষণের উত্সকে বাধা দিতে মেলানোসাইটের ভিতরে টাইরোসিনেজ অনুঘটক-ক্রিয়াকলাপকে সরাসরি দমন করুন;

কেরাটিনোসাইট থেকে প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি-সাইটোকাইন ওভার-নিঃসরণকে বাধা দেয়, মেলানোসাইটের দিকে প্যারাক্রাইন প্রদাহজনক-উদ্দীপনা সংকেত কেটে দেয়;

অতিরিক্ত প্রতিক্রিয়াশীল-অক্সিজেন-প্রজাতি নির্মূল করুন এবং অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস-মধ্যস্থ রঙ্গক-পরিবর্ধন প্রশমিত করে অন্তঃসত্ত্বা SOD/CAT অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-এনজাইম কার্যকলাপ পুনরুদ্ধার করুন।

m(PhGs):m(Gla) = 1:1 অনুপাত জৈব রাসায়নিক এনজাইম-নিরোধ, র্যাডিকাল-স্ক্যাভেঞ্জিং, মেলানোসাইট পিগমেন্ট-মডেল, কেরাটিনোসাইট-ইনফ্ল্যামেটিভ-ডেলমোঅক্সেস জুড়ে সর্বোত্তম ব্যাপক সমন্বিত-কর্মক্ষমতা প্রদর্শন করেছে। এই অনুপাতটি প্রায় সমস্ত পরীক্ষার সূচকে 5:1 এবং 10:1 গোষ্ঠীর বাইরে ছিল। সিনার্জি সম্পূরক আণবিক-কাঠামোগত বৈশিষ্ট্য থেকে উদ্ভূত হতে পারে: PhGs এবং glabridin আলাদা ফেনোলিক-কঙ্কাল কাঠামোর অধিকারী, বিভিন্ন লক্ষ্য প্রোটিনের সাথে মিথস্ক্রিয়া করে (টাইরোসিনেজ, প্রদাহজনক-সংকেতকারী কাইনেস, অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-এনজাইম-প্যাথওয়েরেল)। যৌগিক মিশ্রণের পরে, ফেনোলিক-হাইড্রক্সিল এক্সপোজার স্থিতি আন্তঃআণবিক মিথস্ক্রিয়া দ্বারা অপ্টিমাইজ করা হয়, সামগ্রিক জৈবিক-ক্রিয়াকলাপ বৃদ্ধি করে।

প্রসাধনী-শিল্পের ব্যবহারিক দৃষ্টিভঙ্গির জন্য, সিনারজিস্টিক বোটানিক্যাল-যৌগিক কাঁচামাল দুটি প্রধান সুবিধা নিয়ে আসে। প্রথমত, সিনারজিস্টিক-ইফেক্ট প্রতিটি একক সক্রিয়-উপাদানের জন্য প্রয়োজনীয় ডোজ কমাতে সক্ষম করে, ফর্মুলেশন খরচ কমায়; দ্বিতীয়, মাল্টি-পাথ ফাংশনাল প্রোফাইল ক্লিনিকাল-পর্যবেক্ষিত ত্বকের হাইপারপিগমেন্টেশন যেমন PIH এবং মেলাসমার জটিল রোগগত-প্রণালীর সাথে মেলে, যা উচ্চ-কার্যকারিতা প্রাকৃতিক ত্বক-উজ্জ্বল প্রসাধনী সূত্রগুলি বিকাশের জন্য তাত্ত্বিক-ভিত্তি প্রদান করে।

4. উপসংহার

এই গবেষণা পদ্ধতিগতভাবে সিনারজিস্টিক অ্যান্টি-হাইপারপিগমেন্টেশন বায়োঅ্যাক্টিভিটি মূল্যায়ন করেছেCistanche deserticola-প্রাপ্তphenylethanoid glycosides (PhGs) glabridin (Gla) এর সাথে মিলিত। বায়োকেমিক্যাল ইন-ভিট্রো স্ক্রীনিং এবং তিনটি প্রতিনিধি সেলুলার-মডেল বহু-মাত্রিক কার্যকারিতা বৈশিষ্ট্যের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রধান পরীক্ষামূলক-উপসংহারগুলি নিম্নরূপ সংক্ষিপ্ত করা হয়েছে:

টাইরোসিনেজ-নিরোধ এবং ফ্রি-র্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং-এর জন্য ইন-ভিট্রো জৈব রাসায়নিক অ্যাসেসের মধ্যে, যৌগিক ফর্মুলেশন m(PhGs):m(Gla) = 1:1, 5:1, 10:1 অনুকূল বাধা-কার্যকারিতা এবং সমন্বয়সাধন উপস্থাপন করেছে। pH 6.8 PBS-এ 0.4 g/L মোট ঘনত্বের অধীনে, টাইরোসিনেজ-নিরোধ-হার 94.37% (1:1), 92.93% (5:1), 88.06% (10:1) এ পৌঁছেছে। DPPH-র্যাডিকাল-স্ক্যাভেঞ্জিং-রেট: 89.44%, 88.72%, 88.10%। ABTS⁺‑র্যাডিক্যাল-স্ক্যাভেঞ্জিং-রেট: 100.13%, 100.01%, 99.87%।

নিরাপদ কর্ম-ঘনত্ব 25 ug/mL, PhGs/Gla (1:1), (5:1), (10:1) DMEM সমাধানগুলি B16F10 মেলানোমা কোষ এবং HaCaT মানব কেরাটিনোসাইটের বিরুদ্ধে কোনও সাইটোটক্সিসিটি প্রদর্শন করে না। এই গোষ্ঠীগুলির মধ্যে, PhGs/Gla (1:1) সর্বোত্তম সমন্বিত-কার্যকারিতা অর্জন করেছে: অন্তঃকোষীয় টাইরোসিনেজ-ক্রিয়াকলাপ 23.80% এ হ্রাস পেয়েছে, মেলানিন-সামগ্রী 30.90% এ হ্রাস পেয়েছে। এটি IL-6, TNF-প্রদাহজনক-সাইটোকাইন রিলিজ এবং SOD এবং CAT অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট-এনজাইম জীবনীশক্তির জন্য সর্বাধিক পুনরুদ্ধারে শক্তিশালী বাধা তৈরি করেছে। 1:1 ভর-অনুপাত গোষ্ঠীটি একক-এজেন্ট গোষ্ঠী এবং অন্যান্য যৌগ-অনুপাত গোষ্ঠীগুলির থেকে উচ্চতর সুস্পষ্ট সিনারজিস্টিক-বর্ধিত প্রভাব প্রদর্শন করেছে।

PhGs এবং গ্ল্যাব্রিডিন বাইনারি মিশ্রণ ট্রিপল-পাথওয়ের মাধ্যমে ত্বক-বিরোধী-হাইপারপিগমেন্টেশন প্রভাব প্রয়োগ করে: মেলানিন জৈব সংশ্লেষণকে দমন করে, এপিডার্মাল প্রদাহ উপশম করে এবং অক্সিডেটিভ-স্ট্রেস ক্ষতি প্রতিরোধ করে। সর্বোত্তম সিনারজিস্টিক-ভর-অনুপাত m(PhGs):m(Gla) = 1:1। এই গবেষণাটি ত্বক-উজ্জ্বল এবং অ্যান্টি-পিগমেন্টেশন অ্যাপ্লিকেশনের জন্য প্রাকৃতিক উদ্ভিদ থেকে প্রাপ্ত বহু-কার্যকরী কসমেটিক কাঁচামাল তৈরির জন্য পরীক্ষামূলক-প্রমাণ এবং প্রযুক্তিগত সহায়তা সরবরাহ করে।

স্বীকৃতি

এই কাজটি চীনের ন্যাশনাল ন্যাচারাল সায়েন্স ফাউন্ডেশন (অনুদান নম্বর. 82160772) দ্বারা আর্থিকভাবে সমর্থিত ছিল। পরীক্ষামূলক-প্ল্যাটফর্ম সমর্থনের জন্য আমরা ক্লিনিক্যাল ড্রাগ রিসার্চের জিনজিয়াং কী ল্যাবরেটরিকে ধন্যবাদ জানাই।

তথ্যসূত্র

[১] নটিয়াল এ, ওয়াইরকার এস. হাইপারপিগমেন্টেশনের ব্যবস্থাপনা: বর্তমান চিকিৎসা এবং উদীয়মান থেরাপি[জে]। পিগমেন্ট সেল এবং মেলানোমা রিসার্চ, 2021, 34(6):1000-1014।

[২] ইয়ার্ডম্যান-ফ্রাঙ্ক জে এম, ফিশার ডি ই. ত্বকের পিগমেন্টেশন এবং এর নিয়ন্ত্রণ: অতিবেগুনী বিকিরণ থেকে স্টেম সেল [জে]। পরীক্ষামূলক ডার্মাটোলজি, 2021, 30(4):560-571।

[৩] নেগু এন, কনফোর্টি সি, এগোজিনো এম, এট আল। মেলাসমা চিকিত্সা: একটি পদ্ধতিগত পর্যালোচনা [জে]। জার্নাল অফ ডার্মাটোলজিকাল ট্রিটমেন্ট, 2022, 33(4):1816-1837।

[৪] হোসেন এম আর, আনসারী টি এম, কোমিন এম, এট আল। বৈচিত্র্যময় উদ্দীপনা-প্ররোচিত প্রদাহজনক পথগুলি ত্বকের পিগমেন্টেশনের কারণ হয় [জে]। ইন্টারন্যাশনাল জার্নাল অফ মলিকুলার সায়েন্সেস, 2021, 22(8):3970।

[৫] গান X, Ni M T, Zhang Y, et al. টাইরোসিনেজের বিরুদ্ধে এপিগালোক্যাচিন-3-গ্যালেট এবং গ্যালোক্যাটেচিন গ্যালেটের প্রতিরোধ ক্ষমতা এবং কোজিক অ্যাসিড [জে] এর সাথে তাদের সম্মিলিত প্রভাবগুলির তুলনা করা। খাদ্য রসায়ন, 2021, 349(1):129172।

[৬] জোলগাদরি এস, বেগি এম, মোহাম্মদ টি এফ, এবং অন্যান্য। হাইপারপিগমেন্টেশনে টাইরোসিনেজ লক্ষ্য করা: বর্তমান অবস্থা, সীমাবদ্ধতা এবং ভবিষ্যতের প্রতিশ্রুতি [জে]। বায়োকেমিক্যাল ফার্মাকোলজি, 2023, 212:115574।

[৭] সিসেরো এ এল, ডেলেভো সি, গিলস-মার্সেন্স এফ, এট আল। কেরাটিনোসাইট দ্বারা নির্গত এক্সোসোমগুলি মেলানোসাইট পিগমেন্টেশনকে সংশোধন করে[J]। প্রকৃতি যোগাযোগ, 2015, 6:7506।

[৮] Serre C, Busuttil V, Botto J M. মানুষের ত্বকের মেলানোজেনেসিস এবং পিগমেন্টেশনের অভ্যন্তরীণ এবং বাহ্যিক নিয়ন্ত্রণ [J]। কসমেটিক সায়েন্সের আন্তর্জাতিক জার্নাল, 2018, 40(4):328‑347।

[৯] ইরফান এম, শফিক এ, সিদ্দিকী ইউ, এবং অন্যান্য। কসমেটিক ক্রিমগুলিতে ভারী ধাতু, হাইড্রোকুইনোন এবং অণুজীবের বিষাক্ততা এবং ঝুঁকি মূল্যায়নের জন্য একটি যান্ত্রিক পদ্ধতি [জে]। জার্নাল অফ হ্যাজার্ডাস ম্যাটেরিয়ালস, 2022, 433:128806।

[১০] ঝেং ওয়াই, ডু এক্স এস, ঝাং এল, এট আল। হাইড্রোকুইনোন-প্ররোচিত ত্বকের বিরক্তিকর প্রতিক্রিয়া মাস-সম্পর্কিত জি প্রোটিন-কাপল্ড রিসেপ্টর X2[J] এর মাধ্যমে মাস্ট কোষগুলিকে সক্রিয় করে অর্জন করা যেতে পারে। এক্সপেরিমেন্টাল ডার্মাটোলজি, 2023, 32(4):436‑446।

[১১] মেং এইচ, লিউ এক্স কে, লি জে আর, এট আল। ত্বকে জিনসেং এর প্রভাবের বাইবলিওমেট্রিক বিশ্লেষণ [জে]। জার্নাল অফ কসমেটিক ডার্মাটোলজি, 2022, 21(1):99-107।

[১২] লিউ এফ, কিউ এল কে, লি এইচ, এট আল। ত্বকের পিগমেন্টেশন রোগের চিকিৎসায় প্রাকৃতিক ঝকঝকে পদার্থের বায়োমেডিকাল ফাংশনে অগ্রগতি[জে]। ফার্মাসিউটিকস, 2022, 14(11):2308।

[১৩] ওয়াং টি টি, ঝাং ডি, ওয়াং ওয়াই জে, এট আল। Lonicera japonica polyphenols এবং Vaccinium vitis-idaea L[J] এর ইথানল নির্যাস-এর সিনারজিস্টিক ত্বকের যত্ন। ফাইন কেমিক্যালস, 2023, 40(3):627-637।

[১৪] Wu Y, Liu Q, Tang W, et al. প্রসাধনীতে সালভিয়া মিলটিওরিজা উদ্বায়ী তেল এবং ড্যান্ডেলিয়ন নির্যাসের কমপ্লেক্সের প্রয়োগ [জে]। ফাইন কেমিক্যালস, 2022, 39(3):562-568।

[১৫] চেন জে আর, ঝু এক্স ওয়াই, কুই এইচ ওয়াই, এট আল। সক্রিয় উপাদানের তারতম্য এবং জিনজিয়াং প্রদেশের বিভিন্ন জাত এবং অংশ থেকে Cistanche deserticola এর অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট কার্যকলাপ বিশ্লেষণ [J]। খাদ্য শিল্প বিজ্ঞান ও প্রযুক্তি, 2024, 45(21):227-233।

[16] Xiao L Y, Yao J, Miao Y Y, et al. Tubuloside B, Cistanche tubulosa থেকে বিচ্ছিন্ন, Mob1 এবং ERK1/2[J] কে সিনারজিস্টিকভাবে লক্ষ্য করে M1 ম্যাক্রোফেজ অ্যাক্টিভেশনের বিরুদ্ধে একটি প্রতিশ্রুতিশীল এজেন্ট। বায়োমেডিসিন এবং ফার্মাকোথেরাপি, 2022, 153:113414।

[১৭] Xu H H. Herba cistanches ট্রান্সডার্মাল ডেলিভারির ফেনাইলেথানয়েড গ্লাইকোসাইডের উপর অধ্যয়ন এবং বাদামী গিনি পিগ[D]-এ বি-প্ররোচিত পিগমেন্টেশনে মেলানিন সংশ্লেষণের উপর প্রতিরোধমূলক প্রভাব। উরুমকি: জিনজিয়াং মেডিকেল বিশ্ববিদ্যালয়, 2020।

[১৮] Huang J, Xie C, Pan Z. Synergistic whitening, antioxidant and anti-inflammatory activity of glabridin, resveratrol এবং poldatin complex[J]। ফ্লেভার ফ্র্যাগ্রেন্স কসমেটিকস, 2024(3):99‑107,233।

[১৯] ওয়াং এস কিউ, ঝু ওয়াই জেড, ঝেং এক্স বি। টিউমার-বিরোধী ওষুধের সংমিশ্রণের জন্য চৌ-তালালে পদ্ধতির অধ্যয়ন এবং প্রয়োগ। চাইনিজ জার্নাল অফ মডার্ন অ্যাপ্লাইড ফার্মেসি, 2013, 30(4):449‑453।

[২০] পিল্লাইয়ার টি, মানিকাম এম, নমাসিভায়ম ভি। ত্বক সাদা করার এজেন্ট: টাইরোসিনেজ ইনহিবিটরস [জে] এর ঔষধি রসায়ন দৃষ্টিকোণ। জার্নাল অফ এনজাইম ইনহিবিশন অ্যান্ড মেডিসিনাল কেমিস্ট্রি, 2017, 32(1):403-425